CN112220887A - 一种提高免疫力的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提高免疫力的中药组合物及其制备方法与应用。该中药组合物由下述质量份的原料制成：铁皮石斛1～4份、西洋参2～4份、黄芪2～6份。制备方法包括下述步骤：1)按所述质量份数比称取铁皮石斛、西洋参、黄芪五味药材，用水加热提取，提取完毕后，滤过，收集提取液；2)将所述提取液减压浓缩成浸膏、再真空干燥成干浸膏，得到所述药物组合物。本发明的中药组合物所制备的颗粒剂经测定小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、单核‑巨噬细胞功能及NK细胞活性，结果表明具有提供免疫力作用。

Description

一种提高免疫力的中药组合物及其制备方法
技术领域
本发明属于中药领域，具体涉及一种提高免疫力的中药组合物及其制备方法。
背景技术
现代医学认为人体的免疫力是机体识别和消灭外来侵入异物，处理机体衰老、损伤、变性、死亡等细胞的能力，是机体排除“异己”、保护自身的防御能力。人体免疫力的调节能力对维持机体内在平衡，维护人体身体健康发挥着重要作用。
而我国中医对疾病的治疗提倡“治未病”，也即讲究疾病在未产生之前，就注重对身体的调养，和对可能发生疾病的预防，因此有着悠久历史文化的中医重在调养身体的辩证思想与现代医学中所提倡“提高机体免疫力，预防疾病发生”的科学理论相符一致。也就是中医理论认为人体疾病的产生源于体内阴阳失衡或寒热、虚实偏性所致。因为人体的气血阴阳与脏腑之间，以及人体内环境与外环境之间，均处在相互调节和趋向平衡的的动态变化中，以此维持人体的正常生理活动。当中医谓之“正气内存，邪不可干，邪之所凑，其气必虚”出现时，也就是病邪入侵，体内正气与邪气展开斗争之际，若正盛则邪退，疾病好转；若邪盛正衰，则病趋所恶。所以中医所指人体“正气”与西医的“人体免疫力”有着相似之处，均指除机体维持人体正常生理机能外活动，具有抵御和清除各种有害和不利因素的能力。为此，通过服用对机体免疫有调节功能的中药组合物，对于提升体内正气，增强机体的修复和调节功能，提高机体抗病能力，恢复人体身体健康有重要作用。
因此，本发明在于研制一种提高机体免疫力，对人体具有补气养阴功能的中药组合物，该组合物中的铁皮石斛、西洋参、黄芪经现代医学证明单方使用就能提高机体免疫力，经组合使用，则能产生协同增效作用，共具养阴补气之效，因此对修复体内正气失衡、阴阳失衡所致的人体亚健康状态具有良好修复功能。而且本发明所制备的颗粒剂经免疫功能试验验证，具有提高小鼠体液免疫功能、提高小鼠NK细胞活性的效果，可判定为该颗粒剂具有增强免疫力功能。因此该组合物对免疫力低下者尤为适宜，效果优于单方，可制备成各种口服制剂，应用于保健食品或中药领域。
发明内容
本发明的目的是提供一种提高免疫力的中药组合物及其制备方法。
本发明所提供的提高免疫力的中药组合物由下述质量份的原料制成：铁皮石斛1～4份、西洋参2～4份、黄芪2～6份。
所述中药组合物具体可由如下原料制成：铁皮石斛2份、西洋参3份、黄芪3份。
制成本发明中药组合物的各原料药是按照质量份作为配比，在生产时可按照相应的比例增大或减少，如大规模生产可以以公斤或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或减小，但各组成之间的原料药质量配比比例不变。
本发明所提供的上述中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
1)按所述质量份数比称取铁皮石斛、西洋参、黄芪三味药材，用水加热提取，提取完毕后，滤过，收集提取液；
2)将所述提取液减压浓缩成浸膏、再真空干燥成干浸膏，得到所述药物组合物。
上述方法步骤1)中，所述提取至少进行1～3次，具体可提取2次；每次提取时，所述水的加入量为所述药材总质量的6～11倍，具体可为9倍；每次提取的时间为1～3小时，具体可为2.5小时；每次提取的温度可为80～100℃，具体可为90℃。所述过滤是通过80目筛。
上述方法步骤2)中，所述减压浓缩的条件为-0.080Mpa、55～65℃。
上述方法步骤2)中，所述浸膏是60℃热测相对密度为1.20～1.30的浸膏。
上述方法步骤2)中，所述真空干燥的条件是-0.08Mpa、60℃干燥至物料含水量≤6％。
上述方法制备的中药组合物可根据需要进一步制备成药学上可接受的剂型。
如可将所述干浸膏粉碎过筛后加入适量的辅料(如乳糖、D-甘露糖醇)混匀、制粒、干燥(60℃)、整粒制成颗粒剂。
所述中药组合物颗粒剂由下述质量份的原料和辅料制成：铁皮石斛1～4份、西洋参2～4份、黄芪2～6份、乳糖2～4份、D-甘露糖醇2～4份。
具体的，所述中药组合物颗粒剂由下述质量份的原料和辅料制成：铁皮石斛2份、西洋参3份、黄芪3份、乳糖2份、D-甘露糖醇2份。
本发明的再一个目的是提供所述中药组合物的应用。
本发明所提供的中药组合物的应用是其在制备提高免疫力产品中的应用。
所述产品包括药物或保健食品。
