CN112501212B

CN112501212B - 一种冬虫夏草发酵工艺

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Publication number: CN112501212B
Application number: CN202011524020.0A
Authority: CN
Inventors: 刘随记
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2020-12-22
Filing date: 2020-12-22
Publication date: 2023-02-28
Anticipated expiration: 2040-12-22
Also published as: CN112501212A

Abstract

本发明涉及冬虫夏草发酵技术领域，更具体而言，一种冬虫夏草发酵工艺，工艺简单，易于实现，培养周期短，得到的冬虫夏草菌丝体活性成分含量高，具有极高的营养价值。本发明在通过对青藏高原的野生冬虫夏草菌种分离、提纯，并通过复合发酵技术生产出冬虫夏草发酵原浆和冬虫夏草发酵原浆粉。经多次试验分析检测其多项关键指标都超过天然的冬虫夏草成分，冬虫夏草发酵原浆和冬虫夏草发酵原浆粉经部分人群服用后对久咳虚喘、劳嗽咯血、阳瘘遗精、腰膝酸痛、失眠、便秘、贫血、通风等具有很好的效果。

Description

一种冬虫夏草发酵工艺

技术领域

本发明涉及冬虫夏草发酵技术领域，更具体而言，一种冬虫夏草发酵工艺。

背景技术

冬虫夏草是一种鳞翅目昆虫和真菌共生的药用真菌生物体，其念珠状菌丝体通过蚕食方式感染了蝙蝠蛾的六龄幼虫，而后以幼虫体内的有机质作为营养培养基寄生扩繁生长，经过秋、冬、春不同阶段的环境温度和湿度不断生长发育，直至莅年“立夏”到“芒种”阶段其虫体中菌丝体扭结并形成了一个棕褐色子座长出幼虫的头部，既入药部位的菌核和子座复合体。本草纲目中记载冬虫夏草具有提高免疫能力，经过中医临床应用研究证明长期坚持服用冬虫夏草，免疫力的提高能达到85％以上，促进造血细胞增殖，对免疫或造血功能低下、癌症等疾病有显著的辅助调理作用。尤其是对老年慢性支气管炎、哮喘、肺气肿、肺心病等疾病能起到减轻症状的作用。据研究分析表明，对肺源性心脏病呼吸衰竭患者在综合治疗的基础上辅以冬虫夏草调理，发现了应用冬虫夏草后除苯丙氨酸外的人体必需氨基酸均增高。清代吴仪洛《本草丛新》书中认为冬虫夏草性味甘，温。功能补肺益肾，化痰止咳。可用之于久咳虚喘，产后虚弱、阳痿阴冷等“虚”的病症。据研究：冬虫夏草主要含有虫草素、虫草酸、腺苷和粗多糖、氨基酸等成分；能抑制链球菌、鼻疽杆菌炭疽杆菌等病菌的生长，又是抗癌的活性物质，对人体的内分泌系统和神经系统有很好的调节作用；

我国天然冬虫夏草野生资源极其有限，无法满足需求，货源奇缺，价格昂贵。

发明内容

为了克服现有技术中所存在的不足，本发明提供一种冬虫夏草发酵工艺。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种冬虫夏草发酵工艺，包括以下步骤：

S1、冬虫夏草发酵原浆发酵原料配方；

蛹虫草超微粉1～2％，黄芪粉0.1～1％，当归粉0.1～1％，白芍粉0.1～1％，熟地粉0.1～1％，麦冬粉0.1～1％，枸杞粉0.1～1％，柏子仁粉0.1～1％，附子粉0.1～1％，肉桂粉0.1～1％，鹿角胶粉0.1～1％，五味子粉0.1～1％，肉苁蓉粉0.1～1％；麦麸超微粉0.1～1％，蛋白胨0.01～0.1％，葡萄糖0.1～1％，维生素B₁粉0.001～0.1％，百合粉1～2％，罗汉果粉1～2％，维生素B₆粉0.001～0.1％，氨基酸粉0.001～0.1％，食品消泡剂0.01～0.1％，余量为水；

S2、发酵罐的选择：选择具有三级空气减排过滤系统和发酵罐底部带有自动搅拌系统，罐体为夹层结构，罐体材质为304不锈钢材质；

S3、发酵原料降解处理：发酵罐内加水定容至总罐体的35％，关闭灌盖加温至100℃，按S1中配方精确称量蛹虫草超微粉，黄芪粉，当归粉，白芍粉，熟地粉，麦冬粉，枸杞粉，柏子仁粉，附子粉，肉桂粉，鹿角胶粉，五味子粉，肉苁蓉粉，麦麸超微粉，百合粉，罗汉果粉混合，用35℃无菌温水搅拌溶解调和至糊状倒入发酵罐内，开始加温并开动发酵罐底部的自动搅拌系统避免糊状原料粘连在罐底或罐壁上，当罐内温度再次达到100℃时关闭所有排气阀门、换气阀门，加温至125℃保温127秒后，向发酵罐夹层内加冷水循环，罐内降温至37℃；在无菌条件下打开罐口将植物乳杆菌液体菌种接入罐内，接种量为0.1％，封闭发酵罐口后，开启发酵罐底部全自动搅拌器，转速调至130r/min，发酵罐上部的通气压力表调至0.06MPa，发酵罐内温保持在37℃，连续发酵72小时后，逐渐降温至30℃；发酵原料降解指标；原料颜色为浅褐色，PH3.8～4.2，原料呈分离的糊状，入口感为甜酸味；

S4、发酵罐二次填料灭菌：发酵罐内加入纯净水定容至总罐体的80％，加温至100℃后，按S1中配方精确称量蛋白胨，葡萄糖，维生素B₁，维生素B₆，氨基酸粉，食品消泡剂混合，加开水搅拌溶解后加入发酵罐内，将液体酸碱度调至7，将罐口周围料垢清理后封紧罐盖开始加温灭菌，当罐内温度上升至108℃，压力表表压为0.05MPa时打开放气阀逐渐排尽发酵罐中的冷空气，压力表表压为0时关闭放气阀，调节罐内温度125℃，压力表表压为0.13～0.15MPa，灭菌时间120min；灭菌结束后将罐盖顶部的总排气阀打开1/3让发酵罐内压力缓慢降低，罐内温度降至80℃时开启发酵罐夹层低温循环水逐渐降至18～20℃待用接种；

