CN112457364A - 一种鱿鱼小分子肽的制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种制备鱿鱼小分子肽的方法；所述方法通过超微粉碎、亚临界水提取和酶解等手段，提高鱿鱼肽和鱿鱼小分子肽提取率，所述方法所需酶加入量少，成本低，制备时间快，环境友好；所述方法所得鱿鱼肽小分子分子量小，羟自由基清除率高，易于吸收，有很好的抗氧化、抗衰老或保健效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种水产品深加工领域，具体涉及一种鱿鱼小分子肽的制备方法和用途。
背景技术
鱿鱼是软体动物门头足纲鞘亚纲枪形目柔鱼科、枪乌贼科软体动物的俗称。全世界大洋洲鱿鱼总资源量约为4.2×108-6.5×108吨，广泛分布于大西洋、印度洋及太平洋等海域。随着远洋渔业的发展，鱿鱼渔业成为近年来最热门的产业之一。我国是鱿鱼捕捞加工大国，我国每年鱿鱼的捕捞数量超过50万吨。鱿鱼营养丰富，鱿鱼中蛋白质含量可高达15-19％，是一种优良的水产品蛋白质资源。然而，目前，鱿鱼加工以粗加工为主，市场上的产品主要是鱿鱼休闲食品如鱿鱼干、鱿鱼罐头、鱿鱼烧烤制品等，产品类型单一，产品附加值低。因此高附加值鱿鱼肽的开发成为研究的热点。
目前，从鱿鱼中获得活性肽的方法，有酸碱处理法、酶分解法、微生物发酵法等。
专利CN102217699B，公开了一种鱿鱼皮蛋白活性肽的制备方法，将鱿鱼皮洗净剪成块状，加入NaOH水溶液浸泡2-8d进行脱色，再经水洗至pH中性，加入Ca(OH)2溶液浸泡2-4d进行固色，再经水洗至pH中性，在55-75℃的pH中性水中处理0.5-1.5h过滤，除去不溶性蛋白，提取得到鱼皮蛋白液，最后，将该液于110-121℃高压处理30-120min，既得鱿鱼皮蛋白活性肽，该方法的制备时间太长。
专利CN 106244657 A公开了一种鱿鱼抗氧化多肽及其制备方法和应用，该专利利用蛋白酶酶解鱿鱼肉糜后，过滤膜过滤，透析袋除杂，冻干机干燥后得到鱿鱼肽样品。该类型提取方法，反应条件温和，避免酸碱提取造成的环境污染，具有一定的优越性。然而，鱿鱼肉蛋白质主要由肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、肌基质蛋白和副肌球蛋白组成，在中性提取条件下，蛋白质难以从鱿鱼肉提取出来，鱿鱼肽的提取率低于10％，所得鱿鱼肽的羟自由基清除率低，制备时间长，且采用冻干机干燥，需要用到大量的蛋白酶，成本过高。
专利CN 103947818 B公开了一种鱿鱼活性肽的制备方法，该专利利用超声波提取鱿鱼大分子肽，高压技术降解鱿鱼大分子肽，得到鱿鱼肽样品。该类型制备方法提取率高于单一的蛋白酶提取法，但该专利需要用到大量碱溶液和水资源，不环保，且发明人发现该专利采用的降解多肽链的技术难以得到分子量较集中的小分子肽，所制备得到的鱿鱼肽的羟自由基清除率低，分子量太大，人体难以吸收。
故，亟待开发一种提取率高、环境友好、成本低、制备时间快的鱿鱼肽和鱿鱼小分子肽的制备方法。
发明内容
发明概述
本发明的第一个目的是提供一种制备鱿鱼肽的方法；所述方法通过湿法超微粉碎、亚临界水提取等手段，提高鱿鱼肽提取率，且其操作简单，制备时间快，环境友好，能解决现有技术中鱿鱼肽提取率低，制备时间长，操作复杂，不环保，成本高等问题。
本发明的第二个目的是提供一种制备鱿鱼小分子肽的方法，所述方法通过湿法超微粉碎、亚临界水提取，酶解等手段得到鱿鱼小分子肽；亚临界水提取和酶解能起到协同作用，所制备的鱿鱼小分子肽分子量小(小于1kDa)，所需酶加入量少，成本低，制备时间快，环境友好，所起到的技术效果远比采用单独的亚临界水提取或酶解要好，能解决现有技术中所得鱿鱼肽分子量大，羟自由基清除率低，所需酶加入量多，制备成本高，制备时间长，不环保等问题。
本发明的第三个目的是提供一种根据第二目的所述方法所制备的鱿鱼小分子肽，所述鱿鱼肽分子量小，羟自由基清除率高，易于吸收，有很好的抗氧化、抗衰老或保健效果。
本发明的第四个目的是提供一种第二目的中所述的鱿鱼小分子肽在制备用于抗氧化、抗衰老或保健的产品中的用途。
发明详述
第一方面，本发明提供一种制备鱿鱼肽的方法。
一种制备鱿鱼肽的方法，包括以下步骤：取去除内脏后的鱿鱼，粉碎，亚临界水提取；采用本方案所得鱿鱼肽提取率高，操作简单，制备时间快，环境友好。
根据本发明的一些实施例，一种制备鱿鱼肽的方法，包括以下步骤：取去除内脏后的鱿鱼，粉碎，亚临界水提取；所述粉碎包括微纳米化超微粉碎；或者所述粉碎所得物料的粒度为10-100μm；采用此方案采用超微粉碎或将鱿鱼湿法微纳米化粉碎至粒度为10-100μm，可以和亚临界水提取产生协同作用，所制备的鱿鱼肽提取率高，操作简单，制备时间快，环境友好。
