CN112280705B - 一株硝化短芽孢杆菌及其在草菇生产中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株硝化短芽孢杆菌(Brevibacillus nitrificans)及其在草菇生产中的应用，硝化短芽孢杆菌菌株vv6已于2017年12月6日保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号GDMCC NO:60296。将活化的草菇菌丝接种在PDA培养基中，同时接种硝化短芽孢杆菌菌株vv6与草菇菌丝共培养，常温下培养至少6天，与vv6菌株共培养的草菇菌丝长满培养基。菌株vv6对草菇菌丝生长有明显的促进作用，可应用在草菇生产中。

Description

一株硝化短芽孢杆菌及其在草菇生产中的应用
技术领域
本发明涉及一株硝化短芽孢杆菌(Brevibacillus nitrificans)及其在草菇生产中的应用。
背景技术
目前草菇的栽培原料大多是废棉、稻草、中药渣等，将这些原材料二次发酵后接种栽培。
在食用菌的生长环境中，存在各种微生物，其中的有益微生物对食用菌生长是相当重要的，有时甚至是必不可少的。这些有益微生物对培养原料进行各种转化，改变培养原料的理化性质与生物学特性，创造出一个适合食用菌生长的培养基质。将有益微生物加入到食用菌的培养原料中发酵，可有效促进食用菌的生长。
分离筛选培养原料中的有益微生物，优化培养原料中微生物群落和数量，可以促进草菇菌丝生长、缩短菌丝生长时间，达到缩短生产周期的目的。
中国专利申请CN 110591972A公开了硝化短芽孢杆菌在降解正十六烷中的应用。至今未见硝化短芽孢杆菌应用在食用菌栽培中的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一株硝化短芽孢杆菌菌株vv6，及其在草菇生产中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一株硝化短芽孢杆菌菌株vv6，已于2017年12月6日保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏单位地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号GDMCC NO:60296。
硝化短芽孢杆菌菌株vv6为革兰氏阴性的杆状细菌，有芽孢，芽孢椭圆形，端生。在营养琼脂平板上培养48h，菌落呈圆形，淡黄色，半透明(图1、图2)。
硝化短芽孢杆菌菌株vv6的生理生化试验结果如下：
Figure BDA0002693899660000021
硝化短芽孢杆菌菌株vv6的16S rDNA测序序列(SEQ.ID.NO.1)与Brevibacillusnitrificans(硝化短芽孢杆菌)的同源性达100％；结合其形态特征及生理生化特征，判定菌株vv6为Brevibacillus nitrificans(硝化短芽孢杆菌)。
本发明的硝化短芽孢杆菌菌株vv6可以应用在草菇生产中，有促进草菇菌丝生长的作用；具体应用包括以下步骤：
将活化的草菇菌丝接种在培养基中，然后接种硝化短芽孢杆菌菌株vv6与草菇菌丝共培养，常温下培养至少6天，与vv6菌株共培养的草菇菌丝可长满培养基；
所述的培养基为PDA培养基或棉籽壳培养基；
所述的培养基为PDA培养基时，硝化短芽孢杆菌菌株vv6划线接种到培养基上。
所述PDA培养基的配方和制法是，马铃薯200克，加水煮沸至少30分钟，过滤后取滤液，再葡萄糖20克、琼脂15～20克，加水至1000毫升，自然pH值。
优选地，所述的过滤为8层纱布过滤。
所述的培养基为棉籽壳培养基时，优选将活化稀释后的硝化短芽孢杆菌菌株vv6菌液接种到培养基中；
进一步优选地，是将OD600值0.6的硝化短芽孢杆菌菌株vv6菌液接种到30-50g棉籽壳培养基中。
特别优选地，所述的棉籽壳培养基由棉籽壳89％、麸皮10％、石灰1％组成，培养基灭菌后使用。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
本发明从草菇场栽培培养料中筛选到一株对草菇菌丝生长有促进作用的菌株，经鉴定为Brevibacillus nitrificans(硝化短芽孢杆菌)，命名为菌株vv6。该菌株对草菇菌丝生长有明显的促进作用，可应用在草菇生产中。
附图说明
图1是vv6菌株菌落形态图。
图2是vv6菌株显微形态图。
图3是有无接种vv6菌株的草菇菌丝生长对照图。
