CN112546113A - 一种益生菌抑菌凝胶及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种益生菌抑菌凝胶及其制备方法，涉及医药技术领域。其中，抑菌凝胶包括经过双阳离子型酸性离子液体和微生物菌剂发酵催化的发酵中药、益生菌、pH调节剂、保湿剂、增稠剂、螯合剂和去离子水。方法包括：S1、按照配方比例称中药，混合粉碎，灭菌；S2、加入发酵催化剂、去离子水进行发酵；S3、对发酵后的中药混合物进行过滤，得到药液，对药液进行浓缩得到发酵中药；S4、将发酵中药与益生菌、pH调节剂、营养保湿剂、增稠剂、螯合剂、去离子水混合，制备得到抑菌凝胶。本发明通过抑制有害菌生长、调节阴道益生菌生长繁殖，改善阴道炎患者阴道微生态环境，有助于减少疾病复发。制备方法简单，有利于工业生产。

Description

一种益生菌抑菌凝胶及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种益生菌抑菌凝胶及其制备方法。

[Ps₂TMEDA][BF₄]₂指N,N'-二丙基磺酸基-N,N,N',N'-四甲基乙二铵四氟硼酸盐，其余不同阴离子的离子液体的命名以此类推；

[Bs₂TMEDA][BF₄]₂指N,N'-二丁基磺酸基-N,N,N',N'-四甲基乙二铵四氟硼酸盐，其余不同阴离子的离子液体的命名以此类推。

背景技术

阴道菌群对维护阴道内环境的稳定和调节发挥着不可替代的作用。阴道菌群非常复杂，除原虫、真菌外，尚包括很多需氧菌及厌氧菌，如乳链球菌、肠杆菌、变形杆菌、加夫基球菌、韦永球菌等在阴道下端常见，这些微生物可分为共栖的及病理性的，都生长在这个共同的环境内，各微生物之间可能有桔抗作用。另一个影响其生长的是氢离子浓度，在pH3.8～4.2时，有利于共栖益生菌的繁殖，尤其是乳酸杆菌，这是健康阴道中的主要益生菌种，阴道液中的密度可达10⁵～10⁸ml，当阴道被病原微生物感染后，假使乳酸杆菌占优势，仍能维持阴道内pH3.8～4.2的弱酸环境，阴道则不会发生疾病，重要的是乳酸杆菌还能产生H₂0₂，对其他微生物有毒性作用而抑制其繁殖。一旦病原微生物繁殖力超过益生菌，就会破坏益生菌的生长环境，进而破坏阴道内环境，最终导致妇科疾病发生。妇科疾病发生后，往往不能很有效的调节治疗，且顽固的炎症反复发作，严重影响女性生殖健康。

阴道炎是妇产科的常见病，已婚妇女一生中至少患1-2次阴道炎，孕产妇患阴道炎会影响到妊娠的结果，对产后的病程也会产生影响。一般情况下阴道有一些常驻菌群，如B型溶血性链球菌属、白色念珠菌等，在机体抵抗力低下、阴道黏膜损伤或阴道内酸度改变时，这些菌的毒力增加，成为致病菌而使阴道炎发作。如妊娠期妇女阴道上皮细胞糖原含量增加，阴道酸性增强，同时肾糖阈降低，小便中糖含量升高而促进白色念珠菌的生长繁殖。临床上，根据阴道炎性疾病的病因不同，将阴道炎分为非特异性、真菌性、细菌性、病毒性和原虫性阴道炎。

目前针对该疾病的主要治疗措施是通过抗生素或杀菌剂治疗，通杀所有阴道细菌以彻底清洁阴道。通过治疗后的阴道往往需要很长时间进行自我修护，更严重者会因为治疗失当导致阴道丧失自我调节能力。通过查阅现有的产品和专利，我们发现有正规文号的在售私处护理凝胶产品多是通过杀菌的方式以添加季铵类阳离子作为杀菌剂，如：醋酸氯已定、苯扎氯铵等，通过改变细菌胞浆膜通透性，使菌体胞浆物质外渗，阻碍其代谢而起杀灭作用。有报道此类杀菌剂可引起变态反应性结膜炎、视力减退、接触性皮炎等，严重者甚至引起死亡。这类杀菌剂在杀灭有害菌的同时，把益生菌也杀死了，益生菌死掉了，阴道内环境也就瓦解了。此外，还有一些洗液针可清洗阴道和外阴，但这些洗液多含表活剂且多呈碱性或中性，用碱性的沐浴露或自来水清洗是不科学的，频繁使用洗液、消毒护垫等，也容易破坏阴道弱酸性环境。长期应用抗菌药物易导致疾病复发，要在保护好益生菌的前提下，控制好病原菌的生长，依靠阴道自身的调节能力来治疗和养护好自身的根部。

离子液体(Ionic Liquids，ILs)是由正负离子组成的、室温或使用温度下呈液态的盐，是一类溶解能力强、不挥发、高热稳定性、可设计的绿色溶剂和催化剂。离子液体已在食品成分的催化制备、提取分离、分析检测及物性修饰等方面具有出色表现。研究表明，离子液体中的阴、阳离子含不同的官能团如羟基等可形成氢键，破坏微晶膳食纤维结晶结构，增强膳食纤维的溶解性。因此，将离子液体用于发酵中药的制备，具有很大的潜力。

发明内容

本发明旨在解决上述问题，提供一种通过调节阴道益生菌生长繁殖，改善阴道炎患者阴道微生态环境，有助于减少疾病复发的一种益生菌抑菌凝胶及其制备方法。

本发明目的的一个方面，提供了一种益生菌抑菌凝胶，包括：经过双阳离子型酸性离子液体和微生物菌剂发酵催化的发酵中药、益生菌、pH调节剂、保湿剂、增稠剂、螯合剂和去离子水。

