CN112326765A - 一次性分析胰岛素中24种元素杂质含量的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及分析检测技术领域，具体涉及一种一次性分析胰岛素中24种元素杂质含量的检测方法。所述的一次性分析胰岛素中24种元素杂质含量的检测方法，采用电感耦合等离子体质谱法、USP‑233进行检测，定量分析方法采用内标校正的标准曲线法，待测元素分别为Cd、Pb、As、Hg、Co、V、Ni、Tl、Au、Pd、Ir、Os、Rh、Ru、Se、Ag、Pt、Li、Sb、Ba、Mo、Cu、Sn、Cr，内标为和¹¹⁵In。本发明的检测方法一次性可以检测门冬胰岛素中的24种杂质元素，极大地节约了检测时间，检测方法高效，准确。

Description

一次性分析胰岛素中24种元素杂质含量的检测方法

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，具体涉及一种一次性分析胰岛素中24种元素杂质含量的检测方法。

背景技术

胰岛素的主要功能是降低血糖浓度，使得血糖浓度恢复正常值范围(80-120mg/dL)，可以通过促进血糖氧化分解释放能量，同时促使血糖合成糖元储存起来，还可促使血糖转化为脂肪、氨基酸等非糖物质，从而达到降低血糖的目的。门冬胰岛素(Insulinaspart)是用于治疗糖尿病的常用药，是无色澄明液体。

胰岛素在合成和制成试剂的过程中，合成的原料、接触的生产工艺组件、胰岛素的辅料、胰岛素的包装等都有可能含有对人体有害的元素，从而迁移到药品中。其中汞进入人体对大脑视力神经破坏极大；铅是重金属污染中毒性较大的一种，一旦进入人体很难排除。直接伤害人的脑细胞，特别是胎儿的神经板，可造成先天大脑沟回浅，智力低下；对老年人造成痴呆、脑死亡等。

因此，需要对胰岛素中可能含有的金属杂质进行检测。但是现有的检测方法不能同时检测多种杂质元素，检测效率较低。

发明内容

本发明的目的是提供一种一次性分析胰岛素中24种元素杂质含量的检测方法，通过对样品的处理方式进行优化，克服了有机物需要消解的困扰，并通过优化仪器的参数以及检测所采用的内标溶液，制定的检测方法一次性可以检测门冬胰岛素中的24种杂质元素，极大地节约了检测时间，检测方法高效，准确。

本发明所述的一次性分析胰岛素中24种元素杂质含量的检测方法，采用电感耦合等离子体质谱法、USP-233进行检测，定量分析方法采用内标校正的标准曲线法，待测元素分别为镉(Cd)、铅(Pb)、砷(As)、汞(Hg)、钴(Co)、钒(V)、镍(Ni)、铊(Tl)、金(Au)钯(Pd)、铱(Ir)、锇(Os)、铑(Rh)、钌(Ru)、硒(Se)、银(Ag)、铂(Pt)、锂(Li)、锑(Sb)、钡(Ba)、钼(Mo)、铜(Cu)、锡(Sn)、铬(Cr)，其中⁷Li、⁵¹V、⁵²Cr、⁵⁹Co、⁶⁰Ni、⁶³Cu、⁷⁵As、⁷⁸Se以⁷²Ge(锗)作为内标，⁹⁵Mo、¹⁰¹Ru、¹⁰³Rh、¹⁰⁵Pd、¹⁰⁷Ag、¹¹⁴Cd、¹¹⁸Sn、¹²¹Sb、¹³⁷Ba、¹⁸⁹Os、¹⁹³Ir、¹⁹⁵Pt、¹⁹⁷Au、²⁰²Hg、²⁰⁵Tl、²⁰⁸Pb以¹¹⁵In(铟)作为内标。

质谱模式选项：峰形：3points；重复次数：3；扫描/重复次数：100。

调谐模式：He模式；等离子体模式：常规；射频输出功率：1550W；雾化气：0.7-0.9L/min；补偿气：0.2-0.4L/min；He：3.5mL/min。

样品提升：50s；速度：0.3rps；稳定时间：40s。

优选的，调谐模式：He模式；等离子体模式：常规；射频输出功率：1550W；雾化气：0.8L/min；补偿气：0.3L/min；He：3.5mL/min。

其中，雾化气是提高进样量的重要参数，补偿气进一步提高进样的稳定性。雾化气低造成样品进样量过低影响检测，雾化气高进样量过大造成仪器污染，影响仪器使用。

内标溶液的配制方法为：

分别取锗元素标准溶液50μL，铟元素标准溶液50μL，异丙醇10mL，置于同一50mL量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，摇匀，即得内标溶液；