第二方面，本发明天提供一种制备鱿鱼小分子肽的方法。
一种制备鱿鱼小分子肽的方法，包括：取去除内脏后的鱿鱼，粉碎，亚临界水提取，在亚临界水提取后，加入蛋白酶进行酶解，经后处理，得到鱿鱼小分子肽；本方案中亚临界水提取和酶解能起到协同作用，所制备的鱿鱼小分子肽分子量小，所需酶加入量少，成本低，制备时间快，环境友好，所起到的技术效果远比采用单独的亚临界水提取或酶解要好。
所述粉碎可以包括物料湿法微纳米化超微粉碎；采用湿法微纳米化超微粉碎，有利于鱿鱼肽或鱿鱼小分子肽的提取和酶解。
所述微纳米化超微粉碎所得物料的粒度可以为2-100μm；采用粉碎至此粒度范围的方式，有利于鱿鱼肽或鱿鱼小分子肽的提取和酶解。在一些实施例中，所述微纳米化超微粉碎所得物料的粒度可以为10-100μm
所述蛋白酶可以包括选自木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、动物蛋白水解酶或菠萝蛋白酶中的至少一种。
所述后处理可以包括：离心，过滤，干燥。在一些实施例中，所述后处理包括：以5000-20000rpm转速离心，除去固体杂质，得到鱿鱼小分子肽溶液；用截留分子量为3-5kDa的超滤膜过滤鱿鱼小分子肽溶液，去除大分子杂质，所述超滤膜过滤的压力为0.5-2.0MPa，得到的透过液，用截留分子量为200-1000Da的纳滤膜过滤透过液，脱盐浓缩，得到鱿鱼小分子肽浓缩液，所述纳滤膜过滤的压力为5.0-6.0MPa；利用喷雾干燥工艺干燥鱿鱼小分子肽浓缩液，得到鱿鱼小分子肽；喷雾干燥工艺条件为，出风温度70℃，进风温度140℃。
所述离心的转速可以为5000-20000rpm；采用离心的方式，能除去酶解后溶液中的固体杂质。在一些实施例中，所述离心的转速为10000-15000rpm。
所述过滤可以包括超滤膜过滤和纳滤膜过滤；采用超滤膜过滤，能出去其中的大分子杂质；采用纳滤膜过滤，能脱除产品的盐分，减少产品灰分，提高产品纯度。
所述粉碎可以包括采用胶体磨进行湿法微纳米化超微粉碎。
所述采用胶体磨进行湿法微纳米化超微粉碎匀质化中所述去除内脏后的鱿鱼与水的质量比为1:1-1:10。优选地，所述采用胶体磨进行湿法微纳米化超微粉碎匀质化中所述去除内脏后的鱿鱼与水的质量比为1:2-1:10或1:2-1:8，进一步优选为1:2-1:5、1:2-1:6、1:2-1:4或1:2-1:3。
所述胶体磨的磨盘定转子间隙可以为0.01-0.05mm。在一些实施例中，所述胶体磨的磨盘定转子间隙为0.01-0.03mm。
所述胶体磨的转速可以为2000-4000rpm。在一些实施例中，所述胶体磨的转速可以为2800-3000rpm。
所述胶体磨的冷却水压力可以为0.12-0.16MPa。
所述胶体磨的水温15-30℃。
本发明所述的亚临界水，亚临界水既是溶媒也是反应剂，在亚临界环境下，水的密度随压力、温度的升高急剧增大，从而显著提高了水的溶剂化能力；另一方面，在亚临界的高温高压条件下，水的电离度、介电常数、粘度、离子活度积均发生了很大的变化，分子间氢键作用减弱，使得有机物的溶解度增大，显著催化加速了有机物与水发生的水解反应，从而实现从鱿鱼物料中高效提取出鱿鱼肽目标产物，并进一步与酶定向水解协同作用，实现鱿鱼小分子肽的制备。
优选地，所述亚临界水提取采用压力条件可以为0.2MPa-15MPa，进一步优选为0.5MPa-15MPa、1MPa-15MPa、5MPa-15MPa、1.5MPa-10MPa、1.5MPa-8MPa、1.5MPa-15MPa、2MPa-15MPa或2MPa-10MPa。
优选地，所述亚临界水提取采用温度条件为120℃至300℃，进一步优选为150℃至300℃、180℃至300℃、200℃至300℃、200℃至300℃或220℃至280℃。
作为一种优先方式，亚临界水提取的条件：所述亚临界水提取的压力为0.2-15MPa。所述亚临界水提取的温度可以为120-300℃。
优选地，所述亚临界水提取在设定压力与温度条件下保持时间为20-120min，进一步优选为15-100min、15-80min、15-60min、15-40min、15-30min或15-20min。
所述亚临界水提取的反应时间可以为20-120min。在一些实施例中，所述亚临界水提取的反应时间为20-60min。
