CN112515050A - 一种含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂及其应用 - Google Patents
一种含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂及其应用。首先提供了一种含重组人溶菌酶的组合物，包括重组人溶菌酶、植物乳杆菌、凝结芽孢杆菌、低聚果糖和辅料，然后将含重组人溶菌酶的组合物混合复配出一种含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂。本发明的抑菌型动物生长促进剂可于室温下长期保存，代替抗生素作为禽畜促生长剂添加到饲料中或是直接配水口服，提高禽畜类动物生长水平和饲料利用率，预防和治疗常见动物疾病，提高免疫力和存活率，并可降低耐药菌的发生和解决药物残留问题。
Description
技术领域
本发明属于饲料添加剂技术领域，更具体地，涉及一种含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂及其应用。
背景技术
禽畜动物养殖中抗生素作为非营养性促生长剂被广泛应用，由于抗生素滥用所导致的多种耐药菌株增多和药物残留问题日益突出，动物源致病菌的安全控制问题越来越严重，严重威胁着食品安全和人类健康。尤其是近年来“超级细菌”逐渐增多，农业部发布了《全国遏制动物源细菌耐药行动计划2017-2020》，2020 年起全面禁止在正常养殖过程中使用抗生素。
目前对我国禽、畜养殖业危害最大的病源菌是金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、支原体、衣原体等。由于禽、畜病原菌种类较多，免疫预防困难，因此目前对禽、畜病的预防与治疗还是主要采用化学药物防治。其中最常用的方法是在禽、畜饲料中添加抗生素，该方法虽有效，长期使用可在禽、畜体内产生耐药菌，但产生的耐药菌会随食物链进入人体而造成感染性疾病，使用抗生素难以治疗。因此，我们急需找到抗生素的替代品来有效控制这些致病微生物的泛滥，改善禽畜免疫机能严重下降的困境。
微生态制剂是一种肠道菌群调节剂，目前应用于微生态制剂的益生菌种主要有乳酸菌类、芽孢杆菌和酵母菌等。尤其是乳酸菌类，可定植于动物肠道防止致病菌的入侵，还可以分泌有机酸和细菌素等有益物质，具有提高生产性能、防治动物疾病、调节免疫功能、改善养殖环境和提高饲料转化率等多种功能。但乳酸菌存在主要问题是不耐高温，储存期内活菌数稳定性差，且菌型单一，含水量高，对胃酸和胆盐环境不耐受，且杀菌效果不如抗生素等，严重制约了乳酸菌制剂产品的生产与应用。
溶菌酶是人体细胞在非特异性免疫过程中由单核-巨噬细胞分泌产生的碱性肽类抗菌物质，多数研究表明重组人溶菌酶具有杀菌(包括耐药菌)、抗炎、抗病毒和镇痛作用，无毒副作用，不会产生耐药性，无刺激性，是极具潜力的新一代候选肽类抗生素。现有技术已有使用溶菌酶作为饲料添加剂来预防家畜感染，如CN103461676A公开了一种含有溶菌酶的动物饲料添加剂，和中药组合结合使用达到治疗猪感染疾病的目的，但其具有一定的耐药性且稳定性较差。CN1088 50640、CN106578348A公开了含表达人溶菌酶的酵母发酵产品作为饲料添加剂，达到杀菌的目的，但这些研究方法要么制备过程复杂，不易保存，且添加量较大，要么人溶菌酶活力较低，杀菌效果较差。因此，如何克服现有技术，使人溶菌酶加入饲料添加剂时发挥更好的作用是亟需解决的问题。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术中含溶菌酶的动物饲料添加剂的耐药性、稳定性以及杀菌活力较差的缺陷和不足，提供一种含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂及其应用。本发明将重组人溶菌酶制剂与耐热性乳酸菌菌株的凝结芽孢杆菌和植物乳杆菌菌粉混合，制备得到的抑菌型动物生长促进剂既保持了人溶菌酶广谱的抗菌抗病毒作用，又发挥了乳酸菌改善微生态平衡，提高生产性能的功效，又解决了益生菌剂在畜牧养殖应用过程中抗菌性能差，储存期短等问题，具有广阔的市场应用价值。