其中，锗元素标准溶液和铟元素标准溶液的标准值为1000μg/mL；

溶剂A为50mL的5wt％盐酸和950mL的超纯水混合。

样品待测溶液的配制方法为：

精密称取样品100mg，置于50mL量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，摇匀，即得样品待测溶液；

溶剂A为50mL的5wt％盐酸和950mL的超纯水混合。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明通过对样品的处理方式进行优化，往内标溶液中加入适量的异丙醇，降低有机物的增敏效应，克服了有机物需要消解的困扰，并通过优化仪器的参数以及检测所采用的内标溶液，制定的检测方法一次性可以检测门冬胰岛素中的24种杂质元素，极大地节约了检测时间，检测方法高效，准确。

附图说明

图1为本发明24种元素的标准曲线图。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明做进一步描述。

实施例使用的试剂如表1所示：

表1 实施例使用的试剂列表

实施例使用的内标元素如表2所示：

表2 实施例使用的内标元素列表

实施例使用的单标元素如表3所示：

表3 实施例使用的单标元素列表

实施例使用的仪器如表4所示：

表4 实施例使用的仪器列表

名称	型号	厂家
			电感耦合等离子体质谱仪	ICP-MS7800	美国安捷伦
电子分析天平	BT125D	德国赛多利斯
			综合分析型超纯水系统	NANO pure Dlamo UV/UF	美国Thermo

实施例中的检测条件如下：

质谱模式选项：峰形：3points；重复次数：3；扫描/重复次数：100。

调谐模式：He模式，Plasma Mode：General，RF功率：1550W，雾化气：0.8L/min，补偿气：0.3L/min，He：3.5mL/min。

样品提升：50s；速度：0.3rps；稳定时间：40s。

实施例1

线性试验：

(1)制备线性储备溶液，具体操作如表5所示。其中，溶剂A为50mL的5wt％盐酸和950mL超纯水混合；溶剂B为20mL的5wt％盐酸、30mL的5wt％硝酸和950mL的超纯水混合。

表5 线性储备溶液制备操作

(2)制备线性溶液：

分别量取上述线性储备溶液0μL、10μL、50μL、100μL、150μL、200μL，置10mL量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，摇匀，即得线性溶液STD-0(限度浓度0％)、STD-1(限度浓度10％)、STD-2(限度浓度50％)、STD-3(限度浓度100％)、STD-4(限度浓度150％)、STD-5(限度浓度200％)。具体各级别标准曲线浓度如表6所示，线性方程参数及相关系数值如表7所示，标准曲线如图1所示。

表6 线性各级别标准曲线浓度

表7 线性方程参数及相关系数值

可接受标准：24种元素杂质在10％～200％限度浓度范围内应成良好的线性关系，相关系数均应在0.99以上。由表7可以看出，本发明的检测系统符合可接受标准。

实施例2

精密度试验：

(1)重复性试验：

精密称取供试品约100mg，置于50mL量瓶中，加入线性储备溶液500μL，用溶剂A稀释至刻度，摇匀，即得。同法制备6份作为重复性样品，分别记为样品1-6。

试验结果见表8。

表8 重复性试验结果

可接受标准：每个元素杂质测得的浓度的RSD％应不大于20％。由表8可以看出，本发明的检测系统符合可接受标准。

(2)准确度试验

准确度试验是确定元素杂质用所确定的方法检测测定结果与真实值接近的程度，使用加标回收方法研究。加样回收率浓度选择以限度为中心覆盖50％-150％的限度值。

准确度空白样品制备：精密称取样品约100mg，置于50mL量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，摇匀，即得。每批同法制备2份。

准确度加标样品溶液配制：精密称取样品约100mg，置于50mL量瓶中，分别加入线性储备溶液250μL、500μL、750μL，用溶剂A稀释至刻度，摇匀，即得，即得50％、100％、150％加标样品溶液，每个浓度同法制备3份。