S5、发酵罐接种：将冬虫夏草菌种快速倒入发酵罐内进行接种后迅速密封罐盖，关闭排气管使罐内压力恢复至0.05MPa，观察罐内有气泡出现后，确认饱和打开排气管进行通气培养

S6、冬虫夏草复合发酵菌原浆的生长培养：发酵罐罐内温度控制在20℃±0.5℃，罐内表压控制在0.04MPa，保温保压96个小时；96小时后再将罐内温度下调至18℃±0.5℃，罐内表压控制在0.06MPa，罐底自动搅拌器转速设定为130r/min，接入菌种，培养15天；发酵结束后取样检测菌球量≥0.6g/ml，PH值5.2～5.5；

S7、冬虫夏草发酵原浆灭菌处理：冬虫夏草复合发酵原浆发酵结束后，关闭通气系统，打开罐盖，使用专用工具刮掉粘在灌盖及罐体内壁上的菌球粘连层块混合于液体中，将液体酸碱度调至6.5；封闭罐盖，开启总排气阀开始向发酵罐夹层内通热气加温，在加温的同时也要开动罐底部的自动搅拌器转速设定为80r/min，当罐内温度上升至100℃时保温30min进行灭菌；将罐盖顶部的总排气阀打开1/3让发酵罐内压力缓慢降低，罐内温度降至80℃时开启发酵罐夹层低温循环水逐渐降至15～20℃；

S8、冬虫夏草发酵原浆调和均质处理：像发酵罐内添加3～5％的纯蜂蜜进行调和处理；把离心机的转速调至13000r/min，通料量1.2～1.6T\h进行均质，使得冬虫夏草原浆菌球质体的细度在0.0015～0.002mm之间，浑浊度、流速度均匀；

S9、冬虫夏草发酵原浆浓缩：将冬虫夏草原浆的浓缩温度要保持在35～40℃，真空度为90kPa，当原浆中可溶性固形物达到40～45％浓缩完成；

S10、冬虫夏草发酵原浆灌装：浓缩后的冬虫夏草原浆要通过换热器输送到快速杀菌机里，再经过121℃保温127秒快速杀菌后进行灌装至瓶中；

S11、灭菌：将冬虫夏草发酵原浆瓶灭菌，再经烘干机烘干瓶外壁的表面水分后即为成品。

进一步地，蛹虫草超微粉1.6％，黄芪粉0.2％，当归粉0.2％，白芍粉0.13％，熟地粉0.3％，麦冬粉0.4％，枸杞粉0.3％，柏子仁粉0.2％，附子粉0.2％，肉桂粉0.5，鹿角胶粉0.2％，五味子粉0.3％，肉苁蓉粉0.2％，麦麸超微粉0.2％，蛋白胨0.054％，葡萄糖0.3％，维生素B₁粉0.0014％，百合粉1.3％，罗汉果粉1.2％，维生素B₆粉0.001％，氨基酸粉0.001％，食品消泡剂0.052％，余量为水。

进一步地，步骤S3所述植物乳杆菌接种前40分钟要用臭氧和紫外线对发酵罐制备室进行消毒杀菌。

进一步地，步骤S4所述液体酸碱度通过用碱调节。

进一步地，步骤S5所述发酵罐接种前，要开启臭氧机和紫外线灯对室内的所有接种用具、菌种和罐体进行全面消毒杀菌30min；将75％酒精喷雾在发酵罐上半部进行消毒，再用丁烷火枪把罐顶的接种口灼烧两圈，然后点燃酒精火焰圈套放在接种口处，把进气压力调低至1kg打开接种口上的罐帽，右手持大长镊子将棉塞夹取下来，对准发酵罐的接种口在火焰圈覆盖下将液体摇瓶菌种快速倒入罐内。

进一步地，步骤S7所述液体酸碱度通过食用碱调节。

进一步地，步骤S10所述原浆灌装的温度不能低于90℃，经过杀菌热处理的原浆要迅速灌装，停待时间不得超过2小时；所述灌装采用全自动灌装机灌装或手工罐装。目前使用的B.GXIII动液体灌装机每小时可以灌装50ml量装的瓶子6000瓶。

进一步地，步骤S11所述灭菌采用水浴常温灭菌或高温高压灭菌；所述水浴常温灭菌具体为，将灌装后液体瓶放入全自动水浴杀菌锅内95℃灭菌50min；所述高温高压灭菌具体为，将灌装后的液体瓶放入卧式高压灭菌锅内，封闭锅门后，当锅内温度上升至108℃，压力表表压为0.05MPa时打开放气阀逐渐排尽高压锅中的冷空气，压力表表压0关闭放气阀再次加温启动灭菌锅灭菌，保证灭菌升温至125℃，灭菌标准：高压锅内温度125℃，压力表指示0.13～0.15MPa，灭菌时间30min。

进一步地，所述冬虫夏草菌种制备工艺：

S1、冬虫夏草平皿母种生产

(1)冬虫夏草平皿母种培养基配方：麸皮粉12.5g，葡萄糖粉10g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁3g，蛋白胨5g，玉米蛋白粉1.5g，维生素B₁2片，琼脂粉10g，蝙蝠蛾幼虫冻干粉2g，纯净水500ml

(2)冬虫夏草平皿培养基的生产流程

Ⅰ.将500ml纯净水放入1000ml的玻璃烧杯中煮沸，准确依次称取各种培养基原料倒入烧杯中，用玻璃棒搅拌均匀使其溶化，然后将液体装入1000ml三角瓶内并用专用棉塞封口外加一层铝箔纸复盖棉塞，放入高压灭菌锅内灭菌，灭菌参数指标为：125℃，0.15MPa，30min灭菌结束后，趁热将三角瓶取出转移至超净工作台内，打开紫外灯和臭氧机，超净工作台的风机风速设定0.7m/s，同时将灭好菌的培养皿也要同时放入工作台内，待培养基冷却至温度50℃时，打开日光灯，用喷火枪对培养皿内外灼烧一遍，快速将灭菌过的培养液倒入，培养皿装入量多少以培养皿的总高度3/5为准；倒完一个培养皿后迅速将上盖扣合上，上盖与培养皿留有一条细缝，便于培养基水汽蒸发出去，待培养基凝固后再将上盖完全扣合紧密，单个平放在台面上，保持超净工作台开启状态，用无菌风吹干残留在上盖的水雾；采用前述方法制作3～5个培养皿放置于35度培养箱中培养2天；