以上述中药组合物为活性成分制成的药物也属于本发明的保护范围。通过将上述药物组合物，直接制备或者加入药学上可接受的辅料后制备，可制成任何药学上可接受的剂型。以口服制剂为例包括：胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、滴丸剂、口服液、合剂和糖浆剂。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
根据本发明的一个实施例，所述中药组合物制备成颗粒剂，产品规格：3g/袋，食用量及食用方法：每日2次，一次1袋，开水冲服。
所述提高免疫力具体体现在下述至少一方面：
1)提高细胞免疫功能；
2)提高体液免疫功能；
3)提高单核-巨噬细胞功能；
4)提高NK细胞活性。
本发明还提供一种提高免疫力的产品。
所述提高免疫力的产品，其活性成分包括本发明提供的中药组合物。
所述产品包括药物或保健食品。
本发明中药组合物中的各方在《中国药典》中所描述的性味与功效如下：
1、铁皮石斛：甘，微寒。归胃、肾经。功效：益胃生津，滋阴清热。
2、西洋参：甘、微苦，凉。归心、肺、肾经。功效：补气养阴，清热生津。
3、黄芪：甘，微温。归肺、脾经。功效：补气升阳，固表止汗，利水消肿，生津养血，行滞通痹，托毒排脓，敛疮生肌。
本发明在于研制一种提高机体免疫力，对人体具有补气养阴功能的中药组合物，该组合物中的铁皮石斛、西洋参、黄芪经现代医学证明单方使用就能提高机体免疫力，经组合使用，则能产生协同增效作用，共具养阴补气之效，因此对修复体内正气失衡、阴阳失衡所致的人体亚健康状态具有良好修复功能。而且本发明所制备的颗粒剂经免疫功能试验验证，具有提高小鼠体液免疫功能、提高小鼠NK细胞活性的效果，可判定为该颗粒剂具有增强免疫力功能。因此该组合物对免疫力低下者尤为适宜，效果优于单方，可制备成各种口服制剂，应用于保健食品或中药领域。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
铁皮石斛：性味甘，微寒。归胃、肾经；有滋阴清热，益胃生津之功效，位居“中华九大仙草”之首，偏重滋阴；西洋参性甘、微苦，凉，归心、肺、肾经，具有补气养阴，清热生津的功效；铁皮石斛配伍西洋参，益气养阴，养胃生津，补而不腻，清而不伤胃；而被中医誉为“补气圣药”的黄芪味甘性温，主补脾肺之气，和西洋参配伍温而不燥，可增强补肺气之功效；三者单用，均属补益药之上品；若配伍使用，则具有协同增效作用，共具养阴补气之效，因此配方合理而科学，对调节人体的机体免疫力具有很好疗效。
附图说明
图1为本发明中药组合物颗粒剂的制备流程图，图中：虚线框内为10万级洁净区，其它为一般生产区。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
下述实施例中所用的原料符合下述要求：
1.铁皮石斛：本品应符合《中国药典》2015年版一部第282页“铁皮石斛”项下的有关规定。
2.西洋参：本品应符合《中国药典》2015年版一部第131页“西洋参”项下的有关规定。
3.黄芪：本品应符合《中国药典》2015年版一部第302页“黄芪”项下的有关规定。
4.乳糖：本品符合《中华人民共和国药典》2015版四部524页中“乳糖”的规定。
5.D-甘露糖醇：本品符合《GB1886.177-2016食品安全国家标准食品添加剂D-甘露糖醇》的要求。
实施例1、制备中药组合物颗粒剂
所述中药组合物颗粒剂具体可由如下质量份的原料制成：
原料：铁皮石斛2份、西洋参3份、黄芪3份；
辅料：乳糖2份、D-甘露糖醇2份。
制备方法如下：
称取所述质量份的五味药材，加入9倍质量的水，90℃提取2次，每次2.5hr，提取结束后合并提取液，过滤(80目)，收集滤液。将滤液减压浓缩(55～65℃，-0.080Mpa)至相对密度为度1.20～1.30(60℃热测)的浸膏、真空干燥(-0.08Mpa，60℃，物料含水量≤6％)成干浸膏(其为药材原料总质量的26％)、粉碎过筛(80目)后加入辅料混和30分钟，在混合粉中加入体积分数75％乙醇水溶液制软材，20目制粒，干燥(60℃)至含水量<6％，14目整粒、内包装(3g/袋)。
感官要求符合表1的规定。
表1感官要求
Figure BDA0002727523390000041
Figure BDA0002727523390000051
理化指标符合表2的规定。
表2理化指标
Figure BDA0002727523390000053
微生物指标符合表3的规定。
表3微生物指标
项目 指标 检测方法
菌落总数，CFU/g ≤30000 GB 4789.2-2016
大肠菌群，MPN/g ≤0.92 GB 4789.3-2016MPN计数法(第一法)
霉菌和酵母，CFU/g ≤50 GB 4789.15-2016
金黄色葡萄球菌 ≤0/25g GB 4789.10-2016(第一法)
沙门氏菌 ≤0/25g GB 4789.4-2016
颗粒剂中标志性成分指标符合表4的规定
表4标志性成分指标
Figure BDA0002727523390000052
实施例2、中药组合物提供免疫力功能试验
1材料和方法
1.1样品：实施例1制备的中药组合物颗粒，规格：3g/袋，样品形态为黄棕色颗粒。样品密闭，置阴凉、干燥处保存。受试样品人体推荐剂量为6.0g/人/日。
