CN112462015A - 一种氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法，包括如下步骤：鲎试剂灵敏度复核；确定氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素限值以及最小稀释浓度；方法进行干扰实验，确认不存在干扰的供试品浓度；实验中用10‑30mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解供试品，并用细菌内毒素检测用水稀释得到供试品溶液；氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素检查：用10‑30mg/mL聚山梨酯80的水溶液溶解氢溴酸瑞马唑仑供试品，并用细菌内毒素检查用水稀释至不存在干扰的有效浓度进行细菌内毒素检查。该方法用一定浓度的聚山梨酯‑80水溶液溶解样品，可以消除供试品对细菌内毒素的干扰作用，方法简便易操作，实用性高。

Description

一种氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法
技术领域
本发明涉及细菌内毒素的检测技术领域，具体涉及一种氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法。
背景技术
细菌内毒素是革兰氏隐形细菌所产生的具有各种生物活性的大分子物质，其主要化学成分为脂多糖，内毒素是注射剂药品(原料等)中的主要污染物质。
鲎试验法是细菌内毒素的常用检测方法，其利用鲎试剂与内毒素发生凝集反应的机理，以定性或定量检测药品或机体血液中的感染细菌内毒素的一种体外检测方法。
药典中细菌内毒素检查一般用细菌内毒素检查用水溶解、稀释，然而，本发明人在研究过程中发现，用细菌内毒素检查用水(BET水)溶解并稀释氢溴酸瑞马唑仑，对其细菌内毒素检测有抑制干扰作用，无法进行氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检查。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法，该方法选用一定浓度的聚山梨酯-80溶解样品，可以消除氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素检查过程中的抑制干扰作用。
为了达到上述技术效果，本发明提供了如下技术方案：
一种氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法，包括如下步骤：
(1)鲎试剂灵敏度复核，确保鲎试剂灵敏度结果在0.5λ～2.0λ之间；
(2)确定氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素限值以及最小稀释浓度；
(3)进行干扰实验，确认不存在干扰的供试品浓度；实验中用10-30mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解供试品，并用细菌内毒素检测用水稀释得到供试品溶液；
(4)氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素检查：用10-30mg/mL聚山梨酯80的水溶液溶解氢溴酸瑞马唑仑供试品，并用细菌内毒素检查用水稀释至不存在干扰的有效浓度进行细菌内毒素检查。
其中，步骤(3)中的干扰试验，具体操作过程依据《中国药典》2020年版四部通则1143细菌内毒素检查法(凝胶法)进行细菌内毒素干扰实验。
进一步地，步骤(3)中，采用10-20mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解供试品。
进一步地，步骤(4)中，用10-20mg/mL聚山梨酯80的水溶液溶解供试品。
进一步地，在干扰实验之前，进行干扰预实验，初步确认不存在抑制干扰的供试品浓度范围。
进一步地，干扰预实验中，采用10-30mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解、并用细菌内毒素检查用水稀释供试品。
进一步地，干扰预实验中，采用10-20mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解、并用细菌内毒素检查用水稀释供试品。
进一步地，干扰试验之后，进行细菌内毒素回收试验，确认用10-30mg/ml聚山梨酯80水溶液溶解供试品并用细菌内毒素检查用水稀释得到的供试品溶液用于对供试品细菌内毒素检查不存在干扰。
进一步地，供试品细菌内毒素限值定为每1mg氢溴酸瑞马唑仑中含细菌内毒素的量不超过0.1EU。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明采用特定浓度的聚山梨酯80对氢溴酸瑞马唑仑供试品进行溶解并采用细菌内毒素检查用水稀释，消除了供试品对细菌内毒素的干扰作用，实现了水溶性药品氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测，且该方法简便易操作，可以作为氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法，值得推广应用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的解释和说明。
本发明采用的试剂、标准品及供试品如表1所示：
表1
Figure BDA0002784812440000031
本发明中参照《中国药典》2020年版第四部通则1143细菌内毒素检查法（凝胶法）的有关规定，复核鲎试剂灵敏度、确定供试品细菌内毒素限值以及最小稀释浓度。
经复核，本发明使用的鲎试剂灵敏度测得值λc（λc表示鲎试剂的灵敏度测得值）均在0.5λ～2λ（λ为鲎试剂的标示灵敏度）范围内，符合要求，可按标示灵敏度值进行试验。
按照《中国药典》2020年版四部通则1143细菌内毒素检查法规定，确定氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素限值为：
Figure BDA0002784812440000041
考虑到临床用药安全性将本品细菌内毒素限值定为：每1mg氢溴酸瑞马唑仑中含细菌内毒素的量应小于0.1EU。
实施例1
干扰预试验：取供试品氢溴酸瑞马唑仑，用2个厂家的鲎试剂(λ＝0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验，结果见表2。
