CN112569252A - 火棘多糖的应用和含有火棘多糖的药物组合物及含有该药物组合物的载药囊泡 - Google Patents

火棘多糖的应用和含有火棘多糖的药物组合物及含有该药物组合物的载药囊泡 Download PDF

Info

Publication number
CN112569252A
CN112569252A CN202011578121.6A CN202011578121A CN112569252A CN 112569252 A CN112569252 A CN 112569252A CN 202011578121 A CN202011578121 A CN 202011578121A CN 112569252 A CN112569252 A CN 112569252A
Authority
CN
China
Prior art keywords
polysaccharide
pyracantha fortuneana
drug
pharmaceutical composition
vesicle
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202011578121.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112569252B (zh
Inventor
张笛
陈彬
张一�
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hubei Soundny Bio Tech Co ltd
Original Assignee
Hubei Soundny Bio Tech Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hubei Soundny Bio Tech Co ltd filed Critical Hubei Soundny Bio Tech Co ltd
Priority to CN202011578121.6A priority Critical patent/CN112569252B/zh
Publication of CN112569252A publication Critical patent/CN112569252A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112569252B publication Critical patent/CN112569252B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A61K9/1273—Polymersomes; Liposomes with polymerisable or polymerised bilayer-forming substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供了火棘多糖的应用和含有火棘多糖的药物组合物及含有该药物组合物的载药囊泡，属于生物医药技术领域，所述火棘多糖用作化疗药物的增效剂和/或减毒剂，本发明发现火棘多糖与化疗药物联用对肿瘤细胞抑制作用更强且毒副作用更低，具有更好的抗肿瘤作用。同时本发明还将火棘多糖与化疗药物包裹于载药囊泡中，通过体外杀伤和细胞凋亡实验证明火棘多糖和化疗药物联用的载药囊泡能发挥靶向作用，进一步提高化疗药物对肿瘤细胞的敏感性，更有利于化疗药物的药效发挥，同时还能增强化疗药抗氧化应激作用，达到增效减毒的作用。

Description

火棘多糖的应用和含有火棘多糖的药物组合物及含有该药物 组合物的载药囊泡
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及火棘多糖作为增效剂和/或减毒剂的用途，还涉及火棘多糖与化疗药物的联合用药，进一步涉及包含该联合用药的载药囊泡及含有该载药囊泡的抗肿瘤药物制剂。
背景技术
近年来，肿瘤的发病率逐年提高。尽管科学家们一直在探索以各种方式来攻克肿瘤，但临床上对肿瘤的治愈率仍未显示出明显的提高。当前，治疗肿瘤最常用的方法依然是化疗药物治疗。但是，由于化疗药物非特异性的细胞毒性，在杀伤肿瘤细胞的同时也会损伤正常细胞，引起骨髓抑制、黏膜炎、皮炎、腹泻等严重的不良反应。而且长时间使用化疗药物治疗会出现耐药的情况，肿瘤细胞多次与化疗药物接触之后，对化疗药物的敏感性将下降甚至消失，导致治疗效果大大降低，而且耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明显下降，从而导致治疗失败。因而，增强化疗药物的疗效，减少使用剂量并达到较好的治疗效果，提高患者的生活质量，延长肿瘤患者的生存时间一直是抗肿瘤药物研究领域的热点。