其中，所述中药包括：黄柏20～50份，苦参20～50份，赤芍20～50份，蒲公英10～40份，蛇床子10～40份，积雪草10～40份，续断10～40份，杜仲叶10～30份，故芷10～30份，紫草10～30份，冰片0～20份，当归0～20份，番石榴叶0～20份。

发酵中药中天然产物的生物活性和生物利用度大幅增强，从而提高其药用保健功能，同时结合益生菌的调节作用，制得的抑菌凝胶对女性阴道炎具有十分优异的疗效。发酵中药中含有多种天然产物，其搭配科学合理，能维持阴道内酸碱平衡，对阴道嗜血杆菌有抑制效果，促进嗜乳酸杆菌的增殖，增强阴道免疫和新陈代谢，使阴道产生自净能力和防御能力，不仅可清洁阴道内部，还可改善阴道健康和阴道验证，安全性能高，对皮肤无刺激。

微生物菌剂在发酵过程中会进行代谢活动从而产生益生菌素，益生菌素可以与各种致病菌、病毒有效结合，阻止他们的活性甚至让这些致病菌、病毒生命凋亡，即起到杀菌抗病毒的作用。因此，益生菌素可以与益生菌、发酵中药产生协同作用，大幅提高抑菌凝胶的药效。同时由于这些物质是由益生菌代谢产生，而益生菌是伴随人类进化而自然选择下来与人体适应并对人体有益的微生物，因此这类益生菌代谢产生的物质即益生菌素对人体来说很安全。

本发明配方中的双阳离子型酸性离子液体为阳离子体系，而阴道处的有害细菌通常带负电荷，当遇到阳离子时，在库伦定律下，阳离子可击穿细菌的细胞壁，进入细胞内，通过配方中抑菌杀菌成分的协同作用，可起到抑菌或杀死细菌的作用。

黄柏具有清热燥湿，泻火解毒，除骨蒸的功效；主治湿热带下，热淋涩痛，湿热泻痢，黄疸，湿热脚气，痿证，骨蒸劳热，盗汗，遗精，疮疡肿毒，湿疹瘙痒。

苦参有清热燥湿，杀虫，利尿之功。用于热痢，便血，黄疸尿闭，赤白带下，阴肿阴痒，湿疹，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣麻风，外治滴虫性阴道炎。

赤芍有清热凉血、散瘀止痛的功效；用于温毒发斑、吐血衄血、目赤肿痛、肝郁胁痛、经闭痛经、症瘕腹痛、跌扑损伤、痈肿疮疡。

蒲公英具有清热解毒，消肿散结，利湿通淋的功效。主治痈肿疔毒，乳痈内痈，热淋涩痛，湿热黄疸，清肝明目。

蛇床子具有温肾壮阳、燥湿、祛风、杀虫的功效。用于阳痿、宫冷、寒湿带下、湿痹腰痛、外治外阴湿疹、妇人阴痒、滴虫性阴道炎。

积雪草具有清热利湿、消肿解毒的功效。治痧气腹痛、暑泻、痢疾、湿热黄疸、砂淋、血淋、吐、衄、咳血、目赤、喉肿、风疹、疥癣、疔痈肿毒、跌打损伤。

续断具有抗菌消炎、增强免疫调节、抗氧化及抗衰老、促进骨损伤愈合、抗早产流产的作用。补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏。属补虚药下分类的补阳药。

杜仲叶有镇静、镇痛、降压、抗炎等作用，还能增强机体免疫功能，促进创作性骨折的愈合。补肝肾、强筋骨。属补虚药下属分类的补阳药。

故芷具有温肾助阳，纳气，止泻的功效。用于阳痿遗精，遗尿尿频，腰膝冷痛，肾虚作喘，五更泄泻；外用治白癜风，斑秃。

冰片具有通诸窍，散郁火，去翳明目，消肿止痛的功效。治中风口噤，热病神昏，惊痫痰迷，气闭耳聋，喉痹，口疮，中耳炎，痈肿，痔疮，目亦翳膜，蛲虫病。还可作为凉感剂。

紫草为紫草科植物新疆紫草或内蒙紫草干燥根，主要成分为萘醌类色素和多糖类化合物，通过发酵催化可释放出来。紫草具有较好的抗菌、抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抗过敏、保肝降酶等作用，是一种药用价值很高的植物。研究发现，紫草提取物对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌均有明显抑菌作用。紫草中的萘醌具有较强的抗真菌作用，对念珠菌病有显著治疗作用。

当归具有补血活血，调经止痛，润肠通便的功效。主治血虚萎黄，月经不调，经闭痛经，血虚、血滞、血寒诸痛，跌打损伤，风湿痹痛，痈疽疮疡，肠燥便秘等；西医诊为贫血属于心肝血虚者，子宫内膜炎、功能性子宫出血、先兆流产、习惯性流产、产后出血属血虚血滞者，肌肉深部脓疡属血虚者，习惯性便秘、老人或产后便秘等属血虚津枯者。

番石榴叶具有抗氧化能力，有抗金黄色葡萄球菌的作用；具有燥湿健脾，清热解毒，收敛止血，消炎止血的功效。主治泻痢腹痛，食积腹胀，齿龈肿痛，风湿痹痛，湿疹臁疮，疔疮肿毒，跌打肿痛，外伤出血，蛇虫咬伤。

