CN112111019A - 一种含有三七多糖提取物的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

一种含有三七多糖提取物的药物组合物及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112111019A
CN112111019A CN202011071858.9A CN202011071858A CN112111019A CN 112111019 A CN112111019 A CN 112111019A CN 202011071858 A CN202011071858 A CN 202011071858A CN 112111019 A CN112111019 A CN 112111019A
Authority
CN
China
Prior art keywords
extract
parts
filtrate
ethanol
notoginseng
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202011071858.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112111019B (zh
Inventor
辛文锋
蔡群虎
刘石磊
张文生
胡会泽
袁敏惠
王芬
张芳盛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yunnan Sanqi Technology Co ltd
Original Assignee
Yunnan Sanqi Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yunnan Sanqi Technology Co ltd filed Critical Yunnan Sanqi Technology Co ltd
Priority to CN202011071858.9A priority Critical patent/CN112111019B/zh
Publication of CN112111019A publication Critical patent/CN112111019A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112111019B publication Critical patent/CN112111019B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
    • A61K36/076—Poria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
    • A61K36/258—Panax (ginseng)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/481—Astragalus (milkvetch)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/73—Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
    • A61K36/734—Crataegus (hawthorn)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/81—Solanaceae (Potato family), e.g. tobacco, nightshade, tomato, belladonna, capsicum or jimsonweed
    • A61K36/815—Lycium (desert-thorn)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种含有三七多糖提取物的药物组合物及其制备方法。所述药物组合物按照重量份数计，包括如下组分：三七多糖提取物10‑30份、茯苓提取物3‑10份、山楂提取物5‑20份、沙棘提取物5‑15份、枸杞提取物1‑8份、黄芪提取物6‑10份。本发明具有提高免疫力效果显著的优点。

Description

一种含有三七多糖提取物的药物组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种含有三七多糖提取物的药物组合物及其制备方法。
背景技术