所述酶的加入量可以为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的0.5wt％-5.0wt％。在一些实施例中，所述酶的加入量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的0.5wt％-3.0wt％。在一些实施例中，所述酶的加入量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的0.5wt％-1.0wt％。在一些实施例中，所述酶的加入量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的1.0wt％-2.0wt％。
所述酶解的酶解温度可以为30-60℃。在一些实施例中，所述酶解的酶解温度为45-55℃。
所述酶解的酶解pH值可以为5.0-8.0。在一些实施例中，所述酶解的酶解pH值可以为6.0-7.5。
所述酶解的酶解时间可以为1-8h。在一些实施例中，所述酶解的酶解时间为2-4h。
所述超滤膜的膜截留分子量可以为3-5kDa。
所述超滤膜过滤的压力可以为0.5-2.0MPa。
所述纳滤膜的膜截留分子量可以为200-1000Da。
所述纳滤膜过滤的压力可以为5.0-6.0MPa。
所述干燥可以包括喷雾干燥。
所述喷雾干燥的出风温度可以为70-85℃。
所述喷雾干燥进风温度可以为140-170℃。
根据本发明的一些实施例，一种制备鱿鱼小分子肽的方法，包括以下步骤：取去除内脏后的鱿鱼，粉碎，亚临界水提取；在亚临界水提取后，加入蛋白酶进行酶解，经后处理，得到鱿鱼小分子肽；本方案所采用亚临界水提取和酶解能起到协同作用，所制备的鱿鱼小分子肽分子量小，所需酶加入量少，成本低，制备时间快，环境友好，所起到的技术效果远比采用单独的亚临界水提取或酶解要好。
根据本发明的一些实施例，一种制备鱿鱼小分子肽的方法，包括以下步骤：取去除内脏后的鱿鱼，粉碎，亚临界水提取；在亚临界水提取后，加入蛋白酶进行酶解，经后处理，得到鱿鱼小分子肽；所述粉碎包括微纳米化超微粉碎；或者所述粉碎所得物料的粒度为10-100μm；本方案所采用超微粉碎或将鱿鱼湿法微纳米化超微粉碎至粒度为10-100μm，能与亚临界水提取和酶解起到协同作用，所制备的鱿鱼小分子肽分子量小，所需酶加入量少，成本低，制备时间快，环境友好，所起到的技术效果远比采用单独的亚临界水提取或酶解要好。
根据本发明的一些实施例，一种制备鱿鱼小分子肽的方法，包括以下步骤：取去除内脏后的鱿鱼，粉碎，亚临界水提取；在亚临界水提取后，加入蛋白酶进行酶解，经后处理，得到鱿鱼小分子肽；所述后处理可以包括：离心，过滤，干燥。
根据本发明的一些实施例，一种制备鱿鱼小分子肽的方法，包括以下步骤：取去除内脏后的鱿鱼，粉碎，亚临界水提取；在亚临界水提取后，加入蛋白酶进行酶解，经后处理，得到鱿鱼小分子肽；所述后处理可以包括：离心，过滤，干燥；所述酶的加入量可以为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的0.5wt％-3.0wt％或1.0wt％-2.0wt％；本方案所采用亚临界水提取和酶解能起到协同作用，所制备的鱿鱼小分子肽分子量小，所需酶加入量少，成本低，制备时间快，环境友好，所起到的技术效果远比采用单独的亚临界水提取或酶解要好。
根据本发明的一些实施例，一种制备鱿鱼小分子肽的方法，包括以下步骤：取去除内脏后的鱿鱼，粉碎，亚临界水提取；在亚临界水提取后，加入蛋白酶进行酶解，经后处理，得到鱿鱼小分子肽；所述后处理可以包括：离心，过滤，干燥；所述酶的加入量可以为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的0.5wt％-3.0wt％、0.5wt％-1.0wt％或1.0wt％-2.0wt％；所述酶解的酶解时间为2-4h；本方案所采用亚临界水提取和酶解能起到协同作用，所制备的鱿鱼小分子肽分子量小，所需酶加入量少，成本低，制备时间快，环境友好，所起到的技术效果远比采用单独的亚临界水提取或酶解要好。
第三方面，本发明提供一种前述任一方法所制备得到的鱿鱼小分子肽。
一种前述任一方法所制备得到的鱿鱼小分子肽；所述鱿鱼小分子肽分子量小，羟自由基清除率高，易于吸收，有很好的抗氧化、抗衰老或保健效果。
第四方面，本发明提供一种第二方面或第三方面所述鱿鱼小分子肽在制备用于抗氧化、抗衰老或保健的产品中的用途。
有益效果
相比现有技术，本发明包括具有以下有益技术效果：
1.由实施例1-4与对比例1的结果可知，采用超微粉碎或将鱿鱼湿法微纳米化超微粉碎至物料粒度为10-100μm，和亚临界水提取产生协同作用，所制备的鱿鱼肽提取率高于85％，操作简单，制备时间快，环境友好，适合规模化生产。
2.由实施例1-4与对比例2的结果可知，采用亚临界水提取能和酶解起到协同作用，所制备的鱿鱼小分子肽分子量小(小于1kDa)，所需酶加入量少，成本低，制备时间快，环境友好，所起到的技术效果远比采用单独的亚临界水提取或酶解要好。
