CN112176018A - 基于炙甘草制备甘草次酸及其衍生物的方法和用途 - Google Patents

基于炙甘草制备甘草次酸及其衍生物的方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于炙甘草制备甘草次酸及其衍生物的方法和用途，涉及药物化学技术领域。基于灸甘草制备甘草酸的具体为：微波法提取甘草酸，接着酶法分解甘草酸制备甘草次酸，产物得率高。然后利用上述甘草次酸与芪苷化合物复合制得甘草次酸衍生物，两者协同作用，使其具有更高的生物利用度和细胞吸收效率，对癌细胞具有明显的抑制作用；且具有更低的甘草次酸衍生物的药物用量以及不良反应率。整个反应过程，反应条件温和，在室温下均可反应，产物收率较高。

Description

基于炙甘草制备甘草次酸及其衍生物的方法和用途
技术领域
本发明属于药物化学技术领域，具体涉及基于炙甘草制备甘草次酸及其衍生物的方法和用途。
背景技术
甘草(Glycyrrhiza Root)始载于《神农本草经》，《伤寒论》的110个处方中有74个处方用到甘草，可见甘草是一味重要的传统中药。甘草性平味甘，具有和中缓急、润肺、解毒、祛痰、止咳、通经脉、利气血、调和诸药等功效，甘草的主要活性成分为甘草酸和甘草次酸。灸甘草，以生甘草用蜂蜜炒至甘草呈金黄色而得。为类圆形或椭圆形切片，表面红棕色或灰棕色，微有光泽，切面黄色至深黄色，形成层环明显，射线放射状。质稍粘，具焦香气，味甜。
甘草次酸又称甘草亭酸，它是由甘草酸水解得到的五环三萜类化合物，其中以18β-甘草次酸为主。研究表明，甘草次酸具有抗炎、抗溃疡、抗病毒、降血脂、保护心肌和治疗缺血性心肌炎、清除体内自由基、促进胰岛素吸收、抗癌及防癌等多种药理活性。甘草次酸在临床上的应用主要以其糖苷甘草酸的形式口服或注射给药，体内代谢为甘草次酸发挥药效。甘草酸口服给药后，依赖胃酸和肠道内的正常菌群水解代谢成甘草次酸后吸收入血发挥药效。甘草酸注射给药后，首先在肝细胞酶体中的β-D-葡萄苷酸酶代谢成3-单-葡萄苷酸甘草次酸，进一步在肝脏中代谢，并随胆汁排入肠内，形成肝肠循环，由肠内细菌代谢成甘草次酸，再吸收入血。
然而，由于甘草次酸的水溶性差，导致其生物利用度差，临床应用需要大剂量，而长期大量用药则会引起药源性高血压和水肿等不良反应。因此，对甘草次酸进行结构修饰，提高其生物利用度和药理活性，减少药物用量，避免不良反应是非常有必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于炙甘草制备甘草次酸及其衍生物的方法和用途，该甘草次酸的制备具有较高的产率，制得的甘草次酸衍生物生物活性高，对癌细胞具有较好的抑制作用，且不良反应率低。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
一种基于炙甘草制备甘草次酸的方法，包括：
微波法提取甘草酸，取粉碎的灸甘草，依次加乙醇、水，微波提取各两次；
酶法制备甘草次酸，取上述甘草酸，用醋酸缓冲溶液配制底物溶液，加入酶、乙酰左旋肉碱进行反应；接着加入氢氧化钠溶液终止反应；酸沉、离心、水洗、离心，接着乙醇溶解，加水静置，离心干燥、重结晶得到甘草次酸。本发明所用灸甘草由甘草炮制而得，相比于传统制备工序，提前用蜂蜜浸泡甘草，加工时间短，蜂蜜渗入效果较好，进一步增强灸甘草中甘草苷、甘草酸的稳定性及含量；提取甘草酸后利用酶法制备甘草次酸，反应条件温和、无污染、反应速率快，化学键选择性好；乙酰左旋肉碱是存在于体内的一种自然物质，可作用于酶的活性位点增强酶的活性；且可与底物的水解产物葡萄糖醛酸结合，降低产物抑制效应，进而提高了酶促反应，进一步提升酶的活性，促进甘草酸的转化效率，提高产率。
优选地，微波法提取甘草酸的实验条件具体为：微波功率320～350W，温度为60～70℃。
