CN112080456A - 一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法 - Google Patents

一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法 Download PDF

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聂简琪
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Abstract

本发明提供了一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其能通过对发酵方法的各工艺步骤、参数条件以及培养基配制进行综合优化，以提高外源蛋白的表达水平。一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、在生长温度条件下培养大肠杆菌，生长温度为30‑37℃；步骤2、待细胞密度在OD600条件下达到40±5℃时，转为诱导温度下培养大肠杆菌，诱导温度为20‑35℃，诱导温度低于生长温度；步骤3、在诱导温度下培养0.5‑2 h后加入诱导剂进行诱导。采用本发明方法的表达调控，可有效地延长大肠杆菌培养周期，提高大肠杆菌的细胞密度，同时实现较高的蛋白表达量。

Description

一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法
技术领域
本专利涉及蛋白异源表达技术领域，具体涉及一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法。
背景技术
基于大肠杆菌的原核蛋白表达系统既是最常用的表达系统，也是最经济实惠的蛋白表达系统。大肠杆菌表达系统为代表，具有遗传背景清楚、成本低、表达产物分离纯化相对简单等优点。目前大肠杆菌表达体系主要通过大肠杆菌菌株的自然筛选或基因改造、载体构建或元件优化以提高外源蛋白的表达水平，但对大肠杆菌发酵培养方法的优化控制却鲜有提及，因此，提供一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，通过对发酵方法的各工艺步骤、参数条件以及培养基配制进行综合优化，以提高外源蛋白的表达水平，是本领域技术人员亟待解决的问题。
发明内容
本发明提供了一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其能通过对发酵方法的各工艺步骤、参数条件以及培养基配制进行综合优化，以提高外源蛋白的表达水平。
其技术方案是这样的，一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、在生长温度条件下培养大肠杆菌(转化有重组蛋白相应载体的大肠杆菌)，所述生长温度为30-37℃；
步骤2、待细胞密度在OD600条件下达到40±5时，转为诱导温度下培养大肠杆菌，所述诱导温度为20-35℃，所述诱导温度低于所述生长温度；
步骤3、在诱导温度下培养0.5-2 h后加入诱导剂进行诱导；
所述步骤1中，首先采用基础培养基培养大肠杆菌，待反应器中甘油耗尽，溶解氧浓度上升并达到峰值时，添加补料培养基，补料速度为1-10 mL/(h·L)（每升培养基每小时流加1-10 mL补料培养基）；
所述基础培养基包括酵母蛋白胨5-15 g/L，酵母浸出物10-25 g/L，甘油5-10 g/L，磷酸二氢钾1.3-2.0 g/L，磷酸氢二钾4.5-8.0 g/L，氯化钙0.1-0.3 g/L，氯化镁1-4 g/L，氯化钴0.002-0.01 g/L，硫酸铁0.15-0.5 g/L，硫酸锌0.02-0.05 g/L，钼酸钠0.01 g/L；
所述补料培养基包括甘油10-300 g/L，硫酸铵5-10 g/L，氯化铵5-10 g/L。
进一步的，所述基础培养基、所述补料培养基中的甘油由半乳糖、乳糖、麦芽糖、木糖中的一种以上替代，或者，甘油由甘油、半乳糖、乳糖、麦芽糖、木糖中的两种以上替代。
进一步的，所述诱导剂包括但不限于IPTG、乳糖、阿拉伯糖、色氨酸。
进一步的，所述重组蛋白包括但不限于VLP（病毒样颗粒）、抗体、多肽、酶制剂。
进一步的，所述大肠杆菌为自然筛选菌种或基因改造后的工程菌，包括但不限于BL21、W3110、DH5α。
本发明的方法，通过碳源筛选及控制、阶段变温、补料控制、补料培养基控制、诱导控制、溶解氧控制，微量元素控制等以及以上的多方式组合，提高外源蛋白表达量；具体的，在碳源筛选及控制上，以甘油、半乳糖、乳糖、麦芽糖、木糖中的一种或多种作为主要碳源，相对于以葡萄糖为主要碳源，可有效降低代谢副产物-乙酸的产生，减缓乙酸对大肠杆菌生长的抑制作用；在补料与阶段变温的控制上，通过当甘油耗尽时进行补料，待细胞生长至对数期降低细胞培养温度，并调节补料培养基流加速度，调节大肠杆菌的生长速度与代谢流，采用此表达调控，可有效地延长大肠杆菌培养周期，提高大肠杆菌的细胞密度，同时实现较高的蛋白表达量。