3.由实施例1-4与对比例1-6的结果可知，采用超微粉碎或将鱿鱼湿法微纳米化超微粉碎至粒度为10-100μm，能与亚临界水提取和酶解产生协同作用，所制备的鱿鱼小分子肽分子量小(小于1kDa)，操作简单，制备时间快，环境友好，所需酶加入量少，成本低，所起到的技术效果远比采用单独的亚临界水提取或酶解要好。
4.采用超滤膜过滤和纳滤膜过滤可除去大分子杂质和盐份，提高所得鱿鱼小分子肽的纯度，提高其羟自由基清除率。
5.本发明所述方案所得鱿鱼小分子肽，分子量小于1kDa，有利于人体吸收，其抗氧活性高，安全性高，无毒副作用，可应用在营养保健品领域。
术语说明
本发明中，pH表示酸碱度；min表示分钟；kDa表示千道尔顿；Da表示道尔顿；MPa表示兆帕；μm表示微米；rpm表示转每分钟，为转速单位；mm表示毫米；h表示小时；kg表示千克。
本发明中，提取率为所得产物中肽与鱿鱼原料中的蛋白质的重量百分比。
本发明中，“wt％”表示重量百分比。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的技术方案。应理解，本发明提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本发明的示例性实施例。虽然显示了本发明的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。
实施例1
一种制备鱿鱼小分子肽的方法，包括以下步骤：
S1、取去除内脏后的鱿鱼10kg，切块，用胶体磨进行超微粉碎，所述去除内脏后的鱿鱼与水的质量比为1:2，胶体磨的磨盘定转子间隙为0.01mm，转速为2800rpm，冷却水压力为0.12MPa，水温15℃；粉碎后，得到超微粉碎或微纳米化粉碎的鱿鱼匀浆物料，所述鱿鱼匀浆物料的粒度为2μm；将所述鱿鱼匀浆物料进行亚临界水提取，所述亚临界水提取的压力为0.2MPa，所述亚临界水提取的温度为120℃，所述亚临界水提取时间为60min，得到鱿鱼大分子肽溶液，鱿鱼大分子肽的提取率为86％。
S2、取S1中所得鱿鱼大分子肽溶液，加入动物蛋白水解酶进行酶解，所述动物蛋白水解酶的加入量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的3.0wt％，所述酶解的酶解温度45℃，所述酶解的酶解pH值6.0，所述酶解的时间为3h，得到酶解液；以10000rmp转速离心酶解液，除去固体杂质，得到鱿鱼小分子肽溶液。用截留分子量为5kDa的超滤膜过滤鱿鱼小分子肽溶液，去除大分子杂质，所述超滤膜过滤的压力为0.5MPa，得到的透过液，用截留分子量为200Da的纳滤膜过滤透过液，脱盐浓缩，得到鱿鱼小分子肽浓缩液，所述纳滤膜过滤的压力为6.0MPa，所述鱿鱼小分子肽浓缩液的浓度为15wt％。
S3、利用喷雾干燥工艺干燥鱿鱼小分子肽浓缩液，得到鱿鱼小分子肽，所得鱿鱼小分子肽的提取率为81％；喷雾干燥工艺条件为，出风温度70℃，进风温度140℃；检测所得鱿鱼小分子肽的分子量和羟自由基清除率，所述鱿鱼小分子肽的分子量小于1kDa，所述鱿鱼小分子肽的羟自由基清除率为91％。
实施例2
一种制备鱿鱼小分子肽的方法，包括以下步骤：
S1、取去除内脏后的鱿鱼20kg，切块，用胶体磨进行超微粉碎，所述去除内脏后的鱿鱼与水的质量比为1:4，胶体磨的磨盘定转子间隙为0.02mm，转速为2900rpm，冷却水压力为0.13MPa，水温20℃；粉碎后，得到超微粉碎或微纳米化粉碎的鱿鱼匀浆物料，所述鱿鱼匀浆物料的的粒度为10μm；将所述鱿鱼物料进行亚临界水提取，所述亚临界水提取的压力为5MPa，所述亚临界水提取的温度为150℃，所述亚临界水提取的时间为30min，得到鱿鱼大分子肽溶液，鱿鱼大分子肽的提取率为87％。
S2、取S1中所得鱿鱼大分子肽溶液，加入中性蛋白酶和菠萝蛋白酶进行酶解，所述中性蛋白酶和菠萝蛋白酶的加入总量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的2.0wt％，所述酶解的酶解温度50℃，所述酶解的酶解pH值6.5，所述酶解的时间为2.5h，得到酶解液；以10000rmp转速离心酶解液，除去固体杂质，得到鱿鱼小分子肽溶液。用截留分子量为4kDa的超滤膜过滤鱿鱼小分子肽溶液，去除大分子杂质，所述超滤膜过滤的压力为1.0MPa，得到的透过液，用截留分子量为300Da的纳滤膜过滤透过液，脱盐浓缩，得到鱿鱼小分子肽浓缩液，所述纳滤膜过滤的压力为5.0MPa，所述鱿鱼小分子肽浓缩液的浓度为20wt％。
