CN101473896A - 微生物活菌饲用添加剂及制作方法 - Google Patents

微生物活菌饲用添加剂及制作方法 Download PDF

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Abstract

本发明是微生物活菌饲用添加剂及制作方法。是由凝结芽孢杆菌活菌粉1.5－2.5份、嗜酸乳杆菌活菌粉0.5－2.0份、植物乳杆菌活菌粉1.0－2.5份、纳豆芽孢杆菌活菌粉0.5－2.5份、产朊假丝酵母活菌粉0.5－1.5份和黑曲霉活菌粉2－4.5份组成，每克活菌含量分别为：凝结芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；嗜酸乳杆菌≥1.0×108cfu/g；植物乳杆菌≥ 1.0×108cfu/g；纳豆芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；黑曲霉孢子≥1.0×105cfu/g；产朊假丝酵母≥1.0×108cfu/g。本发明组方合理，制作方法科学，使用范围广泛，操作简单，容易掌握，成本低，可用于各种畜禽作为饲料添加剂，提高饲料添加剂的利用率，具有增强畜禽抗病的作用。饲用微生物活菌添加剂及制作方法。

Description

微生物活菌饲用添加剂及制作方法
技术领域
本发明涉及一种饲料添加剂，尤其涉及一种微生物活菌饲用添加剂及制作方法。
背景技术
目前，在畜牧养殖业中广泛地大量使用抗生素，用来治疗牲畜疾病和提高其生产性能，然而，随着抗生素使用量的的增加，诸如促进耐药菌株增加，破坏了动物体内正常微生物群，导致微生态平衡失调；影响动物的免疫功能，使机体抗病能力减弱；增加易感生境的敏感性，促进机体的外源性感染和内源性感染等弊病日益显露。此外，抗生素等药物会在畜产品(肉、蛋、奶)中的残留，导致威胁人类的身体健康；对人和动物致畸、致残，甚至导致人畜中毒死亡。尤其是在1981年英国发生大量使用“三合一”针剂注射抗生素、激素引发的“疯牛病”事件以来，世界各国，特别是欧美、日本等发达国家纷纷采取官方强硬措施，对饲用抗生素的种类、使用方法、剂量和配伍等方面严加限制。2005年以后，欧盟国家规定：在动物饲料中禁止添加任何抗生素，同时积极鼓励大力开展研究药用饲料添加剂的替代品和倡导绿色安全的饲料添加剂。
从上个世纪初，人们就开始认识到微生物及其产物能够对机体产生影响，并且从细菌、真菌、酵母等微生物中筛选得到了许多被认为是益生菌的微生物。选择适合的微生物种类并采用科学的比例作为活菌饲料添加剂，可达到维持动物体内微生态系统的平衡，使幼龄家畜建立起良好的肠道微生物区系，减少牲畜消化类型的疾病发生，降低动物生产的损失，并具有通过帮助恢复动物体内微生态系统的平衡部分替代抗菌药物，达到治疗动物疾病的目的。
发明内容
本发明的主要目的在于解决上述畜牧养殖业中的问题，提供一种预防动物消化道疾病，增进牲畜进食量，提高饲料消化率的微生物活菌饲用添加剂及制作方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
由凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、黑曲霉和产朊假丝酵母组成。
本发明采用乳酸菌、芽孢杆菌、黑曲霉和酵母四类微生物，通过活菌增殖培养、低温干燥制成活菌剂。乳酸菌可产生乳酸、乙酸、多种维生素、抗生物物质和促生长因子，为动物提供营养，调整菌群，抑制病原菌，增强抗病能力。乳酸菌产生的挥发性脂肪酸为大肠粘膜代谢提供了能源，也使肠道pH值和氧化还原电势降低，有利于矿物质钙、铁、镁、锌等的吸收。乳酸菌能产生类细菌素物质，对病原菌有抑制作用。嗜酸乳杆菌产生的分子量为3500的肽，可以抑制大肠杆菌DNA的合成，可抑制一系列革兰氏阳性和阴性病原体的生长。嗜酸乳杆菌可以产生H2O2，抑制葡萄球菌等致病菌的生长繁殖，还能产生双乙酰，对许多病原菌有抑制作用。提高动物免疫力，用乳酸杆菌发酵产物饲喂断奶仔猪，仔猪血清中IgG水平明显升高。
