CN112469415A - 用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及化学式1的化合物用于治疗、减轻或预防非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和/或肝纤维化的医学用途。

Description

用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物

技术领域

本公开涉及用于治疗或预防非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物。本公开还涉及用于治疗或预防肝纤维化的药物组合物。

背景技术

非酒精性脂肪性肝炎的全球患病率达到2至4％(美国为3至5％)。与单纯性脂肪性肝炎不同，此种非酒精性脂肪性肝炎示出病理性发现诸如气球样变性、细胞死亡和炎症浸润，且在一些情况下，可示出纤维化诸如胶原积聚。众所周知，单纯性脂肪变性示出了缓慢的组织学进展，而非酒精性脂肪性肝炎示出了较快的组织学进展并可发展为肝硬化。被发现患有脂肪肝的人中约5至10％被证明还患有脂肪性肝炎(Metabolism Clinical andExperimental 65(2016)1038-1048)。

目前，没有治疗此种脂肪性肝炎的商业上可用的疗法，并且由于不存在疗法，使用了其他代谢综合征疗法，诸如腹部肥胖、高脂血症、糖尿病例如胰岛素抵抗改善药物，抗氧化剂(例如维生素C、E)，血脂异常药物，肝保护药物等，但这些不被认为是非酒精性脂肪性肝炎的直接疗法。

同时，由以下化学式1表示的2-((R)-4-(2-氟-4-(甲基磺酰基)苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)-N-((1R,2s,3S,5S,7S)-5-羟基金刚烷-2-基)嘧啶-4-甲酰胺(在下文中，缩写为‘嘧啶-4-甲酰胺’)是包括在PCT公开号WO2011-139107中公开的式中的化合物。

[化学式1]

化学式1的化合物是11β-羟类固醇脱氢酶1型(11β-HSD1)的抑制剂，其已被开发为2型糖尿病的治疗剂。然而，与其他11β-HSD1抑制剂一样，由于单次给药和与二甲双胍(糖尿病药物)联合给药均未示出足够的疗效，因此其开发被中断。

发明内容

技术问题

因此，本发明要解决的问题是提供可用于治疗、减轻或预防非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物。

此外，本发明要解决的问题是提供可用于治疗、减轻或预防肝纤维化的药物组合物。

技术方案

为了解决上述问题，本公开提供了用于治疗、减轻或预防非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物，其包括化学式1的嘧啶-4-甲酰胺化合物作为活性成分。

[化学式1]

本公开还提供了用于减轻、预防或治疗伴随肝纤维化的非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物，其包括化学式1的化合物作为活性成分。

本公开还提供了用于减轻、预防或治疗肝纤维化的药物组合物，其包括化学式1的化合物作为活性成分。

本公开还提供了用于减轻、治疗或预防非酒精性脂肪性肝炎(优选伴随肝纤维化)和/或肝纤维化的方法，其包括向需要治疗、减轻或预防非酒精性脂肪性肝炎和/或肝纤维化的受试者给药治疗或预防有效量的化学式1的化合物。

即，本公开提供了化学式1的化合物用于治疗、减轻或预防非酒精性脂肪性肝炎(优选伴随肝纤维化的非酒精性脂肪性肝炎)和/或肝纤维化的医学用途。

本发明诸位发明人通过以下完成了本发明：在对小鼠口服给药后2小时测量化学式1的化合物的组织浓度时，确认肝组织的浓度高于血浆浓度，并且然后还确认了在非酒精性脂肪性肝炎动物模型中口服给药后的疗效(预防和治疗)。