优选地，所述双阳离子型酸性离子液体为磺酸功能化的四甲基乙二胺类离子液体。

优选地，所述双阳离子型酸性离子液体的制备方法包括以下步骤：

a、在搅拌的条件下将1,3-丙烷磺内酯或1,4-丙烷磺内酯加入四甲基乙二胺的乙醇溶液中，在60～100℃下反应一段时间，分离所得到的固体中间产物；

b、将酸溶液加入步骤S1所得固体中间产物中，在60～100℃下搅拌反应一段时间，除去反应混合物中的溶剂和残留的反应物，得到所述双阳离子型酸性离子液体。

本发明使用磺酸功能化的四甲基乙二胺类离子液体作为发酵催化剂，不仅具有良好的生物相容性，还具有良好的催化活性，在发酵过程中能够改善发酵环境，协助和促进微生物破坏生物质细胞壁结构及胞外聚合物，与中药中的大量结晶态的纤维素反应，促进纤维素的去结晶化，加快纤维素糖转化速率，得到更适合微生物生长的环境条件。同时配合微生物菌剂，二者产生协同作用，提高发酵效率、缩短发酵时间，减少气体产生，并提高发酵中药中天然产物的生物活性和生物利用度。并且，该离子液体还可以作为酶保活剂，使微生物菌剂的活性得到保护，各种胞外酵素齐全，活力强。此外，该离子液体还具有与阴道环境相似的酸性，不会影响抑菌凝胶的酸度，保证了使用的安全性。

优选地，包括以下重量份的原料：发酵中药2～10份，益生菌0.1～1.5份、pH调节剂1～5份、营养保湿剂2～10份、增稠剂1～5份、螯合剂1～5份、去离子水50～100份。

优选地，所述微生物菌剂包括酵母菌、木醋杆菌、植物乳杆菌中的一种或多种。

优选地，所述益生菌包括卷曲乳酸杆菌、干酪乳酸杆菌、嗜酸乳杆菌和双歧乳酸杆菌中的一种或多种。

阴道内的益生菌中以乳酸杆菌为代表，本发明加入的益生菌均属于乳酸杆菌；并且，卷曲乳酸杆菌产H₂O₂的能力最强，阴道卷曲乳酸杆菌可以竞争性排斥其他细菌在阴道内的定植，以卷曲乳酸杆菌为优势菌的妇女发生细菌性阴道病比例较低。

优选地，本发明的一种益生菌抑菌凝胶，还包括以下附加技术特征至少其中之一：

所述pH调节剂为乳酸、乳酸钠、醋酸、酒石酸、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、柠檬酸、苹果酸的一种或多种；本发明所用的酸度调节剂，安全性能高，刺激性低，可将产品调节至有利于阴道有益菌生长的pH范围内。

所述保湿剂包括植物胶原蛋白、酵母-β-葡聚糖、α-葡聚糖寡糖、菊粉、果聚糖和低聚果糖中的一种或几种，还包括丙二醇、丙三醇、丁二醇、戊二醇、氢化蓖麻油、甜菜碱、乳酸钠、聚乙二醇-200和聚乙二醇-400中的一种或几种。

植物胶原蛋白具有极强亲水性，是非常好的天然保湿成份，植物胶原非一般覆盖型保湿剂，同时能够促进皮肤角质细胞生成天然保湿因子，发挥保湿效果，渗透浸润角质层，使皮肤更具透明度和润泽感，形成皮肤自我保护机制，增强皮肤弹性，抚平肌肤细纹，提高皮肤触感，隔离外界有毒有害物质。

酵母-β-葡聚糖可以与表皮层中免疫细胞朗格罕氏细胞上面有酵母β-葡聚糖的受体CR3结合，激活巨噬细胞，产生各种细胞因子、表皮生长因子、肿瘤坏死因子和血管生成因子等，增强皮肤的免疫能力；酵母β-葡聚糖还具有消炎、抗过敏、清除自由基、保湿和加速角质层更新，有助于皮肤抵御外源性的各种机械和化学刺激，促进伤口愈合，表皮细胞生长因子的增加可以提高胶原蛋白和弹性蛋白的生成，进而使皮肤的外观得以改善，并使细小的皱纹消失。

α-葡聚糖寡糖、菊粉、果聚糖和果糖低聚物通过选择营养供应机制，促进表皮益生菌生长，通过竞争机制抑制有害菌群生长，建立和保持稳定健康的皮肤微生态系统，维持阴道的正常菌落平衡，恢复阴道的正常pH值，减少炎症和过敏反应发生，减少后期复发的几率。

本发明的保湿剂为天然保湿剂，安全性高，刺激性低，能提高皮肤含水量，形成皮肤保护屏障并增加产品的润滑度；还可以促进益生菌群的繁殖，抑制有害菌的生长，确保维持最佳酸性环境和维持菌群。

所述增稠剂为甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚季铵盐1、聚季铵盐6、瓜尔胶、黄原胶、果胶、卡拉胶、壳聚糖、脱乙酰壳多糖中的一种或多种；

脱乙酰壳多糖是自然界中唯一的阳离子生物多糖，具有良好的生物相容性、黏附性、降解性、抑菌性和可塑性，可促进伤口愈合和组织再生，该物质可以与增稠剂结合，协同起到增稠的作用，与平衡菌群复合提取物结合，协同起到抑制有害菌而促进益生菌生长的作用，从而调节阴道菌群环境，使之处于平衡状态。

所述螯合剂为EDTA或EDTA二钠。

优选地，本发明的一种益生菌抑菌凝胶，pH为4～6，符合阴道环境酸度。

本发明目的的另一个方面，提供了一种益生菌抑菌凝胶的制备方法，包括以下步骤：

S1、按照配方比例称取黄柏、苦参、赤芍、蒲公英、蛇床子、积雪草、续断、杜仲叶、故芷、冰片、紫草、当归、番石榴叶，混合粉碎，灭菌；

S2、加入双阳离子型酸性离子液体和微生物菌剂发酵催化剂，加入去离子水，搅拌均匀，发酵；

S3、对发酵后的中药混合物进行过滤，得到药液，对药液进行浓缩得到发酵中药；

S4、将得到的发酵中药与益生菌、PH调节剂、保湿剂、增稠剂、螯合剂、去离子水混合，制备得到益生菌抑菌凝胶。

中药发酵是一种较新的中药加工工艺，是对传统煎、熬、炼、煮等工艺的改变，该工艺能有效增强天然产物的生物活性，从而提高其药用保健功能。本发明采用了双阳离子型酸性离子液体和微生物菌剂共同催化固态发酵的方法，天然产物在发酵过程中伴随着各种生物活性化合物的生成与转化，从而提高其生物利用度和生物活性。

