CN113881744B - 一种亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于小麦蛋白的深加工技术领域，具体涉及一种亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法。先将面筋蛋白经亚临界水分阶段处理，然后进行酶解，之后超滤分离出分子量小于1000 Da的组分，冷冻干燥后得到咸味肽。本发明提供的亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法，简单高效，解决了面筋蛋白酶解率低、酶解产物风味复杂、咸味不明显等问题，且极大缩短了酶解时间；制备的咸味肽产品用于食品调味料，可实现工业化生产，具有良好的经济价值和发展前景。

Description

一种亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法
技术领域
本发明属于小麦蛋白深加工技术领域，具体涉及一种亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法。
背景技术
咸味是一种非常重要的基本味，是调制各种复合味的基础。食盐作为最基础的咸味剂，可以维持人体正常生理功能，调节血液渗透压，但过多钠离子的摄入会导致心血管病、高血压及其它疾病。在国家提倡全民减盐的背景下，开发新型的咸味剂以代替部分食盐，有效减少钠离子的摄入，对人体健康是非常有利的。咸味肽作为一种健康的代盐产品，具有刺激性小、后味延续时间短、营养价值高且易吸收等特点，逐渐为人们所关注。研究发现，来源于动物的部分低聚肽具有咸味，可用于制备咸味肽或咸味香精。如CN101822308酶解畜骨制备咸味复合肽，水解度为14％-22％左右，酶解液相当于0.5％-1.4％质量分数的钠盐溶液；CN109182426通过南极磷虾发酵制备咸味肽粉纯度为72.56％；CN110074380将鳊鱼酶解后得到的肽粉与氯化钠混合，并加入其他辅料配制成低钠盐；CN110623244用蛋白酶复配酶解鸡骨架生成小分子肽，再进行热反应修饰制备咸味肽，可代替40％的食盐。然而来源于动物的咸味肽不仅大多制备工艺较为复杂，并伴有严重异味，且原料不易储存、成本较高，具有药物残留，重金属污染等安全隐患。
植物源蛋白来源广泛，成本较低，能显著提高产品标准化程度，符合国家鼓励农副产品深加工和综合利用的产业政策，因此近年来植物来源的咸味肽开发成为热点。CN101703145酶解植物蛋白制备风味原料肽用于生产咸味香精；CN102224921酶解大豆蛋白并经过多步分离纯化得到咸味多肽；CN101518323利用脱脂饼粕酶解产物与糖进行美拉德反应制备清蒸型咸味香精。但利用植物源蛋白制备咸味肽也存在较大的劣势，即植物蛋白不易溶解，水解程度较低，酶解产物风味复杂，咸味不明显，得到咸味肽的工艺繁琐。因此，开发一种工艺简单，咸味突出的植物源咸味肽制备方法具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用植物源的面筋蛋白制备咸味肽的方法，可以克服目前植物蛋白水解程度低、酶解产物复杂且咸味不明显的缺陷。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法，先将面筋蛋白经亚临界水分阶段处理，然后进行酶解，之后超滤分离出分子量小于1000Da的组分，冷冻干燥后得到咸味肽。
进一步，所述的面筋蛋白经亚临界水分三个阶段处理：将面筋蛋白的水溶液先在100-120℃、15-25MPa下处理30-40min，然后在140-160℃、15-25MPa下处理10-60min，最后在140-160℃、5-15MPa下处理10-20min。
面筋蛋白水溶液的质量体积浓度优选为4％-9％。
面筋蛋白经亚临界水分阶段处理后迅速降至室温。
将面筋蛋白经亚临界水处理后获得的悬浊液调节pH为7.0-8.0，控制温度为45-57℃，加入混合蛋白酶进行酶解；优选控制温度在55℃。
