CN112457381A

CN112457381A - 一种转录因子MaMYB44及其在激活MaGBSSI-3基因上调表达中的应用

Info

Publication number: CN112457381A
Application number: CN202011455785.3A
Authority: CN
Inventors: 苗红霞; 孙佩光; 金志强; 徐碧玉; 刘菊华; 赵东方
Original assignee: Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Current assignee: Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Priority date: 2020-12-10
Filing date: 2020-12-10
Publication date: 2021-03-09

Abstract

本发明提供了一种转录因子MaMYB44，其是由核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的基因编码的蛋白质。本发明还提供了转录因子MaMYB44的编码基因和应用。本发明的转录因子MaMYB44能够与香蕉果实直链淀粉合成酶基因MaGBSSI‑3启动子区结合互作，激活MaGBSSI‑3基因上调表达，例如将转录因子MaMYB44基因和MaGBSSI‑3基因启动子导入香蕉果实中，双荧光素酶活性检测、GUS染色及其表达量分析均发现MaGBSSI‑3基因被显著激活上调表达，这对调控淀粉含量或提高作物产量、改善淀粉品质、培育优质香蕉新品种具有重要意义，为改良香蕉或其他植物淀粉品质提供了候选转录因子资源。

Description

一种转录因子MaMYB44及其在激活MaGBSSI-3基因上调表达中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种转录因子MaMYB44及其在激活MaGBSSI-3基因上调表达中的应用。

背景技术

淀粉是影响香蕉产量、品质、营养和风味的关键因子，而淀粉合成酶(Granule-bound starch synthase，GBSS)是决定淀粉合成的关键酶之一。目前，GBSSI基因表达模式已在香蕉(匡云波和赖钟雄,2012；Miao et al.,2014)、水稻(Zhou et al.,2016；Zhang etal.,2019)、玉米(Zeng et al.,2015)、小麦(陈虎等,2017)、马铃薯(杨素等,2018)等多种作物中报道，但该基因在淀粉生物合成中表达调控的机制还不清楚。

MYB(v-myb avian myeloblastosis viral oncogene homolog)转录因子在植物中广泛存在，其参与植物生长发育、代谢、胁迫响应、花色素合成等多重生物过程的表达调控(Mccarthy et al.,2010；Petroni et al.,2011；Yang et al.,2012；James et al.,2017；Zhang et al.,2019)，但未见MYB转录因子能够与GBSSI基因互作且参与淀粉合成的相关报道。因此，开展香蕉MYB转录因子与香蕉GBSSI基因的研究对调控淀粉合成或提高作物产量、改善淀粉品质、培育优质香蕉新品种具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种可激活香蕉果实直链淀粉合成酶基因MaGBSSI-3上调表达的转录因子MaMYB44及其编码基因和应用。

本发明的第一个方面是提供一种转录因子MaMYB44，其是由核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示的基因编码的蛋白质。

本发明的第二个方面是提供一种转录因子MaMYB44基因，其核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示。

本发明的第三个方面是提供一种重组载体，其包含原始载体和本发明第二个方面所述的转录因子MaMYB44基因。

其中，所述原始载体可以采用基因重组领域中常用的载体，例如病毒、质粒等。本发明对此不进行限定。在本发明的一个具体实施方式中，所述原始载体采用pGreenII 62SK载体质粒，但应当理解的是，本发明还可以采用其他质粒、或者病毒等。

优选地，所述原始载体为pGreenII 62SK载体质粒，SEQ ID NO:1所示核苷酸序列位于pGreenII 62SK载体质粒的Sac I和EcoR I两限制性内切酶位点之间。

本发明的第四个方面是提供如本发明第一个方面所述的转录因子MaMYB44、或者本发明第二个方面所述的转录因子MaMYB44基因、或者本发明第三个方面所述的重组载体在激活香蕉果实直链淀粉合成酶基因MaGBSSI-3上调表达中的应用。

其中，本发明第一个方面所述的转录因子MaMYB44与香蕉果实直链淀粉合成酶基因MaGBSSI-3启动子互作，从而激活香蕉果实直链淀粉合成酶基因MaGBSSI-3上调表达。