优选地，步骤S2中所述发酵为厌氧发酵，所述厌氧发酵的时间为3～10天，所述厌氧发酵的温度为20～40℃。

优选地，步骤S2中所述双阳离子型酸性离子液体的加入量为所述中药总质量的0.05％～2.5％，所述微生物菌剂的加入量为所述中药总质量的0.1％～3.5％。

优选地，步骤S4具体包括：

S41、将配方量的保湿剂加入去离子水中，配制成水性溶液；

S42、将配方量的增稠剂和螯合剂加入所述水性溶液中，充分溶胀，配制成基质溶液；

S43、称取配方量的发酵中药和益生菌，加入去离子水使其溶解，在搅拌条件下加入到所述基质溶液中，配制成活性溶液；

S44、加入pH调节剂调节所述活性溶液的pH为4～6，即制得所述益生菌抑菌凝胶。

本发明可取得如下有益效果：

1、发酵中药中天然产物的生物活性和生物利用度大幅增强，从而提高其药用保健功能，同时结合益生菌的调节作用，制得的抑菌凝胶对女性阴道炎具有十分优异的疗效。发酵中药中含有多种天然产物，其搭配科学合理，能维持阴道内酸碱平衡，对阴道嗜血杆菌有抑制效果，促进嗜乳酸杆菌的增殖，增强阴道免疫和新陈代谢，使阴道产生自净能力和防御能力，不仅可清洁阴道内部，还可改善阴道健康和阴道验证，安全性能高，对皮肤无刺激。

2、本方案通过科学合理的搭配，多种抑菌作用的成分结合，在抑制有害菌的生长，促进益生菌的生长方面起到协同作用，增稠剂和螯合剂结合起到协同作用，增加产品粘度，使产品使用方便，有效成分浓度适当增加，同时再加上保湿剂的作用，形成皮肤的保护屏障，增加其润滑度，同时促进药效的发挥。

3、本发明制备的抑菌平衡妇科凝胶除了能够抑制阴道有害病菌生长外，还能够促进阴道益生菌群的生长和繁殖，通过阴道益生菌群调节阴道内环境平衡，达到对阴道日常养护的目的；同时对私处生态系统极速补水滋养，持续温和修护，对粘膜无刺激，快速修复女性生殖系统的微循环，降低妇科炎症发病率。

4、本发明制备的抑菌凝胶不含任何抗生素，不会产生任何耐药性，且不含杀菌剂，减少了出现不良反应的几率，是一种可用于妇科辅助治疗以及女性阴道日常养护的具有抑菌平衡的多用途凝胶。

5、本发明的制备方法较简单，有利于工业生产，可工业推广应用。

附图说明

图1为本发明优选实施例的一种益生菌抑菌凝胶的制备方法流程图；

图2为本发明优选实施例的双阳离子型酸性离子液体的制备方法流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明的实施例中的附图，对本发明的实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明优选实施例所用的化学试剂及实验仪器均为市售。

双阳离子型酸性离子液体的制备过程，如图2所示，以离子液体[Ps₂TMEDA][BF₄]₂的合成为例。

在反应器中分别加入四甲基乙二胺和乙醇(1mol：1L的比例)，置于70℃下预热；在搅拌的条件下逐滴加入1,3-丙烷磺内酯(四甲基乙二胺的物质的量的2倍)，滴加完成后，继续搅拌8h，得到大量中间产物(白色固体)。反应完成后，用乙醚反复冲洗中间产物3-5次，以除去未反应完的原料，再放入80℃真空干燥箱干燥12h。

将中间产物加入反应器中，在70℃下预热，然后将四氟硼酸溶液(四甲基乙二胺的物质的量的2倍)逐滴加入到反应器中，继续搅拌10h。反应结束后，旋转蒸发除去反应混合物中的水，最后，用丙酮洗涤所得产物3-5次，以除去可能未反应的中间产物，即可得到离子液体[Ps₂TMEDA][BF₄]₂，在80℃下真空干燥10h，产率约为92％。

参照上述方法，将中间产物分别与硫酸溶液、磷酸溶液、盐酸溶液、硝酸溶液、三氟甲基磺酸溶液或六氟磷酸溶液在75℃下反应10h制得离子液体[Ps₂TMEDA][HSO₄]₂、[Ps₂TMEDA][H₂PO₄]₂、[Ps₂TMEDA]Cl₂、[Ps₂TMEDA][NO₃]₂、[Ps₂TMEDA][CF₃SO₃]₂、[Ps₂TMEDA][PCl₆]₂，六种离子液体的产率分别为92％、90％、92％、92％、92％、92％。

将1,3-丙烷磺内酯替换成1,4-丁烷磺内酯，按照同样的步骤即可制备得到离子液体[Bs₂TMEDA][BF₄]₂、[Bs₂TMEDA][HSO₄]₂、[Bs₂TMEDA][H₂PO₄]₂、[Bs₂TMEDA]Cl₂、[Bs₂TMEDA][NO₃]₂、[Bs₂TMEDA][CF₃SO₃]₂、[Bs₂TMEDA][PCl₆]₂，七种离子液体的产率分别为92％、91％、90％、92％、92％、90％、92％。