所述的混合蛋白酶为碱性蛋白酶、风味蛋白酶和复合蛋白酶三种酶的混合物，三者的酶活比为碱性蛋白酶：风味蛋白酶：复合蛋白酶为0.4-0.5：0.3-0.4：0.1-0.3，且三者之和为1，优选按照酶活比为0.45：0.36：0.19加入。
混合蛋白酶与底物比为2500-5000U/g，酶解时间1-4h；优选混合蛋白酶与底物比为3799U/g，酶解时间为2h。
酶解后进行灭酶，条件为100℃、10min，离心条件为6000×g、15min。
灭酶后离心去除沉淀，得酶解液，对酶解液进行超滤分离。
进一步，选用超滤膜进行分级分离，在室温下进行，压力2-3MPa，磁力搅拌转速为0-400r/min。
优选地，可选用超滤膜UE010(10000Da)、UE005(5000Da)、UE001(1000Da)进行分级分离，分为4组组分(＞10000Da，10000-5000Da，5000-1000Da，＜1000Da)，收集小于1000Da的肽段。
特别优选的，所述方法步骤如下：
(1)亚临界水处理：面筋蛋白加入纯水配制成浓度为5％(w/v，g/ml)的悬浮液，在亚临界水状态下分三个阶段处理，处理结束后迅速降至室温；
(2)制备酶解液：将处理后的悬浊液调节pH为7.4，控制温度为55℃，加入混合蛋白酶(碱性蛋白酶：风味蛋白酶：复合蛋白酶＝0.45：0.36：0.19，酶活比)进行酶解，酶与底物比为3799U/g，酶解时间2h，灭酶、离心去除沉淀后得酶解液；
(3)分离咸味肽：将步骤2)制备的酶解液通过超滤膜进行超滤分离，冷冻干燥收集后得到咸味肽。
本发明提供了一种亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法，该方法在三段式亚临界水辅助下酶解面筋蛋白得到酶解液，经超滤膜分离后结合咸味评价得到咸味肽。
采用的原料面筋蛋白又称谷朊粉，是一种优质植物源蛋白，其原料丰富，价格低廉，蛋白含量高达72％-85％，含有人体必需的15种氨基酸，其中谷氨酸和脯氨酸含量尤为丰富，一级结构中富含呈味肽序列，是制备呈味肽和咸味香精的良好原料。然而，面筋蛋白遇水易发生团聚，溶解性和水解度极低。目前有部分研究通过酶解小麦蛋白制备多肽，但对其研究局限于酶法改性对小麦蛋白功能性质的提升，对小麦多肽产物的呈味方面研究较少。目前利用酶水解谷朊粉制备短肽的水解度高的也只达到24.14％；也有利用小麦面筋蛋白制备热反应肉味香精，后续再进行美拉德反应，才能得到咸鲜味突出的香精类产品，工艺复杂，成本较高。
亚临界水是温度为100℃以上，在一定的压力下仍然保持液体状态的水，不同的温度和压力下，水的极性、表面张力和粘度都有所变化。本发明通过调节亚临界水的温度和压力，通过特定的低温高压、中温高压和中温低压三个阶段的亚临界水处理，使在亚临界水中的蛋白结构和特性发生不同程度的变化，从而进一步影响蛋白质的酶解效果。经亚临界水辅助酶解，面筋蛋白水解度最高可达到50％，酶解液中咸味肽占比90.13％，仅需超滤就能得到咸味程度能代替约50％食盐的咸味肽，制备咸味肽的效果显著。
本发明与现有技术相比，具有如下优点：
本发明提供的亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法，简单高效，解决了面筋蛋白酶解率低、酶解产物风味复杂、咸味不明显等问题，且极大缩短了酶解时间。制备的咸味肽产品用于食品调味料，可实现工业化生产，具有良好的经济价值和发展前景。
附图说明
图1是以水解度与酶解液咸味感官评价为指标筛选6种蛋白酶的结果；
图2为混合酶混料设计优化实验中碱性、风味、复合三种蛋白酶配比对水解度影响的等高线图；
图3为不同浓度食盐溶液的电子舌评分，以此作为咸味程度对照；
图4为实施例3中分离纯化得到的咸味肽序列质谱图。
具体实施方式
以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此：
以下实施例中所用面筋蛋白的蛋白含量为72％。所用蛋白酶均采购自诺维信生物公司，其中碱性蛋白酶、风味蛋白酶和复合蛋白酶实际酶活分别为46000U/g、28000U/g和44000U/g。
实施例1
面筋蛋白加入纯水配制成浓度为5％(w/v)的悬浮液，在亚临界水状态下分段处理，先控制温度120℃、压力20MPa处理30min，然后控制温度150℃，压力20MPa处理10min，然后控制温度150℃，压力5MPa处理10min，处理后降至室温。调节处理液pH＝7.4，加入碱性蛋白酶、风味蛋白酶和复合蛋白酶(酶活比为0.45：0.36：0.19)，酶与底物比为3799U/g，55℃水浴搅拌酶解2h。酶解结束后煮沸10min进行灭酶处理，冷却后于6000×g下离心15min去除沉淀，得面筋蛋白原酶解液。将面筋蛋白酶解液依次通过UE010、UE005、UE001膜进行超滤，分成四组组分(＞10000Da，10000-5000Da，5000-1000Da，＜1000Da)，收集各个组分并冻干。对2％浓度的各个组分含量进行测定和咸味评价，测定结果如下：
酶解液组分 相对含量(％) 咸味感官评分 电子舌评分
原酶解液 100 8.44±0.32 8.83±0.35
组分Ⅰ(＞10000Da) 0.83±0.31 1.45±0.36 1.23±0.27
组分Ⅱ(10000-5000Da) 2.88±0.43 3.55±0.29 3.68±0.33
组分Ⅲ(5000-1000Da) 9.92±0.37 8.26±0.32 8.48±0.30
组分Ⅵ(＜1000Da) 87.21±0.43 8.99±0.28 9.24±0.25
经本发明三段式亚临界水辅助酶解后，面筋蛋白的水解度提升至47.55％，酶解液的咸味程度相比对比例1提升48.9％。面筋蛋白酶解液中小于1000Da的组分咸度达到9.24，占比为87.21％(各组分相对含量为实际测定值，相加不完全等于100％)。由此方法得到的咸味肽可代替约47％的食盐。
实施例2
面筋蛋白加入纯水配制成浓度为5％(w/v)的悬浮液，在亚临界水状态下分段处理，先控制温度100℃、压力25MPa处理30min，然后控制温度140℃，压力15MPa处理20min，然后控制温度160℃，压力5MPa处理10min，处理后降至室温。调节处理液pH＝7.4，加入碱性蛋白酶、风味蛋白酶和复合蛋白酶(酶活比为0.45：0.36：0.19)，酶与底物比为3799U/g，55℃水浴搅拌酶解2h。酶解结束后煮沸10min进行灭酶处理，冷却后于6000×g下离心15min去除沉淀，得面筋蛋白原酶解液。将面筋蛋白酶解液依次通过UE010、UE005、UE001膜进行超滤，分成四组组分(＞10000Da，10000-5000Da，5000-1000Da，＜1000Da)，收集各个组分并冻干。对2％浓度的各个组分含量进行测定和咸味评价，测定结果如下：
酶解液组分 相对含量(％) 咸味感官评分 电子舌评分
原酶解液 100 8.53±0.37 8.89±0.26
组分Ⅰ(＞10000Da) 1.32±0.33 1.44±0.38 1.23±0.37
组分Ⅱ(10000-5000Da) 1.62±0.25 3.35±0.30 3.66±0.31
组分Ⅲ(5000-1000Da) 8.87±0.29 8.22±0.28 8.50±0.30
组分Ⅵ(＜1000Da) 88.13±0.38 8.91±0.35 9.27±0.18
经本发明三段式亚临界水辅助酶解后，面筋蛋白的水解度提升至47.80％，酶解液的咸味程度相比对比例1提升49.9％。面筋蛋白酶解液中小于1000Da的组分咸度达到9.27，占比为88.13％(各组分相对含量为实际测定值，相加不完全等于100％)。由此方法得到的咸味肽可代替约48％的食盐。
实施例3
面筋蛋白加入纯水配制成浓度为5％(w/v)的悬浮液，在亚临界水状态下分段处理，先控制温度120℃、压力20MPa处理30min，再控制温度150℃，压力15MPa处理20min，然后控制温度150℃，压力5MPa处理20min，处理后降至室温。调节pH＝7.4，加入碱性蛋白酶、风味蛋白酶和复合蛋白酶(酶活比为0.45：0.36：0.19)，酶与底物比为3799U/g，55℃水浴搅拌酶解2h。酶解结束后煮沸10min进行灭酶处理，冷却后于6000×g下离心15min去除沉淀，得面筋蛋白原酶解液。将面筋蛋白酶解液依次通过UE010、UE005、UE001膜进行超滤，分为四组组分(＞10000Da，10000-5000Da，5000-1000Da，＜1000Da)，收集各个组分并冻干。对2％浓度的各个组分含量进行测定和咸味评价，测定结果如下：
经三段式亚临界水辅助酶解后，面筋蛋白的水解度提升至50.75％，酶解液的咸味程度相比对比例1提升52.0％。面筋蛋白酶解液中小于1000Da的组分咸度达到9.48，占比为90.13％(各组分相对含量为实际测定值，相加不完全等于100％)。由此方法得到的咸味肽可代替约50％的食盐。
对比例1
面筋蛋白加入纯水配制成浓度为5％(w/v)的悬浮液，调节pH＝7.4，加入碱性蛋白酶、风味蛋白酶和复合蛋白酶(酶活比为0.45：0.36：0.19)，酶与底物比为3799U/g，55℃水浴搅拌酶解2h。酶解结束后煮沸10min进行灭酶处理，冷却后于6000×g离心15min去除沉淀，得面筋蛋白原酶解液。将面筋蛋白酶解液依次通过UE010、UE005、UE001膜进行超滤，分为4个组分(＞10000Da，10000-5000Da，5000-1000Da，＜1000Da)，收集各个组分并冻干。对2％浓度的各个组分含量进行测定和咸味评价，样品测定结果：
酶解液组分 相对含量(％) 咸味感官评分 电子舌评分
原酶解液 100 5.36±0.33 5.93±0.32
组分Ⅰ(＞10000Da) 2.46±0.33 1.24±0.55 1.20±0.40
组分Ⅱ(10000-5000Da) 10.23±0.41 3.23±0.44 3.32±0.37
组分Ⅲ(5000-1000Da) 23.14±0.39 5.06±0.45 5.44±0.36
组分Ⅵ(＜1000Da) 64.34±0.58 5.77±0.39 6.11±0.30
经测定，面筋蛋白的水解度为28.03％，酶解液的咸味程度为5.93。从咸味评价数据可以看出，面筋蛋白酶解液中小于1000Da的组分咸度为6.11，占比为64.34％。由此方法得到的咸味肽可代替约26％的食盐。
对比例2
面筋蛋白加入纯水配制成浓度为5％(w/v)的悬浮液，调节pH＝7.4，加入碱性蛋白酶、风味蛋白酶和复合蛋白酶(酶活比为0.3：0.3：0.4)，酶与底物比为3799U/g，55℃水浴搅拌酶解2h。酶解结束后煮沸10min进行灭酶处理，冷却后于6000×g离心15min去除沉淀，得面筋蛋白原酶解液。将面筋蛋白酶解液依次通过UE010、UE005、UE001膜进行超滤，分为4个组分(＞10000Da，10000-5000Da，5000-1000Da，＜1000Da)，收集各个组分并冻干。对2％浓度的各个组分含量进行测定和咸味评价，样品测定结果：
酶解液组分 相对含量(％) 咸味感官评分 电子舌评分
原酶解液 100 3.86±0.42 4.20±0.35
组分Ⅰ(＞10000Da) 3.32±0.28 1.21±0.31 1.25±0.37
组分Ⅱ(10000-5000Da) 16.23±0.34 2.88±0.41 3.03±0.29
组分Ⅲ(5000-1000Da) 30.14±0.36 3.47±0.43 3.76±0.30
组分Ⅵ(＜1000Da) 50.28±0.41 4.01±0.38 4.35±0.25
经测定，面筋蛋白的水解度为20.82％，酶解液的咸味程度为4.20。从咸味评价数据可以看出，面筋蛋白酶解液中小于1000Da的组分咸度为4.35，占比为50.28％。由此方法得到的咸味肽可代替约19％的食盐。
对比例3
面筋蛋白加入纯水配制成浓度为5％(w/v)的悬浮液，在亚临界水状态处理，控制温度140℃、压力20MPa处理60min。处理后降至室温，调节pH＝7.4，加入碱性蛋白酶、风味蛋白酶和复合蛋白酶(酶活比为0.45：0.36：0.19)，酶与底物比为3799U/g，55℃水浴搅拌酶解2h。酶解结束后煮沸10min进行灭酶处理，冷却后于6000×g离心15min去除沉淀，得面筋蛋白原酶解液。将面筋蛋白酶解液依次通过UE010、UE005、UE001膜进行超滤，分为4个组分(＞10000Da，10000-5000Da，5000-1000Da，＜1000Da)，收集各个组分并冻干。对2％浓度的各个组分含量进行测定和咸味评价，样品测定结果：
酶解液组分 相对含量(％) 咸味感官评分 电子舌评分
原酶解液 100 7.06±0.32 7.24±0.22
组分Ⅰ(＞10000Da) 3.46±0.33 1.34±0.46 1.15±0.20
组分Ⅱ(10000-5000Da) 8.02±0.51 3.62±0.38 3.80±0.15
组分Ⅲ(5000-1000Da) 16.89±0.48 6.56±0.35 6.78±0.23
组分Ⅵ(＜1000Da) 72.11±0.64 7.39±0.28 7.67±0.21
经亚临界水辅助酶解后，面筋蛋白的水解度为36.31％，酶解液的咸味程度相比对比例1提升22.1％。从咸味评价数据可以看出，面筋蛋白酶解液中小于1000Da的组分咸度达到7.67，占比为72.11％。由此方法得到的咸味肽可代替约35％的食盐。
对比例4
面筋蛋白加入纯水配制成浓度为5％(w/v)的悬浮液，在亚临界水状态下分段处理，先控制温度110℃、压力20MPa处理40min，再控制温度150℃，压力10MPa处理20min。处理后降至室温，调节pH＝7.4，加入碱性蛋白酶、风味蛋白酶和复合蛋白酶(酶活比为0.45：0.36：0.19)，酶与底物比为3799U/g，55℃水浴搅拌酶解2h。酶解结束后煮沸10min进行灭酶处理，冷却后于6000×g离心15min去除沉淀，得面筋蛋白酶解液。将面筋蛋白原酶解液依次通过UE010、UE005、UE001膜进行超滤，分为4个组分(＞10000Da，10000-5000Da，5000-1000Da，＜1000Da)，收集各个组分并冻干。对2％浓度的各个组分含量进行测定和咸味评价，样品测定结果：
酶解液组分 相对含量(％) 咸味感官评分 电子舌评分
原酶解液 100 7.64±0.32 8.03±0.35
组分Ⅰ(＞10000Da) 2.46±0.33 1.45±0.36 1.23±0.27
组分Ⅱ(10000-5000Da) 5.02±0.51 3.55±0.29 3.68±0.33
组分Ⅲ(5000-1000Da) 12.89±0.48 7.36±0.32 7.68±0.30
组分Ⅵ(＜1000Da) 80.11±0.64 8.22±0.28 8.48±0.25
经两段式亚临界水辅助酶解后，面筋蛋白的酶解度提升至40.31％，酶解液的咸味程度相比对比例1提升35.4％。从咸味评价数据可以看出，面筋蛋白酶解液中小于1000Da的组分咸度达到8.48，占比为80.11％。由此方法得到的咸味肽可代替约41％的食盐。
对实施例3中制备的咸味肽进一步分离纯化并鉴定，步骤如下：
(1)凝胶过滤色谱法分离：将分子量小于1000Da的冻干组分溶于蒸馏水中(100mg/mL)，取5mL装载到Sephadex G-15层析柱(2.6cm×60cm)中，洗脱液为超纯水，流速1.0mL/min，紫外检测波长为220nm，在25℃下进行。按照谱峰将分离的各个组分收集浓缩，冻干后进行咸度测定。
(2)选择上一步中咸度最高的组分进行制备型液相色谱分离：选择色谱柱为C18柱(10型250mm)，采用超纯水-甲醇(95：5-90：10,V/V)为流动相梯度洗脱20min，样品质量浓度为50mg/mL，进样量体积为1mL，流速5mL/min，λ为220nm，柱温25℃。按照谱峰将分离的各个组分收集浓缩，冻干后进行咸度测定。
(3)选择上一步中咸度最高的组分进行肽段序列鉴定。取1mg粉末样品溶解于1mLddH2O。取20μg肽段样品并加入ddH2O溶液至100μL，加入DTT溶液使其终浓度为10mmol/L，于56℃水浴中还原1h。加入IAA溶液使其终浓度为50mmol/L，避光反应40min。使用自填C18脱盐柱脱盐，于45℃真空离心浓缩仪中挥干溶剂。使用自填C18脱盐柱脱盐，纳升液相色谱分析柱为C18反相分析柱(150μm×150mm,1.9μm,)，流动相A为99.9％水和0.1％甲酸混合液，流动相B为80％乙腈和0.1％甲酸混合液。液相洗脱梯度为：0-2min，4％～8％B；2～45min，8％～28％B；45～55min，28％～40％B；55～56min，40％～95％B；56～66min，95％B。流动相流速为600nL/min。MS条件为：ESI+模式，采用数据依赖性扫描模式，在分辨率为70000(AGC3e6)的轨道阱中进行全扫描采集(300-1800m/z)。将分离出的前20个肽信号(电荷态≥+1)母离子通过高能碰撞(HCD)破碎，标准化碰撞能(NCE)为28.0。毛细管的温度是320℃，喷雾电压是2300V，子离子在分辨率为17500(AGC le5)的轨道上测量。全扫描和MS-MS扫描的最大填充时间分别设置为100ms和50ms，动态排除时间设置为30s。利用Byonic软件对样品中的多肽进行序列分析，经质谱图解析和氨基酸组成分析鉴定出的肽序列如下：
可以初步判定制备的咸味肽质荷比值主要在300-400m/z之间，但不排除所检测物质中含有其他可呈现咸味多肽的可能性。
咸度和风味评价：
1.实验材料：实施例3中制备的咸味肽。
2.实验方法
将制备的咸味肽代替50％的食盐(即正常加盐量的50％用咸味肽替代)分别加入到蔬菜汤、方便面和青椒肉丝中，并以100％加盐量做对比，由10名男性和10名女性(年龄在20-35岁)组成感官评价小组，对这四种食品进行咸度评价，结果如下：
通过感官评价发现，咸味肽代替50％的食盐加入到不同食品中的咸味程度与食盐相似，说明本发明制备的咸味肽可以代替部分食盐广泛应用到食品中。
本发明感官评价小组由受过专业培训的10名男性和10名女性组成，年龄在20-35岁之间，评定过程在温度为25±1℃的感官评价室进行。将各组分配制为2％浓度的溶液，参比不同浓度梯度的食盐溶液，设置评分为1-10。电子舌测定所用的参比溶液为氯化钾和酒石酸的混合溶液，用于模拟人体口腔中只有唾液时的状态。所有样品均以参比溶液作为对照。

Claims (6)

1.一种亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法，其特征在于，先将面筋蛋白经亚临界水分阶段处理，然后进行酶解，之后超滤分离出分子量小于1000 Da的组分，冷冻干燥后得到咸味肽；
其中，面筋蛋白经亚临界水分三个阶段处理：将面筋蛋白的水溶液先在100-120℃、15-25 MPa下处理30-40 min，然后在140-160℃、15-25 MPa下处理10-60 min，最后在140-160℃、5-15 MPa下处理10-20 min；
将面筋蛋白经亚临界水处理后获得的悬浊液调节pH为7.0-8.0，控制温度为45-57℃，加入混合蛋白酶进行酶解；
所述的混合蛋白酶为碱性蛋白酶、风味蛋白酶和复合蛋白酶三种酶的混合物，三者的酶活比为碱性蛋白酶：风味蛋白酶：复合蛋白酶为0.4-0.5：0.3-0.4：0.1-0.3，且三者之和为1；
混合蛋白酶与底物比为2500-5000 U/g，酶解时间1-4 h。
2.如权利要求1所述的亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法，其特征在于，面筋蛋白水溶液的质量体积浓度为4%-9%。
3.如权利要求1所述的亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法，其特征在于，面筋蛋白经亚临界水分阶段处理后迅速降至室温。
4.如权利要求1所述的亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法，其特征在于，酶解后灭酶并离心去除沉淀后得酶解液，对酶解液进行超滤分离。
5.如权利要求4所述的亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法，其特征在于，选用超滤膜进行分级分离，在室温下进行，压力2-3 MPa，磁力搅拌转速为0-400 r/min。
6.如权利要求4所述的亚临界水辅助酶解面筋蛋白制备咸味肽的方法，其特征在于，灭酶条件为100℃、10 min，离心条件为6000×g、15 min。
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