CN108715612A - 鱼胶原抗氧化肽的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了鱼胶原抗氧化肽的制备方法：先将原料进行脱脂除杂蛋白处理，溶胀后使用热水浴抽提制备胶原蛋白，然后在胶原蛋白溶液中添加复合酶和酶解助剂进行处理，控制酶解温度、时间及pH，酶解结束后灭酶、离心，所得上清液得到鱼胶原抗氧化肽酶解液，之后使用脱色脱腥剂对鱼胶原抗氧化肽酶解液进行脱色脱腥处理，过超滤膜除杂纯化，低温冷冻，真空干燥即得到鱼胶原抗氧化肽粉。本发明制备方法工艺简单、酶解效率高、便于工业化生产，所制备的鱼胶原抗氧化肽感官品质良好，纯度高，无色无味无杂，分子量小，便于机体吸收利用，且金属螯合能力强。

Description

鱼胶原抗氧化肽的制备方法

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，特别涉及鱼胶原抗氧化肽的制备方法。

背景技术

我国地大物博，水域辽阔，水产资源十分丰富，近几年来，随着生活水平的提高，人们对水产资源需求的多样性及实用性逐渐提高，从而促进我国水产加工业的飞速发展。但是，在水产加工业高速发展的同时会产生大量的鱼下脚料，例如鱼皮、鱼鳞、内脏、鱼头等，这些下脚料约占原料鱼的40-50%，这些下脚料的胶原含量相当丰富，将其作为新型的胶原蛋白资源，具有很高的开发和利用价值。

自由基是独立存在的、带有不成对电子的原子或原子团，化学性质极活泼，氧自由基是其中一类，又称活性氧，主要有超氧阴离子、羟自由基、过氧化氢、单线态氧等类型，尤以羟自由基的性质最活泼、毒性最大，可与活细胞内任何分子发生反应而造成损伤，且反应极快。在正常生理状态下，机体内自由基的产生与清除处于动态平衡状态，但当机体处于不良环境以及随着年龄的增长，体内的自由基就会因清除过慢或产生过多而积累，过剩的自由基因其高度的活性与极强的氧化反应能力，可通过氧化作用来攻击所遇到的任何分子，使机体内大分子物质产生过氧化变性，交联或断裂，引起细胞结构和功能的破坏，从而造成机体的多种损伤和病变。

天然抗氧化物质，特别是具有抑制生物大分子过氧化能力和清除体内自由基功能的抗氧化多肽日益受到人们的关注，利用水产品加工过程中的鱼下脚料生产高附加值的胶原抗氧化肽，不仅能够变废为宝，清除体内多余的自由基，保护细胞和组织不被过氧化，减少疾病的发病率，还可解决了陆生哺乳动物胶原蛋白产品涉及的宗教及人畜共患病等问题，因此具有重要的研究价值及实际意义。

现有技术如授权公告号为CN 103409489 B的中国发明专利，公开了一种鱼胶原抗氧化肽的制备方法，该制备方法为以鱼皮或鱼鳞为原料，在预处理过的鱼皮或鱼鳞中加入复合蛋白酶，酶解后，得鱼胶原蛋白酶解液，将获得的鱼胶原蛋白酶解液加热，进行灭酶后过滤，再利用纳滤膜去除氨基酸和盐分，获得鱼胶原肽溶液，在鱼胶原肽溶液中加入疏水性吸附剂，静置吸附，过滤后在疏水性吸附剂中加入有机溶剂，过滤后得鱼胶原抗氧化肽溶液，利用真空加热蒸发去除鱼胶原抗氧化肽溶液中的有机溶剂，得到具有抗氧化功能的鱼胶原抗氧化肽。但是，该制备方法制备过程复杂，酶解效率较低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种工艺简单、酶解效率高、便于工业化生产的鱼胶原抗氧化肽的制备方法，所制备的鱼胶原抗氧化肽感官品质良好，纯度高，无色无味无杂，分子量小，便于机体吸收利用，且金属螯合能力强。