Ⅲ.冬虫夏草培养皿菌种的接种流程

提前将接种针、接种切割刀、接种针放置架、75％酒精壶、标签笔、封口膜、酒精灯、打火机、酒精棉球、冬虫夏草试管母种、空白培养皿置于超净工作台内，打开臭氧消毒并配合启紫外灯照射30分钟；打开日光灯，把接种针灼烧后放在针架上冷却备用；用75％酒精喷洒消毒培养皿外表面倒扣放置；待酒精挥发干净后，拆掉培养皿外圈的封口膜，再次用酒精棉球擦洗密封部位，点燃酒精灯，在酒精灯火焰前方打开培养皿盖子，先用冷却的接种切割刀将经过优化的冬虫夏草试管母种中切取一块2*2*3mm大小的母种块，再用接种针迅速移植于空白培养皿中间部位，要求一次定植到位，不可反复挪动菌种块；用封口膜将新接种的培养皿封包起来，在皿盖正面上写上接种日期、扩繁代数、母种信息；

Ⅲ.冬虫夏草培养皿菌种的培养

接种后培养皿要放入专用培养箱中避光培养，在菌种没有萌发生长前培养温度18～20℃，空间湿度60％～75％；菌种萌发后培养箱温度调至16～18℃；菌种平皿整个培养时间为210～240天；

S2、冬虫夏草液体摇瓶菌种生产工艺

(1)冬虫夏草复合发酵液体摇瓶菌种配方：麸皮超微粉8g、葡萄糖15g磷酸二氢钾3g硫酸镁1.5g、蛋白胨6g、玉米蛋白粉2.5g、羧甲基纤维素钠1g、维生素B₁2片、大豆粉3g、蝙蝠蛾幼虫冻干粉2g、纯净水1000ml、消泡剂0.2g；

(2)冬虫夏草液体摇瓶菌种的生产流程

Ⅰ.将(1)中原料精确称量混合，加入90℃水搅拌均匀，再加凉水溶解成糊状后迅速倒入锅内，煮至3～5分钟后再分装到各个三角瓶内，每瓶分装1200ml，塞上棉塞外加一层铝箔纸移入高压灭菌锅内灭菌；

Ⅱ.灭菌锅在使用前要加足指标用水至水位线，三角瓶放入锅内后要及时封闭锅盖加热，当锅内温度上升至108℃，压力表表压达到0.05MPa时要打开手动放气阀排尽锅内冷空气，而后关闭排气阀继续加温至灭菌指标温度126℃，015MPa，90min；灭菌结束后，压力表表压降至0，排尽锅内余热气体，打开锅盖取出三角瓶放置在超净工作台上，取下摇瓶上包盖的铝箔纸，开启无菌风吹30分钟，使棉塞水分蒸发保持干燥待用接种；

Ⅲ.液体菌种接种前要提前一个小时将灭菌的三角瓶、S1中遮光纸覆盖的冬虫夏草平皿母种、酒精棉球、酒精灯、接种刀、接种针、镊子等操作工具放在超净工作台面上用臭氧和紫外线消毒30min，消毒结束后关闭紫外线灯打开吹风机和照明灯5min准备接种接种时首先用酒精棉球将液体摇瓶，平皿菌种及所有用具擦拭一遍，点燃酒精灯，将接种针，接种刀灼烧一遍冷却备用，液体摇瓶消毒完成后，将待接种摇瓶棉塞旋松处于半开状态，用接种刀沿冬虫夏草平皿菌种底部将菌种切割成4*4*4mm大小菌种块，用接种针依次挑取15块菌种接入摇瓶内，将三角瓶棉塞绕酒精灯火焰缓慢灼烧3～5圈，迅速塞在摇瓶瓶口上再用铝箔纸抱盖最后用标签笔在液体摇瓶上写上菌种信息

Ⅳ.接种完成后，把接种的液体摇瓶移至培养摇床上20℃静止培养24小时，而后再将培养摇床温度设定为17.5～20.5℃，摇床转速设定为150r/min，48小时后摇床转速设定为170r/min，温度设定为15.5～18.5℃，液体摇瓶菌种整个培养周期为15天。

进一步地，所述冬虫夏草原浆冻干粉加工工艺：

S1、把冬虫夏发酵原浆采用卧式螺旋卸料沉淀离心机进行分层离心所得的固形物可用于冻干加工成冬虫夏发酵原浆冻干粉。经过离心冬虫夏草发酵原浆固形物含水量比较低，适合采用SCIENTZ型冻干机进行冻干。

S2、冬虫夏草发酵原浆离心出来的固形物大多数呈团结块状，将其移放在洁净的冻干盘内并用专用的不锈钢叉把块状物分开铺平，为减少冻干后含水量的批内差，要求料层高度高度不可大于3cm，最低不得低于2cm，以免影响冻干效果；

S3、开启冻干机，运行如下曲线：

常温～-50℃，真空度控制为常压，2h，控制度为预冻；

-50℃～-25℃，真空度控制为常压，2h，控制度为预冻；

-25℃～-15℃，真空度控制为常压，2h，控制度为预冻；

-15℃～-5℃，真空度控制为常压，2h，控制度为预冻；

5℃～10℃，真空度控制为50pa，3h，控制度为干燥；

10℃～15℃，真空度控制为50pa，3h，控制度为干燥；

15℃～18℃，真空度控制为50pa，2h，控制度为干燥；

18℃～20℃，真空度控制为常压，2h，控制度为干燥；

S4、冬虫夏草发酵原浆冻干结束后，打开冻干仓门移出冻干盘用不锈钢产将冻干成蜂窝状物取出，再用低温超微粉碎机将其磨成600目的细粉，而后用真空包装机分装成500～2000g包装0～5℃条件下保存。

与现有技术相比，本发明所具有的有益效果为：

本发明提供了一种冬虫夏草发酵工艺，工艺简单，易于实现，培养周期短，得到的冬虫夏草菌丝体活性成分含量高，具有极高的营养价值。本发明在通过对冬虫夏草菌种分离、提纯，并通过复合发酵技术生产出冬虫夏草发酵原浆和冬虫夏草发酵原浆粉。经多次试验分析检测其多项关键指标都超过天然的冬虫夏草成分，冬虫夏草发酵原浆和冬虫夏草发酵原浆粉经部分人群服用后对久咳虚喘、劳嗽咯血、阳瘘遗精、腰膝酸痛、失眠、便秘、贫血、通风等具有很好的效果。本发明所使用菌种由中国科学院微生物研究所提供。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一、冬虫夏草菌种(被毛孢)生产技术