近年来，随着国内外学者对肿瘤耐药机制的研究，根据现有机制开发出大量的肿瘤多药耐药逆转剂，但是这些逆转剂普遍存在副作用大、体内逆转效果不明显、价格昂贵等缺点。天然中草药植物资源丰富，药理作用广泛，多种中药如灵芝、红豆杉、黄芪或中药提取物如黄酮类、多酚类、生物碱类经研究证实具有体外抗肿瘤活性，且具有毒副作用低的优势，因此，开发中药或中药提取物作为逆转剂有显著优势。但上述中药或中药提取物作用温和、见效慢，药效仍有待提高。
发明内容
针对以上现有技术中的问题，本发明在于提供火棘多糖作为增效剂和/或减毒剂的应用，以及火棘多糖与化疗药物联合用药制备药物组合物和包含该药物组合物的载药囊泡，以及它们在制备抗肿瘤药物中的应用。
为实现上述目的，本发明具体通过以下技术实现：
本发明提供了火棘多糖用作增效剂和/或减毒剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
进一步地，所述火棘多糖的浓度为50-400μg/mL。
进一步地，所述火棘多糖的浓度为300μg/mL。
进一步地，所述火棘多糖采用水提醇沉法制备得到。
另外，本发明提供了一种药物组合物，包含有效量的火棘多糖和有效量的化疗药物。
进一步地，所述药物组合物包含50-400μg/mL的火棘多糖和0.1-50μg/mL 的化疗药物。
进一步地，所述药物组合物包含300μg/mL的火棘多糖和0.5-20μg/mL 的化疗药物。
进一步地，所述化疗药物为阿霉素、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤和顺铂中的一种或多种。
进一步地，当所述化疗药物为阿霉素时，所述药物组合物包含300μg/mL 的火棘多糖和0.5μg/mL的阿霉素；
当所述化疗药物为5-氟尿嘧啶时，所述药物组合物包含300μg/mL的火棘多糖和10μg/mL的5-氟尿嘧啶；
当所述化疗药物为甲氨蝶呤时，所述药物组合物包含300μg/mL的火棘多糖和10μg/mL的甲氨蝶呤；
当所述化疗药物为顺铂时，所述药物组合物包含300μg/mL的火棘多糖和5μg/mL的甲氨蝶呤。
另外，本发明提供了一种载药囊泡，包含源自凋亡肿瘤细胞的细胞囊泡和被包裹在所述细胞囊泡内的如上所述的药物组合物。
另外，本发明提供了如上所述的载药囊泡在制备抗肿瘤药物中的应用。
另外，本发明提供了一种抗肿瘤药物制剂，包含如上所述的载药囊泡和药学上可接受的辅剂。
有益效果：
本发明通过对比火棘多糖与目前常见的其他多糖类化合物对化疗药物的增效作用，发现火棘多糖的增效作用优于其他多糖类化合物，与化疗药物联用对肿瘤细胞抑制作用更强且毒副作用更低，具有更好的抗肿瘤作用。同时本发明还将火棘多糖与化疗药物包裹于载药囊泡中，通过体外杀伤和细胞凋亡实验证明火棘多糖和化疗药物联用的载药囊泡能发挥靶向作用，进一步提高化疗药物对肿瘤细胞的敏感性，更有利于化疗药物的药效发挥，同时还能增强化疗药抗氧化应激作用，达到增效减毒的作用。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。另外，术语“包括”、“包含”、“含有”、“具有”的含义是非限制性的，即可加入不影响结果的其它步骤和其它成分。如无特殊说明的，材料、设备、试剂均为市售。
为了更好地理解本发明而不是限制本发明的范围，在本发明中所用的表示用量、质量分数的所有数字、以及其他数值，在所有情况下都应理解为以词语“大约”所修饰。因此，除非特别说明，否则在说明书和权利要求书中所列出的数字参数都是近似值，其可能会根据试图获得的理想性质的不同而加以改变。各个数字参数至少应被看作是根据所报告的有效数字和通过常规的四舍五入方法而获得的。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂，下面对本发明的具体实施例做详细说明。
多糖类化合物是一种广泛存在于动植物中，具有多种生理活性的生物大分子。大量药理及临床研究表明，多糖类化合物(如香菇多糖、灵芝多糖、黄芪多糖)是一种良好的免疫调节剂，它能激活免疫受体，提高机体的免疫功能，由于天然、无毒的特性以及良好的疗效，已经成为一类极具开发潜力的新药资源。但将多糖类化合物与化疗药物联合使用来治疗肿瘤的研究还较少。
火棘(Pyracantha fortuneana(Maxim.)Li)属于蔷薇科苹果亚科火棘属的一种常绿植物灌木，是一种可药可食可观赏的多用途花果植物。其果实又称救军粮、水杈子，含有多种营养成分，如多糖、多酚、果胶、黄酮、原花青素等，具有很大的研究价值。火棘多糖应用于体外清除含氧自由基、抗氧化、抗疲劳方面的作用已有文献报道，然而，尚未有报道表明火棘多糖具有增强化疗药物抗肿瘤疗效或降低化疗药物毒性的作用。
基于此，本发明研究了火棘多糖与化疗药物配合的增效减毒等方面的效果。本发明实施例提供了火棘多糖在制备抗肿瘤药物中的应用，具体为：火棘多糖用作增效剂和/或减毒剂在制备抗肿瘤药物中的应用。所述增效剂是指所述火棘多糖与所述药物联用，能提高所述药物的抗肿瘤作用和疗效。所述减毒剂是指所述火棘多糖与所述药物联用，能降低所述药物的毒副作用。