芽孢杆菌是需氧菌，培养要求的营养物质简单，其产生内生孢子，抗逆性强，能耐酸、碱和高温、高压，在饲料加工和储存过程中不易失活。芽孢杆菌在生长繁殖过程中能产生多种酶，通常是畜禽类动物所不具有的如果胶酶、纤维素酶、葡聚糖酶等，从而可补充畜禽类动物肠道内源酶的不足，提高饲料转化率。还能产生植酸酶，促进动物对植酸磷的利用和对脂肪的消化吸收。产生的氨基氧化酶及分解硫化氢的酶类，可将吲哚类氧化成无毒、无害的物质，从而降低畜禽舍内氨气、硫化氢的浓度和臭味，减少环境污染。此外，通过生物夺氧而扶持厌氧菌的生长，为维持其肠道菌群的微生态平衡起重要作用。酵母只是零星存在于动物肠道微生物群落中，主要调控胃肠内容物发酵，减少乳酸盐的产生，提高pH值的稳定性，促进乳酸菌、纤维素菌等有益菌群生长繁殖，提高活力、增加胃肠道中酵母、乳酸菌、纤维分解菌的数量，促进胃肠对营养物质的分解、合成、消化、吸收和利用，从而增加采食量，提高饲料利用率和生产性能。
黑曲霉菌是存在于土壤中的微生物，不是动物肠道中的正常微生物，作为饲料的添加剂，可提高家禽、家畜的生产性能，尤其是反刍动物。黑霉菌能产生纤维素酶，有利于反刍动物对纤维素的消化和吸收，而且能透过植物表皮角质层屏障，破坏纤维素的结构完整性，降解含木质素的植物细胞壁，使动物更有效的消化。黑曲霉还能产生淀粉酶、蛋白酶和果胶酶，在饲料成分复杂或粗饲料成分较多的情况下，其作用更为明显。
凝结芽孢杆菌活菌粉1.5-2.5份、嗜酸乳杆菌活菌粉0.5-2.0份、植物乳杆菌活菌粉1.0-2.5份、纳豆芽孢杆菌活菌粉0.5-2.5份、产朊假丝酵母活菌粉0.5-1.5份和黑曲霉活菌粉活菌粉2-4.5份，每克活菌含量分别为：凝结芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；嗜酸乳杆菌≥1.0×108cfu/g；植物乳杆菌≥1.0×108cfu/g；纳豆芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；黑曲霉孢子≥1.0×105cfu/g；产朊假丝酵母≥1.0×108cfu/g。
成品指标：
产品活菌数：凝结芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；嗜酸乳杆菌≥1.0×108cfu/g；植物乳杆菌≥1.0×108cfu/g；纳豆芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；黑曲霉孢子≥1.0×105cfu/g；产朊假丝酵母≥1.0×108cfu/g。
感官指标：产品为灰白色粉剂，色泽均一；
理化指标：粒度：制剂能通过40目筛；水分：含水量低于8％。
饲料添加剂的掺量为：幼年牲畜每天食用粮食类饲料重量的0.12％-0.40％，成年牲畜每天食用粮食类饲料重量的0.015％-0.05％。
本发明采用乳酸菌、芽孢杆菌、黑曲霉和酵母四类微生物，通过活菌增殖培养、低温干燥制成活菌剂，再根据不同牲畜的生理特点配制成饲料添加剂，在预防动物消化道疾病，增进牲畜进食量，提高饲料消化率的应用效果显著。
幼年牲畜主要指仔猪、仔鸡、幼年奶牛等，成年牲畜是指已成年的成猪、成鸡、成年奶牛等。
把凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、纳豆芽孢杆菌和产朊假丝酵母的各菌体单菌株斜面菌种培养：各菌种使用相应培养基并加入1.5-2.5％琼脂，在30-40℃条件下静止培养20-48小时，放入4℃冰箱保存。