本发明的目的在于提供上述抑菌型动物生长促进剂替代抗生素在禽畜养殖方面的应用，该含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂可作为饲料添加剂代替抗生素在蛋雏鸡和断奶仔猪中应用，能增强仔猪免疫力和提高生长性能，有制控制腹泻。
本发明的第一个目的是提供一种含重组人溶菌酶的组合物。
本发明的第二个目的是提供所述含重组人溶菌酶的组合物作为或在制备禽畜饲料添加剂中的应用。
本发明的第三个目的是提供一种含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂。
为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：
本发明要求保护一种含重组人溶菌酶的组合物，包括重组人溶菌酶、植物乳杆菌、凝结芽孢杆菌、低聚果糖。
优选地，所述重组人溶菌酶的组合物还包括米糠、辅美粉。
优选地，所述重组人溶菌酶以微囊颗粒的形式添加，按重量份数计，所述重组人溶菌酶微囊颗粒包括表达重组人溶菌酶成熟肽的工程菌的发酵液的固形物 10～20份、玉米淀粉80～90份。
优选地，所述表达重组人溶菌酶成熟肽基因序列的工程菌为毕赤酵母工程菌。
更优选地，所述重组人溶菌酶微囊颗粒的杀菌活性为1.5～2.0×1015IU/g。
优选地，所述含重组人溶菌酶的组合物按重量份数计，包括重组人溶菌酶微囊颗粒10～20份、植物乳杆菌菌粉5～15份、凝结芽孢杆菌芽孢粉20～30份、低聚果糖5～15份、米糠10～20份、辅美粉20～30份。
更优选地，所述含重组人溶菌酶的组合物按重量份数计，包括重组人溶菌酶微囊颗粒15份、植物乳杆菌菌粉10份、凝结芽孢杆菌芽孢粉25份、低聚果糖 10份、米糠15份、辅美粉25份。
优选地，按重量份数计，所述植物乳杆菌菌粉每份还含有1～3份冻干保护剂，冻干保护剂包括脱脂奶粉：乳糖：海藻糖＝10～15份：5～10份：2～7份。
更优选地，按重量份数计，所述植物乳杆菌菌粉每份还含有2份冻干保护剂，冻干保护剂包括脱脂奶粉：乳糖：海藻糖＝15份：8份：2份。
更优选地，所述植物乳杆菌菌粉的活菌数为1×1011～2×1011cfu/g。
更优选地，所述植物乳杆菌菌粉的活菌数为2×1011cfu/g。
优选地，按重量份数计，所述凝结芽孢杆菌芽孢粉每份还含有2～5份冻干保护剂，冻干保护剂包括脱脂奶粉：海藻糖：谷氨酸钠＝10～15份：5～10份： 0.5～5份。
更优选地，按重量份数计，所述凝结芽孢杆菌芽孢粉每份还含有3份冻干保护剂，冻干保护剂包括脱脂奶粉：海藻糖：谷氨酸钠＝15份：10份：5份。
更优选地，所述凝结芽孢杆菌芽孢粉的活菌数为1×1010～5×1010cfu/g。
更优选地，所述凝结芽孢杆菌芽孢粉的活菌数为5×1010cfu/g。
以上任一所述重组人溶菌酶微囊颗粒的制备方法包括以下步骤：
S1.菌株发酵培养：将表达人溶菌酶的重组菌株发酵，得发酵液；
S2.向步骤S1的发酵液中加入玉米淀粉：发酵液＝5％～15％w/v的玉米淀粉，作为冻干保护剂溶解，按照进风口120～150℃、出风口65～85℃进行喷雾干燥制粒，即制备得到重组人溶菌酶微囊颗粒。
优选地，步骤S2中加入玉米淀粉：发酵液＝10％w/v的玉米淀粉。
优选地，所述重组人溶菌酶微囊颗粒含有表达重组人溶菌酶成熟肽基因序列的工程菌的固形发酵物10份、玉米淀粉90份。
优选地，步骤S1中所述表达人溶菌酶的重组菌株为含有人溶菌酶成熟肽基因序列的毕赤酵母工程菌株。
更优选地，所述含有人溶菌酶成熟肽基因序列的毕赤酵母工程菌株是以毕赤酵母野生型菌株X-33为宿主细胞，以毕赤酵母组成型表达质粒pGAPzα-A为载体构建所得。
优选地，步骤S2中加入溶解的辅料为玉米淀粉：发酵液＝10％w/v的玉米淀粉。
优选地，步骤S2中按照进风口140℃、出风口70℃进行喷雾干燥。
以上任一所述含重组人溶菌酶的组合物在作为或制备禽畜饲料添加剂中的应用，也应在本发明的保护范围之内。
本发明还要求保护一种含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂，利用以上任一所述含重组人溶菌酶的组合物制备得到。
上述抑菌型动物生长促进剂可作为禽畜饲料添加剂或是直接配水口服，能调节动物胃肠道微生态平衡，抑制致病菌生长，可代替抗生素显著提高断奶仔猪和蛋雏鸡的生长水平和饲料的利用率。