S3、利用喷雾干燥工艺干燥鱿鱼小分子肽浓缩液，得到鱿鱼小分子肽，所得鱿鱼小分子肽的提取率为83％；喷雾干燥工艺条件为，出风温度75℃，进风温度150℃；检测所得鱿鱼小分子肽的分子量和羟自由基清除率，所述鱿鱼小分子肽的分子量小于1kDa，所述鱿鱼小分子肽的羟自由基清除率为90％。
实施例3
一种制备鱿鱼小分子肽的方法，包括以下步骤：
S1、取去除内脏后的鱿鱼30kg，切块，用胶体磨进行超微粉碎，所述去除内脏后的鱿鱼与水的质量比为1:4，胶体磨的磨盘定转子间隙为0.03mm，转速为3000rpm，冷却水压力为0.14MPa，水温25℃；粉碎后，得到超微粉碎或微纳米化粉碎的鱿鱼匀浆物料，所述鱿鱼匀浆物料的粒度为20μm；将所述鱿鱼物料进行亚临界水提取，所述亚临界水提取的压力为10MPa，所述亚临界水提取的温度为200℃，所述亚临界水提取的时间为30min，得到鱿鱼大分子肽溶液，鱿鱼大分子肽的提取率为90％。
S2、取S1中所得鱿鱼大分子肽溶液，加入中性蛋白酶和动物蛋白水解酶进行酶解，所述中性蛋白酶和动物蛋白水解酶的加入总量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的2.0wt％，所述酶解的酶解温度55℃，所述酶解的酶解pH值7.0，所述酶解的时间为2.5h，得到酶解液；以10000rmp转速离心酶解液，除去固体杂质，得到鱿鱼小分子肽溶液。用截留分子量为4kDa的超滤膜过滤鱿鱼小分子肽溶液，去除大分子杂质，所述超滤膜过滤的压力为1.0MPa，得到的透过液，用截留分子量为200Da的纳滤膜过滤透过液，脱盐浓缩，得到鱿鱼小分子肽浓缩液，所述纳滤膜过滤的压力为6.0MPa，所述鱿鱼小分子肽浓缩液的浓度为25wt％。
S3、利用喷雾干燥工艺干燥鱿鱼小分子肽浓缩液，得到鱿鱼小分子肽，鱿鱼小分子肽，所得鱿鱼肽的提取率为86％；喷雾干燥工艺条件为，出风温度80℃，进风温度160℃；检测所得鱿鱼小分子肽的分子量和羟自由基清除率，所述鱿鱼小分子肽的分子量小于1kDa，所述鱿鱼小分子肽的羟自由基清除率为92％。
实施例4
一种制备鱿鱼小分子肽的方法，包括以下步骤：
S1、取去除内脏后的鱿鱼40kg，切块，用胶体磨进行超微粉碎，所述去除内脏后的鱿鱼与水的质量比为1:6，胶体磨的磨盘定转子间隙为0.02mm，转速为2900rpm，冷却水压力为0.15MPa，水温30℃；粉碎后，得到超微粉碎或微纳米化粉碎的鱿鱼匀浆物料，所述鱿鱼匀浆物料的粒度为10μm；将所述鱿鱼物料进行亚临界水提取，所述亚临界水提取压力为15MPa，所述亚临界水提取温度为300℃，所述亚临界水提取时间为20min，得到鱿鱼大分子肽溶液，所述鱿鱼大分子肽的提取率为92％。
S2、取S1中所得鱿鱼大分子肽溶液，加入中性蛋白酶、动物蛋白水解酶和菠萝蛋白酶进行酶解，所述中性蛋白酶、动物蛋白水解酶和菠萝蛋白酶的加入总量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的0.5wt％，所述酶解的酶解温度50℃，所述酶解的酶解pH值6.5，所述酶解的时间为2h，得到酶解液；以10000rmp转速离心酶解液，除去固体杂质，得到鱿鱼小分子肽溶液。用截留分子量为3kDa的超滤膜过滤鱿鱼小分子肽溶液，去除大分子杂质，所述超滤膜过滤的压力为2.0MPa，得到的透过液，用截留分子量为300Da的纳滤膜过滤透过液，脱盐浓缩，得到鱿鱼小分子肽浓缩液，所述纳滤膜过滤的压力为5.0MPa，所述鱿鱼小分子肽浓缩液的浓度为20wt％。
S3、利用喷雾干燥工艺干燥鱿鱼小分子肽浓缩液，得到鱿鱼小分子肽，所得鱿鱼小分子肽的提取率为87％；喷雾干燥工艺条件为，出风温度85℃，进风温度170℃；检测所得鱿鱼小分子肽的分子量和羟自由基清除率，所述鱿鱼小分子肽的分子量小于1kDa，所述鱿鱼小分子肽的羟自由基清除率为93％。
实施例5
一种制备鱿鱼小分子肽的方法，包括以下步骤：
S1、取去除内脏后的鱿鱼50kg，切成块状；用胶体磨进行超微粉碎，所述去除内脏后的鱿鱼与水的质量比为1:5，胶体磨的磨盘定转子间隙为0.1mm，转速为3000rpm，冷却水压力为0.16MPa，水温30℃；粉碎后，得到超微粉碎或微纳米化粉碎的鱿鱼匀浆物料，所述鱿鱼匀浆物料的粒度为50μm；将所述鱿鱼物料进行亚临界水提取，所述亚临界水提取压力为15MPa，所述亚临界水提取温度为300℃，所述亚临界水提取时间为20min，得到鱿鱼大分子肽溶液，鱿鱼大分子肽的提取率为93％。