优选地，酶法制备甘草次酸的具体条件为：酶与底物的比例为1：1～3，温度为37～40℃，pH为5.0～5.5，反应5～6h；其中酶为β-葡萄糖醛酸苷酶，底物溶液浓度为2～3g/L，乙酰左旋肉碱的加入量为0.3～0.5mol/L。
本发明又一目的在于公开了基于灸甘草制备甘草次酸在甘草酸衍生物制备中应用。
一种甘草次酸衍生物，其结构式如以下通式I所示：
Figure BDA0002656598000000021
其中，R1、R2各自独立地表示OH或OCH3。本发明制得的甘草次酸衍生物，具有更高的生物利用度和细胞吸收效率，对癌细胞具有明显的抑制作用；并且对甘草次酸的生物活性无损害，因而具有更低的甘草次酸衍生物的药物用量以及不良反应率。
优选地，通式I选自以下化合物：
Figure BDA0002656598000000022
Figure BDA0002656598000000031
一种甘草次酸衍生物的制备方法，包括：
S1：将上述甘草次酸溶于无水乙醇中，加入锌粉，加热回流，依次滴入浓盐酸、无水乙醇；过滤、收集滤液冷至室温；加入蒸馏水、水浴加热、抽率、重结晶后得11-脱氧甘草次酸；
S2：取上述11-脱氧甘草次酸溶于DMF中，加入烯丙基溴、DBU；反应完全后浓缩、硅胶柱层析得到白色固体A；
S3：取芪苷化合物加入吡啶，搅拌、冰水浴条件下加入苯甲酰氯，反应后倒入水中，静置、洗涤、干燥，得到固体，溶于DMF中，冰浴条件下加入冰乙酸、水合肼，反应后加入乙酸乙酯，洗涤、干燥、过滤、旋蒸、柱层析分离，得固体溶于二氯甲烷中，加入三氯乙腈、DBU，搅拌、硅胶柱层析得到固体B；
S4：取固体B溶于无水二氯甲烷中，搅拌，加入上述白色固体A，冰盐浴条件下加入TMSOTf，搅拌反应、硅胶柱层析得到固体C；
S5：取固体C加入二氯甲烷/甲醇的混合溶液，调pH、搅拌；加入阳离子交换树脂，过滤，硅胶柱层析，得到固体溶于无水甲醇中，加入二氯化钯，搅拌、硅藻土助滤、硅胶柱层析，得到甘草次酸衍生物。甘草次酸在11位羰基被还原为亚甲基后醛固酮样副作用降低，采用改进的克莱门森方法，使用毒性小的乙醇作溶剂，用还原剂锌粉中未加汞，减少了污染，降低了对人的危害，且反应条件易于控制；接着利用化学方法对还原后的甘草次酸的C3位羟基进行修饰，得到甘草次酸衍生物，反应条件温和，在室温下均可反应，产物收率较高。
优选地，芪苷化合物为虎杖苷、土大黄苷和白皮杉醇-3′-O-葡萄糖苷中的一种。
优选地，步骤S2中11-脱氧甘草次酸与烯丙基溴、DBU的固液比为3.8～4g：0.9～1mL：0.5～0.6mL。
优选地，步骤S3中芪苷化合物与苯甲酰氯的固液比为1g：4～5mL；三氯乙腈、DBU体积比为12～13：1；冰乙酸与水合肼的体积比为1～1.2：2。
优选地，步骤S4中固体B与固体A的质量比为1：2～3；与TMSOTf的固液比为5～6g：0.1mL。
优选地，步骤S5中二氯甲烷/甲醇的混合溶液中二氯甲烷与甲醇的体积比为1：1～1.2，pH值为10～10.5。
优选地，步骤S2～S4中硅胶柱层析展开剂为：石油醚：乙酸乙酯＝3～4：1；步骤S5中硅胶柱层析展开剂为：氯仿：甲醇＝15～16：1。
本发明还公开了甘草次酸衍生物在制备抗癌药物中的用途。
相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：
利用酶法基于灸甘草制备甘草次酸，反应条件温和、无污染、反应速率快，化学键选择性好；酶解反应中加入乙酰左旋肉碱可提升酶的活性，促进酶促反应的发生，提高甘草次酸的产率。通过化学方法利用芪苷化合物改性甘草次酸得到的甘草次酸衍生物，具有更高的生物利用度和细胞吸收效率，对癌细胞具有明显的抑制作用；且具有更低的甘草次酸衍生物的药物用量以及不良反应率。整个反应过程，反应条件温和，在室温下均可反应，产物收率较高。