本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：

鱼胶原抗氧化肽的制备方法，包括原料预处理、胶原蛋白的制备、胶原蛋白酶解、酶解液脱色脱腥、酶解液的纯化，具体步骤如下：

原料预处理：以鱼皮或鱼鳞为原料，置于冰水中清洗、剪碎，然后将其置于含有脱脂剂的溶液中，在转速为180-200rpm下连续搅拌，控制料液比为1:20-25，脱脂时间36-40h，脱脂温度8-12℃，之后将脱脂后的鱼皮用0.05-0.1mol/L的NaOH溶液浸泡30-50min，最后用水将浸泡过的原料反复清洗至中性，沥干水分待用，对原料进行预处理可以将包裹在胶原蛋白纤维周围的脂肪以及诸如球蛋白、角蛋白等非胶原性蛋白质去除，便于后续的提取分离工作，有利于提高鱼胶原抗氧化肽的纯度；

胶原蛋白的制备：将经过预处理的原料用0.5-0.8mol/L冰乙酸溶液溶胀30-50min，控制料液比1:4-6，浸泡结束后用水反复清洗至中性，沥干水分后，用组织捣碎机将溶胀好的鱼料破碎，并添加其重量8-10倍的蒸馏水，于45-50℃水浴摇床中提取10-12h，提取结束后真空抽滤除杂，冷冻干燥得到胶原蛋白粉，通过酸性浸泡与热水抽提相结合的方法可有效提取鱼鳞中的胶原蛋白，提取过程中胶原纤维被充分溶胀，有利于胶原纤维的溶解，使得胶原蛋白的提取率大大提高；

胶原蛋白酶解：将胶原蛋白粉与蒸馏水混合配成浓度为5-8%的胶原蛋白溶液，然后添加复合酶和酶解助剂，连续搅拌酶解液4-6h，控制酶解温度50-65℃，调节pH为7.5-10，酶解结束后，沸水浴灭酶5-10min，冷却至室温后在3500-4000rpm条件下离心10-15min，所得上清液即为胶原抗氧化肽酶解液，使用复合酶和酶解助剂对鱼皮的胶原蛋白进行处理，可将胶原蛋白三螺旋结构完全打开，将多肽链上的特定氨基酸残基切断，使肽链变成分子量较低的短肽链，使得胶原蛋白酶解液具有最高的水解度，所得到的胶原多肽具有较好的抗氧化能力，可以有效抑制生物大分子过氧化能力和清除体内多余自由基；

酶解液脱色脱腥：将鱼胶原抗氧化肽酶解液稀释10-15倍，加入脱色脱腥助剂，调节pH为3.5-4.0，在40-50℃下处理50-60min，结束后过滤，收集滤液，使用脱色脱腥助剂通过物理吸附和生化作用将鱼皮多肽水解液中的有色、带腥味的物质去除，有效改善胶原抗氧化肽酶解液的色泽和味道；

酶解液的纯化：先将脱色脱腥后的胶原抗氧化肽酶解液在50-60℃条件旋转蒸发浓缩，抽滤过0.22μm微孔滤膜除去杂质，然后在电泵作用下过2000Da超滤膜进行脱盐处理，旋转蒸发浓缩，最后低温冷冻，真空干燥即得到鱼胶原抗氧化肽，所得到的鱼胶原抗氧化肽的不仅分子量较小，便于被机体吸收利用，能有效清除体内多余的DPPH、羟自由基和超氧阴离子等自由基，而且具有较强的金属螯合能力，可有效抑制氧化反应，降低机体的发病率。

作为优选，原料预处理过程中脱脂剂为重量比为1:1.5-3的异丙醇和石油醚的混合物，石油醚是一种常用的脱脂剂，将其与异丙醇配合使用，发挥协同作用，可有效将将包裹在胶原蛋白纤维周围的脂肪去除，有利于鱼胶原抗氧化肽的提取分离，同时也可提高鱼胶原抗氧化肽酶解液的色泽和透明度。

作为优选，酶解过程中所添加的酶解助剂为重量配比为0.06-0.09:1的硫酸锰和1-呋喃阿拉伯糖基胸腺嘧啶的混合物，其添加量为复合酶重量的0.3-0.5%，硫酸锰和1-呋喃阿拉伯糖基胸腺嘧啶搭配使用，发挥协同增效作用，一方面可以影响复合酶的活性，促进酶与胶原蛋白之间的结合，不仅提高酶解速率，且得到的多肽分子量较低，使得多肽链上更多的生物活性基团暴露在外，有效提高了胶原多肽的抗氧化能力；另一方面酶解助剂通过物理和化学作用使得多肽链上氨基酸的侧链羧基朝向外侧，增加了其与金属离子的接触几率，进一步提高了胶原多肽的金属螯合能力，可有效弱化和抑制自由基链的反应，最终达到抗氧化的目的。

作为优选，酶解过程中复合酶为重量配比为1:0.6-0.9碱性蛋白酶和胰蛋白酶，用量为2000-2500U/g，碱性蛋白酶和胰蛋白酶的水解能力强，水解后得到的胶原多肽分子量低，且具有较强的自由基清除能力和脂质过氧化抑制能力。

作为优选，酶解液脱色脱腥过程中脱色脱腥助剂的原料成分及其重量份为：活性炭粉3-5份、酵母6-10份、β-D-酚酞葡萄糖苷酸2-4份、二甘醇1-2份，β-D-酚酞葡萄糖苷酸和二甘醇发挥协同作用，一方面可影响酵母的生长和代谢，激发代谢生成酶的活性，加强对胶原抗氧化肽酶解液中以羰基化合物和醇类物质为主的腥味物质的转化作用，达到酶解液脱腥的目的；另一方面也可作用于胶原蛋白三螺旋肽链被切断变成多肽后所暴露出的有色、带苦味的疏水氨基酸，并通过范德华力和疏水作用力将这些氨基酸的活性基团包合，以去除酶解液的腥苦味，因此，在活性炭和酵母的基础上搭配使用β-D-酚酞葡萄糖苷酸和二甘醇，可有效对胶原抗氧化肽酶解液进行脱色脱腥处理，且蛋白损失率较低，可制备出无色无味，感官品质良好的胶原抗氧化肽。

与现有技术相比，本发明的优点在于：1）本发明鱼胶原抗氧化肽的制备方法工艺简单，酶解效率高，便于工业化；2）本发明鱼胶原抗氧化肽分子量小，便于机体吸收利用，且金属螯合能力强；3）本发明鱼胶原抗氧化肽纯度高，感官品质良好，无色无味无杂，可被广泛应用于化妆品、保健食品和医药制品等领域中。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：

实施例1：

鱼胶原抗氧化肽的制备方法，包括原料预处理、胶原蛋白的制备、胶原蛋白酶解、酶解液脱色脱腥、酶解液的纯化，具体步骤如下：

1）原料预处理：以鱼皮或鱼鳞为原料，置于冰水中清洗、剪碎，然后将其置于含有脱脂剂的溶液中，在转速为180rpm下连续搅拌，控制料液比为1:20，脱脂时间36h，脱脂温度10℃，之后将脱脂后的鱼皮用0.05mol/L的NaOH溶液浸泡50min，最后用水将浸泡过的原料反复清洗至中性，沥干水分待用，对原料进行预处理可以将包裹在胶原蛋白纤维周围的脂肪以及诸如球蛋白、角蛋白等非胶原性蛋白质去除，便于后续的提取分离工作，有利于提高鱼胶原抗氧化肽的纯度；

2）胶原蛋白粉的制备：将经过预处理的原料用0.5mol/L冰乙酸溶液溶胀50min，控制料液比1:4，浸泡结束后用水反复清洗至中性，沥干水分后，用组织捣碎机将溶胀好的鱼料破碎，并添加其重量8倍的蒸馏水，于45℃水浴摇床中提取10h，提取结束后真空抽滤除杂，冷冻干燥得到胶原蛋白粉，通过酸性浸泡与热水抽提相结合的方法可有效提取鱼鳞中的胶原蛋白，提取过程中胶原纤维被充分溶胀，有利于胶原纤维的溶解，使得胶原蛋白的提取率大大提高；

3）胶原蛋白酶解：将胶原蛋白粉与蒸馏水混合配成浓度为5%的胶原蛋白溶液，然后添加复合酶和酶解助剂，连续搅拌酶解液4h，控制酶解温度50℃，调节pH为7.5，酶解结束后，沸水浴灭酶5min，冷却至室温后在4000rpm条件下离心15min，所得上清液即为胶原抗氧化肽酶解液，使用复合酶和酶解助剂对鱼皮的胶原蛋白进行处理，可将胶原蛋白三螺旋结构完全打开，将多肽链上的特定氨基酸残基切断，使肽链变成分子量较低的短肽链，使得胶原蛋白水解液具有最高的水解度，所得到的胶原多肽具有较好的抗氧化能力，可以有效抑制生物大分子过氧化能力和清除体内多余自由基；

4）酶解液脱色脱腥：将鱼胶原抗氧化肽酶解液稀释10倍，加入脱色脱腥助剂，调节pH为4.0，在40℃下处理50min，结束后过滤，收集滤液，使用脱色脱腥助剂通过物理吸附和生化作用将鱼皮多肽水解液中的有色、带腥味的物质去除，有效改善胶原抗氧化肽水解液的色泽和味道；

5）酶解液的纯化：先将脱色脱腥后的鱼胶原抗氧化肽酶解液在50℃条件旋转蒸发浓缩，抽滤过0.22μm微孔滤膜除去杂质，然后在电泵作用下过2000Da超滤膜进行脱盐处理，旋转蒸发浓缩，最后低温冷冻，真空干燥得到鱼胶原抗氧化肽，所得到的鱼胶原抗氧化肽的不仅分子量较小，便于被机体吸收利用，能有效清除体内多余的DPPH、羟自由基和超氧阴离子等自由基，而且还具有较强的金属螯合能力，可有效抑制氧化反应，降低机体的发病率。

上述原料预处理过程中脱脂剂为重量比为1:1.5的异丙醇和石油醚的混合物，石油醚是一种常用的脱脂剂，将其与异丙醇配合使用，发挥协同作用，可有效将将包裹在胶原蛋白纤维周围的脂肪去除，有利于鱼胶原抗氧化肽的提取分离，同时也可提高鱼胶原抗氧化肽酶解液的色泽和透明度。

上述酶解过程中所添加的酶解助剂为重量配比为0.06:1的硫酸锰和1-呋喃阿拉伯糖基胸腺嘧啶的混合物，其添加量为复合酶重量的0.3%，硫酸锰和1-呋喃阿拉伯糖基胸腺嘧啶搭配使用，发挥协同增效作用，一方面可以影响复合酶的活性，促进酶与胶原蛋白之间的结合，不仅提高酶解速率，且得到的分子量较低，使得多肽链更多的生物活性基团暴露在外，提高了胶原多肽的抗氧化能力；另一方面酶解助剂通过物理和化学作用使得多肽链上氨基酸的侧链羧基朝向外侧，增加了其与金属离子的接触几率，进一步提高了胶原多肽的金属螯合能力，可有效弱化和抑制自由基链的反应，最终达到抗氧化的目的。

上述酶解过程中复合酶为重量配比为1:0.6碱性蛋白酶和胰蛋白酶，用量为2000U/g，碱性蛋白酶和胰蛋白酶的水解能力强，水解后可得到的胶原多肽分子量低，且具有较强的自由基清除能力和脂质过氧化抑制能力。

上述酶解液脱色脱腥过程中脱色脱腥助剂的原料成分及其重量份为：活性炭粉3份、酵母10份、β-D-酚酞葡萄糖苷酸2份、二甘醇1份，β-D-酚酞葡萄糖苷酸和二甘醇发挥协同作用，一方面可影响酵母的生长和代谢，激发代谢生成酶的活性，加强对胶原抗氧化肽酶解液中以羰基化合物和醇类物质为主的腥味物质的转化利用，达到水解液脱腥的目的；另一方面也可作用于胶原蛋白三螺旋肽链被切断成多肽后所暴露出的有色、带苦味的疏水氨基酸，并通过范德华力和疏水作用力将这些氨基酸的活性基团包合，以去除水解液的腥苦味，因此，在活性炭和酵母的基础上搭配使用β-D-酚酞葡萄糖苷酸和二甘醇，可有效对胶原抗氧化肽酶解液进行脱色脱腥处理，且蛋白损失率较低，可制备出无色无味，感官品质良好的胶原抗氧化肽。

实施例2：

鱼胶原抗氧化肽的制备方法，包括原料预处理、胶原蛋白的制备、胶原蛋白酶解、酶解液脱色脱腥、酶解液的纯化，具体步骤如下：

1）原料预处理：以鱼皮或鱼鳞为原料，置于冰水中清洗、剪碎，然后将其置于含有脱脂剂的溶液中，在转速为200rpm下连续搅拌，控制料液比为1: 25，脱脂时间40h，脱脂温度12℃，之后将脱脂后的鱼皮用0.1mol/L的NaOH溶液浸泡40min，最后用水反复清洗至中性，沥干水分待用；

2）胶原蛋白粉的制备：将经过预处理的原料用0.8mol/L冰乙酸溶液溶胀30min，控制料液比1:6，浸泡结束后用水反复清洗鱼皮至中性，沥干水分后，用组织捣碎机将溶胀好的鱼料破碎，并添加其重量10倍的蒸馏水，于50℃水浴摇床中提取12h，提取结束后真空抽滤除杂，冷冻干燥得到胶原蛋白粉；

3）胶原蛋白酶解：将胶原蛋白粉与蒸馏水混合配成浓度为8%的胶原蛋白溶液，然后添加复合酶和酶解助剂，连续搅拌酶解液6h，控制酶解温度65℃，调节pH为8.0，酶解结束后，沸水浴灭酶10min，冷却至室温后在4000rpm条件下离心10min，所得上清液即为胶原抗氧化肽酶解液；

4）酶解液脱色脱腥：将鱼胶原抗氧化肽酶解液稀释10倍，加入脱色脱腥助剂，调节pH为4.0，在40℃下处理50min，结束后过滤，收集滤液；

5）酶解液的纯化：先将脱色脱腥后的鱼胶原抗氧化肽酶解液在60℃条件旋转蒸发浓缩，抽滤过0.22μm微孔滤膜除去杂质，然后在电泵作用下过2000Da超滤膜进行脱盐处理，旋转蒸发浓缩，最后低温冷冻，真空干燥即得到鱼胶原抗氧化肽。

上述原料预处理过程中脱脂剂为重量比为1:2的异丙醇和石油醚的混合物。

上述酶解过程中所添加的酶解助剂为重量配比为0.09:1的硫酸锰和1-呋喃阿拉伯糖基胸腺嘧啶的混合物，其添加量为复合酶重量的0.5%。

上述酶解过程中复合酶为重量配比为1:0.8碱性蛋白酶和胰蛋白酶，用量为2500U/g。

上述酶解液脱色脱腥过程中脱色脱腥助剂的原料成分及其重量份为：活性炭粉4份、酵母9份、β-D-酚酞葡萄糖苷酸4份、二甘醇2份。

实施例3：

鱼胶原抗氧化肽的制备方法，包括原料预处理、胶原蛋白的制备、胶原蛋白酶解、酶解液脱色脱腥、酶解液的纯化，具体步骤如下：

1）原料预处理：以鱼皮或鱼鳞为原料，置于冰水中清洗、剪碎，然后将其置于含有脱脂剂的溶液中，在转速为200rpm下连续搅拌，控制料液比为1:25，脱脂时间36h，脱脂温度10℃，之后将脱脂后的原料用0.05mol/L的NaOH溶液浸泡30min，最后用水反复清洗至中性，沥干水分待用；

2）胶原蛋白粉的制备：将经过预处理的原料用0.6mol/L冰乙酸溶液溶胀50min，控制料液比1:4，浸泡结束后用水反复清洗至中性，沥干水分后，用组织捣碎机将溶胀好的鱼料破碎，并添加其重量10倍的蒸馏水，于45℃水浴摇床中提取10h，提取结束后真空抽滤除杂，冷冻干燥得到胶原蛋白粉；

3）胶原蛋白酶解：将胶原蛋白粉与蒸馏水混合配成浓度为5%的胶原蛋白溶液，然后添加复合酶和酶解助剂，连续搅拌酶解液5h，控制酶解温度60℃，调节pH为8.5，酶解结束后，沸水浴灭酶5min，冷却至室温后在4000rpm条件下离心10min，所得上清液即为胶原抗氧化肽酶解液；

4）酶解液脱色脱腥：将鱼胶原抗氧化肽酶解液稀释10倍，加入脱色脱腥助剂，调节pH为3.5，在50℃下处理60min，结束后过滤，收集滤液；

5）酶解液的纯化：先将脱色脱腥后的鱼胶原抗氧化肽酶解液在50℃条件旋转蒸发浓缩，抽滤过0.22μm微孔滤膜除去杂质，然后在电泵作用下过2000Da超滤膜进行脱盐处理，旋转蒸发浓缩，最后低温冷冻，真空干燥即得到鱼胶原抗氧化肽。