液体一级种子培养：为摇瓶培养，取250ml三角瓶加入种子培养基50-100ml，取斜面种子菌种接入培养基中30-40℃，100-220r/minpm，培养30h。
液体二级培养：10L自动种子发酵罐，装种子培养基5-8L，接重量5-10％，30-40℃，搅拌速度50-100转/分钟，培养30h。
发酵罐单菌株纯增殖培养：
各菌种的种子培养基和发酵培养基(按每升水中加入的原料克计)：
凝结芽孢杆菌：蛋白胨5-15g，酵母膏5-15g，葡萄糖3-9g，MgSO4·7H2O0.5-1.5g，K2HPO4 1-3g，MnSO4 50μg，pH7.0。
嗜酸乳杆菌：胰蛋白胨2.5-7.5g，蛋白胨5-15g，葡萄糖5-15g，乳糖2.5-7.5g，酵母浸出粉4-10g pH7.0。
植物乳杆菌：蛋白胨5-15g，牛肉膏5-15g，酵母膏3-7g，葡萄糖15-25g，柠檬酸二钠1.5-3.5g，K2HPO4 1-3g，醋酸钠2.5-7.5g，MgSO4·7H2O 1-3g，MnSO4·4H2O 0.01g，吐温10ml。
纳豆芽孢杆菌：胰蛋白胨3.5-6.5g，蛋白胨7.5-12.5g，葡萄糖7.5-12.5g，乳糖2.5-7.5g，酵母浸出粉5-9g，pH7.0。
产朊假丝酵母：葡萄糖15g-45g，酵母粉5g-15g，蛋白胨5g-15g，(NH4)2SO4 5g-15g，pH6.5。
各发酵罐单菌株纯培养条件：温度25-40℃，通风量9-13m3/h，罐压0.02-0.09MPa，接种量1.5-7.5％，时间19-72小时，发酵液活菌数达到1010-1013cfu/ml。
黑曲霉斜面菌种培养：黑曲霉菌种使用相应培养基，并加入1.5-2.5％琼脂，在28-30℃条件下静止培养20-48小时，放入4℃冰箱保存。
摇瓶放大培养，培养基(按每升水中加入的原料克数计)：
稻草粉10～15克，麸皮10～15克，葡萄糖5～8克，酵母粉1～3克，磷酸氢二钾3.6～4.6克，七水硫酸镁1.5～2.5克，pH5.0。
培养基成份配比物料分装入三角瓶中，每瓶100毫升，然后置于高压灭菌锅中，121℃，灭菌30分钟，自然冷却后接种黑曲霉菌种。
取黑曲霉菌斜面孢子接种于500毫升三角瓶摇床振荡培养，温度28-30℃，转速180-250转/分钟，培养48-60h。
固体放大培养，茄子瓶或大锥形瓶固体放大培养培养基(按每升水中加入的原料克数计)：
米糠120-150克，稻草粉70-100克，麸皮200-250克，磷酸氢二钾3.6-4.6克，七水硫酸镁1.5-2.5克，pH5.0。
按培养基成份配比物料1升茄子瓶或2-3升的大锥形瓶中，每瓶装150-250克，经121℃，灭菌45分钟，自然冷却后接种黑曲霉菌种。
取黑曲霉摇瓶培养好的种子液接种于1升茄子瓶或2-3升的大锥形瓶内增殖培养，培养温度28-30℃，接种量3-5％(V/W)，时间60-72小时，然后于50℃干燥箱干燥，粉碎过40目筛，每克干培养物(干曲)中孢子数目达到109-10个。本发明所用菌种来源和菌种相应使用的斜面培养基见下表，
 
序号 菌名(中文、拉丁文) 编号 斜面培养基和摇瓶培养基(g/L)
1 凝结芽孢杆菌Bacillus coagulans IFFI10067 蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，pH7.2-7.4
2 嗜酸乳杆菌Lactobacillusacidophilus IFFI06005 脱脂奶粉100g，pH6.0
3 植物乳杆菌Lactobacillusplantarum IFFI06009 蛋白胨10g，蔗糖20g，酵母膏10g，磷酸铵5g，pH7.2-7.4
4 纳豆芽孢杆菌Bacillus natto IFFI10023 蛋白胨1％，牛肉膏0.5％，氯化钠0.5％，pH7.2-7.4
5 黑曲霉Aspergillus niger AS3.1858 马铃薯培养基