(一)、冬虫夏草平皿母种生产工艺；

1、冬虫夏草平皿母种培养基配方；

麸皮粉12.5g，葡萄糖粉10g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁3g，蛋白胨5g，玉米蛋白粉1.5g，维生素B₁2片，琼脂粉10g，蝙蝠蛾幼虫冻干粉2g，纯净水500ml

2、冬虫夏草平皿培养基的生产流程

A、将500ml纯净水放入1000ml的玻璃烧杯中，然后置于电磁炉上煮沸，准确依次称取各种培养基原料倒入烧杯中，用玻璃棒搅拌均匀使其溶化，然后将液体装入1000ml三角瓶内并用专用棉塞封口外加一层铝箔纸复盖棉塞，防止棉塞受潮，放入中小型高压灭菌锅内灭菌，灭菌参数指标为：125℃，0.15MPa，30min。灭菌结束后，趁热将三角瓶取出转移至超净工作台内，打开紫外灯和臭氧机，超净工作台的风机风速设定0.7m/s，同时将灭好菌的培养皿也要同时放入工作台内，待培养基冷却至温度50℃左右时，打开日光灯，用喷火枪对培养皿内外灼烧一遍，快速将灭菌过的培养液倒入，培养皿装入量多少以培养皿的总高度3/5为准，约35-40mL。倒完一个培养皿后迅速将上盖扣合上，注意留下一条细缝，不能完全扣合紧密，便于培养基水汽蒸发出去，待培养基凝固后再将上盖完全扣合紧密，单个平放在台面上，保持超净工作台开启状态，用无菌风吹干残留在上盖的水雾。取出3～5个培养皿放置于35度培养箱中培养2天，检查无杂菌后方可使用。

B、冬虫夏草培养皿菌种的接种流程

提前接种针、接种切割刀、接种针放置架、75％酒精壶、标签笔、封口膜、酒精灯、打火机、酒精棉球、冬虫夏草试管母种、空白培养皿等置于超净工作台内，打开臭氧消毒并配合启紫外灯照射30分钟。打开日光灯，把接种针灼烧后放在针架上冷却备用；用75％酒精喷洒消毒培养皿外表面倒扣放置。待酒精挥发干净后，拆掉培养皿外圈的封口膜，再次用酒精棉球擦洗密封部位，点燃酒精灯，左手在酒精灯火焰前方打开培养皿盖子，先用冷却的接种切割刀将经过优化的冬虫夏草试管母种中切取一块2*2*3mm大小的母种块，再用接种针迅速移植于空白培养皿中间部位，要求一次定植到位，不可反复挪动菌种块。用封口膜将新接种的培养皿封包起来，在皿盖正面上写上接种日期、扩繁代数、母种信息。

C、冬虫夏草培养皿菌种的培养

接种后培养皿要放入专用培养箱中避光培养，在菌种没有萌发生长前培养温度18～20℃，空间湿度60％～75％，菌种没有萌发生长前时间为15天内。菌种萌发后培养箱温度调至16～18℃。由于冬虫夏草菌种生长周期极为缓慢，一个菌种平皿整个培养时间需要210～240天。

(二)、冬虫夏草液体摇瓶菌种生产工艺

1.冬虫夏草复合发酵液体摇瓶菌种配方

麸皮超微粉8g、葡萄糖15g磷酸二氢钾3g硫酸镁1.5g、蛋白胨6g、玉米蛋白粉2.5g、羧甲基纤维素钠1g、维生素B₁2片、大豆粉3g、蝙蝠蛾幼虫冻干粉2g、纯净水1000ml、消泡剂0.2g.

2、冬虫夏草液体摇瓶菌种的生产流程

A、根据生产数量的需求准备洁净干燥规格2000ml的三角瓶，9*40mm磁力搅拌转子,棉塞，精度0.01g电子天平，电磁炉、铝锅，玻璃棒，专用溶解分装器，铝箔封口纸等各种操作工具。

B、按照生产需求称取足量的水加热至90℃，再把按配方要求精确称量的原料用玻璃棒搅拌均匀后，再加凉水溶解成糊状后迅速倒入锅内，原料倒入锅内煮至3～5分钟后再分装到各个三角瓶内，每瓶分装1200ml，塞上棉塞外加一层铝箔纸移入高压灭菌锅内灭菌。

C、灭菌锅在使用前要加足指标用水至水位线，三角瓶放入锅内后要及时封闭锅盖加热，当锅内温度上升至108℃，压力达到0.05MPa时要打开手动放气阀排尽锅内冷空气，而后关闭排气阀继续加温至灭菌指标温度126℃，015MPa，90min。灭菌结束后必须要是压力指示针降至0℃时，排尽锅内余热气体才可打开锅盖取出三角瓶放置在超净工作台上，取下摇瓶上包盖的铝箔纸，开启无菌风吹30分钟，使棉塞水分蒸发保持干燥待用接种。

D、液体菌种接种前要提前一个小时将灭菌的三角瓶、用遮光纸覆盖的冬虫夏草平皿母种，酒精棉球、酒精灯、接种刀、接种针、镊子等操作工具放在超净工作台面上用臭氧和紫外线消毒30min，消毒结束后关闭紫外线灯打开吹风机和照明灯5min准备接种。接种时首先用酒精棉球将液体摇瓶，平皿菌种及所有用具擦拭一遍，点燃酒精灯，将接种针，接种刀灼烧一遍冷却备用，液体摇瓶消毒完成后，将待接种摇瓶棉塞旋松处于半开状态，用接种刀沿冬虫夏草平皿菌种底部将菌种切割成4*4*4mm大小菌种块，用接种针依次挑取15块菌种接入摇瓶内，将三角瓶棉塞绕酒精灯火焰缓慢灼烧3～5圈，迅速塞在摇瓶瓶口上再用铝箔纸抱盖。最后用标签笔在液体摇瓶上写上菌种信息。