S2、取S1中所得鱿鱼大分子肽溶液，加入木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶进行酶解，所述木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶的加入总量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的1.0wt％，所述酶解的酶解温度50℃，所述酶解的酶解pH值7.5，所述酶解的时间为2h，得到酶解液；以10000rmp转速离心酶解液，除去固体杂质，得到鱿鱼小分子肽溶液。用截留分子量为3kDa的超滤膜过滤鱿鱼小分子肽溶液，去除大分子杂质，所述超滤膜过滤的压力为2.0MPa，得到的透过液，用截留分子量为200Da的纳滤膜过滤透过液，脱盐浓缩，得到鱿鱼小分子肽浓缩液，所述纳滤膜过滤的压力为6.0MPa，所述鱿鱼小分子肽浓缩液的浓度为25wt％。
S3、利用喷雾干燥工艺干燥鱿鱼小分子肽浓缩液，得到鱿鱼小分子肽，所得鱿鱼小分子肽的提取率为86％；喷雾干燥工艺条件为，出风温度85℃，进风温度170℃；检测所得鱿鱼小分子肽的分子量和羟自由基清除率，所述鱿鱼小分子肽的分子量小于1kDa，所述鱿鱼小分子肽的羟自由基清除率为92％。
对比例1
取去除内脏后的鱿鱼10kg，切成块状后进行亚临界水催化提取，所述去除内脏后的鱿鱼与水的质量比为1:5，所述亚临界水催化的压力为15MPa，所述亚临界水催化的温度为300℃，所述亚临界水催化的时间为20min，得到鱿鱼大分子肽溶液，所得鱿鱼大分子肽溶液的提取率为34％；以10000rmp转速离心鱿鱼大分子肽溶液，除去固体杂质，经喷雾干燥，得鱿鱼肽，检测所述鱿鱼肽的提取率、分子量和羟自由基清除率，所述鱿鱼肽的提取率为21％，分子量大于5kDa肽占所述鱿鱼肽的83％，羟自由基清除率为35％。
对比例2
取去除内脏后的鱿鱼40kg，切成块状；用胶体磨进行超微粉碎，所述去除内脏后的鱿鱼与水的质量比为1:3，胶体磨的磨盘定转子间隙为0.02mm，转速为2900rpm，冷却水压力为0.15MPa，水温30℃；粉碎后，得到超微粉碎或微纳米化粉碎的鱿鱼匀浆物料，所述鱿鱼匀浆物料的粒度为10μm；将所述鱿鱼匀浆物料进行亚临界水催化提取，所述亚临界水催化的压力为15MPa，所述亚临界水催化的温度为300℃，所述亚临界水催化的时间为20min，得到鱿鱼大分子肽溶液，所述鱿鱼大分子肽的提取率为91％；以10000rmp转速离心鱿鱼大分子肽溶液，除去固体杂质，再用截留分子量为3kDa的超滤膜过滤，去除大分子杂质，所述超滤膜过滤的压力为2.0MPa，得到的透过液，用截留分子量为200Da的纳滤膜过滤透过液，脱盐浓缩，得到鱿鱼小分子肽浓缩液，所述纳滤膜过滤的压力为6.0MPa，经喷雾干燥，得鱿鱼小分子肽，检测所述鱿鱼小分子肽的提取率和羟自由基清除率，所述鱿鱼小分子肽的提取率为63％，羟自由基清除率为64％。
对比例3
取去除内脏后的鱿鱼10kg，切成块状后进行亚临界水催化提取，所述去除内脏后的鱿鱼与水的质量比为1:5，所述亚临界水催化的压力为15MPa，所述亚临界水催化的温度为300℃，所述亚临界水催化的时间为20min，得到鱿鱼大分子肽溶液，所得鱿鱼大分子肽溶液的提取率为21％；以10000rmp转速离心鱿鱼大分子肽溶液，除去固体杂质，再用截留分子量为3kDa的超滤膜过滤，去除大分子杂质，所述超滤膜过滤的压力为2.0MPa，得到的透过液，用截留分子量为200Da的纳滤膜过滤透过液，脱盐浓缩，得到鱿鱼小分子肽浓缩液，所述纳滤膜过滤的压力为6.0MPa，经喷雾干燥，得鱿鱼小分子肽，检测所述鱿鱼小分子肽的提取率和羟自由基清除率，所述鱿鱼小分子肽的提取率为13％，羟自由基清除率为65％。
对比例4
取去除内脏后的鱿鱼20kg，切成块状；用胶体磨进行超微粉碎，所述去除内脏后的鱿鱼与水的质量比为1:5，胶体磨的磨盘定转子间隙为0.02mm，转速为2900rpm，冷却水压力为0.13MPa，水温20℃；粉碎后，得到超微粉碎的鱿鱼匀浆物料，所述鱿鱼匀浆物料的粒度为30μm；所述鱿鱼匀浆物料加入木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶进行酶解，所述木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶的加入总量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的3.0wt％，所述酶解的酶解温度50℃，所述酶解的酶解pH值7.5，所述酶解的时间为5h，得到酶解液；以10000rmp转速离心酶解液，除去固体杂质，得到鱿鱼肽溶液，经喷雾干燥，得鱿鱼肽，检测所述鱿鱼肽的提取率、分子量和羟自由基清除率，所述鱿鱼肽的提取率为53％；分子量大于5kDa肽占所述鱿鱼肽的85％，羟自由基清除率为42％。