如图1所示，将由上述方法制备得到的双阳离子型酸性离子液体用于以下实施例。

实施例1：

一种抑菌凝胶，包括：经过[Ps₂TMEDA][BF₄]₂和微生物菌剂发酵催化的发酵中药、益生菌、pH调节剂、营养保湿剂、增稠剂、螯合剂和去离子水。

其制备方法包括以下步骤：

S1、按照配方比例称取以下重量份的中药：黄柏20份、苦参50份、赤芍30份、蒲公英40份、蛇床子30份、积雪草10份、续断10份、杜仲叶10份、故芷10份、紫草20份、冰片20份、当归20份、番石榴叶20份，混合粉碎，灭菌；

S2、加入中药总质量1％的[Ps₂TMEDA][BF₄]₂作为发酵催化剂，加入去中药总质量10％离子水，搅拌均匀，进行厌氧发酵；其中，厌氧发酵的时间为2天，温度为30℃；再加入1％植物乳杆菌、0.5％木醋杆菌、0.5％酵母菌作为发酵催化剂，继续厌氧发酵6天。

S3、对发酵后的中药混合物进行烘干，然后加入乙醇萃取，得到中药液，旋转蒸发去除中药液中的乙醇，得到发酵中药；

S4、取植物胶原蛋白2份、α-葡聚糖寡糖2份、聚乙二醇-200 2份、戊二醇2份加入60份去离子水中，配制成水性溶液；

取羟乙基纤维素1份、羟丙基甲基纤维素1份、卡拉胶0.5份、脱乙酰壳多糖0.5份，EDTA 2份加入所述水性溶液中，充分溶胀，配制成基质溶液；

取发酵中药3份，嗜酸乳杆菌0.5份，加入去离子水20份使其溶解，在搅拌条件下加入到基质溶液中，配制成活性溶液；

加入乳酸1.5份、柠檬酸1.5份调节所述活性溶液的pH为4～6，即制得抑菌凝胶。

实施例2：

一种抑菌凝胶，包括：经过[Ps₂TMEDA][HSO₄]₂和微生物菌剂发酵催化的发酵中药、益生菌、pH调节剂、营养保湿剂、增稠剂、螯合剂和去离子水。

其制备方法包括以下步骤：

S1、按照配方比例称取以下重量份的中药：黄柏40份、苦参30份、赤芍30份、蒲公英25份、蛇床子25份、积雪草25份、续断25份、杜仲叶20份、故芷20份、紫草10份、冰片10份、当归10份、番石榴叶10份，混合粉碎，灭菌；

S2、加入中药总质量1.5％的[Ps₂TMEDA][HSO₄]₂和0.5％酵母菌、0.5％木醋杆菌、0.5％植物乳杆菌作为发酵催化剂，加入去中药总质量10％离子水，搅拌均匀，进行厌氧发酵；其中，厌氧发酵的时间为6天，温度为30℃；

S3、对发酵后的中药混合物进行烘干，然后加入乙醇萃取，得到中药液，旋转蒸发去除中药液中的乙醇，得到发酵中药；

S4、取植物胶原蛋白1份、酵母-β-葡聚糖1份、菊粉1份、丙二醇1份、氢化蓖麻油1份、聚乙二醇-200 1份加入60份去离子水中，配制成水性溶液；

取羧甲基纤维素1份、黄原胶0.5份、卡拉胶0.5份、壳聚糖0.5份，EDTA2.5份加入所述水性溶液中，充分溶胀，配制成基质溶液；

取发酵中药6份，卷曲乳酸杆菌0.5份，嗜酸乳杆菌0.5份，加入去离子水20份使其溶解，在搅拌条件下加入到基质溶液中，配制成活性溶液；

加入乳酸2份、乳酸钠1份调节所述活性溶液的pH为4～6，即制得抑菌凝胶。

实施例3：

一种抑菌凝胶，包括：经过[Ps₂TMEDA][HSO₄]₂和微生物菌剂发酵催化的发酵中药、益生菌、pH调节剂、营养保湿剂、增稠剂、螯合剂和去离子水。

其制备方法包括以下步骤：

S1、按照配方比例称取以下重量份的中药：黄柏40份、苦参30份、赤芍30份、蒲公英25份、蛇床子25份、积雪草25份、续断25份、杜仲叶20份、故芷20份、紫草10份、冰片10份、当归10份、番石榴叶10份，混合粉碎，灭菌；

S2、加入中药总质量1.5％的[Ps₂TMEDA][HSO₄]₂作为发酵催化剂，加入去中药总质量10％离子水，搅拌均匀，进行厌氧发酵；其中，厌氧发酵的时间为2天，温度为30℃；再加入0.5％酵母菌、0.5％木醋杆菌、0.5％植物乳杆菌作为发酵催化剂，继续厌氧发酵4天。

S3、对发酵后的中药混合物进行烘干，然后加入乙醇萃取，得到中药液，旋转蒸发去除中药液中的乙醇，得到发酵中药；

S4、取植物胶原蛋白1份、酵母-β-葡聚糖1份、菊粉1份、丙二醇1份、氢化蓖麻油1份、聚乙二醇-200 1份加入60份去离子水中，配制成水性溶液；

取羧甲基纤维素1份、黄原胶0.5份、卡拉胶0.5份、壳聚糖0.5份，EDTA2.5份加入所述水性溶液中，充分溶胀，配制成基质溶液；

取发酵中药6份，卷曲乳酸杆菌0.5份，嗜酸乳杆菌0.5份，加入去离子水20份使其溶解，在搅拌条件下加入到基质溶液中，配制成活性溶液；

加入乳酸2份、乳酸钠1份调节所述活性溶液的pH为4～6，即制得抑菌凝胶。

实施例4：

一种抑菌凝胶，包括：经过[Bs₂TMEDA][H₂PO₄]₂和微生物菌剂发酵催化的发酵中药、益生菌、pH调节剂、营养保湿剂、增稠剂、螯合剂和去离子水。

其制备方法包括以下步骤：

S1、按照配方比例称取以下重量份的中药：黄柏30份、苦参40份、赤芍40份、蒲公英20份、蛇床子20份、积雪草20份、续断20份、杜仲叶30份、故芷30份、紫草5份、冰片15份、当归15份、番石榴叶15份，混合粉碎，灭菌；