图4是以棉籽壳为主要培养基、有无接种vv6菌株的草菇菌丝生长对照图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
从广东省佛山市三水区草菇场栽培床架上采集栽培培养料，每份培养料取20g，分别加到装有150ml无菌水的三角瓶中，震荡培养1h，过滤去沉淀，所得菌悬液用无菌水进行梯度稀释，依次稀释成10-2、10-3、10-4、10-5、10-6浓度。28℃下接种到PDA培养基培养48h，选取形态、大小、色泽不同的菌落，进行纯化，斜面培养基保存。
接种直径0.8cm的草菇菌种块到PDA培养基中央，待草菇菌丝萌发后，在培养基的一侧用灭菌后的牙签挑取纯化后的不同细菌单菌落，划线距离草菇菌种块2cm左右，置于28℃的恒温箱中培养，观察草菇菌丝的生长情况。挑取对草菇菌丝生长有促进作用的单菌落做进一步鉴定。
经实验鉴定，该菌落为革兰氏阴性的杆状细菌，有芽孢，芽孢椭圆形，端生。在营养琼脂平板上培养48h，菌落呈圆形，淡黄色，半透明(图1、图2)。
该菌落细菌的生理生化试验结果如下：
Figure BDA0002693899660000041
该菌落细菌的的16S rDNA测序序列(SEQ.ID.NO.1)与Brevibacillusnitrificans(硝化短芽孢杆菌)的同源性达100％；结合其形态特征及生理生化特征，判定该菌落细菌为Brevibacillus nitrificans(硝化短芽孢杆菌)，命名为菌株vv6。
实施例2
硝化短芽孢杆菌菌株vv6在草菇栽培中的应用，包括以下步骤：
将活化的草菇菌丝接种在PDA培养基中，在培养皿的一侧用接种环划线接种vv6菌株于距离草菇菌种块2cm左右区域，划线长度约2cm，与草菇菌丝共培养，在25℃培养6天。如图3A所示(培养皿中央的白色块为草菇菌种块，黑色线框为vv6菌株接种区域)，接入vv6菌株的一侧草菇菌丝生长旺盛，菌丝生长速度为6.38mm/d；相比较未接种vv6菌株一侧菌丝生长速度(3.74mm/d)提高70.5％。
培养9天后如图3B所示，接种vv6菌株一侧的菌丝浓密，可见菌株vv6能有效促进草菇菌丝生长，可以应用在草菇栽培中。
实施例3
硝化短芽孢杆菌菌株vv6在草菇栽培中的应用，包括以下步骤：
(1)将vv6菌株接种在PDA液体培养基中培养至浓度OD600＝2，取培养好的vv6菌液，用新鲜的PDA培养基将vv6菌株稀释至OD600＝0.6。
(2)把30-50g棉籽壳培养基(棉籽壳89％(质量百分比，下同)、麸皮10％、石灰1％，含水量55-65％)装到试管中，灭菌(121℃灭菌20分钟)后，将活化的草菇菌丝接种在试管中，30℃培养一天后，加入稀释后的vv6菌株菌液500μl，对照培养基中加入新鲜的PDA培养基500μl，30℃恒温培养10天。
如图4所示，左侧为对照，右侧为接种vv6菌株的试管，未接种vv6的试管草菇菌丝生长距离管底约2-3cm，接种vv6菌株的试管长满草菇菌丝。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 广东省农业科学院蔬菜研究所
<120> 一株硝化短芽孢杆菌及其在草菇生产中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1413
<212> DNA
<213> 硝化短芽孢杆菌(Brevibacillus nitrificans)
<220>
<223> 16S rDNA
<400> 1
ggctggctcc ttgcggttac ctcaccgact tcgggtgttg caaactcccg tggtgtgacg 60
ggcggtgtgt acaaggcccg ggaacgtatt caccgcggca tgctgatccg cgattactag 120
cgattccgac ttcatgtagg cgagttgcag cctacaatcc gaactgagat tggttttaag 180
agattggcgt cctctcgcga ggtagcatcc cgttgtacca accattgtag cacgtgtgta 240
gcccaggtca taaggggcat gatgatttga cgtcatcccc gccttcctcc gtcttgtcga 300
cggcagtctc tctagagtgc ccaactgaat gctggcaact agaaataagg gttgcgctcg 360
ttgcgggact taacccaaca tctcacgaca cgagctgacg acaaccatgc accacctgtc 420
accgctgccc cgaagggaag ctctgtctcc agagcggtca gcgggatgtc aagacctggt 480