试验结果见表9。

表9 准确度试验结果

可接受标准：回收率应在70％-150％范围内。由表9可以看出，本发明的检测系统符合可接受标准。

从实施例1-2可以得出结论：本发明检测方法的所有验证项目均符合验证方案标准规定，该方法准确可靠，可以用于门冬胰岛素样品中24种元素杂质的含量检测。

实施例3

采用本发明的检测方法对门冬胰岛素中24种元素杂质含量进行测定，样品待测溶液制备方法如下：

精密称取样品100mg，置于50mL量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，摇匀，即得样品待测溶液，每批同法制备2份。

计算公式为：

其中Conc.(ppb)为样品待测溶液检测结果。

4个批次的门冬胰岛素中24种元素杂质含量测定结果见表10。

表10 门冬胰岛素中24种元素杂质含量

“BQL”表示低于10％的限度浓度，10％的限度浓度分别为(单位：ppm)：

Cd：0.02；Pb：0.05；As：0.15；Hg：0.03；Co：0.05；V：0.1；Ni：0.2；Tl：0.08；Au：1；Pd：0.1；Ir：0.1；Os：0.1；Rh：0.1；Ru：0.1；Se：0.8；Ag：0.1；Pt：0.1；Li：2.5；Sb：0.9；Ba：7；Mo：15；Cu：3；Sn：6；Cr：11。

Claims (7)

1.一种一次性分析胰岛素中24种元素杂质含量的检测方法，其特征在于：采用电感耦合等离子体质谱法、USP-233进行检测，定量分析方法采用内标校正的标准曲线法，待测元素分别为Cd、Pb、As、Hg、Co、V、Ni、Tl、Au、Pd、Ir、Os、Rh、Ru、Se、Ag、Pt、Li、Sb、Ba、Mo、Cu、Sn、Cr，其中⁷Li、⁵¹V、⁵²Cr、⁵⁹Co、⁶⁰Ni、⁶³Cu、⁷⁵As、⁷⁸Se以⁷²Ge作为内标，⁹⁵Mo、¹⁰¹Ru、¹⁰³Rh、¹⁰⁵Pd、¹⁰⁷Ag、¹¹⁴Cd、¹¹⁸Sn、¹²¹Sb、¹³⁷Ba、¹⁸⁹Os、¹⁹³Ir、¹⁹⁵Pt、¹⁹⁷Au、²⁰²Hg、²⁰⁵Tl、²⁰⁸Pb以¹¹⁵In作为内标。

2.根据权利要求1所述的一次性分析胰岛素中24种元素杂质含量的检测方法，其特征在于：质谱模式选项：峰形：3points；重复次数：3；扫描/重复次数：100。

3.根据权利要求1所述的一次性分析胰岛素中24种元素杂质含量的检测方法，其特征在于：调谐模式：He模式；等离子体模式：常规；射频输出功率：1550W；雾化气：0.7-0.9L/min；补偿气：0.2-0.4L/min；He：3.5mL/min。

4.根据权利要求3所述的一次性分析胰岛素中24种元素杂质含量的检测方法，其特征在于：调谐模式：He模式；等离子体模式：常规；射频输出功率：1550W；雾化气：0.8L/min；补偿气：0.3L/min；He：3.5mL/min。

5.根据权利要求1所述的一次性分析胰岛素中24种元素杂质含量的检测方法，其特征在于：样品提升：50s；速度：0.3rps；稳定时间：40s。

6.根据权利要求1所述的一次性分析胰岛素中24种元素杂质含量的检测方法，其特征在于：内标溶液的配制方法为：

分别取锗元素标准溶液50μL，铟元素标准溶液50μL，异丙醇10mL，置于同一50mL量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，摇匀，即得内标溶液；

其中，锗元素标准溶液和铟元素标准溶液的标准值为1000μg/mL；

溶剂A为50mL的5wt％盐酸和950mL的超纯水混合。

7.根据权利要求1所述的一次性分析胰岛素中24种元素杂质含量的检测方法，其特征在于：样品待测溶液的配制方法为：

精密称取样品100mg，置于50mL量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，摇匀，即得样品待测溶液；

溶剂A为50mL的5wt％盐酸和950mL的超纯水混合。

Images