对比例5
取去除内脏后的鱿鱼20kg，切成块状；用胶体磨进行超微粉碎，所述去除内脏后的鱿鱼与水的质量比为1:3，胶体磨的磨盘定转子间隙为0.02mm，转速为2900rpm，冷却水压力为0.13MPa，水温20℃；粉碎后，得到超微粉碎的鱿鱼匀浆物料，所述鱿鱼匀浆物料的的粒度为30μm；所述鱿鱼匀浆物料加入木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶进行酶解，所述木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶的加入总量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的3.0wt％，所述酶解的酶解温度50℃，所述酶解的酶解pH值7.5，所述酶解的时间为5h，得到酶解液；以10000rmp转速离心酶解液，除去固体杂质，得到鱿鱼肽溶液，再用截留分子量为3kDa的超滤膜过滤，去除大分子杂质，所述超滤膜过滤的压力为2.0MPa，得到的透过液，用截留分子量为200Da的纳滤膜过滤透过液，脱盐浓缩，得到鱿鱼小分子肽浓缩液，所述纳滤膜过滤的压力为6.0MPa，经喷雾干燥，得鱿鱼小分子肽，检测所述鱿鱼小分子肽的提取率和羟自由基清除率，所述鱿鱼小分子肽的提取率为35％，所述鱿鱼小分子肽的羟自由基清除率为71％。
对比例6
S1、取去除内脏后的鱿鱼10kg，切成块状后进行亚临界水催化提取，所述去除内脏后的鱿鱼与水的质量比为1:3，所述亚临界水催化的压力为15MPa，所述亚临界水催化的温度为300℃，所述亚临界水催化的时间为20min，得到鱿鱼大分子肽溶液，所述鱿鱼大分子肽的提取率为34％。
S2、取S1中所得鱿鱼大分子肽溶液，加入中性蛋白酶、动物蛋白水解酶和菠萝蛋白酶进行酶解，所述中性蛋白酶、动物蛋白水解酶和菠萝蛋白酶的加入总量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的0.5wt％，所述酶解的酶解温度50℃，所述酶解的酶解pH值6.5，所述酶解的时间为2h，得到酶解液；以10000rmp转速离心酶解液，除去固体杂质，得到鱿鱼小分子肽溶液。用截留分子量为3kDa的超滤膜过滤鱿鱼小分子肽溶液，去除大分子杂质，所述超滤膜过滤的压力为2.0MPa，得到的透过液，用截留分子量为300Da的纳滤膜过滤透过液，脱盐浓缩，得到鱿鱼小分子肽浓缩液，所述纳滤膜过滤的压力为5.0MPa。
S3、利用喷雾干燥工艺干燥鱿鱼小分子肽浓缩液，得到鱿鱼小分子肽，所得鱿鱼小分子肽的提取率为22％；喷雾干燥工艺条件为，出风温度85℃，进风温度170℃；检测所得鱿鱼小分子肽的羟自由基清除率，所述鱿鱼小分子肽的羟自由基清除率为70％。
本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。
Claims (10)
1.一种制备鱿鱼肽的方法，包括以下步骤：取去除内脏后的鱿鱼，粉碎，亚临界水提取。
2.一种制备鱿鱼小分子肽的方法，包括：取去除内脏后的鱿鱼，粉碎，亚临界水提取，在亚临界水提取后，加入蛋白酶进行酶解，经后处理，得到鱿鱼小分子肽。
3.根据权利要求1-2任一项所述的方法，所述粉碎包括超微粉碎；或者所述粉碎所得物料的粒度为10-100μm；和/或所述蛋白酶包括选自木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、动物蛋白水解酶或菠萝蛋白酶中的至少一种。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，所述后处理包括：离心，过滤，干燥；和/或所述离心的转速为5000-20000rpm，优选为10000-15000rpm；和/或所述过滤包括超滤膜过滤和纳滤膜过滤。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，所述粉碎包括采用胶体磨进行湿法微纳米化超微粉碎匀质化；和/或所述采用胶体磨进行湿法微纳米化超微粉碎匀质化中所述去除内脏后的鱿鱼与水的质量比为1:1-1:10；和/或所述胶体磨的磨盘定转子间隙为0.01-0.05mm；和/或所述胶体磨的转速为2000-4000rpm；或者所述胶体磨的转速为2800-3000rpm；和/或所述胶体磨的冷却水压力为0.12-0.16MPa；和/或所述胶体磨的水温15-30℃。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，所述亚临界水提取的压力为0.2-15MPa；和/或所述亚临界水提取的温度为120-300℃；和/或所述亚临界水提取的反应时间为20-120min；或者所述亚临界水提取的反应时间为20-60min。
