CN112402559A - 用于预控hpv病毒感染的组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开用于预控HPV病毒感染的组合物及其制备方法。本发明的组合物含有特定的植物提取液作为主要成分之一，通过该提取液能够使组合物的表面带有更多的负电荷，从而能够与HPV衣壳蛋白的正电荷区域相结合，使衣壳蛋白的构象改变，阻断病毒侵入宿主细胞内，达到阻断HPV感染的目的，从而能够有效防控HPV病毒的感染。

Description

用于预控HPV病毒感染的组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及用于预控HPV病毒感染的组合物及其制备方法。
背景技术
人乳头瘤病毒(HPV)是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。表现为寻常疣、生殖器疣(尖锐湿疣)等症状。随着性病中尖锐湿疣的发病率急速上升和宫颈癌、肛门癌等的增多，人乳头瘤病毒感染越来越引起人们的关注。
目前针对HPV引发疾病的治疗主要包括物理疗法，如激光和电灼疗法、微波治疗、冷冻、光动力疗法以及药物疗法。其中，物理疗法适用于多数的临床情况，具有准确定位，对周围正常组织损伤小等优点。但是缺点是治疗时需要熟练的操作者控制，尤其在外生殖器部位，伤口易出血，并且容易引发感染和复发。药物疗法包括足叶草脂等，其具有一定腐蚀性，需要保护好周围正常组织，否则易形成周围正常组织的种植。不太适合粘膜疣的应用。另外，临床上还使用咪喹莫特霜，作为外用免疫调节剂，优点是腐蚀性不大，患者自行用药、方便。缺点是需要至少4-16周的用药，太费时间，有一定的刺激性，也可以出现皮肤的浅糜烂面。
目前的各种疗法虽然能够有效去除HPV引发的肉瘤，但是很难根除。通过综合治疗可以防治复发，达到临床治愈。具体地，用物理方法尽量去除瘤体，同时应用免疫药物，如应用免疫制剂注射和外用等，两类方法的组合效果较佳。
目前已报道和开发多种外用药物。例如，CN102908611A公开了一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物蛋白敷料及隐形膜，其为针对女性而开发的妇科疾病用产品。具体地，其包括JB蛋白、卡波姆、绿茶提取物、甘油、三氯生，和余量水。
再例如，CN 111000890 A公开了一种预防及抑制HPV病毒感染的凝胶敷料，其由水凝胶和均匀分散在水凝胶中的中药提取物组成，中药提取物为苦参提取物、木贼草提取物、鸦胆子提取物、蛇床子提取物、青花素、角叉莱胶、天然平衡因子、冰片，水凝胶包括羟甲基纤维素钠、尼泊金乙酯、丙二醇、甘露醇、抗菌肽、丙三醇、水性润滑粉剂、二乙醇胺、蒸馏水。该技术主要是利用中药成分预防和抑制HPV的感染。
综上所述，目前仍然需要开发新的抗HPV感染的药物。特别是，能够有效防止皮肤表面如寻常疣进一步感染的外用药物。
发明内容
针对现有技术中的问题，本发明提供用于预控HPV病毒感染的组合物及其制备方法。具体地，本发明包括以下内容。
本发明的第一方面，提供一种用于预控HPV病毒感染的组合物，其包含0.01-0.5重量份植物复合提取液、20-30重量份羟丙甲基纤维素、0.5-1重量份卡波姆、50-150重量份甘油、0.1-1重量份溶菌酶、0.5-5重量份尼泊金乙酯和0.01-0.06重量份乳酸菌素，其中，所述植物复合提取液由大豆和天麻作为原料提取得到。
根据本发明的用于预控HPV病毒感染的组合物，优选地，所述植物复合提取液通过包括下述步骤的方法制备得到：
