CN112168899B - 抑制冠状病毒3cl蛋白水解酶的藤茶提取物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及药学领域，特别是涉及一种可抑制新型冠状病毒3CL蛋白水解酶或SARS冠状病毒3CL蛋白水解酶的藤茶提取物。所述藤茶提取物为藤茶水提物、藤茶醇提物或藤茶黄酮精提物。本发明的藤茶提取物可用于治疗新型冠状病毒或SARS冠状病毒感染。

Description

抑制冠状病毒3CL蛋白水解酶的藤茶提取物及其用途
技术领域
本发明属于药学领域，特别是涉及一种藤茶提取物及其医药用途。
背景技术
由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的病毒性肺炎(COVID-19)已成为国际关注的突发公共卫生事件。冠状病毒是一种包被的、非节段的、正股的单链RNA病毒。该病毒一般通过呼吸道分泌物排出，可通过飞沫传播，也可通过接触传播等。
在病毒感染宿主的过程中，冠状病毒中的3CLpro(又称为Mpro)是一类半胱氨酸水解酶，能够在病毒复制过程中裂解多聚蛋白，生成多个有活性的功能蛋白，在病毒的转录和复制中起重要作用。因此，3CLpro可作为抗冠状病毒的关键安全的治疗靶标；同时，基于其序列高度保守，可作为鉴定具有广谱抗病毒活性化合物的潜在靶点，对于抑制冠状病毒的预防和治疗具有重要价值与意义。
目前对于冠状病毒感染的预防和治疗临床尚无特效药。因此，以冠状病毒3CLpro为靶标，寻找一种安全高效，且对冠状病毒3CLpro水解活性有显著抑制的中草药或其活性部位或精细组分，将对于冠状病毒的预防及辅助治疗具有重要意义。
发明内容
本发明首先提供了一种可抑制新型冠状病毒3CL蛋白水解酶或SARS冠状病毒3CL蛋白水解酶的藤茶水提物，所述藤茶水提物可由如下方法制得：将藤茶粉碎，按料液比1：10用水浸泡，30～50℃下超声30分钟，过滤得粗提液，重复提取三次后合并粗提液，再以12000r/min离心20分钟，取上清液，真空减压、浓缩、干燥。
本发明的第二方面是提供了上述藤茶水提物在制备可抑制新型冠状病毒3CL蛋白水解酶或SARS冠状病毒3CL蛋白水解酶的药物中的应用。
本发明的第三方面是提供了上述藤茶水提物在制备可抑制新型冠状病毒3CL蛋白水解酶或SARS冠状病毒3CL蛋白水解酶的饮料或口服液或消毒洗液制品中的应用，所述消毒洗液制品选自洗手液、消毒液、消毒凝胶、洗衣液、沐浴液、洗发剂、洗洁精、清洁剂、漱口液或消毒湿纸巾。
本发明的第四方面是提供了一种可抑制新型冠状病毒3CL蛋白水解酶或SARS冠状病毒3CL蛋白水解酶的藤茶醇提物，所述藤茶醇提物可由如下方法制得：将藤茶粉碎，按料液比1：10用50～95％乙醇浸泡，80℃下回流提取30分钟，过滤得提取液，重复提取三次后合并提取液，再以12000r/min离心20分钟，取上清液，真空减压、浓缩、干燥。
本发明的第五方面是提供了上述藤茶醇提物在制备可抑制新型冠状病毒3CL蛋白水解酶或SARS冠状病毒3CL蛋白水解酶的药物中的应用。
本发明的第六方面是提供了上述藤茶醇提物在制备可抑制新型冠状病毒3CL蛋白水解酶或SARS冠状病毒3CL蛋白水解酶的饮料或口服液或消毒洗液制品中的应用，所述消毒洗液制品选自洗手液、消毒液、消毒凝胶、洗衣液、沐浴液、洗发剂、洗洁精、清洁剂、漱口液或消毒湿纸巾。
本发明的第七方面是提供了一种可抑制新型冠状病毒3CL蛋白水解酶或SARS冠状病毒3CL蛋白水解酶的藤茶黄酮精提物，所述藤茶黄酮精提物的总黄酮含量为30～95％wt。
在一优选例中，所述藤茶黄酮精提物可由如下方法制得：将藤茶粉碎，按料液比1：10用水浸泡，30～50℃下超声30分钟，过滤得粗提液，重复提取三次后合并粗提液，再以12000r/min离心20分钟，取上清液，真空减压、浓缩、干燥，得藤茶水提物；以反相液相色谱法对藤茶水提物进行梯度洗脱，收集10～12.5分钟或12.5～15分钟或15～17.5分钟的馏分，冷冻干燥。