本发明的化学式1的化合物降低了肝组织的脂质含量，具有治疗肝组织炎症的作用，并且具有抑制肝组织纤维化的作用，因此可以有用地用于减轻、预防和治疗非酒精性脂肪性肝炎。

如本文所用，术语“预防”包括预防患者中非酒精性脂肪性肝炎或肝纤维化的复发、扩散或发作。

如本文所用，术语“治疗”包括根除、去除、调节或控制非酒精性脂肪性肝炎或肝纤维化；并最小化或延迟非酒精性脂肪性肝炎或肝纤维化的扩散。

化学式1的化合物可以通过PCT公开号WO2011-139107中公开的方法制备。

如本文所用，短语“该公开/本公开的化合物”包括化学式1的化合物或一种或多种药学上可接受的盐，以及其笼合物、水合物、溶剂化物或多晶型物。

如本文所用，术语“多晶型物”是指本公开的化合物或其络合物的固体结晶形式。同一化合物的不同多晶型物可展现出不同的物理、化学和/或光谱特性。不同的物理特性包括但不限于稳定性(例如，对于热或光)、可压缩性和密度(在制剂和产品制造中是重要的)以及溶出速率(这可影响生物利用度)。稳定性的差异可能起因于以下的变化：化学反应性(例如，差异氧化，使得剂型在由一种多晶型物构成时的变色更快于在由另一种多晶型物构成时的变色)或机械特征(例如，片剂当储存时崩解，因为动力学上有利的多晶型物转化为热力学上更稳定的多晶型物)或两者(例如，一种多晶型物的片剂在高湿度下更容易分解)。多晶型物的不同物理特性可影响其加工。例如，由于例如其颗粒的形状或尺寸分布，一种多晶型物可能比另一种更可能形成溶剂化物，或者可能更难于把杂质过滤或洗涤掉。

如本文所用，术语“溶剂化物”意指根据本公开的化合物或其盐，其进一步包括化学计量或非化学计量的量的通过非共价分子间力结合的溶剂。优选的溶剂是挥发性的、无毒的并且可接受以痕量向人类给药。

如本文所用，术语“水合物”意指根据本公开的化合物或其盐，其进一步包括化学计量或非化学计量的量的通过非共价分子间力结合的水。

如本文所用，术语“笼合物”意指呈晶格形式的化合物或其盐，其包含具有捕获在其中的客体分子(例如，溶剂或水)的空间(例如，通道)。

如果任何化合物(前药)在体内降解后产生本公开的化合物或其盐，则此种化合物包括在本公开中。如本文所用并且除非另有说明，否则术语“前药”意指可以在生物学条件下(体外或体内)水解、氧化或以其他方式反应以提供活性化合物，特别是本公开的化合物的化合物。前药的实例包括但不限于化合物的代谢产物，其包括可生物水解的部分，诸如可生物水解的酰胺、可生物水解的酯、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酰脲和可生物水解的磷酸酯类似物。优选地，具有羧基官能团的化合物的前药是羧酸的低级烷基酯。通过酯化分子上存在的任何羧酸部分方便地形成羧酸酯。前药通常可以使用众所周知的方法来制备，诸如由《伯格的药物化学和药物发现(Burger's MedicinalChemistry and Drug Discovery)》第6版(Donald J.Abraham编辑，2001年，威利出版社(Wiley))和《前药的设计与应用(Design and Application of Prodrugs)》(H.Bundgaard编辑，1985年，哈伍德学术出版社(Harwood Academic Publishers Gmfh))描述的那些。

本公开的化合物通常以治疗有效量给药。

本公开的化合物可以通过任何合适的途径以适合于此途径的药物组合物的形式并且以对于预期治疗有效的剂量来给药。有效剂量通常以单剂量或分剂量在约0.01至约50mg/kg体重/天，优选约0.05至约20mg/kg/天的范围内。根据年龄、种类以及所治疗的疾病或病症，低于该范围下限的剂量水平可能是合适的。在其他情况下，可以使用甚至更大的剂量而无有害副作用。较大剂量也可以分为几个较小剂量，以便全天给药。用于确定合适剂量的方法是本公开所属领域中众所周知的。例如，可以使用《雷明顿：药学的科学与实践(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)》，马克出版有限公司(MackPublishing Co.)，第20版，2000年。

在另一种实施方式中，提供了药物组合物，其包括化学式1的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或添加剂。

术语“药学上可接受的”意指适合用于药物制剂中，通常被认为对于此种用途是安全的，由国家政府监管机构正式批准用于此种用途，或在韩国或美国药典中列出以用于人类。

为了治疗上述提及的疾病或病症，可按如下给药本文所述的化合物或其药学上可接受的盐：

口服给药

本公开的化合物可以口服给药，包括通过吞咽给药，使得该化合物进入胃肠道，或直接从口吸收到血流中(例如，口含或舌下给药)。

用于口服给药的合适的组合物包括固体、液体、凝胶或粉末制剂，并具有剂型诸如片剂、锭剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂。