关于香蕉果实直链淀粉合成酶基因MaGBSSI-3启动子，其已在“申请号：201610477933.9，发明名称：驱动直链淀粉合成酶基因GBSSI-3在香蕉果实中特异表达的启动子及其应用”的中国专利中公开，其核苷酸序列如该专利核苷酸序列表的SEQ ID NO:1所示，具体参见该专利。

本发明的第五个方面是提一种用于扩增转录因子MaMYB44基因的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。

本发明的转录因子MaMYB44能够与香蕉果实直链淀粉合成酶基因MaGBSSI-3启动子区结合，能够与MaGBSSI-3基因启动子互作，激活MaGBSSI-3基因上调表达，例如将转录因子MaMYB44基因和香蕉果实直链淀粉合成酶基因MaGBSSI-3启动子导入香蕉果实中，双荧光素酶活性检测、GUS染色及其表达量分析均发现香蕉果实直链淀粉合成酶基因MaGBSSI-3被显著激活上调表达，这对调控淀粉含量或提高作物产量、改善淀粉品质、培育优质香蕉新品种具有重要意义，为改良香蕉或其他植物淀粉品质提供了候选转录因子资源。

附图说明

图1为MaGBSSI-3基因启动子自激活和酵母单杂交验证，A：MaGBSSI-3基因启动子自激活实验，B：MaMYB44与MaGBSSI-3基因启动子酵母单杂交互作验证。p53 promoter：阳性对照启动子，MaGBSSI-3promoter：MaGBSSI-3基因启动子，AD-Rec-p53+p53 promoter：阳性对照组合，AD+Empty-MaGBSSI-3promoter：阴性对照组合，MaMYB44+MaGBSSI-3promoter：转录因子MaMYB44和MaGBSSI-3基因启动子互作验证。

图2为MaGBSSI-3promoter全长克隆和pGreenII 0800-MaGBSSI-3promoter双酶切验证电泳图，A：为MaGBSSI-3promoter全长克隆电泳结果图，B：为pGreenII 0800-MaGBSSI-3promoter双酶切验证电泳结果图，M：DL2000 DNA Marker，泳道1：为MaGBSSI-3promoter全长克隆电泳结果，泳道2：为pGreenII 0800-MaGBSSI-3promoter重组质粒Xho I和Sma I双酶切电泳结果。

图3为MaMYB44全长克隆和pGreenII 62SK-MaMYB44双酶切验证电泳结果图，A：MaMYB44全长克隆电泳结果图，B：为pGreenII 62SK-MaMYB44双酶切验证电泳结果图，M：DL2000 DNA Marker，泳道1：为MaMYB44全长克隆电泳结果，泳道2：为pGreenII 62SK-MaMYB44重组质粒Sac I和EcoR I双酶切电泳结果。

图4为pGreen-LUC-MaGBSSI-3promoter和pGreenII 62SK-MaMYB44载体构建模式图和LUC活性检测，A：pGreenII 0800-LUC-MaGBSSI-3promoter和pGreenII 62SK-MaMYB44载体构建模式图，B：LUC活性检测，SK：pGreenII 62SK载体，SK+MaMYB44：pGreenII 62SK-MaMYB44载体。

图5为GUS基因全长克隆和pGreenII 0800-GUS-MaGBSSI-3Promoter双酶切验证电泳图，A：GUS基因全长克隆电泳结果图，B：为pGreenII 0800-GUS-MaGBSSI-3Promoter双酶切电泳结果图，M：DL2000 DNA Marker，泳道1：为GUS基因全长克隆电泳结果，泳道2：为pGreenII 0800-GUS-MaGBSSI-3Promoter重组质粒Spe I和Xba I双酶切电泳结果。

图6为MaMYB44和MaGBSSI-3启动子共浸染香蕉果实薄片后GUS染色及其表达量分析结果，A：MaMYB44和MaGBSSI-3启动子共浸染香蕉果实薄片后GUS染色图，B：GUS基因相对表达量分析结果，SK+MaGBSSI-3Pro：pGreenII 62SK载体质粒和pGreenII 0800-GUS-MaGBSSI-3Promoter载体质粒共转化，SK+MaMYB44+MaGBSSI-3Pro：pGreenII 62SK-MaMYB44载体质粒和pGreenII 0800-GUS-MaGBSSI-3Promoter载体质粒共转化。

