CN112451433A - 一种毛豆提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种毛豆提取物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于化妆品技术领域,具体涉及一种毛豆提取物及其制备方法和应用。本发明毛豆提取物的制备方法包括以下步骤:S1)将毛豆洗涤、切块、干燥、粗粉碎、过20~200目筛,得到粉末A;S2)取步骤S1)中的粉末A,加入粉碎助剂进行超微粉碎,得到粉末B;S3)对步骤S2)中的粉末B采用超声波辅助复合酶的方式进行提取,离心,减压过滤,滤膜超滤,得到滤液;S4)将步骤S3)中的滤液用真空冷冻干燥机冻干,得到毛豆提取物。本发明制备得到的毛豆提取物中烟酰胺核苷酸的含量可达到8.072ug/mL,具有优异的抗氧化和抗衰老作用。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域,具体涉及一种毛豆提取物及其制备方法和应用。
背景技术
随着生活水平的提高和科技的发现,人们对皮肤衰老的研究越来越深入。在2016年,经哈佛大学格伦衰老生物学中心试验验证,服用NMN(烟酰胺单核苷酸)一周后22个月大的老鼠(相当于人类60岁)回到了6个月(相当于人类20岁)的状态,并延长30%的寿命。此信息公布后,人们开始认识到了NMN的抗衰老作用。
NMN,分子结构式如式(I)所示,人体内天然存在的物质,是细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+,也称辅酶I)合体的重要前体。NAD+参与细胞物质代谢、能量合成、细胞DNA修复等多种生理活动。由于NMN随着年龄增长会逐渐减少,因此,当体内可以补充NMN时,NAD+也得到了补充,从而实现延缓衰老。鉴于NMN的特性,其在化妆品领域开发应用中具有广阔前景。
式(I)烟酰胺单核苷酸分子结构式
目前,人们发现在蔬菜、真菌、肉类和虾中都存在着NMN,比如牛油果、西兰花、卷心菜、毛豆、黄瓜、蘑菇、生牛肉和虾等。毛豆又名菜大豆,其还含有黄酮、多糖、多肽等活性物质。而人们对毛豆的研究多数在于食品领域,对于毛豆在化妆品领域中的研究较少。
发明内容
本发明旨在提供一种毛豆提取物及其制备方法和应用,本发明制备得到的毛豆提取物中烟酰胺单核苷酸的含量达到8.072ug/mg,具有优异的抗氧化和抗衰老作用。
为了达到上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种毛豆提取物的制备方法,所述制备方法包括以下步骤:
S1)将毛豆洗涤、切块、干燥、粗粉碎、过20~200目筛,得到粉末A;
S2)取步骤S1)中的粉末A,加入粉碎助剂进行超微粉碎,得到粉末B;
S3)对步骤S2)中的粉末B采用超声波辅助复合酶的方式进行提取,离心,减压过滤,滤膜超滤,得到滤液;
S4)将步骤S3)中的滤液用真空冷冻干燥机冻干,得到毛豆提取物。
进一步地,所述步骤S2)中的粉末A与粉碎助剂的质量比为1000:0.01~0.05。
更进一步地,所述粉碎助剂由十二烷基硫酸钠和糊精按照质量比1:0.3~0.6组成。
进一步地,所述步骤S3)的具体步骤为:取步骤S2)中的粉末B,加入粉末B总量8~12倍量的提取溶剂于室温下浸提1~1.5h,35~50℃下100~400W超声提取30~60min,离心,所得到的提取液于10~25μm滤纸下减压过滤,再超滤,截留含有分子量1kD~5kD活性成分的滤液。
更进一步地,所述提取溶剂为含有0.5~2wt%复合酶的pH为4~5柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。
更进一步地,所述复合酶由纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶按照质量比为1:1:0.5~1.5组成。
本发明提供上述制备方法制备得到的毛豆提取物在制备抗衰老护肤品/化妆品中的应用。
本发明还提供一种抗衰老护肤品,包含有效量的根据上述制备方法制备得到的毛豆提取物和有效量的护肤品常用助剂。
在本发明技术方案中,毛豆经粗粉碎和超微粉碎后,增大了比表面积的粉末B与复合酶的相互作用,使活性成分大量溶出。但在实际的操作过程中,超微粉碎后的粉末B出现私结成块的问题,无法获得超微粒径的粉末B,其原因可能是毛豆含有大量的脂肪,细胞壁在超微粉碎过程中破裂,使脂肪溢出。为此,加入十二烷基硫酸钠以改善上述问题,且这种改善作用在糊精的加入下达到最优的效果。这是因为十二烷基硫酸钠能调节粉末B的表面电性,使粉末B的流动性得以提高,而糊精的加入能进一步提高粉末B的流动性,从而降低了私结成块的发生机率。
同时,粉末B与复合酶相互作用过程中,加入的十二烷基硫酸钠能够起到增溶作用,提高了活性成分的含量。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本发明采用粗粉碎和超微粉碎得到超微粒径的粉末B,超声波辅助复合酶的方式对粉末B进行提取,大大提高了毛豆提取物中烟酰胺单核苷酸的含量。烟酰胺单核苷酸与毛豆提取物中的黄酮、多肽等共同作用,对DPPH自由基清除率达到86.57%,对晚期糖基化终产物清除率达到88.24%,具有优异的抗氧化和抗衰老作用。
附图说明
图1为本发明的烟酰胺单核苷酸HPLC标准曲线。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。
实施例1、毛豆提取物
包括以下步骤:
S1)将毛豆洗涤、切块、干燥、粗粉碎、过60目筛,得到粉末A;
S2)取步骤S1)中的粉末A,加入粉碎助剂进行超微粉碎,得到粉末B;
S3)取步骤S2)中的粉末B,加入粉末B总量8倍量的提取溶剂于室温下浸提1h,35℃下300W超声提取30min,离心,所得到的提取液于20μm滤纸下减压过滤,再超滤,截留含有分子量1kD~5kD活性成分的滤液。
S4)将步骤S3)中的滤液用真空冷冻干燥机冻干,得到毛豆提取物。
其中,粉末A与粉碎助剂的质量比为1000:0.01,粉碎助剂由十二烷基硫酸钠和糊精按照质量比1:0.3组成;提取溶剂为含有0.5wt%复合酶的pH为4柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,复合酶由纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶按照质量比为1:1:0.5组成。
实施例2、毛豆提取物
包括以下步骤:
S1)将毛豆洗涤、切块、干燥、粗粉碎、过60目筛,得到粉末A;
S2)取步骤S1)中的粉末A,加入粉碎助剂进行超微粉碎,得到粉末B;
S3)取步骤S2)中的粉末B,加入粉末B总量8~12倍量的提取溶剂于室温下浸提1h,40℃下380W超声提取50min,离心,所得到的提取液于25μm滤纸下减压过滤,再超滤,截留含有分子量1kD~5kD活性成分的滤液。
S4)将步骤S3)中的滤液用真空冷冻干燥机冻干,得到毛豆提取物。
其中,粉末A与粉碎助剂的质量比为1000:0.02,粉碎助剂由十二烷基硫酸钠和糊精按照质量比1:0.5组成;提取溶剂为含有1wt%复合酶的pH为5柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,复合酶由纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶按照质量比为1:1:1.5组成。
实施例3、毛豆提取物
包括以下步骤:
S1)将毛豆洗涤、切块、干燥、粗粉碎、过60目筛,得到粉末A;
S2)取步骤S1)中的粉末A,加入粉碎助剂进行超微粉碎,得到粉末B;
S3)取步骤S2)中的粉末B,加入粉末B总量12倍量的提取溶剂于室温下浸提1.5h,50℃下240W超声提取50min,离心,所得到的提取液于20μm滤纸下减压过滤,再超滤,截留含有分子量1kD~5kD活性成分的滤液。
S4)将步骤S3)中的滤液用真空冷冻干燥机冻干,得到毛豆提取物。
其中,粉末A与粉碎助剂的质量比为1000:0.05,粉碎助剂由十二烷基硫酸钠和糊精按照质量比1:0.6组成;提取溶剂为含有1.5wt%复合酶的pH为5柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,复合酶由纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶按照质量比为1:1:1.2组成。
对比例1、毛豆提取物
与实施例3类似,区别在于:未添加粉碎助剂,在提取溶剂中加入十二烷基硫酸钠,其余参数与实施例3相同。
对比例2、毛豆提取物
与实施例3类似,区别在于:粉碎助剂中只添加十二烷基硫酸钠,其余参数与实施例3相同。
对比例3、毛豆提取物
与实施例3类似,区别在于:粉碎助剂中只添加糊精,其余参数与实施例3相同。
试验一、粉末B观察试验
试验方法:实施例1-3和对比例1-3的粉末B各取10组,在电子显微镜下观察。
表一 观察结果
注:分散能力评定标准
10分 整体分散性好,无成块现象;
7分 出现“星点状”的少量成块现象;
5分 出现“星点状”的大量成块现象;
2分 出现大范围的成块现象并粘附在超微粉碎机的研磨轮上。
从表一来看,实施例1-3的粉末B整体分散性好,无成块现象。
试验二、高效液相色谱测量烟酰胺单核苷酸的含量
1.样品前处理
称取毛豆提取物试样约0.2g,精确到1mg,加入10ml纯水溶解,在超声波清洗器中超声20min,然后用纯水定容至20ml,混匀。取部分溶液放入离心管中,4500r/min离心30min,取上清液,经0.45um滤膜过滤,备用。
2.色谱条件
色谱柱:Agilent XDB C18柱(250mm×4.6mm,5um);
流动相:乙腈-pH为6的磷酸盐缓冲液,梯度洗脱:
流速:1.0mL/min;
进样量:20uL;
柱温:25℃;
测定波长:260nm。
3.标准曲线绘制
用纯水配制1mg/mL的烟酰胺单核苷酸储备液,用纯水准确稀释至0ug/mL、20ug/mL、40ug/mL、60ug/mL、80ug/mL、100ug/mL的待测液,按照以上色谱条件注入液相色谱仪,记录色谱图。以烟酰胺单核苷酸浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。见附图1。
4.样品测试
将毛豆测试样品按照同样的色谱条件注入液相色谱仪,记录色谱图。通过烟酰胺单核苷酸的标准曲线算出测试样品中烟酰胺单核苷酸的含量。
表二 毛豆提取物烟酰胺单核苷酸检测结果
组别 | 提取物得率(%) | 烟酰胺单核苷酸的含量(ug/mg) |
实施例1 | 0.2185 | 8.045 |
实施例2 | 0.2064 | 8.033 |
实施例3 | 0.2245 | 8.072 |
对比例1 | 0.1356 | 3.233 |
对比例2 | 0.1982 | 6.791 |
对比例3 | 0.1613 | 5.214 |
从表二来看,实施例3毛豆提取物中的烟酰胺单核苷酸的含量最高,达到8.072ug/mg。
试验三、DPPH自由基清除能力的测定
3.1试验方法:配制0.2mmol/L的DPPH·甲醇溶液;配制200mg/mL浓度的待测样品溶液;以VC作为阳性对照样品。
分别吸取2mL样品溶液和2mLDPPH·溶液于具塞试管中,混匀,避光反应30min,测定517nm波长下的吸光值A1;分别吸取2mL样品溶液和2mL甲醇于具塞试管中,混匀,避光反应30min,测定517nm波长下的吸光值A2;分别吸取2mLDPPH·溶液和2mL甲醇于具塞试管中,混匀,避光反应30min,测定517nm波长下的吸光值A0;每个样品做3个平行样。
表三 DPPH自由基清除能力测定结果
组别 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 |
清除率/% | 86.02 | 85.28 | 86.57 | 55.76 | 67.05 | 63.33 |
从表三来看,实施例3毛豆提取物对DPPH自由基清除率最高,达到86.57%。
试验四、晚期糖基化终产物清除能力的测定
4.1试验方法:分别配制以下试剂:①0.1mol/L NaOH溶液;②0.05mol/L的PBS磷酸盐缓冲液(pH=7.4);③10mg/ml牛血清白蛋白溶液;④45mg/ml葡萄糖溶液;⑤0.25mmol/L盐酸氨基胍溶液;⑥200mg/mL毛豆提取物待测样品溶液。将0.05mol/L的PBS磷酸盐缓冲液(pH=7.4)、10mg/ml牛血清白蛋白溶液和45mg/ml葡萄糖溶液放置于恒温恒湿培养箱中,然后添加毛豆提取物待测样品溶液和0.25mmol/L盐酸氨基胍溶液,在60℃条件下孵育40h(相当于30℃条件下孵育60天)。40h后取出各样品,用酶标仪对其进行检测,荧光激发/发射波长为370/440nm,记录荧光吸收值。每个样品做3个平行样。
式中:A样品:添加有受试物和葡萄糖溶液的荧光强度;
A样品空白:添加有受试物,不添加葡萄糖溶液的荧光强度;
A阴性对照:不含受试物,有葡萄糖溶液的荧光强度;
A缺糖阴性对照:不含受试物,也不含葡萄糖溶液的荧光强度。
组别 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 |
清除率/% | 87.96 | 87.20 | 88.24 | 60.29 | 71.04 | 67.83 |
从表四来看,实施例3毛豆提取物对晚期糖基化终产物清除率最高,达到88.24%。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效,而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下,对上述实施例进行修饰或改变。因此,举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变,仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (9)
1.一种毛豆提取物的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:
S1)将毛豆洗涤、切块、干燥、粗粉碎、过20~200目筛,得到粉末A;
S2)取步骤S1)中的粉末A,加入粉碎助剂进行超微粉碎,得到粉末B;
S3)对步骤S2)中的粉末B采用超声波辅助复合酶的方式进行提取,离心,减压过滤,滤膜超滤,得到滤液;
S4)将步骤S3)中的滤液用真空冷冻干燥机冻干,得到毛豆提取物。
2.根据权利要求1所述毛豆提取物的制备方法,其特征在于,所述步骤S2)中的粉末A与粉碎助剂的质量比为1000:0.01~0.05。
3.根据权利要求2所述毛豆提取物的制备方法,其特征在于,所述粉碎助剂由十二烷基硫酸钠和糊精按照质量比1:0.3~0.6组成。
4.根据权利要求1所述毛豆提取物的制备方法,其特征在于,所述步骤S3)的具体步骤为:取步骤S2)中的粉末B,加入粉末B总量8~12倍量的提取溶剂于室温下浸提1~1.5h,35~50℃下100~400W超声提取30~60min,离心,所得到的提取液于10~25μm滤纸下减压过滤,再超滤,截留含有分子量1kD~5kD活性成分的滤液。
5.根据权利要求4所述毛豆提取物的制备方法,其特征在于,所述提取溶剂为含有0.5~2wt%复合酶的pH为4~5柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。
6.根据权利要求5所述毛豆提取物的制备方法,其特征在于,所述复合酶由纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶按照质量比为1:1:0.5~1.5组成。
7.权利要求1~6任一所述制备方法制备得到的毛豆提取物。
8.权利要求7所述毛豆提取物在制备抗衰老护肤品/化妆品中的应用。
9.一种抗衰老护肤品,其特征在于,包含有效量的根据权利要求7所述毛豆提取物和有效量的护肤品常用助剂。
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