因此，本发明提供了一种基于炙甘草制备甘草次酸及其衍生物的方法和用途，该甘草次酸的制备具有较高的产率，制得的甘草次酸衍生物生物活性高，对癌细胞具有较好的抑制作用，且不良反应率低。
附图说明
图1为本发明试验例1中相对酶活性测试结果对比示意图；
图2为本发明试验例1中转化率和得率测试结果对比示意图；
图3为本发明试验例2中抗癌活性测试结果对比示意图；
图4为本发明试验例2中不同药物浓度细胞抑制率测试结果对比示意图。
具体实施方式
以下结合具体实施方式和附图对本发明的技术方案作进一步详细描述：
本发明实施例所用β-葡萄糖醛酸苷酶订购于今品化学技术(上海)有限公司。
实施例1：
基于灸甘草制备甘草次酸：
微波法提取甘草酸：称取灸甘草粉碎后加入95％的乙醇(固液比为1g：10mL)，置于微波装置中，温度60℃条件下，醇提两次，微波功率350W，每次30min，过滤药渣加水，浸泡5h后进行水提两次，每次微波提取30mi；将四次滤液合并后重结晶得甘草酸；
酶法制备甘草次酸，取上述甘草酸，用醋酸缓冲溶液配制2g/L的甘草酸溶液作为底物，按照酶与底物体积比为1：3加入β-葡萄糖醛酸苷酶，用50mM pH5.0乙酸-乙酸钠缓冲液调节溶液pH至5.0，40℃、250rpm转速下进行反应，接着加入0.5mol/L的乙酰左旋肉碱；6h后，加入氢氧化钠溶液终止反应；酸沉、离心，然后进行水洗至流出液的pH为5.0、离心，接着加入乙醇溶解，加水静置后，离心干燥，用40％乙醇重结晶得到甘草次酸，得率95.7％。
甘草次酸衍生物的制备(Ia的制备)：
S1：将甘草次酸溶于无水乙醇(固液比为0.3g：50mL)中，加入锌粉(与甘草次酸质量比为15：1)，加热回流，1h内滴入浓盐酸(与无水乙醇体积比为4：5)，之后滴加无水乙醇至反应液澄清，继续回流2h；过滤除去未反应的锌粉，收集滤液冷至室温；向滤液中加入蒸馏水至出现沉淀，水浴加热至沉淀完全溶解，放置24h后抽率得白色沉淀；接着用甲醇重结晶后得11-脱氧甘草次酸；
S2：取11-脱氧甘草次酸溶于DMF(固液比为1g：25mL)中，加入烯丙基溴和DBU(与11-脱氧甘草次酸的液固比为0.9mL：0.5mL：4g)；室温搅拌，TCL监测反应进程，反应完全后浓缩，经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)得到白色固体A；
S3：取虎杖苷于反应瓶中加入吡啶(固液比1：20)，室温搅拌后冰水浴条件下加入40mL苯甲酰氯(与虎杖苷的液固比为4mL：1g)，室温下搅拌32h；倒入水中，静置至固化后使用稀盐酸反复洗涤，接着水洗、干燥，得到固体，溶于DMF(固液比1g：7.5mL)中，冰浴至0℃，加入冰乙酸，缓慢滴加80％水合肼(与固体的液固比为0.3mL：0.6mL：1g)；室温下搅拌24h，TCL监测反应进程，反应结束后加入乙酸乙酯，用饱和NaCl溶液洗涤三次，取有机层，蒸馏水洗涤三次，收集有机层，用无水硫酸镁干燥，过滤，旋蒸除有机溶剂，柱层析分离(薄层层析用硅胶10～50μ，石油醚：乙酸乙酯＝3：1)，得固体溶于二氯甲烷(固液比3g：40mL)中，加入三氯乙腈2.5mL、DBU 200μL(与固体B的液固比5mL：0.4mL：3g)，室温搅拌22h，反应结束后，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)，得到固体B；
S4：取固体B溶于无水二氯甲烷(固液比1g：20mL)中，温室下搅拌，加入上述白色固体A(与固体B的质量比为2.4：1)；制备冰盐浴，将反应置于其中，继续搅拌，加入TMSOTf(与固体B的液固比为0.02mL：1g)，搅拌反应1h后取出至温室下继续搅拌；TCL监测反应进程，反应5h后取出，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)，得到固体C；
