CN106883282A - 救必应酸衍生物在制备抗肿瘤的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了从中药救必应(Ilicis routundae cortex)中提取分离纯化得到救必应酸作为先导化合物，首先反应生成救必应酸酯，再与琥珀酸酐反应，生成琥珀酰基救必应酸酯，最后与氨基酸甲酯反应制备了一系列衍生物，经药理实验证明，琥珀酰基救必应酸酯的氨基酸衍生物具有抗肿瘤活性，对前列腺癌细胞、肺癌细胞、肝癌细胞、宫颈癌细胞、胃癌细胞具有抑制作用，衍生物对上述的肿瘤细胞的抑制作用优于母核化合物救必应酸。

Description

救必应酸衍生物在制备抗肿瘤的药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种从天然中药中获得的救必应酸为先导化合物，经过合成反应，制备得到一系列琥珀酰基救必应酸酯的氨基酸衍生物，确切的说是一种以中药提取化学成分为先导化合物，制备一系列衍生物，以抗肿瘤活性为指标进行结构修饰，属于医药领域。

背景技术

救必应酸是从中药救必应(Ilicis routundae cortex)中经提取、纯化、分离、碱降解而获得的一种五环三萜类化合物。我们的研究已经证明了救必应酸具有预防和治疗心脑血管疾病的药理活性(专利公开号：CN101856357A)，同时具有降血脂等药理作用(专利公开号：CN101849950A)；同时，本发明人研究证明了救必应酸氨基酸衍生物及其在制备抗肿瘤的药物中的应用(专利公开号：CN102391352B)；救必应酸酰化衍生物及其在制备抗肿瘤的药物中的应用(专利公开号：CN102127142B)；本发明人还研究证明了救必应酸与丁二酸酐反应生成的衍生物具有防治心血管疾病的作用(专利公开号：CN102140126B)。据文献报道一些五环三萜类化合物，如熊果酸、齐墩果酸等也具有较强的抗肿瘤活性(中国民族民间医药，2009年，12期，14-15)，因此，本发明的目的在于对救必应酸化合物进行结构改造，制备一系列衍生物，以期寻找对肿瘤细胞株生长有更强的抑制作用的新的五环三萜类衍生物。根据我国常见肿瘤发病疾病，选择了前列腺癌、肺癌、肝癌、宫颈癌、胃癌等肿瘤细胞，进行抗肿瘤活性实验，从而进行药效学评价。

在本发明完成之前，除本发明人研究外，还没有文献报道琥珀酰基救必应酸酯的氨基酸衍生物具有抑制肿瘤细胞生长的作用，也未发现琥珀酰基救必应酸酯的氨基酸衍生物在制备抗肿瘤药物应用的报道。本发明人为了寻找更有效的治疗抗肿瘤的新化合物，从而对救必应酸进行一系列的衍生化研究。

发明内容

本发明在于提供一种以救必应酸为先导化合物合成一系列具有抗肿瘤作用的救必应酸衍生物。

本发明的目的是通过以下技术方案得以实现：

一种具有抗肿瘤活性的救必应酸衍生物，其结构式如下：

其中：R₁为CH₃或CH₂CH₃，R₂为

如上所述的一种具有抗肿瘤活性的救必应酸衍生物由以下方法得到：

1、乙醇提取中药救必应(Ilicis routundae cortex)，经纯化、分离、碱降解而获得的化合物1(3β,19α,24-三羟基-乌苏烷型-12-烯-28-羧酸)，即救必应酸。

2、化合物1分别与碘甲烷、碘乙烷反应得3β,19α,24-三羟基- 乌苏烷型-12-烯-28-羧酸酯类化合物2-3。

其中R₁为甲基或乙基

3、化合物2-3与琥珀酸酐反应，得到琥珀酰基救必应酸酯类化合物4-5。

其中R₁为甲基或乙基

4、化合物4-5与氨基酸酯反应得到化合物6-21。

具体结构式见表1。

表1具体各化合物结构

以上所述的一种具有抗肿瘤活性的琥珀酰基救必应酸酯的氨基酸衍生物，可用于制备治疗肿瘤疾病的药物。

本发明的特点为：对从救必应中提取的救必应酸为先导化合物进行化学修饰，得到一系列与救必应酸结构相似的衍生物，经药理实验证明，具有对肿瘤细胞明显的抑制作用，且活性优于母体化合物救必应酸。

救必应酸及衍生物对肿瘤细胞的抑制作用，这些药理作用，通过以下药效学试验例得到证实。

细胞人宫颈癌细胞(Hela)、人小细胞肺癌(NCI-H446)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人胃癌细胞(SGC-7901)、人肝癌细胞(BEL-7402)、前列腺癌细胞(DU 145)等6种细胞系均购自吉林省肿瘤医院。

药品及试剂救必应酸及各衍生物为本实验室自制；四甲基偶氮唑盐(MTT)、青霉素G钾盐、硫酸链霉素、HEPES、DMSO均为Sigma公司产品；胰酶为Difco公司；新生牛血清(FBS)为北京元亨圣马生物技术研究所产品；RPMI-1640培养基为Hyclone公司产品。

仪器CK2TRC-3荧光倒置显微镜，日本OLYMPUS产品；D-63450-CO₂培养箱，德国Hera公司产品；FCANF129004酶标仪，澳大利亚TECAN公司产品。

实验方法MTT法6种人的肿瘤细胞株按常规方法培养传代，取对数生长期细胞用于实验。将细胞以1×10⁵个/mL浓度接种于96孔板(100μL/孔)，培养12h后，实验组加入救必应酸及各衍生物(或5-氟尿嘧啶作为阳性对照组)100μL/孔，阴性对照组加入培养液100μL/孔，每组各设4个平行孔，并分别设空白孔(即只加入药液和培养液，不加细胞)以调零。将救必应各衍生物组培养44h，加入5mg/mLMTT 20μL，继续培养4h，弃上清，每孔加入DMSO 150μL，混匀，酶标仪(λ＝492nm)测定吸光度(A₄₉₂)，利用SPSS统计软件，计算细胞死亡率，求取IC₅₀。

实验结果

结果表明，经SPSS软件统计,救必应酸及衍生物对Hela、NCI-H446、MCF-7、SGC-7901、BEL-7402、DU 145等6种肿瘤细胞均有不同程度的抑制作用，救必应酸及衍生物对6种肿瘤细胞的抑瘤率、IC₅₀和5-FU对各细胞的IC₅₀值详见表2和3。从表2和表3中可以看出，化合物9、10、11、13、17、18、19、21对肿瘤细胞的生长抑制作用较强。各衍生物对肿瘤细胞的抑制作用都大于救必应酸。除救必应酸外，其余个化合物的IC₅₀均小于阳性对照药5-FU，说明各衍生物均具有很强的抑制肿瘤细胞的作用。

表2浓度为10.00μg/mL各化合物对6种肿瘤细胞的抑瘤率

表3救必应酸各衍生物及5-FU对6种肿瘤细胞的IC₅₀(μg/mL)

为了支持本发明，举例说明本发明中化合物的制备过程，但并不意味这本发明就限于此，具体实施方法如下。

实例1化合物1的制备：

药材用70％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，加提取液体积2％药用活性炭，过滤，滤液浓缩至每1ml含1g药材；加含30％乙醇的1mol/l的氢氧化钠溶液20倍量，回流水解4小时，放冷，用盐酸调PH值为3，滤过，弃去水解液，滤饼用去离子水洗至中性，再用85％的乙醇加热至沸，加入药液体积的1％的药用活性炭，趁热滤过，滤液减压浓缩回收至无醇味、加水至每1ml含1g药材，放置，过滤，水洗，干燥，再重结晶2次，得化合物1。收率为4.2％。

实例2化合物2的制备：

化合物1取5g，溶解于DMF 150ml中，加入无水碳酸钾5g，搅拌30分钟，加入碘甲烷2.5ml，室温下搅拌6h，加入水650ml，搅拌，过滤，滤饼用水洗脱，并用乙醇重结晶3次，得化合物2。产率为96.5％。

实例3化合物3的制备：

化合物1取5g，溶解于DMF 150ml中，加入无水碳酸钾5g，搅拌30分钟，加入碘乙烷2.5ml，室温下搅拌6h，加入水650ml，搅拌，过滤，滤饼用水洗脱，并用乙醇重结晶3次，得化合物3。产率为97.8％。

实例4化合物4-5的制备：

化合物2或3取0.1mol，溶于二氯甲烷100ml中，加入DMAP0.05mol，三乙胺0.05mol，丁二酸酐0.5mol，回流反应，反应结束后，回收溶剂，用乙酸乙酯50ml溶解，依次用水、饱和食盐水进行洗涤，脱水，乙酸乙酯液回收溶剂，干燥，以石油醚-乙酸乙酯-甲酸＝5：5：0.1为展开剂进行硅胶柱分离，合并，回收溶剂，乙酸乙酯溶解，水、饱和食盐水洗脱，脱水，干燥得到化合物4或5，产率均不低于85％。

实例5化合物6-21的制备：

化合物4或5取0.7mmol，溶于二氯甲烷5ml中，加入氨基酸甲酯盐酸盐2.8mmol，DMAP 2.8mmol，将反应液冷却至0℃，再将EDCI2.8mmol溶于5ml二氯甲烷中，缓慢滴加到反应液中，0℃反应10min，室温反应3h，用二氯甲烷提取，用水，饱和食盐水分别洗涤3次，每次30ml，用无水硫酸钠脱水，过滤，滤液回收溶剂，干燥，硅胶柱分离，得到化合物6-21。各个化合物的产率不低于68％。

Claims (2)

1.一种救必应酸衍生物，其结构特征为：

其中：R₁为CH₃或CH₂CH₃，R₂为

2.根据权利要求1所述的救必应酸衍生物在制备抗肿瘤的药物中的应用，所述的肿瘤细胞为前列腺癌细胞、肺癌细胞、肝癌细胞、宫颈癌细胞、胃癌细胞。