具体实施方式

下面参照附图，结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，以更好地理解本发明。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

一、基因获得

1、香蕉转录因子MaMYB44基因的获得

以巴西蕉果实cDNA为模板，以

5’-ATGGCGGCGGCGGCGGCGGCGAC-3’，和

5’-CTACTCGATCTTTGTGATGCCGAT-3’，

为引物，通过PCR方法扩增获得的一种含有碱基序列为1,116bp，其序列如SEQ IDNo:1所示。

二、酵母单杂交

1、酵母单杂交文库的构建与筛选

应用RNA提取试剂盒(TIANGEN Biotech)提取抽蕾后0、20和80d巴西蕉果肉中总RNA，然后通过Mathchmaker^TM酵母单杂交试剂盒(Clontech,Mountain View,CA)构建cDNA文库，并装载于猎物载体pGADT7-Rec(Clontech)。MaGBSSI-3启动子质粒经Sac I和Xho I双酶切、回收、连接，构建于诱饵载体pAbAi(Clontech)。将携带cDNA文库的pGADT7-Rec猎物载体和携带MaGBSSI-3启动子序列的pAbAi诱饵载体共转化Y1HGold酵母菌株(Clontech)，在SD/-Leu+AbA¹⁰⁰筛选培养基上30℃培养3d。通过PCR检测、测序分析以及香蕉A基因组数据库比对注释，获得候选转录因子MaMYB44。

2、MaGBSSI-3启动子自激活实验及其与转录因子MaMYB44互作验证为进一步验证MaGBSSI-3启动子与MaMYB44互作，MaGBSSI-3启动子自激活活性在pAbAi SD/-Ura+AbA¹⁰⁰培养基上被验证，见图1A，在选择培养基SD/-Ura+AbA¹⁰⁰上，pAbAi-MaGBSSI-3promoter菌株不能生长，说明MaGBSSI-3启动子没有自激活活性。

通过构建转录因子MaMYB44基因于猎物载体pGADT7-AD，MaGBSSI-3启动子于诱饵载体pAbAi，然后共转化酵母菌株Y1 HGold(Clontech)，在SD/-Leu+AbA¹⁰⁰筛选培养基上于30℃培养3d，见图1B，pGADT7AD-MaMYB44+pAbAi-MaGBSSI-3promoter菌株能够正常生长，说明MaMYB44能够与MaGBSSI-3启动子互作。

三、重组载体的构建

1、用于双荧光素酶活性检测的pGreenII 0800-LUC-MaGBSSI-3promoter载体

将MaGBSSI-3基因启动子的核苷酸序列，利用Xho I和Sma I两种限制性内切酶分别对目的片段及pGreenII 0800载体质粒双酶切，将酶切后的目的片段与pGreenII 0800载体片段进行回收、连接、转化及测序验证正确，即得香蕉果实直链淀粉合成酶基因MaGBSSI-3启动子载体pGreenII 0800-LUC-MaGBSSI-3promoter(图2)。

2、用于GUS染色的pGreenII 0800-GUS-MaGBSSI-3promoter载体

GUS基因存在于大肠杆菌等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶，可水解β-葡萄糖苷酸酯类物质，生成产物为蓝色。含有报告基因GUS的农杆菌瞬时转化香蕉薄片后，依据GUS染色的深浅程度和GUS基因的表达量可以判断启动子的活性。采用已知的GUS基因序列(GenBank登录号：MN266288.1；SEQ ID NO:4)，利用Spe I和Xba I两种限制性内切酶分别对GUS基因片段及pGreenII 0800载体质粒中LUC基因片段进行双酶切，用GUS基因片段替换LUC基因片段。将酶切后的GUS基因片段与pGreenII 0800载体片段进行回收、连接、转化及测序验证正确，即得香蕉果实直链淀粉合成酶基因MaGBSSI-3启动子载体pGreenII 0800-GUS-MaGBSSI-3promoter(图5)。

