CN112458025B - 一株深海亚硫酸杆菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用 - Google Patents
一株深海亚硫酸杆菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一株深海亚硫酸杆菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用，深海亚硫酸杆菌Sulfitobacter sp.G213‑c的保藏号为CCTCC NO：M 2019806，且深海亚硫酸杆菌形成的微生物被膜在诱导厚壳贻贝稚贝附着中应用；诱导的过程为：将深海亚硫酸杆菌分离、纯化得到纯种亚硫酸杆菌株；将纯种亚硫酸杆菌株接种培养、沉淀、洗涤得到悬浮菌液；并加入灭菌海水培养，得到微生物被膜，将附有微生物被膜的载玻片和厚壳贻贝稚贝诱导培养；故本发明的深海亚硫酸杆菌形成的微生物被膜能够诱导厚壳贻贝稚贝的附着，且不同细菌初始密度微生物被膜对稚贝的诱导活性也有所不同，及本发明对厚壳贻贝的人工养殖具有重要的意义。
Description
技术领域
本发明属于海洋微生物技术领域，涉及一株深海亚硫酸杆菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用，具体涉及一株深海细菌亚硫酸杆菌Sulfitobacter sp.G213-c的分离、纯化、鉴定和保藏，以及其在不同初始细菌密度条件下形成的微生物被膜对厚壳贻贝稚贝附着的影响作用。
背景技术
厚壳贻贝(Mytilus coruscus)，隶属于软体动物门(Mollusca)，双壳纲(Bivalvia)，贻贝目(Mytilodia)，贻贝科(Mytilidae)，是我国重要的海产贝类养殖品种，分布于黄海、渤海和东海沿岸。厚壳贻贝营养价值较高，具有开阔的养殖前景和市场开发潜力。在厚壳贻贝生活史中，浮游生活阶段的后期，眼点幼虫会附着变态成为稚贝，并最终发育为成贝。在稚贝生长为成贝的过程中，当环境发生变化，厚壳贻贝稚贝能够自行切断足丝，开始爬行并重新选择适宜的附着基进行再次附着。厚壳贻贝作为一种重要的海水贝类养殖品种，其苗种主要依靠天然苗种和半人工采苗获得。近年来，渔业资源的过度开发，天然苗种无法满足厚壳贻贝养殖产业的发展。因此，解决苗种问题、探索利用细菌形成微生物被膜诱导厚壳贻贝附着等生物工程技术显得尤为必要。
发明内容
针对现有技术中的不足，本发明的首要目的是提供一株深海亚硫酸杆菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。
本发明的第二个目的是提供上述深海亚硫酸杆菌形成的微生物被膜在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。
为达到上述首要目的，本发明的解决方案是：
一株深海亚硫酸杆菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。
一株深海亚硫酸杆菌，其保藏号为CCTCC NO：M 2019806，该深海亚硫酸杆菌为：Sulfitobacter sp.G213-c。
该深海亚硫酸杆菌的16S rRNA基因序列为：SEQ ID NO.1。
为达到上述第二个目的，本发明的解决方案是：
一株深海亚硫酸杆菌形成的微生物被膜在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。
优选地，诱导的过程为：将深海亚硫酸杆菌分离、纯化得到纯种亚硫酸杆菌株；将纯种亚硫酸杆菌株接种培养、沉淀、洗涤得到悬浮菌液；向培养皿中加入悬浮菌液和灭菌海水培养，得到微生物被膜，将附有微生物被膜的载玻片和厚壳贻贝稚贝诱导培养。
优选地，悬浮菌液的初始密度为1.0×106-5×108cells/mL。
进一步优选地，悬浮菌液的初始密度选自1.0×106cells/mL、1.0×107cells/mL、1.0×108 cells/mL和5×108cells/mL中的一种以上。
由于采用上述方案，本发明的有益效果是：
本发明的深海亚硫酸杆菌微生物被膜在初始密度为1.0×107cells/mL时，形成的微生物被膜对稚贝附着的诱导率提高至27.8％，而在无深海亚硫酸杆菌微生物被膜下厚壳贻贝稚贝附着率仅为16.7％，且本发明中不同细菌初始密度微生物被膜对稚贝的诱导活性也有所不同，故本发明的深海亚硫酸杆菌形成的微生物被膜能够诱导厚壳贻贝稚贝的附着以及对厚壳贻贝的人工养殖均具有重要的意义。
附图说明
图1为本发明实施例中不同初始细菌密度悬浮菌液形成的微生物被膜对厚壳贻贝稚贝附着的诱导作用图。
具体实施方式
本发明提供了一种深海亚硫酸杆菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。
