CN112400697B - 一种草乌无菌苗培育方法 - Google Patents

一种草乌无菌苗培育方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112400697B
CN112400697B CN202011585051.7A CN202011585051A CN112400697B CN 112400697 B CN112400697 B CN 112400697B CN 202011585051 A CN202011585051 A CN 202011585051A CN 112400697 B CN112400697 B CN 112400697B
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
fixedly connected
box body
medium
plate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202011585051.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112400697A (zh
Inventor
马怀林
贾振宇
张跃华
高俊刚
刘亚玲
屈璐璐
刘思泱
高旭
王乌恩巴图
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Mengcao Ecological Environment Group Co Ltd
Original Assignee
Inner Mongolia M Grass Ecological Environment Group Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Inner Mongolia M Grass Ecological Environment Group Co Ltd filed Critical Inner Mongolia M Grass Ecological Environment Group Co Ltd
Priority to CN202011585051.7A priority Critical patent/CN112400697B/zh
Publication of CN112400697A publication Critical patent/CN112400697A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112400697B publication Critical patent/CN112400697B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

Abstract

本发明公开了一种草乌无菌苗培育方法，具体包括以下步骤；S1：选取外皮软嫩的草乌枝条作为外植体，外植体大小为3‑5mm；S2：将选取的外植体进行消毒，先用农用链霉素浸泡4‑6min，然后用无菌水装置冲洗4‑6次，每次50‑70S，再用0.1%升汞溶液浸泡7‑9min，再用无菌水装置冲洗4‑6次；S3：将消毒处理后的外植体置入初代培养基进行诱导培养形成愈伤组织；通过本发明培育方法,实现了有效降低愈伤组织的褐化率和育苗成活率高的功能，解决了传统的沙藏处理育苗成活率低的问题，提高了育苗的存活率。

Description

一种草乌无菌苗培育方法
技术领域
本发明涉及生物领域，具体是一种草乌无菌苗培育方法。
背景技术
草乌，中药名；为毛茛科植物北乌头的干燥块根；秋季茎叶枯萎时采挖，除去须根和泥沙，干燥；培育，指培养幼小生物，使其发育成长；用于风寒湿痹，关节疼痛，心腹冷痛，寒疝作痛及麻醉止痛；用于治寒湿瘀血留滞经络，肢体筋脉挛痛，关节屈伸不利：与川乌、地龙、乳香等同用；常作为麻醉止痛药，多以生品与生川乌并用，配伍羊踯躅、姜黄等。
草乌种子萌发前需要进行沙藏处理，在沙藏处理后苗期成活率较低，无法提高草乌的苗的生存率，使得大规模的种植难度大；因此，针对上述问题提出一种草乌无菌苗培育方法。
发明内容
为了弥补现有技术的不足，本发明提供了一种草乌无菌苗培育方法，通过本发明培育方法,实现了有效降低愈伤组织的褐化率和育苗成活率高的功能，解决了传统的沙藏处理育苗成活率低的问题，提高了育苗的存活率；采用本发明技术幼苗污染率降低到3%以下，褐化率降低到了0%，生根条数达到45-60根/瓶。
本发明解决技术问题所采用的技术方案是：
一种草乌无菌苗培育方法，具体包括以下步骤；
S1：选取外皮软嫩的草乌枝条作为外植体，外植体大小为3-5mm；
S2：将选取的外植体进行消毒，具体方法为：先用农用链霉素浸泡4-6min，然后用无菌水装置冲洗4-6次，每次50-70S，再用0.1%升汞溶液浸泡7-9min，再用无菌水装置冲洗4-6次；
S3：将消毒处理后的外植体置入初代培养基进行诱导培养形成愈伤组织；
所述初代培养基为：GS+6-BA 1mg/L+NAA 0.45-0.55mg/L+AC 5mg/L+KT 0.05mg/L；
所述初代诱导培养的条件为培养温度20-23℃，光照强度2500-5000Lx，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是20-24天；
S4：将诱导培养的愈伤组织置入继代培养基进行分化培养形成分化组织；
所述继代培养基为：改良MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.45-0.55mg/L+AC 5mg/L，改良MS培养基配方为硝酸钾、硝酸铵改为原来的1/3；有机成分中的VB1在原基础上增加1/2；微量元素中的硫酸锰减少1/4，去除硫酸铜；
所述的继代培养条件为培养温度20-23℃，光照强度2500-5000Lx，除白天自然光照外，夜间补光1小时/天，培养周期是14-16天；
S5：将继代培养基中的分化组织置入生根培养基中，进行生根培养，培养基配方为1/2MS+6-BA 0.095-0.105mg/L+B9 0.5mg/L；
所述的生根培养条件为培养温度18-20℃，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是7-9天；
优先地，一种草乌无菌苗培育方法，具体包括以下步骤；
S1：选取外皮软嫩的草乌枝条作为外植体，外植体大小为3-5mm；
S2：将选取的外植体进行消毒，具体方法为：先用农用链霉素浸泡5min，然后用无菌水装置冲洗5次，每次60S，再用0.1%升汞溶液浸泡8min，再用无菌水装置冲洗5次；
S3：将消毒处理后的外植体置入初代培养基进行诱导培养形成愈伤组织；
所述初代培养基为：GS+6-BA 1mg/L+NAA 0.5mg/L+AC 5mg/L+KT 0.05mg/L；
所述初代诱导培养的条件为培养温度22℃，光照强度3000Lx，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是22天；
S4：将诱导培养的愈伤组织置入继代培养基进行分化培养形成分化组织；
所述继代培养基为：改良MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.5mg/L+AC 5mg/L，改良MS培养基配方为硝酸钾、硝酸铵改为原来的1/3；有机成分中的VB1在原基础上增加1/2；微量元素中的硫酸锰减少1/4，去除硫酸铜；
所述的继代培养条件为培养温度22℃，光照强度3000Lx，除白天自然光照外，夜间补光1小时/天，培养周期是15天；
S5：将继代培养基中的分化组织置入生根培养基中，进行生根培养，培养基配方为1/2MS+6-BA 0.1mg/L+B9 0.5mg/L；
所述的生根培养条件为培养温度19℃，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是8天；
S6：将上述诱导生根后的草乌无菌苗进行移栽。
优选的，所述无菌水装置包括制造箱体、直线滑轨和降温保温单元；所述制造箱体的内壁上固接有直线滑轨；所述直线滑轨上扣合滑动连接有滑块；所述滑块上固接有储水加热件；所述储水加热件的内部密封固接有间隙框板；所述间隙框板内固接有电加热件；所述储水加热件上连通固接有蒸汽输出管；所述蒸汽输出管的另一端连通固接有散热冷凝管；所述散热冷凝管的下端连通固接有连通管；所述连通管连通插接在无菌水容器内；所述制造箱体的内部设有降温保温单元。
优选的，所述降温保温单元包括分隔板、箱体门、间隙垫板、散热保护板、散热片、鼓风机、进水盖；所述分隔板水平固接在制造箱体的内壁上；所述箱体门铰接在制造箱体的开口处；所述制造箱体的侧面固接有间隙垫板；所述间隙垫板上固接有散热保护板；所述散热保护板和制造箱体上固接有散热片；所述制造箱体的内部底面放置有鼓风机；所述鼓风机的输入端与散热保护板连通固接；所述鼓风机的输出端与制造箱体连通固接；所述进水盖可拆卸螺纹密封连接在储水加热件上。
优选的，所述制造箱体的内壁上固接有支撑板；所述支撑板上表面固接有隔热板；所述隔热板上表面固接有第二反射件；所述储水加热件上固接有隔热把手。
优选的，所述制造箱体、分隔板和箱体门的相对面上均真空镀膜固接有第一反射件。
本发明的有益之处在于：
1、通过本发明培育方法,实现了有效降低愈伤组织的褐化率和育苗成活率高的功能，解决了传统的沙藏处理育苗成活率低的问题，提高了育苗的存活率；采用本发明技术幼苗污染率降低到3%以下，褐化率降低到了0%，生根条数达到45-60根/瓶。
2、本发明操作简便，成本低廉，具有良好的应用前景。本发明系统地研究了草乌的外植体的选择、最佳培养条件、不同阶段的最佳培养基及栽培基质配比，提高组培苗成活率，为实现草乌的工厂化生产奠定了可靠的基础；
3、本发明技术中确定的草乌组织培养过程中各阶段的最佳培养基能充分满足草乌各个时期的营养需要和生长发育，是保证草乌组织培养成功实施，达到流程化生产的关键和核心。由于初代诱导、继代培养、生根培养各阶段的相互影响，上述培养基的选择可以使草乌在组培扩繁的各个阶段不断促进，利用本发明技术培养的草乌幼苗移栽至大田后长势茁壮；大大提高工厂化草乌育苗的产量。
4、本发明中用GS培养基替换MS培养基，能够有效降愈伤组织的褐化率，而且使用MS培养基进行诱导培养时会导致生长点坏死，降低诱导率；在外植体消毒处理时，与常规消毒手段相比去掉了酒精消毒的过程，酒精消毒时细胞的渗透势较高，后期导致愈伤组织褐化严重；草乌种子萌发前需要进行沙藏处理，且苗期成活率较低，而利用组培方法培养草乌无菌苗，能够提高苗期成活率，而且外植体材料易于获取，与播种扩繁相比组培扩繁的繁殖系数较高。
5、本发明还提供一种无菌水装置，通过储水加热件、间隙框板、电加热件、蒸汽输出管、散热冷凝管、鼓风机、第一反射件、散热片、连通管和无菌水容器的结构设计,实现了高效蒸馏冷凝形成无菌水的功能，解决了传统的蒸馏装置体积大效率不高的问题，提高了无菌水的制造效率，可以利用该装置制造无菌水来供草乌无菌苗培育使用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1为本发明的方法步骤示意图；
图2为本发明中无菌水装置的立体结构示意图；
图3为本发明中无菌水装置的前视剖面结构示意图；
图4为本发明中无菌水装置的侧视结构示意图；
图5为本发明中无菌水装置的俯视结构示意图。
图中：1、制造箱体；2、分隔板；3、箱体门；4、间隙垫板；5、散热保护板；6、散热片；7、直线滑轨；8、滑块；9、第一反射件；10、储水加热件；11、间隙框板；12、电加热件；13、隔热把手；14、蒸汽输出管；15、散热冷凝管；16、鼓风机；17、第二反射件；18、隔热板；19、支撑板；20、进水盖；21、连通管；22、无菌水容器。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明中：改良MS培养基配方为硝酸钾、硝酸铵改为原来的1/3，1/3是指浓度（mg/L）变为原来的1/3；有机成分中的VB1在原基础上增加1/2，1/2是指浓度（mg/L）变为原来的1/2；微量元素中的硫酸锰减少1/4，去除硫酸铜，1/4是指浓度（mg/L）变为原来的1/4。
本发明中：MS为MS培养基；GS为GS培养基；6-BA为6-苄氨基嘌呤;B9为维生素B9；NAA为1-萘乙酸。
褐化率、诱导率、污染率、分化率、成活率的计算公式如下：
褐化率=（褐化愈伤组织数量/总接种数量）×100%
诱导率=（愈伤组织的数量/总接种数量）×100%；
污染率=受污染组培苗数量/总数×100%；
分化率=（已分化的外植体数 / 接种外植体总数)×100%；
实施例1
一种草乌无菌苗培育方法，具体包括以下步骤；
S1：选取外皮软嫩的草乌枝条作为外植体，外植体大小为3-5mm；
S2：将选取的外植体进行消毒，具体方法为：先用农用链霉素浸泡4min，然后用无菌水装置冲洗4次，每次50S，再用0.1%升汞溶液浸泡7min，再用无菌水装置冲洗4次；
S3：将消毒处理后的外植体置入初代培养基进行诱导培养形成愈伤组织；
所述初代培养基为：GS+6-BA 1mg/L+NAA 0.45mg/L+AC 5mg/L+KT 0.05mg/L；
所述初代诱导培养的条件为培养温度20℃，光照强度2500Lx，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是20天；
S4：将诱导培养的愈伤组织置入继代培养基进行分化培养形成分化组织；
所述继代培养基为：改良MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.45mg/L+AC 5mg/L，改良MS培养基配方为硝酸钾、硝酸铵改为原来的1/3；有机成分中的VB1在原基础上增加1/2；微量元素中的硫酸锰减少1/4，去除硫酸铜；
所述的继代培养条件为培养温度20℃，光照强度2500Lx，除白天自然光照外，夜间补光1小时/天，培养周期是14天；
S5：将继代培养基中的分化组织置入生根培养基中，进行生根培养，培养基配方为1/2MS+6-BA 0.095mg/L+B9 0.5mg/L；
所述的生根培养条件为培养温度18℃，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是7天；
S6：将上述诱导生根后的草乌无菌苗进行移栽。
实施例2
一种草乌无菌苗培育方法，具体包括以下步骤：
S1：选取外皮软嫩的草乌枝条作为外植体，外植体大小为3-5mm；
S2：将选取的外植体进行消毒，具体方法为：先用农用链霉素浸泡5min，然后用无菌水装置冲洗5次，每次60S，再用0.1%升汞溶液浸泡8min，再用无菌水装置冲洗5次；
S3：将消毒处理后的外植体置入初代培养基进行诱导培养形成愈伤组织；
所述初代培养基为：GS+6-BA 1mg/L+NAA 0.5mg/L+AC 5mg/L+KT 0.05mg/L；
所述初代诱导培养的条件为培养温度22℃，光照强度3000Lx，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是22天；
S4：将诱导培养的愈伤组织置入继代培养基进行分化培养形成分化组织；
所述继代培养基为：改良MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.5mg/L+AC 5mg/L，改良MS培养基配方为硝酸钾、硝酸铵改为原来的1/3；有机成分中的VB1在原基础上增加1/2；微量元素中的硫酸锰减少1/4，去除硫酸铜；
所述的继代培养条件为培养温度22℃，光照强度3000Lx，除白天自然光照外，夜间补光1小时/天，培养周期是15天；
S5：将继代培养基中的分化组织置入生根培养基中，进行生根培养，培养基配方为1/2MS+6-BA 0.1mg/L+B9 0.5mg/L；
所述的生根培养条件为培养温度19℃，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是8天；
S6：将上述诱导生根后的草乌无菌苗进行移栽。
实施例3
一种草乌无菌苗培育方法，具体包括以下步骤；
S1：选取外皮软嫩的草乌枝条作为外植体，外植体大小为3-5mm；
S2：将选取的外植体进行消毒，具体方法为：先用农用链霉素浸泡4-6min，然后用无菌水装置冲洗6次，每次70S，再用0.1%升汞溶液浸泡9min，再用无菌水装置冲洗6次；
S3：将消毒处理后的外植体置入初代培养基进行诱导培养形成愈伤组织；
所述初代培养基为：GS+6-BA 1mg/L+NAA 0.55mg/L+AC 5mg/L+KT 0.05mg/L；
所述初代诱导培养的条件为培养温度23℃，光照强度5000Lx，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是24天；
S4：将诱导培养的愈伤组织置入继代培养基进行分化培养形成分化组织；
所述继代培养基为：改良MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.55mg/L+AC 5mg/L，改良MS培养基配方为硝酸钾、硝酸铵改为原来的1/3；有机成分中的VB1在原基础上增加1/2；微量元素中的硫酸锰减少1/4，去除硫酸铜；
所述的继代培养条件为培养温度23℃，光照强度5000Lx，除白天自然光照外，夜间补光1小时/天，培养周期是16天；
S5：将继代培养基中的分化组织置入生根培养基中，进行生根培养，培养基配方为1/2MS+6-BA 0.105mg/L+B9 0.5mg/L；
所述的生根培养条件为培养温度20℃，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是9天；
S6：将上述诱导生根后的草乌无菌苗进行移栽。
对比例1
所述初代培养基为：MS +6-BA 1.0mg/L +NAA 0.5mg/L +AC 5.0mg/L +KT0.05mg/L，其余步骤与实施例2相同。
对比例2
所述初代培养基为：GS +6-BA 1.5mg/L +NAA 0.3mg/L +AC 5.0mg/L +KT0.05mg/L，其余步骤与实施例2相同。
对比例3
所述S2：将选取的外植体进行消毒，具体方法为：先用浓度为75%的酒精消毒1分钟，然后用无菌水装置冲洗2次、每次50S，再用0.1%升汞溶液浸泡7min，再用无菌水装置冲洗4次；其余步骤与实施例2相同。
实施例1、2、3，对比例1、2、3试验结果如表1所示：
表1 不同诱导培养基对愈伤组织诱导影响
Figure 287727DEST_PATH_IMAGE002
由表1数据可知：本发明中诱导培养基中用GS培养基替换MS培养基，GS培养基中能够有效降愈伤组织的褐化率，而且使用MS培养基进行诱导培养时会导致生长点坏死，降低诱导率；对比例3中说明，本发明在外植体消毒处理时，与常规消毒手段相比去掉了酒精消毒的过程，酒精消毒时渗透势较高，后期导致愈伤组织褐化严重；对比例2的诱导率减低和褐化率升高说明诱导培养基每一组分参数的改变，都会直接影响诱导率（%）和褐化率（%），选取合适的初代诱导培养基是保证草乌组织培养成功实施的关键点。
对比例4
所述继代培养基为：改良MS +6-BA 3.5mg/L +NAA 0.3 mg/L+AC 5.0mg/L，其余步骤与实施例2相同。
对比例5
所述继代培养基为：MS +6-BA 3.0mg/L +NAA 0.5mg/L +AC 5.0mg/L，其余步骤与实施例2相同。
对比例4、5试验结果如表2所示：
表2 继代培养基对愈伤组织分化的影响
Figure 598623DEST_PATH_IMAGE004
从表2中可以得知：继代培养基任一参数的变化将对分化率和污染率产生直接的影响，采用本发明的继代培养基配方分化率能达到80%以上，污染率降低到4%以下，选取合适的继代诱导培养基是保证草乌组织培养成功实施的关键点。
对比例6
所述生根培养基：1/2MS+6-BA 0.3mg/L +B9 0.5mg/L，其余步骤与实施例2相同。
对比例7
所述生根培养基：1/2MS+6-BA 0.1mg/L +B9 0.3mg/L，其余步骤与实施例2相同。
对比例8
所述初代诱导培养的条件为培养温度23±1℃，光照强度1500Lx，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是30天；
所述的继代培养条件为培养温度25±1℃，光照强度2000Lx，除白天自然光照外，夜间补光1小时/天，培养周期是20天；
所述的生根培养条件为培养温度25±1℃，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是15天；
其余步骤均与实施例2相同。
对比例9
所述初代诱导培养的条件为培养温度24℃，光照强度1500Lx，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是22天；
所述的继代培养条件为培养温度20±1℃，光照强度3000Lx，除白天自然光照外，夜间补光1小时/天，培养周期是15天；
所述的生根培养条件为培养温度20±1℃，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是10天；
其余步骤均与实施例2相同。
对比例10
所述初代诱导培养的条件为培养温度18℃，光照强度1000Lx，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是22天；
所述的继代培养条件为培养温度20℃，光照强度1000Lx，除白天自然光照外，夜间补光2小时/天，培养周期是15天；
所述的生根培养条件为培养温度20℃，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是8天；
其余步骤均与实施例2相同。
对比例6、7试验结果如表3所示：
表3不同生根培养基对生根数量的影响
Figure 898892DEST_PATH_IMAGE006
从表3中可以得知：生根培养基任一参数的变化将对生根数量产生直接的影响，采用本发明的生根培养基配方生根数能达到45根以上，选取合适的生根培养基是保证草乌组织培养成功实施的关键点。从表3还可以得知：即使培养基条件完全一致的情况下，只是对培养条件进行了改变，造成诱导率、分化率、生根数值的下降，说明每一步选取合适的培养条件是保证草乌组织培养成功实施的关键点。
通过实施例1-3，对比例1-10可以得知，本发明中的用GS培养基替换MS培养基，因为GS培养基中能够有效降愈伤组织的褐化率，而且使用MS培养基进行诱导培养时会导致生长点坏死，降低诱导率；在外植体消毒处理时，与常规消毒手段相比去掉了酒精消毒的过程，酒精消毒时细胞的渗透势较高，后期导致愈伤组织褐化严重；草乌种子萌发前需要进行沙藏处理，且苗期成活率较低，而利用组培方法培养草乌无菌苗，能够提高苗期成活率，而且外植体材料易于获取，与播种扩繁相比组培扩繁的繁殖系数较高。
实施例5
作为本发明的一种实施方式，一种无菌水装置包括制造箱体1、直线滑轨7和降温保温单元；所述制造箱体1的内壁上固接有直线滑轨7；所述直线滑轨7上扣合滑动连接有滑块8；所述滑块8上固接有储水加热件10；所述储水加热件10的内部密封固接有间隙框板11；所述间隙框板11内固接有电加热件12；所述储水加热件10上连通固接有蒸汽输出管14；所述蒸汽输出管14的另一端连通固接有散热冷凝管15；所述散热冷凝管15的下端连通固接有连通管21；所述连通管21连通插接在无菌水容器22内；所述制造箱体1的内部设有降温保温单元，工作时，通过间隙框板11和电加热件12的配合下，使得储水加热件11内部的水与电加热件12的接触面积大，使得可以快速高效的进行加热形成水蒸气，在直线滑轨7和滑块8的作用下，使得储水加热件10保持悬空状态，只有上表面小面积与滑块8固接，使得储水加热件10上的热量不容易传递到其他部件上，防止过热受损；
作为本发明的一种实施方式，所述降温保温单元包括分隔板2、箱体门3、间隙垫板4、散热保护板5、散热片6、鼓风机16、进水盖20；所述分隔板2水平固接在制造箱体1的内壁上；所述箱体门3铰接在制造箱体1的开口处；所述制造箱体1的侧面固接有间隙垫板4；所述间隙垫板4上固接有散热保护板5；所述散热保护板5和制造箱体1上固接有散热片6；所述制造箱体1的内部底面放置有鼓风机16；所述鼓风机16的输入端与散热保护板5连通固接；所述鼓风机16的输出端与制造箱体1连通固接；所述进水盖20可拆卸螺纹密封连接在储水加热件10上，工作时，通过将无菌水装置放置在水平地面上，使得制造箱体1、间隙垫板4和散热保护板5形成的上下开口的下端开口处被地面堵住，从而使得鼓风机16从外界吸收的空气向上运动，高效的带走散热冷凝管15内的热量和散热片6的热量；
作为本发明的一种实施方式，所述制造箱体1的内壁上固接有支撑板19；所述支撑板19上表面固接有隔热板18；所述隔热板18上表面固接有第二反射件17；所述储水加热件10上固接有隔热把手13，工作时，通过隔热把手13使得储水加热件10方便移动加注水，同时在隔热板18和第二反射件17的配合下使得隔热板18和第二反射件17的上下空间温度不会相互影响；
作为本发明的一种实施方式，所述制造箱体1、分隔板2和箱体门3的相对面上均真空镀膜固接有第一反射件9，工作时，通过真空镀膜的技术将铝材质的第一反射件9致密的固定在制造箱体1、分隔板2和箱体门3的相对面上，使得制造箱体1、分隔板2和箱体门3内部的热量难以散失。
工作原理，通过在制造箱体1的中间水平固接有分隔板2，分隔板2的下方位置制造箱体1的开口处对称铰接有箱体门3，制造箱体1的内部分隔板2的下方水平固接有金属制成的支撑板19，支撑板19的上表面固接有隔热材料制成的隔热板18，隔热板18的上表面固接有第二反射件17，第二反射件17通过真空镀膜的方式覆合固接在隔热板18的上表面，通过这样的设计，将分隔板2和制造箱体1之间的空间分为两个部分，同时隔绝热量的传递；通过在制造箱体1的内壁上对称固接有两个直线滑轨7，两个直线滑轨7上扣合滑动连接有四个滑块8，四个滑块8之间固接有储水加热件10，储水加热件10的上端可拆卸密封螺纹连接有进水盖20，储水加热件10的侧面固接有隔热把手13，制造箱体1和箱体门3上均固接有第一反射件9，通过这样的设计，使得无菌水装置方便添加自来水进行蒸发形成无菌水，同时可以将储水加热件10在加热过程中的热量存储在制造箱体1的内部；通过在储水加热件10的内部间隔密封固接有多个间隙框板11，间隙框板11内固接有电加热件12，通过间隙框板11将储水加热件10的内部与电加热件12的接触面积增大，从而实现了快速加热形成水蒸气的功能；通过在储水加热件10的后侧连通密封固接有金属波纹管制成的蒸汽输出管14，蒸汽输出管14的另一端连通固接有多个相互连通的散热冷凝管15，散热冷凝管15固接在散热保护板5上，散热保护板5通过固接间隙垫板4间隙固接在制造箱体1的侧面，散热保护板5和制造箱体1的相对面上均固接有多个散热片6，散热冷凝管15的下端连通固接有连通管21，连通管21的另一端连通固接在无菌水容器22上，无菌水容器22放置在制造箱体1的内部底面上，制造箱体1的内部底面上还放置有鼓风机16，鼓风机16的输入端与散热保护板5连通固接，鼓风机16的输出端与制造箱体1的侧壁连通固接，通过制造箱体1、间隙垫板4和散热保护板5与地面接触，从而使得鼓风机16推动的风向上运动，将散热冷凝管15内的大量水蒸气进行冷凝，从而汇聚成无菌水在重力的作用下通过连通管21到达无菌水容器22的内部进行存储，给与育苗过程中清洗使用。
由于电加热件12的结构属于现有技术，所以本发明文件中未做描述。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。

Claims (6)

1.一种草乌无菌苗培育方法，其特征在于：具体包括以下步骤： S1：选取外皮软嫩的草乌枝条作为外植体，外植体大小为3-5mm； S2：将选取的外植体进行消毒，具体方法为：先用农用链霉素浸泡4-6min，然后用无菌水装置冲洗4-6次，每次50-70S，再用0.1%升汞溶液浸泡7-9min，再用无菌水装置冲洗4-6次； S3：将消毒处理后的外植体置入初代培养基进行诱导培养形成愈伤组织； 所述初代培养基为：GS+6-BA 1mg/L+NAA 0.45-0.55mg/L+AC 5mg/L+KT 0.05mg/L； 所述诱导培养的条件为培养温度20-23℃，光照强度2500-5000Lx，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是20-24天； S4：将诱导培养的愈伤组织置入继代培养基进行分化培养形成分化组织； 所述继代培养基为：改良MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.45-0.55mg/L+AC 5mg/L，改良MS培养基配方为硝酸钾、硝酸铵改为原来的1/3；有机成分中的VB1在原基础上增加1/2；微量元素中的硫酸锰减少1/4，去除硫酸铜； 所述的继代培养条件为培养温度20-23℃，光照强度2500-5000Lx，除白天自然光照外，夜间补光1小时/天，培养周期是14-16天； S5：将继代培养基中的分化组织置入生根培养基中，进行生根培养，培养基配方为1/2MS+6-BA 0.095-0.105mg/L+维生素B9 0.5mg/L； 所述的生根培养条件为培养温度18-20℃，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是7-9天； S6：将上述诱导生根后的草乌无菌苗进行移栽。
2.根据权利要求1所述的一种草乌无菌苗培育方法，其特征在于：具体包括以下步骤：S1：选取外皮软嫩的草乌枝条作为外植体，外植体大小为3-5mm； S2：将选取的外植体进行消毒，具体方法为：先用农用链霉素浸泡5min，然后用无菌水装置冲洗5次，每次60S，再用0.1%升汞溶液浸泡8min，再用无菌水装置冲洗5次； S3：将消毒处理后的外植体置入初代培养基进行诱导培养形成愈伤组织； 所述初代培养基为：GS+6-BA 1mg/L+NAA 0.5mg/L+AC5mg/L+KT 0.05mg/L； 所述诱导培养的条件为培养温度22℃，光照强度3000Lx，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是22天； S4：将诱导培养的愈伤组织置入继代培养基进行分化培养形成分化组织； 所述继代培养基为：改良MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.5mg/L+AC 5mg/L，改良MS培养基配方为硝酸钾、硝酸铵改为原来的1/3；有机成分中的VB1在原基础上增加1/2；微量元素中的硫酸锰减少1/4，去除硫酸铜； 所述的继代培养条件为培养温度22℃，光照强度3000Lx，除白天自然光照外，夜间补光1小时/天，培养周期是15天； S5：将继代培养基中的分化组织置入生根培养基中，进行生根培养，培养基配方为1/2MS+6-BA 0.1mg/L+维生素B9 0.5mg/L； 所述的生根培养条件为培养温度19℃，除白天自然光照外，夜间不补光，培养周期是8天； S6：将上述诱导生根后的草乌无菌苗进行移栽。
3.根据权利要求1-2任意一项所述的一种草乌无菌苗培育方法，其特征在于：所述无菌水装置包括制造箱体（1）、直线滑轨（7）和降温保温单元；所述制造箱体（1）的内壁上固接有直线滑轨（7）；所述直线滑轨（7）上扣合滑动连接有滑块（8）；所述滑块（8）上固接有储水加热件（10）；所述储水加热件（10）的内部密封固接有间隙框板（11）；所述间隙框板（11）内固接有电加热件（12）；所述储水加热件（10）上连通固接有蒸汽输出管（14）；所述蒸汽输出管（14）的另一端连通固接有散热冷凝管（15）；所述散热冷凝管（15）的下端连通固接有连通管（21）；所述连通管（21）连通插接在无菌水容器（22）内；所述制造箱体（1）的内部设有降温保温单元。
4.根据权利要求3所述的一种草乌无菌苗培育方法，其特征在于：所述降温保温单元包括分隔板（2）、箱体门（3）、间隙垫板（4）、散热保护板（5）、散热片（6）、鼓风机（16）、进水盖（20）；所述分隔板（2）水平固接在制造箱体（1）的内壁上；所述箱体门（3）铰接在制造箱体（1）的开口处；所述制造箱体（1）的侧面固接有间隙垫板（4）；所述间隙垫板（4）上固接有散热保护板（5）；所述散热保护板（5）和制造箱体（1）上固接有散热片（6）；所述制造箱体（1）的内部底面放置有鼓风机（16）；所述鼓风机（16）的输入端与散热保护板（5）连通固接；所述鼓风机（16）的输出端与制造箱体（1）连通固接；所述进水盖（20）可拆卸螺纹密封连接在储水加热件（10）上。
5.根据权利要求4所述的一种草乌无菌苗培育方法，其特征在于：所述制造箱体（1）的内壁上固接有支撑板（19）；所述支撑板（19）上表面固接有隔热板（18）；所述隔热板（18）上表面固接有第二反射件（17）；所述储水加热件（10）上固接有隔热把手（13）。
6.根据权利要求5所述的一种草乌无菌苗培育方法，其特征在于：所述制造箱体（1）、分隔板（2）和箱体门（3）的相对面上均真空镀膜固接有第一反射件（9）。
CN202011585051.7A 2020-12-28 2020-12-28 一种草乌无菌苗培育方法 Active CN112400697B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011585051.7A CN112400697B (zh) 2020-12-28 2020-12-28 一种草乌无菌苗培育方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011585051.7A CN112400697B (zh) 2020-12-28 2020-12-28 一种草乌无菌苗培育方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112400697A CN112400697A (zh) 2021-02-26
CN112400697B true CN112400697B (zh) 2022-04-08

Family

ID=74782876

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011585051.7A Active CN112400697B (zh) 2020-12-28 2020-12-28 一种草乌无菌苗培育方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112400697B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101926284A (zh) * 2008-12-31 2010-12-29 雅安三九中药材科技产业化有限公司 一种川附子组织培养及快速繁殖方法
CN201770504U (zh) * 2010-07-26 2011-03-23 济南西斯普换热系统有限公司 一种无菌水机组
CN208250079U (zh) * 2018-03-28 2018-12-18 扬生（南召）生物科技有限公司 一种无菌水制备系统
CN211111538U (zh) * 2019-11-27 2020-07-28 河南博纯环保科技有限公司 一种全自动无菌水制备装置

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101926284A (zh) * 2008-12-31 2010-12-29 雅安三九中药材科技产业化有限公司 一种川附子组织培养及快速繁殖方法
CN201770504U (zh) * 2010-07-26 2011-03-23 济南西斯普换热系统有限公司 一种无菌水机组
CN208250079U (zh) * 2018-03-28 2018-12-18 扬生（南召）生物科技有限公司 一种无菌水制备系统
CN211111538U (zh) * 2019-11-27 2020-07-28 河南博纯环保科技有限公司 一种全自动无菌水制备装置

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
乌头的组织培养与再生植株;胡延玉等;《植物生理学通讯》;19851231(第05期);全文 *
乌头离体培养和快速繁殖;田迎秋等;《中草药》;20070812(第08期);全文 *
北乌头组培快繁技术体系初步研究;宋子龙等;《林业科技》;20190731;第44卷(第4期);全文 *
正交试验法在乌头组织培养中的应用;王跃华等;《中国中药杂志》;20060320(第15期);全文 *
江油附子离体培养的初步研究;李路娥;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)农业科技辑》;20161215(第12期);全文 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112400697A (zh) 2021-02-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106212275B (zh) 一种乌头附子种苗组织培养快繁再生方法
CN100493345C (zh) 一种利用草莓花药培养进行脱毒快繁的方法
CN101147466B (zh) 一种微型姜苗组培快繁培养基及组培快繁方法
CN103931493A (zh) 一种半夏一步成苗的组织培养方法以及新的半夏培养基
CN104396742B (zh) 用五步法诱导淡黄花百合珠芽愈伤组织再分化出无菌苗的方法
CN105557518A (zh) 一种白及种子开放式组培繁殖方法
CN106900555B (zh) 阳春砂试管分株培养基及一次成苗组培分株快繁方法
CN112400697B (zh) 一种草乌无菌苗培育方法
CN1701660A (zh) 一种半夏离体块茎的高效诱导方法
CN102939903A (zh) 一种生姜脱毒、脱菌快繁方法
CN111869569B (zh) 用于金姜花离体培养的培养体系及其应用
CN105340750A (zh) 忍冬组培苗培养基及忍冬组培快繁方法
CN106134996B (zh) 一种黄精一次成苗的方法
CN101926284A (zh) 一种川附子组织培养及快速繁殖方法
CN107466864B (zh) 一种铁皮石斛无性繁殖快速成苗的方法
CN109122123B (zh) 一种青稞-内生真菌共生体的构建方法
CN110226519A (zh) 一种茅苍术的快速繁殖方法
CN103070073A (zh) 试管慈姑组织培养快速繁殖的方法
CN105432466A (zh) 一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生的方法
CN107568065A (zh) 一种毛汉十二卷离体培养方法
CN103858764B (zh) 鹅不食草组培快繁培养基及一次成苗组培快繁方法
CN108012932A (zh) 一种香叶天竺葵的组织培养快速繁殖方法
CN101595845B (zh) 圆齿野鸦椿离体胚培养及植株再生方法
CN107242136A (zh) 一种树莓的组织培养方法
CN112655558B (zh) 一种用于草乌组织培育的培养基

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CP01 Change in the name or title of a patent holder
CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 010070 mengcao seed industry center, Xincheng District, Hohhot, Inner Mongolia Autonomous Region

Patentee after: Mengcao ecological environment (Group) Co.,Ltd.

Address before: 010070 mengcao seed industry center, Xincheng District, Hohhot, Inner Mongolia Autonomous Region

Patentee before: INNER MONGOLIA MONGOLIAN GRASS ECOLOGICAL ENVIRONMENT (GROUP) Ltd.