6 产朊假丝酵母Candida utilis CGMCC2.120 YEPD培养基
把凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、纳豆芽孢杆菌和产朊假丝酵母各单菌株发酵结束后的纯培养液，经过旋转流化干燥造粒设备，以淀粉为载体制成固体菌粉；设备预热，高温干燥空气(140℃)在系统内循环，实现系统内的灭菌15分钟，灭菌达到工作要求后启动原料输送系统，原料经雾化器喷入干燥器内，同时高速吹入温度45-55℃的热气流，直接干燥成粉，每1吨单菌株纯培养物(液体)干燥时加入10-20公斤载体，经干燥后得60-70公斤菌粉，每克干菌粉活菌数达到1010-1013cfu/g；黑曲霉固态发酵扩大培养后，于干燥箱内50℃干燥，粉碎过40目筛，每克干培养物(干曲)中孢子数目达到109-10个；将凝结芽孢杆菌活菌粉1.5-2.5份、嗜酸乳杆菌活菌粉0.5-2.0份、植物乳杆菌活菌粉1.0-2.5份、纳豆芽孢杆菌活菌粉0.5-2.5份、产朊假丝酵母活菌粉0.5-1.5份和黑曲霉活菌粉活菌粉2-4.5份，按比例混合均匀，制成成品，包装入库。
根据不同种类的牲畜以及其体质生理状态配置微生物活菌制剂，见下表。
牲畜饲料微生物活菌制剂配比表
 
动物 凝结芽孢杆菌粉(份) 嗜酸乳杆菌粉(份) 植物乳杆菌粉(份) 纳豆芽孢杆菌粉(份) 黑曲霉干曲粉(份) 产朊假丝酵母菌粉(份) 共计(克)
仔猪 1.5 1.5 1.5 2.5 2 1 10
成年猪 2 1 1 1.5 3 1.5 10
仔鸡 2 1 2.5 2 2 0.5 10
成鸡 1.5 0.5 1 1.5 4 1.5 10
牛犊 2.5 1 1.5 0.5 4 0.5 10
成年奶牛 1.5 2 1 0.5 4.5 0.5 10
本发明作为饲料添加剂预防幼畜腹泻和增加抵抗力方面的应用进行了对比实验。
作为饲料添加剂的用法：
仔鸡以每日食用饲料重量的0.2-0.4％加入到仔鸡日粮中，仔鸡出壳后第2-3天开始饲喂至20天停止。
成鸡以每日食用饲料重量的0.04-0.05％加入饲料中。
仔猪以每日食用饲料重量的0.12-0.25％加入到仔猪日粮中，仔猪出生后第五天开始饲喂，连续饲喂服用20-35天。
成猪以每日食用饲料重量的0.02-0.025％加入饲料中。
牛犊以每日食用饲料中粉状精饲料重量的0.13-0.26％加入到牛犊精饲料中，从牛犊出生后第7天开始，连续服用35至50天。
成年牛以每日食用饲料中粉状精饲料重量的0.015-0.02％加入饲料中。
实验结果表明，实验组与对照组相比较，实验组显著提高幼畜体质，腹泻症状和白痢等患病率明显降低。参见下列对照表。
实验组与对照组喂养效果表
 
项目 幼畜种类 试验头数(只数) 试验时间(天) 腹泻发病率％ 平均日增重(克) 平均日增中提高率％ 料肉比 料肉比降低率％
对照组 仔鸡 300 20 33.65 34.17 0 2.46 0
实验组 仔鸡 300 20 16.70 41.76 22.21 1.98 19.51
对照组 仔猪 100 30 23 467.46 0 2.38 0
实验组 仔猪 100 30 7 503.73 7.76 1.96 17.65
对照组 牛犊 30 40 19 967.86 0 2.73 0
实验组 牛犊 30 40 8 1006.85 4.02 2.23 18.32
本发明是微生物活菌饲用添加剂及制作方法。组方合理，制作方法科学，使用范围广泛，操作简单，容易掌握，成本低，可用于各种畜禽作为饲用添加剂，提高饲料添加剂的利用率，具有增强畜禽抗病的作用。目前，活菌剂的生产均采用离心冷冻干燥的方式，生产成本高，能耗大，排放大量离心后废弃的发酵液，并且产品的活菌数最高达到109-1010cfu/g。本发明采用旋转流化干燥造粒设备，在40-50℃条件制备活菌粉，菌粉易保存，溶解性好，生产效率高，损失小，无残留液体排放，实现洁净化生产，产品的活菌数高达到1010-1013cfu/g。