1.2实验动物：选用上海西普尔-必凯实验动物有限公司繁殖的SPF级CI/F1代健康雌性小鼠200只，体重为19.0～21.9g，实验动物生产许可证号为SCXK(沪)2013-0016，合格证号：2008001668945。
小鼠按体重随机分为I、II、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ五个大组，每大组40只小鼠，分成4个剂量组，每个剂量组10只。其中I组小鼠进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化、NK细胞活性试验；II组小鼠进行耳廓肿胀试验；Ⅲ组小鼠进行抗体生成细胞检测和半数溶血值HC50的测定；Ⅳ组小鼠进行碳廓清试验；Ⅴ组小鼠进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验。
试验动物在温度为20～26℃、相对湿度为40％～70％的本中心屏障环境中饲养。实验动物使用许可证号：SYXK(苏)2015-0009。辐照灭菌饲料由江苏省协同医药生物工程有限责任公司提供，生产许可证：苏饲证(2014)01008。
1.3剂量选择与受试物给予方式：受试样品人体推荐剂量为6.0g/人/日(以60kg体重计)，设0.5g/kg·bw/d、1.0g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d三个剂量组(分别相当于受试样品人体推荐摄入量的5倍、10倍、30倍)，另设0g/kg·bw/d组以无菌水代替受试物。受试样品用无菌水配制，低、中、高剂量配制浓度分别为50mg/mL、100mg/mL、300mg/mL，经口每日一次给予小鼠相应剂量的受试物，小鼠灌胃量为0.1mL/10g·bw。连续灌胃一个月后测定各项增强免疫力功能指标。
1.4主要仪器与试剂
1.4.1主要仪器：打孔器、T1000型电子天平、JA2003型电子天平、SG-603生物安全柜、多功能酶标仪、二氧化碳培养箱、JJ-100电子天平。
1.4.2主要试剂：DNFB、SRBC、豚鼠血清、印度墨汁、RPMI1640、ConA、MTT、异丙醇、SA缓冲液、都氏试剂、YAC-1细胞、LDH基质液。
1.5试验方法
1.5.1 ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验——MTT法
各剂量组动物连续灌胃一个月后，颈椎脱臼法处死动物，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾脏，制成单个细胞悬液，经200目筛网过滤，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，然后将细胞悬浮于1mL RPMI1640完全培养液中，台酚兰染色计数活细胞数(均在95％以上)，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为3×106个/mL。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，一孔加75μL ConA液(100μg/mL)，另一孔作为对照，置37℃、5％CO2培养箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。将溶解液移入96孔培养板中，每孔做三个平行孔，用酶标仪在波长570nm下测定各孔吸光度值。
淋巴细胞增殖能力＝加ConA的光密度值－不加ConA的光密度值
用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力，受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值，可判定该项试验结果阳性。
1.5.2 DNFB诱导小鼠迟发型变态反应(DTH)——耳肿胀法
各剂量组动物连续灌胃一个月后，每鼠用剃毛机将腹部毛剃去，范围约3cm3cm，用10mg/mL DNFB溶液50μL均匀涂抹致敏。5日后用10mg/mL DNFB溶液10μL均匀涂抹于小鼠右耳(两面)进行攻击，攻击后24h颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下直径8mm耳片，称重。
耳重差(mg)＝右耳重(mg)－左耳重(mg)
用左右耳重量之差表示DTH的程度。受试样品组的重量差值显著高于对照组的重量差值，可判定该项试验结果阳性。
1.5.3抗体生成细胞检测——Jerne改良玻片法
各剂量组动物连续灌胃一个月后，每只鼠腹腔注射2％(v/v)的SRBC悬液0.2mL进行免疫，4d后小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，放在盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾脏，制成细胞悬液，经200目筛网过滤，离心(1000r/min)10min，用Hank’s液洗2遍，最后将细胞悬浮于8mLHank’s液中。将表层培养基加热溶解后，放45℃水浴保温，与等量pH7.2～7.4两倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5mL，再向管内加10％SRBC(v/v，用SA缓冲液配制)50μL，25μL脾细胞悬液，迅速混匀，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，做二个平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入37℃、5％CO2培养箱中孵育1.5h，然后将制备好的补体1:8稀释后加入到玻片架凹槽内，继续孵育1.5h后，计数溶血空斑数。