供试品溶液(A)的制备：精密称取供试品适量，用10mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液将供试品溶解制成浓度100mg/mL，并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C)：取细菌内毒素工作标准品，加检查用水1.0mL使溶解，漩涡混合15min，用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B)：分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL混匀。
阴性对照(D)：细菌内毒素检查用水。
表2供试品干扰预试验结果
Figure BDA0002784812440000042
Figure BDA0002784812440000051
注：1.(+)为形成凝胶且倒置不变形，(-)为未形成凝胶或形成凝胶但倒置变形；
2.(+)/(-)个数代表平行管数。下同。
结果表明：供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂不存在干扰。
实施例2
干扰预试验：取供试品氢溴酸瑞马唑仑，用2个厂家的鲎试剂(λ＝0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验，结果见表3。
供试品溶液(A)的制备：精密称取供试品适量，用20mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液将供试品溶解制成浓度100mg/mL，并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C)：取细菌内毒素工作标准品，加检查用水1.0mL使溶解，漩涡混合15min，用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B)：分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL混匀。
阴性对照(D)：细菌内毒素检查用水。
表3供试品干扰预试验结果
Figure BDA0002784812440000052
结果表明：供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂不存在干扰。
实施例3
干扰预试验：取供试品氢溴酸瑞马唑仑(批号：180102)，用2个厂家的鲎试剂(λ＝0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验，结果见表4。
供试品溶液(A)的制备：精密称取供试品适量，用30mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液将供试品溶解制成浓度100mg/mL，并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C)：取细菌内毒素工作标准品，加检查用水1.0mL使溶解，漩涡混合15min，用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B)：分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL混匀。
阴性对照(D)：细菌内毒素检查用水。
表4供试品干扰预试验结果
Figure BDA0002784812440000061
结果表明：供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂不存在干扰。
实施例4
聚山梨酯80的水溶液细菌内毒素回收试验：取细菌内毒素工作标准品1支用细菌内毒素检查用水溶解，置于漩涡混合仪上混合15min。精密称取供试品适量，用10mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液溶解并加入高浓度低剂量的细菌内毒素标准品，制成100mg/mL的供试液中含细菌内毒素工作标准品浓度为20EU/mL。用细菌内毒素检查用水并将供试品制成含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ(λ为鲎试剂的标示灵敏度)四种浓度的细菌内毒素的供试品阳性溶液(B)(供试品的浓度均为0.6mg/mL)，对每一浓度平行做4支。另取细菌内毒素检查用水制备内毒素标准对照溶液(C)含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ(λ为鲎试剂的标示灵敏度)四种浓度各2支，取细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管(D)。依法操作，并记录结果，依法操作实验，结果见表5。
表5回收试验结果
Figure BDA0002784812440000071
注：(1)λC为鲎试剂灵敏度的测定值，λC＝antilg(∑X/n)。下同。
(2)表中“/”表示样品无相关操作，故不涉及相应结果。下同。
表5显示：供试品溶液(A)和阴性对照管(D)所有平行管均为阴性，鲎试剂标示灵敏度的对照系列(C)和干扰系列(B)的结果均符合鲎试剂灵敏度复核要求。λc均在0.5λ～2λ范围内，说明10mg/mL聚山梨酯80(注射用)水溶液和细菌内毒素检查用水对供试品细菌内毒素检查不存在干扰，可以用10mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液、细菌内毒素检查用水对供试品细菌内毒素检查进行溶解及稀释。
实施例5
聚山梨酯80的水溶液细菌内毒素回收试验：取细菌内毒素工作标准品1支用细菌内毒素检查用水溶解，置于漩涡混合仪上混合15min。精密称取供试品适量，用20mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液溶解并加入高浓度低剂量的细菌内毒素标准品，制成100mg/mL的供试液中含细菌内毒素工作标准品浓度为20EU/mL。用细菌内毒素检查用水并将供试品制成含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ(λ为鲎试剂的标示灵敏度)四种浓度的细菌内毒素的供试品阳性溶液(B)(供试品的浓度均为0.6mg/mL)，对每一浓度平行做4支。另取细菌内毒素检查用水制备内毒素标准对照溶液(C)含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ(λ为鲎试剂的标示灵敏度)四种浓度各2支，取细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管(D)。依法操作，并记录结果，依法操作实验，结果见表6。
表6回收试验结果
Figure BDA0002784812440000081
表6显示：供试品溶液(A)和阴性对照管(D)所有平行管均为阴性，鲎试剂标示灵敏度的对照系列(C)和干扰系列(B)的结果均符合鲎试剂灵敏度复核要求。λc均在0.5λ～2λ范围内，说明20mg/mL聚山梨酯80(注射用)水溶液和细菌内毒素检查用水对供试品细菌内毒素检查不存在干扰，可以用20mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液、细菌内毒素检查用水对供试品细菌内毒素检查进行溶解及稀释。
实施例6
聚山梨酯80的水溶液细菌内毒素回收试验：取细菌内毒素工作标准品1支用细菌内毒素检查用水溶解，置于漩涡混合仪上混合15min。精密称取供试品适量，用30mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液溶解并加入高浓度低剂量的细菌内毒素标准品，制成100mg/mL的供试液中含细菌内毒素工作标准品浓度为20EU/mL。用细菌内毒素检查用水并将供试品制成含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ(λ为鲎试剂的标示灵敏度)四种浓度的细菌内毒素的供试品阳性溶液(B)(供试品的浓度均为0.6mg/mL)，对每一浓度平行做4支。另取细菌内毒素检查用水制备内毒素标准对照溶液(C)含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ(λ为鲎试剂的标示灵敏度)四种浓度各2支，取细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管(D)。依法操作，并记录结果，依法操作实验，结果见表7。
表7回收试验结果
Figure BDA0002784812440000091
表7显示：供试品溶液(A)和阴性对照管(D)所有平行管均为阴性，鲎试剂标示灵敏度的对照系列(C)和干扰系列(B)的结果均符合鲎试剂灵敏度复核要求。λc均在0.5λ～2λ范围内，说明30mg/mL聚山梨酯80(注射用)水溶液和细菌内毒素检查用水对供试品细菌内毒素检查不存在干扰，可以用30mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液、细菌内毒素检查用水对供试品细菌内毒素检查进行溶解及稀释。
实施例7
干扰实验：干扰实验中使用的鲎试剂的标识灵敏度为0.06EU/mL，根据C＝λ/L(C为供试品溶液最小有效稀释浓度，λ为鲎试剂标识灵敏度，L细菌内毒素限值)，得到供试品溶液有效稀释浓度为0.6mg/mL，根据预实验结果，该浓度不存在干扰，故选择0.6mg/mL进行正式实验。
精密称取供试品适量，用10mg/ml聚山梨酯80(注射用)的水溶液溶解供试品，制成为100mg/ml的浓度，并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成0.6mg/ml，制备含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ四种浓度的细菌内毒素的供试品阳性溶液(B)(选用两个公司的鲎试剂、三批供试品分别进行实验，供试品分别标号为供试品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，对每一浓度平行做4支。另取细菌内毒素检查用水制备内毒素标准对照溶液含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ四种浓度各2支(C)，取细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管(D)。取供试品0.6mg/ml的浓度2支做供试品阴性(A)。依法操作，并记录结果。
接受标准：无细菌内毒素浓度的供试品溶液平行管(A)均为阴性，阴性细菌内毒素检查用水平行管均为(D)阴性，含内毒素浓度细菌内毒素检查用水溶液(C)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求，含内毒素浓度的供试品溶液(B)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求。
实验结果如表8所示。
表8氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素干扰试验结果
Figure BDA0002784812440000101
Figure BDA0002784812440000111
试验结果表明：无细菌内毒素浓度的供试品溶液(A)和阴性细菌内毒素检查用水(D)平行管均为阴性,含内毒素浓度细菌内毒素检查用水溶液(C)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求,含内毒素浓度的供试品溶液(B)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求，λc均在0.5λ～2λ范围内，符合规定。
实施例8
干扰实验：干扰实验中使用的鲎试剂的标识灵敏度为0.06EU/mL，根据C＝λ/L(C为供试品溶液有效稀释浓度，λ为鲎试剂标识灵敏度，L细菌内毒素限值)，得到供试品溶液有效稀释浓度为0.6mg/mL，根据预实验结果，该浓度不存在干扰，故选择0.6mg/mL进行正式实验。
精密称取供试品适量，用20mg/ml聚山梨酯80(注射用)的水溶液溶解供试品，制成为100mg/ml的浓度，并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成0.6mg/ml，制备含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ四种浓度的细菌内毒素的供试品阳性溶液(B)(选用两个公司的鲎试剂、三批供试品分别进行实验，供试品分别标号为供试品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，对每一浓度平行做4支。另取细菌内毒素检查用水制备内毒素标准对照溶液含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ四种浓度各2支(C)，取细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管(D)。取供试品0.6mg/ml的浓度2支做供试品阴性(A)。依法操作，并记录结果。
接受标准：无细菌内毒素浓度的供试品溶液平行管(A)均为阴性，阴性细菌内毒素检查用水平行管均为(D)阴性，含内毒素浓度细菌内毒素检查用水溶液(C)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求，含内毒素浓度的供试品溶液(B)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求。
实验结果如表9所示。
表9氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素干扰试验结果
Figure BDA0002784812440000121
试验结果表明：无细菌内毒素浓度的供试品溶液(A)和阴性细菌内毒素检查用水(D)平行管均为阴性,含内毒素浓度细菌内毒素检查用水溶液(C)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求,含内毒素浓度的供试品溶液(B)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求，λc均在0.5λ～2λ范围内，符合规定。
实施例9
干扰实验：干扰实验中使用的鲎试剂的标识灵敏度为0.06EU/mL，根据C＝λ/L(C为供试品溶液有效稀释浓度，λ为鲎试剂标识灵敏度，L细菌内毒素限值)，得到供试品溶液有效稀释浓度为0.6mg/mL，根据预实验结果，该浓度不存在干扰，故选择0.6mg/mL进行正式实验。
精密称取供试品适量，用30mg/ml聚山梨酯80(注射用)的水溶液溶解供试品，制成为100mg/ml的浓度，并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成0.6mg/ml，制备含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ四种浓度的细菌内毒素的供试品阳性溶液(B)(选用两个公司的鲎试剂、三批供试品分别进行实验，供试品分别标号为供试品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，对每一浓度平行做4支。另取细菌内毒素检查用水制备内毒素标准对照溶液含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ四种浓度各2支(C)，取细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管(D)。取供试品0.6mg/ml的浓度2支做供试品阴性(A)。依法操作，并记录结果。
接受标准：无细菌内毒素浓度的供试品溶液平行管(A)均为阴性，阴性细菌内毒素检查用水平行管均为(D)阴性，含内毒素浓度细菌内毒素检查用水溶液(C)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求，含内毒素浓度的供试品溶液(B)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求。
实验结果如表10所示。
表10氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素干扰试验结果
Figure BDA0002784812440000131
Figure BDA0002784812440000141
试验结果表明：无细菌内毒素浓度的供试品溶液(A)和阴性细菌内毒素检查用水(D)平行管均为阴性,含内毒素浓度细菌内毒素检查用水溶液(C)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求,含内毒素浓度的供试品溶液(B)的结果符合鲎试剂灵敏度复核要求，λc均在0.5λ～2λ范围内，符合规定。
对比例1
干扰预试验：取供试品氢溴酸瑞马唑仑，用2个厂家的鲎试剂(λ＝0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验，结果见表3。
供试品溶液(A)的制备：精密称取供试品适量，细菌内毒素检查用水将供试品溶解制成浓度100mg/mL，并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C)：取细菌内毒素工作标准品，加细菌内毒素检查用水1.0mL使溶解，漩涡混合15min，用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B)：分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、0.125mg/mL混匀。
阴性对照(D)：细菌内毒素检查用水。
表11供试品干扰预试验结果
Figure BDA0002784812440000151
结果表明：供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂存在干扰。
对比例2
干扰预试验：取供试品氢溴酸瑞马唑仑，用2个厂家的鲎试剂(λ＝0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验，结果见表3。
供试品溶液(A)的制备：精密称取供试品适量，用5mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液将供试品溶解制成浓度100mg/mL，并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C)：取细菌内毒素工作标准品，加检查用水1.0mL使溶解，漩涡混合15min，用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B)：分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL混匀。
阴性对照(D)：细菌内毒素检查用水。
表12供试品干扰预试验结果
Figure BDA0002784812440000161
结果表明：供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂存在干扰。
对比例3
干扰预试验：取供试品氢溴酸瑞马唑仑，用2个厂家的鲎试剂(λ＝0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验，结果见表3。
供试品溶液(A)的制备：精密称取供试品适量，用35mg/mL聚山梨酯80(注射用)的水溶液将供试品溶解制成浓度100mg/mL，并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C)：取细菌内毒素工作标准品，加检查用水1.0mL使溶解，漩涡混合15min，用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B)：分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、0.125mg/mL混匀。
阴性对照(D)：细菌内毒素检查用水。
表13供试品干扰预试验结果
Figure BDA0002784812440000162
Figure BDA0002784812440000171
结果表明：供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂存在干扰。
对比例4
干扰预试验：取供试品氢溴酸瑞马唑仑，用2个厂家的鲎试剂(λ＝0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验，结果见表3。