以下结合实施例对本发明详细说明。
具体实施方式
实施例1(高剂量按重量比每份以1g计)
凝结芽孢杆菌活菌粉2.5份、嗜酸乳杆菌活菌粉2.0份、植物乳杆菌活菌粉2.5份、纳豆芽孢杆菌活菌粉2.5份、产朊假丝酵母活菌粉1.5份和黑曲霉活菌粉活菌粉4.5份，每克活菌含量分别为：凝结芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；嗜酸乳杆菌≥1.0×108cfu/g；植物乳杆菌≥1.0×108cfu/g；纳豆芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；黑曲霉孢子≥1.0×105cfu/g；产朊假丝酵母≥1.0×108cfu/g，每克干菌粉活菌数达到1011-1014cfu/g。
成品指标：
产品活菌数：凝结芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；嗜酸乳杆菌≥1.0×108cfu/g；植物乳杆菌≥1.0×108cfu/g；纳豆芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；黑曲霉孢子≥1.0×105cfu/g；产朊假丝酵母≥1.0×108cfu/g。
感官指标：产品为灰白色粉剂，色泽均一；
理化指标：粒度：制剂能通过40目筛；水分：含水量低于8％。
实施例2(低剂量按重量比每份以1g计)
凝结芽孢杆菌活菌粉1.5份、嗜酸乳杆菌活菌粉0.5份、植物乳杆菌活菌粉1.0份、纳豆芽孢杆菌活菌粉0.5份、产朊假丝酵母活菌粉0.5份和黑曲霉活菌粉活菌粉2份，每克活菌含量分别为：凝结芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；嗜酸乳杆菌≥1.0×108cfu/g；植物乳杆菌≥1.0×108cfu/g；纳豆芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；黑曲霉孢子≥1.0×105cfu/g；产朊假丝酵母≥1.0×108cfu/g，每克干菌粉活菌数达到1011-1014cfu/g。
成品指标：
产品活菌数：凝结芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；嗜酸乳杆菌≥1.0×108cfu/g；植物乳杆菌≥1.0×108cfu/g；纳豆芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；黑曲霉孢子≥1.0×105cfu/g；产朊假丝酵母≥1.0×108cfu/g。
感官指标：产品为灰白色粉剂，色泽均一；
理化指标：粒度：制剂能通过40目筛；水分：含水量低于8％。
实施例3(中等剂量按重量比每份以1g计)
凝结芽孢杆菌活菌粉-2.0份、嗜酸乳杆菌活菌粉1.25-.0份、植物乳杆菌活菌粉1.75份、纳豆芽孢杆菌活菌粉1.5份、产朊假丝酵母活菌粉1.0份和黑曲霉活菌粉活菌粉3.25份，每克活菌含量分别为：凝结芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；嗜酸乳杆菌≥1.0×108cfu/g；植物乳杆菌≥1.0×108cfu/g；纳豆芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；黑曲霉孢子≥1.0×105cfu/g；产朊假丝酵母≥1.0×108cfu/g，每克干菌粉活菌数达到1011-1014cfu/g。
成品指标：