在植物糖化学研究中很多报道指出具有治病、防病功效的高活性多糖基本为小分子多糖，大分子多糖功效较弱。免疫系统是一个极其复杂而重要的生理体系，其中吞噬细胞是机体抵抗病原微生物感染的第一道防线之一，包括中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞等，它们都是先天性免疫系统的重要组分。其中巨噬细胞能够非特异性吞噬和杀灭病原微生物，同时还能够释放一些炎性介质和细胞因子来将其杀灭，此外还能将病原菌提供给T淋巴细胞，激活适应性免疫反应释放各种细胞因子来发挥免疫调节作用。
三七为五加科植物，以其根部作为药用部分，三七主产于我国的云南文山，三七主要成分为三七总皂苷、多糖类、三七素、黄酮、挥发油、氨基酸及各种微量元素等。多年来三七的研究主要集中在皂苷的化学和药理作用上，研究已证实，三七总皂苷有心肌保护作用；预防血栓和抗血栓作用；镇痛作用；保护肝脏；抗炎症作用；抗辐射作用；增加超氧化物歧化酶活性等，其他成分的研究则较少。随着科学的发展，高等植物的生物活性成分多糖越来越引起人们的兴趣，多糖的作用研究也逐渐深入。
三七多糖是从三七中提取出来的具有多种生物活性且结构复杂的杂多糖或其复合物。大量研究证明，三七多糖具有抗肿瘤、降血糖、抗氧化、增强免疫力等多种功效。我国目前对三七多糖的开发利用并不多，三七多糖的功效研究、产品开发等还存在着很大的研究价值和空间。
发明专利申请CN 106832037A公开了一种三七多糖提取的方法，其技术要点是：将含有乙醇的三七药渣回收乙醇后，直接加纯化入水进行混合后用闪式提取器提取，然后过滤并收集滤液；将收集的滤液通过离心机进行分离，并制得离心液；将制得离心液浓缩、沉淀结晶后离心甩干，用纯化水溶解过阳离子树脂柱，料液过后加入纯化水进行洗涤，并制得洗脱液；将制得洗脱液浓缩后加入乙醇，静置，离心，析出沉淀物，将沉淀物加入水中进行溶解，制得喷雾料液；将料液通过喷雾干燥或析出沉淀物直接真空干燥制得三七多糖。解决了现有三七多糖制备方法存在最终提取物中三七多糖含量偏低，灰分等杂质含量过高，质量不稳定，生产周期长，提取率低下对环境存在污染的问题。但是经过分析最终实验数据可知，每次试验结果不稳定，变化制备方法条件时，实验结果相差较大。
发明专利申请CN 102961424A公开了一种三七多糖提取物及其制备方法与制剂及应用，所述的三七多糖提取物是以提取三七总皂苷后的废渣为原料经提取、浓缩、精制、干燥、粉碎、检验步骤得到，其中三七多糖含量不低于15％。所述的三七多糖提取物的制备方法包括提取、浓缩、精制、干燥、粉碎、检验步骤，具体包括：将提取三七总皂苷后的废渣加入纯化水提取，过滤，浓缩，加入乙醇沉淀，过滤，精制，干燥得到目标物干燥品；所述的三七多糖提取物加入药用辅料制成散剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂或丸剂；所述的三七多糖提取物用于制备抗肿瘤药物和增强免疫力药物中的应用。本发明以提取三七总皂苷后的废渣进行再次利用，变废为宝，有助于三七资源的综合利用，降低成本，提高经济效益。但是经测定，经专利公开文本所述的制备方法得到的三七多糖含量约为54-70％，试验结果不稳定，且含量较低。
而且现有技术中虽然有一些三七多糖提取物的收率和纯度较高，但是其小分子活性多糖含量较低，因此用于提高免疫力效果不佳。另外，仅仅将三七多糖用于提高免疫力，效果仍有待进一步提高。
因此，开发一种能解决上述技术问题的含有三七多糖提取物的药物组合物及其制备方法是非常必要的。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种提高免疫力效果显著的含有三七多糖提取物的药物组合物及其制备方法。
本发明是通过以下技术方案予以实现的：
一种三七多糖提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)预处理：将三七洗净干燥，粉碎过筛；
(2)浸提：将粉碎后的三七用乙醇浸泡，得混合溶液，加碱和助剂，先后经过微波提取、加热浸提后，过筛，得到固体A；
(3)回流提取：将固体A回流提取两次；第一次经乙醇回流提取得到固体B和提取液B，第二次将固体B经乙醇回流提取得到固体C和提取液C；
(4)提纯：合并提取液B、C，得到提取液D，通过大孔吸附树脂，收集流出液和洗脱液，得到洗脱液D；
(5)过滤脱色：洗脱液D经超滤膜过滤，然后将滤液与活性炭混合，煮沸脱色，静置，过滤后得滤液E；
(6)浓缩：将滤液E浓缩、干燥，得到三七多糖提取物。
更优选地，所述步骤(1)中粉碎过40-60目筛。
如果粉碎的粒径太小，三七多糖可能会在步骤(2)被提取出来，降低固体A中三七多糖的含量，从而降低三七多糖的提取率；如果粉碎的粒径太大，步骤(2)提取过程中，三七中较多的黄酮、低聚糖和氨基酸等杂质可能还存在固体A中，从而降低三七多糖提取物的纯度。
更优选地，所述步骤(2)中，乙醇浓度为75-85％。
本发明中没有特殊说明，“乙醇浓度”均指乙醇的体积分数。
更优选地，所述步骤(2)中，按重量份计，三七：乙醇＝1:8-10。
