CN112553280B - 一种蛋壳膜肽钙的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种蛋壳膜肽钙的制备方法,以鸡蛋壳为原料,将蛋壳和蛋壳膜经过分离和粉碎,分别得到蛋壳粉和蛋壳膜蛋白粉,蛋壳粉中加盐酸得到CaCl2溶液,蛋壳膜粉经过提取、过滤得到蛋壳膜蛋白粉的提取液,再经过复合酶酶解、过滤、浓缩得到蛋壳膜多肽,将CaCl2溶液和蛋壳膜多肽混合,加入无水乙醇沉淀、过滤得到蛋壳膜肽钙。本发明从蛋壳中提取其中的可溶性钙和蛋白,在此基础上将其制备成蛋壳膜肽钙,达到胶原与钙同补的效果,为鸡蛋壳的综合利用开辟一条有效途径,该制备方法多肽与钙的螯合率高,产物中多肽与钙含量更高。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药制备技术领域,具体涉及一种蛋壳膜肽钙的制备方法。
背景技术
缺钙会导致多种疾病的发生,常见的包括心血管疾病、骨质疏松、佝偻病等,补钙已经成为提高我国居民身体素质的关键问题之一。要使补钙产品中的钙能够被有效的利用,还需对骨胶原进行补充。鸡蛋壳膜中约含有其自重10%的胶原蛋白,具有极高的利用价值,周艳华采用二次提取法制备了可溶性鸡蛋壳膜蛋白,检定出鸡蛋壳膜蛋白含有所有人体所必需的氨基酸,是一种营养丰富的优质蛋白;王泽奇,李静,胡廷,等利用微波辅助制备鸡蛋壳膜多肽螯合钙,螯合率可提高达80%以上,产物具有更高的肠道吸收效果。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种蛋壳膜肽钙的制备方法,方法简单,多肽与钙的螯合率更高。
基于上述问题,本发明提出的技术方案是提供一种蛋壳膜肽钙的制备方法,包括以下步骤:
(1)以鸡蛋壳为原料,将蛋壳和蛋壳膜经过破碎、分离、粉碎,分别得到蛋壳粉和蛋壳膜蛋白粉;
(2)蛋壳粉中加盐酸得到CaCl2溶液;
(3)蛋壳膜粉经过提取、过滤得到蛋壳膜蛋白粉的提取液,在提取液中加入复合酶进行酶解,将酶解液进行过滤、浓缩得到蛋壳膜多肽;
(4)将质量比为1:4~3:1的蛋壳膜多肽和CaCl2充分溶解在蒸馏水中,调节溶液pH为5~9,在20~60℃的水浴温度下,反应10~60min,再加入无水乙醇,然后经过过滤、沉淀、干燥得到蛋壳膜肽钙。
其中,步骤(3)中采用的复合酶为碱性蛋白酶及木瓜蛋白酶复合酶。
其中,对混合溶液pH对螯合率的影响进行考察:称取0.3g蛋壳膜肽粉和0.1gCaCl2,使之充分溶解在5mL蒸馏水中,分别在pH值为6、7、8、9、10的条件下,50℃水浴中反应40min,反应结束后加入无水乙醇,静置后过滤,测定螯合率,结果见图1,由图1可知,pH在5~9范围内,随着pH值不断增加,螯合率不断上升,当pH值为8时,螯合率达到最大值,当pH值超过8时,螯合率反而下降,故优选pH值为8。
对肽和钙质量比对螯合率的影响进行考察,称取一定质量的蛋壳膜肽粉和CaCl2,质量比分别为1:4、1:3、1:2、1:2、2:1、3:1、4:1使之充分溶解在5mL蒸馏水中,在pH值为8,50℃水浴条件下,反应40min,反应结束后加入无水乙醇,静置后过滤,测定螯合率,结果见图2,由图2可知,在1∶4~3∶1范围内,随着肽粉的增加,螯合率不断上升。当配比3∶1时达到最大值,之后螯合率基本不变,故优选配比为3∶1。
对反应时间对螯合率的影响进行考察,称取0.3g蛋壳膜肽粉和0.1g Ca Cl2,使之充分溶解在5mL蒸馏水中,在pH值为8,50℃水浴条件下,分别反应0、10、20、30、40min,反应结束后加入无水乙醇,静置后过滤,测定螯合率,结果见图3。一般金属离子的配位反应是一个室温下的快速反应,从图3中可以看出反应时间对螯合率基本无影响,在10min~50min之间螯合率均在90%附近,因此选择20min即可。
对反应温度对螯合率的影响进行考察,称取0.3g蛋壳膜肽粉和0.1g Ca Cl2,使之充分溶解在5mL蒸馏水中,调节pH值为8,分别在20、30、40、50、60℃水浴条件下,反应40min,反应结束后加入无水乙醇,静置后过滤,测定螯合率,结果见图4。如图4可知:在20℃~60℃范围内,随着反应温度不断增加,螯合率不断上升;当反应温度40℃时螯合率达到最大,当反应温度超过40℃时,螯合率略有下降,故优选反应温度为40~50℃。
本发明的优点和有益效果:
本发明以鸡蛋壳为原料,提取其中的可溶性钙和蛋白然,在此基础上通过有机溶剂沉淀法将其制备成蛋壳膜肽钙,达到胶原与钙同补的效果,为鸡蛋壳的综合利用开辟一条有效途径,通过有机溶剂沉淀法结合优化的反应条件,多肽与钙的螯合率高达90%;制得的蛋壳膜肽钙中肽含量≥60.0%,钙含量≥15.0%。
附图说明
图1为pH值对螯合率的影响的线性图。
图2为蛋壳膜肽粉和Ca Cl2对螯合率的影响的线性图。
图3为反应时间对螯合率的影响的线性图。
图4为水浴温度对螯合率的影响的线性图
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。
实施例1一种蛋壳膜肽钙的制备方法,包括以下步骤:
(1)以鸡蛋壳为原料,将蛋壳和蛋壳膜经过破碎、分离、粉碎,分别得到蛋壳粉和蛋壳膜蛋白粉;
(2)蛋壳粉中加盐酸得到CaCl2溶液;
(3)蛋壳膜粉经过提取、过滤得到蛋壳膜蛋白粉的提取液,在提取液中加入碱性蛋白酶及木瓜蛋白酶复合酶进行酶解,将酶解液进行过滤、浓缩得到蛋壳膜多肽;
(4)将质量比为2:1的蛋壳膜多肽和CaCl2充分溶解在蒸馏水中,调节溶液pH为7.5,在30℃的水浴温度下,反应10min,再加入无水乙醇,然后经过过滤、沉淀、干燥得到蛋壳膜肽钙。
实施例2一种蛋壳膜肽钙的制备方法,包括以下步骤:
(1)以鸡蛋壳为原料,将蛋壳和蛋壳膜经过破碎、分离、粉碎,分别得到蛋壳粉和蛋壳膜蛋白粉;
(2)蛋壳粉中加盐酸得到CaCl2溶液;
(3)蛋壳膜粉经过提取、过滤得到蛋壳膜蛋白粉的提取液,在提取液中加入碱性蛋白酶及木瓜蛋白酶复合酶进行酶解,将酶解液进行过滤、浓缩得到蛋壳膜多肽;
(4)将质量比为3:1的蛋壳膜多肽和CaCl2充分溶解在蒸馏水中,调节溶液pH为8,在40℃的水浴温度下,反应10min,再加入无水乙醇,然后经过过滤、沉淀、干燥得到蛋壳膜肽钙。
实施例3一种蛋壳膜肽钙的制备方法,包括以下步骤:
(1)以鸡蛋壳为原料,将蛋壳和蛋壳膜经过破碎、分离、粉碎,分别得到蛋壳粉和蛋壳膜蛋白粉;
(2)蛋壳粉中加盐酸得到CaCl2溶液;
(3)蛋壳膜粉经过提取、过滤得到蛋壳膜蛋白粉的提取液,在提取液中加入碱性蛋白酶及木瓜蛋白酶复合酶进行酶解,将酶解液进行过滤、浓缩得到蛋壳膜多肽;
(4)将质量比为4:1的蛋壳膜多肽和CaCl2充分溶解在蒸馏水中,调节溶液pH为8.5,在40℃的水浴温度下,反应20min,再加入无水乙醇,然后经过过滤、沉淀、干燥得到蛋壳膜肽钙。
实施例4一种蛋壳膜肽钙的制备方法,包括以下步骤:
(1)以鸡蛋壳为原料,将蛋壳和蛋壳膜经过破碎、分离、粉碎,分别得到蛋壳粉和蛋壳膜蛋白粉;
(2)蛋壳粉中加盐酸得到CaCl2溶液;
(3)蛋壳膜粉经过提取、过滤得到蛋壳膜蛋白粉的提取液,在提取液中加入碱性蛋白酶及木瓜蛋白酶复合酶进行酶解,将酶解液进行过滤、浓缩得到蛋壳膜多肽;
(4)将质量比为1:2的蛋壳膜多肽和CaCl2充分溶解在蒸馏水中,调节溶液pH为8,在50℃的水浴温度下,反应20min,再加入无水乙醇,然后经过过滤、沉淀、干燥得到蛋壳膜肽钙。
实施例5一种蛋壳膜肽钙的制备方法,包括以下步骤:
(1)以鸡蛋壳为原料,将蛋壳和蛋壳膜经过破碎、分离、粉碎,分别得到蛋壳粉和蛋壳膜蛋白粉;
(2)蛋壳粉中加盐酸得到CaCl2溶液;
(3)蛋壳膜粉经过提取、过滤得到蛋壳膜蛋白粉的提取液,在提取液中加入碱性蛋白酶及木瓜蛋白酶复合酶进行酶解,将酶解液进行过滤、浓缩得到蛋壳膜多肽;
(4)将质量比为1:4的蛋壳膜多肽和CaCl2充分溶解在蒸馏水中,调节溶液pH为7.5,在40℃的水浴温度下,反应30min,再加入无水乙醇,然后经过过滤、沉淀、干燥得到蛋壳膜肽钙。
实施例6一种蛋壳膜肽钙的制备方法,包括以下步骤:
(1)以鸡蛋壳为原料,将蛋壳和蛋壳膜经过破碎、分离、粉碎,分别得到蛋壳粉和蛋壳膜蛋白粉;
(2)蛋壳粉中加盐酸得到CaCl2溶液;
(3)蛋壳膜粉经过提取、过滤得到蛋壳膜蛋白粉的提取液,在提取液中加入碱性蛋白酶及木瓜蛋白酶复合酶进行酶解,将酶解液进行过滤、浓缩得到蛋壳膜多肽;
(4)将质量比为1:4的蛋壳膜多肽和CaCl2充分溶解在蒸馏水中,调节溶液pH为8,在40℃的水浴温度下,反应20min,再加入无水乙醇,然后经过过滤、沉淀、干燥得到蛋壳膜肽钙。
以上对本发明的几个实施例进行了详细说明,但所述内容仅为本发明的较佳实施例,不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等,均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。
Claims (3)
1.一种蛋壳膜肽钙的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)以鸡蛋壳为原料,将蛋壳和蛋壳膜经过破碎、分离、粉碎,分别得到蛋壳粉和蛋壳膜蛋白粉;
(2)蛋壳粉中加盐酸得到CaCl2溶液;
(3)蛋壳膜粉经过提取、过滤得到蛋壳膜蛋白粉的提取液,在提取液中加入碱性蛋白酶及木瓜蛋白酶组成的复合酶进行酶解,将酶解液进行过滤、浓缩得到蛋壳膜多肽;
(4)将质量比为3:1的蛋壳膜多肽和CaCl2充分溶解在蒸馏水中,调节溶液pH为8 ,在40~50℃的水浴温度下,反应10~60min,加入无水乙醇,然后经过过滤、沉淀、干燥得到蛋壳膜肽钙。
2.根据权利要求1所述的蛋壳膜肽钙的制备方法,其特征在于:步骤(4)水浴温度为40℃。
3.根据权利要求1所述的蛋壳膜肽钙的制备方法,其特征在于:步骤(4)中螯合反应的时间为20min。
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Application publication date: 20210326 Assignee: TIANJIN LIMIN CONDIMENT Co.,Ltd. Assignor: TIANJIN FOOD RESEARCH INSTITUTE Co.,Ltd. Contract record no.: X2024980002352 Denomination of invention: A Preparation Method of Eggshell Membrane Peptide Calcium Granted publication date: 20221118 License type: Common License Record date: 20240229 |
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