S5：取固体C加入5mL二氯甲烷/甲醇(1：1)的混合溶液(固液比0.07g：1mL)，室温搅拌，加入甲醇钠调pH至10，继续搅拌，TCL监测，24h后停止搅拌；加入阳离子交换树脂，过滤，除树脂后进行硅胶柱层析(氯仿：甲醇＝15：1)，得到固体溶于无水甲醇(固液比0.03g：1mL)中，加入二氯化钯(与固体质量比1：75)，室温下搅拌，TCL监测反应进程，24h后，硅藻土助滤，硅胶柱层析(氯仿：甲醇＝15：1)，得到甘草次酸衍生物，产率70％。
实施例2：
基于灸甘草制备甘草次酸与实施例1相同。
甘草次酸衍生物的制备(Ib的制备)与实施例1的不同之处在于：步骤S3中土大黄苷代替虎杖苷；产率65％。
实施例3：
基于灸甘草制备甘草次酸与实施例1相同。
甘草次酸衍生物的制备((Ic的制备))与实施例1的不同之处在于：步骤S3中白皮杉醇-3′-O-葡萄糖苷代替虎杖苷；产率62％。
对比例1：
基于灸甘草制备甘草次酸：
与实施例1不同之处在于：不添加乙酰左旋肉碱；得率90.3％。
对比例2：
基于灸甘草制备甘草次酸：与实施例1相同。
试验例1：
1、核磁共振表征(13C NMR)
称取3mg样品溶于氘代二甲亚砜(DMSO)中，配置成样品溶液置于核磁管中，放入核磁共振仪中进行测定。仪器运行条件：AVANCE III 400核磁共振仪(Bruker)。通过碳谱的数据分析目标产物中碳的类型及数量。
对实施例1、实施例2、实施例3中制备得到的甘草次酸衍生物进行核磁氢谱测试，表征结果如下：
实施例1(Ia)：产率70％，13C NMR(400MHz，DMSO)，相比于甘草次酸的碳谱多出来的信号峰包括：六元环相关δ：81.3，70.1，73.4，69.3，102.5，74.3，58.4；Ar(1)δ：154.7，101.8，132.7，95.4，150.3，98.7；Ar(2)δ：124.6，120.3(2C)，108.4(2C)，143.6；C＝C相关δ：116.8(2C)。
实施例2(Ib)：产率65％，13C NMR(400MHz，DMSO)，相比于甘草次酸的碳谱多出来的信号峰包括：六元环相关δ：82.4，68.3，71.5，68.1，103.4，75.9，60.1；Ar(1)δ：153.3，100.6，133.4，98.2，153.2，95.3；Ar(2)δ：126.4，119.3(2C)，109.4(2C)，138.6，50.4(O-C)；C＝C相关δ：121.3(2C)。
实施例3(Ic)：产率62％，13C NMR(400MHz，DMSO)，相比于甘草次酸的碳谱多出来的信号峰包括：六元环相关δ：80.6，69.3，72.2，67.4，100.5，73.8，56.9；Ar(1)δ：155.7，103.8，130.3，96.2，149.3，97.6；Ar(2)δ：122.6，117.3(2C)，105.4(2C)，140.7；C＝C相关δ：118.5(2C)。
2、酶活性检测
以pNPG为底物
β-葡萄糖醛酸苷酶催化无色的4-硝基苯基-β-D-葡萄糖醛酸苷(pNPG)的糖苷键水解，生成黄色的对硝基苯酚(pNP)。
将10μL 0.05mg/mL浓度的纯酶液，加入到40μL pNPG，进行四组处理，实验组1～3为加入乙酰左旋肉碱，浓度分别为0.5M、0.4M、0.3M，对照组为不添加；分别在40℃水浴中反应10min，加入20040μL 0.4M NaCO3溶液终止反应后，用酶标仪测定405nm的吸光度，将吸光度数值百分化处理，以对照组酶活性为100％，用相对酶活性来表征酶的活力。测试结果如图1所示，分析可知，实验组酶活性明显高于对照组，表明加入乙酰左旋肉碱对酶活性具有一定的增强作用。
