CN112442449A - 枝瑚菌原种培养基及其应用以及枝瑚菌原种及其培养方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及食用菌技术领域，公开了枝瑚菌原种培养基及其应用以及枝瑚菌原种及其培养方法，所述原种培养基含有木屑、麸皮、钙盐、磷酸盐和镁盐。通过在本发明提供的原种培养基中对枝瑚菌进行原种的培养，相比于常规原种培养基，枝瑚菌生长速度快、菌丝健壮，气生菌丝均一、颜色佳、甚至有菌核出现。相比于其他的枝瑚菌，本发明的原种培养基更适用于保藏号为CGMCC NO：17783的枝瑚菌。

Description

枝瑚菌原种培养基及其应用以及枝瑚菌原种及其培养方法

技术领域

本发明涉及食用菌技术领域，具体涉及一种枝瑚菌原种培养基，该原种培养基在枝瑚菌的原种培养中的应用，一种枝瑚菌原种的培养方法，以及由该方法培养的枝瑚菌原种。

背景技术

野生枝瑚菌(Ramaria sp.)又名扫帚菌，刷把菌，属于非褶菌目，枝瑚菌科，枝瑚菌属，夏秋季节在山区多生于阔叶林或针叶林地上，该科各属含有很多别具风味的食用菌，是我国野生食用菌资源中宝贵的组成部分，据报导，枝瑚菌多糖等活性物质具有抑制肿瘤、抗氧化、清除自由基、免疫调节等功能，该类真菌很有研究价值。

目前，对于枝瑚菌的研究多限于资源调查或者大分子生物活性等方面的研究，未见枝瑚菌菌种配方优化和人工驯化栽培相关报道，本发明的发明人在对枝瑚菌进行初期试验的过程中，发现该菌菌丝在常规原种培养基上菌丝生长速度非常慢，且菌丝稀疏，甚至不吃料不萌发，无法开展后续的人工驯化栽培试验。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的上述问题，提供一种枝瑚菌原种培养基及其应用，以及枝瑚菌原种及其培养方法，相比于常规原种培养基，在本发明提供的原种培养基上进行枝瑚菌原种生产，生长速度快、菌丝健壮，为开展后续的人工驯化栽培试验提供了基础。

为了实现上述目的，本发明一方面，提供一种枝瑚菌原种培养基，该原种培养基含有木屑、麸皮、钙盐、磷酸盐和镁盐。

本发明第二方面，提供如上所述的原种培养基在枝瑚菌的原种培养中的应用。

本发明第三方面，提供一种枝瑚菌原种的培养方法，该方法包括：将枝瑚菌菌种接种到如上所述的原种培养基中进行培养；

其中，所述枝瑚菌为枝瑚菌属(Ramaria sp.)的一个菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO：17783。

本发明第四方面，提供如上所述的方法培养的枝瑚菌原种。

通过在本发明提供的原种培养基中对枝瑚菌进行原种的培养，相比于常规原种培养基，枝瑚菌生长速度快、菌丝健壮。相比于其他的枝瑚菌，本发明的原种培养基更适用于保藏号为CGMCC NO：17783的枝瑚菌。

生物保藏

本发明的菌株被命名为枝瑚菌(Ramaria sp.)，并于2019年5月22日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号为CGMCCNO：17783，简称为菌株野生枝瑚菌2。

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。

图1是本发明提供的枝瑚菌CGMCC NO：17783的子实体，图中箭头所示位置为其一级分支；

图2是本发明实施例1培养的枝瑚菌原种培养结果。

具体实施方式

在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。

本发明中，未作相反说明的情况下，如本领域所公知的，为了避免杂菌污染，所进行的各种操作均优选在基本上无菌的条件(例如，经紫外杀菌后的环境)下进行，所用的各种工具和材料均为已经消毒过的，例如在110-130℃和0.12-0.18MPa下进行蒸汽灭菌20-80min后的。

第一方面，本发明提供一种枝瑚菌原种培养基，该原种培养基含有木屑、麸皮、钙盐、磷酸盐和镁盐。

本发明中，术语“原种”是指由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也叫二级种。原种主要用来生产栽培种，也可直接用作栽培种。其中，术语“母种”是指直接从子实体组织分离、孢子分离等所得到的菌丝体纯培养物，及其转接的菌种，也称一级种。

尽管将枝瑚菌在如上的原种培养基中进行培养，即可缓解在常规原种培养基中菌丝生长速度缓慢，且菌丝稀疏不均匀，甚至不吃料不萌发的问题，而对于原种培养基中各组分的含量没有特别的限定。但本发明的发明人在研究中进一步发现，当相对于100g的所述木屑，所述麸皮的含量为10-25g，所述钙盐的含量为0.5-2g，所述磷酸盐的含量为0.05-1g，所述镁盐的含量为0.01-0.5g，优选的，相对于100g的所述木屑，所述麸皮的含量为15-20g，所述钙盐的含量为0.8-1.5g，所述磷酸盐的含量为0.2-0.6g，所述镁盐的含量为0.1-0.3g时，枝瑚菌原种培养过程中，菌丝生长速度更快、菌丝更健壮、颜色更好，气生菌丝更均一。

根据本发明，所述木屑可以为能够用于食用菌原种培养基的各种木屑，然而本发明的发明人在研究中发现，当所述木屑选用桦木屑时，枝瑚菌的生长效果更佳。更为优选的，在使用前，对桦木屑进行发酵处理，并将发酵后的桦木屑用于枝瑚菌的培养时，能够进一步提高所述枝瑚菌的生长效果。

根据本发明一种优选的实施方式，对所述桦木屑进行发酵的方法可以包括，将桦木屑与水混合均匀，并堆积自然发酵。

其中，水的用量可以在较宽的范围内进行改变，优选的，水的用量使得拌匀后的桦木屑用手紧握时，有水滴从指间流出(例如，可以为1-5滴)。

其中，所述发酵的时间优选为10-12个月，发酵好的桦木屑颜色变黑褐色，用手轻柔可揉碎。在发酵的过程中，桦木屑自然风化并降解，从而使得发酵后的物料中的养分更易被枝瑚菌所利用，更有利于枝瑚菌的生长。

其中，在发酵的过程中，可以根据桦木屑的水分含量情况对桦木屑洒水保湿，以使桦木屑保持在初始的湿润状态，并每隔一段时间(例如，2-4个月)翻堆一次，整个发酵过程可以翻堆共3-5次。

其中，术语“自然发酵”是指在不进行过多人工干预的情况下的发酵，例如，不添加发酵菌剂、不添加其他营养物质、不对温度进行控制等。在本发明中，可以将桦木屑堆积于室外向阳处，并堆积于厚度40-60cm，宽30-40cm，上宽下窄的梯形。

根据本发明，所述麸皮可以为各种种子脱皮后形成的麸皮，例如，可以为但不限于小麦麸皮、玉米麸皮、水稻麸皮、小米麸皮等。但本发明的发明人发现，当所述麸皮为麦麸(小麦麸皮)时，更能够促进枝瑚菌的生长。

根据本发明，所述钙盐可以为能够用作食用菌培养基的钙盐，例如，可以为但不限于碳酸钙、硫酸钙、氯化钙、磷酸钙和柠檬酸钙中的至少一种。但本发明的发明人发现，当所述钙盐为硫酸钙时，更能够促进枝瑚菌的生长。其中，所述硫酸钙可以以石膏的形式提供，所述石膏可以商购获得。

根据本发明，所述磷酸盐可以为能够用作食用菌培养基的磷酸盐，例如，可以为但不限于磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠等。但本发明的发明人发现，当所述磷酸盐为磷酸二氢钾时，更能够促进枝瑚菌的生长。

根据本发明，所述镁盐可以为能够用作食用菌培养基的镁盐，例如，可以为但不限于氯化镁、硫酸镁等。但本发明的发明人发现，当所述镁盐为硫酸镁时，更能够促进枝瑚菌的生长。

根据本发明，所述原种培养基中的水含量可以在较宽的范围内进行改变，只要其水含量能够为枝瑚菌的生长提供足够的水分即可，优选的，所述原种培养基中的水含量可以调节为55-65重量％。

根据本发明一种优选的实施方式，所述原种培养基含有发酵后的桦木屑、麦麸、硫酸钙(石膏)、磷酸二氢钾和硫酸镁。

根据本发明一种优选的实施方式，所述原种培养基由发酵后的桦木屑、麦麸、硫酸钙(石膏)、磷酸二氢钾、硫酸镁和水组成。

根据本发明，所述原种培养基的制备方法没有特别的限制，只要能够将各组分混合均匀即可，而对于各组分的加入顺序也可以随意调整。根据本发明一种优选的实施方式，将各组分混合均匀后，堆积闷堆0.5-1.5小时即得。

第二方面，本发明提供了如上所述的原种培养基在枝瑚菌的原种培养中的应用。

根据本发明，所述枝瑚菌的原种培养基可以用于各种枝瑚菌的原种培养，但本发明的发明人发现，本发明提供的原种培养基更适用于枝瑚菌菌株CGMCC NO：17783的原种培养，枝瑚菌菌株CGMCC NO：17783于2017年9月分离自房山区蒲洼乡东村。

第三方面，本发明提供一种枝瑚菌原种的培养方法，该方法包括：将枝瑚菌菌种接种到如上所述的原种培养基中进行培养；其中，所述枝瑚菌为枝瑚菌属(Ramaria sp.)的一个菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO：17783。

常规情况下，枝瑚菌原种的培养是指将枝瑚菌母种接种到原种培养基上进行的培养，因此，在将所述枝瑚菌菌种接种到所述原种培养基中之前，还包括将所述枝瑚菌在母种培养基中进行培养。

根据本发明，所述枝瑚菌菌株CGMCC NO：17783可以通过在常规的食用菌培养基，例如，PDA培养基中进行培养，但经过本发明的发明人研究，获得了一种更适用于枝瑚菌菌株CGMCC NO：17783的用于人工培养枝瑚菌的母种培养基，其含有土豆、菠萝、葡萄糖、氨基酸和维生素B。使用该母种培养基对枝瑚菌进行培养时，枝瑚菌菌丝生长速度快、菌丝健壮，气生菌丝均一，颜色佳，并甚至有菌核出现。当使用该母种培养基用于所述枝瑚菌菌株CGMCC NO：17783的培养时，相比于其他的枝瑚菌菌株，具有更强的生长优势，将在该母种培养基上培养的母种接种到本发明提供的原种培养基上进行原种培养时，能够进一步促进枝瑚菌原种的生长。

尽管将枝瑚菌在如上的母种培养基中进行母种培养，即可提高枝瑚菌的生长速度以及菌丝的健壮程度，从而利于后续原种培养，而对于母种培养基中各组分的含量没有特别的限定。但本发明的发明人在研究中进一步发现，当相对于100g的所述土豆，所述菠萝的含量为40-80g，所述葡萄糖的含量为10-30g，所述氨基酸的含量为30-70mg，所述维生素B的含量为5-15mg，优选的，相对于100g的所述土豆，所述菠萝的含量为50-70g，所述葡萄糖的含量为15-25g，所述氨基酸的含量为40-60mg，所述维生素B的含量为8-12mg时，枝瑚菌菌丝生长速度更快、菌丝更健壮、气生菌丝更均匀一致，菌核出现时间更早，从而更有利于后续原种的培养。

菠萝(学名：Ananas comosus)，是热带水果之一。福建和台湾地区称之为旺梨或者旺来，新马一带称为黄梨，大陆及香港称作菠萝。有70多个品种，岭南四大名果之一。本发明中所述菠萝可以为市售的各种菠萝，对此并没有特别的限制。但本发明的发明人发现，选择合适成熟度的菠萝能够进一步促进枝瑚菌的生长，优选的，所述菠萝的成熟度为7-9，其中，所述成熟度是指根据中国农业标准NY/℃450-2001的成熟度标准来划分的。

根据本发明，所述氨基酸可以为能够用作食用菌培养基的氨基酸，优选的，所述氨基酸为极性氨基酸，更优选为带正电荷的氨基酸，例如，赖氨酸、天冬氨酸和组氨酸，最优选的，所述氨基酸为赖氨酸。本发明的发明人发现，当所述氨基酸为赖氨酸时，更能够促进枝瑚菌的生长。

根据本发明，所述维生素B可以为常规的各种B族维生素，例如，可以为但不限于VB1、VB2、VB12等。但本发明的发明人发现，当所述维生素B为VB1时，更能够促进枝瑚菌的生长。

根据本发明，所述母种培养基还可以含有琼脂，优选的，相对于100g的所述土豆，所述琼脂的含量为10-30g，优选为15-25g。

根据本发明，所述母种培养基还可以含有水，优选的，相对于100g的所述土豆，水的含量为500-1500ml，优选为800-1200ml。

根据本发明一种优选的实施方式，所述母种培养基含有土豆、菠萝、葡萄糖、氨基酸、维生素B、琼脂和水。

根据本发明一种优选的实施方式，所述母种培养基由土豆、菠萝、葡萄糖、氨基酸、维生素B、琼脂和水组成。

根据本发明一种优选的实施方式，所述母种培养基由土豆、成熟度为7-9的菠萝、葡萄糖、赖氨酸、维生素B1、琼脂和水组成。

根据本发明，所述母种培养基的制备方法可以按照PDA培养基的制备方法进行，具体的，选择无发芽、腐烂土豆，洗净去皮，切成正方体(1厘米边长左右)，菠萝洗净去皮，切成正方体(1厘米边长左右)，备用，在不锈钢锅内加水(1200ml)，加热，称取切好的土豆、菠萝加入锅中，煮沸(30min)，用纱布过滤(4层)，将滤液放入不锈钢锅加热；称取葡萄糖、氨基酸、维生素B和琼脂，分别均匀倒入锅内，边倒边搅拌，直至全部融化后停火。选用洁净、完整无损的玻璃试管进行分装(培养基装液量为试管的1/4)，用硅胶塞封口，放置于灭菌锅内进行灭菌，灭菌结束后，让培养基慢慢冷却到70℃左右时再取出摆放斜面，斜面的顶端距硅胶塞40-50mm，待培养基凝固后收起，即为所述培养基，可用于枝瑚菌母种培养。

由如上所述的本发明的母种培养基的制备方法可以看出，所述土豆和菠萝并非是直接将土豆和菠萝粉碎用作制备培养基的原料，而是通过洗切、蒸煮并过滤后得到的滤液。但需要说明的是，本发明的母种培养基中各组分的用量所基于的土豆的含量是指洗切后并蒸煮前的土豆的量，菠萝的含量也是指洗切后并蒸煮前的菠萝的量。

使用本发明提供的母种培养基对枝瑚菌进行母种培养的方法包括：将枝瑚菌的菌肉组织接种到本发明的母种培养基上进行培养。

根据本发明，所述母种的培养的条件可以为枝瑚菌常规的生长条件，优选的，所述培养的温度为20-30℃，更优选为23-28℃，所述培养为暗培养，也即在光照强度小于30LX的条件下进行培养。

根据本发明，所述原种的培养的条件可以为枝瑚菌常规的生长条件，优选的，所述培养的温度为20-30℃，更优选为23-28℃，所述培养的湿度为55-65％，所述培养为暗培养，也即在光照强度小于30LX的条件下进行培养。

第四方面，本发明提供了如上所述的方法培养的枝瑚菌原种。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。

本发明的枝瑚菌于2019年5月22日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号为CGMCC NO：17783，简称为野生枝瑚菌1。

制备例1

本制备例用于说明枝瑚菌CGMCC NO：17783菌丝纯培养物的获得

将采集到的保藏编号为CGMCC NO：17783的子实体(如图1所示)，置于超净工作台，吹无菌风30cm，操作人员双手用75％酒精消毒、操作工具等进行表面消毒和火焰灭菌，将枝瑚菌CGMCC NO：17783子实体用75％酒精棉球擦拭根部和主分支，进行表面消毒，用手掰下一级分支(如图1中箭头标志部位)，并将掰下来的分枝从基部向顶端用手掰开，使分枝一分两半，注意手不要碰到裸露的菌肉，用消毒好的镊子从一级分支基部夹取长0.3cm，宽0.2-0.3cm的菌肉，放入灭好菌的含有PDA斜面培养基试管内，菌肉组织放置于斜面中间，整个组织分离操作过程在酒精灯火焰20cm范围内完成。将含有组织的试管置于25℃条件下，暗培养，经过20天的培养，获得了本发明的野生枝瑚菌菌丝纯培养物。

制备例2

本制备例用于说明参比的菌丝纯培养物的获得

将同时采集的另一株枝瑚菌(参比枝瑚菌)的子实体，置于超净工作台，吹无菌风30cm，操作人员双手用75％酒精消毒、操作工具等进行表面消毒和火焰灭菌，将参比枝瑚菌子实体用75％酒精棉球擦拭根部和主分支，进行表面消毒，用手掰下一级分支，并将掰下来的分枝从基部向顶端用手掰开，使分枝一分两半，注意手不要碰到裸露的菌肉，用消毒好的镊子从主枝基部夹取长0.3cm，宽0.2-0.3cm的菌肉，放入灭好菌的含有PDA斜面培养基试管内，菌肉组织放置于斜面中间，整个组织分离操作过程在酒精灯火焰20cm范围内完成。将含有组织的试管置于25℃条件下，暗培养，经过20天的培养，获得了参比的野生枝瑚菌菌丝纯培养物。

制备例3

本制备例用于说明本发明提供的母种培养基及母种的培养

选择无发芽、腐烂土豆，洗净去皮，切成1边长厘米左右正方体，8成熟菠萝，洗净去皮，切成1边长厘米左右正方体，备用，在不锈钢锅内加水1200ml，加热，称取切好的土豆100g、菠萝60g加入锅中，煮沸30min，用4层纱布过滤，将滤液体积调至1000ml，放入不锈钢锅加热；称取葡萄糖20g，赖氨酸50mg，维生素B1 10mg，琼脂20g，分别均匀倒入锅内，边倒边搅拌，直至全部融化后停火。选用洁净、完整无损的18*180mm的玻璃试管进行分装，培养基装液量为试管的1/4，用硅胶塞封口，3支一把，用橡皮筋捆好，竖直放置于灭菌锅内进行灭菌，在温度121℃压力0.12MP条件下保持30min，灭菌结束后要自然冷却，待压力降到0MP时，打开放气阀，排出锅内气体，微微打开锅门，让培养基慢慢冷却到70℃左右时再取出摆放斜面，斜面的顶端距硅胶塞40-50mm，得到母种培养基。

待培养基凝固后和制备例1制备的装有野生枝瑚菌菌丝纯培养物的PDA玻璃试管一起放入超净工作台，无菌风吹30min后进行接种操作，双手表面要用75％酒精消毒，接种工具酒精消毒、火焰灭菌，用接种钩去掉枝瑚菌种源试管前端1cm左右培养基，切取大小为3mm*3mm*2mm的接种块，接种至上述试管母种培养基斜面中间位置，注意整个接种操作要在酒精灯火焰10-15cm范围内，将接好种的试管贴上标签，写明品种、名称、接种日期，放置于生化培养箱，调节温度至25℃，进行暗培养，12天菌丝即可长满试管，菌丝健壮，气生菌丝均匀一致，黄白色，有双菌核出现。

实施例1-3

实施例1-3用于说明本发明原种培养基的制备以及原种的培养

按照表1中的组分用量，称取干燥、洁净、无霉变桦木屑，加清水拌匀，用手紧握，有1-2滴水从指间流出，堆积于室外向阳处，厚度50cm，宽40厘米，下宽上窄的梯形，放置10-12个月的时间，使其自然发酵、风化和降解，期间洒水保湿，保持木屑湿润，并每隔3个月左右翻堆1次，共翻堆3-4次，处理好的木屑颜色变黑褐色，用手轻柔就能揉碎，称取麦麸，石膏，磷酸二氢钾，硫酸镁，将上述所有原料混合在一起，拌匀，调节含水量至60％左右，用手紧握原料，有1-2滴水从指间流出，堆积闷堆1小时后装袋，原种袋规格为15*28cm聚丙烯袋，每袋干料0.35kg，用无棉体套环封口后放入高压锅，在温度126℃，压力0.14mp条件下灭菌120min，自然冷却至70℃出锅，当料袋温度降至30℃时进行接种，每支制备例3得到的母种试管接种原种袋3袋，整个接种过程在无菌条件下进行，并严格按照无菌操作规程进行操作，将接种好的原种袋置于温度25℃，空气相对湿度60％条件下暗培养。记录菌丝长满袋的时间，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色、气生菌丝均一性、是否有菌核出现，结果见表2，实施例1结果如图2所示。

表1

实施例4

本实施例用于说明本发明原种培养基的制备以及原种的培养

按照实施例1的方法进行枝瑚菌的原种培养，不同的是，不对所述桦木屑进行发酵处理，而是直接将桦木屑与其他组分混合制备原种培养基。记录菌丝长满袋的时间，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色、气生菌丝均一性、是否有菌核出现，结果见表2。

实施例5

本实施例用于说明本发明原种培养基的制备以及原种的培养

按照实施例1的方法进行枝瑚菌的原种培养，不同的是，将麦麸替换为等量的玉米麸皮。记录菌丝长满袋的时间，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色、气生菌丝均一性、是否有菌核出现，结果见表2。

实施例6

本实施例用于说明本发明原种培养基的制备以及原种的培养

按照实施例1的方法进行枝瑚菌的原种培养，不同的是，将石膏替换为等量的碳酸钙。记录菌丝长满袋的时间，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色、气生菌丝均一性、是否有菌核出现，结果见表2。

实施例7

本实施例用于说明本发明原种培养基的制备以及原种的培养

按照实施例1的方法进行枝瑚菌的原种培养，不同的是，将磷酸二氢钾替换为等量的磷酸钙和氯化钾1：1的混合物。记录菌丝长满袋的时间，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色、气生菌丝均一性、是否有菌核出现，结果见表2。

实施例8

本实施例用于说明本发明原种培养基的制备以及原种的培养

按照实施例1的方法进行枝瑚菌的原种培养，不同的是，将硫酸镁替换为等量的氯化镁。记录菌丝长满袋的时间，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色、气生菌丝均一性、是否有菌核出现，结果见表2。

实施例9

本实施例用于说明本发明原种培养基的制备以及原种的培养

按照实施例1的方法进行枝瑚菌的原种培养，不同的是，将枝瑚菌CGMCC NO：17783替换为制备例2制备的参比枝瑚菌。记录菌丝长满袋的时间，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色、气生菌丝均一性、是否有菌核出现，结果见表2。

实施例10

本实施例用于说明本发明原种培养基的制备以及原种的培养

按照实施例1的方法进行枝瑚菌的原种培养，不同的是，将本发明提供的母种培养基替换为PDA培养基。记录菌丝长满袋的时间，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色、气生菌丝均一性、是否有菌核出现，结果见表2。

对比例1-5

对比例1-5用于参比的原种培养基的制备以及原种的培养

按照实施例1的方法进行枝瑚菌的原种培养，不同的是，原种培养基的组成如表3所示。记录菌丝长满袋的时间，菌丝健壮程度，气生菌丝颜色、气生菌丝均一性、是否有菌核出现，结果见表2。

表3

表2

注：菌丝健壮程度列和气生菌丝通过肉眼观察，并粗略估算健壮菌丝或均一菌丝占总菌丝的百分比；

菌核的有无可通过光学显微镜进行观察

由以上可以看出，将枝瑚菌在本发明提供的原种培养基上进行培养，菌丝生长速度快，且健壮，气生菌丝基本呈现黄白色，且气生菌丝较为均一，甚至还有菌核出现。将实施例1和实施例4-8进行比较可以看出，采用本发明优选的组分，能够进一步提高菌丝生长速度快，健壮程度，气生菌丝均一性。将实施例1与实施例9进行比较可以看出，本发明的原种培养基更适合枝瑚菌CGMCC NO：17783的原种培养。将实施例1与实施例10比较可以看出，采用本发明优选的母种培养基，能够进一步提高菌丝生长速度快，健壮程度，气生菌丝均一性，以及促进菌核出现。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种枝瑚菌原种培养基，其特征在于，该原种培养基含有木屑、麸皮、钙盐、磷酸盐和镁盐。

2.根据权利要求1所述的原种培养基，其中，相对于100g的所述木屑，所述麸皮的含量为10-25g，所述钙盐的含量为0.5-2g，所述磷酸盐的含量为0.05-1g，所述镁盐的含量为0.01-0.5g；

优选的，相对于100g的所述木屑，所述麸皮的含量为15-20g，所述钙盐的含量为0.8-1.5g，所述磷酸盐的含量为0.2-0.6g，所述镁盐的含量为0.1-0.3g。

3.根据权利要求1或2所述的原种培养基，其中，所述木屑为桦木屑；优选为发酵后的桦木屑；和/或

所述麸皮选自小麦麸皮、玉米麸皮、水稻麸皮和小米麸皮中的至少一种；和/或

所述钙盐选自碳酸钙、硫酸钙、氯化钙、磷酸钙和柠檬酸钙中的至少一种；和/或

所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠中的至少一种；和/或

所述镁盐选自氯化镁和硫酸镁。

4.权利要求1-3中任意一项所述的原种培养基在枝瑚菌的原种培养中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其中，所述枝瑚菌为枝瑚菌属(Ramaria sp.)的一个菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO：17783。

6.一种枝瑚菌原种的培养方法，其特征在于，该方法包括：将枝瑚菌菌种接种到权利要求1-3中任意一项所述的原种培养基中进行培养；

其中，所述枝瑚菌为枝瑚菌属(Ramaria sp.)的一个菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO：17783。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，在将所述枝瑚菌菌种接种到所述原种培养基中之前，该方法还包括，将所述枝瑚菌在母种培养基中进行培养；所述母种培养基含有土豆、菠萝、葡萄糖、氨基酸和维生素B；

优选的，相对于100g的所述土豆，所述菠萝的含量为40-80g，所述葡萄糖的含量为10-30g，所述氨基酸的含量为30-70mg，所述维生素B的含量为5-15mg；

更优选的，相对于100g的所述土豆，所述菠萝的含量为50-70g，所述葡萄糖的含量为15-25g，所述氨基酸的含量为40-60mg，所述维生素B的含量为8-12mg。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述菠萝为根据中国农业标准NY/℃450-2001的成熟度标准的程度为7-9的菠萝；和/或

所述氨基酸为极性氨基酸；和/或

所述维生素B选自维生素B1、维生素B2和维生素B12中的一种或多种。

9.根据权利要求6-8中任意一项所述的方法，其中，所述培养为暗培养，培养的温度为20-30℃。

10.权利要求6-9中任意一项所述的方法培养的枝瑚菌原种。

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