溶血空斑数＝溶血空斑计数×320
用空斑数/全脾细胞来表示，受试样品组的空斑数显著高于对照组的空斑数，可判定该项试验结果阳性。
1.5.4血清溶血素测定——半数溶血值(HC50)
各剂量组动物连续灌胃一个月后，制备2％(v/v)的SRBC悬液，每只鼠腹腔注射0.2mL进行免疫，4d后小鼠眼底静脉丛取血于离心管内，放置1h，2000r/min离心10min，分离并收集血清。血清200倍稀释后，按检验方法测定样品管及SRBC半数溶血时的光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示。
Figure BDA0002727523390000071
溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示，受试样品组的HC50显著高于对照组的HC50，可判定该项试验结果阳性。
1.5.5小鼠碳廓清试验
各剂量组动物连续灌胃一个月后，每鼠尾静脉注入4倍稀释的印度墨汁(0.1mL/10g·bw)，待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2min及10min分别从眼内眦静脉丛取血20μL，并将其加到2mL0.1％Na2CO3溶液中，用酶标仪在600nm波长处测光密度值，并取胸腺、肝、脾称重，利用光密度值、肝重和脾重计算吞噬指数a。另计算胸腺/体比、脾/体比。
Figure BDA0002727523390000081
以吞噬指数a表示小鼠碳廓清的能力。受试样品组的吞噬指数a显著高于对照组的吞噬指数a，可判定该项试验结果阳性。
1.5.6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(滴片法)
小鼠巨噬细胞的激活：实验前4天给每只小鼠腹腔注射2％压积羊血红细胞0.2mL。用颈椎脱臼法处死小鼠，腹腔注射加小牛血清的Hank’s液4mL/只，轻轻按揉腹部20次，以充分洗出腹腔巨噬细胞，然后将腹壁剪开一个小口，用胶头吸管吸取腹腔洗液2mL于试管内(或用注射器)。用1mL加样器吸取腹腔洗液0.5mL加入盛有0.5mL1％鸡血红细胞悬液的试管内，混匀。用注射器吸取0.5mL混合液，加入玻片的琼脂圈内。放置孵箱内37℃孵育15-20分钟。孵育结束后迅速用生理盐水将未贴壁细胞冲掉，于甲醇液中固定1分钟，Giemsa液染色15min。用蒸馏水冲洗干净，晾干，用40×显微镜计数吞噬率和吞噬指数。
Figure BDA0002727523390000082
Figure BDA0002727523390000083
受试样品组的吞噬百分率或吞噬指数与对照组比较，差异均有统计学意义，方可判定该项试验结果阳性。
1.5.7NK细胞活性测定——乳酸脱氢酶测定法
各剂量组动物连续灌胃一个月后，颈椎脱臼处死小鼠，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾脏，制成单细胞悬液，经200目筛网过滤，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，弃上清将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水20秒，裂解红细胞后再加入0.5mL 2倍Hank’s液及8mL Hank’s液，离心10min(1000r/min)，用含10％小牛血清RPMI1640完全培养液重悬，1％冰乙酸稀释后计数，台酚兰染色计数活细胞数(均在95％以上)，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/mL。
试验前24h将靶细胞(YAC-1细胞)传代培养，应用前以Hank’s液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/mL。取YAC-1细胞和脾细胞各100μL(效靶比50:1)加入U型96孔培养板中，YAC-1细胞自然释放孔加YAC-1细胞和培养液各100μL，YAC-1细胞最大释放孔加YAC-1细胞和2.5％Triton各100μL，上述各项均设三个平行孔，于37℃、5％CO2培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清液100μL置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μL，反应10min，每孔加入1mol/L的HCl 30μL，在酶标仪490nm处测定光密度值。
Figure BDA0002727523390000091