3、基于灸甘草制备草甘次酸的得率分析
采用反相高效色谱法测定，仪器主要参数：岛津LC-10A，色谱柱：Shim-pack，VP-ODS(150mm×4.6mm)，检测器：SPD，检测波长：254nm，流动相为甲醇：蒸馏水(加入适量醋酸，pH＝2.85)＝81：19，进样量：10μL，流速：1mL/min，柱温箱：40℃，工作站：LCsolution；
底物转化率和产物得率的计算
根据绘制的标准曲线，换算液相检测结果，底物转化率(A)的计算公式如下：
A％＝(C0V0-C1V1)/C0V0×100％
其中，C0表示起始底物浓度，C1表示t小时后底物的浓度，V1表示反应结束的体积，V0表示反应开始的体积。
产物得率(B)的计算公式如下：
B％＝CtVt/M0×100％
其中，Ct表示t小时后产物的浓度，Vt表示反应结束的体积，M0表示产物的理论得率。
对实施例1、对比例1相应产物进行上述测试，结果如图2所示。从图中可以看出，实施例1中底物的转化效率可达98.7％，甘草次酸的得率为95.7％，对比例1中底物的转化效率为93.1％，的得率为90.3％；表明加入乙酰左旋肉碱促进酶活性的提升，进而提升底物的转化效率和甘草次酸的产出率。
试验例2：
抗癌活性研究
正常肝细胞培养
正常肝细胞chang liver，以含体积分数为10％的热灭活胎牛血清，100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的PRMI-1640培养基，在37℃、CO2浓度5％饱和温度条件下培养，24h后细胞贴壁生长，细胞每3～4天传代一次。取对数生长期的Bel-7402细胞制成2×105个/mL的细胞悬液，加入96孔培养板中，每孔200μL。待24h细胞贴壁生长后弃去培养液。
人肝癌细胞培养
选用人肝癌细胞Bel-7402，以含体积分数为10％的胎牛血清，100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的PRMI-1640培养基，在37℃、CO2浓度5％饱和温度条件下培养，24h后细胞贴壁生长，细胞每3～4天传代一次。取对数生长期的Bel-7402细胞制成2×105个/mL的细胞悬液，加入96孔培养板中，每孔200μL。待24h细胞贴壁生长后弃去培养液。
样品溶液制备
将样品用DMSO溶解后，用PRMI-1640培养基稀释成5％DMSO母液，经0.22μm过滤器除菌后备用。
用MTT法测定对肝癌细胞增殖的抑制活性
取对数生长期的Bel-7402细胞和正常肝细胞chang liver，接种于96孔板(密度为2×105个/mL)每孔200μL(边缘用无菌PBS填充，消除边缘效应)，设置药物浓度梯度进行药物干预24h，药物浓度分别为5、25、50、100、200μM，每孔浓度6个复孔，空白对照组加入相同体积的完全培养基，正常对照组选用与药物组相同浓度比例的DMSO，边缘均用相同体积PBS填充。次日，每孔加入10μL MTT(5mg/mL)，并保持培养基的原体积不变。在37℃和5％CO2细胞孵育箱培养4h后，弃去培养基，用150μL DMSO溶解细胞。待细胞内紫色结晶溶解后，利用酶标仪测定其570nm处吸光度(OD570)，计算细胞存活率，并判断细胞活力；本实验重复3次。按下列公式计算细胞生长抑制率：
生长抑制率(％)＝(1-实验组平均值/对照组平均值)×100％
对对比例2、实施例1～3制得的甘草次酸衍生物进行上述测试，结果如图3和图4所示。其中，图3为药物浓度为100μM时各处理组对细胞生长抑制情况，分析可知，实施例1～3对肝癌细胞生长的抑制率明显高于对比例2，表明实施例制得的甘草次酸衍生物具有较高的生物活性，对癌细胞具有较高的抑制作用；同时，实施例制得的甘草次酸衍生物对正常细胞的抑制作用低于对比例2的甘草次酸，表明其对正常细胞的毒副作用好于甘草次酸。