上述原料预处理过程中脱脂剂为重量比为1:2.5的异丙醇和石油醚的混合物。

上述酶解过程中所添加的酶解助剂为重量配比为0.07:1的硫酸锰和1-呋喃阿拉伯糖基胸腺嘧啶的混合物，其添加量为复合酶重量的0.4%。

上述酶解过程中复合酶为重量配比为1:0.8碱性蛋白酶和胰蛋白酶，用量为2000U/g。

上述酶解液脱色脱腥过程中脱色脱腥助剂的原料成分及其重量份为：活性炭粉3份、酵母6份、β-D-酚酞葡萄糖苷酸2份、二甘醇2份。

对照组：

本对照组与实施例1相比，步骤3胶原蛋白酶解过程中只添加复合酶，除此外的方法步骤均相同。

实施例4：

为了对比本发明效果，分别对实施例1、实施例2、实施例3和对照组所制备的鱼胶原抗氧化肽的性能进行测试。具体测试项如下：

（1）测试纯化后的酶解液中相对分子质量在500-1000的胶原抗氧化肽的含量；

（2）将最终制备的鱼胶原抗氧化肽粉配制成5mg/ml的鱼胶原抗氧化肽溶液，采用2-脱氧核糖法测试其对羟自由基的清除能力；

（3）将最终制备的鱼胶原抗氧化肽粉配制成5mg/ml的鱼胶原抗氧化肽溶液，采用邻苯三酚法测试其对超氧阴离子自由基的清除能力；

（4）将最终制备的鱼胶原抗氧化肽粉配制成0.5mg/ml的鱼胶原抗氧化肽溶液，测试其亚铁离子螯合能力。

以上各项具体测试结果如表1和表2：

表1鱼胶原抗氧化肽的相对分子质量500-1000的含量表

	相对分子质量在500-1000的含量/%
		实施例1	80
实施例2	86
		实施例3	81
对照组	53

表2鱼胶原抗氧化肽抗氧化能力测试结果表

	羟自由基清除率/%	超氧阴离子自由基清除率/%	亚铁离子螯合能力/%
				实施例1	80	74	90
实施例2	86	76	95
				实施例3	82	73	92
对照组	63	51	79

从表1和表2可以看出，与对照组相比，实施例1、实施例2和实施例3所制备的鱼胶原抗氧化肽的分子量较小，且具有较好的羟自由基、超氧阴离子自由基清除能力和较强的金属螯合能力，可见，本发明所制备的鱼胶原抗氧化肽具有良好的抗氧化性能。

本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。

以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.鱼胶原抗氧化肽的制备方法，包括原料预处理、胶原蛋白的制备、胶原蛋白酶解、酶解液脱色脱腥、酶解液的纯化，其特征在于：所述胶原蛋白酶解步骤为：在胶原蛋白溶液中添加复合酶和酶解助剂，控制酶解时间、温度和pH，灭酶后，冷却离心，所得上清液即为胶原抗氧化肽酶解液，所述酶解助剂为硫酸锰和1-呋喃阿拉伯糖基胸腺嘧啶的混合物。

2.根据权利要求1所述的鱼胶原抗氧化肽的制备方法，其特征在于：所述酶解助剂中硫酸锰和1-呋喃阿拉伯糖基胸腺嘧啶的重量配比为0.06-0.09:1，其添加量为复合酶重量的0.3-0.5%。

3.根据权利要求1所述的鱼胶原抗氧化肽的制备方法，其特征在于：所述复合酶为重量配比为1:0.6-0.9碱性蛋白酶和胰蛋白酶，用量为2000-2500U/g。

4.根据权利要求1所述的鱼胶原抗氧化肽的制备方法，其特征在于：所述酶解过程中酶解时间为4-6h，酶解温度为50-65℃，pH为7.5-10。

5.根据权利要求1所述的鱼胶原抗氧化肽的制备方法，其特征在于：所述酶解液脱色脱腥步骤为：将鱼胶原抗氧化肽酶解液稀释后加入脱色脱腥助剂进行处理，调节pH和温度，结束后过滤，收集滤液。

6.根据权利要求5所述的鱼胶原抗氧化肽的制备方法，其特征在于：所述脱色脱腥助剂的原料成分及其重量份为：活性炭粉3-5份、酵母6-10份、β-D-酚酞葡萄糖苷酸2-4份、二甘醇1-2份。

7.根据权利要求5所述的鱼胶原抗氧化肽的制备方法，其特征在于：所述酶解液脱色脱腥过程中控制温度为35-40℃，pH为4.0-5.0。

8.根据权利要求1所述的鱼胶原抗氧化肽的制备方法，其特征在于：所述原料预处理过程中脱脂剂重量比为1:1.5-3的异丙醇和石油醚。