附图说明
图1是传统方式（以葡萄糖为主要碳源）利用大肠杆菌进行蛋白异源表工艺以及大肠杆菌生长曲线。
图2是传统方式（以葡萄糖为主要碳源）诱导后大肠杆菌比生长速率。
图3是采用本发明的进行VLP表达的工艺以及大肠杆菌生长曲线。
图4是采用本发明的诱导后大肠杆菌比生长速率。
图5是采用本发明的进行VLP表达的SDS-PAGE图。
图6是采用本发明的进行ScFv表达的工艺以及大肠杆菌生长曲线。
图7是采用本发明的诱导后大肠杆菌比生长速率。
图8是采用本发明的进行ScFv表达的SDS-PAGE图。
图9是采用本发明的进行普鲁兰酶表达的工艺以及大肠杆菌生长曲线。
图10是采用本发明的诱导后大肠杆菌比生长速率。
图11是采用本发明的进行普鲁兰酶表达的SDS-PAGE图。
图12是诱导后大肠杆菌比生长速率与蛋白表达产量图。
具体实施方式
实施例1：利用本发明的方法进行VLP的表达
1. 将SARS-CoV-2的S蛋白的核酸序列（NCBI，GeneID:43740568，如SEQ ID NO：1所示）由苏州金唯智生物科技有限公司合成，经Bgl II酶（NEB公司）与BamH I酶（NEB公司）双酶切后通过T4连接酶（NEB公司）连接于pET-22b(+)质粒（Novagen公司），构建表达质粒pET-22b(+)-S，将该质粒化转大肠杆菌BL21菌株（中国高校工业微生物资源与信息中心），即得到表达菌株，表达菌株需要加入IPTG诱导剂启动转录与翻译。
2. 按照表1与表2中培养基配方配制1 L基础培养基与200 mL补料培养基。将基础培养基装入反应器（Applikon 5L反应器）内，将补料培养基装入补料瓶中。pH电极与DO电极以及其他管路安装完成后置于灭菌锅中高温高压锅中灭菌（121℃，20 min）。
3. 灭菌结束后将反应器与控制器相连接，启动温度控制（温度设置为37℃），将空气进气量设置为1 vvm（每分钟通气量与罐体实际料液体积的比值）。不接菌种空置培养一天通过无菌检验后进行后续操作。
4. 启动pH控制与DO控制，将pH设置为7.0，将DO设置为30%。将经过摇瓶过夜活化后（OD600=3-5）的大肠杆菌种子液按照0.5%比例接种（接种终OD600=0.05-0.3）至反应器中。
5. 待反应器中甘油耗尽时，溶解氧浓度上升，出现DO峰，启动补料，补料速度为20mL/h。
6. 待细胞密度（OD600）达到40±5℃时，将反应器温度由37℃更改为23℃，继续培养1 h。
7. 向反应器中加入终浓度为0.5 mM的IPTG（诱导剂），继续培养24 h。
8. 待发酵结束后，收获培养基并离心去除上清。菌体经PBS溶液重悬后进行高压匀浆，并经过12000 rpm离心后取上清测定VLP滴度。另取适量上清进行SDS-PAGE分析。
9. VLP滴度采用新冠病毒S蛋白酶联免疫（ELISA）试剂盒（北京义翘神州科技有限公司）进行测定，具体操作参考试剂盒说明书，滴度以mg/L表示。
10. 过程工艺以及大肠杆菌生长曲线如图2所示，SDS-PAGE结果如图3所示。
由于大肠杆菌发酵的传统方式以葡萄糖作为培养基中的主要碳源（例如《重组大肠杆菌的高密度培养及在丙谷二肽生产中的应用》，DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.023810；《大肠杆菌工程菌高密度发酵生产虾青素》，DOI：10.27103/d.cnki.ghebu.2020.001037）等），本专利中以传统方式作为实验对照组。
由实验结果可以看出，与传统方式（过程工艺与大肠杆菌生长曲线如图1所示）相比，利用本发明的表达方法，大肠杆菌的细胞密度可以提高三倍以上。由VLP滴度以及SDS-PAGE结果可以看，采用本发明的表达方法，可明显提高VLP的表达量。结合病毒滴度数据，VLP表达量由102 mg/L提高至390 mg/L，提高3倍以上。
表1 基础培养基配方
Figure DEST_PATH_IMAGE001
表2 补料培养基
Figure DEST_PATH_IMAGE002
实施例2：利用本发明的方法进行ScFv(单链抗体)的表达
1. scFv基因片段（如SEQ ID NO：2所示）由苏州金唯智生物科技有限公司合成，经NdeI酶（NEB公司）与Xho I酶（NEB公司）双酶切后通过T4连接酶（NEB公司）连接于pBY质粒（Novagen公司），构建表达质粒pBW-scFv，将该质粒化转大肠杆菌W3110，即得到表达菌株，表达菌株需要加入IPTG诱导剂启动转录与翻译。
2. 按照表1与表2中培养基配方配制1 L基础培养基与200 mL补料培养基。将基础培养基装入反应器内，将补料培养基装入补料瓶中。pH电极与DO电极以及其他管路安装完成后置于灭菌锅中高温高压锅中灭菌（121℃，20 min）。
3. 灭菌结束后将反应器与控制器相连接，启动温度控制（温度设置为37℃），将空气进气量设置为1 vvm（每分钟通气量与罐体实际料液体积的比值）。不接菌种空置培养一天通过无菌检验后进行后续操作。