图4为实施例1制得的甘草次酸衍生物在不同药物浓度下对细胞生长的作用情况。从图中分析可得，浓度在5～200μM的范围内，甘草次酸衍生物对肝癌细胞的抑制作用趋势表现为浓度依赖性；随着药物浓度的增加，对肝癌细胞的抑制率逐渐上升；且对正常细胞的抑制作用也在逐渐增加。
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (9)

1.一种基于炙甘草制备甘草次酸的方法，包括：
微波法提取甘草酸，取粉碎的灸甘草，依次加乙醇、水，微波提取各两次；
酶法制备甘草次酸，取所述甘草酸，用醋酸缓冲溶液配制底物溶液，加入酶、乙酰左旋肉碱进行反应；接着加入氢氧化钠溶液终止反应；酸沉、离心、水洗、离心，接着乙醇溶解，加水静置，离心干燥、重结晶得到甘草次酸。
2.根据权利要求1所述的一种基于炙甘草制备甘草次酸的方法，其特征在于：所述酶法制备甘草次酸的具体条件为：酶与底物的比例为1：1～3，温度为37～40℃，pH为5.0～5.5，反应5～6h；其中酶为β-葡萄糖醛酸苷酶，底物溶液浓度为2～3g/L，乙酰左旋肉碱的加入量为0.3～0.5mol/L。
3.权利要求1或2所述制备方法制得的甘草次酸在制备甘草酸衍生物中应用。
4.一种甘草次酸衍生物，其结构式通式I所示：
Figure FDA0002656597990000011
其中，R1、R2各自独立地表示OH或OCH3。
5.根据权利要求4所述的一种甘草次酸衍生物，其特征在于：所述通式I选自以下化合物：
Figure FDA0002656597990000012
6.权利要求4或5所述的一种甘草次酸衍生物的制备方法，包括：
S1：将权利要求1所述的甘草次酸溶于无水乙醇中，加入锌粉，加热回流，依次滴入浓盐酸、无水乙醇；过滤、收集滤液冷至室温；加入蒸馏水、水浴加热、抽率、重结晶后得11-脱氧甘草次酸；
S2：取所述11-脱氧甘草次酸溶于DMF中，加入烯丙基溴、DBU；反应完全后浓缩、硅胶柱层析得到白色固体A；
S3：取芪苷化合物加入吡啶，搅拌、冰水浴条件下加入苯甲酰氯，反应后倒入水中，静置、洗涤、干燥，得到固体，溶于DMF中，冰浴条件下加入冰乙酸、水合肼，反应后加入乙酸乙酯，洗涤、干燥、过滤、旋蒸、柱层析分离，得固体溶于二氯甲烷中，加入三氯乙腈、DBU，搅拌、硅胶柱层析得到固体B；
S4：取固体B溶于无水二氯甲烷中，搅拌，加入所述白色固体A，冰盐浴条件下加入TMSOTf，搅拌反应、硅胶柱层析得到固体C；
S5：取固体C加入二氯甲烷/甲醇的混合溶液，调pH、搅拌；加入阳离子交换树脂，过滤，硅胶柱层析，得到固体溶于无水甲醇中，加入二氯化钯，搅拌、硅藻土助滤、硅胶柱层析，得到甘草次酸衍生物。
7.根据权利要求6所述的一种甘草次酸衍生物的制备方法，其特征在于：所述芪苷化合物为虎杖苷、土大黄苷和白皮杉醇-3′-O-葡萄糖苷中的一种。
8.根据权利要求6所述的一种甘草次酸衍生物的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中11-脱氧甘草次酸与烯丙基溴、DBU的固液比为3.8～4g：0.9～1mL：0.5～0.6mL；
所述步骤S3中芪苷化合物与苯甲酰氯的固液比为1g：4～5mL；三氯乙腈、DBU体积比为12～13：1；
所述步骤S4中固体B与固体A的质量比为1：2～3；与TMSOTf的固液比为5～6g：0.1mL；
所述步骤S5中二氯甲烷/甲醇的混合溶液中二氯甲烷与甲醇的体积比为1：1～1.2，pH值为10～10.5。
9.权利要求6～8中任一项所述的制备方法获得的甘草次酸衍生物在制备抗癌药物中的用途。
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