术语“药物”是指可以通过抑制、杀伤肿瘤细胞而治疗肿瘤的化疗药物。所述化疗药物包括但不限于：治疗卵巢癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、肝癌、膀胱癌、白血病或胶质瘤的药物。具体地，所述化疗药物包括但不限于：甲氨蝶呤、阿霉素、顺铂、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、吉西他滨和/或10-羟基喜树碱。
火棘多糖具有良好的免疫增强作用，可以刺激机体的体液免疫和细胞免疫功能，促进或协调不同免疫细胞的活动，进而有助于提高机体对肿瘤细胞的杀伤作用。本发明将火棘多糖与化疗药物联合用药，首次发现了火棘多糖对化疗有良好的增效作用。火棘多糖与化疗药物联用对于多个不同组织来源的肿瘤细胞均具有显著的抑制增殖和活性的作用，能有效杀伤肿瘤细胞，增强治疗效果。而且火棘多糖还能够有效增强机体的氧化自由基清除力，从而保证了氧化/过氧化的平衡，有助于降低机体的氧化应激水平，逆转单独化疗导致的免疫系统和血液系统主要生化指标值的异常，避免机体细胞损伤加剧，临床可用于减轻肿瘤化疗造成的毒副作用和作为肿瘤治疗的辅助用药。且火棘多糖体外细胞实验中，采用工作浓度未见对细胞的毒性反应，安全性好，具有临床应用前景。
本发明对火棘多糖的提取方法不作特殊的限定，能够有效提取到可溶性的火棘多糖即可，如文献“赵荣飞,程劲松,郑浩,等.火棘果多糖提取工艺的研究[J].轻工科技,2017,09(v.26):15-16.”和文献“楚红英,陈志冉,李瑜.火棘中水溶性多糖的提取及测定[J].湖北农业科学,2014,53(10):2408-2411.”中公开的方法。
本发明具体提供了一种示例，其不能作为对本发明保护范围的限制。所述火棘多糖采用水提醇沉法制备得到，具体包括以下步骤：
S1、将火棘果去籽粉碎，过40目筛，取筛下物备用；
S2、采用水提法，火棘粉与水按照料液比1:10-30，在80-120℃温度条件下提取1-3次，合并浸提液，离心取上清液减压浓缩至一定体积，用1-4倍浓缩液体积的无水乙醇沉淀多次，直到不产生新的沉淀，将沉淀真空干燥得到火棘粗多糖；
S3、用蒸馏水溶解所述火棘粗多糖，采用Sevag法去除蛋白，大孔树脂吸附法除色素，再用2-4倍体积的无水乙醇沉淀，4℃静置过夜，之后离心干燥得到脱蛋白脱色素后的火棘多糖。
采用硫酸-苯酚法测定上述水提醇沉法提取得到的火棘多糖，得到多糖含量为102.3-105.6mg/g，多糖得率高，能够获得高纯度火棘多糖，提取效果好。其中，单糖种类主要以果糖、蔗糖和葡萄糖为主，且果糖、葡萄糖和蔗糖占火棘多糖总量的90％以上，具体为每1g火棘多糖中含有0.52-0.62g葡萄糖、 0.21-0.27g果糖和0.08-0.105g蔗糖。
本发明另一实施例提供了一种药物组合物，包含有效量的火棘多糖和有效量的化疗药物。本发明将火棘多糖和化疗药物联合使用后，发挥了协同增效作用，药效活性显著提高，对肿瘤细胞增殖有良好的抑制作用，同时能够诱导肿瘤细胞发生凋亡，显著增强化疗药物抗肿瘤作用，也减轻肿瘤化疗引起的副作用。
术语“有效量”是指足以实现其预期目标，例如，细胞、组织或受试者中所需的生物或医学反应的化合物、试剂、制剂或组合物的任何量，例如，在本发明的某些实施方案中，该预期目标可为：改善和/或治疗疾病(如肿瘤)的症状和并发症。火棘多糖和化疗药物用量多少决定于本领域技术熟练人员应知的标准，还要参考其他因素，这些因素包括并不限于个体的大小和健康情况和疾病的严重程度。
术语”治疗”及其类似术语涵盖对哺乳动物，尤其人类疾病的任何治疗，且包括：(a)预防疾病：在易患所述疾病但尚未诊断患有所述疾病的个体中发生； (b)抑制疾病：亦即遏制疾病进展，延长患者的生存期，减轻症状，使肿瘤缩小，使肿瘤转移受到遏制；及(c)缓解疾病，亦即引起疾病消退。在本发明中，“肿瘤治疗”和“抗肿瘤”或“治疗肿瘤”有相同的含义。抗肿瘤包括对肿瘤的治疗，也包括对肿瘤发生、复发和转移的预防。
细胞增殖和细胞活性的抑制强弱与胞内药物组合物的浓度在一定浓度范围内具有时间-浓度依赖性，且细胞凋亡程度也随胞内药物组合物浓度的增加而增大。胞内药物组合物浓度过低，抑制肿瘤细胞的生长和增殖的效果差，且细胞凋亡率相应降低，进而抗肿瘤作用差。而胞内药物组合物浓度过大，一方面对抗肿瘤作用增效不明显，另一方面还会产生更强的毒副作用，因此考虑到给药剂量不宜过大的问题，优选地，包含50-400μg/mL的火棘多糖和 0.1-50μg/mL的化疗药物。更优选包含300μg/mL的火棘多糖和0.5-20μg/mL 的化疗药物。
通过研究不同浓度的火棘多糖对化疗药物增效减毒的影响，进一步优选地，当化疗药物为阿霉素时，包含300μg/mL的火棘多糖和0.5μg/mL的阿霉素；当化疗药物为5-氟尿嘧啶时，包含300μg/mL的火棘多糖和10μg/mL的 5-氟尿嘧啶；当化疗药物为甲氨蝶呤时，包含300μg/mL的火棘多糖和10 μg/mL的甲氨蝶呤；当化疗药物为顺铂时，包含300μg/mL的火棘多糖和5 μg/mL的甲氨蝶呤。在上述范围内，药物组合物的疗效好、毒性低。