3、pGreenII 62SK-MaMYB44载体

将上述香蕉转录因子MaMYB44基因的核苷酸序列，利用Sac I和EcoR I两种限制性内切酶分别对目的片段及pGreenII 62SK载体质粒双酶切，将酶切后的目的片段与pGreenII 62SK载体片段进行回收、连接、转化及测序验证正确，即得香蕉转录因子MaMYB44基因的pGreenII 62SK-MaMYB44载体(图3)。

四、pGreenII 0800-LUC-MaGBSSI-3promoter载体和pGreenII 62SK-MaMYB44载体共转化至香蕉果实薄片及其双荧光素酶(LUC)活性检测方法

1、pGreenII 0800-LUC-MaGBSSI-3promoter载体的农杆菌转化

取200μL冰浴上融化的根癌农杆菌GV3101感受态细胞，加入pGreenII 0800-LUC-MaGBSSI-3promoter重组质粒2μg，轻轻混匀，在冰浴中放置30min；转入液氮中冷冻3min，迅速置37℃水浴中温育5min；加入800μL YEP液体培养基，28℃，250rpm预培养4～5h；吸取300μL菌液至含有50mg/L Rif的YEP固体选择培养基上，均匀涂布于整个平板；将平板置于28℃至液体被吸收，倒置平板，28℃培养2～3d，挑选单菌落，验证检测，将转化正确的农杆菌菌液用于下一步实验。

2、pGreenII 62SK-MaMYB44载体的农杆菌转化

取200μL冰浴上融化的根癌农杆菌GV3101感受态细胞，加入pGreenII 62SK-MaMYB44重组质粒2μg，轻轻混匀，在冰浴中放置30min；转入液氮中冷冻3min，迅速置37℃水浴中温育5min；加入800μL YEP液体培养基，28℃，250rpm预培养4～5h；吸取300μL菌液至含有50mg/L Rif的YEP固体选择培养基上，均匀涂布于整个平板；将平板置于28℃至液体被吸收，倒置平板，28℃培养2～3d，挑选单菌落，验证检测，将转化正确的农杆菌菌液用于下一步实验。

3、根癌农杆菌介导香蕉果实薄片遗传转化

在超净工作台上将香蕉果实薄片(厚度1mm)浸泡于5mL 75％乙醇的无菌离心管中1min，浸泡期间充分晃动；然后用无菌水冲洗3次；20％次氯酸钠溶液浸泡15min，浸泡期间充分晃动；用无菌水冲洗3次。将pGreenII 0800-LUC-MaGBSSI-3promoter启动子载体菌液与pGreenII 62SK-MaMYB44转录因子载体菌液按照1:7体积比到10mL含有50mg/L kan的YEP液体培养基中过夜活化培养；吸取活化培养的菌液1mL到新的50mL含有50mg/L kan的YEP液体培养基中培养至OD600＝0.6；将所需浓度的菌液于超净工作台上转移到50mL无菌离心管中，4℃，6000rpm离心5min，弃去上清液，加入等体积(离心前菌液体积)的MS液体培养基将菌体重新悬浮；将菌液转移到100mL无菌三角瓶中，加入0.1％体积(重悬菌液体积)的乙酰丁香酮(AS)，充分混匀，然后将香蕉果实薄片转移至农杆菌菌液中浸泡15min，期间摇动菌液使果实薄片与菌液充分接触；将薄片取出置于无菌滤纸上，吸干薄片表面多余的菌液，然后将其转移到含有乙酰丁香酮的MS培养基上，25℃培养3d；将共培养的香蕉果实薄片用于双荧光素酶活性检测。