产品活菌数：凝结芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；嗜酸乳杆菌≥1.0×108cfu/g；植物乳杆菌≥1.0×108cfu/g；纳豆芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；黑曲霉孢子≥1.0×105cfu/g；产朊假丝酵母≥1.0×108cfu/g。
感官指标：产品为灰白色粉剂，色泽均一；
理化指标：粒度：制剂能通过40目筛；水分：含水量低于8％。
实施例4
幼年牲畜饲料添加剂的掺量为：每天食用粮食类饲料重量的0.12％-0.40％
实施例5
成年牲畜饲料添加剂的掺量为：每天食用粮食类饲料重量的0.015％-0.05％。
实施例6
把凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、纳豆芽孢杆菌和产朊假丝酵母的各菌体单菌株斜面菌种培养：各菌种使用相应培养基并加入1.5-2.5％琼脂，在30-40℃条件下静止培养20-48小时，放入4℃冰箱保存。
液体一级种子培养：为摇瓶培养，取250ml三角瓶加入种子培养基50-100ml，取斜面种子菌种接入培养基中30-40℃，100-220r/minpm，培养30h。
液体二级培养：10L自动种子发酵罐，装种子培养基5-8L，接重量5-10％，30-40℃，搅拌速度50-100转/分钟，培养30h。
发酵罐单菌株纯增殖培养：
各菌种的种子培养基和发酵培养基(按每升水中加入的原料克计)：
凝结芽孢杆菌：蛋白胨5-15g，酵母膏5-15g，葡萄糖3-9g，MgSO4·7H2O0.5-1.5g，K2HPO4 1-3g，MnSO4 50μg，pH7.0。
嗜酸乳杆菌：胰蛋白胨2.5-7.5g，蛋白胨5-15g，葡萄糖5-15g，乳糖2.5-7.5g，酵母浸出粉4-10g pH7.0。
植物乳杆菌：蛋白胨5-15g，牛肉膏5-15g，酵母膏3-7g，葡萄糖15-25g，柠檬酸二钠1.5-3.5g，K2HPO4 1-3g，醋酸钠2.5-7.5g，MgSO4·7H2O 1-3g，MnSO4·4H2O 0.01g，吐温10ml。
纳豆芽孢杆菌：胰蛋白胨3.5-6.5g，蛋白胨7.5-12.5g，葡萄糖7.5-12.5g，乳糖2.5-7.5g，酵母浸出粉5-9g，pH7.0。
产朊假丝酵母：葡萄糖15g-45g，酵母粉5g-15g，蛋白胨5g-15g，(NH4)2SO4 5g-15g，pH6.5。
各发酵罐单菌株纯培养条件：温度25-40℃，通风量9-13m3/h，罐压0.02-0.09MPa，接种量1.5-7.5％，时间19-72小时，发酵液活菌数达到1010-1013cfu/ml。
实施例7
黑曲霉斜面菌种培养：黑曲霉菌种使用相应培养基，并加入1.5-2.5％琼脂，在28-30℃条件下静止培养20-48小时，放入4℃冰箱保存。
摇瓶放大培养，培养基(按每升水中加入的原料克数计)：
稻草粉10～15克，麸皮10～15克，葡萄糖5～8克，酵母粉1～3克，磷酸氢二钾3.6～4.6克，七水硫酸镁1.5～2.5克，pH5.0。
培养基成份配比物料分装入三角瓶中，每瓶100毫升，然后置于高压灭菌锅中，121℃，灭菌30分钟，自然冷却后接种黑曲霉菌种。
取黑曲霉菌斜面孢子接种于500毫升三角瓶摇床振荡培养，温度28-30℃，转速180-250转/分钟，培养48-60h。
固体放大培养，茄子瓶或大锥形瓶固体放大培养培养基(按每升水中加入的原料克数计)：
米糠120-150克，稻草粉70-100克，麸皮200-250克，磷酸氢二钾3.6-4.6克，七水硫酸镁1.5-2.5克，pH5.0。
按培养基成份配比物料1升茄子瓶或2-3升的大锥形瓶中，每瓶装150-250克，经121℃，灭菌45分钟，自然冷却后接种黑曲霉菌种。