因此，以上任一所述的含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂作为或在制备禽畜饲料添加剂方面的应用，也应在本发明的保护范围之内。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明将人溶菌酶微囊颗粒、植物乳杆菌、凝结芽孢杆菌和益生元低聚果糖进行科学配伍。其中，人溶菌酶对动物致病菌如金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌等耐药菌株均有较好的杀菌活性，并具有抗病毒和提高动物生产性能和免疫力等功效；植物乳杆菌和凝结芽孢杆菌可定植于至小肠黏膜上皮细胞，抑制病原菌生长，提高动物免疫性能；低聚果糖对肠道益生菌有促生长作用，通过对病原菌的抑制和对益生菌的促进从而维持正常的肠道菌群平衡；因益生菌对肠道的定植性能好，与溶菌酶接触面积小，因此溶菌酶可选择性杀灭游离的致病菌细胞，起到调节动物肠道微生态平衡的作用。
(2)本发明提供的含重组人溶菌酶抑菌型动物生长促进剂，将具有较强广谱杀菌作用的重组人溶菌酶和益生菌复配，可在动物体内发挥协同效果，既能高效杀灭禽畜致病微生物，还能调节动物胃肠道微生态平衡，可显著提高断奶仔猪和蛋雏鸡的生长水平和饲料的利用率，增强动物免疫力。
(3)本发明制备的含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂，其有效成分溶菌酶和益生菌具有耐热、酸和耐胆盐的特点，可顺利通过胃液到达肠道发挥作用；人溶菌酶制成微囊颗粒后，提高了溶菌酶的酶活力，从而保证了其效果的稳定性，延长了贮存期，且不对植物乳杆菌和凝结芽孢杆菌造成影响，从而能共同发挥协同抑菌作用。
(4)本发明制备的含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂，在全面禁止饲料中添加抗生素的情况下，可代替抗生素作为生长促进剂的使用，而且没有添加其他额外的抗生素或药物，安全无毒，不会产生耐药性，具有提高生产性能、防治动物疾病、调节免疫功能、改善养殖环境和提高饲料转化率等多种功能，克服了应用抗生素或添加药物造成的菌群失调、出现耐药性菌株及药物的不良反应，不仅可以防病治病，而且可以降低污染及改善环境，降低耐药菌的发生和解决药物残留问题。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1重组人溶菌酶粉末制剂的制备
1、表达人溶菌酶重组工程菌株的构建
(1)首先依据人溶菌酶成熟肽基因序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所述，人工合成2条人溶菌酶成熟肽扩增引物，引物序列如下所示：
引物C1：CCGAATTCAAAAGAGAGGCTGAAGCTAAGGTCTTTG
引物C2：CTGCGGCCGCTTACACTCCACAACCTTGAACATAC
(2)提取人外周血淋巴细胞的RNA，反转录为cDNA，以此为模板，运用 PCR方法扩增人溶菌酶成熟肽基因片段，并在片段两端设计两个限制性酶切位点EcoR I和Not I酶切位点，通过酶切连接反应连入被同样限制性内切酶切割的质粒pGAPzα-A中，通过菌落PCR，双酶切鉴定，筛选阳性克隆。
(3)将重组质粒转入大肠杆菌中进行培养增殖，提取质粒，单酶切后用电转化仪转入毕赤酵母野生型菌株X-33中，通过PCR筛选阳性克隆，并用高浓度的抗生素筛选高拷贝菌株，最终得到抗4mg/mL博来霉素的毕赤酵母工程菌株。
2、工程菌株高密度发酵培养
(1)取表达人溶菌酶的重组毕赤酵母菌种(即含有人溶菌酶成熟肽基因序列的毕赤酵母工程菌株)，在100mL YPD培养基中，于27～29℃，250rpm/min 振荡培养17～19小时；再转接到1000mL YPD培养基中，于27～29℃，250 rpm/min振荡培养17～19小时后，得到种子液。