4、双荧光素酶活性检测方法

应用Dual-LUC Reporter分析系统检测共培养3d的香蕉果实薄片中荧光素酶和REN-LUC活性，实验三次重复。首先在冰上研磨香蕉果实薄片呈浆，等体积加入细胞裂解液，充分混匀。冰上孵育5min，充分裂解细胞。13000rpm离心1min，取上清。取20μL细胞裂解液，加至黑色酶标板中，设置3孔重复。配制萤火虫荧光素酶(LUC)反应工作液和海肾荧光素酶(REN)反应液，即LUC底物(50X)和REN底物(50X)分别用对应的缓冲液稀释至1倍工作液。并孵育至25℃。加入100μL LUC反应液，震板混匀，检测LUC的活力，检测尽量在30min内完成。加入100μL REN反应液，震板混匀，检测REN的活力，检测尽量在30min内完成。计算LUC/REN比值，得到相对LUC活性。结果如图4所示，在只有MaGBSSI-3promoter存在的条件下(SK)，LUC相对活性为1.0，在MaMYB44和MaGBSSI-3promoter同时存在的条件下，LUC相对活性为1.5，MaMYB44和MaGBSSI-3启动子共侵染香蕉果实薄片后LUC活性显著高于对照，说明MaMYB44转录因子与MaGBSSI-3启动子互作后对启动子驱动的LUC活性产生了正调控影响，MaMYB44转录因子激活了MaSBE2.3基因上调表达。

五、pGreenII 0800-GUS-MaGBSSI-3 promoter载体和pGreenII 62SK-MaMYB44载体共转化香蕉果实薄片及其GUS染色方法

1、pGreenII 0800-GUS-MaGBSSI-3 promoter载体的农杆菌转化

取200μL冰浴上融化的根癌农杆菌GV3101感受态细胞，加入pGreenII 0800-GUS-MaGBSSI-3promoter重组质粒2μg，轻轻混匀，在冰浴中放置30min；转入液氮中冷冻3min，迅速置37℃水浴中温育5min；加入800μL YEP液体培养基，28℃，250rpm预培养4～5h；吸取300μL菌液至含有50mg/L Rif的YEP固体选择培养基上，均匀涂布于整个平板；将平板置于28℃至液体被吸收，倒置平板，28℃培养2～3d，挑选单菌落，验证检测，将转化正确的农杆菌菌液用于下一步实验。

2、pGreenII 62SK-MaMYB44载体的农杆菌转化

同“四、pGreenII 0800-LUC-MaGBSSI-3promoter载体和pGreenII 62SK-MaMYB44载体转化至香蕉果实薄片及双荧光素酶(LUC)活性检测方法”中的“2、pGreenII 62SK-MaMYB44载体的农杆菌转化”。

3、根癌农杆菌介导香蕉果实薄片遗传转化

在超净工作台上将香蕉果实薄片(厚度1mm)浸泡于5mL 75％乙醇的无菌离心管中1min，浸泡期间充分晃动；然后用无菌水冲洗3次；20％次氯酸钠溶液浸泡15min，浸泡期间充分晃动；用无菌水冲洗3次。将pGreenII 0800-GUS-MaGBSSI-3promoter启动子载体菌液与pGreenII 62SK-MaMYB44转录因子载体菌液按照1:4体积比到10mL含有50mg/L kan的YEP液体培养基中过夜活化培养；吸取活化培养的菌液1mL到新的50mL含有50mg/L kan的YEP液体培养基中培养至OD600＝0.6；将所需浓度的菌液于超净工作台上转移到50mL无菌离心管中，4℃，6000rpm离心5min，弃去上清液，加入等体积(离心前菌液体积)的MS液体培养基将菌体重新悬浮；将菌液转移到100mL无菌三角瓶中，加入0.1％体积(重悬菌液体积)的乙酰丁香酮(AS)，充分混匀，然后将香蕉果实薄片转移至农杆菌菌液中浸泡15min，期间摇动菌液使果实薄片与菌液充分接触；将薄片取出置于无菌滤纸上，吸干薄片表面多余的菌液，然后将其转移到含有乙酰丁香酮的MS培养基上，25℃暗培养3d；样品液氮速冻后-80℃冰箱保存备用。

4、GUS染色

香蕉薄片GUS染色采用GUS染色试剂盒(Real-Times,China)。香蕉果实薄片瞬时转化3d后，选取大小相近的薄片置于离心管中，加入配置好的GUS染液，染液要浸没香蕉果实薄片。将离心管不封口置于真空抽气装置内，抽气15min，封上离心管口，锡纸包裹；37℃暗培养3d；无水乙醇脱色1h。