更优选地，所述步骤(2)中，微波提取的功率为300-500W。
更优选地，所述步骤(2)中，微波提取时间为40-60s。
更优选地，所述步骤(2)中，加热浸提的加热温度为50-70℃，加热时间为1-3h。
更优选地，步骤(2)中所述碱为碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾中的至少一种。
更优选地，所述碱的添加量为混合溶液的0.01-0.1wt％。
更优选地，步骤(2)中所述助剂为吐温80、十二烷基硫酸钠、单硬脂酸甘油酯中的至少一种。
更优选地，所述助剂为吐温80、十二烷基硫酸钠和单硬脂酸甘油酯的混合物。
更优选地，吐温80、十二烷基硫酸钠和单硬脂酸甘油酯的质量比为1:2-4:1-3。
更优选地，所述助剂添加量为混合溶液的0.4-0.6wt％。
步骤(2)的目的是使三七多糖尽可能多的留在固体A中，而除三七多糖外的其它杂质，尽可能多的被提取出来，从而同时提高三七多糖提取物的提取率和纯度。
更优选地，所述步骤(3)中，乙醇浓度为15-25％。
本发明步骤(3)中通过优化回流提取所用乙醇的浓度，使得尽可能多的三七多糖被提取到提取液中，而且避免了提取其它杂质，提高了三七多糖提取物的纯度。
更优选地，所述步骤(3)中，第一次回流，按重量份计，固体A：15-25％乙醇＝1:5-8，回流比为2-6。
更优选地，所述步骤(3)中，第二次回流，按重量份计，固体B：15-25％乙醇＝1:1-3，回流比为0.2-0.8。
更优选地，所述步骤(4)中，大孔吸附树脂类型为HPD-100、D-101、SD-300中的一种。
更优选地，所述步骤(4)中，按重量份计，提取液D：树脂＝1:10-15。
更优选地，所述步骤(4)中，洗脱剂为水。
更优选地，所述步骤(5)中，超滤膜的孔径为100kDa-150kDa。
更优选地，所述步骤(5)中，静置时间为1-3h。
更优选地，所述步骤(5)中，按重量份计，活性炭重量：三七＝0.005-0.01:1。
更优选地，所述三七多糖提取物的制备方法包括以下步骤：
(1)预处理：将三七洗净干燥，粉碎过40-60目筛；
(2)浸提：将粉碎后的三七用75-85％乙醇浸泡，按重量份计，三七：75-85％乙醇＝1:8-10，得混合溶液，加0.01-0.1wt％的碱和0.4-0.6wt％的助剂，先后经过微波提取(功率为300-500W，时间为40-60s)、加热浸提(加热温度为50-70℃，时间为1-3h)后，过筛，得到固体A；
(3)回流提取：将固体A回流提取两次；第一次经15-25％乙醇回流提取得到固体B和提取液B，按重量份计，固体A：15-25％乙醇＝1:5-8，回流温度为40-60℃，回流比为2-6，回流时间1-3h；第二次将固体B经15-25％乙醇回流提取得到固体C和提取液C，按重量份计，固体B：15-25％乙醇＝1:1-3，回流温度为30-50℃，回流比为0.2-0.8，回流时间1-3h；
(4)提纯：合并提取液B、C，得到提取液D，通过大孔吸附树脂，按重量份计，提取液D：树脂＝1:10-15，采用水洗脱，收集流出液和洗脱液，得到洗脱液D；
(5)过滤脱色：将洗脱液D经100kDa-150kDa超滤膜过滤，然后将滤液用活性炭吸附脱色，按重量份计，活性炭重量：三七＝0.005-0.01:1，煮沸脱色1-3h，静置，过滤后得滤液E；
(6)浓缩：将滤液E浓缩、干燥，得到三七多糖提取物。
本发明还涉及一种药物组合物，包括上述的制备方法制备得到的三七多糖提取物。
优选地，所述药物组合物按照重量份数计，包括如下组分：三七多糖提取物10-30份、茯苓提取物3-10份、山楂提取物5-20份、沙棘提取物5-15份、枸杞提取物1-8份、黄芪提取物6-10份。
本发明还涉及上述药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
1)将茯苓提取物、山楂提取物和沙棘提取物混合，加入水中，过滤，得滤液1；
2)将滤液1与枸杞提取物、黄芪提取物混合，过滤，得滤液2，将滤液2浓缩干燥，得混合物1；
3)将混合物1与三七多糖提取物混合，即得。
优选地，所述制备方法包括如下步骤：
1)将茯苓提取物、山楂提取物和沙棘提取物混合，加入5-10倍量的水中，20-30℃加热0.5-1h，过滤，得滤液1；
2)将滤液1与枸杞提取物、黄芪提取物混合，30-35℃加热0.5-1h，过滤，得滤液2，将滤液2浓缩干燥，得混合物1；
3)将混合物1与三七多糖提取物混合，即得。
本发明还涉及一种药物制剂，包括上述药物组合物或上述的制备方法制备得到的药物组合物。
所述药物制剂还可以加入一种或多种药物上可接受的辅料，所述辅料包括药学领域常规的填充剂、稀释剂、粘合剂、赋形剂、吸收促进剂、填充剂、表面活性剂和稳定剂等，必要时还可加入香味剂、色素和甜味剂等；或者与其他治疗免疫疾病的药物配合使用。