供试品溶液(A)的制备：精密称取供试品适量，二甲亚砜将供试品溶解制成浓度100mg/mL，并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C)：取细菌内毒素工作标准品，加细菌内毒素检查用水1.0mL使溶解，漩涡混合15min，用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B)：分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL混匀。
阴性对照(D)：细菌内毒素检查用水。
表14供试品干扰预试验结果
Figure BDA0002784812440000172
Figure BDA0002784812440000181
结果表明：供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂存在干扰。
对比例5
干扰预试验：取供试品氢溴酸瑞马唑仑，用2个厂家的鲎试剂(λ＝0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验，结果见表3。
供试品溶液(A)的制备：精密称取供试品适量，5mg/mL的聚乙二醇400将供试品溶解制成浓度100mg/mL，并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C)：取细菌内毒素工作标准品，加细菌内毒素检查用水1.0mL使溶解，漩涡混合15min，用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/mL和0.5EU/mL。
供试品阳性对照(B)：分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL混匀。
阴性对照(D)：细菌内毒素检查用水。
表16供试品干扰预试验结果
Figure BDA0002784812440000182
结果表明：供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂存在干扰。
对比例6
干扰预试验：取供试品氢溴酸瑞马唑仑，用2个厂家的鲎试剂(λ＝0.25EU/ml)对供试品进行干扰预试验，结果见表3。
供试品溶液(A)的制备：精密称取供试品适量，5mg/mL的单月桂酸酯(PEG400ML)将供试品溶解制成浓度100mg/mL，并用细菌内毒素检查用水将供试品溶液稀释成2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL。
细菌内毒素标准液阳性对照(C)：取细菌内毒素工作标准品，加细菌内毒素检查用水1.0mL使溶解，漩涡混合15min，用细菌内毒素检查用水稀释1.0EU/ml和0.5EU/ml。
供试品阳性对照(B)：分别取等体积的含细菌内毒素1.0EU/ml的溶液与等体积的供试品溶液5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL混匀。
阴性对照(D)：细菌内毒素检查用水。
表17供试品干扰预试验结果
Figure BDA0002784812440000191
结果表明：供试品在1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下使用0.25EU/mL灵敏度的鲎试剂存在干扰。
尽管这里参照本发明的解释性实施例对本发明进行了描述，上述实施例仅为本发明较佳的实施方式，本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。

Claims (8)

1.一种氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)鲎试剂灵敏度复核，确保鲎试剂灵敏度结果在0.5λ～2.0λ之间；
(2)确定氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素限值以及最小稀释浓度；
(3)进行干扰实验，确认不存在干扰的供试品浓度；实验中用10-30mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解供试品，并用细菌内毒素检测用水稀释得到供试品溶液；
(4)氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素检查：用10-30mg/mL聚山梨酯80的水溶液溶解氢溴酸瑞马唑仑供试品，并用细菌内毒素检查用水稀释至不存在干扰的有效浓度进行细菌内毒素检查。
2.根据权利要求1所述的氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，采用10-20mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解供试品。
3.根据权利要求1所述的氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法，其特征在于，步骤(4)中，用10-20mg/mL聚山梨酯80的水溶液溶解供试品。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法，其特征在于，在干扰实验之前，进行干扰预实验，初步确认不存在抑制干扰的供试品浓度范围。
5.根据权利要求4所述的氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法，其特征在于，干扰预实验中，采用10-30mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解、并用细菌内毒素检查用水稀释供试品。
6.根据权利要求5所示的氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法，其特征在于，干扰预实验中，采用10-20mg/mL的聚山梨酯80的水溶液溶解、并用细菌内毒素检查用水稀释供试品。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法，其特征在于，干扰试验之后，进行细菌内毒素回收试验，确认用10-30mg/ml聚山梨酯80水溶液溶解供试品并用细菌内毒素检查用水稀释得到的供试品溶液用于对供试品细菌内毒素检查不存在干扰。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的氢溴酸瑞马唑仑细菌内毒素的检测方法，其特征在于，供试品细菌内毒素限值定为每1mg氢溴酸瑞马唑仑中含细菌内毒素的量不超过0.1EU。
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