本发明再一实施例提供了一种载药囊泡，包含源自凋亡肿瘤细胞的细胞囊泡和被包裹在所述细胞囊泡内的如上所述的药物组合物。
将源自凋亡肿瘤细胞的细胞膜外翻形成的细胞囊泡作为载体包裹药物，细胞膜为磷脂双分子层，具有通透性，药物组合物可以顺浓度梯度进入细胞囊泡内，在细胞囊泡内形成均一的溶质，载药量高。此外，肿瘤细胞本身很难完成对火棘多糖的有效利用，但载药囊泡的载体来源于肿瘤细胞，含有待治疗的目标肿瘤细胞的生物学标记，能够轻易地被待治疗的目标肿瘤细胞识别并与其细胞膜融合，进而将载药囊泡内的药物输送到肿瘤细胞内，提高药物组合物的利用率，进一步增强抗肿瘤作用，且靶向性更强，能够定向于肿瘤细胞，实现药物的靶向传递，避免对机体的正常细胞产生毒害作用。上述载药囊泡用于肿瘤治疗，具有提高机体免疫应答，增强抗肿瘤效果，减少其毒副作用等优点。
另外，本发明提供了上述载药囊泡的制备方法，包括以下步骤：诱导处于对数生长期的肿瘤细胞凋亡，收集所述凋亡肿瘤细胞释放的细胞囊泡，向所述细胞囊泡中加入如上所述的有效量的药物组合物，共孵育16-24h以使药物组合物进入到所述细胞囊泡内，分离纯化得到载药囊泡。药物组合物以接近作为载体的细胞囊泡中的最大饱和度的量加入，之后在室温条件下进行孵育，实现细胞囊泡对药物组合物的包裹，制备的载药囊泡粒径均一，药物组合物包载量高、分散性好，具有明显的肿瘤杀伤作用。
诱导所述肿瘤细胞凋亡的方法为使用紫外线照射肿瘤细胞或者使用化疗药物与肿瘤细胞共孵育一段时间，具体操作参见专利CN102302784B。收集细胞囊泡和分离纯化载药囊泡的方法采用本领域的常规技术，通过收集将细胞囊泡和载药囊泡与细胞膜碎片和包涵体等杂质分离开，如差速离心分离、密度梯度离心分离等技术手段，本发明不再赘述。
本发明又一实施例提供了如上所述的载药囊泡在制备抗肿瘤药物中的应用。
另外，本发明提供了一种抗肿瘤药物制剂，包含如上所述的载药囊泡和药学上可接受的辅剂。所述的抗肿瘤药物制剂与如上所述的药物组合物和所述的载药囊泡相对于现有技术所具有的优势相同，在此不再赘述。
术语“药学上可接受的辅剂”是指不干扰活性成分的生物活性的效力并在其施用的浓度下对主体不具有明显毒性的组分，包括溶剂、分散剂、填充剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、防腐剂、助悬剂、乳化剂、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。将上述组分用于药学活性物质是本领域所熟知的。如溶剂或分散剂可包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等，也包括由这些溶剂或分散剂组成的混合物。
通过上述药学上可接受的辅剂的配合，该抗肿瘤药物制剂可被制成一定的剂型，这些剂型包括但不限于溶液、乳化液、脂质体和冻干粉等。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照制造厂商所建议的条件。
以下实施例中，除非特别说明，所述肿瘤细胞选用MCF-7细胞株、HepG-2 细胞株和SKOV-3细胞株。
以下实施例中，除非特别说明，所述火棘多糖采用以下方法制备得到，具体为：S1、采摘新鲜的火棘果洗净，置于60℃烘箱中干燥至恒重，之后去籽粉碎，过40目筛，取筛下物备用；本实施例中，所述火棘果采摘于湖北省武汉市东湖高新区；S2、采用水提法，火棘粉与水按照按照料液比1:20，在 95℃温度条件下提取2次，每次2小时，合并2次浸提液，离心取上清液减压浓缩至一定体积，用2倍浓缩液体积的无水乙醇沉淀3次，直到不产生新的沉淀，将沉淀真空干燥得到火棘粗多糖；S3、用蒸馏水溶解所述火棘粗多糖，采用Sevag法去除蛋白，大孔树脂吸附法除色素，再用3倍体积的无水乙醇沉淀，4℃静置过夜，之后离心干燥得到脱蛋白脱色素后的火棘多糖。采用硫酸-苯酚法测定上述水提醇沉法提取得到的火棘多糖，得到火棘多糖含量为105.6mg/g，具体每1g火棘多糖中含有0.582g葡萄糖、0.247g果糖和0.098g 蔗糖。
实施例1火棘多糖对阿霉素的增效作用
肿瘤细胞培养：将纯化的肿瘤细胞接种于RPMI 1640培养基，培养基中含有10％胎牛血清(v/v)、100U/mL青霉素、100mg/mL链霉素，在温度为 37℃、气体氛围为5％CO2的条件下进行培养，定期观察并传代培养，当肿瘤细胞生长到对数期时进行消化，之后将分散的肿瘤细胞接种于96孔板孵育过夜后备用。
增效实验：将96孔板中的肿瘤细胞分为6组，其中5组作为实验组，分别加入0.5μg/mL阿霉素、400μg/mL火棘多糖、0.5μg/mL阿霉素和400μg/mL 火棘多糖、0.5μg/mL阿霉素和400μg/mL芦荟多糖、0.5μg/mL阿霉素和400 μg/mL黄芪多糖，另一组不加任何药物作为对照组，将6组中细胞分别置于温度为37℃、气体氛围为5％CO2的条件下培养24h，取样采用MTT法检测各组肿瘤细胞抑制情况并按照下式计算抑制率，检测结果见表1。
抑制率＝[1-(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100％；式中，As为实验组吸光度值， Ac为对照组吸光度值，Ab为空白组吸光度值，即含培养基、MTT溶液，但不含细胞和药物，以扣除培养基和MTT溶液等对实验组和对照组吸光度值的影响，提高测定结果的精度。
表1不同多糖类化合物和阿霉素联用对肿瘤细胞的抑制率(％)
Figure BDA0002864577570000091
注：与0.5μg/mL阿霉素组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
由表1可知，单用火棘多糖时，对三种肿瘤细胞的增殖无明显影响，单用阿霉素时，对三种肿瘤细胞均有抑制作用，将火棘多糖、芦荟多糖、黄芪多糖与阿霉素联用能显著抑制肿瘤细胞的生长，其中火棘多糖相比于市售常见的芦荟多糖和黄芪多糖增效作用更强，其抑制率远高于其它组，差异具有统计学意义(P＜0.01)，表明火棘多糖是一种更强的增效剂。
实施例2筛选合适的火棘多糖与阿霉素联用浓度
采用实施例1的方法进行肿瘤细胞培养，之后将96孔板中的肿瘤细胞分成不同组，分别加入0.5μg/mL阿霉素以及不同浓度的火棘多糖(0、50、100、 200、300、400μg/mL)，之后将肿瘤细胞置于温度为37℃、气体氛围为5％CO2的条件下培养24h，取样采用MTT法检测各组肿瘤细胞抑制情况并计算抑制率，检测结果见表2。
表2不同浓度火棘多糖和阿霉素联用对肿瘤细胞的抑制率(％)
Figure BDA0002864577570000101
注：与0.5μg/mL阿霉素组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；“/”表示未加入。
由表2可知，火棘多糖在50-400μg/mL范围内都具有一定的增强阿霉素多肿瘤细胞的抑制作用，且呈现剂量依耐性，增效作用随火棘多糖浓度增大而增强，但300μg/mL与400μg/mL的火棘多糖增效作用差异不明显，考虑到给药剂量不宜过大的问题，优选300μg/mL火棘多糖与阿霉素联用。
实施例3火棘多糖与阿霉素联用的载药囊泡对肿瘤细胞的杀伤作用
载药囊泡制备：培养肿瘤细胞使细胞量达到2×107个/mL，然后置于紫外线下照射30min诱导细胞凋亡，之后培养48h以形成稳定的细胞囊泡，将含有凋亡细胞的培养液进行密度梯度离心分离出细胞囊泡，使用1mL的0.9％ (wt)的生理盐水重悬细胞囊泡，向细胞囊泡悬液中加入阿霉素和火棘多糖，在室温条件下共孵育24h，使细胞囊泡包裹阿霉素和火棘多糖形成载药囊泡，最后密度梯度离心分离出载药囊泡备用。
肿瘤细胞杀伤实验：采用实施例1的方法进行肿瘤细胞培养，之后将96 孔板中的肿瘤细胞分成4组，其中1组加入火棘多糖与阿霉素联用的载药囊泡，使其火棘多糖和阿霉素的终浓度分别为300μg/mL和0.5μg/mL；另外3 组分别加入0.5μg/mL阿霉素、0.5μg/mL阿霉素载药囊泡、300μg/mL火棘多糖载药囊泡，之后将肿瘤细胞置于温度为37℃、气体氛围为5％CO2的条件下培养24h，取样采用乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(Lactatedehydrogenase (LDH)Cytotoxicity Assay Kit，购自武汉默沙克生物科技有限公司，货号： 69-98628)检测各组乳酸脱氢酶活性来分析细胞凋亡情况，并按照下式计算凋亡率，检测结果见表3。同时取样使用BDFACSCantoⅡ流式细胞仪测定细胞凋亡率，进行体外肿瘤细胞杀伤对比，测定结果见表4。
表3采用LDH检测试剂盒检测乳酸脱氢酶活性结果
Figure BDA0002864577570000111
注：与0.5μg/mL阿霉素组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
表4采用流式细胞仪测定细胞凋亡率结果
Figure BDA0002864577570000112
注：与0.5μg/mL阿霉素组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
细胞凋亡造成细胞膜结构的破坏会导致胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(LDH)，LDH生成的红色产物的量与凋亡裂解的细胞数成正比。通过检测培养液中LDH的酶活性，可以指示细胞凋亡程度。由表3-4可知，与0.5μg/mL阿霉素游离组相比，载药囊泡包载的阿霉素组对肿瘤细胞的杀伤作用优于游离组；与0.5μg/mL阿霉素载药囊泡组相比，包载了0.5μg/mL阿霉素和300μg/mL火棘多糖的载药囊泡组对肿瘤的杀伤效果更强，这是因为火棘多糖对阿霉素具有良好的增效作用，同时采用源自凋亡肿瘤细胞的细胞囊泡作为载体，包裹火棘多糖和阿霉素形成载药囊泡，发挥了靶向作用，有利于药物到达靶向部位，提高药物的药效发挥，对肿瘤细胞疗效增加。由此，在达到相同疗效的情况下，采用火棘多糖和阿霉素联用可以降低化疗药物的有效剂量，制备成载药囊泡后，给药剂量可以进一步降低。
实施例4火棘多糖与阿霉素联用及其载药囊泡对肿瘤细胞的毒副作用
采用实施例1的方法进行肿瘤细胞培养，之后将96孔板中的肿瘤细胞分成4组，分别加入0.5μg/mL阿霉素、300μg/mL火棘多糖、0.5μg/mL阿霉素和300μg/mL火棘多糖、0.5μg/mL阿霉素载药囊泡、0.5μg/mL阿霉素和300 μg/mL火棘多糖联用载药囊泡，之后将肿瘤细胞置于温度为37℃、气体氛围为5％CO2的条件下培养24h，取样采用三磷酸腺苷(ATP)检测试剂盒(购自武汉默沙克生物科技有限公司，货号：69-38561)、谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(购自武汉默沙克生物科技有限公司，货号：69-81223)测定ATP和 GSH的水平，同时以不加入任何药物的肿瘤细胞作为对照组，检测结果见表 5。
表5火棘多糖联用阿霉素对肿瘤细胞的ATP及GSH的影响
Figure BDA0002864577570000121
注：与0.5μg/mL阿霉素组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
ATP，是生命体最基本的能量分子，一种通用的能量“货币”。ATP参与多种酶促反应，维持正常的生命活动。通过ATP检测，可以间接定量肿瘤细胞的数量和活性状态。患者在接受化疗后，体内的抗氧化能力会大大降低，低到某个程度时，自由基就会损害细胞、器官，还原型谷胱甘肽(GSH)是绝大多数活细胞中巯基的主要来源，对于维持蛋白质中巯基适当的氧化还原状态有重要作用，并且是动物细胞中关键的抗氧化剂，GSH含量的高低可以反映细胞的氧化应激性水平和抗氧化能力。
由表5可知，与单用阿霉素相比，火棘多糖与阿霉素联用能降低肿瘤细胞的ATP水平，抑制肿瘤细胞的能量代谢，将其包裹于载药囊泡后，由于载药囊泡的靶向性和高效的药物递送效率，其对肿瘤细胞的抑制作用更加显著。且火棘多糖与阿霉素联用组的GSH水平升高，有利于增强机体清除氧自由基的能力而发挥增效减毒作用，缓解氧化应激带来的伤害，保护细胞免受损伤，起到一定的免疫保护作用。
实施例5火棘多糖对5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤和顺铂的增效作用
采用实施例1的方法进行肿瘤细胞培养，之后将96孔板中的肿瘤细胞分成6组，分别加入10μg/mL 5-氟尿嘧啶、10μg/mL 5-氟尿嘧啶和300μg/mL 火棘多糖、10μg/mL甲氨蝶呤、10μg/mL甲氨蝶呤和300μg/mL火棘多糖、 5μg/mL顺铂、5μg/mL顺铂和300μg/mL火棘多糖，之后将肿瘤细胞置于温度为37℃、气体氛围为5％CO2的条件下培养24h，取样采用MTT法检测各组肿瘤细胞抑制情况并计算抑制率，检测结果见表6。
表6火棘多糖和不同类化疗药物联用对肿瘤细胞的抑制率(％)
Figure BDA0002864577570000131
注：与0.5μg/mL阿霉素组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
由表6可知，火棘多糖对5-氟尿嘧啶/甲氨蝶呤/顺铂均有增效作用，且作用较明显，是一种优良的化疗药物的增效剂，具有良好的应用前景，将火棘多糖与上述的5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤和顺铂分别联用，制备成载药囊泡，相比于游离药，同样具有更高的疗效。
虽然本发明公开披露如上，但本发明公开的保护范围并非仅限于此。本领域技术人员在不脱离本发明公开的精神和范围的前提下，可进行各种变更与修改，这些变更与修改均将落入本发明的保护范围。

Claims (10)

1.火棘多糖用作增效剂和/或减毒剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述火棘多糖的浓度为50-400μg/mL。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述火棘多糖采用水提醇沉法制备得到。
4.一种药物组合物，其特征在于，包含有效量的火棘多糖和有效量的化疗药物。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，包含50-400μg/mL的火棘多糖和0.1-50μg/mL的化疗药物。
6.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含300μg/mL的火棘多糖和0.5-10μg/mL的化疗药物。
7.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述化疗药物为阿霉素、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤和顺铂中的一种或多种。
8.一种载药囊泡，其特征在于，包含源自凋亡肿瘤细胞的细胞囊泡和被包裹在所述细胞囊泡内的如权利要求4-7任一项所述的药物组合物。
9.根据权利要求8所述的载药囊泡在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.一种抗肿瘤药物制剂，其特征在于，包含如权利要求8所述的载药囊泡和药学上可接受的辅剂。
CN202011578121.6A 2020-12-28 2020-12-28 火棘多糖的应用和含有火棘多糖的药物组合物及含有该药物组合物的载药囊泡 Active CN112569252B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011578121.6A CN112569252B (zh) 2020-12-28 2020-12-28 火棘多糖的应用和含有火棘多糖的药物组合物及含有该药物组合物的载药囊泡

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011578121.6A CN112569252B (zh) 2020-12-28 2020-12-28 火棘多糖的应用和含有火棘多糖的药物组合物及含有该药物组合物的载药囊泡

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112569252A true CN112569252A (zh) 2021-03-30
CN112569252B CN112569252B (zh) 2022-01-11

Family

ID=75140191

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011578121.6A Active CN112569252B (zh) 2020-12-28 2020-12-28 火棘多糖的应用和含有火棘多糖的药物组合物及含有该药物组合物的载药囊泡

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112569252B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115350215A (zh) * 2022-09-13 2022-11-18 华中科技大学鄂州工业技术研究院 一种火棘果提取物在制备治疗骨髓抑制的药物中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080261896A1 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 Sinphar Pharmaceutical Co., Ltd. Testosterone generating and metabolizing enhancer
CN107712845A (zh) * 2017-10-18 2018-02-23 西昌学院 火棘果提取物在制备提高视觉敏感度保健食品与药品中的用途
CN108771061A (zh) * 2018-03-30 2018-11-09 重庆火吉健康产业（集团）有限公司 具有抗癌功效的火棘果浓缩原液及其制备方法
CN109134683A (zh) * 2018-09-25 2019-01-04 武汉轻工大学 一种火棘多糖铁复合物的制备方法及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080261896A1 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 Sinphar Pharmaceutical Co., Ltd. Testosterone generating and metabolizing enhancer
CN107712845A (zh) * 2017-10-18 2018-02-23 西昌学院 火棘果提取物在制备提高视觉敏感度保健食品与药品中的用途
CN108771061A (zh) * 2018-03-30 2018-11-09 重庆火吉健康产业（集团）有限公司 具有抗癌功效的火棘果浓缩原液及其制备方法