受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性，方可判定该项试验结果阳性。
1.6试验数据统计：用SPSS软件对各试验原始数据进行方差齐性检验，满足方差齐要求的数据资料，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理；对非正态分布或方差不齐的数据资料用秩和检验进行统计处理。
1.7结果判定：在细胞免疫功能(ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化，DNFB诱导小鼠DTH)、体液免疫功能(抗体生成细胞检测，血清溶血素测定)、单核-巨噬细胞功能(小鼠碳廓清，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞)、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。
其中细胞免疫功能测定项目中的两个试验结果均为阳性，或任一个试验的两个剂量组结果阳性，可判定细胞免疫功能测定结果阳性。体液免疫功能测定结果中两个试验结果均为阳性，或任一个试验的两个剂量组结果阳性，可判定体液免疫功能测定结果阳性。单核-巨噬细胞功能测定项目中的两个试验结果均为阳性，或任一个试验的两个剂量组结果阳性，可判定单核-巨噬细胞功能结果阳性。NK细胞活性测定试验的一个以上剂量组结果阳性，可判定NK细胞活性结果阳性。
2结果
试验过程中动物饮水摄食正常，外观无异常。
2.1中药组合物颗粒对小鼠体重的影响
由表1可见，小鼠的初始体重0.5g/kg·bw/d、1.0g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组与0g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。表明小鼠的初始体重在各组间较为均衡。
经口给予小鼠不同剂量的中药组合物颗粒一个月后，将各剂量组体重增长值进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表1-5可见，0.5g/kg·bw/d、1.0g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组与0g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。
表1中药组合物颗粒对Ⅰ组小鼠体重的影响
Figure BDA0002727523390000101
Figure BDA0002727523390000102
表2中药组合物颗粒对ⅠI组小鼠体重的影响
Figure BDA0002727523390000103
Figure BDA0002727523390000104
表3中药组合物颗粒对Ⅲ组小鼠体重的影响
Figure BDA0002727523390000105
Figure BDA0002727523390000106
表4中药组合物颗粒对Ⅲ组小鼠体重的影响
Figure BDA0002727523390000107
Figure BDA0002727523390000108
表5中药组合物颗粒对Ⅲ组小鼠体重的影响
Figure BDA0002727523390000109
Figure BDA00027275233900001010
Figure BDA0002727523390000111
2.2中药组合物颗粒对小鼠胸腺、脾脏器官的影响
经口给予小鼠不同剂量的中药组合物颗粒一个月后，取小鼠的胸腺和脾称重，计算脏体比，并对脏体比进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表6结果可见，0.5g/kg·bw/d、1.0g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组胸腺体比和脾体比与0g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。
表6中药组合物颗粒对小鼠胸腺、脾脏器官的影响
Figure BDA0002727523390000112
Figure BDA0002727523390000113
2.3中药组合物颗粒对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的影响
经口给予小鼠不同剂量的中药组合物颗粒一个月后，用MTT法进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验，计算加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值，并对其进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表7结果可见，1.0g/kg·bw/d组小鼠脾淋巴细胞中加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值高于0g/kg·bw/d组，差异有统计学意义(P<0.05)。