取黑曲霉摇瓶培养好的种子液接种于1升茄子瓶或2-3升的大锥形瓶内增殖培养，培养温度28-30℃，接种量3-5％(V/W)，时间60-72小时，然后于50℃干燥箱干燥，粉碎过40目筛，每克干培养物(干曲)中孢子数目达到109-10个。
实施例8
把凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、纳豆芽孢杆菌和产朊假丝酵母各单菌株发酵结束后的纯培养液，经过旋转流化干燥造粒设备，以淀粉为载体制成固体菌粉；设备预热，高温干燥空气(140℃)在系统内循环，实现系统内的灭菌15分钟，灭菌达到工作要求后启动原料输送系统，原料经雾化器喷入干燥器内，同时高速吹入温度45-55℃的热气流，直接干燥成粉，每1吨单菌株纯培养物(液体)干燥时加入10-20公斤载体，经干燥后得60-70公斤菌粉，每克干菌粉活菌数达到1010-1013cfu/g；黑曲霉固态发酵扩大培养后，于干燥箱内50℃干燥，粉碎过40目筛，每克干培养物(干曲)中孢子数目达到109-10个；将凝结芽孢杆菌活菌粉1.5-2.5份、嗜酸乳杆菌活菌粉0.5-2.0份、植物乳杆菌活菌粉1.0-2.5份、纳豆芽孢杆菌活菌粉0.5-2.5份、产朊假丝酵母活菌粉0.5-1.5份和黑曲霉活菌粉活菌粉2-4.5份，按比例混合均匀，制成成品，包装入库。
附图说明
图1微生物活菌饲用添加剂的工艺流程示意图。

Claims (2)

1、一种微生物活菌饲用添加剂，其特征是由凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、黑曲霉和产朊假丝酵母组成，凝结芽孢杆菌活菌粉1.5-2.5份、嗜酸乳杆菌活菌粉0.5-2.0份、植物乳杆菌活菌粉1.0-2.5份、纳豆芽孢杆菌活菌粉0.5-2.5份、产朊假丝酵母活菌粉0.5-1.5份和黑曲霉活菌粉活菌粉2-4.5份，每克活菌含量分别为：凝结芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；嗜酸乳杆菌≥1.0×108cfu/g；植物乳杆菌≥1.0×108cfu/g；纳豆芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；黑曲霉孢子≥1.0×105cfu/g；产朊假丝酵母≥1.0×108cfu/g，每克干菌粉活菌数达到1011-1014cfu/g；成品指标：
产品活菌数：凝结芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；嗜酸乳杆菌≥1.0×108cfu/g；植物乳杆菌≥1.0×108cfu/g；纳豆芽孢杆菌≥1.0×1010cfu/g；黑曲霉孢子≥1.0×105cfu/g；产朊假丝酵母≥1.0×108cfu/g；
感官指标：产品为灰白色粉剂，色泽均一；
理化指标：粒度：制剂能通过40目筛；水分：含水量低于8％；
饲用添加剂的掺量为：幼年牲畜每天食用粮食类饲料重量的0.12％-0.40％，成年牲畜每天食用粮食类饲料重量的0.015％-0.05％。
2、一种微生物活菌饲料用添加剂的制作方法，其特征是把凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、纳豆芽孢杆菌和产朊假丝酵母的各单菌株斜面菌种培养：各菌种使用相应培养基并加入1.5-2.5％琼脂，在30-40℃条件下静止培养20-48小时，放入4℃冰箱保存；
液体一级种子培养：为摇瓶培养，取250ml三角瓶加入种子培养基50-100ml，取斜面种子菌种接入培养基中30-40℃，100-220r/minpm，培养30h；
液体二级培养：10L自动种子发酵罐，装种子培养基5-8L，接重量5-10％，30-40℃，搅拌速度50-100转/分钟，培养30h；
发酵罐单菌株纯增殖培养：