E、接种完成后，把接种的液体摇瓶移至培养摇床上20℃静止培养24小时，而后再将培养摇床温度设定为17.5～20.5℃，摇床转速设定为150r/min，48小时候后摇床转速设定为170r/min,，温度设定为15.5～18.5℃。注意；液体摇瓶放入摇床当天一定要确认磁力搅拌转子无须势晃动，遇到晃动的搅拌转子可将摇瓶一侧垫高，防止转子在内部滚动，导致菌球破碎不成形不便于判断菌种生长质量判断。液体摇瓶菌种整个培养周期为15天。

二、冬虫夏草发酵原浆发酵罐发酵技术

(一)、冬虫夏草发酵原浆发酵原料配方；

蛹虫草超微粉1.6％，黄芪粉0.2％，当归粉0.2％，白芍粉0.13％，熟地粉0.3％，麦冬粉0.4％，枸杞粉0.3％，柏子仁粉0.2％，附子粉0.2％，肉桂粉0.5，鹿角胶粉0.2％，五味子粉0.3％，肉苁蓉粉0.2％。麦麸超微粉0.2％，蛋白胨O.O54％，葡萄糖0.3％，维生素B₁粉O.OO14％，百合粉1.3％，罗汉果粉1.2％，维生素B₆粉0.001％，氨基酸粉0.001％，食品消泡剂0.052％，余量为水；

(三)、发酵罐的使用及复合发酵原浆的生产流程

1、发酵罐类型的选择

由于冬虫夏草复合发酵原浆固形物比例较大，使用的发酵罐一定要选择具有三级空气减排过滤系统和发酵罐底部带有自动搅拌系统，罐体为夹层结构，罐体材质为304不锈钢材质。发酵罐的容积为200L～5000L均可。

2、发酵罐检查准备

在发酵罐使用的前一天，罐内要装入50％洁净水盖上罐帽连接上洁净气管，关闭排气阀，保压至第二天早上观察罐内水面是否有气泡冒出，没有气泡即为“饱和”，有气泡说明罐体有漏气现象，要重新检修罐体各连接部件后方可使用。

3、发酵原料降解处理

由于冬虫夏草复合发酵原浆配方中的部分原材料呈半木质化和角质化状态很难被冬虫夏草菌种分解吸收，在冬虫夏草菌种接入前要先使用植物乳杆菌进行一次短期原料发酵降解处理。首先把经检测的发酵罐加水定容至总罐体的35％，然后关闭灌盖加温至100℃，然后按配方要求精确称量将蛹虫草超微粉，黄芪粉，当归粉，白芍粉，熟地粉，麦冬粉，枸杞粉，柏子仁粉，附子粉，肉桂粉，鹿角胶粉，五味子粉，肉苁蓉粉，麦麸超微粉，百合粉，罗汉果粉用35℃洁净温水搅拌溶解调和至糊状倒入发酵罐内。

A、发酵原料加入发酵罐后开始加温并开动发酵罐底部的自动搅拌系统避免糊状原料粘连在罐底或罐壁上，当罐内温度再次达到100℃时关闭所有排气换气阀门加温至125℃保温127秒即可。而后开始向发酵罐夹层内加冷水循环降温至37℃待用接种。

B、在植物乳杆菌接种前40分钟要用臭氧和紫外线对发酵罐制备室进行消毒杀菌一次，然后在无菌条件下打开罐口将植物乳杆菌液体菌种接入罐内，接种量为罐内物质的0.1％，封闭发酵罐口后，开启发酵罐底部全自动搅拌器，转速调至130r/min，发酵罐上部的通气压力表调至0.06MPa，发酵罐内温保持在37℃，连续发酵72小时，而后逐渐降温至30℃以下短期发酵即结束。发酵原料降解指标；原料颜色为浅褐色，PH3.8-4.2，原料呈分离的糊状，入口感为甜酸味。

4、发酵罐二次填料灭菌

发酵罐内第一批原料经过降解发酵降温后，要打开罐盖再加入纯净水定容至总罐体的80％，加温至100℃后，再把剩余的蛋白胨，葡萄糖，维生素B₁，维生素B₆，氨基酸粉，食品消泡剂用开水溶化后加入罐内，液体的标准酸碱度为PH7，如果酸碱度偏低可用食用碱面进行调节，最后搽干净罐口周围料垢封紧罐盖开始加温灭菌。当罐内温度上升至108℃，温度压力达到0.05MPa时打开放气阀逐渐排尽发酵罐中的冷空气，压力表指示针复回至0，关闭放气阀再次加温启动灭菌，注意调节减压阀避免罐体急剧受热造成内外压差过大，使罐体变形。定时观察记录一次灭菌压力、温度，确保发酵罐灭菌运行正常。灭菌标准；罐内温度125℃，压力表指示0.13--0.15MPa，灭菌时间120min。灭菌结束后将罐盖顶部的总排气阀打开1/3让发酵罐内压力缓慢降低，罐内温度降至80℃时开启发酵罐夹层低温循环水逐渐降至18--20℃待用接种。

5.发酵罐液体菌种的筛选与处理

A、液体摇瓶菌种的筛选

菌球形状呈球元型，大小均匀(菌球直径2～4㎜)，没有超大菌球，菌球毛刺明显活力强，菌液浓度适中(固形物1.8％)，菌液颜色呈黄白色，PH5.0-6.0。

B、液体摇瓶菌种接种的前处理

用75％酒精棉球擦拭消毒摇瓶菌种瓶外表面后移入磁力搅拌器中心位置，开启时控开关，搅拌破碎至菌球分裂大小均匀，菌种搅拌破碎完成后，取下覆盖在菌种瓶口棉塞的铝箔纸用丁烷火枪轻微灼烧瓶口杀菌。

6、发酵罐接种

A、发酵罐接种前，要开启臭氧机和紫外线灯对室内的所有接种用具、菌种和罐体进行全面消毒杀菌30min。

B、所有接种人员要穿上专用的接种服，带上口罩，使用酒精枪全身喷雾消毒，在关闭紫外线灯和臭氧机10min后，打开日光灯接种人员才可进入发酵罐操作室。

C、接种人员戴好防火手套将75％酒精喷雾在发酵罐上半部进行消毒，再用丁烷火枪把罐顶的接种口灼烧两圈，然后点燃酒精火焰圈套放在接种口处，把进气压力调低至1kg打开接种口上的罐帽，右手持大长镊子将棉塞夹取下来，对准发酵罐的接种口在火焰圈覆盖下，将液体摇瓶菌种快速倒入罐内，注意不能将菌液倒洒在罐口，接种结束后迅速将罐帽快速扣合在罐口上封紧，关闭排气管使罐内压力恢复在0.05MPa，透过视镜观察罐内有气泡出现后，确认饱和打开排气管进行通气培养。