本发明涉及的深海亚硫酸杆菌Sulfitobacter sp.G213-c来源于南海冷泉(119°17.1089’E， 22°6.9705’N)水下-1151.16m处的表层沉积物。利用ZoBell 2216E固体培养基分离、纯化得到纯种菌落，并通过16S rRNA基因测序与GENEBANK(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)中核酸数据进行比对后上传至NCBI数据库。最终确定菌名为亚硫酸杆菌，获取序列号为MN043852.1，其保藏信息为：该细菌的保藏单位为位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏日期为2019年10月11日，保藏号为CCTCC NO：M2019806。
其中，该深海亚硫酸杆菌的16S rRNA基因序列(SEQ ID NO.1)具体为：
以下结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例：
本实施例的深海亚硫酸杆菌对厚壳贻贝稚贝附着的诱导实验：
主要步骤是将分离纯化后纯种的亚硫酸杆菌菌株接种到海水2216E液体培养基中扩大培养，离心后得到细菌沉淀，用灭菌海水洗涤并制成悬浮菌液，重复多次实验。最后将得到的菌液稀释后用吖啶橙染色并在荧光显微镜1000倍镜头下随机选取10个点进行计数，确定菌液总密度为4×109cells/mL。每个培养皿中放入一枚灭菌载玻片，向培养皿中加入灭菌海水及菌液，使细菌初始密度分别为1.0×106cells/mL、1.0×107cells/mL、1.0×108cells/mL和5×108 cells/mL。在18℃下避光条件培养48h形成微生物被膜。最后将附有微生物被膜的载玻片及 10只厚壳贻贝稚贝(壳长1.31±0.02mm；壳高0.89±0.02mm)放入含有灭菌过滤海水的培养皿中，在12h时记录稚贝的附着率，即载玻片上附着的稚贝个数占该培养皿中稚贝总个数的百分比。
研究发现该细菌形成的微生物被膜具有诱导厚壳贻贝稚贝附着的活性，实验结果如图1 所示，不同初始密度条件下形成的微生物被膜对稚贝的诱导活性也有所不同，在初始密度为 1.0×107cells/mL时，形成的微生物被膜对稚贝附着的诱导率为27.8％，初始密度为1.0×106 cells/mL时形成的微生物被膜对稚贝的诱导活率仅为21.1％。由此可得，深海亚硫酸杆菌 Sulfitobacter形成的微生物被膜具有诱导稚贝附着的作用，且不同细菌密度微生物被膜诱导活性有所不同，故本发明对于阐明深海亚硫酸杆菌诱导厚壳贻贝稚贝附着以及对厚壳贻贝的人工养殖均具有重要的意义。
上述对实施例的描述是为了便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用本发明。熟悉本领域技术人员显然可以容易的对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中，而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例。本领域技术人员根据本发明的原理，不脱离本发明的范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 上海海洋大学
<120> 一株深海亚硫酸杆菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用
<141> 2020-12-15
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1373
<212> DNA
<213> 深海亚硫酸杆菌()
<400> 1
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Claims (6)
1.一株深海亚硫酸杆菌（Sulfitobacter sp.）G213-c，其保藏号为CCTCC NO：M2019806。
2.一株如权利要求1所述的深海亚硫酸杆菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。
3.一株如权利要求1所述的深海亚硫酸杆菌形成的微生物被膜在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述诱导的过程为：将深海亚硫酸杆菌分离、纯化得到纯种亚硫酸杆菌株；将所述纯种亚硫酸杆菌株接种培养、沉淀、洗涤得到悬浮菌液；向培养皿中加入所述悬浮菌液和灭菌海水培养，得到微生物被膜，将附有微生物被膜的载玻片和厚壳贻贝稚贝诱导培养。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述悬浮菌液的初始密度为1.0×106-5×108 cells/mL。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述悬浮菌液的初始密度选自1.0×106 cells/mL、1.0×107 cells/mL、1.0×108 cells/mL和5×108 cells/mL。
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| 微生物膜对厚壳贻贝稚贝附着的影响;杨金龙等;水产学报;第37卷(第6期);第904-909页 * |
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