(2)在50L发酵罐中，配制30L发酵培养基，接种量10％，装液量40％，菌体增殖阶段：控制PH为6.0，发酵温度30℃，溶氧控制在30％～40％，当初始培养基中的碳源耗尽后，菌体不再生长，溶氧量开始上升，此时开始流加碳源甘油，使诱导前菌体浓度为400g/L；诱导表达阶段：控制pH为5.5，发酵温度 28℃，溶氧控制在20％～30％，用50％质量浓度的山梨醇：甲醇＝1：4的诱导剂，采取连续补料方式，诱导初期补料速度为1mL/(L·h)，每小时提升一个单位，5h后控制流加速度为5～6mL/(L·h)，此过程根据溶氧控制流速，发酵 60h结束，即得到含有表达重组人溶菌酶成熟肽基因序列的工程菌的发酵液。
3、人溶菌酶微囊颗粒的制备
在发酵液中加入玉米淀粉：发酵液＝10％w/v的玉米淀粉，按照进风口140℃、出风口70℃进行喷雾干燥制粒，即制备得到含有表达重组人溶菌酶成熟肽基因序列的工程菌的发酵液的固形物10重量份、玉米淀粉90重量份的重组人溶菌酶微囊颗粒，封好口放于阴凉干燥处保存。重组人溶菌酶微囊颗粒的抑菌效价为 20万IU/g。
实施例2含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂的制备
1、称量以下重量份数的各个组分：实施例1的重组人溶菌酶微囊颗粒15份、植物乳杆菌菌粉10份、凝结芽孢杆菌芽孢粉25份，低聚果糖10份、米糠15份、辅美粉25份。
其中，植物乳杆菌菌粉的活菌数为2×1011cfu/g，按重量份数计，每份植物乳杆菌菌粉还含有2份冻干保护剂，其中，冻干保护剂包括脱脂奶粉：海藻糖：谷氨酸钠＝15份：8份：2份。
凝结芽孢杆菌芽孢粉的活菌数为5×1010cfu/g，按重量份数计，每份凝结芽孢杆菌芽孢粉还含有3份冻干保护剂，其中，冻干保护剂包括脱脂奶粉：乳糖：海藻糖＝15份：10份：5份。
2、将以上组分用混料机搅拌混合后，粉碎后过100目筛，即得含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂。
实施例3重组人溶菌酶微囊颗粒对病原菌的最小抑菌浓度(MIC)的测定
一、实验方法
将实施例1制备的重组人溶菌酶微囊颗粒用磷酸盐缓冲液稀释溶解，离心取上清作为待测样品；活化动物常见的病原菌藤黄微球菌、大肠标准菌株、大肠杆菌K12D31、蜡样芽孢杆菌、沙门氏菌，将菌液浓度调整约为2×106cfu/ml。
取无菌96孔板，每孔加入100μl病原菌培养基，然后在第1孔中加入人溶菌酶样品100μl混匀，然后吸取100μl到第2孔，混匀后再吸100μl至第3孔，如此连续倍比稀释，然后在每孔中加入上述制备好的病原菌液100μl，混匀，37℃培养14～16小时，用酶标仪测OD595nm值。在读取和报告所测试菌株的MIC 前，应检查生长对照管的细菌生长情况是否良好，菌株的MIC值是否处于质控范围，同时还应检查阴性对照是否无菌生长。以肉眼观察，药物最低浓度管无细菌生长，即为受试菌的MIC。
二、实验结果
测定重组人溶菌酶微囊颗粒对不同致病菌株的MIC。从表1可看出，人溶菌酶对几种常见的病原菌均具有良好的抑菌效果，其中，对革兰氏阳性菌的抑菌作用较好，对阴性菌抑菌作用较弱，对藤黄微球菌的最低抑菌浓度最小，抑菌效果最好。根据样品最高稀释倍数的结果，结合养殖生产实际情况，可指导养殖实验用量为：1吨饲料中加入重组人溶菌酶微囊颗粒100～1000g，可用于预防和治疗动物疾病。
表1重组人溶菌酶微囊颗粒对五种致病菌的MIC检测结果
实施例4含重组人溶菌酶抑菌型动物生长促进剂对蛋雏鸡生长性能及免疫功能的影响
一、实验方法
1、实验分组及处理
选取7日龄蛋雏鸡，正常饲喂3天，淘汰病鸡和弱鸡后，选取400只体重相近的健康蛋雏鸡，随机分为一个对照组，一个抗生素组和两个试验组，每组100 只。所有蛋雏鸡采取自由采食和饮水，试验周期为6周，其他饲养操作严格按照蛋雏鸡饲养管理方法进行。
分组情况如下：
对照组：基础日粮+自由饮水；
抗生素组：按照鸡场常规抗生素添加量在基础日粮中添加黄霉素；
试验组1：在对照组的基础上，将实施例2的含重组人溶菌酶抑菌型动物生长促进剂中的重组人溶菌酶成分用等量的辅美粉代替，保留其它成分，配方比例同实施例2，按照每吨饲料里面200g的添加量饲喂蛋雏鸡；
试验组2：在对照组的基础上，将实施例2的含重组人溶菌酶抑菌型动物生长促进剂按照每吨饲料里面200g的添加量饲喂蛋雏鸡。
2、结果统计
于试验期的0、1、2、3、4、5、6周第一天早晨称取所有雏鸡空腹重量和饲料重量，计算周增重，耗料重及料重比，检测饲喂6周后检测免疫器官发育水平和成活率。
