CN112461956A - 一种检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法，包括如下步骤，制备供试品溶液，称取包含有肼类物质的甾体激素类物质，加入稀释剂，分散，加入苯甲醛，混合均匀，加入提取剂，搅拌，静置分层，取上清液，得到供试品溶液，所述稀释剂为稀盐酸和乙醇混合液；稀盐酸的重量浓度为9.5～10.5％；制备肼类物质对照品溶液；色谱条件，以十八烷基硅烷基为固定相，选用流动相进行等度洗脱，检测波长为300‑340nm；流动相为0.3g/L依地酸钠溶液‑乙腈；测定肼类物质的含量；本发明选择性好，准确度高，灵敏度高。

Description

一种检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法
技术领域
本发明属于有机物质含量检测领域，具体涉及一种检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法。
背景技术
在醋酸阿比特龙生产过程中，在合成中间体Ⅰ(3β-醇-5,16-二烯-17-腙雄甾)的反应过程中使用了水合肼，而肼类物质属于具有警示结构的遗传毒性杂质，遗传毒性杂质极低的限度要求，对工艺和检测分析提出了更高的挑战，也成为药品进入欧美市场的技术挑战和潜在壁垒，为严格控制产品质量，在醋酸阿比特龙成品中监控肼类物质的含量，避免不合格的产品流入市场。目前国内外没有公开报道的醋酸阿比特龙中肼类物质含量测定的分析方法。
现有技术中，醋酸阿比特龙的监控或检测，主要有一下几种方法，化学滴定法、薄层色谱法、仪器分析方法(包括高效液相色谱法、气相色谱法、紫外检测法)等，具体选用哪种方法，需要对醋酸阿比特龙的反应体系进行分析，还有考虑其他多种因素。以高效液相色谱法为例，在使用该方法进行肼类物质含量测定过程中，需要根据醋酸阿比特龙的具体情况选择色谱条件，而色谱条件的选择是测定结果准确性的关键因素，需要投入大量的时间、精力和资金进行摸索验证。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法，选择性好，准确度高，灵敏度高。
本发明的内容为一种检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法，包括如下步骤，
制备供试品溶液，
称取包含有肼类物质的甾体激素类物质，加入稀释剂，分散，加入苯甲醛，混合均匀，加入提取剂，搅拌，静置分层，取上清液，得到供试品溶液，所述稀释剂为稀盐酸和乙醇混合液；稀盐酸的重量浓度为9.5～10.5％；
制备肼类物质对照品溶液，
称取硫酸肼，加稀释剂，分散，加入苯甲醛，混合均匀，加入提取剂，搅拌，静置分层，取上清液，得到肼类物质对照品溶液，所述稀释剂为稀盐酸和乙醇混合液；
色谱条件，
以十八烷基硅烷基为固定相，选用流动相进行等度洗脱，检测波长为300-340nm；流动相为0.3g/L依地酸钠溶液-乙腈；
测定含量，
吸取供试品溶液和杂质对照品溶液，注入高效液相色谱仪，测定肼类物质的含量。
甾体激素类物质为醋酸阿比特龙，肼类物质为水合肼，所述提取剂为正庚烷。
所述稀释剂中，稀盐酸和乙醇的重量配比为(45-55):(55-45)。
所述稀释剂中，稀盐酸和乙醇的重量配比为50:50。
色谱柱的长度100-250mm，直径为3-5mm，粒径为3-5μm。
检测波长为305nm。
流动相中，0.3g/L依地酸钠溶液和乙腈的重量比为3:7。
进样量为40ul，流速为1.0ml/min，柱温为室温。
本发明的检测方法，可以在最终的醋酸阿比特龙产物中进行检测，也可以在制备得到醋酸阿比特龙中间体I时进行检测，以评估产品和制备方法的优劣程度。所述醋酸阿比特龙中间体I和醋酸阿比特龙的结构式分别为：
Figure BDA0002774149220000021
本发明的有益效果是，水合肼在一般的检测波长下无吸收，一般的色谱方法并不能检出。本发明通过苯甲醛对其衍生，使其对紫外光有吸收从而对其进行定量检测。本发明通过对照品溶液与系统适应性溶液比较证明该方法有较好的选择性；通过加样回收实验证明该方法有很好的准确率；该方法检测限1/10ppm级，具有较高的灵敏度。
本发明提供一种测定醋酸阿比特龙成品中肼类物质含量的方法，解决醋酸阿比特龙合成过程中高效、快捷、灵敏、准确测定肼类物质的含量，以便提高产品的质量。
本发明采用高效液相色谱法检测醋酸阿比特龙成品中肼类物质的含量，以稀盐酸-无水乙醇为稀释剂，通过超声溶解供试品，苯甲醛衍生的方式，使水合肼与苯甲醛生成苯甲醛吖嗪，具有紫外吸收，从而被有效分离、检测出；并通过专属性、准确性和精密度等试验验证此方法的可靠性。
本发明对于醋酸阿比特龙成品中肼类物质含量在0.5ppm至150ppm之间的测定均具有较好的选择性、准确度和灵敏度，且操作简便、测定快速和简单易行。
附图说明
图1为空白溶液的检测色谱图。
图2为对照品溶液的检测色谱图。
图3为供试品溶液的检测色谱图。
图4为对照品溶液2的检测色谱图。
图5为系统适应性混合物的检测色谱图。
具体实施方式
本发明实施例中所用的各种化学品和试剂，均为市售购买。
实施例1
一种检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法，包括如下步骤，
1.色谱柱为Agela promosil C18 250*4.6mm，5μm粒径或类似色谱柱。
2.检测波长为305nm，是水合肼衍生物(苯甲醛吖嗪)在紫外可见光区具有较大吸收的波长。
3.通过优选出的流动相为0.3g/L依地酸钠溶液-乙腈(30:70)。
4.分析时间为20分钟。
5.采用外标法法计算苯甲醛吖嗪的含量；进样量为40ul；流速为1.0ml/min；柱温为室温。
6.苯甲醛吖嗪对照品溶液：精密称取硫酸肼对照品25mg，置100mL量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL置20mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，再精密量取1mL置50mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液5mL置具塞试管中，再精密加入溶液A(取苯甲醛4.0g，置100mL容量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。)4mL，混匀，室温放置2.5h。精密加入5mL正庚烷，振摇1min后，放置使分层，取上清液，作为对照品溶液。(临用新制)。
7.供试品溶液：精密称取本品210mg，置具塞试管中，精密加入稀释剂5mL，超声使溶解，再精密加入溶液A(取苯甲醛4.0g，置100mL容量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。)4mL，混匀，室温放置2.5h。精密加入5mL正庚烷，振摇1min后，放置使分层，取上清液，即得。(临用新制)。
8.空白溶液：具塞试管中，精密加入稀释剂5mL，再精密加入溶液A(取苯甲醛4.0g，置100mL容量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。)4mL，混匀，室温放置2.5h。精密加入5mL正庚烷，振摇1min后，放置使分层，取上清液，作为对照品溶液。(临用新制)。
9.测定含量，吸取供试品溶液和杂质对照品溶液，注入高效液相色谱仪，测定肼类物质的含量。
图1-3分别为空白溶液，对照品溶液，和供试品溶液的色谱图，图1-3说明空白对检测无影响，供试品和对照品中肼衍生物具有相同的保留时间。
实验例
1.加样回收率数据
Figure BDA0002774149220000041
2.选择性
通过往系统适应性混合物中加入等量的对照品溶液，与对照品溶液比较硫酸肼衍生物的峰面积，得出在其他杂质存在的条件下对水合肼的检测无影响。
对照品溶液中硫酸肼衍生物峰面积(图4)：11508.55；
系统适用性溶液中硫酸肼衍生物峰面积(图5)：11255.81。
3.灵敏度
通过定量限信噪比不少于10：1，推算出该方法的定量限约为0.03ppm。具有较高的灵敏度。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法，其特征是，包括如下步骤，
制备供试品溶液，
称取包含有肼类物质的甾体激素类物质，加入稀释剂，分散，加入苯甲醛，混合均匀，加入提取剂，搅拌，静置分层，取上清液，得到供试品溶液，所述稀释剂为稀盐酸和乙醇混合液；稀盐酸的重量浓度为9.5～10.5％；
制备肼类物质对照品溶液，
称取硫酸肼，加稀释剂，分散，加入苯甲醛，混合均匀，加入提取剂，搅拌，静置分层，取上清液，得到肼类物质对照品溶液，所述稀释剂为稀盐酸和乙醇混合液；
色谱条件，
以十八烷基硅烷基为固定相，选用流动相进行等度洗脱，检测波长为300-340nm；流动相为0.3g/L依地酸钠溶液-乙腈；
测定含量，
吸取供试品溶液和杂质对照品溶液，注入高效液相色谱仪，测定肼类物质的含量。
2.如权利要求1所述的检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法，其特征是，甾体激素类物质为醋酸阿比特龙。
3.如权利要求1所述的检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法，其特征是，肼类物质为水合肼。
4.如权利要求1所述的检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法，其特征是，所述提取剂为正庚烷。
5.如权利要求1-4任一项所述的检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法，其特征是，所述稀释剂中，稀盐酸和乙醇的重量配比为(45-55):(55-45)。
6.如权利要求5所述的检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法，其特征是，所述稀释剂中，稀盐酸和乙醇的重量配比为50:50。
7.如权利要求1-4任一项所述的检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法，其特征是，色谱柱的长度100-250mm，直径为3-5mm，粒径为3-5μm。
8.如权利要求1-4任一项所述的检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法，其特征是，检测波长为305nm。
9.如权利要求1-4任一项所述的检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法，其特征是，流动相中，0.3g/L依地酸钠溶液和乙腈的重量比为3:7。
10.如权利要求1-4任一项所述的检测甾体激素类物质中肼类物质含量的方法，其特征是，进样量为40ul，流速为1.0ml/min，柱温为室温。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112358520A (zh) * 2020-11-17 2021-02-12 湖南成大生物科技有限公司 醋酸阿比特龙中间体产品中肼类化合物的分离方法及含量检测方法
CN113295805A (zh) * 2021-07-28 2021-08-24 广州国标检验检测有限公司 一种药物中水合肼的检测方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003014715A (ja) * 2001-07-02 2003-01-15 Kawasaki Steel Corp 固相中のヒドラジンの定量分析方法
CN107064368A (zh) * 2017-04-21 2017-08-18 常州佳德医药科技有限公司 衍生化hplc法测定水合肼的方法
CN108459107A (zh) * 2018-04-26 2018-08-28 南京明捷生物医药检测有限公司 利用液质联用法测定药品中水合肼残留的方法
CN109682921A (zh) * 2019-01-15 2019-04-26 通化东宝药业股份有限公司 一种游离肼的检测方法及其在磷酸西格列汀原料药杂质检测中的应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003014715A (ja) * 2001-07-02 2003-01-15 Kawasaki Steel Corp 固相中のヒドラジンの定量分析方法
CN107064368A (zh) * 2017-04-21 2017-08-18 常州佳德医药科技有限公司 衍生化hplc法测定水合肼的方法
CN108459107A (zh) * 2018-04-26 2018-08-28 南京明捷生物医药检测有限公司 利用液质联用法测定药品中水合肼残留的方法
CN109682921A (zh) * 2019-01-15 2019-04-26 通化东宝药业股份有限公司 一种游离肼的检测方法及其在磷酸西格列汀原料药杂质检测中的应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KATALIN TAMÁS 等: "Hydrazine determination in allopurinol using derivatization and SPE for sample preparation", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS》 *
张萌萌 等: "利伐沙班中肼的柱前衍生化-HPLC法测定", 《中国医药工业杂志》 *
李滋 等: "柱前衍生化HPLC法测定异烟肼注射液中游离肼的含量", 《药物分析杂志》 *
王汝金 等: "高效液相色谱法测定沙咪珠利中的水合肼残留量", 《中国兽药杂志》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112358520A (zh) * 2020-11-17 2021-02-12 湖南成大生物科技有限公司 醋酸阿比特龙中间体产品中肼类化合物的分离方法及含量检测方法
CN113295805A (zh) * 2021-07-28 2021-08-24 广州国标检验检测有限公司 一种药物中水合肼的检测方法
CN113295805B (zh) * 2021-07-28 2021-12-07 广州国标检验检测有限公司 一种药物中水合肼的检测方法

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