7.根据权利要求2-6任一项所述的方法，所述酶的加入量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的0.5wt％-5.0wt％；或者所述酶的加入量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的0.5wt％-3.0wt％；或者所述酶的加入量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的0.5wt％-1.0wt％；或者所述酶的加入量为所述去除内脏后的鱿鱼的质量的1.0wt％-2.0wt％；和/或所述酶解的酶解温度为30-60℃；或者所述酶解的酶解温度为45-55℃；和/或所述酶解的酶解pH值为5.0-8.0；或者所述酶解的酶解pH值为6.0-7.5；和/或所述酶解的酶解时间为1-8h；或者所述酶解的酶解时间为2-4h。
8.根据权利要求4-7任一项所述的方法，所述超滤膜的膜截留分子量为3-5kDa；和/或所述超滤膜过滤的压力为0.5-2.0MPa；和/或所述纳滤膜的膜截留分子量为200-1000Da；和/或所述纳滤膜过滤的压力为5.0-6.0MPa；和/或所述干燥包括喷雾干燥，和/或所述喷雾干燥的出风温度为70-85℃，和/或所述喷雾干燥进风温度为140-170℃。
9.根据权利要求2-8任一项所述方法所制备得到的鱿鱼小分子肽。
10.一种根据权利要求9所述鱿鱼小分子肽在制备用于抗氧化、抗衰老或保健的产品中的用途。
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| CN202011370665.3A CN112457364A (zh) | 2020-11-30 | 2020-11-30 | 一种鱿鱼小分子肽的制备方法和用途 |
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| CN202011370665.3A CN112457364A (zh) | 2020-11-30 | 2020-11-30 | 一种鱿鱼小分子肽的制备方法和用途 |
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN113881744A (zh) * | 2021-10-12 | 2022-01-04 | 河南省农业科学院农副产品加工研究中心 | 一种亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法 |
Citations (3)
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|---|---|---|---|---|
| CN106244657A (zh) * | 2016-08-29 | 2016-12-21 | 岭南师范学院 | 一种鱿鱼抗氧化多肽及其制备方法和应用 |
| CN107556364A (zh) * | 2017-09-30 | 2018-01-09 | 厦门市百肽生物科技有限公司 | 亚临界水辅助酶解提取鲍鱼蛋白肽的方法及产品 |
| CN108925741A (zh) * | 2018-07-05 | 2018-12-04 | 浙江海洋大学 | 一种超声辅助亚临界萃取制备鱿鱼蛋白粉的方法 |
-
2020
- 2020-11-30 CN CN202011370665.3A patent/CN112457364A/zh active Pending
Patent Citations (3)
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN113881744A (zh) * | 2021-10-12 | 2022-01-04 | 河南省农业科学院农副产品加工研究中心 | 一种亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法 |
| CN113881744B (zh) * | 2021-10-12 | 2024-04-26 | 河南省农业科学院农副产品加工研究中心 | 一种亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法 |
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