二、实验结果
结果如表2所示。由表2可知，抗生素组与对照组相比，平均周增重提高，料重比降低，免疫器官重量增加，成活率提高，说明抗生素作为饲料添加剂具有一定的促生长作用。在饲料中不添加抗生素的前提下，用乳酸菌抑菌型动物生长促进剂饲喂蛋雏鸡，可有效提高蛋雏鸡的生长水平和饲料的利用率，并能促进免疫器官的发育，提高成活率，降低疾病发生，但促生长效果不如抗生素。
在益生菌剂中加入重组人溶菌酶微囊颗粒后，雏鸡的生长水平、免疫器官发育水平和成活率均高于单独使用益生菌剂试验组，促生长效果优于抗生素添加组，说明人溶菌酶可与益生菌剂协同增效作用，本发明的含重组人溶菌酶抑菌型动物生长促进剂可代替抗生素作为家禽生长促进剂，且不会产生耐药性，能够提高家禽生产水平和免疫水平，并能抑制致病菌生长，降低发病率，提高存活率。
表2含重组人溶菌酶抑菌型动物生长促进剂对蛋雏鸡生长性能和免疫性能的影响
注：表2中数据均为各组相应指标的平均值。
实施例5含重组人溶菌酶抑菌型动物生长促进剂对断奶仔猪的促生长作用
一、实验方法
1、实验分组及处理
随机选取160头30日龄断奶仔猪，大白×大长×杜络克三元杂交猪，平均重约9.7kg，随机分为四组，分别为对照组、抗生素组、试验组1和试验组2，每组40头，各组随机分栏，每栏20头，试验期30天，试验开始前，对猪舍进行彻底清洁消毒，仔猪自由采食饮水，按猪场常规饲养管理方式进行。
各组饲喂情况如下：
对照组：基础日粮+自由饮水；
抗生素组：按照猪场常规抗生素添加量在基础日粮中添加金霉素和杆菌肽锌。
试验组1：在对照组的基础上，将实施例2的含重组人溶菌酶抑菌型动物生长促进剂中的重组人溶菌酶用等量的辅美粉代替，保留其它成分，配方比例同实施例2，按照每吨饲料里面500g的添加量饲喂断奶仔猪；
试验组2：在对照组的基础上，将实施例2的含重组人溶菌酶抑菌型动物生长促进剂按照每吨饲料里面500g的添加量喂饲断奶仔猪。
2、结果统计
在试验期，测定指标包括日增重、料肉比、腹泻率、成活率和残次率，测试结果见下表3。
二、实验结果
结果如表3所示。由表3可知，抗生素组与对照组相比，平均日增重提高，料重比降低，腹泻率和残次率降低，成活率提高，说明抗生素作为断奶仔猪饲料添加剂具有一定的促生长作用；在饲料中不添加抗生素的前提下，用乳酸菌抑菌型动物生长促进剂饲喂断奶仔猪，可有效提高断奶仔猪的生长水平和饲料的利用率，增加日增重，降低料肉比，并提高成活率，降低腹泻率和残次率，但对疾病的预防控制效果较弱于抗生素，促生长效果也不如抗生素。
在益生菌剂中加入重组人溶菌酶微囊颗粒，其生长水平、对饲料的利用效率和成活率均高于单独使用益生菌剂试验组和抗生素组，促生长和疾病预防效果优于抗生素添加组，说明人溶菌酶可与益生菌剂协同增效作用，其中断奶仔猪的腹泻率为0％，成活率为100％，说明本发明的含重组人溶菌酶抑菌型动物生长促进剂相对于普通抗生素和抑菌剂具有更好的杀菌活力，可代替抗生素作为断奶仔猪生长促进剂，在饲料中不添加抗生素的前提下，提高保育仔猪的成活率，改善猪只肠道健康，并降低残次发生率，减少仔猪腹泻，提高其生产水平和免疫水平。
表3含重组人溶菌酶抑菌型动物生长促进剂对断奶仔猪生长性能的影响
注：符合体型外貌差、患病或日增重低于0.12kg条件之一的猪即被认定为残次猪。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
序列表
<110> 广州市微生物研究所有限公司
<120> 一种含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 396
<212> DNA
<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum
<400> 1
atgaaggtct ttgaaaggtg tgagttggcc agaactctga aaagattggg aatggatggc 60
tacaggggaa tcagcctagc aaactggatg tgtttggcca aatgggagag tggttacaac 120
acacgagcta caaactacaa tgctggagac agaagcactg attatgggat atttcagatc 180