本发明还涉及上述的药物组合物或上述的制备方法制备得到的药物组合物或上述的药物制剂在制备治疗免疫疾病药物中的应用。
与现有技术对比，本发明的有益效果是：
1.本发明将三七原料采用75-85％乙醇先进行微波提取，再加热浸提，杂质的浸出率较高，所得三七多糖提取物纯度提高。
2.本发明在提取过程中添加了碱和助剂，并优化了两者的组成，有利于三七多糖提取物的除杂。
3.本发明进行了两次回流提取，且优化了两次回流提取采用的溶剂和回流比，进一步提高了三七多糖提取物的收率和纯度。
4.本发明通过采用大孔吸附树脂吸附杂质，提高了三七多糖提取物的纯度，同时采用水进行洗脱，进一步提高了三七多糖提取物的收率，有利于产品发挥药理活性。
5.本发明所得三七多糖提取物中蛋白质、淀粉、灰分、重金属等杂质脱除较为彻底，含有小分子多糖、氨基酸、多肽等多种活性成分，药理活性较高。
6.本发明将三七多糖提取物与其它提取物共同作用，提高免疫力的效果明显提高，各组分之间协同作用显著。
7.本发明优化了药物组合物中各组分的混合顺序，制备得到的药物组合物在提高免疫力方面的效果进一步提高。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚，但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
本发明各实施例和对比例中的茯苓提取物购自西安昌岳生物科技有限公司，山楂提取物(产品编号MF-009193，产品规格80％)、沙棘提取物(产品编号MF-009140，产品规格10:1)和枸杞提取物(产品编号MF-000614，产品规格：枸杞多糖50％)购自信阳市沐凡生物科技有限公司，黄芪提取物购自新乡博凯生物技术有限公司。
实施例1
一种药物组合物，按照重量份数计，包括如下组分：三七多糖提取物20份、茯苓提取物6份、山楂提取物12份、沙棘提取物10份、枸杞提取物4份、黄芪提取物8份。
所述三七多糖提取物的制备方法包括以下步骤：
(1)预处理：将三七洗净干燥，粉碎过50目筛；
(2)浸提：将粉碎后的三七用80％乙醇浸泡，按重量份计，三七：80％乙醇＝1:9，得混合溶液，加0.05wt％的氢氧化钠和0.5wt％的助剂，先后经过微波提取(功率为400W，时间为50s)、加热浸提(加热温度为60℃，时间为2h)后，过筛，得到固体A；所述助剂为吐温80、十二烷基硫酸钠和单硬脂酸甘油酯的混合物，三者质量比为1:3:2；
(3)回流提取：将固体A回流提取两次；第一次经20％乙醇回流提取得到固体B和提取液B，按重量份计，固体A：20％乙醇＝1:7，回流温度为50℃，回流比为4，回流时间2h；第二次将固体B经20％乙醇回流提取得到固体C和提取液C，按重量份计，固体B：20％乙醇＝1:2，回流温度为40℃，回流比为0.5，回流时间2h；
(4)提纯：合并提取液B、C，得到提取液D，通过D-101大孔吸附树脂，按重量份计，提取液D：树脂＝1:12，采用水洗脱，收集上柱流出液和水洗脱液，得到洗脱液D；
(5)过滤脱色：将洗脱液D经120kDa超滤膜过滤，然后将滤液用活性炭吸附脱色，按重量份计，活性炭重量：粉碎后的三七＝0.008:1，煮沸脱色2h，静置，过滤后得滤液E；
(6)浓缩：将滤液E浓缩、干燥，得到三七多糖提取物。
所述药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
1)将茯苓提取物、山楂提取物和沙棘提取物混合，加入8倍量的水中，25℃加热0.75h，过滤，得滤液1；
2)将滤液1与枸杞提取物、黄芪提取物混合，33℃加热0.75h，过滤，得滤液2，将滤液2浓缩干燥，得混合物1；
3)将混合物1与三七多糖提取物混合，即得。
实施例2
一种药物组合物，按照重量份数计，包括如下组分：三七多糖提取物10份、茯苓提取物3份、山楂提取物5份、沙棘提取物5份、枸杞提取物1份、黄芪提取物6份。
所述三七多糖提取物的制备方法包括以下步骤：
(1)预处理：将三七洗净干燥，粉碎过40目筛；
(2)浸提：将粉碎后的三七用75％乙醇浸泡，按重量份计，三七：75％乙醇＝1:8，得混合溶液，加0.01wt％的碳酸氢钠和0.4wt％的助剂，先后经过微波提取(功率为300W，时间为40s)、加热浸提(加热温度为50℃，时间为1h)后，过筛，得到固体A；所述助剂为吐温80、十二烷基硫酸钠和单硬脂酸甘油酯的混合物，三者质量比为1:2:1；
(3)回流提取：将固体A回流提取两次；第一次经15％乙醇回流提取得到固体B和提取液B，按重量份计，固体A：15％乙醇＝1:5，回流温度为40℃，回流比为2，回流时间1h；第二次将固体B经15％乙醇回流提取得到固体C和提取液C，按重量份计，固体B：15％乙醇＝1:1，回流温度为30℃，回流比为0.2，回流时间1h；
(4)提纯：合并提取液B、C，得到提取液D，通过HPD-100大孔吸附树脂，按重量份计，提取液D：树脂＝1:10，采用水洗脱，收集上柱流出液和水洗脱液，得到洗脱液D；
(5)过滤脱色：将洗脱液D经100kDa超滤膜过滤，然后将滤液用活性炭吸附脱色，按重量份计，活性炭重量：三七＝0.005:1，煮沸脱色1h，静置，过滤后得滤液E；
(6)浓缩：将滤液E浓缩、干燥，得到三七多糖提取物。
所述药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
1)将茯苓提取物、山楂提取物和沙棘提取物混合，加入5倍量的水中，20℃加热0.5h，过滤，得滤液1；
2)将滤液1与枸杞提取物、黄芪提取物混合，30℃加热0.5h，过滤，得滤液2，将滤液2浓缩干燥，得混合物1；
3)将混合物1与三七多糖提取物混合，即得。
实施例3
一种药物组合物，按照重量份数计，包括如下组分：三七多糖提取物30份、茯苓提取物10份、山楂提取物20份、沙棘提取物15份、枸杞提取物8份、黄芪提取物10份。
所述三七多糖提取物的制备方法包括以下步骤：
(1)预处理：将三七洗净干燥，粉碎过60目筛；
(2)浸提：将粉碎后的三七用85％乙醇浸泡，按重量份计，三七：85％乙醇＝1:10，得混合溶液，加0.1wt％的碳酸钠和0.6wt％的助剂，先后经过微波提取(功率为500W，时间为60s)、加热浸提(加热温度为70℃，时间为3h)后，过筛，得到固体A；所述助剂为吐温80、十二烷基硫酸钠和单硬脂酸甘油酯的混合物，三者质量比为1:4:3；
(3)回流提取：将固体A回流提取两次；第一次经25％乙醇回流提取得到固体B和提取液B，按重量份计，固体A：25％乙醇＝1:8，回流温度为60℃，回流比为6，回流时间3h；第二次将固体B经25％乙醇回流提取得到固体C和提取液C，按重量份计，固体B：25％乙醇＝1:3，回流温度为50℃，回流比为0.8，回流时间3h；
(4)提纯：合并提取液B、C，得到提取液D，通过SD-300大孔吸附树脂，按重量份计，提取液D：树脂＝1:15，采用水洗脱，收集上柱流出液和水洗脱液，得到洗脱液D；
(5)过滤脱色：将洗脱液D经150kDa超滤膜过滤，然后将滤液用活性炭吸附脱色，按重量份计，活性炭重量：三七＝0.01:1，煮沸脱色3h，静置，过滤后得滤液E；
(6)浓缩：将滤液E浓缩、干燥，得到三七多糖提取物。
所述药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
1)将茯苓提取物、山楂提取物和沙棘提取物混合，加入10倍量的水中，30℃加热1h，过滤，得滤液1；
2)将滤液1与枸杞提取物、黄芪提取物混合，35℃加热1h，过滤，得滤液2，将滤液2浓缩干燥，得混合物1；
3)将混合物1与三七多糖提取物混合，即得。
对比例1
与实施例1的区别仅在于三七多糖提取物制备过程中，步骤(2)不加氢氧化钠，其余条件均相同。
对比例2
与实施例1的区别仅在于三七多糖提取物制备过程中，步骤(2)不加助剂，其余条件均相同。
对比例3
与实施例1的区别仅在于三七多糖提取物制备过程中，步骤(2)的助剂用量不变，仅为吐温80，其余条件均相同。
对比例4
与实施例1的区别仅在于三七多糖提取物制备过程中，步骤(1)三七粉碎的目数为30目，其余条件均相同。
对比例5
与实施例1的区别仅在于三七多糖提取物制备过程中，步骤(1)三七粉碎的目数为70目，其余条件均相同。
对比例6
与实施例1的区别仅在于三七多糖提取物制备过程中，步骤(3)回流提取的回流比不同，具体如下：
(3)回流提取：将固体A回流提取两次；第一次经20％乙醇回流提取得到固体B和提取液B，按重量份计，固体A：20％乙醇＝1:7，回流温度为50℃，回流比为1，回流时间2h；第二次将固体B经20％乙醇回流提取得到固体C和提取液C，按重量份计，固体B：20％乙醇＝1:2，回流温度为40℃，回流比为1，回流时间2h。
对比例7
与实施例1的区别仅在于三七多糖提取物制备过程中，步骤(3)中两次回流提取采用的20％乙醇均替换为5％乙醇，其余条件均相同。
对比例8
与实施例1的区别仅在于三七多糖提取物制备过程中，步骤(3)中两次回流提取采用的20％乙醇均替换为35％乙醇，其余条件均相同。
对比例9
与实施例1的区别仅在于药物组合物的各组分用量配比不同，其余条件均相同，具体如下：
一种药物组合物，按照重量份数计，包括如下组分：三七多糖提取物20份、茯苓提取物15份、山楂提取物3份、沙棘提取物17份、枸杞提取物1份、黄芪提取物4份。
对比例10
与实施例1的区别仅在于药物组合物制备过程中各组分的混合顺序不同，其余条件均相同，具体如下：
所述药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
1)将茯苓提取物、山楂提取物、沙棘提取物、枸杞提取物和黄芪提取物混合，加入8倍量的水中，25℃加热0.75h，再在33℃加热0.75h，过滤，得滤液1；
2)将滤液1浓缩干燥，得混合物1；
3)将混合物1与三七多糖提取物混合，即得。
测试例1
实施例1的三七多糖提取物以及实施例1和对比例1-10的药物组合物在提高免疫力方面的效果测试。
1、实验细胞：小鼠巨噬细胞株RAW264.7购自上海细胞所，培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养液中(含100mg·L-1青霉素、100mg·L-1链霉素)，置于37℃，5％CO2细胞培养箱中，每天换液，隔2天传代1次；
2、药品的制备：将实验样品三七多糖提取物或药物组合物溶于一定量细胞培养液中，使得样品溶液终浓度为40μg/mL，过滤(0.22μm滤膜)除菌，-20℃分装保存样品溶液；
3、实验方法
采用MTT法检测对RAW264.7细胞的增殖效应：
MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5–di–phenytetrazoliumromide，MTT四甲基偶氮唑盐为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下四唑环开裂，生成蓝色的甲臜结晶，甲臜结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原)；还原生成的甲臜结晶可在DMSO溶解液中溶解，利用酶标仪测定570nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。
采用中性红法检测对RAW264.7细胞的吞噬效应：
正常情况下，巨噬细胞处于静息状态，被激活后吞噬活性增加，可以通过检测期吞噬活性来衡量其免疫活性的增加。静息状态的巨噬细胞受到刺激后，吞噬功能增强，吞噬活性的大小反映了药物的药理活性。中性红法检测巨噬细胞吞噬功能是通过巨噬细胞对中性红的吞噬量来反映巨噬细胞的吞噬能力，是快速筛选巨噬细胞吞噬功能调节成分的常用细胞模型。
4、分析方法：
调节RAW264.7细胞浓度为5×104个/mL，每孔加入细胞悬浮液100μL，培养4小时后洗去未贴壁细胞，然后分别加入不同的样品溶液作为实验组，同时设置1μg/mL的脂多糖LPS，空白对照孔作为对照组；每组均设6个复孔；5％CO2，37℃孵育24小时，倒置显微镜观察，每孔加入含5％MTT的培养液20μL，4小时后终止培养，小心吸去孔内培养液，每孔加入150μL二甲亚砜震荡10分钟，使结晶充分溶解，酶标仪570nm波长检测吸光值，计算细胞相对增殖率。细胞相对增殖率＝(实验组吸光值-对照组吸光值)/对照组吸光值×100％。
将样品溶液作用于终浓度为106/mL RAW264.7巨噬细胞24h作为实验组，同时设置1μg/mL的LPS，空白对照孔作为对照组。弃上清，加入0.1％中性红(100mg中性红/100mL生理盐水)溶液100μL/孔，培养3小时后以温PBS(30℃)洗3次，加入细胞裂解液(醋酸：乙醇＝1：1)200μL/孔，静置30min，用酶标仪测定巨噬细胞吞噬的中性红，以A540值表示，计算吞噬指数。吞噬指数＝(实验组吸光值/对照组吸光值-1)×100％。
5、实验结果见表1：
表1不同实验样品对RAW264.7细胞的增殖和吞噬功能影响
增殖率(％) 吞噬指数(％)
实施例1三七多糖提取物 15.67 59.83
实施例1药物组合物 20.36 68.79
对比例1药物组合物 17.15 63.35
对比例2药物组合物 16.47 62.16
对比例3药物组合物 17.52 63.84
对比例4药物组合物 16.27 61.46
对比例5药物组合物 16.79 62.52
对比例6药物组合物 17.88 64.20
对比例7药物组合物 17.36 63.57
对比例8药物组合物 16.03 60.33
对比例9药物组合物 15.91 60.09
对比例10药物组合物 18.25 64.61
本发明方案所公开的技术手段不仅限于上述所公开的技术手段，还包括由以上技术特征任意组合所组成的技术方案。以上所述是本发明的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和修饰，这些也将视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种三七多糖提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)预处理：将三七洗净干燥，粉碎过筛；
(2)浸提：将粉碎后的三七用乙醇浸泡，得混合溶液，加碱和助剂，先后经过微波提取、加热浸提后，过筛，得到固体A；
(3)回流提取：将固体A回流提取两次；第一次经乙醇回流提取得到固体B和提取液B，第二次将固体B经乙醇回流提取得到固体C和提取液C；
(4)提纯：合并提取液B、C，得到提取液D，通过大孔吸附树脂，收集流出液和洗脱液，得到洗脱液D；
(5)过滤脱色：将洗脱液D经超滤膜过滤，然后将滤液与活性炭混合，煮沸脱色，静置，过滤后得滤液E；
(6)浓缩：将滤液E浓缩、干燥，得到三七多糖提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中粉碎过40-60目筛；所述步骤(2)中，乙醇浓度为75-85％，按重量份计，三七：乙醇＝1:8-10，微波提取的功率为300-500W，提取时间为40-60s，加热温度为50-70℃，加热时间为1-3h。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中所述碱为碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾中的至少一种，所述碱的添加量为混合溶液的0.01-0.1wt％；所述助剂为吐温80、十二烷基硫酸钠、单硬脂酸甘油酯中的至少一种，优选为吐温80、十二烷基硫酸钠和单硬脂酸甘油酯的混合物，三者质量比为1:2-4:1-3，所述助剂添加量为混合溶液的0.4-0.6wt％。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，乙醇浓度为15-25％，第一次回流，按重量份计，固体A：15-25％乙醇＝1:5-8，回流比为2-6；第二次回流，按重量份计，固体B：15-25％乙醇＝1:1-3，回流比为0.2-0.8。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，按重量份计，提取液D：树脂＝1:10-15，大孔吸附树脂类型为HPD-100、D-101、SD-300中的一种；所述步骤(5)中，按重量份计，活性炭重量：三七＝0.005-0.01:1。
6.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1-5任一所述的制备方法制备得到的三七多糖提取物，优选地，按照重量份数计，包括如下组分：三七多糖提取物10-30份、茯苓提取物3-10份、山楂提取物5-20份、沙棘提取物5-15份、枸杞提取物1-8份、黄芪提取物6-10份。
7.一种权利要求6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将茯苓提取物、山楂提取物和沙棘提取物混合，加入水中，过滤，得滤液1；
2)将滤液1与枸杞提取物、黄芪提取物混合，过滤，得滤液2，将滤液2浓缩干燥，得混合物1；
3)将混合物1与三七多糖混合，即得。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将茯苓提取物、山楂提取物和沙棘提取物混合，加入5-10倍量的水中，20-30℃加热0.5-1h，过滤，得滤液1；
2)将滤液1与枸杞提取物、黄芪提取物混合，30-35℃加热0.5-1h，过滤，得滤液2，将滤液2浓缩干燥，得混合物1；
3)将混合物1与三七多糖提取物混合，即得。
9.一种药物制剂，其特征在于，包括权利要求6所述的药物组合物或权利要求7-8任一所述的制备方法制备得到的药物组合物。
10.权利要求6所述的药物组合物或权利要求7-8任一所述的制备方法制备得到的药物组合物或权利要求9所述的药物制剂在制备治疗免疫疾病药物中的应用。
CN202011071858.9A 2020-10-09 2020-10-09 一种含有三七多糖提取物的药物组合物及其制备方法 Active CN112111019B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011071858.9A CN112111019B (zh) 2020-10-09 2020-10-09 一种含有三七多糖提取物的药物组合物及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011071858.9A CN112111019B (zh) 2020-10-09 2020-10-09 一种含有三七多糖提取物的药物组合物及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112111019A true CN112111019A (zh) 2020-12-22
CN112111019B CN112111019B (zh) 2022-03-11

Family

ID=73797512