5、GUS基因表达量检测

取-80℃冰箱保存的香蕉果实薄片，提取RNA反转录cDNA，进行GUS基因表达量检测。引物序列为qGUS-F:5’-CAGTGAAGGGCGAACAGT-3’和qGUS-R:5’-CGAAACCAATGCCTAAAGA-3’。选用SYBR Green PCR试剂盒(TaKaRa)进行QRT-PCR验证，反应体系为：2×QuantiNovaSYBR Green PCR Mix 10μL、cDNA模板1μL、Rox染料0.5μL、qGUS-F 1μL、qGUS-R1μL、ddH₂O6.5μL。置于实时荧光定量PCR仪(Stratagene MX3005P)上进行QRT-PCR反应，反应程序为：95℃3min；95℃20s、57℃20s、72℃30s。结果如图6所示，MaMYB44和MaGBSSI-3启动子共侵染香蕉果实薄片后GUS染色深于对照组，MaMYB44和MaGBSSI-3启动子共侵染香蕉果实薄片后GUS基因相对表达量为40，对照组GUS基因相对表达量为15，说明MaMYB44转录因子与MaGBSSI-3启动子互作后，对MaGBSSI-3启动子驱动的GUS基因的表达及染色情况有正调控影响；与双荧光素酶(LUC)活性检测结果相一致，MaMYB44转录因子激活了MaSBE2.3基因上调表达。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

序列表

<110> 中国热带农业科学院热带生物技术研究所

<120> 一种转录因子MaMYB44及其在激活MaGBSSI-3基因上调表达中的应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1116