表7中药组合物颗粒对小鼠脾淋巴细胞转化的影响
Figure BDA0002727523390000114
Figure BDA0002727523390000115
2.4中药组合物颗粒对DNFB诱导小鼠DTH的影响
经口给予小鼠不同剂量的中药组合物颗粒一个月后，用耳肿胀法进行DNFB诱导小鼠DTH实验，计算耳壳增重，并对其进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表8结果可见，0.5g/kg·bw/d、1.0g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组耳壳增重与0g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。
表8中药组合物颗粒对DNFB诱导小鼠DTH的影响
Figure BDA0002727523390000121
Figure BDA0002727523390000122
2.5中药组合物颗粒对小鼠溶血空斑数的影响
经口给予小鼠不同剂量的中药组合物颗粒一个月后，用Jerne改良玻片法进行小鼠抗体生成细胞实验，计算溶血空斑数，并对其进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表9结果可见，0.5g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组小鼠溶血空斑数高于0g/kg·bw/d组，差异有统计学意义(P<0.05)。
表9中药组合物颗粒对小鼠溶血空斑数的影响
Figure BDA0002727523390000123
Figure BDA0002727523390000124
2.6中药组合物颗粒对小鼠血清半数溶血值(HC50)的影响
经口给予小鼠不同剂量的中药组合物颗粒一个月后，用半数溶血值法测定小鼠的血清半数溶血值(HC50)，并对其进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表10结果可见，0.5g/kg·bw/d、1.0g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组小鼠血清半数溶血值(HC50)高于0g/kg·bw/d组，差异有统计学意义(P<0.05)。
表10中药组合物颗粒对小鼠HC50的影响
Figure BDA0002727523390000125
Figure BDA0002727523390000126
Figure BDA0002727523390000131
2.7中药组合物颗粒对小鼠碳廓清能力的影响
经口给予小鼠不同剂量的中药组合物颗粒一个月后，进行小鼠碳廓清实验，计算吞噬指数a，并对其进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表11结果可见，0.5g/kg·bw/d、1.0g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组小鼠碳廓清吞噬指数a与0g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。
表11中药组合物颗粒对小鼠碳廓清能力的影响
Figure BDA0002727523390000132
Figure BDA0002727523390000133
2.8中药组合物颗粒对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率及吞噬指数的影响
经口给予小鼠不同剂量的中药组合物颗粒一个月后，用滴片法进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验，计算吞噬指数及吞噬百分率，并将吞噬百分率经sin-1P1/2(P为吞噬百分率，用小数表示)转化后进行方差齐性检验，吞噬百分率、吞噬指数满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表12结果可见，0.5g/kg·bw/d、1.0g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数与0g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。
表12中药组合物颗粒对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率及吞噬指数的影响
Figure BDA0002727523390000134
Figure BDA0002727523390000135
2.9中药组合物颗粒对小鼠NK细胞活性的影响
经口给予小鼠不同剂量的中药组合物颗粒一个月后，用乳酸脱氢酶测定法进行小鼠NK细胞活性测定，将NK细胞活性经sin-1P1/2(P为NK细胞活性，用小数表示)转化后进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表9结果可见，0.5g/kg·bw/d、1.0g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组小鼠NK细胞活性高于0g/kg·bw/d组，差异有统计学意义(P<0.05)。
表13中药组合物颗粒对小鼠NK细胞活性的影响
Figure BDA0002727523390000141
Figure BDA0002727523390000142
3小结
3.1细胞免疫功能：ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验中，1.0g/kg·bw/d组小鼠脾淋巴细胞中加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值高于0g/kg·bw/d组，差异有统计学意义(P<0.05)；DNFB诱导小鼠DTH试验中，0.5g/kg·bw/d、1.0g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组耳壳增重与0g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。此项为阴性。
3.2体液免疫功能：抗体生成细胞检测试验中，0.5g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组小鼠溶血空斑数高于0g/kg·bw/d组，差异有统计学意义(P<0.05)；小鼠血清半数溶血值试验中，0.5g/kg·bw/d、1.0g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组小鼠血清半数溶血值(HC50)高于0g/kg·bw/d组，差异有统计学意义(P<0.05)。此项为阳性。
3.3单核-巨噬细胞功能：碳廓清试验中，0.5g/kg·bw/d、1.0g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组小鼠碳廓清吞噬指数a与0g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义(P>0.05)；鸡红细胞吞噬试验中，0.5g/kg·bw/d、1.0g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数与0g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。此项为阴性。
3.4NK细胞活性：小鼠NK细胞活性测定试验中，0.5g/kg·bw/d、1.0g/kg·bw/d、3.0g/kg·bw/d组小鼠NK细胞活性高于0g/kg·bw/d组，差异有统计学意义(P<0.05)。此项为阳性。
根据《保健食品检验与评价技术规范》之增强免疫力功能试验的结果判定，在本试验条件下上述中药组合物颗粒有增强免疫力功能。

Claims (10)

1.一种提高免疫力的中药组合物，由下述质量份的原料制成：铁皮石斛1～4份、西洋参2～4份、黄芪2～6份。
2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物由如下原料制成：铁皮石斛2份、西洋参3份、黄芪3份。
3.权利要求1或2所述中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
1)按所述质量份数比称取铁皮石斛、西洋参、黄芪三味药材，用水加热提取，提取完毕后，滤过，收集提取液；
2)将所述提取液减压浓缩成浸膏、再真空干燥成干浸膏，得到所述药物组合物。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述提取进行1～3次；每次提取时，所述水的加入量为所述药材总质量的6～11倍；每次提取的温度为80～100℃；每次提取的时间为1～3小时；所述过滤是通过80目筛。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述提取进行提取2次；每次提取时，所述水的加入量为所述药材总质量的9倍；每次提取的温度为90℃；每次提取的时间为2.5小时。
6.根据权利要求3-5中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述减压浓缩的条件为-0.080Mpa、55～65℃；
所述浸膏是60℃热测相对密度为1.20～1.30的浸膏。
所述真空干燥的条件是-0.08Mpa、60℃干燥至物料含水量≤6％。
7.一种提供免疫力的中药组合物颗粒剂，由下述质量份的原料和辅料制成：铁皮石斛1～4份、西洋参2～4份、黄芪2～6份、乳糖2～4份、D-甘露糖醇2～4份。
8.权利要求1或2所述的中药组合物在制备提高免疫力产品中的应用。
9.一种提高免疫力的产品，其活性成分包括权利要求1或2所述的中药组合物。
10.根据权利要求8所述的应用或根据权利要求9所述的产品，其特征在于：
所述提高免疫力具体体现在下述至少一方面：
1)提高细胞免疫功能；
2)提高体液免疫功能；
3)提高单核-巨噬细胞功能；
4)提高NK细胞活性；
所述产品为药物或保健品。
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