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011071858.9A Active CN112111019B (zh) 2020-10-09 2020-10-09 一种含有三七多糖提取物的药物组合物及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112111019B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114163486A (zh) * 2021-12-22 2022-03-11 云南三七科技有限公司 一种从三七中制备低聚糖的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102585029A (zh) * 2012-03-08 2012-07-18 玉溪市维和生物技术有限责任公司 一种生理活性三七多糖的制备方法及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102585029A (zh) * 2012-03-08 2012-07-18 玉溪市维和生物技术有限责任公司 一种生理活性三七多糖的制备方法及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李慧婷等: ""浸提辅助剂在中药提取中的应用及研究进展"", 《中国实验方剂学杂志》 *
陈红惠等: ""表面活性剂协同超声波酶法提取三七花总皂苷工艺优化及抗氧化活性研究"", 《食品与发酵工业》 *
韩淑琴等: ""表面活性剂协同酶解辅助水提荔枝核多糖"", 《食品科技》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114163486A (zh) * 2021-12-22 2022-03-11 云南三七科技有限公司 一种从三七中制备低聚糖的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN112111019B (zh) 2022-03-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108047343B (zh) 伊贝母总多糖的制备方法及其应用
CN108689852A (zh) 一种从平卧菊三七中提取绿原酸和异绿原酸的方法
CN101829164A (zh) 一种贯叶连翘提取物的生物制备方法
CN112294830B (zh) 一种富集稀有人参皂苷的西洋参叶产品
CN106810618A (zh) 一种从蛹虫草培养基中提取及连续富集多糖的方法
CN106722875A (zh) 一种灵芝三萜的提取方法及灵芝保健品
CN112111019B (zh) 一种含有三七多糖提取物的药物组合物及其制备方法
CN106749731A (zh) 一种小分子三七多糖提取物的制备方法及应用
CN110882285A (zh) 桑黄中活性物质的高效制备方法
CN111019008A (zh) 一种抗炎活性桑黄多糖shp及其制备方法
CN112315968B (zh) 一种富含稀有人参皂苷的人参叶产品
CN112121071B (zh) 一种以人参为原料制备的产品
CN110680802B (zh) 汉防己甲素注射液及其制备方法
KR20060117401A (ko) 상황버섯 및 가공인삼을 이용하여 다량의 Rg3와 Rg5를 함유하는 기능성 조성물의 제조방법 및 이를 이용한 기능성 다류의 제조방법
CN107326059A (zh) 一种天然来源的高活性抗衰老成分的制备方法及其应用
CN113527383B (zh) 一种利用工业级栲胶制备的高纯度植物单宁及其制备方法
CN112656828B (zh) 一种三七叶产品
Xing et al. Optimization of steaming process for polysaccharides from Panax notoginseng by box-behnken response surface methodology and comparison of immunomodulatory effects of raw and steamed Panax notoginseng polysaccharides
CN106749732A (zh) 新疆一枝蒿多糖提取方法
CN1245415C (zh) 三七叶皂苷的提取方法
CN100335493C (zh) 从中药材中提取菝葜皂甙元的方法
LU502945B1 (en) Efficient preparation method of active substances in sanghuangporus vaninii
CN116370517B (zh) 一种从蔓越莓中提取黄酮类物质的提取方法
CN110903168A (zh) 一种亚临界提取废弃烟叶中茄尼醇的方法
CN114288705B (zh) 一种从银杏叶提取物中去除银杏酸的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant