CN111044641A - 羟基脲及其制剂的检测方法和应用 - Google Patents

羟基脲及其制剂的检测方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及药物分析技术领域，尤其是涉及一种羟基脲及其制剂的检测方法和应用。所述羟基脲及其制剂的检测方法，包括如下步骤：采用高效液相色谱对供试品溶液进行检测；所述高效液相色谱检测的条件包括：色谱柱为氨基柱；所述色谱柱的柱温为35～45℃；采用流动相进行等度洗脱，所述流动相包括体积比为(80～84)﹕(20～16)的乙腈和水。本发明的检测方法，在保证各有关物质与有效成分高效分离的基础上，使其具有良好的专属性、重复性与准确度；可以实现对羟基脲及其制剂的质量控制。

Description

羟基脲及其制剂的检测方法和应用
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，尤其是涉及一种羟基脲及其制剂的检测方法和应用。
背景技术
中国药典2015版二部收载了羟基脲原料和羟基脲片；欧洲药典8.0收载了羟基脲原料；英国药典2016收载了羟基脲原料和羟基脲胶囊；美国药典42版收载羟基脲原料和羟基脲胶囊。羟基脲的合成路线为：氨基甲酸乙酯与盐酸羟胺进行化学反应，其可能工艺杂质为脲。现行的各国标准中，均分别采用高效液相色谱法(HPLC法)测定羟基脲的含量。
中国药典2015版中使用HPLC和TLC法分别控制羟基脲中的不同杂质。如使用HPLC法进行羟基脲含量测定及其他杂质的检测：使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(5﹕95，v/v)为流动相等度洗脱；检测波长为214nm；流速为1.0mL/min。结合羟基脲的分子结构可知，羟基脲是强极性，弱保留，中国药典的液相条件十分不利于强极性弱保留主成分及杂质的检测，以至主成分几乎不保留，主药成分羟基脲与盐酸羟胺无有效分离；采用薄层色谱法(TLC法)进行工艺杂质(脲)的检测，实验过程复杂，对薄层板的厂家、批号均有要求，方法重现性差，点样过程中斑点会拖尾严重，无法定量测定，检测灵敏度低，因此需要开发更高灵敏度的羟基脲及其有关物质的检测方法。
美国药典42用四丁基硫酸氢铵缓冲液-甲醇(85﹕15，v/v)等度洗脱；检测波长为214nm；流速为0.5mL/min检测羟基脲含量，使用该法进行含量检测，流动相中有离子对试剂，液相系统不好平衡，基线不稳定，色谱柱容易损耗。
现有技术在针对羟基脲原料及其制剂中的有关物质有效可控的质量检测方面存在诸多缺陷和不足。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供羟基脲及其制剂的检测方法，以解决现有技术中存在的分离度差、重现性差的技术问题。
本发明的第二目的在于提供上述羟基脲及其制剂的检测方法在羟基脲及其制剂的质量控制中的应用。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
羟基脲及其制剂的检测方法，包括如下步骤：
采用高效液相色谱对供试品溶液进行检测；所述高效液相色谱检测的条件包括：
色谱柱为氨基柱；所述色谱柱的柱温为35～45℃；
采用流动相进行等度洗脱，所述流动相包括体积比为(80～84)﹕(20～16)的乙腈和水。
现有技术中，使用HPLC和TLC法分别控制羟基脲中的不同杂质，如使用HPLC检测盐酸羟胺和降解杂质，使用TLC法检测脲。同时，现有的HPLC检测过程中，盐酸羟胺与羟基脲分离度差；而TLC法检测脲，灵敏度不高，重现性较差。
本发明的检测方法，能够保证盐酸羟胺与羟基脲的分离度，并且能够将羟基脲酸、碱、氧化、高温、光照降解杂质同时检出，避免使用传统的TLC法检测，该检测方法专属性强，耐用性好。
本发明的检测方法，能够在同一色谱条件下，使盐酸羟胺与羟基脲出峰，且相互之间分离度符合要求；并且降解杂质与主峰之间分离度符合要求。
在本发明一具体实施方式中，所述高效液相色谱的检测器包括电喷雾检测器和蒸发光检测器中的任一种；优选为电喷雾检测器。采用电喷雾检测器能够更进一步提高检测灵敏度。
采用上述检测器，能够进一步将脲和羟基脲酸、碱、氧化、高温、光照降解杂质同时检出；解决了现有技术中采用TLC法检测脲，灵敏度不高，重现性较差的问题。
在本发明一具体实施方式中，包括对供试品中的羟基脲含量的检测和/或对供试品中的有关物质及其含量的检测。
其中，有关物质包括盐酸羟胺、脲和/或羟基脲降解物。
所述羟基脲降解物为羟基脲经降解反应得到的物质；所述降解反应包括酸降解反应、碱降解反应、氧化降解反应、高温降解反应和/或光照降解反应。
在本发明一具体实施方式中，所述供试品选自含羟基脲的原料或制剂。
具体的，含羟基脲的制剂可以为羟基脲片、羟基脲胶囊等等。
本发明的检测方法适用于检测羟基脲原料中羟基脲及有关物质、羟基脲胶囊中羟基脲及有关物质、羟基脲片中羟基脲及有关物质以及其他主要成分为羟基脲的其它制剂中羟基脲及有关物质的检测。
在本发明一具体实施方式中，所述流动相中，乙腈和水的体积比为(81～83)﹕(19～17)，优选为82﹕18。
在本发明一具体实施方式中，所述等度洗脱的流速为0.8～1.2mL/min，优选为1mL/min。
如在不同实施方式中，所述等度洗脱的流速可以为0.8mL/min、0.85mL/min、0.9mL/min、0.95mL/min、1mL/min、1.05mL/min、1.1mL/min、1.15mL/min、1.2mL/min等等。
在本发明一具体实施方式中，所述氨基柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为10μm。如可以为
Figure BDA0002349761010000041
NH2柱，
Figure BDA0002349761010000042
250×4.6mm。
如在不同实施方式中，所述色谱柱的柱温可以为35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃等等，优选为40℃。
在本发明一具体实施方式中，检测时，进样量可以为10～20μL，如可以为10μL、12μL、14μL、16μL、18μL、20μL等等，优选为10μL。但进样量不局限于此，可根据实际情况进行调整。
在本发明一优选实施方式中，所述高效液相色谱检测的条件包括：
所述色谱柱为氨基柱，所述色谱柱的柱温为40℃；
采用流动相进行等度洗脱，所述流动相包括体积比为82﹕18的乙腈和水；
所述高效液相色谱的检测器为电喷雾检测器；
所述等度洗脱的流速为1.0mL/min。
在本发明一具体实施方式中，所述电喷雾检测器的采集频率为5～10Hz，优选为5Hz；干燥管蒸发温度为45～50℃，优选为50℃；过滤常数为3～4s，优选为3.6s；但电喷雾检测器的性能参数不局限于此，可根据实际需求进行调整。
如在具体实施方式中，所述电喷雾检测器可以为Thermo U3000高效液相色谱仪附带型号为Corona Veo电喷雾检测器，但不局限于此。
在本发明一优选实施方式中，将同体积的供试品溶液和对照品溶液分别采用高效液相色谱进行检测，根据高效液相色谱检测结果分析羟基脲和/或其有关物质。
在本发明一优选实施方式中，将同体积的供试品溶液和对照品溶液分别采用高效液相色谱进行检测，采用外标法对供试品溶液中的羟基脲和/或其有关物质进行计算。
采用上述分析方式，对供试品溶液中的成分进行定性和/或定量分析。
在本发明一优选实施方式中，所述对照品包括羟基脲对照品和/或盐酸羟胺对照品和/或脲对照品。其中，盐酸羟胺对照品溶液的浓度可以为3mg/mL，脲对照品溶液的浓度可以为0.75mg/mL，对照品溶液的浓度可根据实际需求进行调整。
在本发明一具体实施方式中，所述供试品溶液的制备方法包括：采用流动相溶解所述供试品，取续滤液作为供试品溶液。其中，所述供试品溶液中，羟基脲的浓度可以为1～10mg/mL，如为5mg/mL，但不局限于此。
在本发明一优选实施方式中，采用上述检测方法，对羟基脲的含量进行检测，包括如下步骤：将羟基脲标准系列工作溶液分别注入高效液相色谱仪中，在与供试品溶液相同的色谱条件下测定相应的色谱峰面积，以标准系列工作溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；根据供试品溶液的色谱图得到供试品溶液中羟基脲对应的色谱峰面积，代入标准曲线计算得到所述供试品溶液中羟基脲的浓度。
其中，与供试品溶液相同的色谱条件是指前述任一种所述高效液相色谱检测的条件。
本发明还提供了上述羟基脲及其制剂的检测方法在含羟基脲的原料或制剂的质量控制中的应用。
本发明的检测方法能够保证盐酸羟胺与羟基脲的分离度，并且能将脲和羟基脲酸、碱、氧化、高温和光照降解杂质同时检出，该法专属性强，耐用性好。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明的检测方法，在保证各有关物质与有效成分高效分离的基础上，使其具有良好的专属性、重复性与准确度；
(2)本发明的检测方法可以实现对羟基脲及其制剂的质量控制。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1提供的检测方法中系统适用性溶液的色谱图；
图2为本发明实施例1提供的检测方法中盐酸羟胺对照品溶液的色谱图；
图3为本发明实施例1提供的检测方法中脲对照品溶液的色谱图；
图4为本发明实施例1提供的检测方法中供试品溶液的色谱图；
图5为本发明实施例2提供的酸降解供试品溶液的色谱图；
图6为本发明实施例2提供的碱降解供试品溶液的色谱图；
图7为本发明实施例2提供的氧化降解供试品溶液的色谱图；
图8为本发明实施例2提供的高温降解供试品溶液的色谱图；
图9为本发明实施例2提供的光照降解供试品溶液的色谱图；
图10为本发明实施例4的检测方法中的羟基脲标准曲线图；
图11为比较例1的检测方法的色谱图；
图12为比较例2的检测方法的TLC照片；其中，图中的圆圈表示斑点位置；
图13为本发明实验例2的6份样品色谱叠加图。
具体实施方式
下面将结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
各实施例和比较例采用的供试品是羟基脲胶囊内容物，厂家为北京振东光明药物研究院，批号为20181108。该羟基脲胶囊内容物的处方比例如下：
Figure BDA0002349761010000071
本发明各实施例采用的仪器信息可以如下：
Thermo U3000高效液相色谱仪，附带型号为Corona Veo电喷雾检测器。
实施例1
本实施例提供了羟基脲及其制剂的检测方法，包括如下步骤：
(1)溶液配制
系统适用性溶液：分别取羟基脲对照品、脲对照品、盐酸羟胺对照品各适量，加体积比为82﹕18的乙腈和水溶解并稀释制成每1mL含羟基脲对照品、脲对照品和盐酸羟胺对照品分别为5mg、0.25mg和5mg的溶液，作为系统适用性溶液。
盐酸羟胺对照品溶液：精密称取盐酸羟胺对照品，加体积比为82﹕18的乙腈和水溶解并稀释制成3mg/mL的盐酸羟胺对照品溶液。
脲对照品溶液：精密称取脲对照品，加体积比为82﹕18的乙腈和水溶解并稀释制成0.75mg/mL的脲对照品溶液。
供试品溶液：精密称取羟基脲胶囊内容物适量(相当于羟基脲50mg)，置10mL量瓶中，加体积比为82﹕18的乙腈和水超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过取续滤液，即得供试品溶液。
(2)高效液相色谱检测条件
仪器：Thermo U3000高效液相色谱仪，型号为Corona Veo电喷雾检测器，采集频率：5HZ，干燥管蒸发温度：High(50℃)，过滤常数Filter：3.6s，Power Function：1.00；
色谱柱：
Figure BDA0002349761010000081
NH2柱，
Figure BDA0002349761010000082
250×4.6mm；
流动相：流动相A和流动相B，二者体积比为82﹕18，流动相A为乙腈，流动相B为水；等度洗脱；
流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：10μL。
(3)检测步骤
分别精密量取系统适用性溶液、盐酸羟胺对照品溶液、脲对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按照步骤(2)中的条件进行检测，记录色谱图，分别见图1至图4。
图1为本实施例的系统适用性溶液的色谱图；从图中可知，盐酸羟胺的保留时间为3.375min，脲的保留时间为4.653min，羟基脲保留时间为5.146min，脲与盐酸羟胺，羟基脲与脲分离度良好，系统适用性符合要求。
图2和图3分别为本实施例的盐酸羟胺对照品溶液和脲对照品溶液的色谱图；从图中可知，盐酸羟胺的保留时间为3.356min，脲的保留时间为4.657min。
图4为本实施例的供试品溶液的色谱图；从图中可知，供试品中未检出盐酸羟胺和脲。
实施例2
本实施例分别对羟基脲胶囊内容物进行强降解实验后，对其强降解产物进行检测，包括如下步骤：
(1)强降解实验
供试品酸降解：精密称取羟基脲胶囊内容物适量(相当于羟基脲50mg)，置10mL量瓶中，加体积比为82﹕18的乙腈和水适量，超声使溶解，加入1mol/L盐酸溶液1mL，于105℃条件下放置1.5h，取出，冷却至室温，加入1mol/L氢氧化钠溶液调节至中性，加体积比为82﹕18的乙腈和水释至刻度，摇匀，滤过取续滤液，即得供试品酸降解溶液。
供试品碱降解：精密称取羟基脲胶囊内容物适量(相当于羟基脲50mg)，置10mL量瓶中，加体积比为82﹕18的乙腈和水适量，超声使溶解，加入1mol/L氢氧化钠溶液1mL，于105℃条件下放置30min，取出，冷却至室温，加入1mol/L盐酸溶液调节至中性，加体积比为82﹕18的乙腈和水稀释至刻度，摇匀，滤过取续滤液，即得供试品碱降解溶液。
供试品氧化降解：精密称取羟基脲胶囊内容物适量(相当于羟基脲50mg)，置10mL量瓶中，加体积比为82﹕18的乙腈和水适量，超声使溶解，加10％双氧水1mL，放置1.5h，加体积比为82﹕18的乙腈和水稀释至刻度，摇匀，滤过取续滤液，即得供试品氧化降解溶液。
供试品高温降解：精密称羟基脲胶囊内容物适量(相当于羟基脲50mg)，置10mL量瓶中，加体积比为82﹕18的乙腈和水适量，超声使溶解，于105℃放置1.5h，取出，冷却至室温，加体积比为82﹕18的乙腈和水稀释至刻度，摇匀，滤过取续滤液，即得供试品高温降解溶液。
供试品光照降解：精密称取羟基脲胶囊内容物适量，在5000lux光照强度下放置10天，取出适量(相当于羟基脲50mg)，置10mL量瓶中，加体积比为82﹕18的乙腈和水超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过取续滤液，即得供试品光照降解溶液。
(2)采用实施例1中步骤(2)中的检测条件进行检测，具体操作如下：
分别精密量取各降解条件下的供试品溶液(供试品酸降解溶液、供试品碱降解溶液、供试品氧化降解溶液、供试品高温降解溶液、供试品光照降解溶液)，注入液相色谱仪，记录色谱图，分别如图5-9所示。
从图中可知，羟基脲供试品在高温、强酸、强碱和强氧化条件下不稳定，容易降解产生脲及其他杂质；在光照条件下较为稳定。而盐酸羟胺属于工艺杂质，在各降解产物中均未检出；并且各降解杂质与主峰之间分离度符合要求。
实施例3
本实施例提供了羟基脲及其制剂的检测方法，包括如下步骤：
(1)溶液配制
系统适用性溶液：分别取羟基脲对照品、脲对照品、盐酸羟胺对照品各适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL含羟基脲对照品、脲对照品和盐酸羟胺对照品分别为5mg、0.25mg和5mg的溶液，作为系统适用性溶液。
(2)高效液相色谱检测条件
仪器：Thermo U3000高效液相色谱仪，型号为Corona Veo电喷雾检测器，采集频率：5HZ，干燥管蒸发温度：High(50℃)，过滤常数Filter：3.6s，Power Function：1.00；
色谱柱：
Figure BDA0002349761010000101
NH2柱，
Figure BDA0002349761010000102
250×4.6mm；
流动相：流动相A为乙腈，流动相B为水，二者按比例混合等度洗脱；
流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：10μL。
(3)检测步骤
精密量取系统适用性溶液注入液相色谱仪，按照步骤(2)中的条件进行检测，记录色谱图。
其中，本实施例为了考察在不同流动相条件下，脲与羟基脲的分离度，分别进行三组实验，区别仅在于流动相中流动相A与流动相B的比例不同，三组流动相比例分别如下，按照上述检测记录系统适用性溶液的色谱图，得到脲与羟基脲的分离度，具体结果见下表1。
表1不同流动相的分离度
流动相A﹕流动相B 羟基脲/min 脲/min 分离度
80﹕20 4.521 4.917 1.72
82﹕18 4.718 5.142 1.50
84﹕16 4.932 5.438 1.62
实施例4
本实施例提供了羟基脲的含量的检测方法，包括如下步骤：
(1)精密称取羟基脲对照品适量采用体积比为82﹕18的乙腈和水作为溶剂配制并稀释，分别得到浓度为0.3048mg/mL、0.5715mg/mL、0.8128mg/mL、1.0160mg/mL、1.2700mg/mL的浓度的羟基脲的系列浓度溶液；
(2)分别精密量取上述系列浓度溶液各10μL，注入液相色谱仪，按照实施例1中步骤(2)的条件进行检测，记录色谱图；测试结果见表2，以浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，得到线性回归方程。
表2羟基脲的线性测试结果
Figure BDA0002349761010000111
由数据可知，在0.3048mg/mL～1.2700mg/mL的浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，Y＝32.369X+0.2581，r＝0.9998，标准曲线见图10。
比较例1
比较例1参考中国药典2015版标准中记载的检测方法，对系统适用性溶液进行了分析，其中采用甲醇-水(5﹕95，v/v)作为流动相，使用C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱，检测波长为214nm，流速为1.0mL/min。
其中，系统适用性溶液的配制：称取羟基脲对照品与盐酸羟胺对照品各适量，加流动相溶解并稀释制成含羟基脲0.1mg/mL、含盐酸羟胺2mg/mL的系统适用性溶液。
将上述系统适用性溶液按照中国药典2015版标准中记载的检测方法进行进样检测，检测结果见图11。从图11中可知，盐酸羟胺与羟基脲不能得到有效分离。
比较例2
比较例2参考中国药典2015版标准，使用TLC法对脲进行检测。
羟基脲原料溶液：称取羟基脲原料适量，加水溶解并稀释制成浓度约为20mg/mL的溶液。
脲对照品溶液：称取脲对照品适量，加水溶解并稀释制成浓度约为0.1mg/mL的溶液；
系统适用性溶液：称取羟基脲和脲对照品各适量，加水溶解并稀释制成羟基脲和脲浓度分别为0.1mg/mL的溶液，作为系统适用性溶液。
展开剂：分别量取吡啶、水、乙酸乙酯，按照(2﹕2﹕10)比例混合，振摇，静置使分层，取上层液为展开剂，倒入展开缸中，放置2小时。
显色剂：称取对二甲氨基苯甲醛500.00mg，用1mol/mL的盐酸溶液(9mL→100mL)溶解，制成含对二甲氨基苯甲醛10mg/mL的溶液。
薄层板：取G板(100×200mm，批号：20170413，厂家：青岛海洋化工有限公司制造)，在105℃烘箱，放置2小时。
分别取上述羟基脲原料溶液、脲对照品溶液及系统适用性溶液，点样10μL，展开，显色，结果见图12。从图中可知，斑点拖尾，方法专属性不强，灵敏度不高，重现性不好。
实验例1
回收率
为了验证本发明的检测方法的回收率，按照实施例1的检测方法，配制3种浓度(相当于羟基脲0.8mg/mL、1.0mg/mL、1.2mg/mL)共9份回收率样品溶液，考察回收率，结果见表3。
其中，回收率样品溶液的配制方法为：
100％回收率样品溶液：精密称取羟基脲对照品25mg，空白辅料(乳糖110M﹕乳糖200M﹕枸橼酸﹕无水磷酸氢二钠﹕硬脂酸镁＝42﹕42﹕6﹕16﹕4)11mg，置25mL量瓶中，加体积比为82﹕18的乙腈和水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得100％浓度的回收率样品溶液(1mg/mL)；80％回收率样品溶液：精密称取羟基脲对照品20mg，空白辅料11mg，置25mL量瓶中，加体积比为82﹕18的乙腈和水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得80％回收率样品溶液(0.8mg/mL)；120％回收率样品溶液：精密称取羟基脲对照品30mg，空白辅料11mg，置25mL量瓶中，加体积比为82﹕18的乙腈和水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得120％回收率样品溶液(1.0mg/mL)。每个浓度平行配制3个样品。
表3回收率测试结果
Figure BDA0002349761010000131
Figure BDA0002349761010000141
由表3可知，在0.8～1.2mg/mL(80％～120％)，平均回收率为99.47％，RSD值为0.65％，该检测方法回收率良好。
实验例2
重复性
为了验证本发明的检测方法的重复性，按照实施例1的检测方法，平行配制6份约含羟基脲1mg/mL的供试品溶液，检测计算含量，考察方法重复性。
其中，供试品溶液的配制方法为：精密称取羟基脲胶囊内容物适量，采用流动相(体积比为82﹕18的乙腈和水)溶解并稀释制成相当于羟基脲1mg/mL的供试品溶液，平行配制6份，作为重复性样品溶液。
6份样品溶液的色谱检测结果如图13所示。根据实施例4的含量的检测方法，分别计算6份样品溶液的平均含量为100.07％，RSD值为0.26％，说明了方法重复性良好。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.羟基脲及其制剂的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
采用高效液相色谱对供试品溶液进行检测；所述高效液相色谱检测的条件包括：
色谱柱为氨基柱；所述色谱柱的柱温为35～45℃；
采用流动相进行等度洗脱，所述流动相包括体积比为(80～84)﹕(20～16)的乙腈和水。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测器包括电喷雾检测器和蒸发光检测器中的任一种；
优选的，所述高效液相色谱的检测器为电喷雾检测器。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，包括对所述供试品中的羟基脲含量的检测和/或对所述供试品中的有关物质及其含量的检测；
优选的，所述有关物质包括盐酸羟胺、脲和/或羟基脲降解物；
优选的，所述羟基脲降解物为羟基脲经降解反应得到的物质；所述降解反应包括酸降解反应、碱降解反应、氧化降解反应、高温降解反应和/或光照降解反应。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述供试品选自含羟基脲的原料或制剂；
优选的，所述含羟基脲的制剂包括羟基脲片和羟基脲胶囊的任一种。
5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述流动相包括体积比为82﹕18的乙腈和水。
6.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述洗脱的流速为0.8～1.2mL/min，优选为1mL/min。
7.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件包括：
所述色谱柱的柱温为40℃；
所述流动相包括体积比为82﹕18的乙腈和水；
所述高效液相色谱的检测器为电喷雾检测器；
所述等度洗脱的流速为1.0mL/min。
8.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，将同体积的供试品溶液和对照品溶液分别采用高效液相色谱进行检测，根据高效液相色谱检测结果分析羟基脲和/或其有关物质；
和/或，将同体积的供试品溶液和对照品溶液分别采用高效液相色谱进行检测，采用外标法对供试品溶液中的羟基脲和/或其有关物质进行计算；
可选的，所述对照品包括羟基脲对照品和/或盐酸羟胺对照品和/或脲对照品。
9.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述对供试品中羟基脲含量的检测，包括如下步骤：
将羟基脲标准系列工作溶液分别注入高效液相色谱仪中，在与供试品溶液相同的色谱条件下测定相应的色谱峰面积，以标准系列工作溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；
根据供试品溶液的色谱图得到供试品溶液中羟基脲对应的色谱峰面积，代入标准曲线计算得到所述供试品溶液中羟基脲的浓度。
10.权利要求1-9任一项所述的检测方法在含羟基脲的原料或制剂的质量控制中的应用。
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