各菌种的种子培养基和发酵培养基(按每升水中加入的原料克计)：
凝结芽孢杆菌：蛋白胨5-15g，酵母膏5-15g，葡萄糖3-9g，MgSO4·7H2O0.5-1.5g，K2HPO4 1-3g，MnSO4 50μg，pH7.0；
嗜酸乳杆菌：胰蛋白胨 2.5-7.5g，蛋白胨 5-15g，葡萄糖 5-15g，乳糖2.5-7.5g，酵母浸出粉 4-10g pH7.0；
植物乳杆菌：蛋白胨 5-15g，牛肉膏 5-15g，酵母膏 3-7g，葡萄糖 15-25g，柠檬酸二钠 1.5-3.5g，K2HPO4 1-3g，醋酸钠 2.5-7.5g，MgSO4·7H2O 1-3g，MnSO4·4H2O 0.01g，吐温10ml；
纳豆芽孢杆菌：胰蛋白胨 3.5-6.5g，蛋白胨 7.5-12.5g，葡萄糖 7.5-12.5g，乳糖 2.5-7.5g，酵母浸出粉 5-9g，pH7.0；
产朊假丝酵母：葡萄糖 15g-45g，酵母粉 5g-15g，蛋白胨 5g-15g，(NH4)2SO4 5g-15g，pH6.5；
各发酵罐单菌株纯培养条件：温度25-40℃，通风量9-13m3/h，罐压0.02-0.09MPa，接种量1.5-7.5％，时间19-72小时，发酵液活菌数达到1010-1013cfu/ml；
黑曲霉斜面菌种培养：黑曲霉菌种使用相应培养基，并加入1.5-2.5％琼脂，在28-30℃条件下静止培养20-48小时，放入4℃冰箱保存；
摇瓶放大培养，培养基(按每升水中加入的原料克数计)：
稻草粉10～15克，麸皮10～15克，葡萄糖5～8克，酵母粉1～3克，磷酸氢二钾3.6～4.6克，七水硫酸镁1.5～2.5克，pH5.0；
培养基成份配比物料分装入三角瓶中，每瓶100毫升，然后置于高压灭菌锅中，121℃，灭菌30分钟，自然冷却后接种黑曲霉菌种；
取黑曲霉菌斜面孢子接种于500毫升三角瓶摇床振荡培养，温度28-30℃，转速180-250转/分钟，培养48-60h；
固体放大培养，茄子瓶或大锥形瓶固体放大培养培养基(按每升水中加入的原料克数计)：
米糠120-150克，稻草粉 70-100克，麸皮 200-250克，磷酸氢二钾 3.6-4.6克，七水硫酸镁 1.5-2.5克，pH5.0。
按培养基成份配比物料1升茄子瓶或2-3升的大锥形瓶中，每瓶装150-250克，经121℃，灭菌45分钟，自然冷却后接种黑曲霉菌种；
取黑曲霉摇瓶培养好的种子液接种于1升茄子瓶或2-3升的大锥形瓶内增殖培养，培养温度28-30℃，接种量3-5％(V/W)，时间60-72小时，然后于50℃干燥箱干燥，粉碎过40目筛，每克干培养物(干曲)中孢子数目达到109-10个；
把凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、纳豆芽孢杆菌和产朊假丝酵母各单菌株发酵结束后的纯培养液，经过旋转流化干燥造粒设备，以淀粉为载体制成固体菌粉；设备预热，高温干燥空气(140℃)在系统内循环，实现系统内的灭菌15分钟，灭菌达到工作要求后启动原料输送系统，原料经雾化器喷入干燥器内，同时高速吹入温度45-55℃的热气流，直接干燥成粉，每1吨单菌株纯培养物(液体)干燥时加入10-20公斤载体，经干燥后得60-70公斤菌粉，每克干菌粉活菌数达到1010-1013cfu/g；黑曲霉固态发酵扩大培养后，于干燥箱内50℃干燥，粉碎过40目筛，每克干培养物(干曲)中孢子数目达到109-10个；将凝结芽孢杆菌活菌粉1.5-2.5份、嗜酸乳杆菌活菌粉0.5-2.0份、植物乳杆菌活菌粉1.0-2.5份、纳豆芽孢杆菌活菌粉0.5-2.5份、产朊假丝酵母活菌粉0.5-1.5份和黑曲霉活菌粉活菌粉2-4.5份，按比例混合均匀，制成成品，包装入库。
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