在另一优选例中，当所述藤茶黄酮精提物为10～12.5分钟的馏分时，所述藤茶黄酮精提物含二氢杨梅素、异二氢杨梅素和杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷；当所述藤茶黄酮精提物为12.5～15分钟的馏分时，所述藤茶黄酮精提物含杨梅素、二氢槲皮素、槲皮素-3-O-β-D-木糖苷和槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷；当所述藤茶黄酮精提物为15～17.5分钟的馏分时，所述藤茶黄酮精提物含杨梅苷、根皮素和山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。
在另一优选例中，，所述反相液相色谱法的反应物质与条件为：流动相由0.1％甲酸水和乙腈组成，采用梯度洗脱程序，流速为0.4mL/min，色谱柱温度40℃，进样体积为3μL，固定相为C18色谱柱。
本发明的第八方面是提供了上述藤茶黄酮精提物在制备可抑制新型冠状病毒3CL蛋白水解酶或SARS冠状病毒3CL蛋白水解酶的药物中的应用。
本发明还提供了上述藤茶黄酮精提物在制备可抑制新型冠状病毒3CL蛋白水解酶或SARS冠状病毒3CL蛋白水解酶的饮料或口服液或消毒洗液制品中的应用，所述消毒洗液制品选自洗手液、消毒液、消毒凝胶、洗衣液、沐浴液、洗发剂、洗洁精、清洁剂、漱口液或消毒湿纸巾。
针对当前抗冠状病毒药物研发现状，本申请的发明人以3CLpro为靶点，开展了中草药及其化学成分抑制3CLpro的规模化筛选，其中藤茶水提物及其醇提物对多种冠状病毒3CLpro水解活性均有显著的抑制作用。在此基础上，本发明提供了一种抑制冠状病毒3CL水解酶的藤茶活性部位的制备工艺及其应用，通过谱效结合导向下的活性部位发现策略，进一步锁定了藤茶抑制3CLpro的活性部位(藤茶黄酮富集部位)，并确定了其制备工艺。此外，还将其应用于饮品及口服液、漱口水、消毒湿巾、消毒液及外用洗液中，可用于冠状病毒的消杀和日常预防。
藤茶是药食同源的植物，民间已有数百年的饮用历史，其具有清热利湿，平肝降压，活血通络的功效，可用于痢疾，泄泻，小便淋痛，高血压，头昏目胀，跌打损伤。藤茶中富含黄酮类化合物，如二氢杨梅素、异二氢杨梅素、杨梅素等。现代医学研究显示藤茶具有多种药理活性，如调节免疫、抗菌抗炎、降血压、降血脂、改善胰岛素抵抗作用、抗肿瘤、抗血栓、抑菌作用等，但其对于冠状病毒3CLpro的抑制活性及抗冠状病毒能力尚未报道。
本发明在前期高通量筛选结果基础上，分别绘制了藤茶水提物、藤茶醇提物对冠状病毒3CLpro的抑制曲线，拟合了其IC50值，明确其对3CLpro水解活性的强效抑制能力。
进一步地，以藤茶水提物为例，利用C18色谱柱，在反相液相色谱上构建了梯度洗脱方法，以每2.5分钟收集一次馏分，连续收集了不同时间段的藤茶提取物的精细馏分。将上述收集的不同时间段的藤茶水提物馏分进行冷冻干燥处理，复溶后，然后测定各馏分对冠状病毒3CLpro水解活性的抑制能力，并绘制相应的化学指纹谱-3CLpro抑制效应谱，进而可得到藤茶抑制冠状病毒3CLpro的活性部位。
发明人采用液质联用技术，将上述藤茶活性部位进行了成分分析。结果表明，本发明的藤茶活性部位为藤茶黄酮富集部位，其主要成分为二氢杨梅素、异二氢杨梅素体、杨梅素、杨梅苷及二氢槲皮素等多酚类黄酮，且总黄酮含量为30％-95％。
本发明的藤茶水提物及其活性部位可通过适量藤茶热水冲泡或沸水煎煮易得，用作日常茶饮，能抑制消化道中冠状病毒3CLpro，进而用于冠状病毒的预防和辅助治疗。此外，其还可用作厨具家具的清洁消毒，从而抑制附着在不同物体表面的冠状病毒3CLpro，以预防冠状病毒的接触传播，相比常用消毒剂洗涤剂，温和无刺激，且安全环保。
优选地，本发明还提供一种藤茶饮料的制备工艺，可改善藤茶口感，掩盖藤茶的苦涩，且卫生便携，以满足不同人群的需求。
进一步优选，所述藤茶醇提物及其活性部位还可做本草精华添加至各种外用洗剂中，相比常用洗涤剂或消毒剂，其具备阻碍冠状病毒复制的活性成分，刺激性小，安全无毒，可在低剂量下高效抑制冠状病毒3CLpro。
优选地，所述外用洗剂包括但不限于洗手液，消毒液，洗衣液，沐浴液，洗发液，洗洁精、清洁剂、漱口液和消毒湿纸巾等。所述外用洗剂的主要有效成分为藤茶水/醇提物及其活性部位，其余组分为各种安全合适的添加剂，包括表面活性剂，保湿剂，螯合剂，pH调节剂，增稠剂，溶剂，香料，起泡剂，荧光剂等。
此外，所述藤茶水/醇提物及其活性部位还可与任意一种或多种抗冠状病毒活性成分以不同比例组合，作为主要活性成分添加于各种外用洗剂中。
本发明具有以下优点：
1.活性部位及其主要成分明确：所述藤茶活性部位为藤茶黄酮富集部位，其主要成分为二氢杨梅素、异二氢杨梅素、杨梅素、杨梅苷及二氢槲皮素等多酚类黄酮，且总黄酮含量为30～95％wt。
2.原料廉价易得，工艺稳定可靠：所述藤茶水/醇提物及其活性部位可通过回流提取或超声提取获得，且采用的反相液相色谱柱效高、分离能力强，操作简单，工艺稳定可靠。
3.产品形式多样：藤茶提取物及其活性部位除了作为日常茶饮外，还可作为本草精华或与任意一种或多种抗冠状病毒活性成分以不同比例组合，添加在多种外用洗剂中，其中包括但不限于洗手液，消毒液，洗衣液，沐浴液，洗发液，洗洁精、全能清洁剂、漱口液和消毒湿纸巾。可为生活不同物品进行不同程度的清洁灭菌，满足不同人群和生产、生活各领域需求。
4.安全性高且能强效抑制冠状病毒3CLpro：作为药食同源的草药，藤茶安全性高，其活性部位的多元成分协同作用，不易产生耐药，毒副作用小，亦可作保健茶长期饮用。此外，藤茶活性部位可有效减少冠状病毒的接触传播途径，在冠状病毒的预防中具有重要意义。
附图说明
图1是实施例三中藤茶水提物对SARS病毒3CLpro抑制曲线，表明藤茶水提物可剂量依赖性地抑制SARS-CoV 3CLpro活性。
图2是实施例三中藤茶水提物对新冠病毒3CLpro抑制曲线，表明藤茶水提物可剂量依赖性地抑制新冠3CLpro活性。
图3是实施例三中藤茶醇提物对新冠病毒3CLpro抑制曲线，表明藤茶醇提物可剂量依赖性地抑制新冠3CLpro活性。
图4是实施例三中藤茶醇提物对SARS 3CLpro抑制曲线，表明藤茶醇提物可剂量依赖性地抑制SARS 3CLpro活性。
图5是实施例四中藤茶活性部位的制备工艺流程图
图6是实施例四中藤茶水提物化学指纹谱-3CLpro抑制效应谱，其中馏分5、6、7显示强效抑制3CLpro作用，且通过与对照组进行显著性检验，具有极显著性差异(P<0.01)。
图7是实施例六中藤茶活性部位馏分5分别对新冠病毒3CLpro及SARS 3CLpro的抑制曲线。
图8是实施例六中藤茶活性部位馏分6分别对新冠病毒3CLpro及SARS 3CLpro的抑制曲线。
图9是实施例六中藤茶活性部位馏分7对分别新冠病毒3CLpro及SARS 3CLpro的抑制曲线。
图10是实施例七中藤茶水提物的总离子流图。其中藤茶活性部位的成分为藤茶总黄酮富集部位，其主要成分为二氢杨梅素、异二氢杨梅素等多酚类黄酮。
图11是实施例七中藤茶活性部位中二氢杨梅素(A)、异二氢杨梅素(B)、杨梅素(C)及二氢槲皮素(D)的MS/MS图谱及结构式。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本专利说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
实施例一藤茶水提物的制备方法
1.材料
干燥藤茶茶叶；Milli-Q Direct 8纯水/超纯水一体化系统(Bedford，美国)；KQ-800DE型数码超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；EYELA旋转蒸发仪(东京理化公司)；低温高速离心机(Thermo)，YHG-9245A型电热恒温鼓风干燥箱(上海姚氏仪器设备)。
2.方法
藤茶干燥后用粉碎机制粉，过40目筛后获得藤茶细粉；精密称取50g藤茶茶粉置于500mL蒸馏水中，50℃下超声30分钟，过滤得藤茶粗提取液，重复提取三次后合并提取液，再高速离心20分钟(12000r/min)，取得上清液。随后在旋转蒸发仪上保持真空度-0.1～-0.08MPa，40℃(±2℃)将藤茶水提液减压浓缩至50mL。将所得浓缩液喷雾干燥(出口温度(40℃-50℃))或至于烘箱(40℃-50℃)中避光干燥，制得藤茶水提物干粉，避光密封备用。
实施例二藤茶醇提物的制备方法
1.材料
干燥藤茶茶叶；75％乙醇；Milli-Q Direct 8纯水/超纯水一体化系统(Bedford，美国)；回流提取器；EYELA旋转蒸发仪(东京理化公司)；低温高速离心机(Thermo)；YHG-9245A型电热恒温鼓风干燥箱(上海姚氏仪器设备)。
2.方法
精密称取50g藤茶茶粉置于500毫升75％乙醇中，80℃下回流提取30分钟，过滤得藤茶醇提取液，重复提取三次后合并提取液，再高速离心20分钟(12000r/min)，取得上清液。随后在旋转蒸发仪上保持真空度-0.1～-0.08MPa，40℃(±2℃)将藤茶醇提液减压浓缩至50mL。将所得浓缩液喷雾干燥(出口温度(40℃-50℃))或至于烘箱(40℃-50℃)中避光干燥，制得藤茶醇提物干粉，避光密封备用。
实施例三藤茶提取物抑制3CLpro的IC50测定
1.材料
藤茶水提及醇提物干粉(按实施一、二制备例)；新冠3CLpro及SARS 3CLpro由葛广波课题组重组表达，作为体外3CLpro抑制实验的酶源；底物Dabcyl-KNSTLQSGLRKE-Edans由Sangon Biotech公司合成(上海)；磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、乙二胺四乙酸均购自美仑生物(纯度>98％)；色谱级二甲基亚砜购自Tedia公司(美国)；Milli-Q Direct 8纯水/超纯水一体化系统(Bedford，美国)；2.5μL、10μL、20μL、100μL、200μL、1000μL移液器(德国Eppendorf)；黑色96孔板；涡旋仪；恒温混匀仪(杭州奥盛)；
Figure BDA0002711838670000061
ID3多模式酶标仪(奥地利)。
2.方法
向96孔板中加入90μL预孵液，预孵液由pH＝7.4，含1mM乙二胺四乙酸(EDTA)的磷酸盐缓冲液78μL、不同浓度的藤茶提取物溶液2μL、10μL新冠/SARS 3CLpro组成。将预孵液在37℃下预孵60分钟后，加入底物(Dabcyl-KNSTLQSGLRKE-Edans)起始反应，于多功能酶标仪下对底物的代谢水解产物连续检测30分钟(激发波长为340nm，发射波长为490nm)。随后以藤茶水提物浓度的对数值为横坐标，剩余酶活为纵坐标，绘制其抑制曲线，由Graph PadPrism 7.0软件进行数据处理。
其中剩余酶活的计算公式为：
剩余酶活(％)＝(F0-F1)/F0×100％
F0为预孵液中不加藤茶提取物时测得的荧光强度值，F1为预孵液中加入各浓度藤茶提取物时测得的荧光强度值。
Figure BDA0002711838670000071
注：表中所述浓度均为100μL体系中的终浓度。
3.结果
藤茶水提物及醇提物能够呈剂量依赖强效抑制新冠及SARS 3CLpro，结果如下表，抑制曲线分别如图1、2、3、4所示。
Figure BDA0002711838670000072
实施例四藤茶活性部位的制备工艺及不同馏分对新冠3CLpro的抑制作用
1.材料
藤茶水提物干粉(按实施例一制备)；Milli-Q Direct 8纯水/超纯水一体化系统(Bedford，美国)；色谱级甲酸购自阿拉丁；色谱级乙腈购自Tedia公司(美国)；KQ-800DE型数码超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；低温高速离心机(Thermo)；高效液相色谱仪(岛津)；Shim-pack VP-ODS色谱柱(250*2.0mm，日本岛津公司)；FD-15冷冻干燥机(Scientz-10ND)；黑色96孔板；涡旋仪；恒温混匀仪(杭州奥盛)；
Figure BDA0002711838670000073
ID3多模式酶标仪(奥地利)。
2.方法
精密称取藤茶水提物，用纯水溶解后40℃超声处理20分钟(功率100W，40KHz)后，稀释至10mg/mL的溶液，高速离心20分钟(12000r/min)，取200μL至液相小瓶中待测。通过反相液相色谱来实现藤茶水部位化学指纹谱的建立和馏分收集，流动相由0.1％甲酸水(A)和乙腈(B)组成，采用梯度洗脱程序，流速为0.4mL/min，色谱柱温度40℃，进样体积为3μL，固定相为C18色谱柱(250*2.0mm，填料为4.6μm的硅胶颗粒)，将藤茶水提物的LC馏分以每2.5分钟连续收集一次，收集25分钟。所有馏分用冷冻干燥器干燥，用流动相复溶后，根据实施例四中的方法，在体外测定各馏分对新冠3CLpro的抑制能力。
流动洗脱程序表
Figure BDA0002711838670000081
3.结果
根据所得活性图，结合藤茶水提物的液相色谱图，得到相应的化学指纹谱-3CLpro抑制效应谱，如图6所示，馏分5、6、7显示出对新冠3CLpro的强效抑制作用，为藤茶的活性部位。
实施例五藤茶活性部位的总黄酮含量测定
1.材料
芦丁对照品；藤茶活性部位(包由实施例四制得的馏分5、6和7)；Milli-Q Direct8纯水/超纯水一体化系统(Bedford，美国)；70％乙醇溶液；比色皿；
Figure BDA0002711838670000082
M4多模式酶标仪(奥地利)。
称取芦丁对照品适量置于25mL容量瓶中，用适量70％乙醇溶解，加入5％的亚硝酸钠溶液1mL，摇匀后放置5分钟，加入10％的硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置5分钟，再用70％乙醇定容至刻度，混匀得芦丁标准液。分别取0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00ml芦丁标准液，以不加空白溶液为阴性对照，于510nm波长处测定吸光度，以芦丁含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
按实施例四分别制得5份藤茶活性部位，于510nm波长处测定吸光度，根据标曲测得藤茶活性部位的总黄酮含量。
Figure BDA0002711838670000091
实施例六藤茶活性馏分抑制新冠及SARS3CLpro的IC50测定
1.材料同实施例三和实施例五。
2.方法
针对实施例五中优选所得藤茶活性部位为馏分5、6、7。进一步地，同实施例五中的制备方法，通过反相液相色谱规模化制备藤茶活性部位，固定相为C18色谱柱(250*2.0mm，填料为4.6μm的硅胶颗粒)，采用梯度洗脱程序，将10-12.5分钟、12.5-15分钟、15-17.5分钟三段收集10次后，得到三个馏分的富集液。馏分用冷冻干燥器进行干燥处理后得到馏分5、6、7的干粉。称取一定量的馏分后，用流动相复溶后，根据实施例三中的方法，在体外分别对馏分5、6、7对新冠及SARS 3CLpro的IC50测定，数据处理同实施例三。
3.结果
馏分5、6、7分别能够呈剂量依赖型强效抑制新冠及SARS 3CLpro，其IC50值如下表，抑制曲线如图7、8、9。
Figure BDA0002711838670000092
实施例七藤茶活性部位的成分鉴定
1.材料
藤茶水提物干粉；Milli-Q Direct 8纯水/超纯水一体化系统(Bedford，美国)；色谱级甲酸购自阿拉丁；色谱级乙腈购自Tedia公司(美国)；低温高速离心机(Thermo)；三重四极杆TOF 4600质谱仪系统(AB SCIEX,Foster City,USA)；LC-30AT超快速液相色谱仪(UFLC，日本Shimadzu公司)，系统配备有一个系统控制器CBM-30A，两个LC-30AD泵，一个DGU-20A真空脱气机，一个CTO-30A柱温箱，一个SIL-30AC自动进样器，一个SPD-M 30A DAD检测器，一个RF-20A荧光检测器。
2.方法
精密称取藤茶水提物，用纯水溶解后40℃超声处理20分钟(功率100W，40KHz)后，稀释至10mg/mL的溶液，高速离心20分钟(12000r/min)，取200μL至液相小瓶中待测。采用高效液相色谱和三重四极杆TOF-MS联用系统，流动相由0.1％甲酸水(A)和乙腈(B)组成，洗脱程序同实施例四，流速为0.3mL/min，进样量为5μL，固定相为C18色谱柱(250mm，2.0μm,)，所有质量数据均在正离子和负离子模式下获得，质谱参数如下表，其中气体1和气体2均为氮气。所有MS数据用PeakView软件2.20(AB SCIEX,Foster City,USA)进行了分析。
分析藤茶提取物成分的TOF-MS和TOF-MS/MS质谱参数值
Figure BDA0002711838670000101
3.结果
藤茶水提物的总离子流图见图10，其中，10～17.5分钟的藤茶活性部位的成分鉴定结果如下表，主要为藤茶黄酮富集部位，富含二氢杨梅素、异二氢杨梅素、杨梅素、杨梅苷及二氢槲皮素等多酚类黄酮，二氢杨梅素、异二氢杨梅素、杨梅素、二氢槲皮素的二级质谱图如图11所示。
Figure BDA0002711838670000111
实施例八藤茶饮品及口服液的制备
配方(质量比)：20份藤茶水提物及其活性部位，4份蜂蜜，0.5份果胶、0.5份山梨酸钾和75份去离子水。将以上组分加入搅拌器中进行混匀调配，之后进行高温杀菌，测定相关技术指标，合格后灌装完成后，进行二次杀菌，制得藤茶饮料或不同包装规格的口服液。
实施例九藤茶精华消毒湿纸巾的制备
配方(质量比)：30份的藤茶醇提物及其活性部位，30份的乙醇，0.5份十二烷基二甲基氧化胺、0.5份月桂醇聚氧乙烯醚、2份木糖醇和37份去离子水。将以上组分混匀，通过预浸渍方法喷淋到基材上，经过湿巾机器裁切、测定相关技术指标，合格后灭菌包装，制得藤茶精华消毒湿巾。
实施例十藤茶精华洗手液的制备
配方(质量比)：10份藤茶醇提物及其活性部位、10份乙醇、4份烷基糖苷、0.6份乙二胺四乙酸，3份甜菜碱、2份山梨醇、2份柠檬酸、0.4份柠檬酸钠和68份去离子水组成。将溶剂、甘油、氯化钠、柠檬酸钠和柠檬酸等缓慢依次加入到37±3℃的去离子水中。搅拌均匀后静置15分钟后温度降至常温状态时，测定相关技术指标，合格后包装，制得藤茶精华洗手液。
实施例十一藤茶精华漱口液的制备
配方(质量比)：20份藤茶水提物及其活性部位、0.1份甘油、5份乙醇、0.5表面活性剂、0.5份辛甘醇、2份山梨醇、0.5份柠檬酸、0.4份防腐剂、0.5份水溶性薄荷香料和70.5份去离子水组成。在有加热装置的反应中加入水，加热至37±3℃，将主要组分依次缓慢加入到热水中，搅拌均匀，加入柠檬酸调节pH值，最后加入水溶性薄荷香料，温度降至常温状态时，检测相关指标，合格后杀菌装瓶，制得藤茶精华漱口液。
实施例十二藤茶精华洗洁剂的制备
配方(质量比)：10份藤茶醇提物及其活性部位、8份脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠，起泡剂：2份椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、1份防腐剂、1.3份氢氧化钠、5份脂肪醇聚氧乙烯醚、10份直链烷基苯磺酸、0.1份乙二胺四乙酸二钠、1份氯化钠、0.6香精和61份去离子水组成。将定量的去离子水投入配料锅中，在搅拌下加入氢氧化钠，待其溶解后缓缓加入直链烷基苯磺酸，搅拌调节pH，在温度下加入剩余组分，澄清透明后加入香精，补足去离子水即可。温度降至常温状态时，测定相关技术指标，合格后包装，制得藤茶精华洗洁剂。
实施例十三藤茶精华洗发液的制备
配方(质量比)：20份藤茶醇提物及其活性部位、15份表面活性剂、2份珠光浆、3份保湿柔亮剂、2份增稠剂、3份柠檬酸、1份香精、1份色素、1份防腐剂、2份发泡剂和50份去离子水。反应釜中加入藤茶醇提物、表面活性剂、珠光浆、保湿柔亮剂、增稠剂和去离子水，连续搅拌混匀乳化，加入柠檬酸调节pH，持续真空搅拌25-30分钟；最后加入香精、色素、防腐剂、发泡剂再真空搅拌25-30分钟，测定相关技术指标，合格后包装，制得藤茶精华洗发液。
实施例十四藤茶精华洗衣液的制备
配方(质量比)：50份藤茶醇提物及其活性部位，15份椰子油脂肪酸甘氨酸钾、4份柠檬酸、15份纳米二氧化钛、10份氯化十二烷基二甲基苄基铵、3份羧甲基纤维素、3份硅酸钠。将藤茶醇提物、椰子油脂肪酸甘氨酸钾、柠檬酸、纳米二氧化钛加入搅拌罐中均匀20分钟后，加入氯化十二烷基二甲基苄基铵、羧甲基纤维素、硅酸钠混合后加入加热罐中低温加热，50℃加热20分钟，之后缓慢冷却至室温，测定相关技术指标，静置5h后，合格后包装，制得藤茶精华洗衣液。
实施例十五藤茶精华消毒液的制备
配方(质量比)：30份藤茶醇提物及其活性部位，30份乙醇、3份双氧水、6份甘油、1份乙二胺四乙酸四钠及30份去离子水。将藤茶醇提物和乙醇加入搅拌器中搅拌10-20分钟，随后加入去离子水和双氧水，最后加入甘油和乙二胺四乙酸四钠，搅拌25-30分钟使液体混合均匀。检测合格后灭菌包装，制得藤茶精华消毒液。
实施例十六藤茶精华全能清洁剂的制备
配方(质量比)：30份藤茶醇提物及其活性部位、20份椰子油脂肪醇单乙醇酰胺、5份柠檬酸、10份烷基酚聚氧乙烯醚、3.8份氢氧化钠、6.2份二甲基苯磺酸钠、5份偏硅酸钠20份去离子水。将藤茶醇提物、椰子油脂肪醇单乙醇酰胺、烷基酚聚氧乙烯醚、偏硅酸钠加入到反应釜中反应20-30分钟，再依次添加其余组分，搅拌均匀至透明，加入柠檬酸调节pH值，再进行自然消泡静置后除去沉淀，测定相关指标，合格后灌装，制得藤茶精华全能清洁剂。
实施例十七藤茶精华沐浴液的制备
配方(质量比)：10份藤茶醇提物及其活性部位、50份脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵、10份月桂醇硫酸钠、5份脂肪酸甲酯磺酸盐、3份乳化硅油、3份椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、0.1份水杨酸、2份杏仁油、0.5份柠檬酸和13.4份去离子水组成。将杏仁油和椰子油脂肪酸二乙醇酰胺混合为油相，加热到75℃融化成液体保温备用，其余组分加热后加入，搅拌混合，柠檬酸调节pH，均质成稳定乳液后降温静置消泡，测定相关指标，合格后灌装，制得藤茶精华沐浴液。
实施例十八藤茶精华免洗消毒凝胶的制备
配方(质量比)：30份藤茶醇提物及其活性部位、30份乙醇、1份三氯羟基二苯醚、10份卡波姆940、4份山梨醇和25份去离子水。制作工艺：将卡波姆940加入到有水的反应釜中静止溶胀30分钟，制备出A溶液；再将其余组分在另一容器中搅拌均匀，调节pH值，制备出B溶液；再将B溶液加入A溶液中，搅拌均匀灌装，制得藤茶精华免洗消毒凝胶。
本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而，应理解的是，在不偏离本发明精神之前提下，本领域专业人员可对上述发明进行等同改变、工艺微调和修饰，所述改变、工艺微调和修饰同样落入本专利申请之权利要求的覆盖范围。

Claims (4)

1.藤茶水提物在制备可抑制新型冠状病毒3CL蛋白水解酶或SARS冠状病毒3CL蛋白水解酶的药物中的应用，其特征在于，所述藤茶水提物由如下方法制得：将藤茶粉碎，按料液比1 ：10用水浸泡，30~50℃下超声30分钟，过滤得粗提液，重复提取三次后合并粗提液，再以12000 r/min离心20分钟，取上清液，真空减压、浓缩、干燥。
2.藤茶水提物在制备可抑制新型冠状病毒3CL蛋白水解酶或SARS冠状病毒3CL蛋白水解酶的口服液或消毒洗液制品中的应用，其特征在于，所述藤茶水提物由如下方法制得：将藤茶粉碎，按料液比1 ：10用水浸泡，30~50℃下超声30分钟，过滤得粗提液，重复提取三次后合并粗提液，再以12000 r/min离心20分钟，取上清液，真空减压、浓缩、干燥；所述消毒洗液制品选自洗手液、消毒液、消毒凝胶、洗衣液、沐浴液、洗发剂、洗洁精、清洁剂、漱口液或消毒湿纸巾。
3.藤茶黄酮精提物在制备可抑制新型冠状病毒3CL蛋白水解酶或SARS冠状病毒3CL蛋白水解酶的药物中的应用，其特征在于，所述藤茶黄酮精提物的总黄酮含量为30~95% wt；所述藤茶黄酮精提物由如下方法制得：将藤茶粉碎，按料液比1 ：10用水浸泡，30~50℃下超声30分钟，过滤得粗提液，重复提取三次后合并粗提液，再以12000 r/min离心20分钟，取上清液，真空减压、浓缩、干燥，得藤茶水提物；以反相液相色谱法对藤茶水提物进行梯度洗脱，收集10~12.5分钟或12.5~15分钟或15~17.5分钟的馏分，冷冻干燥；所述反相液相色谱法的反应物质与条件为：流动相由0.1%甲酸水和乙腈组成，采用梯度洗脱程序，流速为0.4mL/min，色谱柱温度40℃，进样体积为 3 μL，固定相为C18色谱柱。
4.藤茶黄酮精提物在制备可抑制新型冠状病毒3CL蛋白水解酶或SARS冠状病毒3CL蛋白水解酶的口服液或消毒洗液制品中的应用，其特征在于，所述藤茶黄酮精提物的总黄酮含量为30~95% wt；所述藤茶黄酮精提物由如下方法制得：将藤茶粉碎，按料液比1 ：10用水浸泡，30~50℃下超声30分钟，过滤得粗提液，重复提取三次后合并粗提液，再以12000 r/min离心20分钟，取上清液，真空减压、浓缩、干燥，得藤茶水提物；以反相液相色谱法对藤茶水提物进行梯度洗脱，收集10~12.5分钟或12.5~15分钟或15~17.5分钟的馏分，冷冻干燥；所述反相液相色谱法的反应物质与条件为：流动相由0.1%甲酸水和乙腈组成，采用梯度洗脱程序，流速为0.4 mL/min，色谱柱温度40℃，进样体积为 3 μL，固定相为C18色谱柱；所述消毒洗液制品选自洗手液、消毒液、消毒凝胶、洗衣液、沐浴液、洗发剂、洗洁精、清洁剂、漱口液或消毒湿纸巾。
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