<212> DNA

<213> Artificial

<400> 1

atggcggcgg cggcggcggc gacgacggtg gtgagtaggt tcaacgatgt ggatcggatc 60

aaggggccgt ggagcccgga ggaggacgat gcgctgcaga agctggtgca gcgccacggc 120

ccgaggaact ggtcgcttat aagcaaatcg atcccgggta ggtcggggaa gtcgtgccgg 180

ctccggtggt gcaaccagct gtcgccgcag gtggagcacc gcccgttcac gcccgaggag 240

gatgagacca tcatccgcgc ccaccgtcgc ttcggcaaca agtgggcgac tatcgcccgc 300

ctcctgtcgg gccggactga caacgccgtc aagaaccact ggaactccac cctcaagcgg 360

aggtactcgg cctccgccac cgccgttgcc gtcgatggtg ggttcgtcgc agcggcggaa 420

ctcgagcccg tgccggagcg gcggctcaaa aagacgtgca gcgacgggcc gctcctctcg 480

tcggacggtg cagggctctg cttgagcccc ggaagcccat cggagtccga tctcagtgat 540

tctagctacc acagccatcc gatgatctct ccggtctcca ccggttcgca catctaccga 600

ccggtgccga gaaccggagc cgtcgtactc ccatcctcat ccacaccaaa ccaccaccat 660

ccgacggagc cttctgccgc agccgcagcc acctcctgct ccccagagat cgtagaagat 720

ccggtgacat ccctcaccct ctccctccct ggatccgatc cgatggacac ctgcaatgac 780

cgccacagcg ccgacaacga cggcaacggt cagaaaccgc tcgagcttct tccatctgtg 840

ccgatgcccc tgcaggcgcg gccatcgtct tcaaagacga ggtccgccga ggccaccggt 900

gcaaccccct gttgtaagga agaacagggg tggcacgcgc cgtgtccctt cggcgcggag 960

ttcttggcgg cgatgcagga gctgatccga aaggaggtga ggagctacat gtccagcttg 1020

gagcagagcg gtatgatgtg tacgcggttt ccactgccgc cggagagcgt tcttaatgcc 1080

ggtattaggc ggatcggcat cacaaagatc gagtag 1116

<210> 2

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial

<400> 2

atggcggcgg cggcggcggc gac 23

<210> 3

<211> 24

<212> DNA

<213> Artificial

<400> 3

ctactcgatc tttgtgatgc cgat 24

<210> 4

<211> 1812

<212> DNA

<213> Artificial

<400> 4

atgttacgtc ctgtagaaac cccaacccgt gaaatcaaaa aactcgacgg cctgtgggca 60

ttcagtctgg atcgcgaaaa ctgtggaatt gatcagcgtt ggtgggaaag cgcgttacaa 120

gaaagccggg caattgctgt gccaggcagt tttaacgatc agttcgccga tgcagatatt 180

cgtaattatg cgggcaacgt ctggtatcag cgcgaagtct ttataccgaa aggttgggca 240

ggccagcgta tcgtgctgcg tttcgatgcg gtcactcatt acggcaaagt gtgggtcaat 300

aatcaggaag tgatggagca tcagggcggc tatacgccat ttgaagccga tgtcacgccg 360

tatgttattg ccgggaaaag tgtacgtatc accgtttgtg tgaacaacga actgaactgg 420

cagactatcc cgccgggaat ggtgattacc gacgaaaacg gcaagaaaaa gcagtcttac 480

ttccatgatt tctttaacta tgccggaatc catcgcagcg taatgctcta caccacgccg 540

aacacctggg tggacgatat caccgtggtg acgcatgtcg cgcaagactg taaccacgcg 600

tctgttgact ggcaggtggt ggccaatggt gatgtcagcg ttgaactgcg tgatgcggat 660

caacaggtgg ttgcaactgg acaaggcact agcgggactt tgcaagtggt gaatccgcac 720

ctctggcaac cgggtgaagg ttatctctat gaactgtgcg tcacagccaa aagccagaca 780

gagtgtgata tctacccgct tcgcgtcggc atccggtcag tggcagtgaa gggcgaacag 840

ttcctgatta accacaaacc gttctacttt actggctttg gtcgtcatga agatgcggac 900

ttgcgtggca aaggattcga taacgtgctg atggtgcacg accacgcatt aatggactgg 960

attggggcca actcctaccg tacctcgcat tacccttacg ctgaagagat gctcgactgg 1020

gcagatgaac atggcatcgt ggtgattgat gaaactgctg ctgtcggctt taacctctct 1080

ttaggcattg gtttcgaagc gggcaacaag ccgaaagaac tgtacagcga agaggcagtc 1140

aacggggaaa ctcagcaagc gcacttacag gcgattaaag agctgatagc gcgtgacaaa 1200

aaccacccaa gcgtggtgat gtggagtatt gccaacgaac cggatacccg tccgcaaggt 1260

gcacgggaat atttcgcgcc actggcggaa gcaacgcgta aactcgaccc gacgcgtccg 1320

atcacctgcg tcaatgtaat gttctgcgac gctcacaccg ataccatcag cgatctcttt 1380

gatgtgctgt gcctgaaccg ttattacgga tggtatgtcc aaagcggcga tttggaaacg 1440

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tggagtgaag agtatcagtg tgcatggctg gatatgtatc accgcgtctt tgatcgcgtc 1620

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ttgcgcgttg gcggtaacaa gaaagggatc ttcactcgcg accgcaaacc gaagtcggcg 1740

gcttttctgc tgcaaaaacg ctggactggc atgaacttcg gtgaaaaacc gcagcaggga 1800

ggcaaacaat aa 1812

Claims

1.一种转录因子MaMYB44，其特征在于，其是由核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的基因编码的蛋白质。

2.一种转录因子MaMYB44基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.一种重组载体，其特征在于，其包含原始载体和权利要求2所述的转录因子MaMYB44基因。

4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述原始载体为pGreenII62SK载体质粒，SEQ ID NO:1所示核苷酸序列位于pGreenII 62SK载体质粒的Sac I和EcoR I两限制性内切酶位点之间。

5.如权利要求1所述的转录因子MaMYB44、或者权利要求2所述的转录因子MaMYB44基因、或者权利要求3或4所述的重组载体在激活香蕉果实直链淀粉合成酶基因MaGBSSI-3上调表达中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，权利要求1所述的转录因子MaMYB44与香蕉果实直链淀粉合成酶基因MaGBSSI-3启动子互作。

7.一种用于扩增转录因子MaMYB44基因的引物对，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ IDNO:2和SEQ ID NO:3所示。