CN106581319A - 一种藤茶总黄酮的超声提取工艺 - Google Patents

一种藤茶总黄酮的超声提取工艺 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种藤茶总黄酮的超声提取工艺，它包括以下工艺步骤：（1）将新鲜藤茶的茎叶干燥后粉碎，过20～100目筛，得藤茶粗粉；（2）按照藤茶粗粉：乙醇为1:25～35的料液比向藤茶粗粉中加入体积分数为60～80%的乙醇进行浸泡；（3）浸泡20～40min后超声提取1～3次，每次20～40min，过滤并合并滤液，得藤茶总黄酮超声提取液，总黄酮得率为35～40%。本发明与传统提取工艺比较，具有省时、高效、低耗、总黄酮得率得率高等优点，是一种新型的藤茶总黄酮提取工艺，具有良好的应用和发展前景，为更好地提取藤茶总黄酮提供一种新的途径和方法。

Description

一种藤茶总黄酮的超声提取工艺
技术领域
本发明涉及一种藤茶的提取工艺，特别是一种藤茶总黄酮的超声提取工艺。
背景技术
藤茶，学名显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata (Hand～Mazz) W.T.Wang，属葡萄科蛇葡萄属的一种木质藤本植物，分布于我国云南东南部、广西、广东、福建、江西、湖南、贵州、湖北西部等地。藤茶是一种非常古老的传统中草药，为我国民间广泛使用的药食两用植物，全株药用，味甘、淡，性凉，具有清热解毒、祛风湿、强筋骨之功效，我国历代药学专著及植物志，诸如《救荒本草》、《植物名实图考》、《植物名汇》、《全国中草药汇编》、《种子植物名称》、《泉州草本》、《江西药物志》、《浙江民间常用草药》、《东北常用中草药手册》、《上海常用中草药》等均有关于藤茶的记载。经实验研究证明，藤茶的药理作用主要和藤茶中的黄酮类化合物相关，目前对黄酮类化合物提取工艺的研究主要有热水提取法、乙醇加热回流提取法、索式提取法。这些传统的提取方法存在提取时间长、有机溶剂消耗大、提取温度高的缺点，不利于保护黄酮类化合物的母核，造成黄酮类化合物得率和含量低的结果，尤其是存在溶剂残留。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种省时、高效、低耗、黄酮类化合物得率得率较高的藤茶总黄酮的超声提取工艺，从而克服上述现有技术的不足。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种藤茶总黄酮的超声提取工艺，其包括以下工艺步骤：
（1）将新鲜藤茶的茎叶干燥后粉碎，过20～100目筛，得藤茶粗粉；
（2）按照藤茶粗粉：乙醇为1:25～35的料液比向藤茶粗粉中加入体积分数为60～80%的乙醇进行浸泡；
（3）浸泡20～40min后超声提取1～3次，每次20～40min，过滤并合并滤液，得藤茶总黄酮超声提取液，总黄酮得率为35～40%。
上述藤茶总黄酮的超声提取工艺中，优选的，所述步骤（2）中，是按照藤茶粗粉：乙醇为1:30的料液比向藤茶粗粉中加入体积分数为70%的乙醇进行浸泡。
前述藤茶总黄酮的超声提取工艺中，优选的，所述步骤（3）中，是浸泡30min后超声提取3次，每次20min，总黄酮得率为35.86%。
本发明的有益效果：与传统提取工艺相比，本发明采用超声提取法提取藤茶总黄酮，并通过对乙醇体积分数、液料比、提取时间和提取次数等工艺参数进行研究，确定了藤茶总黄酮超声提取的最佳工艺条件，具有省时、高效、低耗、总黄酮得率高等优点，是一种新型的藤茶总黄酮提取工艺，具有良好的应用和发展前景，为更好地提取藤茶总黄酮提供一种新的途径和方法。
附图说明
图1是本发明的乙醇体积分数对得率的影响曲线图，图中横坐标为乙醇体积分数/%，纵坐标为提取率/%；
图2是本发明的液料比对得率的影响曲线图，图中横坐标为液料比，纵坐标为提取率/%；
图3是本发明的超声提取时间对得率的影响曲线图,图中横坐标为超声提取时间/min，纵坐标为提取率/%；
图4是本发明的提次数对得率的影响曲线图,图中横坐标为提取次数/次，纵坐标为提取率/%。
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步的说明。
具体实施方式
实施例1：藤茶总黄酮的超声提取工艺，步骤如下：（1）将新鲜藤茶的茎叶干燥后粉碎，过20目筛，得藤茶粗粉；（2）按照藤茶粗粉：乙醇为1:30的料液比向藤茶粗粉中加入体积分数为70%的乙醇进行浸泡；（3）浸泡30min后超声提取3次，每次20min，过滤并合并3次滤液，得藤茶总黄酮超声提取液，总黄酮得率为35.86%。
实施例2：藤茶总黄酮的超声提取工艺，步骤如下：（1）将新鲜藤茶的茎叶干燥后粉碎，过40目筛，得藤茶粗粉；（2）按照藤茶粗粉：乙醇为1:25的料液比向藤茶粗粉中加入体积分数为60%的乙醇进行浸泡；（3）浸泡20min后超声提取2次，每次30min，过滤，合并2次滤液，即得藤茶总黄酮超声提取液。
实施例3：藤茶总黄酮的超声提取工艺，步骤如下：（1）将新鲜藤茶的茎叶干燥后粉碎，过100目筛，得藤茶粗粉；（2）按照藤茶粗粉：乙醇为1:35的料液比向藤茶粗粉中加入体积分数为80%的乙醇进行浸泡；（3）浸泡40min后超声提取1次，每次40min，过滤，即得藤茶总黄酮超声提取液。
本发明通过对藤茶总黄酮超声提取法的工艺条件进行实验和研究，考察了乙醇体积分数、液料比、提取时间和提取次数对藤茶总黄酮得率的影响，再采用L9(34)正交试验法确定了藤茶总黄酮超声提取的最佳工艺条件。试验结果表明，各因素对藤茶总黄酮得率影响的主次顺序是：乙醇体积分数>提取次数>提取时间>液料比，乙醇体积分数、提取次数对得率均有显著性影响，而液料比、提取时间在考察范围内影响不显著。最终确定了藤茶总黄酮超声提取的最佳工艺条件为：30倍量70%乙醇超声提取3次，每次20min，总黄酮得率为35.86%。
一、藤茶总黄酮提取工艺研究
1.材料与方法
1.1 材料
藤茶植株，采自贵州省江口县，由贵州大学生命科学学院植物教研室廖海民教授鉴定为葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata (Hand-Mazz) W.T.Wang。植株于80℃干燥，粉碎过40目筛备用。无水乙醇，重庆川东化工有限公司化学试剂厂生产；二氢杨梅素对照品（中国药品生物制品检定所）含量92.21％；重蒸馏水，由贵州大学生化工程中心提供。DS-250A型超声清洗机，宁波市海曙达盛超声波仪器厂生产；TU-1901型双光束紫外分光光度计，北京普析通用；DZKW-4型电子恒温水浴锅，上海金桥科析仪器厂；JY3002型电子天平、GZX-9140MBE型电热恒温鼓风干燥箱，上海博迅；粉碎机、RE-52A型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；SHZ-D(Ⅲ)型循环水式真空泵。
1.2 方法
1.2.1藤茶总黄酮的提取
精密称取藤茶粗粉2g，用一定体积分数的乙醇浸泡30 min后进行超声提取。提取一定时间后，过滤并合并滤液，滤液旋转蒸发后用一定体积分数的乙醇定容于100mL量瓶中。精密吸取此溶液0.1mL，用一定体积分数的乙醇定容至50 mL，试验重复2次，结果取平均值。以下实验相同。
1.2.2 提取条件的优化
考察乙醇体积分数、液料比、提取时间和提取次数对藤茶总黄酮得率的影响。取藤茶粗粉各2g进行实验，分别采用乙醇体积分数50%～100%，液料比（15～40）：1，提取时间10min～60min和提取次数1～4次等水平进行单因素试验。
根据单因素试验结果，选择一定乙醇体积分数、液料比、提取时间和提取次数作为考察因素，以藤茶总黄酮得率为考察指标，按L9(34)正交表进行正交试验，确定藤茶总黄酮超声提取的最佳工艺条件。正交试验的因素与水平见表1。
表1 正交实验因素与水平
1.2.3不同提取方法的比较
在研究超声波提取的同时，与一些常规方法进行了对比试验。精密称取3份藤茶粗粉各2g，分别采用3种方法提取总黄酮:(1)乙醇回流提取法，采用70%乙醇、75℃、液料比30：1，每次提取2h、提取3次；（2）索式提取法，采用70%乙醇、80℃、提取9 h；(3)超声乙醇提取法，采用正交试验所得的最佳提取工艺条件进行提取。
1.2.4标准曲线的绘制
精密称取二氢杨梅素对照品5mg，置于50 mL容量瓶中，用70％乙醇定容至50mL，配制成100ug/mL的溶液。准确吸取上述标准溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mL，分别置于10mL容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度。在291 nm测定吸收度，以对照品的浓度为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，从而得到标准曲线。标准曲线的线性回归方程为:y=0.044 74x+ 0.022 03，R=0.999 4。二氢杨梅素在-1.3～26.3μg·mL-1范围内浓度与吸光度呈良好的线性关系。
1.2.5 藤茶总黄酮的含量测定及得率计算
采用紫外分光光度法测定藤茶总黄酮的含量。根据标准曲线的线性回归方程，得到提取液浓度，按下式计算总黄酮的得率：
总黄酮得率（%）=提取液浓度×体积×稀释倍数/原料质量×100
2.结果与分析
2.1单因素试验
2.1.1乙醇体积分数对藤茶总黄酮得率的影响
精密称取6份2g藤茶粗粉，分别以30倍量的体积分数50%、60%、70%、80%、90%、100%的乙醇做提取剂，浸泡30 min后超声提取30 min，在291 nm测吸光度并计算含量，考察乙醇体积分数对藤茶总黄酮得率的影响，结果见图1。
由图1可以看出，乙醇体积分数过高或过低都影响藤茶总黄酮的得率，在70%左右时得率最大，这是因为体积分数太低时所提取的水溶性的杂质较多，体积分数太高时所提取的非极性物质较多，从而导致了总黄酮得率的下降。因而，选择60%、70%、80%的乙醇作为正交试验乙醇体积分数水平。
2.1.2液料比对藤茶总黄酮得率的影响
精密称取6份2g藤茶粗粉，液料比分别为15：1、20：1、25：1、30：1、35：1、40：1，在同等条件下提取30min，在291nm测吸光度并计算含量，考察液料比对藤茶总黄酮得率的影响，结果见图2。
由图2可以看出，藤茶总黄酮得率随液料比的增加而上升，液料比在30：1时得率最大。那是因为溶剂量增加时总黄酮溶解量也在不断增加，而当溶剂量足够溶解所有可提取的总黄酮时，继续提高溶剂量，所溶解的总黄酮量不会再增加，得率因而没有明显变化。因此，选择25：1、30：1、35：1作为正交实验液料比水平。
2.1.3提取时间对藤茶总黄酮得率的影响
精密称取6份2g藤茶粗粉，以30倍量的70%乙醇为提取溶剂，在室温下分别提取10 min、20 min、30min、40 min、50 min、60 min，在291nm测吸光度并计算含量，考察提取时间对藤茶总黄酮得率的影响，结果见图3。
由图3可以看出，藤茶总黄酮得率随着超声提取时间的延长而上升，在30min时达到最大，而在20～50min之间，藤茶总黄酮得率没有明显变化。这是因为开始时随着超声时间的延长，藤茶总黄酮不断浸出，当藤茶总黄酮的浸出量达到最大之后，再延长时间也不能提高总黄酮得率。考虑到能耗，选择20min、30min、40min作为正交实验提取时间水平。
2.1.4提取次数对藤茶总黄酮得率的影响
精密称取4份2g藤茶粗粉，以30倍量的70%乙醇为提取溶剂，超声提取30min，分别提取1、2、3、4次，在291nm测吸光度并计算含量，考察提取次数对藤茶总黄酮得率的影响，结果见图4。
由图4可以看出，提取2次时，黄酮得率最高，当提取次数多于2次后，黄酮得率基本保持不变，说明提取次数的增加并不能提高总黄酮的得率。因此，选择1、2、3次作为正交试验提取次数水平。
2.2正交试验
正交试验结果与分析见表2。
表2 正交试验结果
由表2直观分析R值看，最优组合为A2B2C3D1，即提取工艺参数为乙醇体积分数70%、液料比30：1、提取20 min、提取3次。由R值可知，在不考虑交互作用情况下各因素的主次顺序是：乙醇体积分数>提取次数>提取时间>液料比。乙醇体积分数、提取次数对得率均有显著性影响，而液料比、提取时间在考察范围内影响不显著。通过正交试验结果直观分析得出藤茶总黄酮提取的最佳工艺条件为：30倍量70%乙醇超声提取3次，每次20 min。
2.3验证试验
精密称取2g藤茶粗粉5份，按正交试验最优工艺条件进行验证试验，重复2次，结果见表3。
表3 验证试验结果
实验号 总黄酮得率/% 平均得率/% RSD/%
1 35.85
2 35.87
3 35.86 35.86 2.33
4 35.85
5 35.86
由表3可以看出，5次测得的平均得率为35.86%，RSD=2.33%(n=5)，说明本提取方法的重复性良好。其总黄酮得率与正交试验方案中的最高值基本吻合，说明优化是成功的，适合于生产应用。另外，依法测定加样回收率为98.31%，说明该测定方法测得的结果准确。
2.4不同提取方法的比较
采用不同提取方法对藤茶总黄酮进行提取试验，结果见表4。
表4 不同提取方法对藤茶总黄酮提取的影响
提取方法 总黄酮得率（%） 耗时（h） 70%乙醇用量（mL）
索式提取法 29.54 9 60
超声乙醇法 35.82 1 60
乙醇回流法 32.78 6 180
由表4可以看出，对藤茶总黄酮得率，超声乙醇法＞乙醇回流法＞索式提取法。超声乙醇提取法的得率高于乙醇回流提取法，且乙醇消耗量较少，耗时短；乙醇回流提取杂质较少，黄酮提取量较高，损失少，但乙醇用量大及耗时长；索式提取法乙醇用量较少，但得率不高且耗时，提取所需温度较高，会导致黄酮有所损失。综合考虑用超声乙醇提取法最为合适。

Claims (3)

1.一种藤茶总黄酮的超声提取工艺，其特征在于，包括以下工艺步骤：
将新鲜藤茶的茎叶干燥后粉碎，过20～100目筛，得藤茶粗粉；
按照藤茶粗粉：乙醇为1:25～35的料液比向藤茶粗粉中加入体积分数为60～80%的乙醇进行浸泡；
浸泡20～40min后超声提取1～3次，每次20～40min，过滤并合并滤液，得藤茶总黄酮超声提取液，总黄酮得率为35～40%。
2.根据权利要求1所述的藤茶总黄酮的超声提取工艺，其特征在于，所述步骤（2）中，按照藤茶粗粉：乙醇为1:30的料液比向藤茶粗粉中加入体积分数为70%的乙醇进行浸泡。
3.根据权利要求1所述的藤茶总黄酮的超声提取工艺，其特征在于，所述步骤（3）中，浸泡30min后超声提取3次，每次20min，总黄酮得率为35.86%。
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