S2、加入中药总质量2％的[Bs₂TMEDA][H₂PO₄]₂作为发酵催化剂，加入去中药总质量10％离子水，搅拌均匀，进行厌氧发酵；其中，厌氧发酵的时间为2天，温度为25℃；再加入1.5％酵母菌、1％木醋杆菌作为发酵催化剂，继续厌氧发酵4天。

S3、对发酵后的中药混合物进行烘干，然后加入乙醇萃取，得到中药液，旋转蒸发去除中药液中的乙醇，得到发酵中药；

S4、取酵母-β-葡聚糖1.5份、α-葡聚糖寡糖1.5份、果聚糖1.5份、丁二醇1.5份、菊粉1.5份加入60份去离子水中，配制成水性溶液；

取羟丙基甲基纤维素0.5份、聚季铵盐1 0.5份、果胶0.5份、脱乙酰壳多糖0.5份，EDTA二钠3份加入所述水性溶液中，充分溶胀，配制成基质溶液；

取发酵中药5份，干酪乳酸杆菌0.2份，双歧乳酸杆菌0.2份，加入去离子水20份使其溶解，在搅拌条件下加入到基质溶液中，配制成活性溶液；

加入乳酸1份、醋酸0.5份、磷酸氢二钾0.5份调节所述活性溶液的pH为4～6，即制得抑菌凝胶。

实施例5：

一种抑菌凝胶，包括：经过[Bs₂TMEDA]Cl₂和微生物菌剂发酵催化的发酵中药、益生菌、pH调节剂、营养保湿剂、增稠剂、螯合剂和去离子水。

其制备方法包括以下步骤：

S1、按照配方比例称取以下重量份的中药：黄柏50份、苦参25份、赤芍25份、蒲公英25份、蛇床子25份、积雪草25份、续断25份、杜仲叶10份、故芷10份、紫草10份、冰片30份、当归30份、番石榴叶30份，混合粉碎，灭菌；

S2、加入中药总质量0.5％的[Bs₂TMEDA]Cl₂作为发酵催化剂，加入去中药总质量10％离子水，搅拌均匀，进行厌氧发酵；其中，厌氧发酵的时间为3天，温度为35℃；再加入1％木醋杆菌、1.5％植物乳杆菌作为发酵催化剂，继续厌氧发酵6天。

S3、对发酵后的中药混合物进行烘干，然后加入乙醇萃取，得到中药液，旋转蒸发去除中药液中的乙醇，得到发酵中药；

S4、取植物胶原蛋白3份、酵母-β-葡聚糖3份、甜菜碱3份加入60份去离子水中，配制成水性溶液；

取甲基纤维素0.75份、黄原胶0.75份、脱乙酰壳多糖0.75份、壳聚糖0.75份，EDTA二钠4份加入所述水性溶液中，充分溶胀，配制成基质溶液；

取发酵中药8份，嗜酸乳杆菌0.75份，双歧乳酸杆菌0.75份，加入去离子水20份使其溶解，在搅拌条件下加入到基质溶液中，配制成活性溶液；

加入乳酸2份、磷酸氢二钾1份、苹果酸0.5份调节所述活性溶液的pH为4～6，即制得抑菌凝胶。

实施例6：

一种抑菌凝胶，包括：经过[Bs₂TMEDA][NO₃]₂和微生物菌剂发酵催化的发酵中药、益生菌、pH调节剂、营养保湿剂、增稠剂、螯合剂和去离子水。

其制备方法包括以下步骤：

S1、按照配方比例称取以下重量份的中药：黄柏35份、苦参35份、赤芍35份、蒲公英15份、蛇床子15份、积雪草15份、续断35份、杜仲叶25份、故芷15份、紫草15份、冰片5份、当归5份、番石榴叶5份，混合粉碎，灭菌；

S2、加入中药总质量2.5％的[Bs₂TMEDA][NO₃]₂作为发酵催化剂，加入去中药总质量10％离子水，搅拌均匀，进行厌氧发酵；其中，厌氧发酵的时间为2天，温度为30℃；再加入1％植物乳杆菌作为发酵催化剂，继续厌氧发酵5天。

S3、对发酵后的中药混合物进行烘干，然后加入乙醇萃取，得到中药液，旋转蒸发去除中药液中的乙醇，得到发酵中药；

S4、取低聚果糖2份、α-葡聚糖寡糖2份、丙三醇1.5份、聚乙二醇-4001.5份加入60份去离子水中，配制成水性溶液；

取果胶1份、黄原胶1份、瓜尔胶0.5份、壳聚糖0.5份，EDTA 5份加入水性溶液中，充分溶胀，配制成基质溶液；

取发酵中药2份，干酪乳酸杆菌0.2份，加入去离子水20份使其溶解，在搅拌条件下加入到基质溶液中，配制成活性溶液；

加入乳酸1份、柠檬酸1份、苹果酸0.5份调节所述活性溶液的pH为4～6，即制得抑菌凝胶。

实施例7：

一种抑菌凝胶，包括：经过[Bs₂TMEDA][CF₃SO₃]₂和微生物菌剂发酵催化的发酵中药、益生菌、pH调节剂、营养保湿剂、增稠剂、螯合剂和去离子水。

其制备方法包括以下步骤：

S1、按照配方比例称取以下重量份的中药：黄柏30份、苦参30份、赤芍30份、蒲公英30份、蛇床子30份、积雪草30份、续断30份、杜仲叶15份、故芷15份、紫草20份、冰片10份、当归10份、番石榴叶12份，混合粉碎，灭菌；

S2、加入中药总质量0.2％的[Bs₂TMEDA][CF₃SO₃]₂作为发酵催化剂，加入去中药总质量10％离子水，搅拌均匀，进行厌氧发酵；其中，厌氧发酵的时间为3天，温度为30℃；再加入1.5％酵母菌、0.5％木醋杆菌、1％植物乳杆菌作为发酵催化剂，继续厌氧发酵6天。

S3、对发酵后的中药混合物进行烘干，然后加入乙醇萃取，得到中药液，旋转蒸发去除中药液中的乙醇，得到发酵中药；

S4、取植物胶原蛋白0.5份、甜菜碱0.5份、α-葡聚糖寡糖0.5份、菊粉0.5份、丙二醇0.5份加入60份去离子水中，配制成水性溶液；

取甲基纤维素1份、瓜尔胶0.5份、卡拉胶0.5份、聚季铵盐6 0.5份，EDTA 2.5份加入所述水性溶液中，充分溶胀，配制成基质溶液；

取发酵中药9份，干酪乳酸杆菌1.2份，加入去离子水20份使其溶解，在搅拌条件下加入到基质溶液中，配制成活性溶液；

加入乳酸1份、酒石酸1份、磷酸氢二钠1份调节所述活性溶液的pH为4～6，即制得抑菌凝胶。

实施例8：

一种抑菌凝胶，包括：经过[Ps₂TMEDA][PCl₆]₂和微生物菌剂发酵催化的发酵中药、益生菌、pH调节剂、营养保湿剂、增稠剂、螯合剂和去离子水。

其制备方法包括以下步骤：

S1、按照配方比例称取以下重量份的中药：黄柏45份、苦参45份、赤芍45份、蒲公英25份、蛇床子25份、积雪草25份、续断20份、杜仲叶20份、故芷20份、紫草10份、冰片12份、当归10份、番石榴叶10份，混合粉碎，灭菌；

S2、加入中药总质量1.8％的[Ps₂TMEDA][PCl₆]₂作为发酵催化剂，加入去中药总质量10％离子水，搅拌均匀，进行厌氧发酵；其中，厌氧发酵的时间为2天，温度为25℃；再加入1.5％酵母菌、1.5％植物乳杆菌作为发酵催化剂，继续厌氧发酵5天。

S3、对发酵后的中药混合物进行烘干，然后加入乙醇萃取，得到中药液，旋转蒸发去除中药液中的乙醇，得到发酵中药；

S4、取植物胶原蛋白1.5份、酵母-β-葡聚糖1.5份、戊二醇1份、氢化蓖麻油1份、聚乙二醇-200 1份加入60份去离子水中，配制成水性溶液；

取脱乙酰壳多糖1份、聚季铵盐6 0.5份、卡拉胶0.5份、壳聚糖0.5份，EDTA 2.5份加入所述水性溶液中，充分溶胀，配制成基质溶液；

取发酵中药3.5份，卷曲乳酸杆菌0.6份，加入去离子水20份使其溶解，在搅拌条件下加入到基质溶液中，配制成活性溶液；

加入乳酸1份、酒石酸0.5份调节所述活性溶液的pH为4～6，即制得抑菌凝胶。

对比例1：

发酵中药替换为煎煮得到的中药提取物，其余与实施例3相同。

对比例2：

不加双阳离子型酸性离子液体[Ps₂TMEDA][HSO₄]₂，替换为使用微生物菌剂发酵6天，其余与实施例3相同。

对比例3：

去除植物胶原蛋白、酵母-β-葡聚糖、菊粉，营养保湿剂中其他成分等比增加，其余与实施例3相同。

对比例4：

不加螯合剂，其余与实施例3相同。

对比例5：

不加益生菌，其余与实施例3相同。

对实施例1-8以及对比例1-5的抑菌凝胶进行效果评价。

试验1：抗菌效果测试：试验方法参考中华人民共和国轻工行业标准QB/T2738-2012日化产品抗菌抑菌效果评价方法，结果列于表1。

表1

表1数据表明，本发明的女性私密护理凝胶的实施例配方产品具有显著的抗菌作用，对大肠埃氏杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的抑菌率均在94.0％以上，通过对比实施例2和实施例3发现，双阳离子型酸性离子液体先于微生物菌剂加入可以得到更高的抑菌效果；这可能是由于离子液体首先将中药纤维结晶结构破坏，增加中药溶解性，有利于中药所含活性物质的溶出，加速微生物菌剂的发酵作用，提高中药可利用的活性成分及其生物利用度。与对比例1比较发现，中药发酵能大幅提高中药的生物活性和利用度，显著抑菌凝胶的抑菌率；与对比例2比较发现，双阳离子型酸性离子液体能与微生物菌剂产生协同作用，提高中药可利用的活性成分及其生物利用度，从而提高抑菌凝胶的抑菌率；与对比例3比较发现，加入植物胶原蛋白、酵母-β-葡聚糖、菊粉等功能性的保湿剂能够提高抑菌凝胶的抑菌率；与对比例4比较发现，加入螯合剂能够增强凝胶的触变性、促进药效发挥、提高抑菌凝胶的抑菌率；与对比例5比较发现，加入益生菌能够在一定程度上提高抑菌凝胶的抑菌率，但作用较小。

试验2：有益菌(嗜酸乳酸菌GDMCC1.208)生长影响试验：制备嗜酸乳酸菌菌悬液(1.0×10⁴～9.0×10⁴)，取女性私密护理凝胶稀释液(1:10)5mL，加入0.1mL嗜酸乳酸菌菌悬液，作用2min后，放入MSR培养基中于37℃，培养12h、24h，做活菌菌落计数，并计算乳酸杆菌的存活率，结果列于表2。存活率按以下公式计算：

存活率＝1-(处理前菌落数-处理后菌落数)/处理前菌落数×100％

表2

表2数据表明，本发明对阴道有益菌无明显的影响，阴道有益菌存活率高，表明本发明配方产品在杀灭阴道致病菌的同时对阴道的有益菌的生长影响较小，还可促进有益菌的生长，长期使用比较安全，而且对于阴道炎的治疗和预防有很好的作用。与对比例1～5比较发现，中药发酵，双阳离子型酸性离子液体，加入植物胶原蛋白、酵母-β-葡聚糖、菊粉等功能性的保湿剂，螯合剂和益生菌均对有益菌的存活起到有益作用，其原因可能与表1数据分析相似，有害菌与有益菌的生长呈相互竞争的关系，抑制有害菌的同时提高了有益菌的存活率；其中，中药发酵对有益菌的存活率影响最大。

由表2数据可知，实施例2是本发明的最佳方案，其配方中各组分的含量既能满足对有害菌的杀灭作用，同时促进益生菌的生长，维持阴道的正常菌落平衡。本发明的抑菌凝胶制作工艺简单，有利于工业生产。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种益生菌抑菌凝胶，其特征在于，包括：经过双阳离子型酸性离子液体和微生物菌剂发酵催化的发酵中药、益生菌、pH调节剂、保湿剂、增稠剂、螯合剂和去离子水；

所述中药包括：黄柏20～50份，苦参20～50份，赤芍20～50份，蒲公英10～40份，蛇床子10～40份，积雪草10～40份，续断10～40份，杜仲叶10～30份，故芷10～30份，冰片0～20份，紫草0～20份，当归0～20份，番石榴叶0～20份。

2.根据权利要求1所述的一种益生菌抑菌凝胶，其特征在于，所述双阳离子型酸性离子液体为磺酸功能化的四甲基乙二胺类离子液体。

3.根据权利要求2所述的一种益生菌抑菌凝胶，其特征在于，所述双阳离子型酸性离子液体的制备方法包括以下步骤：

a、在搅拌的条件下将1,3-丙烷磺内酯或1,4-丙烷磺内酯加入四甲基乙二胺的乙醇溶液中，在60～100℃下反应一段时间，分离所得到的固体中间产物；

b、将酸溶液加入步骤S1所得固体中间产物中，在60～100℃下搅拌反应一段时间，除去反应混合物中的溶剂和残留的反应物，得到所述双阳离子型酸性离子液体。

4.根据权利要求1所述的一种益生菌抑菌凝胶，其特征在于，包括以下重量份的原料：发酵中药2～10份，益生菌0.1～1.5份、pH调节剂1～5份、营养保湿剂2～10份、增稠剂1～5份、螯合剂1～5份、去离子水50～100份。

5.根据权利要求1所述的一种益生菌抑菌凝胶，其特征在于，所述微生物菌剂包括酵母菌、木醋杆菌、植物乳杆菌中的一种或多种；和/或

所述益生菌包括卷曲乳酸杆菌、干酪乳酸杆菌、嗜酸乳杆菌和双歧乳酸杆菌中的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的一种益生菌抑菌凝胶，其特征在于，还包括以下附加技术特征至少其中之一：

所述pH调节剂为乳酸、乳酸钠、醋酸、酒石酸、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、柠檬酸、苹果酸的一种或多种；

所述保湿剂包括植物胶原蛋白、酵母-β-葡聚糖、α-葡聚糖寡糖、菊粉、果聚糖和低聚果糖中的一种或几种，还包括丙二醇、丙三醇、丁二醇、戊二醇、氢化蓖麻油、甜菜碱、乳酸钠、聚乙二醇-200和聚乙二醇-400中的一种或几种；

所述增稠剂为甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚季铵盐1、聚季铵盐6、瓜尔胶、黄原胶、果胶、卡拉胶、壳聚糖、脱乙酰壳多糖中的一种或多种；

所述螯合剂为EDTA或EDTA二钠。

7.根据权利要求1所述的一种益生菌抑菌凝胶，其特征在于，pH为4～6。

8.一种益生菌抑菌凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、按照配方比例称取黄柏、苦参、赤芍、蒲公英、蛇床子、积雪草、续断、杜仲叶、故芷、冰片、紫草、当归、番石榴叶，混合粉碎，灭菌；

S2、加入双阳离子型酸性离子液体、微生物菌剂发酵催化剂、去离子水进行发酵；

S3、对发酵后的中药混合物进行过滤，得到药液，对药液进行浓缩得到发酵中药；

S4、将得到的发酵中药与益生菌、pH调节剂、保湿剂、增稠剂、螯合剂、去离子水混合，制备得到益生菌抑菌凝胶。

9.根据权利要求8所述的一种益生菌抑菌凝胶的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述发酵为厌氧发酵，所述厌氧发酵的时间为3～10天，所述厌氧发酵的温度为20～40℃；和/或

步骤S2中所述双阳离子型酸性离子液体的加入量为所述中药总质量的0.05％～2.5％，所述微生物菌剂的加入量为所述中药总质量的0.1％～3.5％。

10.根据权利要求8所述的一种益生菌抑菌凝胶的制备方法，其特征在于，步骤S4具体包括：

S41、将配方量的保湿剂加入去离子水中，配制成水性溶液；

S42、将配方量的增稠剂和螯合剂加入所述水性溶液中，充分溶胀，配制成基质溶液；

S43、称取配方量的发酵中药和益生菌，加入去离子水使其溶解，在搅拌条件下加入到所述基质溶液中，配制成活性溶液；

S44、加入pH调节剂调节所述活性溶液的pH为4～6，即制得所述益生菌抑菌凝胶。

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