CN112169008A - 一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,包括人源胶原蛋白的制备、蜂蜡乙醇溶液的制备、芦荟精华液的制备以及敷料的制备,其中,通过人源胶原蛋白的制备得到分子量小于3KDa的胶原蛋白,更利于人体吸收,促进伤口的愈合;通过蜂蜡乙醇溶液、芦荟精华液以及其他辅料的添加,使得敷料外层形成一层较薄的柔性膜,从而保证敷料与皮肤紧密贴合、起到保温的效果,同时,柔性膜内部形成具有缓冲作用的蜡层,进而起到缓慢释放有效成分的目的,避免小分子量的胶原蛋白被伤口处快速、大量吸收,造成伤口营养过盛,从而避免出现疤痕或伤口二次损伤的情况;同时,本发明的方法有效、充分的提取芦荟中的成分,避免药物的浪费。
Description
技术领域
本发明属于医疗或美容产品技术领域,具体涉及一种基于人源胶原蛋白的敷料的制备方法。
背景技术
胶原蛋白是生物高分子,动物结缔组织中的主要成分,也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白,占蛋白质总量的25%~30%,某些生物体甚至高达80%以上。胶原蛋白种类较多,常见类型为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅴ型和Ⅺ型。胶原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性,因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域获得广泛的应用。
皮炎、湿疹、敏感皮肤及大部分微创美容术后患者的皮肤屏障功能会出现不同程度的受损,因此需要建立新的皮肤屏障、以达到阻止外界细菌等微生物继续感染受损部分的目的。由于胶原蛋白是一种生物性高分子物质,可以补充皮肤各层所需的营养,使皮肤中胶原活性增强,有滋润皮肤、延缓衰老、美容、消皱等功效,因此常用于作为敷料。但目前市售的人源胶原蛋白敷料,由于分子量分布宽,分子量大,导致其吸收效果差,同时其加入的辅料与皮肤相容性差、导致伤口疤痕明显。
发明内容
针对以上现有技术存在的问题,本发明的目的在于提供一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,该方法制备得到的敷料分子量分布窄且分子量小、更利于人体吸收;同时,该敷料具有缓释作用、能极大的延长敷料的使用寿命,并且有效避免皮肤上营养成分浓度过高、伤口肌肉增生过快、出现疤痕的情况。
本发明的目的通过以下技术方案实现:
一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,其特征在于:包括人源胶原蛋白的制备、蜂蜡乙醇溶液的制备、芦荟精华液的制备以及敷料的制备;
其中,所述人源胶原蛋白的制备具体为:首先将分子量70~200KDa的人源胶原蛋白,溶解于pH为7.5的磷酸缓冲溶液中;然后在30~45℃的温度下进行充分搅拌溶解,配制成浓度为100~150g/L的胶原蛋白溶液;再将配制好的胶原蛋白溶液与混合水解酶均匀混合搅拌,保持温度在35~40℃、持续震荡5~8h;然后废水灭酶,降温至5~10℃,采用离心机进行离心分离,保留上清液;最后对上清液采用分子量保留值为3KDa的超滤膜分离,得到分子量小于3KDa的低分子量胶原蛋白溶液,将低分子量胶原蛋白溶液进行冷冻干燥、得到低分子量的胶原蛋白粉末;
所述蜂蜡乙醇溶液的制备具体为:将天然蜂蜡放入75%的乙醇溶液中,升温至50~60℃,过滤、去除杂质,得到蜂蜡乙醇溶液、备用;
所述芦荟精华液的制备具体为:首先取成熟的芦荟叶洗净去皮、切块、干燥、消毒,然后将处理后的芦荟颗粒采用粉碎机粉碎成芦荟浆,向芦荟浆中加入抗坏血酸(维生素C)、胡萝卜素,混合均匀;再加入无水乙醇,升温至70~80℃、回馏3~5h,冷凝至常温;然后采用高速分离机中进行固液分离,得到芦荟提取物的乙醇溶液与固体物质;最后将分离后的固体物质加入第一份纯化水中、进行煮沸并保温2~3h,过滤除去固形物,得到芦荟提取物的水溶液;将芦荟提取物的乙醇溶液与芦荟提取物的水溶液混合得到芦荟提取物混合溶液,备用;
所述敷料的制备具体为:首先将低分子量的胶原蛋白粉末加入第二份纯化水,升温至45~55℃,搅拌至完全溶解,得到胶原蛋白水溶液、备用;将海藻酸钠与羟乙基纤维素溶解于第三份纯化水中、得到辅助混合溶液备用;然后将蜂蜡乙醇溶液与芦荟提取物混合溶液混合,在500~600rpm的转速下搅拌10~15min、使其混合均匀,再向混合均匀后的溶液中加入胶原蛋白水溶液,保持温度在45~55℃、搅拌50~60min,然后加入辅助混合溶液,温度保持在45~55℃、搅拌30~40min,最后依次加入1,3-丙二醇、甘油、玻尿酸、茶多酚以及氯化钙,充分搅拌50~70min;最后进行减压浓缩、降温至常温,采用浓度为1%的醋酸溶液调节pH值至5~5.6,即得敷料精华液。
本发明通过混合水解酶以及超滤膜分离将大分子的人源胶原蛋白进行水解分离,从而得到小分子的人源胶原蛋白,其分子量分布窄、分子量小,更利于人体吸收,进而保证皮肤伤口的愈合。
但由于分子量小、导致的人源胶原蛋白能被人体快速吸收,大量胶原蛋白被皮肤伤口吸收,出现皮肤伤口处的营养成分浓度过高,从而导致伤口肌肉由于吸收大量营养物质而增生过快、导致皮肤出现疤痕或伤口由于营养过盛出现二次伤害。本发明通过将蜂蜡乙醇溶液、玻尿酸、氯化钙、1,3-丙二醇以及甘油等配合,通过其中成分的交联作用使得整个敷料形成一层较薄的柔性膜,此膜外部与皮肤接触贴合(由于为柔性膜、可根据伤口的形状而改变)、贴合紧密,从而保证伤口局部的温度不出现散失、进一步促进伤口对有效成分的吸收;同时,该柔性膜内部由于蜂蜡乙醇溶液的作用而形成一层蜡层、药物的有效成分(如人源胶原蛋白、芦荟等)被包裹在蜡层中,从而有效降低了有效成分向外渗透的量,并且,通过蜂蜡中含有极性基团(如游离脂肪酸、游离脂肪醇等)、对包裹在其中的药物起到一定的吸附作用,从而降低了有效成分向外的渗透速度;另外,通过海藻酸钠与羟乙基纤维素,增加了药物整体的粘稠性、降低了有效成分的流动性。
通过上述配方的配合,产生协同缓释的作用、保证人源胶原蛋白等有效成分不会因皮肤的吸收而全部释放,有效的保证了伤口处的药物有效成分的适量、确保有效成分的高效吸收(即伤口吸收的量确保其能快速愈合,既不会过量、也不会少量),从而在保证人源胶原蛋白等营养能被人体快速吸收的同时控制其吸收速率(即起到缓释作用),避免大量有效成分被伤口吸收出现营养过盛的情况、损害皮肤,进而确保有效成分充分、适量、高效的被人体吸收,吸收效果好的同时不会造成有效成分的浪费。
芦荟中不但含有脂溶性有效成分、还含有水溶性成分,一般的制备过程中仅能提取部分脂溶性有效成分或部分水溶性成分、而无法完全提取其全部有效成分。本发明对芦荟浆液通过与无水乙醇升温回馏再冷凝的方式结合芦荟分离液与纯化水煮沸保温的方式,从而有效确保芦荟的脂溶性成分与水溶性成分充分的提取,从而保证充分利用芦荟中的有效成分。并且,芦荟的脂溶性成分贴近蜂蜡的蜡层、水溶性成分被脂溶性成分包裹,从而有效推动脂溶性等有效成分的流动,提高保证芦荟有效成分的吸收速率。
作进一步优化,所述磷酸缓冲溶液为磷酸盐和磷酸的混合溶液,其中,所述磷酸盐的浓度为0.1~1mol/L。
作进一步优化,所述混合水解酶包括胶原酶1型与氨肽酶,其重量比为1:1~3。
作进一步优化,所述胶原蛋白溶液与混合水解酶的用量分别为100重量份以及0.1~0.5重量份。
作进一步优化,所述离心分离中离心机的转速为6000rpm,离心时间为13~18min。
作进一步优化,所述冷冻干燥温度为-35~-30℃,压力为-100~-98kpa,干燥时间为30~35h。
由于胶原蛋白分子量小、浓度低,干燥析出粉末时,若温度过高、胶原蛋白的活性将被破坏,若温度过低、胶原蛋白会由于水溶性好导致难以分离、从而导致无法制得粉末。本发明采用冷冻干燥,通过限定冷冻干燥的温度以及压力,从而确保胶原蛋白粉末析出的同时其活性也不会受到破坏。
作进一步优化,所述天然蜂蜡与所述75%的乙醇溶液的用量分别为20~30重量份以及100重量份。
作进一步优化,所述芦荟颗粒、抗坏血酸与胡萝卜素的用量分别为100重量份、0.1~0.5重量份以及0.1~0.5重量份。
芦荟中的有效成分容易氧化,若芦荟浆直接在空气中进行混合,在其有效成分会因氧化而失效。本发明通过胡萝卜素、抗坏血酸与芦荟浆混合,避免芦荟有效成分被氧化的同时也避免有效成分因辅助物质的加入而产生其他变化(如发生化学反应、失活等),从而保证芦荟有效成分的充分利用。
作进一步优化,所述无水乙醇的重量为芦荟颗粒的2~3倍。
作进一步优化,所述第一份纯化水的重量为固体物质重量的5~7倍。
作进一步优化,所述低分子量的胶原蛋白粉末与所述第二份纯化水的用量分别为1~5重量份以及100重量份。
作进一步优化,所述海藻酸钠、羟乙基纤维素与第三份纯化水的用量分别为0.05~0.1重量份、0.01~0.05重量份以及50重量份。
作进一步优化,所述蜂蜡乙醇溶液与芦荟提取物混合溶液的用量分别为100重量份以及50~60重量份。
作进一步优化,所述1,3-丙二醇、甘油、玻尿酸、氯化钙以及茶多酚的用量分别为5~10重量份、10~15重量份、0.1~0.5重量份、0.1~0.5重量份以及0.01~0.05重量份。
作进一步优化,所述氯化钙的粒径为0.1~0.5μm。
作进一步优化,所述减压浓缩的压力小于-90Kpa,减压浓缩后的含固量在30~50%。
通过减压浓缩以及pH值的调节,提高了胶原蛋白的浓度、使胶原更利于吸收,同时,除去了乙醇等刺激性杂质,避免伤口收到二次损伤。
作进一步优化,所述敷料精华液采用纯棉无纺布进行吸收后,敷于人体皮肤伤口处。
本发明具有如下技术效果:
人的皮肤只能吸收小分子量的人源胶原蛋白,本发明通过混合水解酶以及超膜过滤的方法,得到分子量分布窄且分子量小的人源胶原蛋白,使人体能够快速吸收,从而提高伤口愈合的速度;同时,采用辅助原料(如蜂蜡乙醇溶液、玻尿酸、氯化钙、1,3-丙二醇、甘油、芦荟提取物等),保证敷料与皮肤伤口的贴合度,起到保温、加速愈合的作用,并且,辅助原料在保证伤口快速吸收的同时起到缓释作用,避免伤口处出现营养过盛、从而出现疤痕或二次损伤的情况。
通过充分提取芦荟的脂溶性成分与水溶性成分,确保芦荟成分的有效提取,进而进一步促进有效成分被伤口吸收、加速伤口的愈合成、缩短伤口的恢复时间,避免原料的浪费。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中,对本发明具体的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1:
一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
S1:人源胶原蛋白的制备:
S101:将分子量70KDa的人源胶原蛋白,溶解于pH为7.5的磷酸缓冲溶液中,磷酸缓冲溶液为磷酸盐和磷酸的混合溶液,其中,磷酸盐的浓度为0.1mol/L;然后在30℃的温度下进行充分搅拌溶解,配制成浓度为100g/L的胶原蛋白溶液;
S102:将100重量份配制好的胶原蛋白溶液加入0.1重量份的胶原酶1型与氨肽酶组成的混合水解酶中、均匀混合搅拌,保持温度在35℃、持续震荡5h,其中胶原酶1型与氨肽酶的重量比为1:1;
S103:上述酶解结束后、废水灭酶,降温至5℃,采用转速为6000rpm的离心机进行离心分离、离心时间为13min,保留上清液;
S104:取上清液,对上清液采用分子量保留值为3KDa的超滤膜分离,得到分子量小于3KDa的低分子量胶原蛋白溶液,将低分子量胶原蛋白溶液进行干燥温度为-35℃、压力为-100kpa、干燥时间为30h的冷冻干燥,得到低分子量的胶原蛋白粉末。
S2:蜂蜡乙醇溶液的制备:
将20重量份的天然蜂蜡放入100重量份的75%的乙醇溶液中,升温至50℃,过滤、去除杂质,得到蜂蜡乙醇溶液、备用;
S3:芦荟精华液的制备:
S301:预处理:取成熟的芦荟叶洗净去皮、切块、干燥、紫外线消毒,得到芦荟颗粒;
S302:将100重量份预处理后的芦荟颗粒采用粉碎机粉碎成芦荟浆,向芦荟浆中加入0.1重量份的抗坏血酸(维生素C)以及0.1重量份的胡萝卜素,混合均匀;然后加入无水乙醇、无水乙醇的重量为芦荟颗粒的2倍(即200重量份),升温至70℃、回馏3h,冷凝至常温,然后采用高速分离机中进行固液分离,得到芦荟提取物的乙醇溶液与固体物质;
S303:将分离后的固体物质称重,加入第一份纯化水中、第一份纯化水的重量为固体物质的5倍,进行煮沸(即100℃左右)并保温2h,过滤除去固形物,得到芦荟提取物的水溶液;
S304:将芦荟提取物的乙醇溶液与芦荟提取物的水溶液混合得到芦荟提取物混合溶液、备用;
S4:敷料的制备:
S401:将S104中得到的1重量份的低分子量胶原蛋白粉末加入100重量份的第二份纯化水,升温至45℃,搅拌至完全溶解,得到胶原蛋白水溶液、备用;
S402:将0.05重量份的海藻酸钠与0.01重量份的羟乙基纤维素溶解于50重量份的第三份纯化水中、得到辅助混合溶液备用;
S403:将S2中得到的100重量份的蜂蜡乙醇溶液与S304中得到的50重量份的芦荟提取物混合溶液混合,在500rpm的转速下搅拌10min、使其混合均匀;然后加入S401中的胶原蛋白水溶液,保持温度在45℃、搅拌50min;再加入S402中的辅助混合溶液,温度保持在45℃、搅拌30min;
S404:向S403中的混合溶液中依次加入5重量份的1,3-丙二醇、10重量份的甘油、0.1重量份的玻尿酸、0.01重量份的茶多酚以及0.1重量份的氯化钙,其中氯化钙的粒径为0.1μm,充分搅拌50min;
S405:最后在压力小于-90Kpa的条件下进行减压浓缩,使得减压浓缩后的含固量在30%;降温至常温,采用浓度为1%的醋酸溶液调节pH值至5,即得敷料精华液。
敷料精华液采用纯棉无纺布进行吸收后、即得基于人源胶原蛋白的敷料,可敷于人体皮肤伤口处。
上述步骤中未提到转速的搅拌步骤均采用200~300rpm的转速进行搅拌。
实施例2:
一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
S1:人源胶原蛋白的制备:
S101:将分子量135KDa的人源胶原蛋白,溶解于pH为7.5的磷酸缓冲溶液中,磷酸缓冲溶液为磷酸盐和磷酸的混合溶液,其中,磷酸盐的浓度为0.6mol/L;然后在38℃的温度下进行充分搅拌溶解,配制成浓度为125g/L的胶原蛋白溶液;
S102:将100重量份配制好的胶原蛋白溶液加入0.3重量份的胶原酶1型与氨肽酶组成的混合水解酶中、均匀混合搅拌,保持温度在38℃、持续震荡5.5h,其中胶原酶1型与氨肽酶的重量比为1:2;
S103:上述酶解结束后、废水灭酶,降温至8℃,采用转速为6000rpm的离心机进行离心分离、离心时间为15min,保留上清液;
S104:取上清液,对上清液采用分子量保留值为3KDa的超滤膜分离,得到分子量小于3KDa的低分子量胶原蛋白溶液,将低分子量胶原蛋白溶液进行干燥温度为-33℃、压力为-99kpa、干燥时间为33h的冷冻干燥,得到低分子量的胶原蛋白粉末。
S2:蜂蜡乙醇溶液的制备:
将25重量份的天然蜂蜡放入100重量份的75%的乙醇溶液中,升温至55℃,过滤、去除杂质,得到蜂蜡乙醇溶液、备用;
S3:芦荟精华液的制备:
S301:预处理:取成熟的芦荟叶洗净去皮、切块、干燥、紫外线消毒,得到芦荟颗粒;
S302:将100重量份预处理后的芦荟颗粒采用粉碎机粉碎成芦荟浆,向芦荟浆中加入0.3重量份的抗坏血酸(维生素C)以及0.3重量份的胡萝卜素,混合均匀;然后加入无水乙醇、无水乙醇的重量为芦荟颗粒的2.5倍(即250重量份),升温至75℃、回馏4h,冷凝至常温,然后采用高速分离机中进行固液分离,得到芦荟提取物的乙醇溶液与固体物质;
S303:将分离后的固体物质称重,加入第一份纯化水中、第一份纯化水的重量为固体物质的6倍,进行煮沸(即100℃左右)并保温2.5h,过滤除去固形物,得到芦荟提取物的水溶液;
S304:将芦荟提取物的乙醇溶液与芦荟提取物的水溶液混合得到芦荟提取物混合溶液、备用;
S4:敷料的制备:
S401:将S104中得到的3重量份的低分子量胶原蛋白粉末加入100重量份的第二份纯化水,升温至50℃,搅拌至完全溶解,得到胶原蛋白水溶液、备用;
S402:将0.08重量份的海藻酸钠与0.03重量份的羟乙基纤维素溶解于50重量份的第三份纯化水中、得到辅助混合溶液备用;
S403:将S2中得到的100重量份的蜂蜡乙醇溶液与S304中得到的55重量份的芦荟提取物混合溶液混合,在550rpm的转速下搅拌13min、使其混合均匀;然后加入S401中的胶原蛋白水溶液,保持温度在50℃、搅拌55min;再加入S402中的辅助混合溶液,温度保持在50℃、搅拌35min;
S404:向S403中的混合溶液中依次加入8重量份的1,3-丙二醇、12重量份的甘油、0.3重量份的玻尿酸、0.03重量份的茶多酚以及0.3重量份的氯化钙,其中氯化钙的粒径为0.3μm,充分搅拌60min;
S405:最后在压力小于-90Kpa的条件下进行减压浓缩,使得减压浓缩后的含固量在40%;降温至常温,采用浓度为1%的醋酸溶液调节pH值至5.3,即得敷料精华液。
敷料精华液采用纯棉无纺布进行吸收后、即得基于人源胶原蛋白的敷料,可敷于人体皮肤伤口处。
上述步骤中未提到转速的搅拌步骤均采用200~300rpm的转速进行搅拌。
实施例3:
一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
S1:人源胶原蛋白的制备:
S101:将分子量200KDa的人源胶原蛋白,溶解于pH为7.5的磷酸缓冲溶液中,磷酸缓冲溶液为磷酸盐和磷酸的混合溶液,其中,磷酸盐的浓度为1mol/L;然后在45℃的温度下进行充分搅拌溶解,配制成浓度为150g/L的胶原蛋白溶液;
S102:将100重量份配制好的胶原蛋白溶液加入0.5重量份的胶原酶1型与氨肽酶组成的混合水解酶中、均匀混合搅拌,保持温度在40℃、持续震荡8h,其中胶原酶1型与氨肽酶的重量比为1:3;
S103:上述酶解结束后、废水灭酶,降温至10℃,采用转速为6000rpm的离心机进行离心分离、离心时间为18min,保留上清液;
S104:取上清液,对上清液采用分子量保留值为3KDa的超滤膜分离,得到分子量小于3KDa的低分子量胶原蛋白溶液,将低分子量胶原蛋白溶液进行干燥温度为-30℃、压力为-98kpa、干燥时间为35h的冷冻干燥,得到低分子量的胶原蛋白粉末。
S2:蜂蜡乙醇溶液的制备:
将30重量份的天然蜂蜡放入100重量份的75%的乙醇溶液中,升温至60℃,过滤、去除杂质,得到蜂蜡乙醇溶液、备用;
S3:芦荟精华液的制备:
S301:预处理:取成熟的芦荟叶洗净去皮、切块、干燥、紫外线消毒,得到芦荟颗粒;
S302:将100重量份预处理后的芦荟颗粒采用粉碎机粉碎成芦荟浆,向芦荟浆中加入0.5重量份的抗坏血酸(维生素C)以及0.5重量份的胡萝卜素,混合均匀;然后加入无水乙醇、无水乙醇的重量为芦荟颗粒的3倍(即300重量份),升温至80℃、回馏5h,冷凝至常温,然后采用高速分离机中进行固液分离,得到芦荟提取物的乙醇溶液与固体物质;
S303:将分离后的固体物质称重,加入第一份纯化水中、第一份纯化水的重量为固体物质的7倍,进行煮沸(即100℃左右)并保温3h,过滤除去固形物,得到芦荟提取物的水溶液;
S304:将芦荟提取物的乙醇溶液与芦荟提取物的水溶液混合得到芦荟提取物混合溶液、备用;
S4:敷料的制备:
S401:将S104中得到的5重量份的低分子量胶原蛋白粉末加入100重量份的第二份纯化水,升温至55℃,搅拌至完全溶解,得到胶原蛋白水溶液、备用;
S402:将0.1重量份的海藻酸钠与0.05重量份的羟乙基纤维素溶解于50重量份的第三份纯化水中、得到辅助混合溶液备用;
S403:将S2中得到的100重量份的蜂蜡乙醇溶液与S304中得到的60重量份的芦荟提取物混合溶液混合,在600rpm的转速下搅拌15min、使其混合均匀;然后加入S401中的胶原蛋白水溶液,保持温度在55℃、搅拌60min;再加入S402中的辅助混合溶液,温度保持在55℃、搅拌40min;
S404:向S403中的混合溶液中依次加入10重量份的1,3-丙二醇、15重量份的甘油、0.5重量份的玻尿酸、0.05重量份的茶多酚以及0.5重量份的氯化钙,其中氯化钙的粒径为0.5μm,充分搅拌70min;
S405:最后在压力小于-90Kpa的条件下进行减压浓缩,使得减压浓缩后的含固量在50%;降温至常温,采用浓度为1%的醋酸溶液调节pH值至5.6,即得敷料精华液。
敷料精华液采用纯棉无纺布进行吸收后、即得基于人源胶原蛋白的敷料,可敷于人体皮肤伤口处。
上述步骤中未提到转速的搅拌步骤均采用200~300rpm的转速进行搅拌。对比例1:
采用分子量为70~140KDa与分子量为3~20KDa的重组人源胶原蛋白与保湿剂(透明质酸钠、甘油、神经酰胺、NL-50中的任意一种或多种)、增稠剂(羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、黄原胶、瓜尔豆胶中的任意一种或多种)、防腐剂(即山梨酸、苯甲酸钠、乳酸钠、尼泊金酯中的任意一种或多种)按重量百分比0.05~0.2%、0.02%~7%、0.1~1.0%、0.1~2%,以及其余量为水(参见专利CN 106902381B),其中分子量为3~20KDa的人源胶原蛋白和分子量为70~140KDa的重组人源胶原蛋白按照重量比1:1~5组成;得到敷料精华液,敷料精华液采用纯棉无纺布进行吸收后、即得基于人源胶原蛋白的敷料。
对比例2:
采用本发明人源胶原蛋白的制备步骤制得的分子量小于3KDa的低分子量胶原蛋白与保湿剂(透明质酸钠、甘油、神经酰胺、NL-50中的任意一种或多种)、增稠剂(羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、黄原胶、瓜尔豆胶中的任意一种或多种)、防腐剂(即山梨酸、苯甲酸钠、乳酸钠、尼泊金酯中的任意一种或多种)按重量百分比0.05~0.2%、0.02%~7%、0.1~1.0%、0.1~2%,其余量为水;得到敷料精华液,敷料精华液采用纯棉无纺布进行吸收后、即得基于人源胶原蛋白的敷料。
对比例3:
采用本发明人源胶原蛋白的制备步骤制得的分子量小于3KDa的低分子量胶原蛋白与保湿剂(透明质酸钠、甘油、神经酰胺、NL-50中的任意一种或多种)、增稠剂(羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、黄原胶、瓜尔豆胶中的任意一种或多种)、防腐剂(即山梨酸、苯甲酸钠、乳酸钠、尼泊金酯中的任意一种或多种)按重量百分比0.05~0.2%、0.02%~7%、0.1~1.0%、0.1~2%,以及适量的芦荟提取液(采用常规提取方式提取),其余量为水;得到敷料精华液,敷料精华液采用纯棉无纺布进行吸收后、即得基于人源胶原蛋白的敷料。
实验1:伤口恢复实验
选取20个伤口部位一致且手上程度相同的伤员分别进行本发明实施例1与对照组1、对照组2以及对照组3的伤口恢复日期统计(20个伤员分为5组,每组4人,分别采用实施例1与对照组1、对照组2以及对照组3的敷料),统计数据如下:
伤员组数 | 对比例1(天数) | 对比例2(天数) | 对比例3(天数) | 实施例1(天数) |
1 | 13 | 9 | 9 | 6 |
2 | 11 | 10 | 9 | 5 |
3 | 13 | 9 | 9 | 6 |
4 | 12 | 9 | 8 | 5 |
5 | 12 | 9 | 9 | 5 |
从上表看出,本发明处理伤口恢复日期为5.4天左右,对比例1伤口恢复日期为12.2天左右,对比例2伤口恢复日期为9.2天左右,对比例3伤口恢复日期为8.8天左右,证明本发明敷料恢复伤口的时间明显缩短,同时证明小分子量的人源胶原蛋白被人体吸收的速度更快。
实验2:缓释效果测试
采用无纺布浸润本发明实施例2与对比例1、对比例2、对比例3中等量的敷料精华液,敷于同类型、同等程度的伤口上,每隔一天测试其上的残留药物,测试效果如下:
测试天数 | 对比例1(%) | 对比例2(%) | 对比例3(%) | 实施例2(%) |
1 | 95 | 94 | 96 | 99 |
2 | 86 | 87 | 87 | 90 |
3 | 78 | 76 | 78 | 82 |
4 | 66 | 64 | 67 | 75 |
5 | 57 | 58 | 56 | 69 |
6 | 43 | 45 | 44 | 64 |
7 | 35 | 36 | 36 | 60 |
8 | 26 | 25 | 27 | 56 |
9 | 12 | 13 | 14 | 52 |
10 | 8 | 9 | 8 | 48 |
11 | 3 | 5 | 4 | 45 |
从上表可以看出,本发明具有明显的缓释效果,其药物保留率更高、使用寿命更长。
实验3:贴合度测试
将本发明实施例3中的敷料与对比例1、对比例2以及对比例3中的敷料在同一外部环境(即外部环境温度、湿度等均一致)下敷贴于同一类型、同一损伤程度的伤口,同时在伤口边缘处设置微型温度传感器(温度传感器不影响伤口),每隔一小时监测记录一次温度,温度记录表如下:
测试时间(h) | 对比例1(℃) | 对比例2(℃) | 对比例3(℃) | 实施例3(℃) |
1 | 37.1 | 36.9 | 37 | 37.8 |
2 | 36.7 | 36.7 | 36.7 | 37.9 |
3 | 37.1 | 37.1 | 36.8 | 38.2 |
4 | 36.9 | 36.7 | 37 | 38.0 |
5 | 36.8 | 36.8 | 36.9 | 37.9 |
6 | 36.9 | 37.1 | 37.1 | 37.8 |
7 | 37 | 36.9 | 36.5 | 38.0 |
8 | 36.9 | 37 | 36.7 | 38.1 |
9 | 37 | 37.1 | 36.9 | 37.8 |
10 | 37.1 | 36.8 | 37 | 37.9 |
从上表可已看出,本方案敷料的敷于伤口,由于贴合度更好、因此能将温度较好的锁在伤口处,因此伤口处的温度更高,相较于对比例的敷料,本发明的敷料温度高1℃左右,其进一步促进伤口对于药物的吸收以及伤口的愈合。
实验4:无菌检测
对本发明实施例1中的敷料作为样品敷料进行无菌检测,具体为无菌拆开包装,分别接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中,按照《中华人民共和国药典》(2010年版)三部附录ⅫA规定的方法测定,结果显示无菌。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (10)
1.一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,其特征在于:包括人源胶原蛋白的制备、蜂蜡乙醇溶液的制备、芦荟精华液的制备以及敷料的制备;
其中,所述人源胶原蛋白的制备具体为:首先将分子量70~200KDa的人源胶原蛋白,溶解于pH为7.5的磷酸缓冲溶液中;然后在30~45℃的温度下进行充分搅拌溶解,配制成浓度为100~150g/L的胶原蛋白溶液;再将配制好的胶原蛋白溶液与混合水解酶均匀混合搅拌,保持温度在35~40℃、持续震荡5~8h;然后废水灭酶,降温至5~10℃,采用离心机进行离心分离,保留上清液;最后对上清液采用分子量保留值为3KDa的超滤膜分离,得到分子量小于3KDa的低分子量胶原蛋白溶液,将低分子量胶原蛋白溶液进行冷冻干燥、得到低分子量的胶原蛋白粉末;
所述蜂蜡乙醇溶液的制备具体为:将天然蜂蜡放入75%的乙醇溶液中,升温至50~60℃,过滤、去除杂质,得到蜂蜡乙醇溶液、备用;
所述芦荟精华液的制备具体为:首先取成熟的芦荟叶洗净去皮、切块、干燥、消毒,然后将处理后的芦荟颗粒采用粉碎机粉碎成芦荟浆,向芦荟浆中加入抗坏血酸(维生素C)、胡萝卜素,混合均匀;再加入无水乙醇,升温至70~80℃、回馏3~5h,冷凝至常温;然后采用高速分离机中进行固液分离,得到芦荟提取物的乙醇溶液与固体物质;最后将分离后的固体物质加入第一份纯化水中、进行煮沸并保温2~3h,过滤除去固形物,得到芦荟提取物的水溶液;将芦荟提取物的乙醇溶液与芦荟提取物的水溶液混合得到芦荟提取物混合溶液,备用;
所述敷料的制备具体为:首先将低分子量的胶原蛋白粉末加入第二份纯化水,升温至45~55℃,搅拌至完全溶解,得到胶原蛋白水溶液、备用;将海藻酸钠与羟乙基纤维素溶解于第三份纯化水中、得到辅助混合溶液备用;然后将蜂蜡乙醇溶液与芦荟提取物混合溶液混合,在500~600rpm的转速下搅拌10~15min、使其混合均匀,再向混合均匀后的溶液中加入胶原蛋白水溶液,保持温度在45~55℃、搅拌50~60min,然后加入辅助混合溶液,温度保持在45~55℃、搅拌30~40min,最后依次加入1,3-丙二醇、甘油、玻尿酸、茶多酚以及氯化钙,充分搅拌50~70min;最后进行减压浓缩、降温至常温,采用浓度为1%的醋酸溶液调节pH值至5~5.6,即得敷料精华液。
2.根据权利要求1所述的一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,其特征在于:所述混合水解酶包括胶原酶1型与氨肽酶,其重量比可为1:1~3。
3.根据权利要求1所述的一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,其特征在于:所述胶原蛋白溶液与混合水解酶的用量分别为100重量份以及0.1~0.5重量份。
4.根据权利要求1所述的一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,其特征在于:所述离心分离中离心机的转速可为6000rpm,离心时间可为13~18min。
5.根据权利要求1所述的一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,其特征在于:所述天然蜂蜡与所述75%的乙醇溶液的用量分别为20~30重量份以及100重量份。
6.根据权利要求1所述的一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,其特征在于:所述无水乙醇的重量可为芦荟颗粒的2~3倍。
7.根据权利要求1所述的一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,其特征在于:所述第一份纯化水的重量可为固体物质重量的5~7倍。
8.根据权利要求1所述的一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,其特征在于:所述低分子量的胶原蛋白粉末与所述第二份纯化水的用量分别为1~5重量份以及100重量份。
9.根据权利要求1所述的一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,其特征在于:所述蜂蜡乙醇溶液与芦荟提取物混合溶液的用量分别为100重量份以及50~60重量份。
10.根据权利要求1所述的一种基于人源胶原蛋白的医用敷料的制备方法,其特征在于:所述敷料精华液可采用纯棉无纺布进行吸收后,敷于人体皮肤伤口处。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20210105 |