(a)将天麻以1:(6-12)g/ml的料液比置于氯化钠溶液中，在70-90℃下处理2-8h，过滤浓缩，向浓缩液中加入复合酶于50-60℃下水解30分钟至1.5小时，然后超滤酶解液，离心后得到第一组分；
(b)将大豆乳清水的pH值调节至5.0-10.0，离心去除不溶性悬浮物，得到上清液，向上清液添加中性盐并调整pH至4.0-4.8，浓缩后得到第二组分；
(c)将所述第一组分和第二组分以1:(3-5)的重量比与水混合后得到植物复合提取液。
根据本发明的用于预控HPV病毒感染的组合物，优选地，所述大豆乳清水为从大豆分离蛋白和/或酸法浓缩蛋白生产过程中产生的乳清废水。
根据本发明的用于预控HPV病毒感染的组合物，优选地，步骤(b)中所述中性盐选自由硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠和磷酸钠组成的组中的至少一种。
根据本发明的用于预控HPV病毒感染的组合物，优选地，所述组合物为凝胶或膜状。本发明的膜状组合物特别适用于作为皮肤表面如寻常疣进一步感染的外用药物。本发明的凝胶状组合物特别适用于作为粘膜部位如阴道的外皮用药物。
本发明的第二方面，提供一种用于制备第一方面所述的组合物的方法，其包括：
(1)用去离子水调节植物复合提取液使固形物至8-15％，同时用去离子水配制8-15％的羟丙甲基纤维素溶液，按比例将两者混合以使植物复合提取液与羟丙甲基纤维素的重量比为(0.01-0.5):(20-30)；
(2)在搅拌的情况下向(1)的混合液中加入卡波姆、甘油、溶菌酶、尼泊金乙酯和乳酸菌素；
(3)将(2)的混合物加入于40-50℃下反应4-6小时，恒温成膜。
本发明的组合物含有特定的植物提取液作为主要成分之一，本发明的提取液能够使组合物的表面带有更多的负电荷，从而能够与HPV衣壳蛋白的正电荷区域相结合，使衣壳蛋白的构象改变，阻断病毒侵入宿主细胞内的过程，从而达到阻断HPV感染的目的。本发明的组合物能够有效防控HPV病毒的感染。
附图说明
图1为抗原溶液在放入膜材料吸附不同时间后的荧光强度图。从上到下的曲线依次为0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、6.0、12、24小时的结果。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。除非另有说明，否则“％”为基于重量的百分数。
本发明中，“预控HPV病毒感染”是指预防或抑制HPV病毒在体内复制或增殖，包括预防或抑制受试者感染病毒，或预防或抑制已感染的病毒进一步在体内的增殖。
本发明的组合物中包含植物复合提取液、羟丙甲基纤维素、卡波姆、甘油、溶菌酶、尼泊金乙酯和乳酸菌素。
本发明的植物复合提取液是指由大豆和天麻作为原料提取得到复合物，其为以大豆乳清蛋白和天麻多肽为主要成分的混合物。本发明的植物提取物能够使组合物表面带有更多的负电荷，从而与HPV的衣壳蛋白的正电荷区域相结合，阻断病毒侵入宿主细胞内的过程，从而达到阻断HPV感染的目的。植物复合提取液一般还包括低聚糖成分。本发明中适量低聚糖的存在对于病毒的吸收是必要的。可能在于低聚糖中的活性基团在与其他成分如大豆乳清蛋白等相互作用，增强了对病毒的吸附。基于植物复合提取液的总质量，低聚糖的含量一般为6-10％。低聚糖的量过高，则成胶性能变差。如果含量过低，则吸附性变差。植物复合提取液中的天麻多肽不仅具有很好的抗菌性能，而且还能够与大豆乳清蛋白一起协同促进了HPV病毒的变性，大大增强了组合物的抑制能力。植物复合提取液中，天麻提取物与大豆提取物的重量比一般为1:(3-5)，例如1:2、1:3等。本发明的植物复合提取液在组合物中的用量不特定限定一般为足以使组合物中的蛋白含量为10-20mg/100g组合物的量。优选地，植物复合提取液的用量为0.01-0.5重量份，优选0.05-0.4重量份，更优选0.1-0.3重量份。
本发明的羟丙甲基纤维素作为性质稳定，无刺激、无致敏性医用高分子材料，覆盖于糜烂受损组织，可起到隔离作用。同时羟丙甲基纤维素与植物复合提取液中的成分能够形成复杂空间网络，增强了组合物内部结构的致密性，有效防止病毒进入内部后再次流出。另外，适量的羟丙甲基纤维素用量还为组合物提供机械强度。羟丙甲基纤维素的用量。羟丙甲基纤维素的量一般为20-30重量份，优选20-28重量份，更优选22-25重量份。
本发明的卡波姆用于增加组合物的吸附性，其含量一般为0.5-1重量份，优选0.6-0.9重量份，更优选0.7-0.8重量份。
本发明的甘油用于调节组合物的性状，其用量一般为50-150重量份，优选55-140重量份，更优选70-120重量份。
本发明的溶菌酶能够抑制细菌活性。能够与尼泊金乙酯等一起用于防止组合物生产包装后到使用前的微生物等污染。本发明中溶菌酶的用量一般为0.1-1重量份，优选0.2-0.8重量份，更优选0.4-0.6重量份。本发明中作为抑菌剂的尼泊金乙酯的用量一般为0.5-5重量份，优选1-4重量份，更优选2-3重量份。作为乳酸菌素的用量一般为0.01-0.06重量份，优选0.05-0.06重量份，还优选0.02-0.04重量份。
本发明中，植物复合提取液一般通过包括下述步骤的方法制备得到：
(a)将天麻以1:(6-12)g/ml的料液比置于氯化钠溶液中，在70-90℃下处理2-8h，过滤浓缩，向浓缩液中加入复合酶于50-60℃下水解30分钟至1.5小时，然后用15K道尔顿分子量的膜超滤酶解液，离心后得到第一组分；
(b)将大豆乳清水的pH值调节至5.0-10.0，离心去除不溶性悬浮物，得到上清液，向上清液添加中性盐并调整pH至4.0-4.8，浓缩后得到第二组分；
(c)将所述第一组分和第二组分以1:(3-5)的重量比与水混合后得到植物复合提取液。
步骤(a)中，作为原料的天麻一般需要进行粉碎处理，粉碎处理一般至50-100目大小。在粉碎处理之前优选包括洗涤和剔出杂质的步骤。步骤(a)氯化钠溶液的浓度一般为0.2-1.0％，优选0.5-0.8％，更优选0.6-0.8％。步骤(a)的过滤浓缩，一般为减压过滤，从而进行浓缩，一般浓缩为1g/ml。步骤(a)的复合酶一般包括木瓜蛋白酶1.5％、胰蛋白酶0.8％、风味蛋白酶0.6％。
步骤(b)包括第一pH值处理以除去不溶性悬浮物的步骤和第二pH值处理以沉淀大豆乳清蛋白步骤。第一pH值高于大豆乳清蛋白的等电点，从而避免了蛋白的损失。第二pH值选择大豆乳清蛋白等电点范围，从而能够有效分离蛋白。通过步骤(b)得到的大豆乳清蛋白特别适合于得到适于酸性环境(如阴道低pH值环境)的组合物。步骤(b)中的中性盐的实例包括但不限于硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠和磷酸钠。本发明可以使用其中一种，也可使用其中两种以上的组合。
本发明的第二方面，为用于制备组合物的方法，在示例性实施方案中，其包括：
(1)用去离子水调节植物复合提取液使固形物至8-15％，同时用去离子水配制8-15％的羟丙甲基纤维素溶液，按比例将两者混合以使植物复合提取液与羟丙甲基纤维素的重量比为(0.01-0.5):(20-30)；
(2)在搅拌的情况下向(1)的混合液中加入卡波姆、甘油、溶菌酶、尼泊金乙酯和乳酸菌素；
(3)将(2)的混合物加入于40-50℃下反应4-6小时，恒温成膜。
实施例1
一、天麻蛋白提取液的制备
1)天麻经洗涤、剔出杂质后，粉碎至80目，按料液比1:6(g/ml)，置于浓度为0.6％的氯化钠溶液中，80℃水浴提取4h；
2)减压过滤后，将所得天麻蛋白提取液浓缩为1(g/ml)的原药浓度；
3)向浓缩液中按体积比加入0.4％的复合酶水解液，复合酶水解液中含木瓜蛋白酶1.5％、胰蛋白酶0.8％、风味蛋白酶0.6％，酶解温度为55℃，酶解时间为40min，然后将酶解液过10KDa膜进行超滤，8000r.p.m离心20min，所得膜下滤液即为天麻蛋白提取物，于4℃条件下保存备用。
4)采用SDS-PAGE电泳法测天麻多肽分子量，经试验得出天麻蛋白分子量大概为5.8-7.8KD。
二、大豆乳清蛋白提取液的制备
1)将大豆乳清水去除泡沫，调节pH值至5.5搅拌后，通过离心或过滤去除不溶性悬浮物，调温至55℃，获得澄清的大豆乳清水；
2)除去不溶性杂质的大豆乳清水，添加氯化钠0.5％后，通过pH调节剂调整pH至4.6左右，通过调整pH和加盐量，提高蛋白聚集率，降低浓缩难度；
3)蒸汽再压缩技术浓缩大豆乳清水：利用蒸汽低温浓缩技术对调整过pH的进行浓缩，蒸发温度60-65℃，压缩后温度140-145℃，真空度70-80Kpa，浓缩至浓度达到13％-15％，得到浓缩液。
三、植物复合提取液的制备
将步骤一的天麻蛋白提取液与步骤二的大豆乳清蛋白提取液以1:5的重量比混合，用水稀释得到植物复合提取液。
四、复合膜的制备
用去离子水使植物复合提取液的固形物含量为10％，同时用去离子水配制羟丙基甲基纤维素溶液至固形物含量为10％。使20g植物复合提取液与2000g羟丙基甲基纤维素混合，缓慢磁力搅拌2h，加入100g卡波姆、6000g甘油、50g溶菌酶、60g尼泊金乙酯和4g乳酸菌素混合均匀，在混合过程中适量加入氯化钙溶液以促进凝胶形成。之后置于40-50℃下反应4-6小时，取适量于灭菌的培养皿中，晃动至液面水平，恒温成膜。
实施例2
一、天麻蛋白提取液的制备
1)天麻经洗涤、剔出杂质后，粉碎至80目，按料液比1:6(g/ml)，置于浓度为0.6％的氯化钠溶液中，80℃水浴提取4h；
2)减压过滤后，将所得天麻蛋白提取液浓缩为1(g/ml)的原药浓度；
3)向浓缩液中按体积比加入0.4％的复合酶水解液，复合酶水解液中含木瓜蛋白酶1.5％、胰蛋白酶0.8％、风味蛋白酶0.6％，酶解温度为55℃，酶解时间为2小时，然后将酶解液过10KDa膜进行超滤，8000r.p.m离心20min，所得膜下滤液即为天麻蛋白提取物，于4℃条件下保存备用。
4)采用SDS-PAGE电泳法测天麻多肽分子量，经试验得出天麻蛋白分子量大概为2.5KDa。
二、大豆乳清蛋白提取液的制备
1)将大豆乳清水去除泡沫，调节pH值至5.5搅拌后，通过离心或过滤去除不溶性悬浮物，调温至55℃，获得澄清的大豆乳清水；
2)除去不溶性杂质的大豆乳清水，添加硫酸铵0.5％后，通过pH调节剂调整pH至4.7左右，通过调整pH和加盐量，提高蛋白聚集率，降低浓缩难度；
3)蒸汽再压缩技术浓缩大豆乳清水：利用蒸汽低温浓缩技术对调整过pH的进行浓缩，蒸发温度60-65℃，压缩后温度140-145℃，真空度70-80Kpa，浓缩至浓度达到13％-15％，得到浓缩液。
三、植物复合提取液的制备
将步骤一的天麻蛋白提取液与步骤二的大豆乳清蛋白提取液以1:3的重量比混合，用水稀释得到植物复合提取液。
四、组合物的制备
用去离子水使植物复合提取液的固形物含量为10％，同时用去离子水配制羟丙基甲基纤维素溶液至固形物含量为10％。使35g植物复合提取液与2000g羟丙基甲基纤维素混合，缓慢磁力搅拌2h，加入80g卡波姆、6000g甘油、50g溶菌酶、60g尼泊金乙酯和4g乳酸菌素混合均匀。之后置于40-50℃下反应4-6小时制备成凝胶状，其粘度在10Pa.s-30Pa.s范围内。
五、一次性注射装置的制备
将步骤四的组合物装于高密度聚乙烯(HDPE)材质推进器内。根据每支推进器内组合物的装量不同，可制备为2g/支、3g/支、4g/支、5g/支、6g/支、7g/支等。
比较例1
除了不使用步骤一得到的天麻蛋白提取液以外，其余步骤与实施例1相同，由此得到比较例1的膜材料。
比较例2
除了不使用步骤二得到的大豆乳清蛋白提取液以外，其余步骤与实施例1相同，由此得到比较例1的膜材料。
比较例3
除了不添加植物复合提取液外，其余步骤与实施例1相同，由此得到比较例2的膜材料。
比较例4
除了不添加羟丙基甲基纤维素外，其余步骤与实施例1相同，由此得到比较例3的膜材料。
测试例
一、组合物灭活HPV活性实验
用荧光团Cy3 N-羟基琥珀酰亚胺酯(简称Cy3)标记纯化的HPV16L1抗原。具体地，将Cy3加入3mL纯化的HPV16L1抗原(0.2mg/mL)溶液，4℃条件下搅拌6小时后在透析袋(截留分子量2000)中用缓冲液透析除去未参与反应的Cy3，得到Cy3-HPV16 L1。类似地，用荧光团Cy5 N-羟基琥珀酰亚胺酯(简称Cy5)分别标记HPV16L1抗原的单克隆抗体。其中，单克隆抗体是构象型的，其只能识别抗原表位折叠正确的HPV16 L1，而不能识别折叠错误的抗原。当标记Cy3的抗原与标记Cy5的抗体结合后，由于Cy3和Cy5之间发生能量转移，使得535nm波长的光激发照射后产生的荧光被淬灭，从而使得566nm处峰的荧光强度显著降低。因此，荧光强度的变化反映了抗原抗体之间的结合情况。荧光强度的降低程度与抗原受到组合物的影响而变性的程度成负相关。
准备实施例1以及比较例1-3制备的膜材料，用pH值4.5左右含5mM DTT的PBS缓冲液浸渍后取出，观察各膜材料的外观。
在实施例1的膜材料中随机选取直径1cm的圆形小块，将其加入2mL Cy3-HPV16 L1抗原溶液(0.2mg/mL)中静置不同时间后，取抗原溶液使用RF-5301PC仪，以535nm波长的光激发，并检测566nm处峰的荧光强度。如图1所示，在向抗原溶液中放入圆形小块后，随着时间的推移，抗原溶液激发后在566nm处峰的荧光强度降低，说明溶液中抗原的浓度降低，抗原被吸附至膜材料。
接下来，利用实施例1-2以及比较例1-3的膜材料分别进行相同的实验，在吸附24小时后，取出各膜材料，分别加入等量且过量的Cy5标记的单克隆抗体(构象型)，室温孵育12小时，之后检测膜材料内抗原的荧光强度。结果如表1所示。
二、蛋白含量测定实验
依据在酸性溶液中考马斯亮蓝G250与蛋白质分子中的碱性氨基酸(精氨酸)和芳香族氨基酸结合形成蓝色复合物，在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比，以蛋白质对照品溶液作为标准曲线，采用比色法测定供试品中蛋白含量。
酸性染色液的配制：取考马斯亮蓝G2500.1g，加乙醇50ml溶液后，加磷酸100ml，加水稀释至1000ml，混匀。过滤取滤液即得。
对照品溶液的制备：取血清白蛋白(牛)对照品或蛋白质含量测定国家标准品，加水溶解并制成每1ml中含1mg的溶液。
供试品溶液的制备：取2份1g待测试样品分别加入15ml EP管内，各加水至5g，为5倍稀释，充分溶解备用。通过计算得到的蛋白质浓度乘以5(蛋白质浓度应与对照品溶液基本一致)。
测定方法：精密量取对照品溶液0.0ml、0.01ml、0.02ml、0.04ml、0.06ml、0.08ml、0.1ml，分别置具塞试管中，各加水至0.1ml，再分别加入酸性染色液5.0ml，立即混匀，照紫外-可见分光光度法，于595nm的波长处测吸光度；同时以0号管作为空白。以对照品溶液浓度与其相对应的吸光度计算线性回归方程。另精密量取供试品溶液适量，同法测定，从线性回归方程计算供试品溶液中的蛋白质浓度，并乘以稀释倍数，即得。测定结果如表1所示。
表1
Figure BDA0002801834060000111
由表1中可知，当加入抗体后，实施例1和2的膜材料的荧光强度几乎没有下降，说明实施例1和实施例2的膜材料吸附的抗原大部分已发生的构象改变，从而使单抗不能与之有效结合。相反，比较例1-3的荧光强度均有不同程度的大幅降低，说明比较例的膜材料中大量抗原仍能够与抗体结合，进而说明膜材料中仍存在大量未变性有活性的抗原。
尽管本发明已经参考示例性实施方案进行了描述，但应理解本发明不限于公开的示例性实施方案。在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的示例性实施方案做多种调整或变化。权利要求的范围应基于最宽的解释以涵盖所有修改和等同结构与功能。

Claims (7)

1.一种用于预控HPV病毒感染的组合物，其特征在于，包含0.01-0.5重量份植物复合提取液、20-30重量份羟丙甲基纤维素、0.5-1重量份卡波姆、50-150重量份甘油、0.1-1重量份溶菌酶、0.5-5重量份尼泊金乙酯和0.01-0.06重量份乳酸菌素，其中，所述植物复合提取液由大豆和天麻作为原料提取得到。
2.根据权利要求1所述的用于预控HPV病毒感染的组合物，其特征在于，所述植物复合提取液通过包括下述步骤的方法制备得到：
(a)将天麻以1:(6-12)g/ml的料液比置于氯化钠溶液中，在70-90℃下处理2-8h，过滤浓缩，向浓缩液中加入复合酶于50-60℃下水解30分钟至1.5小时，然后用膜超滤酶解液，离心后得到第一组分；
(b)将大豆乳清水的pH值调节至5.0-10.0，离心去除不溶性悬浮物，得到上清液，向上清液添加中性盐并调整pH至4.0-4.8，浓缩后得到第二组分；
(c)将所述第一组分和第二组分以1:(3-5)的重量比与水混合后得到植物复合提取液。
3.根据权利要求2所述的用于预控HPV病毒感染的组合物，其特征在于，所述大豆乳清水为从大豆分离蛋白和/或酸法浓缩蛋白生产过程中产生的乳清废水。
4.根据权利要求2所述的用于预控HPV病毒感染的组合物，其特征在于，步骤(b)中所述中性盐选自由硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠和磷酸钠组成的组中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的用于预控HPV病毒感染的组合物，其特征在于，所述组合物为凝胶状或膜状。
6.一种用于制备根据权利要求1-5任一项所述的组合物的方法，其特征在于，包括：
(1)用去离子水调节植物复合提取液使固形物至8-15％，同时用去离子水配制8-15％的羟丙甲基纤维素溶液，按比例将两者混合以使植物复合提取液与羟丙甲基纤维素的重量比为(0.01-0.5):(20-30)；
(2)在搅拌的情况下向(1)的混合液中加入卡波姆、甘油、溶菌酶、尼泊金乙酯和乳酸菌素；
(3)将(2)的混合物加入于40-50℃下反应4-6小时，恒温成膜。
7.一次性注射装置，其特征在于，在推进器内预装有根据权利要求1-4任一项所述的组合物。
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