aaggttcttc gcgttgcttc gaattaaacc acatgctcca ccgcttgtgc gggcccccgt 540
caattccttt gagtttcact cttgcgagcg tactccccag gcggagtgct tattgcgtta 600
gctgcggcac tgagggtatt gaaaccccca acacctagca ctcatcgttt acggcgtgga 660
ctaccagggt atctaatcct gtttgctccc cacgctttcg cgcctcagcg tcagttacag 720
accagaaagc cgccttcgcc actggtgttc ctccacatct ctacgcattt caccgctaca 780
cgtggaatac cgctttcctc ttctgcactc aagctacaca gtttccgatg cgaaccggag 840
ttgagctccg ggctttaaca ccagacttac atagccgcct gcgcgcgctt tacgcccaat 900
aaatccggac aacgcttgcc acctacgtat taccgcggct gctggcacgt agttagccgt 960
ggctttctcg tcaggtaccg tcaaggtacc gccctattcg aacggtactt gttcgtccct1020
aacaacagaa ctttacaatc cgaagacctt catcgttcac gcggcgttgc tccatcagac1080
tttcgtccat tgtggaaaat tccctactgc tgcctcccgt aggagtctgg gccgtgtctc1140
agtcccagtg tggccggtca ccctctcagg tcggctacgc atcgtcgcct tggtaggcca1200
ttaccccacc aactagctaa tgcgccgcag gcccatctcc cagtgacagc ttaaagccgc1260
cttttctttt cggatcatgc gatccaaaaa cctatccggt attagcataa gtttccctat1320
gttatcccag tctgagaggc aggttgccta cgtgttactc acccgtccgc cgctagcctc1380
cgaagagact cgctcgactt gcatgtatta ggc 1413

Claims (7)

1.一株硝化短芽孢杆菌(Brevibacillus nitrificans)菌株vv6，已于2017年12月6日保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号GDMCC NO:60296。
2.权利要求1所述的硝化短芽孢杆菌菌株vv6在草菇生产中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于包括以下步骤：
将活化的草菇菌丝接种在培养基中，然后接种硝化短芽孢杆菌菌株vv6与草菇菌丝共培养，常温下培养至少6天，与vv6菌株共培养的草菇菌丝长满培养基；
所述的培养基为PDA培养基或棉籽壳培养基；
所述PDA培养基的配方和制法是，马铃薯200克，加水煮沸至少30分钟，过滤后取滤液，再葡萄糖20克、琼脂15～20克，加水至1000毫升，自然pH值；
所述的棉籽壳培养基由棉籽壳89％、麸皮10％、石灰1％组成，培养基灭菌后使用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的培养基为PDA培养基时，硝化短芽孢杆菌菌株vv6划线接种到培养基上。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述PDA培养基的制法中，过滤为8层纱布过滤。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的培养基为棉籽壳培养基时，将活化稀释后的硝化短芽孢杆菌菌株vv6菌液接种到培养基中。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的培养基为棉籽壳培养基时，将OD600值0.6的硝化短芽孢杆菌菌株vv6菌液接种到30-50g棉籽壳培养基中。
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