WO2013143412A1

WO2013143412A1 - 药物组合物

Info

Publication number: WO2013143412A1
Application number: PCT/CN2013/072945
Authority: WO
Inventors: 黄璐; 牟峰; 张思佳; 杨焕明; 杨爽
Original assignee: 武汉华大药业有限公司; 武汉华大基因科技有限公司; 深圳华大基因健康科技有限公司
Priority date: 2012-03-29
Filing date: 2013-03-20
Publication date: 2013-10-03
Also published as: CN102652778A

Abstract

提供了药物组合物及其用途。其中，该药物组合物包含苦参提取物和绿茶提取物作为活性成分，其中，该苦参提取物是通过下列步骤制备的：将苦参进行加水提取，以便获得苦参提取液；将苦参提取液进行浓缩，以便获得苦参浓缩液；将苦参浓缩液进行pH调节；以及将经过pH调节的苦参浓缩液进行纯化，以便获得苦参提取物，该绿茶提取物是通过下列步骤制备的：将绿茶进行加醇提取，以便获得绿茶提取液；以及将绿茶提取液进行纯化，以便获得绿茶提取物。

Description

药物组合物优先权信息

本申请请求 2012 年 03 月 29 日向中国国家知识产权局提交的、专利申请号为 201210088224.3的专利申请的优先权和权益，并且通过参照将其全文并入此处。技术领域

本发明涉及中药领域，具体地涉及药物组合物及其用途。更具体地，本发明提供了药物组合物、药物组合物在制备药物中的用途以及制备药物的方法。背景技术

宫颈病变是女性最常见的疾病之一，宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一。

HPV (人类乳头瘤病毒)感染与湿疣、宫颈癌前病变、宫颈癌、皮肤癌的发病关系密切，几乎 99.8 %的宫颈癌都可以检出 HPV。目前人类还未发明出能够有效治疗 HPV 感染的药物，因此所谓治疗主要是针对由 HPV引起的宫颈或外生殖器或肛周或皮肤的局部病变，包括由 HPV感染引起的宫颈疾病如宫颈糜烂、宫颈癌前病变、宫颈癌；由 HPV感染引起的女阴上皮内瘤变；以及由 HPV感染引起的疣病，如扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣；以及由 HPV感染引起的皮肤癌前病变如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病。

宫颈癌前病变即所谓宫颈上皮内瘤变 (CIN), 包括宫颈非典型增生及宫颈癌，其反映了宫颈癌发生发展中的连续过程。宫颈非典型增生是指宫颈上皮细胞部分或大部分发生异形和不典型的分化，可以发生于宫颈外口或移行带或宫颈内膜表面。宫颈癌前病变由于病位特殊，目前临床上以局部治疗为主。现代医学治疗主要釆用物理治疗和手术治疗，物理疗法包括激光、冷冻、红外线、微波、电灼和聚焦超声等，但治疗后常出现阴道分泌物增多、水样排液及阴道不规则出血，还可能引起宫颈管狹窄、黏连甚至不孕等副作用，而宫颈锥切术、宫颈广泛切除和子宫全切除等手术治疗对人体的创伤重，痛苦大，医疗费用高。

Merck公司生产的针对 HPV6/11/16/18亚型的宫颈癌预防性疫苗 Gardasil, 目前已经在国外上市并投入使用。 GSK公司生产的针对 HPV16/18亚型的宫颈癌预防性疫苗 Cervarix, 具有安全、能够耐受，以及免疫源性好等特点。但这两种疫苗都只是预防性疫苗，尚没有资料证实其对现存的宫颈癌及癌前病变有治疗作用，此外，疫苗不仅会导致受试者注射部位疼痛、肿胀发红，而且价格昂贵。

日光性角化病（AK ) 又名老年性角化病，就是由长期在日光下曝晒损伤皮肤引起的癌前期皮肤损害，通常会让脸部皮肤和头皮变粗糙、发红、成片剥落，或者结痂，日光、紫外线、放射性热能以及沥青或煤及其提炼物均可诱发此病。 AK是一种皮肤癌前期病变，部分 AK可自行消退，但若不经治疗，则约 20%的患者一个或多个皮损可发展为鳞状细胞癌，研究显示 65%的鳞状细胞癌是由 AK导致的。因此积极的治疗日光性角化病，可防止鳞状细胞癌的发生。该病现有的疗法包括液氮法、电灼法、激光疗法和局部外用药治疗。在治疗 AK的药物中，可局部应用 5% 5-氟尿嘧啶，连用数周，但该药可引起暂时性皮肤红肿、红斑、水疱和溃疡等；应用 2.5%咪喹莫特乳膏治疗的局部皮肤副作用较大，皮损处易引起红斑、水肿及糜烂；双氯芬酸虽然耐受性更好，但疗效不高。

大量实验研究证实，在日光性角化病、皮肤癌前组织及皮肤癌组织中可检测到人乳头瘤病毒 DNA。皮肤恶性肿瘤与人乳头瘤病毒感染密切相关，临床上 HPV 的感染率亦逐年增加， Kiviat等人认为， HPV感染致皮肤癌的作用与紫外线的致癌作用是同等重要的因素。

因此，目前对治疗由 HPV感染引起的宫颈癌前病变以及皮肤癌前病变的药物，特别是治疗由 HPV感染引起的宫颈糜烂、轻度宫颈非典型增生（CIN I ) 、中度宫颈非典型增生（CIN II ) , 以及治疗由 HPV感染引起的日光性角化病的药物的研究，仍有待力口强。发明内容

本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

近年来，运用中医药对宫颈癌前病变的研究日趋深入，但目前尚无治疗宫颈癌前病变的中药应用于临床。苦参中富含生物碱类化合物，而生物碱中以苦参碱、氧化苦参碱为主。中药苦参具有清热燥湿，祛风杀虫的作用，多用于疮、疥、癣疾等疾病，主湿热泻痢、肠风便血、黄疸、小便不利、水肿、带下、阴痒、疥癣、麻风、皮肤瘙痒、湿毒疮疡。绿茶是一种非发酵茶，也是一种人们常用的饮料，其主要活性成分是茶多酚。绿茶中茶多酚约占茶叶干重的 20%〜30%。茶多酚是一类多羟基酚类化合物的总称，其主要成分是儿茶素类化合物，约占绿茶中茶多酚总量的 65%〜80%。儿茶素类化合物主要含有 4种单体：表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG)、表儿茶素没食子酸酯 (ECG)、表儿茶素 (EC)及表没食子儿茶素 (EGC)。其中， EGCG含量最高，约占儿茶素类化合物的 50%。绿茶具有清热解毒，收敛除湿等功效，而且经研究证明，绿茶还具有抗病毒、抗菌、抗氧化、抗增生作用。目前国内外有关苦参绿茶组合物在制备治疗由 HPV感染引起的宫颈癌前病变以及皮肤癌前病变药物中的应用未见报道。

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。因此，针对现阶段用于治疗宫颈癌前病变以及皮肤癌前病变药物不足的情况，本发明提供了一种药物组合物及其用途。

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种药物组合物。根据本发明的实施例，该药物组合物包含苦参提取物和绿茶提取物作为活性成分。根据本发明的实施例，优选苦参提取物和绿茶提取物的重量比率为 1 : 1 ~ 2 , 更优选 1 : 1.2。其中，苦参提取物是通过下列步骤制备的：将苦参进行加水提取，以便获得苦参提取液；将苦参提取液进行浓缩，以便获得苦参浓缩液；将苦参浓缩液进行 pH调节；以及将经过 pH调节的苦参浓缩液进行纯化，以便获得苦参提取物。绿茶提取物是通过下列步骤制备的：将绿茶进行加醇提取，以便获得绿茶提取液；以及将绿茶提取液进行纯化，以便获得绿茶提取物。根据本发明的实施例，在得到苦参提取物和绿茶提取物之后，可以根据需要，对所得到的提取物进行干燥得到固体物质。

利用该药物组合物，能够有效地治疗或者预防由 HPV感染引起的宫颈癌前病变，能够对宫颈癌前病变进行有效地治疗。另外，发明人发现，利用该药物组合物可以有效地抑制 HPV E7基因的表达，并且能够用于治疗由 HPV感染引起的宫颈糜烂、轻度宫颈非典型增生及中度宫颈非典型增生。并且进一步发现，该药物组合物还能够有效用于使宫颈癌前病变细胞向良性转化。

本发明进一步发现，该药物组合物可预防 UVA辐射后的组织损伤，延长光老化进程，在 UVA辐射前外用该药物组合物对皮肤有保护效应，表明苦参绿茶组合物可能是防治光老化的有用成分。该药物对 HPV的抑制作用，也可将该药物组合物用于由 HPV 感染引起的日光性角化病的治疗以及由日光性角化病引起的皮肤癌前病变的治疗。

根据本发明的实施例，将苦参进行加水提取，可以进一步包括：将苦参用 6-10倍重量的水进行水煮 2-3次，每次 0.5-2小时，并合并提取液，以便获得苦参提取液。根据本发明的实施例，苦参浓缩液在 50摄氏度时的相对密度为 1.06 ~ 1.08。根据本发明的实施例，利用盐酸将苦参浓缩液进行 pH调节，其中，经过 pH调节的苦参浓缩液的 pH为 3-4。根据本发明的实施例，可以利用阳离子交换树脂将经过 pH调节的苦参浓缩液进行纯化。

具体地，根据本发明实施例的苦参提取物的制备方法可以为如下：

取苦参药材，用 6-10倍量的水煮 2-3次，每次 0.5-2小时，必要时，在水煮之前可以进行粉碎。合并提取液，浓缩至相对密度为 1.06 - 1.08 ( 50 °C )的浓缩液，加盐酸调 pH值至 3-4, 滤过，上清液过阳离子交换树脂柱，用 8-12倍树脂体积水及 5-8倍树脂体积的 30%乙醇洗去部分杂质，再用 0.5-2倍树脂体积浓氨水碱化树脂，用 5-8倍树脂体积的 30%乙醇洗脱。洗脱液经减压浓缩，干燥，粉碎，得苦参提取物细粉，其中细粉的粒度为 50-100目。需要说明的是，在本文中所使用的单位 "目" ，指的是颗粒粒度能够通过每平方英寸上具有所限定数目孔的稀子，本领域技术人员可以方便地通过公式：目数 X孔径（微米数） = 15000 , 确定筛的孔径，从而可以确定以微米为单位的颗粒粒度。