用于口服给药的组合物可以被配制成立即释放或调节释放，包括延迟释放或缓释，任选地具有肠溶包衣。

液体制剂可以包括溶液、糖浆剂和混悬剂，其可以用于软胶囊或硬胶囊中。此类制剂可以包括药学上可接受的载体，例如水、乙醇、聚乙二醇、纤维素或油。该制剂还可包括一种或多种乳化剂和/或助悬剂。

在片剂剂型中，活性成分的存在量可以为剂型的按重量计约0.05％至约95％、更典型地按重量计约2％至约50％。此外，片剂可包含崩解剂，其占剂型的按重量计约0.5％至约35％、更典型地约2％至约25％。崩解剂的实例包括但不限于乳糖、淀粉、羧基乙酸淀粉钠、交聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、麦芽糖糊精或其混合物。

用于片剂的合适的润滑剂可以以按重量计约0.1％至约5％的量存在，并且包括但不限于滑石、二氧化硅、硬脂酸、硬脂酸钙、硬脂酸锌或硬脂酸镁、硬脂酰富马酸钠等。

用于片剂的合适的粘合剂包括但不限于明胶、聚乙二醇、糖、树胶、淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等。用于片剂的合适的稀释剂包括但不限于甘露醇、木糖醇、乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、微晶纤维素和淀粉。

用于片剂的合适的增溶剂可以以按重量计约0.1％至约3％的量存在，并且包括但不限于聚山梨酯、月桂基硫酸钠、十二烷基硫酸钠、碳酸亚丙酯、二甘醇单乙醚、二甲基异山梨酯、聚氧乙烯乙醇(天然或氢化)蓖麻油(polyoxyethylene glycolic(natural orhydrogenated)castor oil)、HCOR^TM(Nikkol)、油烯酯、Gelucire^TM、辛酸/辛酸单/二甘油酯、山梨聚糖脂肪酸酯和Solutol HS^TM。

肠胃外给药

本公开的化合物可以直接给药到血流、肌肉或内脏器官中。肠胃外给药的合适方式包括静脉、肌肉内、皮下动脉内、腹腔内、鞘内、颅内等。用于肠胃外给药的合适装置包括注射器(包括有针和无针注射器)和输注方法。

用于肠胃外给药的组合物可以被配制成立即释放或调节释放，包括延迟释放或缓释。

大多数肠胃外制剂是含有赋形剂包括盐、缓冲剂和等渗剂的水性溶液。

肠胃外制剂也可以以脱水形式(例如，通过冻干)或作为无菌非水性溶液制备。这些制剂可以与合适的媒介物诸如无菌水一起使用。溶解性增强剂也可以用于制备肠胃外溶液。

局部给药

本公开的化合物可以局部给药于皮肤或透皮给药。用于该局部给药的制剂可以包括洗剂、溶液、乳膏、凝胶、水凝胶、软膏剂、泡沫、植入物、贴剂等。用于局部给药制剂的药学上可接受的载体可以包括水、醇、矿物油、甘油、聚乙二醇等。局部给药也可以通过电穿孔、离子导入技术、超声波导入法等来进行。

用于局部给药的组合物可以被配制成立即释放或调节释放，包括延迟释放或缓释。

用于制备药物组合物的参考文献

制备用于治疗或预防疾病或病症的药物组合物的方法是本公开所属领域中众所周知的。例如，基于《药物赋形剂手册(Handbook of Pharmaceutical Excipients)》(第7版)、《雷明顿：药学的科学与实践(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)》(第20版)、《制药技术百科全书(Encyclopedia of Pharmaceutical Technology)》(第3版)或《缓释和控释药物给药系统(Sustained and Controlled Release Drug DeliverySystems)》(1978)，可以选择药学上可接受的赋形剂、载体、添加剂等，并然后将其与本公开的化合物混合用于制造药物组合物。

