CN112385541A - 一种提升乌菜小孢子胚胎发生率的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提升乌菜小孢子胚胎发生率的方法，属于蔬菜化控领域，所述方法还包括在获取乌菜小孢子前对其长至6‑7片真叶的幼苗喷施油菜素内酯，培养基中添加的油菜素内酯的浓度为0.3mg/L，对乌菜幼苗喷施的油菜素内酯的浓度为50mg/L，对乌菜幼苗的喷施部位为叶片背面，且直至叶片表面滴水；本发明提供的方法可有效提高乌菜小孢子胚胎的发生率。

Description

一种提升乌菜小孢子胚胎发生率的方法

技术领域

本发明涉及属于蔬菜化控领域，具体为一种提升乌小孢子胚胎发生率的方法。

背景技术

乌菜，是十字花科不结球白菜的一个变种，是芸苔属的一个重要物种。作为一种重要的秋冬蔬菜，乌菜在我国大部分地区都有栽培，尤其是在江淮流域。乌菜外形美观，富含多种维生素和矿物质，越来越受到大家的欢迎。乌菜是二年生草本植物，在育种工作上获得一个纯和自交系的时间较长，而利用小孢子培养技术可以缩短育种年限，节省了大量的时间和工作量。

乌菜花粉的发育和环境适应受一系列过程的影响，其中植物激素调节、碳水化合物的积累和代谢起着重要的作用。乌菜小孢子的培养效率较低，提高小孢子的胚胎发生率，可以提高育种效率。

现有技术，利用在培养基中添加噻苯隆来提高小孢子的胚胎发生率，但是噻苯隆是一种低毒的细胞分裂素，可能会对植株造成药害作用，并且外界环境对噻苯隆的效果影响较大。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种提升乌菜小孢子胚胎发生率的方法，以解决现有技术中提高乌菜小孢子胚胎发生率的方法存在隐患的技术问题。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种提升乌菜小孢子胚胎发生率的方法，该方法包括获取乌菜小孢子，然后采用培养基对其进行培育，且在培养基中添加油菜素内酯。

进一步，所述方法还包括在获取乌菜小孢子前对其长至6-7片真叶的幼苗喷施油菜素内酯。

进一步，培养基中添加的油菜素内酯的浓度为0.3mg/L。

进一步，对乌菜幼苗喷施的油菜素内酯的浓度为50mg/L。

进一步，对乌菜幼苗的喷施部位为叶片背面，且直至叶片表面滴水。

本发明相比现有技术具有以下优点：

1、本发明操作简单，便于实施，且使用安全；

2、在小孢子培养基中添加适宜浓度的油菜素内酯可以提高小孢子的胚胎发生率；

3、本发明的油菜素内酯属于环境友好试剂，对环境无污染，使用方便。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例

实施方法：

一、挑选籽粒饱满的乌菜品种WS-1种子播种于育种基质中，待大部分种子出苗后进行正常水肥管理，当幼苗长至4-5片真叶时移栽到花盆中，生长环境为昼/夜温为(25±1)℃/(18±1)℃，光合有效辐射为300-500μmol·m^-2·s^-1，相对湿度为60-70％，保持充足的水分和养料供应。当幼苗6-7片真叶时，选择长势好且无病虫害的植株开始喷施浓度为50mg/L BRs。喷施清水作为对照。两种处理每5天喷施一次，喷施部位为叶片的背面，喷至表面滴水为止，持续喷施至乌菜抽薹前期。

二、当植株开始开花时，采集大小为2.5-3.0mm之间的健康花蕾，此时花蕾中大部分的小孢子正处于单核靠边期，最适合进行游离小孢子培养。首先将采集的花蕾流水冲洗10min，在70％酒精中消毒1min，无菌水冲洗花蕾3次，持续10min。然后在2.5％次氯酸钠和吐温20(每100毫升1滴)的混合溶液中消毒10min。无菌水冲洗花蕾3次，持续10min。

将消过毒的花蕾置于研钵中，加入13％蔗糖的B5培养基，压碎，使得小孢子游离出来。浆液通过400目尼龙网过滤筛过滤，1000rpm中离心5分钟，重复两次，获得纯净的小孢子，使用NLN诱导培养基悬浮小孢子。

在细胞培养皿中加入3-4滴无菌琼脂糖活性炭溶液。琼脂糖用活性炭固化后，将5mL小孢子悬浮液置于细胞培养皿中，将培养皿分为多组，每组添加一种浓度的油菜素内酯或细胞分裂素，具体为0、0.1mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、0.7mg/L油菜素内酯，以及0.1mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、0.7mg/L细胞分裂素6-BA，共计9组，同时每组又分为两份，其中一份为喷施清水的植株，一份为在抽薹期前喷施BRs的植株。培养皿在32℃黑暗中孵育2天，然后在25℃下连续暗培养2～3周左右。当培养皿中出现肉眼可见的胚状体后转至转速为50rpm振荡培养箱中继续暗培养，4周后观察胚状体发育情况并统计油菜素内酯和细胞分裂素不同浓度下胚状体的数目。

实施结果：

表1

从表1中可以看出，添加BRs可以显著提高小孢子的胚胎发生率，并且在NLN诱导培养基中不同浓度的BRs对小孢子胚胎发生率也会产生显著影响。与没有喷施外源BRs的植株相比，外施BRs植株的胚胎发生率在各种BRs浓度下都有所提高，培养基中BRs的浓度为0.3mg/L时，两组小孢子的胚胎发生率都达到最高。与6-BA相比，在培养基中添加BRs提高小孢子胚胎发生率的效果更加显著。以上结果说明对乌菜植株外施BRs可以提高小孢子的胚胎发生率，并且在培养小孢子的NLN诱导培养基中添加适宜浓度的BRs可以显著提高胚胎发生率，最适宜的BRs浓度为0.3mg/L。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种提升乌菜小孢子胚胎发生率的方法，其特征在于，该方法包括获取乌菜小孢子，然后采用培养基对其进行培育，且在培养基中添加油菜素内酯。

2.根据权利要求1所述的一种提升乌菜小孢子胚胎发生率的方法，其特征在于，所述方法还包括在获取乌菜小孢子前对其长至6-7片真叶的幼苗喷施油菜素内酯。

3.根据权利要求2所述的一种提升乌菜小孢子胚胎发生率的方法，其特征在于，培养基中添加的油菜素内酯的浓度为0.3mg/L。

4.根据权利要求3所述的一种提升乌菜小孢子胚胎发生率的方法，其特征在于，对乌菜幼苗喷施的油菜素内酯的浓度为50mg/L。