CN112574913B - 深海玫瑰变色菌及其在诱导厚壳贻贝附着中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了深海玫瑰变色菌及其在诱导厚壳贻贝附着中的应用，属于海洋微生物技术领域。该深海玫瑰变色菌命名为深海玫瑰变色菌Roseovarius nubinhibens G213‑d，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2019807，该细菌的16S rRNA基因如SEQ ID NO:1所示，来源于海拔‑1151.16米的南海冷泉附近海域大洋沉积物。本发明经分离、纯化和鉴定得到深海玫瑰变色菌Roseovarius nubinhibens G213‑d，同时验证该细菌形成的生物被膜具有诱导厚壳贻贝附着活性，为解决种苗和利用细菌形成生物被膜诱导厚壳贻贝附着提供新的技术途径。
Description
技术领域
本发明涉及海洋微生物技术领域，具体涉及深海玫瑰变色菌及其在诱导厚壳贻贝附着中的应用。
背景技术
厚壳贻贝(Mytilus coruscus)，属于软体动物门(Mollusca)，双壳纲(Bivalvia)，贻贝目(Mytilodia)，贻贝科(Mytilidae)，是我国重要的海产贝类养殖品种，分布于黄海、渤海和东海沿岸。厚壳贻贝有两种生活方式，包括浮游生活和附着生活，厚壳贻贝幼虫在浮游生活阶段的后期，眼点幼虫会附着变态变成稚贝，并最终成长为成贝。在稚贝生长为成贝的过程中，一旦环境发生变化，厚壳贻贝的稚贝能自行切断足丝并重新选择适宜的附着基进行再次附着。
厚壳贻贝作为一种营养价值高的海水贝类养殖品种，具有广阔的养殖前景和市场开发潜力，其苗种主要依靠天然苗种和半人工采苗获得。但是，随着渔业资源的过度开发，天然苗种已无法满足厚壳贻贝养殖产业的发展，解决种苗问题、探索利用细菌形成生物被膜诱导厚壳贻贝附着等生物工程技术显得尤为迫切。
发明内容
本发明的第一目的是，提供一株深海玫瑰变色菌(Roseovarius nubinhibens)。
本发明的第二目的是，提供上述深海玫瑰变色菌在诱导厚壳贻贝附着中的应用。
为实现上述第一目的，本发明采用的技术方案是：一株深海玫瑰变色菌，命名为深海玫瑰变色菌Roseovarius nubinhibens G213-d，所述深海玫瑰变色菌Roseovariusnubinhibens G213-d保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2019807，保藏日期为2019年10月11日，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。
根据本发明的一实施例，所述深海玫瑰变色菌Roseovarius nubinhibens G213-d的16S rRNA基因如SEQ ID NO:1所示。
根据本发明的一实施例，所述深海玫瑰变色菌Roseovarius nubinhibens G213-d来源于南海冷泉附近海域大洋沉积物(N 22°6.9706’，E 119°17.1090’)，海拔-1151.16米。
根据本发明的一实施例，所述深海玫瑰变色菌Roseovarius nubinhibens G213-d形成的生物被膜具有诱导厚壳贻贝附着活性。
为实现上述第二目的，本发明采用的技术方案是：上述深海玫瑰变色菌在诱导厚壳贻贝附着中的应用。
根据本发明的一实施例，所述厚壳贻贝为稚贝。
本发明采用上述技术方案，其有益效果如下：本发明首次获得一株深海玫瑰变色菌，经分离、纯化和鉴定获得深海玫瑰变色菌Roseovarius nubinhibens G213-d，同时验证该细菌形成的生物被膜具有诱导厚壳贻贝附着活性，为解决种苗和利用细菌形成生物被膜诱导厚壳贻贝附着提供新的技术途径。
附图说明
图1是不同初始细菌密度形成的生物被膜对厚壳贻贝稚贝附着的诱导活性。
具体实施方式
下面通过实施例和对比例进一步说明本发明，这些实施例只是用于说明本发明，本发明不限于以下实施例。凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。
以下实施例中深海玫瑰变色菌(Roseovarius nubinhibens)，命名为深海玫瑰变色菌Roseovarius nubinhibens G213-d，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2019807，保藏日期为2019年10月11日，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。
深海玫瑰变色菌Roseovarius nubinhibens G213-d的16S rRNA基因如SEQ IDNO:1所示，利用Zobell 2216E固体培养基分离、纯化得到纯种菌落，并通过16S rRNA基因测序与GENEBANK(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)中核酸数据进行比对后上传至NCBI数据库，序列号为LT600618.1，具体如下：
gagcgcaccttcgggtgagcggcggacgggttagtaacgcgtgggaacgtacccagatctaaggaatagccactggaaacggtgagtaataccttatacgcccttcgggggaaagatttatcggatttggatcggcccgcgttagattaggtagttggtggggtaatggcctaccaagcctacgatctatagctggttttagaggatgatcagcaacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggggaatcttagacaatgggggcaaccctgatctagccatgccgcgtgagtgaagaaggtcttaggatcgtaaagctctttcgccagggatgataatgacagtacctggtaaagaaaccccggctaactccgtgccagcagccgcggtaatacggagggggttagcgttgttcggaattactgggcgtaaagcgcgcgtaggcggatcagaaagttgggggtgaaatcccagggctcaaccctggaactgcctccaaaactcctggtcttgagttcgagagaggtgagtggaactccgagtgtagaggtgaaattcgtagatattcggaagaacaccagtggcgaaggcggctcactggctcgatactgacgctgaggtgcgaaagtgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacaccgtaaacgatgaatgccagtcgtcgggtagtatactattcggtgacacacctaacggattaagcattccgcctggggagtacggtcgcaagattaaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgcagaaccttaccaacccttgacatcctgatcgcggatcgtagagatactttccttcagttcggctggatcagtgacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttcggttaagtccggcaacgagcgcaacccacatccctagttgccagcagttcggctgggcactctatggaaactgcccgtgataagcgggaggaaggtgtggatgacgtcaagtcctcatggcccttacgggttgggctacacacgtgctacaatggcagtgacaatgggttaatcccaaaaaactgtctcagttcggattggggtctgcaactcgaccccatgaagtcggaatcgctagtaatcgcgtaacagcatgacgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccatgggagttgggtttacccgaaggccgtgcgccaacc。
一实施例中，深海玫瑰变色菌Roseovarius nubinhibens G213-d可以来源于南海冷泉附近海域大洋沉积物(N 22°6.9706’，E 119°17.1090’)，海拔-1151.16米。
以下通过具体实施例证明上述深海玫瑰变色菌Roseovarius nubinhibens G213-d形成的生物被膜具有诱导厚壳贻贝附着活性，可用于诱导厚壳贻贝特别是稚贝附着方面。
实施例1
深海玫瑰变色菌Roseovarius nubinhibens G213-d对厚壳贻贝稚贝附着的诱导实验，具体步骤如下：将纯种的深海玫瑰变色菌Roseovarius nubinhibens G213-d菌株接到海水2216E液体培养基中扩大培养48h，离心得到细菌沉淀，用灭菌海水洗细菌并制成悬浮液，重复3次，得到的菌液定容为50mL，吖啶橙染色后，在100倍镜头的荧光显微镜下随机选取10个点进行计数，确定菌液总密度为2×109cells/mL。每个培养皿中放入一枚灭菌载玻片，并加入相应的灭菌海水及菌液，使得细菌初始密度分别为1.0×106cells/mL、1.0×107cells/mL、1.0×108cells/mL和5×108cells/mL，在18℃以及避光条件下培养48h形成所需的生物被膜，将附有生物被膜的载玻片以及10只厚壳贻贝稚贝(壳长0.80±0.05mm，壳高0.55±0.05mm)加入含有灭菌过滤海水的培养皿中，在24h时记录稚贝的附着率，即载玻片上附着的稚贝个数占培养皿中稚贝总个数的百分比。
结果如图1所示，在初始细菌密度不同的条件下形成的生物被膜对稚贝的诱导活性有显著不同，初始密度为1×108cells/mL时形成的生物被膜对稚贝的附着诱导率为32.2％，初始密度为1.0×107cells/mL时形成的生物被膜对稚贝的附着诱导率为15.6％。证明深海玫瑰变色菌Roseovarius nubinhibens G213-d形成的生物被膜具有诱导厚壳贻贝附着活性，为解决种苗和利用细菌形成生物被膜诱导厚壳贻贝附着提供新的技术途径。
上述对实施例的描述是为了便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用本发明。熟悉本领域技术人员显然可以容易的对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中，而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例。本领域技术人员根据本发明的原理，不脱离本发明的范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 上海海洋大学
<120> 深海玫瑰杆菌及其在诱导厚壳贻贝附着中的应用
<141> 2020-11-23
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1308
<212> DNA
<213> 大洋沉积物()
<400> 1
gagcgcacct tcgggtgagc ggcggacggg ttagtaacgc gtgggaacgt acccagatct 60
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Claims (3)
1.一株深海玫瑰变色菌，其特征在于，命名为深海玫瑰变色菌（Roseovarius nubinhibens） G213-d，所述深海玫瑰变色菌（Roseovarius nubinhibens） G213-d保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: M 2019807，保藏日期为2019年10月11日，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。
2.权利要求1所述深海玫瑰变色菌在诱导厚壳贻贝附着中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述厚壳贻贝为稚贝。
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| Deep‑sea bacteria trigger settlement and metamorphosis of the mussel Mytilus coruscus larvae;Rui‑Heng Chang et al.;Sci Rep.;第11卷(第1期);第1-10页 * |
| 微生物膜对厚壳贻贝稚贝附着的影响;杨金龙等;水产学报;第37卷(第6期);第904-909页 * |
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| GR01 | Patent grant | ||
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