有益效果

本公开提供了可用于减轻、治疗或预防非酒精性脂肪性肝炎或肝纤维化的药物组合物，其包括化学式1的化合物作为活性成分。即，本公开提供了化学式1的化合物的医学用途，其可用于减轻、治疗或预防非酒精性脂肪性肝炎或肝纤维化。

附图说明

在以下图中，数据作为平均值±标准偏差呈现(G1：正常对照，G2：媒介物对照，G3：阳性对照10mg/kg/天，G4：测试化合物10mg/kg/天，G5：测试化合物30mg/kg/天)。

图1示出了在非酒精性脂肪性肝炎疾病模型中给药6周后的血液生化分析结果。

***/**：与G1相比，分别在p<0.001/p<0.01的水平下存在显著差异。

###/##/#：与G2相比，分别在p<0.001/p<0.01/p<0.05的水平下存在显著差异。

$$：与G3相比，在p<0.01的水平下存在显著差异。

图2是测量LDH(乳酸脱氢酶)的结果。

*：与G1相比，在p<0.05的水平下存在显著差异。

图3分别示出了肝的绝对重量和相对重量。

***/*：与G1相比，分别在p<0.001/p<0.05的水平下存在显著差异。

##/#：与G2相比，分别在p<0.01/p<0.05的水平下存在显著差异。

$：与G3相比，在p<0.05的水平下存在显著差异。

图4是使用ELISA测量肝组织中总胆固醇和甘油三酯的结果。可以看出，在测试化合物给药组中，TCHO和TG以剂量依赖性方式降低。

***：与G1相比，在p<0.05的水平下存在显著差异。

###/##/#：与G2相比，分别在p<0.001/p<0.01/p<0.05的水平下存在显著差异。

图5是组织病理学测试结果。

***/**/*：与G1相比，分别在p<0.001/p<0.01/p<0.05的水平下存在显著差异。

###/##/#：与G2相比，分别在p<0.001/p<0.01/p<0.05的水平下存在显著差异。

图6是在测试模型中分析肝细胞中甘油三酯以评估本发明化合物的预防效果的结果。

*：与G1相比，在p<0.05的水平下存在显著差异。

**：与G2相比，在p<0.05的水平下存在显著差异。

具体实施方式

在下文中，用实施例相当详细地描述本公开，以帮助本领域技术人员理解本公开。然而，下面的实施例以说明的方式提供，并非旨在限制本发明的范围。显而易见的是，在不脱离本发明的精神和范围或不牺牲其所有实质优点的情况下，可以进行各种改变。

实施例1.非酒精性脂肪性肝炎治疗模型中的疾病诱导和测试化合物给药

使用了MCD模型，其是脂肪性肝炎的动物模型。向C57BL/6小鼠供应MCD(甲硫氨酸-胆碱缺乏)饮食5天，然后正常饮食2天。以这种方式，持续10周，交替供应MCD饮食和正常饮食。在驯化期(蓝色)、定量给料和观察期(红色)期间，使用尾标志识别动物。在繁殖箱上附有按颜色区分的个体识别卡，并在繁殖室的入口附有动物室使用记录。

在驯化期期间，进行了血液生化测试和体重测量。小鼠被随机分配，使得根据排名的ALT和体重水平将各组的平均值尽可能均匀地分配。[正常饲料组(G1)中10只动物，MCD饮食组(G2-G5)中40只动物]

评估了当对用MCD饮食在10周内诱导的非酒精性脂肪性肝炎C57BL/6小鼠模型重复给药测试化合物6周后出现的改善效果。每天一次给药测试化合物，持续6周。使用奥贝胆酸(obeticholic acid，下文中称为OCA)作为阳性对照物，其目前正在以非酒精性脂肪性肝炎作为指示进行3期临床试验。

在对照化合物(奥贝胆酸，10mg/kg/天)的情况下，称量适当的量并然后在无菌蒸馏水中稀释并给药。在测试化合物的情况下，在称量适当的量后，将其用0.5wt％甲基纤维素水性溶液稀释，向其中添加1wt％吐温80。在口服给药期间，测量小鼠的重量，并使用颈皮肤固定方法将动物固定，并且使用探头给药每种测试化合物以进行口服给药。

实施例2.非酒精性脂肪性肝炎治疗模型中的观察和测试项目

(1)重量测量

在给药开始时以及在开始给药后每周一次以及尸检当天测量重量。

(2)采食量

在就要开始给药前以及开始给药测试化合物后每周一次测量采食量。至于测量方法，定量饲养后第二天测量每单位繁殖箱的饲料剩余量，计算差异，并计算每只小鼠的平均摄入量。

(3)血液生化测试

以下项目使用血液生化分析仪(7180Hitachi，日本)用在就要给药测试化合物之前和给药测试化合物之后第6周(尸检当天)采集并分离的血液进行测试。

给药前的测试项目：ALT(丙氨酸转氨酶)、AST(天冬氨酸转氨酶)

给药测试化合物后六周：ALT(丙氨酸转氨酶)、AST(天冬氨酸转氨酶)、TG(甘油三酯)、TCHO(总胆固醇)、HDL(高密度脂蛋白)、LDL(低密度脂蛋白)、GGT(γ-谷氨酰转移酶)、LDH(乳酸脱氢酶)

(4)尸检

尸检当天，将哌莫硝唑(pimonidazole)以30mg/ml的浓度稀释在盐水中，并然后以60mg/kg的剂量静脉给药。在给药后90分钟使动物安乐死。每次尸检时，动物吸入醚，并在确认麻醉时，使用注射器从后腔静脉采集血液。此后，腹主动脉和后腔静脉被切开、出血并被杀死。将血液注入包含凝块活化剂的vacutainer管中，使其在室温下静置约15分钟以凝结，并然后以3,000rpm离心10分钟以分离血清。在分析之前，将血清储存在设定为-70℃或更低的深冻冰箱中，并用于血液生化测试。

尸检时，将肝切除并称重，将肝的右叶固定在10％中性福尔马林缓冲溶液中，并将左叶分成两半并使用液氮快速冷冻。将速冻样本储存在设定为-70℃或更低的低温冰箱中，直到进行ELISA分析。

(5)ELISA分析

使用尸检时提取的肝分析肝组织中TG和TCHO的含量。使用可商购的ELISA试剂盒进行分析。

(6)组织病理学检查

通过一般组织处理过程，诸如修剪、脱水、石蜡包埋和切割来准备固定的组织用于组织病理学检查，并然后进行苏木精和曙红染色(H&E)、油-红-O染色和Masson三色染色。并且使用光学显微镜(Olympus BX53，日本)观察组织病理学变化。

(7)统计分析

假定该实验结果为数据正态性，并使用参数多重比较程序或非参数多重比较程序进行分析。

如果参数单因素方差分析结果显著，则使用Dunnett的多重比较测试进行事后比较测试，而如果非参数Kruskal-Wallis'H测试结果显著，则使用Dunn的多重比较测试进行事后比较测试。

使用Prism 5.03(GraphPad软件公司，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国)进行统计分析，并确定p值小于0.05为统计学上显著的。

实施例3.非酒精性脂肪性肝炎治疗模型的测试结果

(1)重量测量

作为体重测量的结果，整个实验期期间所有MCD饮食组(G2-G5)的体重水平均显著低于正常对照组(G1)的体重水平(p<0.001)。当以MCD饮食饲养时，这是通常观察到的现象。

(2)采食量

作为测量采食量的结果，在整个实验期期间，与正常对照组(G1)、媒介物对照组(G2)和阳性对照组(G3)相比，所有测试组均未观察到显著差异。

(3)血液生化测试

作为血液生化测试的结果，在开始给药测试物质时，所有MCD饮食组(G2-G5)的ALT和AST水平均显著高于正常对照组(G1)的ALT和AST水平(p<0.001)，并且TG、TCHO和HDL水平在统计学上显著低于正常对照组(G1)的TG、TCHO和HDL水平(p<0.001)。在给药测试化合物后6周，所有MCD饮食组(G2-G5)的ALT和AST水平均显著高于正常对照组(G1)的ALT和AST水平(p<0.001或p<0.01)，并且G5的ALT和AST水平显著低于媒介物对照组(G2)的ALT和AST水平(p<0.001或p<0.05)。在给药测试化合物后6周，G3和G4的ALT水平显著低于媒介物对照组(G2)的ALT水平(p<0.05)，并且所有MCD饮食组(G2-G5)的TG、TCHO和HDL水平均显著低于正常对照组(G1)的TG、TCHO和HDL水平(p<0.001)。在给药测试化合物后6周，所有MCD饮食组(G2-G5)的LDL水平均显著低于正常对照组(G1)的LDL水平(p<0.001或p<0.01)，并且G4和G5的LDL水平显著低于媒介物对照组(G2)和阳性对照组(G3)的LDL水平(p<0.01)。在给药测试化合物后6周，G3的LDH水平显著高于正常对照组(G1)的LDH水平(p<0.05)。

结果汇总并示出于图1和2中。

图1示出了在非酒精性脂肪性肝炎疾病模型中给药6周后的血液生化分析结果。与G1、G2和G3相比，测试组中的肝功能指标ALT和AST以剂量依赖性方式示出统计学上显著降低，并且LDL胆固醇示出统计学上显著降低。

图2是LDH(乳酸脱氢酶)的测量结果。已知LDH在缺血性肝炎中经常增加，并且与肝损伤相关。可以看出，与阳性对照组相比，化学式1的测试化合物倾向于降低LDH，并且特别地，在高剂量给药组中，展现出与正常组的浓度相似的浓度。

(4)肝重量测量

所得值(绝对重量和相对重量)示出于图3中。作为测量肝重量的结果，所有MCD饮食饲养组的肝重量水平均显著低于正常对照组(G1)的肝重量水平(p<0.001)，并且G5的肝重量水平显著低于媒介物对照组(G2)的肝重量水平(p<0.05)。G2的相对肝重量水平显著高于正常对照组(G1)的相对肝重量水平(p<0.05)，并且G5的相对肝重量水平显著低于媒介物对照组(G2)和阳性对照组(G3)的相对肝重量水平(p<0.01或p<0.05)。

(5)肝组织中脂肪的分析

分析结果在图4中示出。作为ELISA分析的结果，所有MCD饮食组(G2-G5)的TG和TCHO水平均显著高于正常对照组(G1)的TG和TCHO水平(p<0.001)，并且G4和G5的TG和TCHO水平显著低于媒介物对照组(G2)的TG和TCHO水平(p<0.001、p<0.01或p<0.05)。

(6)组织病理学检查

组织病理学检查结果在图5中示出。所有MCD饮食组(G2-G5)的微囊性脂肪变性和炎症水平均显著高于正常对照组的微囊性脂肪变性和炎症水平(p<0.01或p<0.05)，并且观察到G5的微囊性脂肪变性水平显著低于媒介物对照组的微囊性脂肪变性水平(p<0.05)。

所有非酒精性脂肪性肝炎诱导组(G2-G5)的油红O和Masson三色染色面积水平均显著高于正常对照组的油红O和Masson三色染色面积水平(p<0.001)，并且G4和G5的油红O染色面积水平显著低于媒介物对照组的油红O染色面积水平(p<0.01)。

G2、G3和G4的羟脯氨酸表达面积水平显著高于正常对照组(G1)的羟脯氨酸表达面积水平(p<0.001或p<0.05)，并且G3、G4和G5的羟脯氨酸表达面积水平显著低于媒介物对照组(G2)的羟脯氨酸表达面积水平(p<0.001或p<0.01)。

总体而言，作为组织病理学检查的结果，测试化合物的高剂量组中的微囊性脂肪变性水平显著低于媒介物对照组中的微囊性脂肪变性水平，并且还观察到使用油红O染色测量脂肪面积的结果和羟脯氨酸的表达面积(肝纤维化的指标)显著低于媒介物对照组的脂肪面积的结果和羟脯氨酸的表达面积。另一方面，测试化合物给药组示出了低于媒介物对照组的炎症水平。

(7)整体意见

在这些测试条件下，当对由甲硫氨酸和胆碱缺乏(MCD)的饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎C57BL/6小鼠模型重复给药测试化合物6周后，与媒介物对照组相比，测试化合物的ALT、AST和LDL水平(其是与肝功能相关的值)以剂量相关的方式示出了统计学上显著的变化。另外，观察到测试化合物组的肝相对重量水平以剂量依赖性方式显著低于媒介物对照组的肝相对重量水平。此外，作为组织病理学检查的结果，观察到微囊性脂肪变性水平、油红O面积水平和羟脯氨酸水平显著降低，并且作为肝组织中的TG和TCHO分析的结果，观察到测试化合物组的肝组织中的TCHO和TG水平显著低于媒介物对照组的TCHO和TG水平。特别地，在测试化合物的高剂量给药组的情况下，一些项目诸如血液生化、肝相对重量、肝组织中的TG和TCHO含量以及微囊性脂肪变性水平低于阳性对照组的这些项目。

因此，证实了在该测试条件下重复给药测试化合物具有减轻非酒精性脂肪性肝炎的效果，并且证实测试化合物30mg/kg/天的效果优于阳性对照化合物的效果。

特别地，考虑到以下事实：阳性对照物OCA在临床试验中在超过10％的受试者中示出胃痛和疲劳，而在约10％的受试者中出现了副作用，像不规则心跳、皮肤干燥、便秘、关节痛、外周性水肿、咽痛、甲状腺激素异常、皮疹等，因而认为本发明的化合物式1的有用性非常高。

实施例4.非酒精性脂肪性肝炎预防模型中的疾病诱导和给药

评估了测试化合物用于预防非酒精性脂肪性肝炎的疗效。使用7周龄的小鼠(C57BL/6)，向正常组(G1)供应普通饲料，并向媒介物对照组(G2)、阳性对照组(G3)和测试组(G4，G5)供应MCD饲料，持续12周。与MCD饮食同时，每天一次口服给药测试化合物和对照物。将小鼠分为五组，并且总共75只小鼠，每组15只小鼠用于实验。

为了评估预防疗效，在与用MCD饮食诱导的同时给药测试化合物12周，并评估了该测试化合物用于预防脂肪性肝炎的疗效。

将各自适量的对照化合物(奥贝胆酸，10mg/kg/天)和测试化合物称量，并然后稀释在向其中添加1wt％吐温80的0.5wt％甲基纤维素水性溶液中。在口服给药期间，测量小鼠的重量，并使用颈皮肤固定方法将动物固定，并且使用探头给药每种测试物质以进行口服给药。

实施例5.非酒精性脂肪性肝炎预防模型的测试结果

(1)重量测量

作为体重测量的结果，整个实验期期间所有MCD饮食组(G2-G5)的体重水平均显著低于正常对照组(G1)的体重水平(p<0.001)。当以MCD饮食饲养时，这是通常观察到的现象。

(2)采食量

作为测量采食量的结果，在整个实验期期间，与正常对照组(G1)、媒介物对照组(G2)和阳性对照组(G3)相比，所有测试组均未观察到显著差异。

(3)肝组织中甘油三酯的分析

从5组中提取小鼠的肝组织，使用脂质提取试剂盒(Cell biolabs，美国)设备提取样品，并使用生化分析仪(7020，hitachi，日本)分析肝组织中的甘油三酯。

实验结果使用平均值和标准偏差表示，并且为了在各组之间进行比较，使用软件StatView(版本4.51，Abacus Concepts，伯克利，加利福尼亚州)进行方差分析，并且如果识别出显著性，则通过Fisher的PLSD进行事后比较测试。通过比较各组，以5％的显著水平验证了显著性。

给药12周后的分析结果在图6中示出。作为给药12周后的分析的结果，与媒介物对照组(G2)相比，发现阳性对照组(G3)和测试组(G4，G5)中的甘油三酯统计学上显著降低。这些结果表明，在非酒精性脂肪性肝炎的疾病预防模型中，化学式1的化合物剂量依赖性地抑制甘油三酯在肝细胞中的积聚。

(4)整体意见

根据以上结果，确认了根据本发明的化合物对非酒精性脂肪性肝炎具有预防作用。

Claims (3)

1.一种用于治疗或预防非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物，包括化学式1的嘧啶-4-甲酰胺化合物作为活性成分

[化学式1]

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述组合物减轻了肝的纤维化症状。

3.一种用于治疗或预防肝纤维化的药物组合物，包括化学式1的嘧啶-4-甲酰胺化合物作为活性成分

[化学式1]

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