7、冬虫夏草复合发酵菌原浆的生长培养

发酵罐接入菌种前96个小时罐内温度控制在20℃±0.5℃，罐压控制在0.04MPa。96小时后再将罐内温度下调至18℃±0.5℃，罐压控制在0.06MPa，罐底自动搅拌器转速设定为130r/min，整个培养周期为15天。发酵结束后取样检测菌球量≥0.6g/ml，PH值5.2-5.5。

三、冬虫夏草复合发酵原浆加工包装

(一)、冬虫夏草发酵原浆灌装前的处理

1、冬虫夏草发酵原浆灭菌处理

A、冬虫夏草复合发酵原浆发酵结束后，要关闭通气系统打开罐盖，使用专用工具刮掉粘在灌盖及罐体内壁上的菌球粘连层块混合于液体中，再用食用碱面将液体酸碱度调至PH6.5。然后封闭罐盖开启总排气阀开始向发酵罐夹层内通热气加温，在加温的同时也要开动罐底部的自动搅拌器转速设定为80r/min，当罐内温度上升至100℃时保温30min既达到灭菌效果。而后将罐盖顶部的总排气阀打开1/3让发酵罐内压力缓慢降低，罐内温度降至80℃时开启发酵罐夹层低温循环水逐渐降至15～20℃。

B、由于冬虫夏草发酵原浆中菌球生长很不均匀差异很大对下一步的灌装流速影响很大，灭菌后的发酵原浆要使用低温LTJM型胶体磨反复磨碎，胶体磨转子转速2940r/min，反复研磨4次使原浆细度达到600目。

(二)、冬虫夏草发酵原浆灌装技术流程

1、冬虫夏草发酵原浆调和均质处理

冬虫夏草发酵原浆味道近似于天然冬虫夏草的味道，入口后有种轻微辛苦味，灌装前要添加3--5％的纯蜂蜜调和处理。禁止添加果糖、蔗糖等糖类以免高温后造成液体酸化。

冬虫夏草发酵原浆固形物比较高，为防止灌装后出现固液分层现象在灌装前进行一次均质处理，均质的目的是把原浆中的悬浮菌球皮状物进一步破碎并稳定于液体中保持均匀度。均质前要清洗干净均质机的内外机体不可有之前生产遗留的水果、蔬菜等酸性物质。离心时把离心机的转速调至13000r/min，通料量1.2～1.6T\h,均质后的菌球质体的细度在0.0015～0.002mm之间，浑浊度、流速度均匀即可。

2、冬虫夏草发酵原浆浓缩与灌装

A、冬虫夏草原浆经浓缩后可以抑制保藏期的酸腐性微生物污染，还可以保持原浆原有口感和营养价值。冬虫夏草原浆的浓缩温度要保持在35～40℃，真空度为90kPa，当原浆中可溶性固形物达到40～45％即可浓缩完成。

B、冬虫夏草发酵原浆包装容器宜选用深褐色的玻璃瓶，抗光照氧化，便于高温杀菌，玻璃瓶的规格为50～200ml，罐装前所有瓶子和瓶盖要用洗瓶机清洗干净备用烘干。

C、浓缩后的冬虫夏草原浆要通过换热器输送到快速杀菌机里，再经过121℃，127秒快速杀菌后才能用于灌装，原浆灌装的温度不能低于90℃，经过杀菌热处理的原浆要迅速灌装，停待时间不得超过2小时。液体数量较大的要使用全自动灌装机灌装，液体数量较小的可进行手工罐装。目前使用的B GXIII动液体灌装机每小时可以灌装50ml量装的瓶子6000瓶。

3灭菌、

由于冬虫夏草发酵原浆营养比较丰富，液体浓度高，不利于长期长期存放。为便于冬虫夏草发酵原浆的长期保存，灌装后的液体瓶要进行高温灭菌处理，目前灭菌方法有两种；一是水浴常温灭菌，将灌装后液体瓶放入全自动水浴杀菌锅内95℃灭菌50min。二是高温高压灭菌，将灌装后的液体瓶放入卧式高压灭菌锅内，封闭锅门后，当锅内温度上升至108℃，温度压力达到0.05MPa时打开放气阀逐渐排尽高压锅中的冷空气，压力表指示针复回至0.关闭放气阀再次加温启动灭菌锅灭菌，保证灭菌升温至125℃，灭菌标准；高压锅内温度125℃，压力表指示0.13--0.15MPa，灭菌时间30min。灭菌后冬虫夏草发酵原浆瓶要经烘干机烘干瓶外壁的表面水分后即为成品。

4、保藏：冬虫夏草发酵原浆成品要放在0--4℃的低温库中保存，保质期为12个月。

四、冬虫夏草发酵原浆冻干粉加工技术

1、把冬虫夏发酵原浆采用卧式螺旋卸料沉淀离心机进行分层离心所得的固形物可用于冻干加工成冬虫夏发酵原浆冻干粉。经过离心冬虫夏草发酵原浆固形物含水量比较低，适合采用SCIENTZ型冻干机进行冻干。

2、冬虫夏草发酵原浆离心出来的固形物大多数呈团结块状，将其移放在洁净的冻干盘内并用专用的不锈钢叉把块状物分开铺平，为减少冻干后含水量的批内差，要求料层高度高度不可大于3cm，最低不得低于2cm，以免影响冻干效果；

3、开启冻干机，运行如下曲线：

冻干曲线

4、冬虫夏草发酵原浆冻干结束后，打开冻干仓门移出冻干盘用不锈钢产将冻干成蜂窝状物取出，再用低温超微粉碎机将其磨成600目的细粉，而后用真空包装机分装成500～2000g包装0～5℃条件下保存。

本实施例提供的冬虫夏草发酵原浆分析检测结果如下表：

上面仅对本发明的较佳实施例作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施例，在本领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化，各种变化均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种冬虫夏草发酵工艺，其特征在于，包括以下步骤：

S1、冬虫夏草发酵原浆发酵原料配方；

蛹虫草超微粉1.6%，黄芪粉0.2%，当归粉0.2%，白芍粉0.13%，熟地粉0.3%，麦冬粉0.4%，枸杞粉0.3%，柏子仁粉0.2%，附子粉0.2%，肉桂粉0.5%，鹿角胶粉0.2%，五味子粉0.3%，肉苁蓉粉0.2%，麦麸超微粉0.2%，蛋白胨0.054%，葡萄糖0.3%，维生素B₁粉0.0014%，百合粉1.3%，罗汉果粉1.2%，维生素B₆粉0.001%，氨基酸粉0.001%，食品消泡剂0.052%，余量为水；

S2、发酵罐的选择：选择具有三级空气减排过滤系统和底部带有自动搅拌系统的发酵罐，罐体为夹层结构；

S3、发酵原料降解处理：发酵罐内加水定容至总罐体的35%，关闭灌盖加温至100℃，按S1中配方精确称量蛹虫草超微粉，黄芪粉，当归粉，白芍粉，熟地粉，麦冬粉，枸杞粉，柏子仁粉，附子粉，肉桂粉，鹿角胶粉，五味子粉，肉苁蓉粉，麦麸超微粉，百合粉，罗汉果粉混合，用35℃无菌温水搅拌溶解调和至糊状倒入发酵罐内，开始加温并开动发酵罐底部的自动搅拌系统避免糊状原料粘连在罐底或罐壁上，当罐内温度再次达到100℃时关闭所有排气阀门、换气阀门，加温至125℃保温127秒后，向发酵罐夹层内加冷水循环，罐内降温至37℃；在无菌条件下打开罐口将植物乳杆菌液体菌种接入罐内，接种量为0.1%，封闭发酵罐口后，开启发酵罐底部全自动搅拌器，转速调至130r/min，发酵罐上部的通气压力表调至0.06MPa，发酵罐内温保持在37℃，连续发酵72小时后，逐渐降温至30℃；

S4、发酵罐二次填料灭菌：发酵罐内加入纯净水定容至总罐体的80%，加温至100℃后，按S1中配方精确称量蛋白胨，葡萄糖，维生素B₁，维生素B₆，氨基酸粉，食品消泡剂混合，加开水搅拌溶解后加入发酵罐内，将液体酸碱度调至7，将罐口周围料垢清理后封紧罐盖开始加温灭菌，当罐内温度上升至108℃，压力表表压为0.05MPa时打开放气阀逐渐排尽发酵罐中的冷空气，压力表表压为0时关闭放气阀，调节罐内温度125℃，压力表表压为0.13~0.15MPa，灭菌时间120min；灭菌结束后将罐盖顶部的总排气阀打开1/3让发酵罐内压力缓慢降低，罐内温度降至80℃时开启发酵罐夹层低温循环水逐渐降至18~20℃待用接种；

S5、发酵罐接种：将冬虫夏草菌种快速倒入发酵罐内进行接种后迅速密封罐盖，关闭排气管使罐内压力恢复至0.05MPa，观察罐内有气泡出现后，确认饱和打开排气管进行通气培养；

S6、冬虫夏草复合发酵菌原浆的生长培养：接入冬虫夏草菌种前发酵罐罐内温度控制在20℃±0.5℃，罐内表压控制在0.04MPa，保温保压96个小时；96小时后再将罐内温度下调至18℃±0.5℃，罐内表压控制在0.06MPa，罐底自动搅拌器转速设定为130r/min，接入菌种，培养15天；

S7、冬虫夏草发酵原浆灭菌处理：冬虫夏草复合发酵原浆发酵结束后，关闭通气系统，打开罐盖，使用专用工具刮掉粘在灌盖及罐体内壁上的菌球粘连层块混合于液体中，将液体酸碱度调至6.5；封闭罐盖，开启总排气阀开始向发酵罐夹层内通热气加温，在加温的同时也要开动罐底部的自动搅拌器转速设定为80r/min，当罐内温度上升至100℃时保温30min进行灭菌；将罐盖顶部的总排气阀打开1/3让发酵罐内压力缓慢降低，罐内温度降至80℃时开启发酵罐夹层低温循环水逐渐降至15~20℃；

S8、冬虫夏草发酵原浆调和均质处理：向发酵罐内添加3~5%的纯蜂蜜进行调和处理；把离心机的转速调至13000r/min，通料量1.2~1.6T\h进行均质，使得冬虫夏草发酵原浆菌球质体的细度在0.0015~0.002mm之间，浑浊度、流速度均匀；

S9、冬虫夏草发酵原浆浓缩：将冬虫夏草发酵原浆的浓缩温度要保持在35~40℃，真空度为90kPa，当原浆中可溶性固形物达到40%~45%，浓缩完成；

S10、冬虫夏草发酵原浆灌装：浓缩后的冬虫夏草发酵原浆要通过换热器输送到快速杀菌机里，再经过121℃保温127秒快速杀菌后进行灌装至瓶中；

2.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草发酵工艺，其特征在于：步骤S3所述植物乳杆菌接种前40分钟要用臭氧和紫外线对发酵罐制备室进行消毒杀菌。

3.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草发酵工艺，其特征在于：步骤S4所述液体酸碱度通过用碱调节。

4.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草发酵工艺，其特征在于：步骤S7所述液体酸碱度通过食用碱调节。

5.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草发酵工艺，其特征在于：步骤S10所述原浆灌装的温度不能低于90℃，经过杀菌热处理的原浆要迅速灌装，停待时间不得超过2小时；所述灌装采用全自动灌装机灌装或手工罐装。

6.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草发酵工艺，其特征在于：步骤S11所述灭菌采用水浴常温灭菌或高温高压灭菌；所述水浴常温灭菌具体为，将灌装后液体瓶放入全自动水浴杀菌锅内95℃灭菌50min；所述高温高压灭菌具体为，将灌装后的液体瓶放入卧式高压灭菌锅内，封闭锅门后，当锅内温度上升至108℃，压力表表压为0.05MPa时打开放气阀逐渐排尽高压锅中的冷空气，压力表表压0关闭放气阀再次加温启动灭菌锅灭菌，保证灭菌升温至125℃，灭菌标准：高压锅内温度125℃，压力表指示0.13~0.15MPa，灭菌时间30min。

7.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草发酵工艺，其特征在于，所述冬虫夏草菌种制备工艺：

S1、冬虫夏草平皿母种生产

（1）冬虫夏草平皿母种培养基配方：麸皮粉12.5g，葡萄糖粉10g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁3g，蛋白胨5g，玉米蛋白粉1.5g，维生素B₁2片，琼脂粉10g，蝙蝠蛾幼虫冻干粉2g，纯净水500ml；

（2）冬虫夏草平皿培养基的生产流程

Ⅰ.将500ml纯净水放入1000ml的玻璃烧杯中煮沸，准确依次称取各种培养基原料倒入烧杯中，用玻璃棒搅拌均匀使其溶化，然后将液体装入1000ml三角瓶内并用专用棉塞封口外加一层铝箔纸复盖棉塞，放入高压灭菌锅内灭菌，灭菌参数指标为：125℃，0.15MPa，30min灭菌结束后，趁热将三角瓶取出转移至超净工作台内，打开紫外灯和臭氧机，超净工作台的风机风速设定0.7m/s，同时将灭好菌的培养皿也要同时放入工作台内，待培养基冷却至温度50℃时，打开日光灯，用喷火枪对培养皿内外灼烧一遍，快速将灭菌过的培养液倒入，培养皿装入量多少以培养皿的总高度3/5为准；倒完一个培养皿后迅速将上盖扣合上，上盖与培养皿留有一条细缝，便于培养基水汽蒸发出去，待培养基凝固后再将上盖完全扣合紧密，单个平放在台面上，保持超净工作台开启状态，用无菌风吹干残留在上盖的水雾；采用前述方法制作3~5个培养皿放置于35度培养箱中培养2天；

Ⅱ.冬虫夏草培养皿菌种的接种流程

提前将接种针、接种切割刀、接种针放置架、75%酒精壶、标签笔、封口膜、酒精灯、打火机、酒精棉球、冬虫夏草试管母种、空白培养皿置于超净工作台内，打开臭氧消毒并配合紫外灯照射30分钟；打开日光灯，把接种针灼烧后放在针架上冷却备用；用75%酒精喷洒消毒培养皿外表面倒扣放置；待酒精挥发干净后，拆掉培养皿外圈的封口膜，再次用酒精棉球擦洗密封部位，点燃酒精灯，在酒精灯火焰前方打开培养皿盖子，先用冷却的接种切割刀将经过优化的冬虫夏草试管母种中切取一块2*2*3mm大小的母种块，再用接种针迅速移植于空白培养皿中间部位，要求一次定植到位，不可反复挪动菌种块；用封口膜将新接种的培养皿封包起来，在皿盖正面上写上接种日期、扩繁代数、母种信息；

Ⅲ.冬虫夏草培养皿菌种的培养

接种后培养皿要放入专用培养箱中避光培养，在菌种没有萌发生长前培养温度18~20℃，空间湿度60%~75%；菌种萌发后培养箱温度调至16~18℃；菌种平皿整个培养时间为210~240天；

S2、冬虫夏草液体摇瓶菌种生产工艺

（1）冬虫夏草复合发酵液体摇瓶菌种配方：麸皮超微粉8g、葡萄糖15g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、蛋白胨6g、玉米蛋白粉2.5g、羧甲基纤维素钠1g、维生素B₁ 2片、大豆粉3g、蝙蝠蛾幼虫冻干粉2g、纯净水1000ml、消泡剂0.2g；

（2）冬虫夏草液体摇瓶菌种的生产流程

Ⅰ.将S2的（1）中原料精确称量混合，加入90℃水搅拌均匀，再加凉水溶解成糊状后迅速倒入锅内，煮至3~5分钟后再分装到各个三角瓶内，每瓶分装1200ml，塞上棉塞外加一层铝箔纸移入高压灭菌锅内灭菌；

Ⅲ.液体菌种接种前要提前一个小时将灭菌的三角瓶、S1中遮光纸覆盖的冬虫夏草平皿母种、酒精棉球、酒精灯、接种刀、接种针、镊子操作工具放在超净工作台面上用臭氧和紫外线消毒30min，消毒结束后关闭紫外线灯，打开吹风机和照明灯5min，准备接种接种时首先用酒精棉球将液体摇瓶，平皿菌种及所有用具擦拭一遍，点燃酒精灯，将接种针，接种刀灼烧一遍冷却备用，液体摇瓶消毒完成后，将待接种摇瓶棉塞旋松处于半开状态，用接种刀沿冬虫夏草平皿菌种底部将菌种切割成4*4*4mm大小菌种块，用接种针依次挑取15块菌种接入摇瓶内，将三角瓶棉塞绕酒精灯火焰缓慢灼烧3~5圈，迅速塞在摇瓶瓶口上再用铝箔纸抱盖最后用标签笔在液体摇瓶上写上菌种信息；

Ⅳ.接种完成后，把接种的液体摇瓶移至培养摇床上20℃静止培养24小时，而后再将培养摇床温度设定为17.5~20.5℃，摇床转速设定为150r/min，48小时后摇床转速设定为170r/min，温度设定为15.5~18.5℃，液体摇瓶菌种整个培养周期为15天。

8.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草发酵工艺，其特征在于，所述冬虫夏草发酵原浆的冻干粉加工工艺：

S1、把冬虫夏草发酵原浆采用卧式螺旋卸料沉淀离心机进行分层离心得到固形物；

S2、将冬虫夏草发酵原浆离心出来的固形物移放在洁净的冻干盘内并用专用的不锈钢叉把块状物分开铺平，要求料层高度不大于3cm，最低不低于2cm；

S3、开启冻干机，运行如下曲线：

常温~ -50℃，真空度控制为常压，2h，控制度为预冻；

-50℃~ -25℃，真空度控制为常压，2h，控制度为预冻；

-25℃~ -15℃，真空度控制为常压，2h，控制度为预冻；

-15℃~ -5℃，真空度控制为常压，2h，控制度为预冻；

5℃~ 10℃，真空度控制为50pa，3h，控制度为干燥；

10℃~ 15℃，真空度控制为50pa，3h，控制度为干燥；

15℃~ 18℃，真空度控制为50pa，2h，控制度为干燥；

18℃~ 20℃，真空度控制为常压，2h，控制度为干燥；

S4、冬虫夏草发酵原浆冻干结束后，打开冻干仓门移出冻干盘用不锈钢铲将冻干成蜂窝状物取出，再用低温超微粉碎机将其磨成600目的细粉制得冬虫夏草发酵原浆冻干粉，而后用真空包装机分装成500~2000g包装0~5℃条件下保存。