CN109134683A (zh) * 2018-09-25 2019-01-04 武汉轻工大学 一种火棘多糖铁复合物的制备方法及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHENGFU YUAN等: "Inhibition on the growth of human MDA-MB-231 breast cancer cells in vitro and tumor growth in a mouse xenograft model by Se-containing polysaccharides from Pyracantha fortuneana", 《NUTRITION RESEARCH》 *
乃戈日优: "火棘的研究进展", 《四川农业科技》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115350215A (zh) * 2022-09-13 2022-11-18 华中科技大学鄂州工业技术研究院 一种火棘果提取物在制备治疗骨髓抑制的药物中的应用
CN115350215B (zh) * 2022-09-13 2023-10-31 华中科技大学鄂州工业技术研究院 一种火棘果提取物在制备治疗骨髓抑制的药物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN112569252B (zh) 2022-01-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101485655B (zh) 二氢杨梅素在制备防治肿瘤放化疗不良反应的药物的应用
KR101074158B1 (ko) 간 보호 또는 간 질환의 예방 및 치료용 인삼다당체 조성물
Gonzaga et al. In vivo growth-inhibition of Sarcoma 180 by an α-(1→ 4)-glucan–β-(1→ 6)-glucan-protein complex polysaccharide obtained from Agaricus blazei Murill
US10967017B2 (en) Traditional Chinese medicine composition and use thereof
CN105017438B (zh) 一种白背三七多糖及其在制备用于免疫调节和抗肿瘤的药物和功能食品中的应用
CN112569252B (zh) 火棘多糖的应用和含有火棘多糖的药物组合物及含有该药物组合物的载药囊泡
CN104042623A (zh) 一种黑根霉胞外多糖在制备治疗或预防消化道肿瘤药物中的应用
CN105769926A (zh) 大鲵皮肤黏液提取物制备抗乳腺癌药物及其应用
KR101829637B1 (ko) 참옻나무 목심 추출물을 함유하는 항암치료 부작용에 따른 소화기능장애, 백혈구 감소증 및 골수부전증의 개선, 예방 또는 치료용 조성물
CN101152165A (zh) 一种抗肿瘤的异甘草素片剂
CN106177187B (zh) 具有增效减毒抗肝癌作用的茶多酚茶多糖组合物
Chandran et al. Evaluation of in vivo anticancer activity of Scaevola taccada Roxb against Ehrlich ascites carcinoma in Swiss albino mice
US11026988B2 (en) Traditional Chinese medicine composition and use thereof
US10967016B2 (en) Traditional Chinese medicine composition and use thereof
CN112979833A (zh) 一种具有肿瘤微血管抑制作用的血红栓菌总多糖及其应用
CN101711790A (zh) 一种用于治疗肝癌的野生核桃楸树皮水提取物
MXPA01008280A (es) Extractos, de alto peso molecular, de convolvulus arvensis (enredadera silvestre).
CN105477068B (zh) 一种桑枝叶活性部位的制备方法及其应用
RU2377008C2 (ru) Противоопухолевое средство
CN109953999B (zh) 由灵芝多糖、猪苓多糖组成的具有免疫增强作用的组合物
TWI826039B (zh) 檳榔葉萃取物於治療或預防肝癌的醫藥用途
CN111840523B (zh) 一种含活性蛋白和活性脂肪酸的抗癌症的药物组合物
KR102590150B1 (ko) 한약재 복합 추출물을 유효 성분으로 포함하는 폐암 예방 또는 치료용 약학적 조성물
CN101485791B (zh) 显齿蛇葡萄总黄酮在制备防治肿瘤放化疗不良反应的药物的应用
CN111494361B (zh) 盐酸芬戈莫德与莪术醇的药物组合物在制备抗多发性骨髓瘤药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant