CN112386615B - 抑制幽门螺旋杆菌感染的副干酪乳杆菌jlpf-176的应用及产品 - Google Patents

抑制幽门螺旋杆菌感染的副干酪乳杆菌jlpf-176的应用及产品 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物技术领域，具体是抑制幽门螺旋杆菌感染的副干酪乳杆菌JLPF‑176的应用及产品，所述应用为在制备抑制幽门螺旋杆菌生长的产品以及治疗胃溃疡的产品中的应用，所述副干酪乳杆菌JLPF‑176的分类命名为副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei，保藏号为CGMCC NO.18043，保藏日期为2019年6月27日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。本发明使用的副干酪乳杆菌JLPF‑176具有强的胃酸存活率，能够有效抑制幽门螺旋杆菌生长。

Description

抑制幽门螺旋杆菌感染的副干酪乳杆菌JLPF-176的应用及 产品
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体的说是抑制幽门螺旋杆菌感染的副干酪乳杆菌JLPF-176的应用及产品。
背景技术
乳酸杆菌是一群对机体有益的微生物，它具有维护人体健康和调节免疫功能的作用。副干酪乳杆菌能维持机体特异性和非特异性的免疫机制。
中文名称：副干酪乳杆菌；拉丁名称：Lactobacillus paracasei；属名：Lactobacillus；种名：paracasei；兼性厌氧、不运动、无芽孢的杆菌或长杆菌，革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性。
应用领域一般为：乳制品、保健食品、饮料、饼干、糖果、冰淇淋。
副干酪乳杆菌经过发酵后不仅可为食品增加发酵风味物质，还能保护食品原有颜色、促进矿物质吸收、产生人体所必需的多种维生素、乳酸菌素、消化酶等物质，从而具有健胃、助消化及提高机体免疫能力的功效。
幽门螺杆菌病是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的细菌。1983年首次从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜活检组织中分离成功，是目前所知能够在人胃中生存的唯一微生物种类。2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，幽门螺杆菌（感染）在一类致癌物清单中。
随着人们生活水平的不断提高，以及对于幽门螺杆菌的日渐认识，一旦发现阳性，都会心事重重，恨不得马上就能把这个菌消灭殆尽。对于幽门螺杆菌的控制采用抗生素联合用药，并且容易反复，现在滥用抗生素的问题泛滥，如何有效并且绿色的抑制该菌，成为困扰携带该菌的人群的一大难题。
发明内容
本发明为抑制幽门螺杆菌的问题，提供了一种有效的并且绿色的产品，具体为一种抑制幽门螺旋杆菌感染的副干酪乳杆菌JLPF-176的应用及产品。
第一方面，本发明提供一种抑制幽门螺旋杆菌感染的副干酪乳杆菌JLPF-176的应用，所述应用为副干酪乳杆菌在制备抑制幽门螺旋杆菌生长的产品以及治疗胃溃疡的产品中的应用，所述副干酪乳杆菌JLPF-176的分类命名为副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei，保藏号为CGMCC NO.18043，保藏日期为2019年6月27日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。
第二方面，本发明提供一种由副干酪乳杆菌JLPF-176制备的抑制幽门螺旋杆菌生长的产品。
第三方面，本发明提供一种由副干酪乳杆菌JLPF-176制备的治疗胃溃疡的产品。
进一步的，所述产品为内服制剂。
进一步的，所述产品含有副干酪乳杆菌粉。
进一步的，所述产品为副干酪乳杆菌粉与低聚异麦芽糖混合复配制成。
进一步的，所述菌粉的活菌数为50亿/g-150亿/g、250亿/g、500亿/g、1000亿/g。
进一步的，所述副干酪乳杆菌粉的制备方法为，将副干酪乳杆菌JLPF-176接种到MRS液体培养基平板中，1%接种量，在37℃条件下，兼性厌氧培养8-12小时，MRS菌液经过离心，真空冷冻干燥，获得副干酪乳杆菌粉。
进一步的，所述MRS液体培养基为：蛋白胨10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、K2HPO4•7H2O2g、柠檬酸三铵2g、CH3COONa•3H2O 5g、葡萄糖20g、吐温80 1mL、MgSO4•7H2O 0.2g、MnSO4•4H2O 0.05g、琼脂15g、蒸馏水1000mL。
本发明的有益效果在于，
本发明通过分离获得的副干酪乳杆菌JLPF-176，具有强的胃酸存活率，能够有效抑制幽门螺旋杆菌生长的能力，进而对胃溃疡有很好的疗效，并有较好的临床效果。
本发明还提供由副干酪乳杆菌JLPF-176制备的产品，该产品中含有副干酪乳杆菌JLPF-176菌粉，方便使用，便于储存，被广大的人群所接受，可以方便的用于日常保健，以及预防和治疗胃溃疡等疾病的应用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为乳杆菌粉通过模拟胃酸存活率对照图；
图2为副干酪乳杆菌JLPF-176对幽门螺旋杆菌抑制实验的抑菌效果直径对比图；
图3为乳杆菌对胃粘膜修复的影响中对照组和实验组的胃粘膜组织图；
图4为不良反应发生率结果图；
图5为对幽门螺旋杆菌的根除率效果图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
本发明的一种副干酪乳杆菌，所述副干酪乳杆菌的菌株号为JLPF-176，其分类命名为副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei，保藏号为：CGMCC NO.18043，保藏日期为2019年6月27日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。
实施例1
（一）菌种分离纯化
平板培养基：蛋白胨10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、K2HPO4•7H2O 2g、柠檬酸三铵2g、CH3COONa•3H2O 5g、葡萄糖20g、吐温80 1mL、MgSO4•7H2O 0.2g、MnSO4•4H2O 0.05g、琼脂15g、蒸馏水1000mL。
菌株的分离
1.山东省青州市西股村对无家族遗传病史的哺乳期女性进行母乳采样，取样过程戴手套消毒操作，避免接触样品以防污染。取出样品后立即冷藏盒保存，并编号记录。
2.对样品液体做十倍梯度稀释，每个梯度取100μL均匀涂布于MRS固体平板培养基上，随后取出置于厌氧罐中，37℃厌氧培养过夜。
次日可见平板上长有形态大小各异的菌落，挑取若干乳酸菌的特征菌落作二代划线纯化处理，平板厌氧活化1天，得培养物，随后做菌株鉴定。
（二）菌种鉴定
1.鉴定单位：生工生物工程（上海）股份有限公司。
2.引物
引物序列
27F：5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'，
1492R：5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'。
3.鉴定的序列
TCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGAGTTCTCGTTGATGATCGGTGCTTGCACCGAGATTCAACATGGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCTTAAGTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAGATCCAAGAACCGCATGGTTCTTGGCTGAAAGATGGCGTAAGCTATCGCTTTTGGATGGACCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGATGATACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGACGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCTCGGCTTAACCGAGGAAGCGCATCGGAAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAATGCTAGGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCAGGTTTCCCCTTCGGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTAGTAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTTGCGAGACCGCGAGGTCAAGCTAATCTCTTAAAGCCATTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGCCTACACGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCGAAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAGCCGTCTAAGGTGGGACAAATGATTAGGGTGAAGTCGT。
4.鉴定的结果
该菌株被鉴定为Lactobacillus paracasei（副干酪乳杆菌）。其分类单元为：Bacteria；Firmicutes；Bacilli；Lactobacillales；Lactobacillaceae；Lactobacillus。
实施例2 菌种产品制备
MRS液体培养基：蛋白胨10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、K2HPO4•7H2O 2g、柠檬酸三铵2g、CH3COONa•3H2O 5g、葡萄糖20g、吐温80 1mL、MgSO4•7H2O 0.2g、MnSO4•4H2O 0.05g、琼脂15g、蒸馏水1000mL。
培养条件：1%接种量，37℃培养。
MRS菌液经过离心，真空冷冻干燥，获得菌粉。
再通过与低聚异麦芽糖混合复配成50亿/g、150亿/g、250亿/g、500亿/g、1000亿/g的菌粉。
低聚异麦芽糖：购自保龄宝生物股份有限公司。
实施例3 菌株耐酸能力的实验
模拟胃酸的配制：取9.5%盐酸16.4mL，加蒸馏水稀释，使pH值达到2.0，按照每100mL加入1.0g胃蛋白酶，混匀，0.22μm无菌滤膜过滤，现配现用。取副干酪乳杆菌JLPF-176菌株的100亿/g菌粉1g，转移到预热的装有9mL模拟胃液试管中，37℃、80r/min处理0.5h、1.5h、2h。对样品溶液进行梯度稀释，倾注法活菌计数，每个处理3个重复。
取其余三种乳杆菌菌株ATCC4356、ATCC4357、ATCC4796作为对照，菌株溶液配制方法与副干酪乳杆菌JLPF-176菌株相同。
根据上述操作方法，对菌株JLPF-176、ATCC4356、ATCC4357、ATCC4796进行模拟胃酸的存活率实验，存活率对照图具体见图1。结论：副干酪乳杆菌JLPF-176菌株在体外模拟胃酸实验时，存活率大大超过其他对照菌株。
实施例4 副干酪乳杆菌JLPF-176对幽门螺旋杆菌抑制实验
幽门螺旋杆菌平板培养（固体培养基）
蛋白胨5.0g、牛脑浸出粉4.0g、牛心浸出粉4.0g、酪蛋白胨16.0g、氯化钠5.0g、葡萄糖2.0g、磷酸氢二钠2.5g、琼脂13.5g、蒸馏水930mL，pH值7.4，25℃。
幽门螺旋杆菌液体培养基
蛋白胨5.0g、牛脑浸出粉4.0g、牛心浸出粉4.0g、酪蛋白胨16.0g、氯化钠5.0g、葡萄糖2.0g、磷酸氢二钠2.5g、蒸馏水930mL，pH值7.4，25℃。
实验步骤
采用单层琼脂平板扩散法。通过稀释控制菌数在106CFU/mL。吸取幽门螺旋杆菌菌液0.1mL于固体培养基平板上，用无菌涂抹棒涂布均匀，于超净工作台内通无菌空气，放置1h待表面的菌液固定在平板的表面后打孔，孔的直径8mm，孔深3mm，将0.2mL(108CFU/mL左右)乳酸菌样液注入孔内，不可溢出孔外。于37℃培养8h观察结果，测定抑菌圈直径，对比如图2所示。每个平板三个孔，做两个平板平行。
结论：副干酪乳杆菌JLPF-176菌株在抑制幽门螺旋杆菌方面，大大超过其他对照菌株。
实施例5 动物实验
选取36只BalBL/C小鼠，8-10周龄。随机分为3组，每组12只。实验分为空白组，模型组，JLPF-176组。各组小鼠先灌胃混合抗生素溶液（阿奇霉素10mg/mL、氨苄青霉素10mg/mL、庆大霉素1.2mg/mL）1周，用量为每天灌胃0.1mL。然后除空白组外，其余各组小鼠均灌胃幽门螺旋杆菌109CFU/mL，灌胃0.5mL，每隔2天灌胃1次，共灌胃4次。同时JLPF-176组小鼠灌胃108CFU/mL的JLPF-176菌液。
试验一：干预8天后，处死小鼠，剪取小鼠的胃组织，参照悉尼分级系统，将胃黏膜组织HE染色后进行切片，并进行胃Hp感染分级，Hp呈深红色，背景红色。对染色后各小鼠胃黏膜组织进行观察，并统计红点数。少于2个红点为Hp（-），2~10个红点为Hp（+），10~50个红点为Hp（++），多于50个红点为Hp（+++）。结果见表1，与空白组比较，模型组小鼠胃组织Hp感染的动物数明显增加；与模型组比较，JLPF-176组小鼠的Hp感染数量和程度显著减少，差异有统计学意义，说明JLPF-176有减轻幽门螺旋杆菌感染的能力。
表1 各组小鼠胃组织Hp感染情况比较（单位：只）
分组 Hp(-) Hp（+） Hp（++） Hp（+++） 总数
空白组 11 1 0 0 12
模型组 0* 1* 5* 6* 12
JLPF-176组 4# 3# 3# 2# 12
注：与空白组比较，*P<0.01；与模型组比较，#P<0.05。
试验二：于小鼠眼眶静脉丛取血清，用ELISA的方法检测IL-1β、TNF-α的含量。结果见表2。幽门螺旋杆菌（Hp）感染可引起慢性消化道溃疡、胃炎等慢性上消化道疾病。由表2可知，在服用JLPF-176后，小鼠胃内的炎症因子IL-1β、TNF-α的表达减少，说明JLPF-176可减轻小鼠胃部的炎症反应。
表2 各组小鼠血清IL-1β、TNF-α水平比较
分组 IL-1β（pg/mL） TNF-α（ng/mL）
空白组 106.54±12.65 85.98±3.11
模型组 219.89±14.98** 254.87±1.55**
JLPF-176组 155.98±13.54*# 126.99±2.65#
注：与空白组相比，*P<0.05，**p<0.01；与模型组相比，#P<0.05。
实施例6 临床试验
选取自愿接受联合治疗的成年幽门螺旋杆菌感染者180名。试验期间，每位患者仍然按照原来的生活饮食习惯不变。为了保证服用乳杆菌菌粉的活性，服用抗生素时间和乳杆菌粉的服药时间间隔2h。抗生素采用三联疗法，即雷贝拉唑每次20mg，每日1次；阿莫西林每次1.0g，每日2次；克拉霉素每次0.5g，每日2次。副干酪乳杆菌JLPF-176菌粉每天服用150亿有效活菌数。
试验一：乳杆菌对胃粘膜修复的影响
试验组：正常服用抗生素（三联疗法）+副干酪乳杆菌JLPF-176菌粉，
对照组：正常服用抗生素（三联疗法），
每组试验人数：90人，
试验内容：试验组每天按时服用抗生素2h后服用JLPF-176菌粉150亿有效活菌数，对照组正常服用抗生素即可。试验进行时间30天，检测胃粘膜组织损伤情况。
试验结果见图3，其中图3a为对照组，图3b为试验组，结论：副干酪乳杆菌JLPF-176对胃粘膜有明显的修复作用。
试验二：联合治疗后不良反应实验
试验组：试验一试验组患者，
对照组：试验一对照组患者，
每组试验人数：90人，
试验内容：服药过程中观察记录两组患者发生不良反应的人数。
试验结果见图4，表明：副干酪乳杆菌JLPF-176可以显著降低服用抗生素的不良反应发生率。
试验三：联合治疗对Hp根除率的实验
试验组：试验一试验组患者，
对照组：试验一对照组患者，
每组试验人数：90人，
试验内容：试验进行时间30天后，检查患者体内幽门螺旋杆菌是否成功根除。
试验结果见图5，表明：副干酪乳杆菌JLPF-176可以明显提高对幽门螺旋杆菌的根除率。
尽管通过参考附图并结合优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以权利要求所述的保护范围为准。
序列表
<110> 山东中科嘉亿生物工程有限公司
<120> 抑制幽门螺旋杆菌感染的副干酪乳杆菌JLPF-176的应用及产品
<130> 2021
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成(引物)
<400> 1
agagtttgat cmtggctcag 20
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工合成(引物)
<400> 2
ggttaccttg ttacgactt 19
<210> 3
<211> 1503
<212> DNA
<213> 副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)
<400> 3
tcaggatgaa cgctggcggc gtgcctaata catgcaagtc gaacgagttc tcgttgatga 60
tcggtgcttg caccgagatt caacatggaa cgagtggcgg acgggtgagt aacacgtggg 120
taacctgccc ttaagtgggg gataacattt ggaaacagat gctaataccg catagatcca 180
agaaccgcat ggttcttggc tgaaagatgg cgtaagctat cgcttttgga tggacccgcg 240
gcgtattagc tagttggtga ggtaatggct caccaaggcg atgatacgta gccgaactga 300
gaggttgatc ggccacattg ggactgagac acggcccaaa ctcctacggg aggcagcagt 360
agggaatctt ccacaatgga cgcaagtctg atggagcaac gccgcgtgag tgaagaaggc 420
tttcgggtcg taaaactctg ttgttggaga agaatggtcg gcagagtaac tgttgtcggc 480
gtgacggtat ccaaccagaa agccacggct aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt 540
aggtggcaag cgttatccgg atttattggg cgtaaagcga gcgcaggcgg ttttttaagt 600
ctgatgtgaa agccctcggc ttaaccgagg aagcgcatcg gaaactggga aacttgagtg 660
cagaagagga cagtggaact ccatgtgtag cggtgaaatg cgtagatata tggaagaaca 720
ccagtggcga aggcggctgt ctggtctgta actgacgctg aggctcgaaa gcatgggtag 780
cgaacaggat tagataccct ggtagtccat gccgtaaacg atgaatgcta ggtgttggag 840
ggtttccgcc cttcagtgcc gcagctaacg cattaagcat tccgcctggg gagtacgacc 900
gcaaggttga aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt 960
aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag gtcttgacat cttttgatca cctgagagat 1020
caggtttccc cttcgggggc aaaatgacag gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg 1080
tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaaccctta tgactagttg ccagcattta 1140
gttgggcact ctagtaagac tgccggtgac aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaaa 1200
tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac acgtgctaca atggatggta caacgagttg 1260
cgagaccgcg aggtcaagct aatctcttaa agccattctc agttcggact gtaggctgca 1320
actcgcctac acgaagtcgg aatcgctagt aatcgcggat cagcacgccg cggtgaatac 1380
gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca caccatgaga gtttgtaaca cccgaagccg 1440
gtggcgtaac ccttttaggg agcgagccgt ctaaggtggg acaaatgatt agggtgaagt 1500
cgt 1503

Claims (9)

1.一种副干酪乳杆菌JLPF-176的应用，其特征在于，所述应用为副干酪乳杆菌JLPF-176在制备抑制幽门螺旋杆菌生长的产品以及治疗胃溃疡的产品中的应用，所述副干酪乳杆菌JLPF-176的分类命名为副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei，保藏号为CGMCCNO.18043，保藏日期为2019年6月27日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。
2.一种副干酪乳杆菌JLPF-176制备得到的抑制幽门螺旋杆菌生长的产品，其特征在于，所述副干酪乳杆菌JLPF-176的分类命名为副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei，保藏号为CGMCC NO.18043，保藏日期为2019年6月27日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。
3.一种副干酪乳杆菌JLPF-176制备得到的治疗胃溃疡的产品，其特征在于，所述副干酪乳杆菌JLPF-176的分类命名为副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei，保藏号为CGMCCNO.18043，保藏日期为2019年6月27日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。
4.如权利要求2或3所述的产品，其特征在于，所述产品为内服制剂。
5.如权利要求2或3所述的产品，其特征在于，所述产品含有副干酪乳杆菌粉。
6.如权利要求5所述的产品，其特征在于，所述产品为副干酪乳杆菌粉与低聚异麦芽糖混合复配制成。
7.如权利要求5所述的产品，其特征在于，副干酪乳杆菌粉的活菌数为50亿/g-150亿/g、250亿/g、500亿/g、1000亿/g。
8.如权利要求5所述的产品，其特征在于，副干酪乳杆菌粉的制备方法为，将副干酪乳杆菌JLPF-176接种到MRS液体培养基平板中，1%接种量，在37℃条件下，兼性厌氧培养8-12小时，MRS菌液经过离心，真空冷冻干燥，获得副干酪乳杆菌粉。
9.如权利要求8所述的产品，其特征在于，所述MRS液体培养基为：蛋白胨10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、K2HPO4•7H2O 2g、柠檬酸三铵2g、CH3COONa•3H2O 5g、葡萄糖20g、吐温80 1mL、MgSO4•7H2O 0.2g、MnSO4•4H2O 0.05g、琼脂15g、蒸馏水1000mL。
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Denomination of invention: Application and product of Lacticaseibacillus paracasei JLPF-176, which inhibits Helicobacter pylori infection

Effective date of registration: 20230616

Granted publication date: 20210406

Pledgee: Qingzhou Shandong rural commercial bank Limited by Share Ltd.

Pledgor: SHANDONG ZHONGKE-JIAYI BIO-ENGINEERING CO.,LTD.

Registration number: Y2023980044147

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