4. 启动pH控制与DO控制，将pH设置为7.0，将DO设置为30%。将经过摇瓶过夜活化后的大肠杆菌种子液按照2 %比例接种（接种终OD600=0.05-0.3）至反应器中。
5. 待反应器中甘油耗尽时（溶氧曲线上升，出现DO峰）启动补料，补料速度为5mL/h。
6. 待细胞密度（OD600）达到40±5℃时，将反应器温度由37℃更改为23℃，继续培养1 h。
7. 向反应器中加入终浓度为0.5 mM的IPTG（诱导剂），并将补料速度为3 mL/h，继续培养12-30 h。
8. 待发酵结束后，收获培养基并离心去除上清。菌体经PBS溶液重悬后进行高压匀浆，并经过12000 rpm离心后取上清采用ELSIA测定ScFv表达量。另取适量上清进行SDS-PAGE分析。
9. ScFv表达量的检测采用ELISA方法，即 scFv 纯品为标准品，按一定比例稀释至不同浓度（1000、500、250、125、62.5、31.25 mg/L）后，各取 50 μL 加入酶标板(Corning，USA) 。另将样品稀释至合适的倍数（2、4、8、16倍）后，各取 50 μL 加入酶标板，37℃温育 1 h 后用洗板机洗涤去未结合的蛋白，每孔加入300 μL 5% 脱脂牛奶封闭1 h后洗版。每孔加入50 μL HRP-Protein A 37℃温育 1 h 后洗板。加入 100 μL 显色液，37℃ 避光 15 min 后，每孔加入100 μL 2 mol /L 硫酸终止反应，用酶标仪读取波长在450 nm 和620 nm 处的差值。根据标准曲线计算样品中ScFv含量。
10. 过程工艺以及大肠杆菌生长曲线如图4所示，SDS-PAGE结果如图5所示。
由实验结果可以看出，利用本发明的表达方法，大肠杆菌的细胞密度（OD600）可以达到90以上。由ScFv表达量以及SDS-PAGE结果可以看，采用本发明的表达方法，可明显提高ScFv的表达量。结合表达量数据，ScFv表达量由62 mg/L（例如：《重组人抗HBsAg单链抗体工程菌的中试发酵工艺研究》，DOI：1005-1678(2005)03-0141-03）提高至392 mg/L，ScFv表达量提高6倍以上。
实施例3：利用本发明的方法进行普鲁兰酶的表达
1. 普鲁兰酶的核酸序列（NCBI，GenBank Accession No:AX203843，如SEQ ID NO：3所示）由苏州金唯智生物科技有限公司合成，经Bgl II酶（NEB公司）与BamH I酶（NEB公司）双酶切后通过T4连接酶（NEB公司）连接于pET-22b(+)质粒（Novagen公司），构建表达质粒pET-22b(+)-pul，将该质粒化转大肠杆菌BL21菌株（中国高校工业微生物资源与信息中心），即得到表达菌株，表达菌株需要加入IPTG诱导剂启动转录与翻译。
2. 按照表1与表2中培养基配方配制1 L基础培养基与200 mL补料培养基，对照试验采用传统LB培养基做为对照。将基础培养基装入反应器内，将补料培养基装入补料瓶中。pH电极与DO电极以及其他管路安装完成后置于灭菌锅中高温高压锅中灭菌（121℃，20min）。
3. 灭菌结束后将反应器与控制器相连接，启动温度控制（温度设置为37℃），将空气进气量设置为1 vvm（每分钟通气量与罐体实际料液体积的比值）。不接菌种空置培养一天通过无菌检验后进行后续操作。
4. 启动pH控制与DO控制，将pH设置为7.0，将DO设置为30%。将经过摇瓶过夜活化后的大肠杆菌种子液按照1 %比例接种（接种终OD600=0.05-0.3）至反应器中。
5. 待反应器中甘油耗尽时启动补料，补料速度为5 mL/h。
6. 待细胞密度（OD600）达到40±5℃时，将反应器温度由37℃更改为23℃，同时将DO更改为20%，继续培养1 h。
7. 向反应器中加入终浓度为0.5 mM的IPTG（诱导剂），继续培养30 h。
8. 待发酵结束后，收获培养基并离心去除上清。菌体经PBS溶液重悬后进行高压匀浆，并经过12000 rpm离心后取上清测定普鲁兰酶含量。另取适量上清进行SDS-PAGE分析。
9. 普鲁兰酶的检测方法为：取96孔MTP，用8通道移液器依次向每孔加入200 μL普鲁兰底物（1%的普鲁兰多糖，0. 1 mol/L pH 5.2 的乙酸-乙酸钠缓冲液），100 μL上清（样品经破碎后，4000 rpm离心10 min）（同时设置标准曲线，即加入100 μL葡萄糖标准品（依次加入0，12，24，36，48，60，72，84，96 μL的葡萄糖母液（50 μmol·L-1），并依次补加蒸馏水至100 μL），用硅胶垫密封后混匀，60 ℃水浴反应10 min，加入450 μL DNS试剂终止反应后立即沸水浴10 min。取96孔酶标板，用8通道移液器依次向每孔加入190 μL 蒸馏水，10 μL冷却后的反应液，540 nm下测定吸光度。普鲁兰酶酶活（U）单的定义为：在上述特定的测定方式下，单位时间（min）催化普鲁兰多糖水解并生成还原糖，其还原力相当于1 μmol葡萄糖所需的酶的量。根据葡萄糖标准品的吸光度绘制标准曲线并计算样品的酶活。
10. 过程工艺以及大肠杆菌生长曲线如图6所示，SDS-PAGE结果如图7所示。
由实验结果可以看出，利用本发明的表达方法，大肠杆菌的细胞密度（OD600）可以达到90以上。由SDS-PAGE结果可以看，采用本发明的表达方法，可明显提高普鲁兰酶的表达量。结合表达量数据，普鲁兰酶表达量由1200 U/mL（《重组大肠杆菌产普鲁兰酶发酵条件优化》，DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201507005）提高至1920 U/mL，表达量提高1.6倍。
11. 图12可以看出，通过多组合生长开关控制不同比生长比率可以大大提高产物产量的提高。
序列表
<110> 江南大学
<120> 一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 3805
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ggaagatctt ccatgtttgt ttttcttgtt ttattgccac tagtctctag tcagtgtgtt 60
aatcttacaa ccagaactca attaccccct gcatacacta attctttcac acgtggtgtt 120
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tgaaccacaa atcattacta cagacaacac atttgtgtct ggtaactgtg atgttgtaat 3360
aggaattgtc aacaacacag tttatgatcc tttgcaacct gaattagact cattcaagga 3420
ggagttagat aaatatttta agaatcatac atcaccagat gttgatttag gtgacatctc 3480
tggcattaat gcttcagttg taaacattca aaaagaaatt gaccgcctca atgaggttgc 3540
caagaattta aatgaatctc tcatcgatct ccaagaactt ggaaagtatg agcagtatat 3600
aaaatggcca tggtacattt ggctaggttt tatagctggc ttgattgcca tagtaatggt 3660
gacaattatg ctttgctgta tgaccagttg ctgtagttgt ctcaagggct gttgttcttg 3720
tggatcctgc tgcaaatttg atgaagacga ctctgagcca gtgctcaaag gagtcaaatt 3780
acattacaca taacgcggat ccgcg 3805
<210> 2
<211> 726
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gggtttcata tgaaacccga agtacaactg ctggagagcg gtggcggcct ggttcaaccg 60
ggtggttccc tgcgcctgtc ctgtgcggca tctggtttca ccttcgcata ttatggaatg 120
aactgggttc gccaagctcc gggcaaaggc ctggaatggg taagctggat aaacacctac 180
actggagagc caacctatgc tgatgacttc aagggacgct ttaccatttc tcgtgataac 240
tccaaaaaca ccctgtacct gcagatgaac tccctgcgcg ccgaggatac tgcggtgtac 300
cattgtgcgc tgcaaaatta ctacggtaat aataacagat acttcgatgt ctggggtcag 360
ggtactctgg tcaccgtgag ctctgcgtct accgatatcc agatgaccca gtctccgtct 420
tctctgtctg cgagcgttgg tgaccgtgtt accatcactt gcagggccag ctcaagtgta 480
aattacatgc actggtatca gcagaaaccg ggcaaagcgc cgaaactgct gatcctggcc 540
acatccatcc tggcttctgg tgttccgtct cgtttctctg gcagcggttc tggtaccgac 600
ttcaccctga ctatctctag cctgcagccg gaagacttcg caacctacta ttgccagcag 660
tggtatagta acccacggac gttcggtcag ggtaccaaag tagaaatcaa acgtccgctc 720
gagcgg 726
<210> 3
<211> 2790
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ggaagatctt ccgattctac ttcgactaaa gttattgttc attatcatcg ttttgattcc 60
aactatacga attgggacgt ctggatgtgg ccttatcagc ctgttaatgg taatggagca 120
gcttaccaat tcactggtac aaatgatgat tttggcgctg ttgcagatac gcaagtgcct 180
ggagataata cacaagttgg tttgattgtt cgtaaaaatg attggagcga gaaaaataca 240
ccaaacgatc tccatattga ccttgcaaaa ggccatgaag tatggattgt acaaggggat 300
ccaactattt attacaatct gagcgacgca caggctgccg caataccatc tgtttcaaat 360
gcctatcttg atgatgaaaa aacagtacta gcaaagctaa gtatgccgat gacgctggcg 420
gatgctgcaa gcggctttac ggttatagat aaaaccacag gtgaaaaaat ccctgtcacc 480
tctgctgtat ccgcaaatcc ggtaactgcc gttcttgttg gagatttaca acaggctttg 540
ggagcagcga ataattggtc accagatgat gatcacacac tgctaaaaaa gataaatcca 600
aacctttacc aattatcggg gacacttcca gctggtacat accaatataa gatagccttg 660
gaccattctt ggaatacctc ctatccaggt aacaatgtaa gtcttactgt tcctcaggga 720
ggggaaaagg ttacctttac ctatattcca tctaccaacc aggtattcga tagcgtcaat 780
catcctaacc aagcattccc tacatcctca gcaggggtcc agacaaattt agtccaattg 840
actttagcga gtgcaccgga tgtcacccat aatttagatg tagcagcaga cggttacaaa 900
gcgcacaata ttttaccaag gaatgtttta aatctgccgc ggtatgatta tagtggaaat 960
gatttgggta atgtttattc aaaggatgca acatccttcc gggtatgggc tccaacagct 1020
tcgaatgtcc agttgctttt atacaatagt gagaaaggtt caataactaa acagcttgaa 1080
atgcaaaaga gtgataacgg tacatggaaa cttcaggttt ctggtaatct tgaaaactgg 1140
tattatctat atcaagtcac agtgaatggg acaacacaaa cggcagttga tccatatgcg 1200
cgtgctattt ctgtcaatgc aacacgcggt atgattgtgg acctaaaagc taccgatcct 1260
gcagggtggc agggagatca tgaacagaca cctgcgaatc cagtagatga agtgatttat 1320
gaagcgcatg tacgcgattt ttcgattgat gctaattcag gtatgaaaaa taaagggaag 1380
tatttagcgt ttacagagca tggaacaaaa ggaccggatc atgtaaagac aggtattgat 1440
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attgatgaga cccagcctga tacgtataac tggggctacg atccaaggaa ctataacgta 1560
ccagagggag cttatgccac aactccagaa ggaacagcgc gtataacaga attaaagcaa 1620
ttaattcaaa gccttcatca gcagcggatt ggtgtcaata tggatgttgt ttataaccat 1680
acctttgatg tgatggtttc tgattttgat aaaattgtcc cgcaatatta ttatcgtacc 1740
gatagtaatg gcaattatac gaacggatca ggttgcggca atgaattcgc gactgagcat 1800
ccaatggcac aaaagtttgt gcttgattca gttaattatt gggtaaatga gtaccacgtg 1860
gatggcttcc gttttgactt aatggctctt ttaggaaaag acacgatggc aaaaatatca 1920
aacgagctgc atgccattaa tcctggtatt gttttatatg gagaaccatg gactggcggc 1980
acatcgggat tatctagcga ccagcttgta acgaagggtc aacaaaaggg attaggaatt 2040
ggcgttttca acgataatat acgtaatggg ctcgatggga acgtgtttga taaaacggca 2100
caaggctttg caacaggaga tccaaaccag gtggatgtca ttaaaaatgg agtaatcggt 2160
agtattcaag attttacttc agcacctagc gaaacgatta actatgttac aagccatgat 2220
aacatgacgc tttgggataa aattttagca agtaatccaa gtgacactga ggctgaccga 2280
attaaaatgg atgaattggc acatgccgta gtattcactt cacaaggtgt accatttatg 2340
caaggtggag aagaaatgct gaggacaaaa ggcggaaatg ataacagtta taacgctgga 2400
gatagtgtga atcagttcga ctggtcaaga aaggcgcaat ttaaggatgt ttttgactac 2460
ttttctagta tgattcatct tcgtaatcag cacccggcat tcaggatgac gacagcggat 2520
caaattaaac agaatcttac attcttagaa agcccaacaa acacggtagc tttcgagtta 2580
aagaattatg caaaccatga tacatggaaa aatataattg tcatgtataa cccaaataag 2640
acttcccaaa cccttaatct accaagtgga gattggacca ttgtaggatt gggagatcaa 2700
ataggtgaga aatcattagg gcatgtaatg ggtaatgttc aagtaccggc tataagtacg 2760
cttattctca aacaataacg cggatccgcg 2790

Claims (5)

1.一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、在生长温度条件下培养大肠杆菌，所述生长温度为30-37℃；
步骤2、待细胞密度在OD600条件下达到40±5℃时，转为诱导温度下培养大肠杆菌，所述诱导温度为20-35℃，所述诱导温度低于所述生长温度；
步骤3、在诱导温度下培养0.5-2 h后加入诱导剂进行诱导；
所述步骤1中，首先采用基础培养基培养大肠杆菌，待反应器中甘油耗尽，溶解氧浓度上升并达到峰值时，添加补料培养基，补料速度为1-10 mL/h·L（每升培养基每小时流加1-10 mL补料培养基）；
所述基础培养基包括酵母蛋白胨5-15 g/L，酵母浸出物10-25 g/L，甘油5-10 g/L，磷酸二氢钾1.3-2.0 g/L，磷酸氢二钾4.5-8.0 g/L，氯化钙0.1-0.3 g/L，氯化镁1-4 g/L，氯化钴0.002-0.01 g/L，硫酸铁0.15-0.5 g/L，硫酸锌0.02-0.05 g/L，钼酸钠0.01 g/L；
所述补料培养基包括甘油10-300 g/L，硫酸铵5-10 g/L，氯化铵5-10 g/L。
2.根据权利要求1所述的一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于：所述基础培养基、所述补料培养基中的甘油由半乳糖、乳糖、麦芽糖、木糖中的一种以上替代，或者，甘油由甘油、半乳糖、乳糖、麦芽糖、木糖中的两种以上替代。
3.根据权利要求1所述的一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于：所述诱导剂包括但不限于IPTG、乳糖、阿拉伯糖、色氨酸。
4.根据权利要求1所述的一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于：所述重组蛋白包括但不限于VLP（病毒样颗粒）、抗体、多肽、酶制剂。
5.根据权利要求1所述的一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于：所述大肠杆菌为自然筛选菌种或基因改造后的工程菌，包括但不限于BL21、W3110、DH5α。
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