aatagccgct actggtgtaa tgatggcaaa accccaggag cagttaatgc ctgtcattta 240
tcctgcagtg ctttgctgca agataacatc gctgatgctg tagcttgtgc aaagagggtt 300
gtccgtgatc cacaaggcat tagaacatgg gtggcatgga gaaatcgttg tcaaaacaga 360
gatgtccgtc agtatgttca aggttgtgga gtgtaa 396
Claims (10)
1.一种含重组人溶菌酶的组合物，其特征在于，包括重组人溶菌酶、植物乳杆菌、凝结芽孢杆菌、低聚果糖。
2.根据权利要求1所述含重组人溶菌酶的组合物，其特征在于，还包括米糠、辅美粉。
3.根据权利要求1或2所述含重组人溶菌酶的组合物，其特征在于，所述重组人溶菌酶以微囊颗粒的形式添加，按重量份数计，所述重组人溶菌酶微囊颗粒包括表达重组人溶菌酶成熟肽的工程菌的发酵液的固形物10～20份、玉米淀粉80～90份。
4.根据权利要求3所述含重组人溶菌酶的组合物，其特征在于，按重量份数计，包括重组人溶菌酶微囊颗粒10～20份、植物乳杆菌菌粉5～15份、凝结芽孢杆菌芽孢粉20～30份、低聚果糖5～15份、米糠10～20份、辅美粉20～30份。
5.根据权利要求4所述含重组人溶菌酶的组合物，其特征在于，按重量份数计，包括重组人溶菌酶微囊颗粒15份、植物乳杆菌菌粉10份、凝结芽孢杆菌芽孢粉25份、低聚果糖10份、米糠15份、辅美粉25份。
6.根据权利要求4～5任一所述含重组人溶菌酶的组合物，其特征在于，按重量份数计，所述植物乳杆菌菌粉每份还含有1～3份冻干保护剂，冻干保护剂包括脱脂奶粉：乳糖：海藻糖＝10～15份：5～10份：2～7份。
7.根据权利要求4～5任一所述含重组人溶菌酶的组合物，其特征在于，按重量份数计，所述凝结芽孢杆菌芽孢粉每份还含有2～5份冻干保护剂，冻干保护剂包括脱脂奶粉：海藻糖：谷氨酸钠＝10～15份：5～10份：0.5～5份。
8.根据权利要求3～5任一所述含重组人溶菌酶的组合物，其特征在于，所述重组人溶菌酶微囊颗粒的制备方法包括以下步骤：
S1.菌株发酵培养：将表达人溶菌酶的重组菌株发酵，得发酵液；
S2.向步骤S1的发酵液中加入玉米淀粉：发酵液＝5％～15％w/v的玉米淀粉，作为冻干保护剂溶解，按照进风口120～150℃、出风口65～85℃进行喷雾干燥制粒，即制备得到重组人溶菌酶微囊颗粒。
9.权利要求1～8任一所述含重组人溶菌酶的组合物在作为或制备禽畜饲料添加剂中的应用。
10.一种含重组人溶菌酶的抑菌型动物生长促进剂，其特征在于，利用权利要求1～8任一所述组合物制备得到。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115094051A (zh) * | 2022-04-08 | 2022-09-23 | 福建福大百特生物科技有限公司 | 一种来源于海科贝特氏菌的重组溶菌酶及其制备方法和应用 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030056244A1 (en) * | 2000-05-02 | 2003-03-20 | Ning Huang | Feed additive compositions and methods |
| CN101473896A (zh) * | 2009-01-09 | 2009-07-08 | 北京阔利达生物技术开发有限公司 | 微生物活菌饲用添加剂及制作方法 |
| CN101530161A (zh) * | 2008-03-10 | 2009-09-16 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 一种新型饲料添加剂及其制备方法 |
| KR20120022291A (ko) * | 2010-09-01 | 2012-03-12 | 한국과학기술원 | 흑운모와 유용미생물을 이용한 발효물을 함유하는 생육촉진용 가축사료 첨가제 |
| CN103005168A (zh) * | 2012-12-27 | 2013-04-03 | 上海海洋大学 | 一种微生物溶菌酶微胶囊及其制备方法和应用 |