根据本发明的具体示例，优选苦参提取物的制备方法如下：

苦参药材 3.6kg, 用 8倍量的水煮 3次，每次 1小时，必要时，在水煮之前可以进行粉碎。合并提取液，浓缩至相对密度为 1.06 - 1.08 ( 50 °C ) 的浓缩液。加盐酸调 pH 值至 3 ~ 4 , 滤过，上清液过 732型阳离子交换树脂柱，用 10倍树脂体积水及 6倍树脂体积的 30%乙醇洗去部分杂质，再用 1倍树脂体积浓氨水碱化树脂，用 6倍树脂体积 30%乙醇洗脱。洗脱液经减压浓缩，干燥，粉碎，得苦参提取物细粉 100g, 其中该细粉的粒度为 80目。

根据本发明的实施例，将绿茶进行加醇提取可以进一步包括：将绿茶用 8-12倍重量的 50-70%乙醇进行加热回流提取 1-3次，每次 1-3小时，并合并提取液，以便获得绿茶提取液。

根据本发明的实施例，将绿茶提取液进行纯化可以进一步包括：将绿茶提取液进行减压处理，以便除去乙醇；将所得的绿茶提取液进行大孔树脂柱处理，以便获得经过纯化的绿茶提取液。

具体地，根据本发明实施例的绿茶提取物的制备方法可以为如下：

绿茶药材加入 8-12倍量的 50%-70%乙醇加热回流提取 1-3次，每次 1-3小时，合并提取液。提取液减压回收除去乙醇，提取液离心，弃去残渣，滤液上大孔树脂柱，用水洗脱至无醇味，用 5-8个柱体积的水洗脱，再用 4-6个柱体积的 10%-30%乙醇洗脱，最后用 5个柱体积的 60%-80%乙醇洗脱，将经乙醇洗脱部分回收，干燥，粉碎，得绿茶提取物细粉，细粉的粒度为 50-100目。

根据本发明的具体示例，优选绿茶提取物的制备方法如下：

绿茶药材 1.0kg, 加入 10倍量的 60%乙醇加热回流提取两次，每次 1.5小时，合并提取液。提取液减压回收除去乙醇，提取液离心，弃去残渣，滤液上大孔树脂（D 101 型）柱，用水洗脱至无醇味，用 6个柱体积的水洗脱，再用 5个柱体积的 15%乙醇洗脱，最后用 5个柱体积的 70%的乙醇洗脱，将经乙醇洗脱部分回收，干燥，得干浸膏细粉（绿茶提取物） 100g , 细粉的粒度为 80目。

此外，根据本发明的实施例，制备药物组合物时，苦参与绿茶药材，即用于制备苦参和绿茶提取物的原材料的重量比例为 3.6: 1〜2 , 根据本发明的具体示例，优选苦参与绿茶药材的重量比例为 3.6: 1 , 更优选地，苦参与绿茶药材的重量比例为 2.25 : 1 , 最优选地，苦参与绿茶药材的重量比例为 3 : 1。

根据本发明的实施例，本发明的药物组合物可以进一步包括药学上可接受的辅料，从而可以使得药物组合物能够呈现适于给药的形式。优选本发明的药物组合物可以呈选自凝胶剂、洗剂、栓剂、泡腾片、泡腾胶嚢、气雾剂以及喷雾剂的至少一种的形式。由此，可以方便使得所述药物组合物适于为对象进行给药。

由此，根据本发明的实施例的药物组合物，可以是以苦参和绿茶为原料，加入药学上可接受的辅料制备而成的中药制剂，并且这些中药制剂可以制成凝胶剂、洗剂、栓剂、泡腾片、泡腾胶嚢、气雾剂或喷雾剂等。

根据本发明的实施例，本发明的药物组合物可以用于治疗或预防宫颈癌前病变。根据本发明的一些具体示例，该药物组合物可以用于使宫颈癌前病变细胞向良性转化。根据本发明的一些实施例，该药物组合物可以用于抑制 HPV E7基因的表达。根据本发明的实施例，本发明的药物组合物能够用于治疗由 HPV感染引起的宫颈糜烂、轻度宫颈非典型增生及中度宫颈非典型增生。

进一步，本发明的药物组合物能够有效地治疗由 HPV感染引起的宫颈癌前病变，使早期宫颈癌前病变的治疗，特别是对宫颈糜烂、轻度宫颈非典型增生及中度宫颈非典型增生的治疗及预防变成现实。

根据本发明的实施例，本发明的药物组合物可以用于治疗或预防皮肤癌前病变。根据本发明的实施例，该药物组合物可预防 UVA辐射后的组织损伤，延长光老化进程，在 UVA辐射前外用该药物组合物对小鼠皮肤有保护效应，表明苦参绿茶组合物是防治光老化的有用成分，可将该药物组合物用于由 HPV感染引起的日光性角化病的治疗。

进一步，本发明的组合物能够有效地治疗或者预防由 HPV感染引起的日光性角化病导致的皮肤癌前病变。

此外，发明人还发现，利用本发明实施例的药物组合物进行宫颈癌前病变和宫颈癌治疗时，前者的治疗效果优于后者。因而，优选将根据本发明实施例的药物组合物用于对宫颈癌前病变进行治疗，特别是对宫颈糜烂、轻度宫颈非典型增生及中度宫颈非典型增生的治疗。进一步，根据本发明的实施例，通过将苦参和绿茶这两种中药以不同的比例进行组合，制备药物组合物进行药效学试验，发明人惊奇地发现，本发明的药物组合物对治疗宫颈癌前病变具有有益效果。其中，部分药效学试验设计及其试验结果如下：

发明人建立了 HPV (人类乳头瘤病毒）体外筛选模型，选择人宫颈癌细胞 HeLa 作为体外研究对象，利用苦参提取物和绿茶提取物比例不同的多种药物组合物，作用于 HeLa细胞，并通过实时荧光定量 PCR法对作用前后细胞内 HPV E7基因（在本文中，有时也简单称为 E7基因）的相对表达倍数的变化进行检测，考察苦参绿茶比例不同的药物组合物对 HeLa细胞 E7基因表达的抑制作用。

试验结果显示：当药物组合物中苦参绿茶提取物的比例分别在 1 : 1〜2 时，其对 E7基因相对表达抑制作用显著，产生了预料不到的技术效果。特别是当药物组合物中苦参绿茶提取物比例在 1 : 1.2时，在作用于 HeLa细胞 72h后，其对 HeLa细胞的 E7 基因的抑制作用最显著。具体地，当各种苦参绿茶提取物配比的药物组合物作用于 HeLa 细胞 72h后，细胞内 E7基因相对表达倍数与正常对照组相比均有降低的趋势，当药物组合物中的苦参绿茶提取物比例在 1 : 1〜2时，对 E7基因相对表达抑制作用显著，抑制率最高达到 87.292%。同时当苦参绿茶提取物比例分别为 1 : 1、 1 : 1.2、 1 : 1.6时，药物组合物对 E7基因的相对表达抑制接近。当药物组合物中绿茶提取物的比例继续升高，使得苦参绿茶比例为 1 : 2时，其对 E7基因的相对表达抑制率降低。当药物组合物中苦参绿茶提取物比例在 1 : 1.2时，作用于 HeLa细胞 72h后，其对 HeLa细胞 E7 基因的抑制作用最显著。根据本发明的实施例，通过进行药物组合物对宫颈癌 HeLa细胞增殖抑制的实验，发明人惊奇地发现，药物组合物能够显著抑制宫颈癌 HeLa细胞的体外增殖，且其作用效应随着对 HeLa细胞的培养时间的延长和药物组合物浓度的增加而增加，表明本发明的药物组合物对人宫颈癌 HeLa细胞的增殖有抑制作用，并且具有明显的时间和剂量依赖性。当利用相同浓度梯度的药物组合物、苦参、绿茶进行宫颈癌 HeLa细胞增殖抑制实验时，药物组合物对宫颈癌 HeLa 细胞增殖的抑制率明显比单用苦参或单用绿茶对 HeLa细胞增殖的抑制率高，并且发明人发现：药物组合物对 HeLa细胞凋亡的影响，比仅用苦参提取物或仅用绿茶提取物对 HeLa细胞凋亡的影响显著，从而证明了苦参提取物与绿茶提取物进行组合，具有协同效应。

根据本发明的实施例，通过进行药物组合物对宫颈癌 HeLa 细胞凋亡率影响的试验，发明人发现，不同浓度的药物组合物作用于 HeLa细胞 24小时、 48小时、 72小时后，细胞凋亡发生率明显增高，随着药物组合物浓度加大和作用时间延长，凋亡率明显增高。

根据本发明的实施例，利用自制的药物组合物凝胶，进行药物组合物凝胶对宫颈上皮内瘤变 (CIN)小鼠宫颈组织 PCNA、 EGFR和 bcl-2表达影响的试验，由试验结果，发明人惊奇地发现，药物组合物凝胶是通过抑制增殖因子、 EGFR以及抗凋亡因子的表达，而发挥抑制宫颈上皮异型细胞增生的作用，进而抑制宫颈上皮异型细胞的增殖，促进宫颈上皮异型细胞凋亡，使宫颈癌前病变细胞向良性转化，从而达到阻断宫颈浸润癌发生的目的，进而达到有效治疗宫颈癌前病变的目的。

根据本发明的一些具体示例，通过利用自制的药物组合物栓剂、洗剂、泡腾片、泡腾胶嚢，进行对宫颈上皮内瘤变小鼠宫颈组织 PCNA、 EGFR和 bcl-2表达影响的试验，发明人也得到了与上述实验相同的结论。

根据本发明的实施例，利用自制的药物组合物软膏，进行药物组合物软膏对接受紫外线辐射后小鼠的皮肤保护作用的实验。研究结果显示苦参绿茶软膏可预防 UVA辐射后的组织损伤，延长光老化进程，在 UVA辐射前外用苦参绿茶软膏对小鼠皮肤有保护效应，表明苦参绿茶是防治光老化的有效成分，可将苦参绿茶软膏用于由 HPV感染引起的日光性角化病等皮肤癌前病变疾病的治疗。

根据本发明的又一方面，本发明提供了根据本发明实施例的药物组合物在制备药物中的用途，该药物用于治疗或预防由 HPV感染引起的宫颈癌前病变。根据本发明实施例，该药物可以用于使宫颈癌前病变细胞向良性转化。根据本发明具体示例，该药物可以用于抑制 E7 基因的表达。根据本发明的一些实施例，药物组合物用于治疗由

HPV感染引起的宫颈糜烂、轻度宫颈非典型增生及中度宫颈非典型增生。根据本发明实施例，该药物可以呈选自凝胶剂、洗剂、栓剂、泡腾片、泡腾胶嚢、气雾剂以及喷雾剂的至少一种的形式。

根据本发明的又一方面，本发明提供了根据本发明实施例的药物组合物在制备药物中的用途，该药物用于治疗或预防由 HPV感染引起的皮肤癌前病变。根据本发明实施例，该药物可以预防 UVA辐射后的组织损伤，延长光老化进程，在 UVA辐射前外用该药物对皮肤有保护效应。根据本发明的一些实施例，该药物能够用于治疗由 HPV 感染引起的日光性角化病等皮肤癌前病变疾病。根据本发明实施例，该药物可以呈选自凝胶剂、软膏、乳膏、气雾剂以及喷雾剂的至少一种的形式。

根据本发明的再一方面，本发明提供了一种制备药物的方法。根据本发明的实施例，该方法包括下列步骤：制备苦参提取物；制备绿茶提取物；以及将苦参提取物与绿茶提取物按照预定的重量比率进行混合，以便得到药物，所述预定的重量比率优选为 1 : 1 ~ 2 , 更优选为 1 : 1.2, 其中，制备苦参提取物进一步包括：将苦参进行加水提取，以便获得苦参提取液；将所得的苦参提取液进行浓缩，以便获得苦参浓缩液；将苦参浓缩液进行 pH调节；将经过 pH调节的苦参浓缩液进行纯化，以便获得苦参提取物。制备绿茶提取物进一步包括：将绿茶进行加醇提取，以便获得绿茶提取液；以及将绿茶提取液进行纯化，以便获得绿茶提取物。根据本发明的实施例，在得到苦参提取物和绿茶提取物之后，可以根据需要，对所得到的提取物进行干燥得到固体物质。

利用上述制备药物的方法所得到的药物，能够对由 HPV感染引起的宫颈癌前病变进行有效地治疗。另外，发明人发现，利用该药物还能够有效用于使宫颈癌前病变细胞向良性转化。并且进一步发现，该药物可以有效地抑制 E7基因的表达，以及用于治疗由 HPV感染引起的宫颈糜烂、轻度宫颈非典型增生及中度宫颈非典型增生。

利用上述制备药物的方法所得到的药物，能够对由 HPV感染引起的皮肤癌前病变进行有效地治疗。另外，发明人发现，利用该药物还能够预防 UVA辐射后的组织损伤，延长光老化进程，在 UVA辐射前外用该药物对皮肤有保护效应，可以用于治疗由 HPV 感染引起的日光性角化病。

根据本发明的实施例，其中将苦参进行加水提取，可以进一步包括：将苦参用 6-10 倍重量的水进行水煮 2-3次，每次 0.5-2小时，并合并提取液，以便获得苦参提取液。根据本发明的实施例，苦参浓缩液在 50摄氏度时的相对密度为 1.06 ~ 1.08。根据本发明的实施例，利用盐酸将苦参浓缩液进行 pH调节，其中，经过 pH调节的苦参浓缩液的 pH为 3-4。根据本发明的实施例，可以利用阳离子交换树脂将经过 pH调节的苦参浓缩液进行纯化。

取苦参药材，，用 6-10倍量的水煮 2-3次，每次 0.5-2小时，必要时可以在水煮之前进行粉碎。合并提取液，浓缩至相对密度为 1.06 - 1.08 ( 50 °C )的浓缩液，加盐酸调 pH值至 3-4, 滤过，上清液过阳离子交换树脂柱，用 8-12倍树脂体积水及 5-8倍树脂体积的 30%乙醇洗去部分杂质，再用 0.5-2倍树脂体积浓氨水碱化树脂，用 5-8倍树脂体积的 30%乙醇洗脱。洗脱液经减压浓缩，干燥，粉碎，得苦参提取物细粉，该细粉的粒度为 50-100目。根据本发明的具体示例，优选苦参提取物的制备方法如下：

苦参药材 3.6kg, 用 8倍量的水煮 3次，每次 1小时，必要时可以在水煮之前进行粉碎。合并提取液，浓缩至相对密度为 1.06 - 1.08 ( 50 °C ) 的浓缩液。加盐酸调 pH值至 3 ~ 4 , 滤过，上清液过 732型阳离子交换树脂柱，用 10倍树脂体积水及 6倍树脂体积的 30%乙醇洗去部分杂质，再用 1倍树脂体积浓氨水碱化树脂，用 6倍树脂体积 30% 乙醇洗脱。洗脱液经减压浓缩，干燥，粉碎，得苦参提取物细粉 100g, 该细粉的粒度为 80目。

绿茶药材加入 8-12倍量的 50%-70%乙醇加热回流提取 1-3次，每次 1-3小时，合并提取液。提取液减压回收除去乙醇，提取液离心，弃去残渣，滤液上大孔树脂柱，用水洗脱至无醇味，用 5-8个柱体积的水洗脱，再用 4-6个柱体积的 10%-30%乙醇洗脱，最后用 5个柱体积的 60%-80%乙醇洗脱，将经乙醇洗脱部分回收，干燥，粉碎，得绿茶提取物细粉。

根据本发明的具体示例，优选绿茶提取物的制备方法如下：

绿茶药材 1.0kg, 加入 10倍量的 60%乙醇加热回流提取两次，每次 1.5小时，合并提取液。提取液减压回收除去乙醇，提取液离心，弃去残渣，滤液上大孔树脂（D 101 型）柱，用水洗脱至无醇味，用 6个柱体积的水洗脱，再用 5个柱体积的 15%乙醇洗脱，最后用 5个柱体积的 70%的乙醇洗脱，将经乙醇洗脱部分回收，干燥，得干浸膏细粉（绿茶提取物） 100g。

根据本发明的实施例，本发明的制备药物的方法可以进一步包括添加药学上可接受的辅料制备而成的中药制剂的步骤。根据本发明的实施例，本发明的制备药物的方法可以进一步包括下列步骤：将药物制成选自凝胶剂、洗剂、栓剂、泡腾片、泡腾胶嚢、气雾剂以及喷雾剂的至少一种的形式。

根据本发明的实施例，利用本发明的制备药物的方法制备的药物，可以用于治疗或预防宫颈癌前病变。根据本发明的一些具体示例，该药物可以用于使宫颈癌前病变细胞向良性转化。根据本发明的一些实施例，该药物可以用于抑制 E7基因的表达。

根据本发明的实施例，利用本发明的制备药物的方法制备的药物，可以用于治疗或预防皮肤癌前病变。根据本发明的一些具体示例，该药物可以预防 UVA辐射后的组织损伤，延长光老化进程，在 UVA辐射前外用该药物对皮肤有保护效应。根据本发明的又一方面，本发明还提出了一种药物，其是通过上述制备药物的方法制备的。如前所述，利用该药物，能够对宫颈癌前病变进行有效地治疗。另外，发明人发现，该药物可以有效地抑制 E7基因的表达。并且进一步发现，利用该药物还能够有效用于使宫颈癌前病变细胞向良性转化，以及根据本发明的一些实施例，药物组合物用于治疗由 HPV感染引起的宫颈糜烂、轻度宫颈非典型增生及中度宫颈非典型增生。此外，根据本发明的实施例，利用该药物，能够对皮肤癌前病变进行有效地治疗。另外，发明人发现，该药物可以预防 UVA 辐射后的组织损伤，延长光老化进程，在 UVA辐射前外用该药物对皮肤有保护效应，以及，该药物可以用于治疗由 HPV感染引起的日光性角化病。

需要说明的是，本发明的药物组合物及其用途是本申请的发明人经过艰苦的创造性劳动和优化工作才完成的。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。发明详细描述

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。除非特殊说明，在实施例中所进行的操作均为按照《中华人民共和国药典》 2010年版以及本领域中公知的方法进行的。

实施例 1: 苦参提取物的制备

苦参药材 3.6kg, 加水煮三次，每次 1小时，每次加 8倍体积的水，合并提取液，减压浓缩至相对密度为 1.06 - 1.08 ( 50°C ) 的浓缩液。加盐酸调 pH值至 3 ~ 4, 滤过，将上清液过处理合格的 732型阳离子交换树脂柱，用 10倍树脂体积水及 6倍树脂体积的 30%乙醇洗去部分杂质，再用 1倍树脂体积浓氨水碱化树脂，用 6倍树脂体积 30%乙醇洗脱。洗脱液经减压浓缩，喷雾干燥，得干浸膏细粉（苦参提取物） 100g, 其粒度为 80目。

实施例 2: 绿茶提取物的制备

绿茶药材 1.0kg, 加入 10倍量的 60%乙醇加热回流提取两次，每次 1.5h, 合并提取液。提取液减压回收除去乙醇，提取液离心，弃去残渣，将滤液上大孔树脂（D101型）柱，用水洗脱至无醇味，用 6个柱体积的水洗脱，再用 5个柱体积的 15%乙醇洗脱，最后用 5个柱体积的 70%乙醇洗脱，将经乙醇洗脱部分回收，真空干燥，得干浸膏细粉（绿茶提取物） 100g, 其粒度为 80目。

实施例 3: 不同配比的苦参绿茶药物组合物体外对人宫颈癌 HeLa细胞 HPV E7基因相对表达量的影响

一、实验细胞株及试验药物

试验细胞株：人宫颈癌细胞株 HeLa细胞（中国医学科学院肿瘤医院惠赠）。

受试物：苦参提取物和绿茶提取物，其分别根据实施例 1和 2所制备，并且按照下列步骤配置苦参提取物和绿茶提取物的母液：

苦参提取物母液：称取 15.6367g苦参提取物（含水量为 7.5% )溶于 37ml不完全 DMEM 中，超声助溶，然后利用 0.45μηι和 0.22μηι滤膜过滤除菌除杂，终浓度为 351mg/ml,于 4°C 下保存。

绿茶提取物母液：称取 80mg绿茶提取物溶于 1ml不完全 DMEM中，然后利用 0.45μηι 和 0.22μηι滤膜过滤除菌除杂，终浓度为 80mg/ml, 于 4°C下保存。

二、不同配比的药物组合物对 HeLa细胞 HPV E7基因相对表达的影响

取对数生长期的 HeLa细胞，以 lxlO⁶个 .ml—¹的密度接种于六孔板中，每孔 1 ml, 于 37°C, 5% C0₂, 饱和湿度条件下培养 24 h, 然后分别添加细胞毒作用低于 5%的不同配比的药物组合物继续培养 72 h, 加药浓度如表 1所示，然后利用实时荧光定量 PCR法对各组的 E7基因的表达量进行检测。

表 1 苦参绿茶提取物最佳配比实验各药物组合物的加药浓度 g/ml )

实验完毕后，受试药对 E7基因相对表达量的影响实验数据由 IQ5软件自动统计，得均值和标准差；手算计算公式为 2—^{Δ ΔΩ}。组间比较釆用单因素方差检验。结果如下表所示：手算结果与 IQ5统计结果一致。

三、不同配比的药物组合物对 HeLa细胞的 HPV E7基因相对表达倍数的影响在上一步的利用实时荧光定量 PCR法对各组的 E7基因的表达量进行检测后，以 β-肌动蛋白（ actin )为内参对照基因，应用 SYBR荧光探针，釆用实时荧光定量 PCR法观察不同配比的药物组合物对 HeLa细胞内 E7基因的影响。实验结果表明不同配比的药物组合物作用于 HeLa细胞 72h后，细胞内 E7基因相对表达倍数与正常对照组相比均有降低的趋势，见下表 2。

表 2 不同配比的药物组合物对 E7基因相对表达量的影响 IQ5软件分析手算分析组别比例基因表达 Mean士 S 基因表达 Mean士 S

抑制率(％) 抑制率(％) ( n— 4 ) ( n— 4 )

对照 - 1.929±1.248 - 1.000±0.000 -

A 32: 1 1.010±0.776 47.647 0.657±0.468 34.280

B 16: 1 1.000±0.237 48.160 0.525±0.092 47.475

C 8: 1 0.961±0.385* 50.156 0.511±0.140* 48.916

D 4: 1 0.818±0.216* 57.583 0.437±0.116* 56.346

E 2: 1 0.576±0.113** 70.159 0.298±0.026** 70.183

F 1 : 1 0.277±0.051 ** 85.633 0.147±0.031 ** 85.350

G 5:6 0.245±0.148** 87.292 0.139±0.063** 86.071

H 5:8 0.258±0.119** 86.632 0.150±0.089** 85.006

I 1 :2 0.710±0.256* 63.201 0.388±0.129* 61.186 注： *与正常对照组相比， p < 0.05;

**与正常对照组相比, p < 0.01 ;

***n=4 , 代表每组均做了 4个数据值出来，举例说明：如 E组的值 0.576士0.113 , 0.576是这 4 个数据的平均值， 0.113是由这 4个值算出来的 S值（标准偏差）。

表 2的数据，显示了不同配比的药物组合物作用于 HeLa细胞 72h后，对细胞内 E7基因的相对表达量的影响。

由表 2可知见，不同配比的药物组合作用于 HeLa细胞 72h后，细胞内 E7基因的相对表达量与正常对照组相比均有降低的趋势，其中 C-I组与正常对照组相比有显著性差异（p < 0.05 )；随着绿茶提取物在药物组合物中比例的升高， E7基因的相对表达量呈逐渐降低的趋势，当苦参绿茶的比例分别在 2: 1、 1 : 1、 1 : 1.2、 1 : 1.6时，药物组合物对 E7基因的相对表达抑制作用显著，抑制率最高达到 87.292%, 但 1 : 1、 1 : 1.2、 1 : 1.6三种比例的药物组合物对 E7基因的相对表达抑制率接近。当绿茶提取物的比例继续升高，使得药物组合物中苦参绿茶比例为 1 : 2时，其对 E7基因的相对表达抑制率降低。当苦参绿茶比例在 1 : 1.2时，作用于 HeLa细胞 72h后，其对 HeLa细胞 E7基因的抑制作用最显著。

实施例 4: 药物组合物对宫颈癌 HeLa细胞的增殖抑制作用

一、实验细胞株及试验药物

实验细胞株：人宫颈癌细胞株 HeLa细胞（中国医学科学院肿瘤医院惠赠）。其中，苦参提取物、绿茶提取物分别为根据实施例 1和 2所制备的。

二、方法： 2. 1 细胞培养：将冻存的宫颈癌 HeLa细胞于 37°C下快速融化，进行常规复苏和传代：置于含 10 %胎牛血清的 DMEM培养液中，于 37°C , 5 % C0₂的培养箱内培养，当细胞贴壁 80 %时进行传代， 1周传代 2次。

2. 2 细胞增殖抑制实验：取对数生长期的 HeLa细胞，以 lxlO⁶个 /ml的密度接种于六孔板中，每孔 l ml, 于 37。C, 5% C0₂, 饱和湿度条件下培养 24 h后给药，即添加不同浓度的苦参提取物（具体见表 3 )、绿茶提取物（具体见表 4 ), 药物组合物（具体见表 5 ), 对照组仅加生理盐水。然后分别培养 24 h、 48 h、 72 h后，添加 20微升 5 mg/ml的 MTT, 于 37°C下孵育 4 h, 然后弃上清，每孔添加 200微升 DMSO, 振荡，使结晶溶解，用酶标仪检测其 570 nm处的吸光度 (OD)值，并根据公式计算细胞生长抑制率，该公式为：细胞生长抑制率 =(1-各处理组 OD均值 /空白对照组 OD均值） X 100 %。

2. 3 流式细胞仪检测细胞凋亡率：将上述利用不同浓度的苦参提取物、绿茶提取物和药物组合物（具体见表 6、表 7和表 8 )对 HeLa细胞进行不同时间 (24h, 48h, 72 h)处理后所得的细胞进行收集，然后用 EDTA进行消化，收集 1 X 10⁶个细胞， lOOOr/min离心 5 min, 弃上清，接着用 4°C预冷的 PBS洗涤细胞， 1000r/min离心 5 min后弃上清，共 2次，接下来用 250微升结合緩冲液重新悬浮细胞，再取 100微升细胞悬浮于 5ml流式管中，添加 5 微升 Annexin V/FITC和 10微升 20 mg/L的 PI,混匀后避光孵育 15min, 然后在反应管中添加 400微升 PBS, 利用流式细胞仪 (FCM)对所得的体系进行细胞凋亡分析。

三、实验结果

3. 1 细胞增殖抑制实验：将各处理组与空白对照组的实验结果进行比较，可知各浓度的药物组（指分别利用苦参提取物、绿茶提取物和药物组合物对 HeLa 细胞进行的处理）的 OD值均明显低于对照组 (P<0.01), 结果见表 3、表 4和表 5。且随着给药浓度的升高，各浓度的药物组 OD值逐渐降低，各组间（指分别利用苦参提取物、绿茶提取物和药物组合物对 HeLa细胞进行的处理）比较均有显著性差异 (P<0.01)。从表 3-表 5中可以看出，药物组合物对宫颈癌 HeLa细胞增殖的抑制率明显比单用苦参或单用绿茶对 HeLa细胞增殖的抑制率高、效果好，证明本发明的药物组合物具有协同效应。研究表明，药物组合物显著抑制宫颈癌 HeLa 细胞的体外增殖，且其作用效应随着培养时间的延长和药物浓度的增加而增加，表明本发明的药物组合物对人宫颈癌 Hela细胞的增殖有抑制作用，并且具有明显的时间和剂量依赖性。

取物 OD值 OD值 OD值

抑制率(％) 抑制率(％) 抑制率(％)

(mg/ml) (Mean士 S) (Mean士 S) (Mean士 S)

- 1.142士0.010 0 1.139±0.009 0 1.138±0.009 0

1.10 1.055士 0.029* 7.65 1.011士 0.030* 11.2 0.915±0.033* 19.6

2.19 0.926士 0.055* 18.9 0.867士 0.060* 23.9 0.818士 0.062* 28.1

4.38 0.685士 0.028* 40.0 0.653士 0.041* 42.7 0.530士 0.055* 53.4

8.75 0.498±0.023* 56.4 0.464±0.024* 59.5 0.357士 0.012* 68.6

17.5 0.431士 0.026* 62.3 0.382±0.015* 66.4 0.296士 0.010* 74.0 注： *与对照组比较， p < 0.01

表 4不同浓度的绿茶提取物对宫颈癌 HeLa细胞增殖的影响

绿茶提 24h 48h 72h

取物 OD值 OD值 OD值

抑制率(％) 抑制率(％) 抑制率(％) (mg/ml) (Mean士 S) (Mean士 S) (Mean士 S)

- 1.142士0.010 0 1.139±0.009 0 1.138±0.009 0

0.166 1.042士 0.032* 8.72 0.984士 0.041* 13.6 0.887士 0.012* 22.1

0.312 0.885士 0.025* 22.5 0.852±0.050* 25.2 0.809士 0.036* 28.9

0.625 0.677±0.030* 40.7 0.625士 0.045* 45.1 0.511士 0.029* 55.1

1.25 0.428±0.031* 62.5 0.358士 0.012* 67.0 0.336±0.013* 70.5

2.50 0.357士 0.038* 68.7 0.290士 0.013* 74.5 0.241士 0.005* 78.8

*与对照组比较， p < 0.01

表 5 不同浓度的药物组合物对宫颈癌 HeLa细胞增殖的影响

注： *与对照组比较， p < 0.01

3. 2 药物组合物对宫颈癌 HeLa细胞凋亡率的影响: 实验表明，相同浓度梯度的药物组合物对 HeLa 细胞凋亡的影响比单用苦参或单用绿茶对 HeLa细胞凋亡的影响显著。苦参绿茶组合物使人宫颈癌 HeLa细胞具有明显的药物浓度依赖性，不同浓度的药物组合物作用于 HeLa细胞 24 h、 48 h、 72 h后，细胞凋亡发生率明显增高，随着药物绿茶组合物浓度加大和作用时间延长，凋亡率明显增高，与对照组相比具有显著差异性，具体结果表 6、表 7和表 8(P<0.01)。

表 6 不同浓度的苦参提取物对 HeLa细胞凋亡的影响 (Mean±S)

表 7 不同浓度的绿茶提取物对 HeLa细胞凋亡的影响 (Mean±S)

表 8 不同浓度的药物组合物对 HeLa细胞凋亡的影响 (Mean±S)

实施例 5: 药物组合物凝胶对宫颈上皮内瘤变 (CIN)小鼠宫颈组织 PCNA、 EGFR 和 bcl-2表达的影响

一、材料

实验药物及试剂：昆明小鼠 40只，雌性，体重 30 ± 2 g , 健康状况良好，由武汉大学医学院实验动物中心提供，动物合格证号： 19-013。苦参绿茶药物组合物凝胶（根据后面实施例 6所示的方法制备）；保妇康凝胶（国药准字 Z20060455 , 武汉中联集团四药药业有限公司生产）；增殖细胞核抗原 (PCNA)免疫组化染色试剂盒、表皮生长因子受体 (EGFR)免疫组化染色试剂盒和细胞凋亡抑制基因 bcl-2免疫组化染色试剂盒，由北京中山生物技术有限公司提供。

二、方法

2. 1 动物造模方法

致癌剂棉线的制备：用苯溶剂溶解化学致癌剂二曱基苯并蒽 (DMBA)得到 DMBA溶液，将棉线浸入该溶液内，置于通风橱内待苯挥发后，计算棉线的含药量为 0.5 mg/cm。

取雌性小鼠，在动物不麻醉状态下，借助阴道扩张器及小号弯针，将浸药棉线穿入宫颈，经宫颈口由穹隆部穿出，线结固定于宫颈口，以便获得诱发宫颈上皮内瘤变的小鼠。关于该技术的详细内容可以参见：施新猷. 现代医学实验动物学 [M]. 北京：人民军医出版社. 2000: 438, 通过参照将其全文并入本文。

2. 2 动物分组及给药方法

将实验动物小鼠随机分为 4组，每组各 10只，分别标记为：空白组（不用药物处理的正常小鼠）、模型组（按照 2.1 动物造模方法所得到、并且没有用药物进行处理的小鼠）、治疗组和对照治疗组。其中治疗组：给予药物组合物凝胶（按 20 mg/kg ), 隔日外用 1次；对照治疗组：给予保妇康凝胶 (按 35 mg / kg ), 隔日外用 1次。将上述 4组小鼠进行 5个月的常规喂养后，通过颈推脱臼将其处死，剖取小鼠宫颈，保存标本以供光镜观察。

2. 3 免疫组织化学检测方法

将各组小鼠的宫颈组织浸入 4%多聚曱醛溶液进行固定，接着依次经过脱水、透明、浸蜡和包埋处理，接下来将所得的每个蜡块进行连续切片，各取 3张切片（切片厚度 5 μ m) , 然后分别选用 PCNA、 EGFR和 bcl-2三种抗体，利用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法（S-P 法）将上述各组的切片进行免疫组织化学染色，二氨基联苯胺 ( DAB )显色和显微镜观察。

三、结果

3. 1 各组小鼠宫颈组织增殖细胞核抗原 (PCNA)表达水平的比较釆用半定量方法对前面所述的切片进行检测，以便比较各组小鼠宫颈组织增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达水平。其中，细胞核被染成棕黄色定为阳性结果。然后，基于每张切片阳性反应颗粒的颜色深浅和占细胞总数的比例，按照下列标准，对各张切片的进行统计：阴性 (-)：无或偶见阳性颗粒，颜色呈浅黄色；

弱阳性 (+): 阳性颗粒少于 1 / 3 , 颜色呈淡棕黄色；

中度阳性 (++): 阳性颗粒介于 1 / 3 ~ 2 / 3之间，颜色介于 + ~ +++之间；

强阳性 (+++): 阳性颗粒多于 2 / 3 , 颜色呈棕黄色。

根据统计结果，对各张切片进行评分，其中 (-)： 1分；（+): 2分；（++): 3分；（+++): 4分。每张切片观察 3个视野。

结果显示： PCNA主要在细胞核上表达。模型组 PCNA表达呈强阳性，与空白组相比有极显著性差异 (P<0.01); 治疗组与模型组比较有极显著性差异 (P<0.01); 对照治疗组与模型组比较无显著性差异 (P>0.05), 结果见表 9。如表 9可见，治疗组与对照治疗组有极显著性差异 (P<0.01)。

表 9各组小鼠宫颈组织 PCNA表达水平比较

注： ^Δ与空白组比较 Ρ<0.01;

*与模型组比较 PO.01;

**η为各组受检小鼠的只数。

本研究结果表明，模型组的小鼠宫颈组织 PCNA表达较强，颜色较深，而治疗组仅有较少的染色程度相对较弱的切片中 PCNA为阳性表达，二者相比有极显著性差异 (P<0.01), 并且其分布逐渐局限于基底层，说明药物组合物凝胶是通过抑制增殖因子的表达而发挥抑制宫颈上皮异型细胞增生作用的。

3. 2 小鼠宫颈组织表皮生长因子 (EGFR)表达水平比较

釆用半定量方法对前面所述的切片进行检测，以便比较各组小鼠宫颈组织表皮生长因子 (EGFR)的表达水平。其中，细胞膜 /浆被染成棕黄色定为阳性结果。然后，基于每张切片阳性反应颗粒的颜色深浅和占细胞总数的比例，按照与上述 PCNA检测中相同的标准，对各张切片进行统计。结果显示： EGFR主要在细胞膜及细胞浆上表达，且以细胞膜为主。模型组 EGFR表达呈强阳性，与空白组相比有极显著性差异 (PO.01); 治疗组与模型组比较有极显著性差异 (P<0.01); 对照治疗组与模型组比较无显著性差异 (P>0.05), 结果见表 10。如表 10可见，治疗组与对照治疗组有极显著性差异 (P<0.01)。

表 10各组小鼠宫颈组织 EGFR表达水平比较

注： ^Δ与空白组比较 Ρ<0.01;

*与模型组比较 PO.01;

**η为各组受检小鼠的只数。

本研究结果表明，治疗组小鼠宫颈组织中的 EGFR 阳性表达较少，且染色较浅，与模型组 EGFR阳性表达相比有极显著性差异 (P <0.01), 说明药物组合物凝胶能够抑制 EGFR 的表达，进而抑制宫颈上皮异型细胞的增生。

3.3 小鼠宫颈组织细胞凋亡抑制基因 bcl-2表达水平比较

釆用半定量方法对前面所述的切片进行检测，以便比较各组小鼠宫颈组织细胞凋亡抑制基因 bcl-2 的表达水平。其中，细胞膜 /浆被染成棕黄色定为阳性结果。基于每张切片阳性反应颗粒的颜色深浅和占细胞总数的比例，按照与上述 PCNA检测中相同的标准，对各张切片进行统计。

结果显示： bcl-2主要在细胞膜及细胞浆上表达，且以细胞膜为主。模型组 bcl-2表达与空白组相比有极显著性差异 (PO.01)；治疗组及对照治疗组与模型组比较有显著性差异 (PO.05); 对照治疗组与模型组比较，无显著性差异 (P>0.05)。结果见表 11。

表 11 各组小鼠宫颈组织 bcl-2表达水平比较

注： ^Δ与空白组比较 Ρ<0.01; *与模型组比较 P<0.01;

**n为各组受检小鼠的只数。

本研究结果表明，治疗组小鼠宫颈组织 bcl-2的阳性表达程度减弱，数量减少。与模型组比较有显著性差异 (P<0. 05), 且阳性表达以基底层明显，说明药物组合物凝胶是通过抑制抗凋亡因子的表达而起到发挥宫颈上皮异型细胞凋亡的作用的。

实施例 6: 苦参绿茶凝胶的制备

处方：

苦参 180g

绿茶 60g

卡波姆 940 1.5g

甘油 5mL

丙二醇 lOmL

稀盐酸适量

蒸媳水适量

共计 100克

制法：以上两味，按实施例 1和实施例 2操作分别得到苦参提取物和绿茶提取物，备用。取 1.5g卡波姆 940均匀溶胀于 60ml蒸馏水中，静置过夜。将苦参提取物溶于适量上述所得的蒸馏水中，然后緩慢滴加稀盐酸调节 pH至 pH为 5.5-6.0, 依次添加 5mL甘油、 10mL丙二醇搅拌均匀，再添加绿茶提取物，边加边搅拌，并用蒸馏水补至 100g, 即得棕褐色凝胶。

实施例 7: 苦参绿茶凝胶的制备

处方：

苦参提取物（实施例 1制备） 50g

绿茶提取物（实施例 2制备） 60g

卡波姆 940 18g

甘油 60mL

丙二醇 lOOmL

稀盐酸适量

蒸馏水适量

共计 1000克

制法：按实施例 1和实施例 2的操作分别得到苦参提取物和绿茶提取物，备用。取 18g 卡波姆 940均勾溶胀于 600ml蒸馏水中，静置过夜。将苦参提取物溶于适量上述所得的蒸馏水中，然后緩慢滴加稀盐酸调节 pH至 pH为 5.5-6.0, 依次添加 60mL甘油、 lOOmL丙二醇搅拌均匀，再添加绿茶提取物，边加边搅拌，并用蒸馏水补至 lOOOg, 即得棕褐色凝胶。

实施例 8: 苦参绿茶洗剂的制备

处方：

苦参 1800g

绿茶 500g

明矾 25g

苯曱酸钠 6g

吐温 80 30mL

薄荷脑 ig

水片 10g

乙醇适量

蒸媳水适量

共计 1000毫升

制法：将苦参药材加水煮三次，每次 1小时，每次加 8倍体积的水，合并提取液，浓缩至相对密度为 1.06 ~ 1.08 ( 50 °C )的浓缩液。加盐酸调 pH值至 pH为 3-4, 滤过，过 732 型阳离子交换树脂柱，用 10倍树脂体积水及 6倍树脂体积的 30%乙醇洗去部分杂质，再用 1倍树脂体积浓氨水碱化树脂，然后用 6倍树脂体积 30%乙醇洗脱。将洗脱液经减压回收乙醇至无醇味，然后趁热加入已研细的 25g明矾、 6g苯曱酸钠、 30mL吐温 80。将绿茶药材加入 8倍量的 60%乙醇加热回流提取两次，每次 1.5h, 合并提取液。提取液减压回收，离心，弃去残渣，将滤液上 D101型大孔树脂，用水洗脱至无醇味，用 6个柱体积的水洗脱，再用 5个柱体积的 15%乙醇洗脱，最后用 5个柱体积的 70%的乙醇洗脱，将经乙醇洗脱部分回收至无醇，然后添加 lg薄荷脑、 10g水片（加少量乙醇溶解）搅拌均勾。最后将苦参和绿茶的上述浓缩液合并，用蒸馏水补充至 1000ml, 搅拌均勾，即得深棕色的混悬液洗剂，本品静置后有细沉淀，气芳香。

实施例 9: 苦参绿茶栓剂的制备

处方：

苦参 180g

绿茶 100g

甘油 120 g 甘油明胶 250 g

共计 100粒

制法：将绿茶药材加入 8倍量的 60%乙醇加热回流提取两次，每次 1.5h, 合并提取液。提取液减压回收，离心，弃去残渣，将滤液上 D101型大孔树脂，用水洗脱至无醇味，用 6 个柱体积的水洗脱，再用 5个柱体积的 15%乙醇洗脱，最后用 5个柱体积的 70%的醇洗脱，将经乙醇洗脱部分回收至干，减压干燥，粉碎，得绿茶粉末，然后添加 2.5 g水片、 5 g硼酸、 8g葡萄糖，研细混合均匀，备用。将苦参药材加水煮三次，每次 1小时，每次加 8倍体积的水，合并提取液，浓缩至相对密度为 1.06 - 1.08 ( 50°C )的浓缩液。加盐酸调 pH值至 pH为 3 ~ 4, 滤过，过 732型阳离子交换树脂柱，用 10倍树脂体积水及 6倍树脂体积的 30%乙醇洗去部分杂质，再用 1倍树脂体积浓氨水碱化树脂，然后用 6倍树脂体积 30%乙醇洗脱。将洗脱液减压浓缩至干，减压干燥，粉碎，得苦参细粉，然后添加 120 g甘油，充分混合成糊状物。将 250 g甘油明胶于水浴上加热融化，再添加上述糊状物，充分混合均匀，最后添加上述已混合均匀备用的绿茶提取物，搅拌均匀，共制 100粒，倒入已涂过润滑剂的栓模中，冷却起模，得深棕色栓剂。

实施例 10: 苦参绿茶栓剂的制备

处方：

苦参 3600g

绿茶 1200g

单硬脂酸丙二醇酯 1200g

38型混合脂肪酸甘油酯 400g

肉豆蔻酸异丙酯 10g

羊毛脂 90g

苯曱酸钠 2.5g

尼泊金乙酯 1.5g

共计 1000粒

制法：

a、根据实施例 1所述的制备苦参提取物的方法，将 3600g苦参制备成苦参提取物。 b、根据实施例 2所述的制备绿茶提取物的方法，将 1200g绿茶制备成绿茶提取物。 c、将苦参提取物用 0.1mol/L的盐酸溶液溶解后，加羊毛脂 45g混匀，以便获得苦参提取物混合物；将单硬脂酸丙二醇酯 600g、 38型混合脂肪酸甘油酯 200g于 50°C水浴加热熔化，混合均匀，并緩慢滴入上述苦参提取物混合物中，搅拌分散均匀，以便获得苦参提取物组合物；将绿茶提取物用水溶解后，加羊毛脂 45g混匀，以便获得绿茶提取物混合物；将单硬脂酸丙二醇酯 600g、 38型混合脂肪酸甘油酯 200g于 50°C水浴加热熔化，混合均匀，并緩慢滴入上述绿茶提取物混合物中，搅拌分散均勾，以便获得绿茶提取物组合物；将上述苦参提取物组合物与绿茶提取物组合物混合，并添加肉豆蔻酸异丙酯 10g、苯曱酸钠 2.5g 和尼泊金乙酯 1.5g, 充分搅拌均匀，然后倾入已冷却并涂有润滑剂的栓模中，至稍有溢出模口为止。室温冷却 30min使完全凝固后，用刀削去溢出部分，开启模型，推出栓剂，以双层低密度聚乙烯膜袋包装，即得苦参绿茶栓剂。

实施例 11、苦参绿茶栓剂的制备

处方：

苦参提取物（实施例 1制备） 60g

绿茶提取物（实施例 2制备） 80g

单硬脂酸丙二醇酯 1200g

38型混合脂肪酸甘油酯 300g

肉豆蔻酸异丙酯 50g

羊毛脂 160g

苯曱酸钠 5.0g

尼泊金乙酯 0.5g

共计 1000粒

制法：将苦参提取物 60g用 0.1mol/L的盐酸溶液溶解后，加羊毛脂 80g混匀，以便获得苦参提取物混合物；将单硬脂酸丙二醇酯 600g、 38型混合脂肪酸甘油酯 150g于 50°C水浴加热熔化，混合均匀，并緩慢滴入上述苦参提取物混合物中，搅拌分散均匀，以便获得苦参提取物组合物；将绿茶提取物 80g用水溶解后，加羊毛脂 80g混勾，以便获得绿茶提取物混合物；将单硬脂酸丙二醇酯 600g、 38型混合脂肪酸甘油酯 150g于 50°C水浴加热熔化，混合均匀，并緩慢滴入上述绿茶提取物混合物中，搅拌分散均匀，以便获得绿茶提取物组合物；将上述苦参提取物组合物与绿茶提取物组合物混合，并添加肉豆蔻酸异丙酯 50g、苯曱酸钠 5.0g和尼泊金乙酯 0.5g, 充分搅拌均匀，然后倾入已冷却并涂有润滑剂的栓模中，至稍有溢出模口为止。室温冷却 30min使完全凝固后，用刀削去溢出部分，开启模型，推出栓剂，以双层低密度聚乙烯膜袋包装，即得苦参绿茶栓剂。

实施例 12: 苦参绿茶泡腾片的制备

处方：

苦参 2450 g

绿茶 860g

硬脂酸棕榈酸甘油酯 40g

酒石酸 160g

碳酸钠 24g 碳酸氢钠 136g

乳糖 280g

聚维酮 K30 50g

交联聚维酮 35g

聚乙二醇 6000 15g

无水乙醇适量

共计 1000片

制法： a. 称取处方量的苦参药材 2450g, 用 8倍量的水煮 3次，每次 1小时。合并提取液，浓缩至相对密度为 1.06 - 1.08 ( 50°C ) 的浓缩液。加盐酸调 pH值至 3 ~ 4, 滤过，上清液过 732型阳离子交换树脂柱，用 10倍树脂体积水及 6倍树脂体积的 30%乙醇洗去部分杂质，再用 1倍树脂体积浓氨水碱化树脂，用 6倍树脂体积 30%乙醇洗脱。洗脱液经减压浓缩，干燥，粉碎，得苦参提取物细粉。

b. 称取处方量的绿茶药材，加入 10倍量的 60%乙醇加热回流提取两次，每次 1.5小时，合并提取液。提取液减压回收除去乙醇，提取液离心，弃去残渣，滤液上 D101 型大孔树脂柱，用水洗脱至无醇味，用 6个柱体积的水洗脱，再用 5个柱体积的 15%乙醇洗脱，最后用 5个柱体积的 70%的乙醇洗脱，将经乙醇洗脱部分回收，干燥，得绿茶提取物。

c 将苦参提取物、绿茶提取物以及各辅料分别过 160目筛，聚维酮 K30溶于无水乙醇中制备得 5% 聚维酮 K30无水乙醇液，备用。

d. 绿茶提取物与酒石酸 160g、硬脂酸棕榈酸甘油酯 40g、乳糖 140g混匀后，用适量 5% 聚维酮 K30无水乙醇液润湿制软材， 20目筛制粒；湿颗粒在 45 °C下鼓风干燥 1.5h, 16 目筛整粒，备用。

e. 将苦参提取物与碳酸钠 24g、碳酸氢钠 136g及乳糖 110g混匀，用适量 5% 聚维酮 K30无水乙醇液润湿制软材， 20目筛制粒；湿颗粒在 45 °C下鼓风干燥 1.5h, 16目筛整粒，备用。

f. 将这两种干颗粒混合，加入乳糖 30g、交联聚维酮 35g、聚乙二醇 6000 15g, 充分混匀搅拌 30min, 再转移至压片机上，用椭圆形异型冲模压片，压制成椭圆形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

实施例 13、苦参绿茶泡腾片的制备

处方：

苦参提取物 68g

绿茶提取物 82g

硬脂酸棕榈酸甘油酯 40g

酒石酸 160g

碳酸钠 24g

碳酸氢钠 136g 乳糖 280g

聚维酮 K30 50g

交联聚维酮 35g

聚乙二醇 6000 15g

无水乙醇适量

共计 1000片

制法： a. 苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例 12; b. 将苦参提取物、绿茶提取物以及各辅料分别过 160目筛，聚维酮 K30溶于无水乙醇中制备得 5% 聚维酮 K30无水乙醇液，备用。

c 绿茶提取物与酒石酸 160g、硬脂酸棕榈酸甘油酯 40g、乳糖 140g混匀后，用适量 5% 聚维酮 K30无水乙醇液润湿制软材， 20目筛制粒；湿颗粒在 45 °C下鼓风干燥 1.5h, 16 目筛整粒，备用。

d. 将苦参提取物与碳酸钠 24g、碳酸氢钠 136g及乳糖 110g混匀，用适量 5% 聚维酮 K30无水乙醇液润湿制软材， 20目筛制粒；湿颗粒在 45 °C下鼓风干燥 1.5h, 16目筛整粒，备用。

e . 将这两种干颗粒混合，加入乳糖 30g、交联聚维酮 35g、聚乙二醇 6000 15g, 充分混匀搅拌 30min, 再转移至压片机上，用椭圆形异型冲模压片，压制成椭圆形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

实施例 14: 苦参绿茶泡腾胶嚢的制备

处方：

苦参 2450g

绿茶 860g

硬脂酸棕榈酸乙二醇酯 25g

硬脂酸棕榈酸甘油酯 25g

酒石酸 180g

碳酸钠 27g

碳酸氢钠 153g

甘露醇 240g

聚维酮 K30 50g

交联聚维酮 80g

硬脂酰富马酸钠 25g

无水乙醇适量

共计 1000粒

制法：苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例 12。 a. 绿茶提取物与酒石酸 180g、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯 25g、硬脂酸棕榈酸甘油

酯 25g、甘露醇 120g混匀后，用适量 5% 聚维酮 K30无水乙醇液润湿制软材， 20 目筛制粒；湿颗粒在 45 °C下鼓风干燥 1.5h, 16目筛整粒，备用。

b. 将苦参提取物与碳酸钠 27g、碳酸氢钠 153g及甘露醇 lOOg混匀，用适量

5%

聚维酮 K30无水乙醇液润湿制软材， 20目筛制粒；湿颗粒在 45 °C下鼓风干燥 1.5h, 16目筛整粒，备用。

c 将这两种干颗粒混合，加入甘露醇 20g、交联聚维酮 80g、硬脂酰富马酸钠 25g, 充分混合均匀，过 100目筛，然后装于商业化的 0号空心胶嚢（目前生产的规格由大到小分为 000, 00, 0, 1 , 2, 3 , 4, 5号共 8种, 其容积分别为 1.42, 0.95 , 0.67, 0.48, 0.37, 0.27, 0.20, 0.13ml )制成 1000粒。

实施例 15、苦参绿茶阴道泡腾胶嚢的制备

处方：

苦参提取物 84g

绿茶提取物 lOOg

硬脂酸棕榈酸乙二醇酯 40g

酒石酸 160g

碳酸钠 24g

碳酸氢钠 136g

甘露醇 300g

聚维酮 K30 80g

微晶纤维素 100g

聚乙二醇 6000 30g

无水乙醇适量

共计 1000粒

制备方法：

a. 苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例 2。 b. 绿茶提取物与酒石酸 160g、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯 40g、甘露醇 150g混匀后，用适量 5% 聚维酮 K30无水乙醇液润湿制软材， 20 目筛制粒；湿颗粒在 45 °C下鼓风干燥 1.5h, 16目筛整粒，备用。

c 将苦参提取物与碳酸钠 24g、碳酸氢钠 136g及甘露醇 120g混匀，用适量

5%

聚维酮 K30无水乙醇液润湿制软材， 20目筛制粒；湿颗粒在 45 °C下鼓风干燥 1.5h, 16目筛整粒，备用。 d. 将这两种干颗粒混合，加入甘露醇 30g、 ^：晶纤维素 100g、聚乙二醇 6000 30g, 充分混合均匀，过 100目筛，然后装于商业化的 0号空心胶嚢，制成 1000粒。实施例 16、苦参绿茶软膏的制备

处方：

苦参 2700g

绿茶 900g

聚乙二醇 -300 150g

液体石蜡 450g

十二烷基磺酸钠改性蒙脱土 40g

甘油 20g

肉豆蔻酸异丙酯 230g

环曱基硅酮 30g

硬脂醇 70g

共计 1000粒

制备方法:

a. 称取苦参药材 2700g, 用 8倍量的水煮 3次，每次 1小时。合并提取液，浓缩至相对密度为 1.06 - 1.08 ( 50°C ) 的浓缩液。加盐酸调 pH值至 3 ~ 4, 滤过，上清液过 732型阳离子交换树脂柱，用 10倍树脂体积水及 6倍树脂体积的 30%乙醇洗去部分杂质，再用 1 倍树脂体积浓氨水碱化树脂，用 6倍树脂体积 30%乙醇洗脱。洗脱液经减压浓缩，干燥，粉碎，得苦参提取物细粉，备用。

b. 称取绿茶药材 900g, 加入 10倍量的 60%乙醇加热回流提取两次，每次 1.5小时，合并提取液。提取液减压回收除去乙醇，提取液离心，弃去残渣，滤液上 D101 型大孔树脂柱，用水洗脱至无醇味，用 6个柱体积的水洗脱，再用 5个柱体积的 15%乙醇洗脱，最后用 5个柱体积的 70%的乙醇洗脱，将经乙醇洗脱部分回收，干燥，粉碎，得绿茶提取物细粉，备用。

c 将上述苦参提取物细粉与 75g聚乙二醇 -300在室温下研磨 5分钟，得苦参提取物药物分散液；将上述绿茶提取物细粉与 75g聚乙二醇 -300在室温下研磨 5分钟，得绿茶提取物药物分散液。

d. 称取十二烷基磺酸钠改性蒙脱土 40g溶于液体石蜡 450g, 置于胶体磨中湿磨分散 8 分钟，充分分散后，加入甘油 20g继续分散 5分钟，得十二烷基磺酸钠改性蒙脱土分散形成的液体石蜡凝胶，加热至 60摄氏度，然后向其中依次緩慢添加苦参提取物药物分散液和绿茶提取物药物分散液，边添加边搅拌，再添加预热至 60摄氏度的肉豆蔻酸异丙酯 230g、环曱基硅酮 30g和硬脂醇 70g, 边加边搅拌均匀，待混合均匀后，停止加热，继续搅拌至室温，即得苦参绿茶软膏。

实施例 17、苦参绿茶软膏的制备

处方：

苦参提取物 84g

绿茶提取物 100g

聚乙二醇 -300 150g

液体石蜡 450g

十二烷基磺酸钠改性蒙脱土 40g

甘油 20g

肉豆蔻酸异丙酯 230g

环曱基硅酮 30g

硬脂醇 70g

共计 1000粒

制备方法:

a. 苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例 2。

b. 将上述苦参提取物细粉与 75g聚乙二醇 -300在室温下研磨 5分钟，得苦参提取物药物分散液；将上述绿茶提取物细粉与 75g聚乙二醇 -300在室温下研磨 5分钟，得绿茶提取物药物分散液。

c 称取十二烷基磺酸钠改性蒙脱土 40g溶于液体石蜡 450g, 置于胶体磨中湿磨分散 8 分钟，充分分散后，加入甘油 20g继续分散 5分钟，得十二烷基磺酸钠改性蒙脱土分散形成的液体石蜡凝胶，加热至 60摄氏度，然后向其中依次緩慢添加苦参提取物药物分散液和绿茶提取物药物分散液，边添加边搅拌，再添加预热至 60摄氏度的肉豆蔻酸异丙酯 230g、环曱基硅酮 30g和硬脂醇 70g, 边加边搅拌均匀，待混合均匀后，停止加热，继续搅拌至室温，即得苦参绿茶软膏。

实施例 18、苦参绿茶软膏对接受紫外线辐射后小鼠的皮肤保护作用

一、动物及试药试剂：动物：雌性 BALAA；小鼠， 15g左右， 5-6周龄，共 30只，由武汉大学医学院实验动物中心提供，动物合格证号： 19-013。

试药试剂：

1、苦参绿茶软膏（根据实施例 17制备），以空白软膏（空白软膏为不加苦参提取物和绿茶提取物，只用相同的药用辅料制备得到的软膏）为对照。

2、固定液：将 40%曱醛溶液用蒸馏水稀释成 10%曱醛溶液，备用。将 25%的戊二醛用 PBS (含 0.05%吐温 - 20的 pH7.4的磷酸盐緩冲液）稀释成 2.5%的戊二醛溶液，备用。

3、系列酒精：用蒸馏水将无水乙醇分别配制成 75%、 80%、 90%、 95%浓度的乙醇。二、方法：

1.小鼠分组、处理及给药：小鼠随机分组，共分 6组，每组 5只，第 1组为对照组，第 2组为苦参绿茶软膏组，第 3组为空白软膏组，第 4组为 UVA组；第 5组为苦参绿茶软膏 +UVA组；第 6组为空白软膏 +UVA组。各组小鼠背部皮肤接受 UVA辐射前先进行局部剃毛，苦参绿茶软膏和空白软膏分别为照射前 30分钟外涂， UVA剂量是第 1周为 20分钟， 0.5焦耳 /分钟，以后每周逐渐递增 20分钟，直至辐射时间为 2小时时停止增加，共持续 12周后处死小鼠，观察不同处理组小鼠背部皮肤损伤情况。

2. UVA辐射： UVA光源 (320-400纳米)，小鼠照射放在离光源 30厘米处。

3.普通病理切片：将取下的小鼠背部皮肤组织切成小块，立即投入 10%曱醛中固定，然后送至病理科做成石蜡切片并 HE染色，釆集病理图像。

4.扫描电镜：

(1)将取下的小鼠皮肤切成小块，用 OCT包埋，并放入液氮里冷冻，取出后做水冻切片，切成 60μηι厚度左右；

(3)固定：将切好的组织放入 2%-3%戊二醛中，固定 2h以上；

(4)清洗：利用 PBS緩冲液将固定好的组织进行清洗 lOmin χ 3 , 其中， χ 3是指同样的处理进行三次：

(5)梯度乙醇脱水：依次利用 50%、 70%、 80%、 90%的乙醇将清洗过的组织进行脱水处理，每次处理 15min; 然后，再用无水乙醇处理 30min χ 3;

(6)置换：利用叔丁醇将经过脱水处理的组织进行置换处理 30min 3(叔丁醇要 45°C预热）；

(7)冷冻干燥：利用叔丁醇淹没上述处理好的样品，并将其置于冷冻干燥机中进行干燥 2-3h; (8)粘样：将经过冷冻干燥处理的样品以方便观察的体位粘于样品台上；

(9)镀膜：利用离子溅射仪将样品进行镀膜 120s, 其中膜约 10nm:

(10)将经过镀膜处理的样品置于电镜下进行观察并拍照。

三、结果：

1、不同处理组小鼠背部皮肤肉眼观察：

BALB/c小鼠经过不同处理后观察到背部皮肤发生如下变化： UVA照射组小鼠背部皮肤增厚粗糙，并见明显的粗大皮肤沟纹出现；空白软膏 +UVA组小鼠皮肤也出现增厚粗糙但无明显粗大的皮肤沟纹出现。而苦参绿茶软膏组及 UVA+苦参绿茶软膏组的小鼠皮肤外观与非光照组相比无显著性变化。

2、 6组小鼠在慢性 UVA辐射后组织病理变化：

虽然照射 UVA时间长达 12周，但由于 UVA主要作用于真皮，所以在 6组小鼠皮肤组织病理切片中，表皮均无明显改变，从真皮厚度上比较起来看， UVA组小鼠皮肤真皮层显著变厚，真皮层内为扭曲的、异常的弹性纤维形成的弹性组织变性。从真皮厚度上来看， UVA组小鼠和其他组小鼠的厚度差异很明显。

3、扫描电镜显示：

UVA组皮肤真皮层增厚，胶原之间排列疏松，扭曲而不规则，而空白对照组真皮胶原纤维致密。苦参绿茶软膏 +UVA组和 UVA组相比，真皮厚度及胶原纤维的排列方向均明显改善趋于正常。而空白软膏 +UVA组在镜下见改善不明显，与单纯 UVA组改变类似。

结果表明：第 1组、第 2组及第 3组之间无显著性变化，第 4组 UVA组在皮肤外观、组织病理及扫描电镜方面与其他组相比有明显病理意义上的变化，而第 5组较第 4组相比有显著性保护作用，而第 6组的变化介于 4、 5两组之间。

结论：本研究结果显示苦参绿茶软膏可预防 UVA辐射后的组织损伤，延长光老化进程，在 UVA辐射前外用苦参绿茶软膏对小鼠皮肤有保护效应，表明苦参绿茶是防治光老化的一种有用成分，可将苦参绿茶软膏用于由 HPV感染引起的日光性角化病等皮肤癌前病变疾病的治疗。工业实用性

本发明的药物组合物，能够有效地用于治疗或预防由 HPV感染引起的宫颈癌前病变和皮肤癌前病变，以及制备治疗或预防宫颈癌前病变和皮肤癌前病变的药物。尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

在本说明书的描述中，参考术语 "一个实施例"、 "一些实施例"、 "示意性实施例"、 "示例"、 "具体示例"、或 "一些示例" 等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

Claims

权利要求书

1、一种药物组合物，其特征在于，包含苦参提取物和绿茶提取物作为活性成分，优选所述苦参提取物和绿茶提取物的重量比率为 1 : 1 ~ 2, 更优选 1 : 1.2,

其巾，

所述苦参提取物是水提取物；

所述绿茶提取物是醇提取物。

2、根据权利要求 1所述的药物组合物，其特征在于，所述苦参提取物是通过下列步骤制备的：

将苦参进行加水提取，以便获得苦参提取液；

将所述苦参提取液进行浓缩，以便获得苦参浓缩液；

将所述苦参浓缩液进行 pH调节；以及

将所述经过 pH调节的苦参浓缩液进行纯化，以便获得所述苦参提取物。

3、根据权利要求 2所述的药物组合物，其特征在于，所述将苦参进行加水提取，进一步包括：

将所述苦参用 6-10倍重量的水进行水煮 2-3次，每次 0.5-2小时，并合并提取液，以便获得所述苦参提取液。

4、根据权利要求 2所述的药物组合物，其特征在于，所述苦参浓缩液在 50摄氏度时的相对密度为 1.06 ~ 1.08。

5、根据权利要求 2所述的药物组合物，其特征在于，利用盐酸将所述苦参浓缩液进行 pH调节，其中，所述经过 pH调节的苦参浓缩液的 pH为 3-4。

6、根据权利要求 2所述的药物组合物，其特征在于，利用阳离子交换树脂对将所述经过 pH调节的苦参浓缩液进行纯化。

7、根据权利要求 1所述的药物组合物，其特征在于，所述绿茶提取物是通过下列步骤制备的：

将绿茶进行加醇提取，以便获得绿茶提取液；以及

将所述绿茶提取液进行纯化，以便获得所述绿茶提取物。

8、根据权利要求 7所述的药物组合物，其特征在于，将绿茶进行加醇提取进一步包括：将所述绿茶用 8-12倍重量的 50-70%乙醇进行加热回流提取 1-3次，每次 1-3小时，并合并提取液，以便获得所述绿茶提取液。

9、根据权利要求 7所述的药物组合物，其特征在于，将所述绿茶提取液进行纯化进一步包括：

将所述绿茶提取液进行减压处理，以便除去乙醇；

将所述绿茶提取液进行大孔树脂柱处理，以便获得经过纯化的绿茶提取液。

10、根据权利要求 1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物进一步包括药学上可接受的辅料。

11、根据权利要求 1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物呈选自凝胶剂、洗剂、栓剂、泡腾片、泡腾胶嚢、气雾剂以及喷雾剂的至少一种的形式。

12、根据权利要求 1-11任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物用于治疗或预防由 HPV感染引起的宫颈癌前病变以及皮肤癌前病变。

13、根据权利要求 12所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物用于使宫颈癌前病变细胞向良性转化。

14、根据权利要求 12所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物用于抑制 E7 基因的表达。

15、根据权利要求 12 所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物用于治疗由 HPV感染引起的宫颈糜烂、轻度宫颈非典型增生及中度宫颈非典型增生。

16、根据权利要求 12所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物用于预防 UVA 辐射后的组织损伤，延长光老化进程。

17、根据权利要求 12所述的药物组合物，其特征在于，在 UVA辐射前外用所述药物组合物对皮肤有保护效应。

18、根据权利要求 12 所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物用于治疗由 HPV感染引起的日光性角化病。

19、权利要求 1-18任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途，其特征在于，所述药物用于治疗或预防由 HPV感染引起的宫颈癌前病变以及皮肤癌前病变。

20、根据权利要求 19所述的用途，其特征在于，所述药物用于使宫颈癌前病变细胞向良性转化。

21、根据权利要求 20所述的用途，其特征在于，所述药物用于抑制 HPV E7基因的表达。

22、根据权利要求 20所述的用途，其特征在于，所述药物用于治疗由 HPV感染引起的宫颈糜烂、轻度宫颈非典型增生及中度宫颈非典型增生。

23、根据权利要求 20所述的用途，其特征在于，所述药物用于预防 UVA辐射后的组织损伤，延长光老化进程。

24、根据权利要求 20所述的用途，其特征在于，在 UVA辐射前外用所述药物对皮肤有保护效应。

25、根据权利要求 20所述的用途，其特征在于，所述药物用于治疗由 HPV感染引起的日光性角化病。

26、根据权利要求 20所述的用途，其特征在于，所述药物呈选自凝胶剂、洗剂、栓剂、泡腾片、泡腾胶嚢、气雾剂以及喷雾剂的至少一种的形式。

27、一种制备药物的方法，其特征在于，包括下列步骤：

制备苦参提取物；制备绿茶提取物；以及

将所述苦参提取物与所述绿茶提取物按照预定的重量比率进行混合，以便得到所述药物，所述预定的重量比率优选为 1 : 1 ~ 2, 更优选为 1 : 1.2,

其巾，

所述苦参提取物是水提取物；

所述绿茶提取物是醇提取物。

28、根据权利要求 27所述的方法，其特征在于，所述制备苦参提取物进一步包括下列步骤：

将苦参进行加水提取，以便获得苦参提取液；

将所述苦参提取液进行浓缩，以便获得苦参浓缩液；

将所述苦参浓缩液进行 pH调节；以及

29、根据权利要求 28所述的方法，其特征在于，所述将苦参进行加水提取，进一步包括：

30、根据权利要求 28所述的方法，其特征在于，所述苦参浓缩液在 50摄氏度时的相对密度为 1.06 ~ 1.08。

31、根据权利要求 28所述的方法，其特征在于，利用盐酸将所述苦参浓缩液进行 pH 调节，其中，所述经过 pH调节的苦参浓缩液的 pH为 3-4。

32、根据权利要求 28所述的方法，其特征在于，利用阳离子交换树脂将所述经过 pH 调节的苦参浓缩液进行纯化。

33、根据权利要求 27所述的方法，其特征在于，所述制备绿茶提取物进一步包括下列步骤：

将绿茶进行加醇提取，以便获得绿茶提取液；以及

将所述绿茶提取液进行纯化，以便获得所述绿茶提取物。

34、根据权利要求 33所述的方法，其特征在于，将绿茶进行加醇提取进一步包括：将所述绿茶用 8-12倍重量的 50-70%乙醇进行加热回流提取 1-3次，每次 1-3小时，并合并提取液，以便获得所述绿茶提取液。

35、根据权利要求 33所述的方法，其特征在于，将所述绿茶提取液进行纯化进一步包括：

将所述绿茶提取液进行减压处理，以便除去乙醇；

36、根据权利要求 27所述的方法，其特征在于，进一步包括下列步骤：

将所述药物制成选自凝胶剂、洗剂、栓剂、泡腾片、泡腾胶嚢、气雾剂以及喷雾剂的至少一种的形式。

37、根据权利要求 27-36任一项所述的方法，其特征在于，所述药物用于治疗或预防 HPV感染引起的宫颈癌前病变以及皮肤癌前病变。

38、根据权利要求 37所述的方法，其特征在于，所述药物用于使宫颈癌前病变细胞向良性转化。

39、根据权利要求 37所述的方法，其特征在于，所述药物用于抑制 HPV E7基因的表达。

40、根据权利要求 37所述的方法，其特征在于，所述药物用于治疗由 HPV感染引起的宫颈糜烂、轻度宫颈非典型增生及中度宫颈非典型增生。

41、根据权利要求 37所述的方法，其特征在于，所述药物用于预防 UVA辐射后的组织损伤，延长光老化进程。

42、根据权利要求 37所述的方法，其特征在于，在 UVA辐射前外用所述药物对皮肤有保护效应。

43、根据权利要求 37所述的方法，其特征在于，所述药物用于治疗由 HPV感染引起的日光性角化病。

44、一种药物，其是根据权利要求 27-43任一项所述的方法制备的。