| CN106135678A (zh) * | 2016-08-18 | 2016-11-23 | 广州暨南生物医药研究开发基地有限公司 | 一种饲料添加剂及其制备方法和应用 |
| CN106260639A (zh) * | 2016-08-15 | 2017-01-04 | 吉林大学 | 一种含有中药六神曲和益生菌的仔猪饲料添加剂 |
| CN106578348A (zh) * | 2016-11-14 | 2017-04-26 | 南京农业大学 | 一种溶菌酶饲料添加剂的制备方法及应用 |
| CN108850640A (zh) * | 2018-07-09 | 2018-11-23 | 广州奇龙生物科技有限公司 | 表达人溶菌酶的毕赤酵母发酵产品在肉鸡饲料添加剂中的应用 |
-
2020
- 2020-12-10 CN CN202011435799.9A patent/CN112515050B/zh active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030056244A1 (en) * | 2000-05-02 | 2003-03-20 | Ning Huang | Feed additive compositions and methods |
| CN101530161A (zh) * | 2008-03-10 | 2009-09-16 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 一种新型饲料添加剂及其制备方法 |
| CN101473896A (zh) * | 2009-01-09 | 2009-07-08 | 北京阔利达生物技术开发有限公司 | 微生物活菌饲用添加剂及制作方法 |
| KR20120022291A (ko) * | 2010-09-01 | 2012-03-12 | 한국과학기술원 | 흑운모와 유용미생물을 이용한 발효물을 함유하는 생육촉진용 가축사료 첨가제 |
| CN103005168A (zh) * | 2012-12-27 | 2013-04-03 | 上海海洋大学 | 一种微生物溶菌酶微胶囊及其制备方法和应用 |
| CN106260639A (zh) * | 2016-08-15 | 2017-01-04 | 吉林大学 | 一种含有中药六神曲和益生菌的仔猪饲料添加剂 |
| CN106135678A (zh) * | 2016-08-18 | 2016-11-23 | 广州暨南生物医药研究开发基地有限公司 | 一种饲料添加剂及其制备方法和应用 |
| CN106578348A (zh) * | 2016-11-14 | 2017-04-26 | 南京农业大学 | 一种溶菌酶饲料添加剂的制备方法及应用 |
| CN108850640A (zh) * | 2018-07-09 | 2018-11-23 | 广州奇龙生物科技有限公司 | 表达人溶菌酶的毕赤酵母发酵产品在肉鸡饲料添加剂中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 李哲 等: "《生物技术创新：体系与热点》", 上海三联书店, pages: 11 - 12 * |
| 李鑫;谭志坚;凌欣华;李巧贤;: "溶菌酶在饲料中的应用", 畜牧与兽医, no. 11, 10 November 2013 (2013-11-10), pages 11 - 12 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115094051A (zh) * | 2022-04-08 | 2022-09-23 | 福建福大百特生物科技有限公司 | 一种来源于海科贝特氏菌的重组溶菌酶及其制备方法和应用 |
| CN115094051B (zh) * | 2022-04-08 | 2023-09-22 | 福建福大百特生物科技有限公司 | 一种来源于海科贝特氏菌的重组溶菌酶及其制备方法和应用 |
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