CN112063726A - 一种用于检测奥司他韦耐药突变的引物、探针及检测方法 - Google Patents

一种用于检测奥司他韦耐药突变的引物、探针及检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种用于检测奥司他韦耐药突变的引物、探针及检测方法，涉及基因检测技术领域。本发明提供一种用于检测奥司他韦耐药突变的引物和探针，所述引物和探针为：正向引物F：5’‑ATGTGCATGTGTAAATGGTTCTTGCTTTAC‑3’；反向引物及探针P：5’‑GAATCAGGGTAACAGGAGCATTCCTCATAG[FAM‑dT]A[THF][BHQ1‑dT]AATTAGGGGCTTTCA[C3‑spacer]‑3’。本发明中基于RT‑RAA法的耐药突变检测技术具有快速、简单，对仪器要求低等优点，可以在临床上用于病毒耐药突变的POCT检测。对于甲型H1N1流感患者特别是重症病例和免疫抑制病例的耐药突变鉴定、及时改变用药策略具有很高的应用价值。通过临床样本测试，本方法与二代测序方法的检测结论完全一致，在检测速度、精准度和临床POCT可行性等综合能力上要优于荧光RT‑PCR、Sanger一代测序和二代测序等方法。

Description

一种用于检测奥司他韦耐药突变的引物、探针及检测方法
技术领域
本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及一种用于检测奥司他韦耐药突变的引物、探针及检测方法。
背景技术
奥司他韦作为抗流感特效药，可以胶囊或颗粒口服，即可以预防又可以治疗，在临床上已经作为首选药被越来越多地应用，甚至亦可作为流感大流行期的抗病毒药物储备。但是随着奥司他韦的广泛使用，病毒病原体耐药性的问题随之而来。如何适度地应用奥司他韦，既能满足临床治疗的给药需求，又不会因为药物滥用引发耐药株传播而造成无药可用的尴尬境地，则需要精准及时的耐药监测数据支持。
目前针对流感病毒的神经氨酸酶抑制剂(NAI)耐药性检测主要包括两种：表型(Phenotype)检测和基因型(Genotype)检测。表型检测主要通过基于荧光底物MUNANA的神经氨酸酶活性和动力学参数来测量，检测前需要获取病毒纯培养物，费时费力。基因型检测方法目前主流的是基因Sanger测序和荧光定量PCR，可直接对原始样本进行检测，避免了病毒分离和增殖等费时费力的操作，且荧光定量PCR还可实现3-4小时检测耐药性突变，相比较测序和表型检测方法要简单迅速许多。但是荧光定量PCR对仪器的要求较高，需要调试校准，适合于微生物实验室操作，尚不能满足于临床应用。除了以上技术，二代测序方法还可以准确检测病毒群体中敏感/耐药毒株的比例。在甲型H1N1流感和H7N9禽流感感染患者中，均出现过敏感和耐药毒株共存的情况。而通过二代测序，含量低于总病毒数目1％的耐药毒株即可检测到。这种同时含有敏感/耐药的混合病毒在表型检测时往往表现出敏感的性状，掩盖了耐药毒株出现的事实，因此真实的耐药率有可能被严重低估。二代测序方法可以很好的解释表型检测结果所带来的困惑。但二代测序对临床样本的质量要求高、测序成本贵、测序周期长，使得其在临床的应用还很有限。
综上所述，亟需建立一套针对甲型H1N1流感病毒奥司他韦耐药突变的快速检测方法，进一步探索便捷的即时检测(POCT)临床应用，可以为流感病毒感染患者特别是重症和免疫抑制患者药物应用的精准医疗提供技术支撑。
发明内容
解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种用于检测奥司他韦耐药突变的引物、探针及检测方法，解决背景技术所提出的至少一个问题。
技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：
第一方面：提供一种用于检测奥司他韦耐药突变的引物和探针，所述引物和探针为：
正向引物F：
5’-ATGTGCATGTGTAAATGGTTCTTGCTTTAC-3’；
反向引物及探针P：
5’-GAATCAGGGTAACAGGAGCATTCCTCATAG[FAM-dT]A[THF][BHQ1-dT]AATTAGGGGCTTTCA[C3-spacer]-3’。
优选的，FAM-dT表示携带了荧光素基团FAM的胸腺嘧啶脱氧核苷酸；
THF表示四氢呋喃；
BHQ-dT表示携带了荧光淬灭基团BHQ的胸腺嘧啶脱氧核苷酸；
C3-spacer表示3’末端碱基由磷酸阻滞剂修饰。
第二方面，提供一种用于检测奥司他韦耐药突变的检测方法，包括以下步骤：核酸提取；
以上述的核酸样本为模板，利用上述引物和探针分别进行荧光RT-RAA等温扩增反应获得扩增曲线；
对扩增曲线分析，确定是否有奥司他韦耐药突变。
优选的，所述荧光RT-RAA等温扩增反应的反应体系为：
Figure BDA0002692970960000021
Figure BDA0002692970960000031
优选的，上述混合液加入到RT-RAA基础反应管中混匀，加入2.5μl 280mM醋酸镁溶液并充分混匀；在39℃条件下反应30min，并实时观察结果。
有益效果
本发明提供了一种用于检测奥司他韦耐药突变的引物、探针及检测方法。与现有技术相比，具备以下有益效果：
本发明中基于RT-RAA法的耐药突变检测技术具有快速、简单，对仪器要求低等优点，可以在临床上用于病毒耐药突变的POCT检测。对于甲型H1N1流感患者特别是重症病例和免疫抑制病例的耐药突变鉴定、及时改变用药策略具有很高的应用价值。通过临床样本测试，本方法与二代测序方法的检测结论完全一致，在检测速度、精准度和临床POCT可行性等综合能力上要优于荧光RT-PCR、Sanger一代测序和二代测序等方法。
附图说明
图1为工作原理；
图2为检测方法的灵敏度实验的结果示意图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明的目的是提供一套引物和探针，通过重组酶介导的等温扩增技术，在39度恒温下检测甲型H1N1流感病毒奥司他韦关键耐药突变NA-His275Tyr，以实现耐药突变的POCT临床应用。
根据重组酶介导的等温扩增法，设计用于检测甲型H1N1流感病毒奥司他韦耐药突变NA-His275Tyr的引物、探针。配合使用重组酶成品试剂盒RT-RAA Kit，在39度恒温下进行30分钟等温扩增，可实现对临床样本和病毒培养物核酸提取物的耐药突变的现场快速鉴定，检测灵敏度可达100个拷贝。
一方面本发明实施例提供一种用于检测奥司他韦耐药突变的引物和探针，所述引物和探针为：
正向引物F：
5’-ATGTGCATGTGTAAATGGTTCTTGCTTTAC-3’；
反向引物及探针P：
5’-GAATCAGGGTAACAGGAGCATTCCTCATAG[FAM-dT]A[THF][BHQ1-dT]AATTAGGGGCTTTCA[C3-spacer]-3’。
其中的，FAM-dT表示携带了荧光素基团FAM的胸腺嘧啶脱氧核苷酸；
THF表示四氢呋喃；
BHQ-dT表示携带了荧光淬灭基团BHQ的胸腺嘧啶脱氧核苷酸；
C3-spacer表示3’末端碱基由磷酸阻滞剂修饰。
本发明中基于RT-RAA法的耐药突变检测技术具有快速、简单，对仪器要求低等优点，可以在临床上用于病毒耐药突变的POCT检测。对于甲型H1N1流感患者特别是重症病例和免疫抑制病例的耐药突变鉴定、及时改变用药策略具有很高的应用价值。通过临床样本测试，本方法与二代测序方法的检测结论完全一致，在检测速度、精准度和临床POCT可行性等综合能力上要优于荧光RT-PCR、Sanger一代测序和二代测序等方法。具体的工作原理如说明书附图1所示。
下面结合具体的实施例，详细的阐述一种用于检测奥司他韦耐药突变的检测方法：
荧光RT-RAA反应、检测及判断
通过全自动磁珠法核酸提取法在西安天隆NP968核酸提取仪上进行核酸提取。
采用上述设计的引物、探针，以及RT-RAA反应试剂盒(本实施例具体采用了江苏奇天基因生物科技有限公司的RT-RAA基础试剂盒)，进行扩增反应。反应体系如下：
Figure BDA0002692970960000041
Figure BDA0002692970960000051
以上混合液加入到RT-RAA基础反应管中混匀，最后加入2.5μl 280mM醋酸镁溶液并用RAA-B600漩涡振荡器(江苏奇天)充分混匀。
将上述步骤准备的反应管放入RAA-F1610检测仪(江苏奇天)中39℃条件下反应30min，并实时观察结果。
阴性对照：FAM通道无扩增曲线，且无Tt值；
阳性对照：FAM通道有标准扩增曲线，Tt值≤10min。
上述阴阳性对照需在同一次实验室中同时满足，否则实验无效，需重新测试。
当阴阳性质控均正常时，当所测试样本FAM通道有扩增曲线，可判定为NA-His275Tyr奥司他韦耐药突变；若所测试样本FAM通道无扩增曲线，可判定为未发生NA-His275Tyr奥司他韦耐药突变。
灵敏度实验
本实验验证该检测方法的最低检测限，采用浓度为1.0×108copies/mL、1.0×107copies/mL、1.0×106copies/mL、1.0×105copies/mL、1.0×104copies/mL、1.0×103copies/mL、1.0×102copies/mL、10copies/mL。通过pseudovirus-275Y假病毒提取的核酸用于实验过程的质控和定量。表明，该检测方法的检测限可达1.0×102copies/mL，结果如图2所示。
混合突变检测实验
通过阳性质控品pseudovirus-275Y假病毒提取核酸和阴性质控品pseudovirus-H275核酸以不同比例混合，在1.0×105copies/mL浓度下得到0％、1％、2％、3％、5％、10％、20％、50％、80％、90％、95％、97％、98％、99％、100％不同NA-His275Tyr突变比例的混合突变样本，用于检测病毒混合突变情况下RT-RAA对NA-His275Tyr突变的检测能力。结果表明，在混合突变存在时，高于3％的较低突变比例就可以正常检出。
临床样本奥司他韦耐药突变检测应用
本实施例随机选取了211例发热门诊流感样病例轻症样本和63份流感重症住院病例临床样本进行了针对甲型H1N1流感病毒流行株NA-His275Tyr耐药突变的重组酶介导的等温扩增应用实验。
211例轻症样本经检测均为H275，未发生耐药突变，结果经一代测序验证准确。63份重症样本中有5份由RT-RAA检出NA-His275Tyr耐药突变，占重症样本的7.94％。经高通量二代测序验证，均证实为敏感/耐药突变混合。如果以Sanger测序机器辩读，结果为两例耐药突变275Y、一例为275H/Y混合、两例为敏感H275。结果凸显出本研究方法在检测质量上优于Sanger测序。且本方法简单高效，采用15分钟快速核酸提取后，进行30分钟的RT-RAA实验，20至55分钟内可以判读病毒株是否对奥司他韦耐药，检测速度上明显优于高通量二代测序。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
序列表
<110> 杭州市疾病预防控制中心
<120> 一种用于检测奥司他韦耐药突变的引物、探针及检测方法
<130> 1
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atgtgcatgt gtaaatggtt cttgctttac 30
<210> 2
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(49)
<223> n(33)=THF
<400> 2
gaatcagggt aacaggagca ttcctcatag tantaattag gggctttca 49
<210> 3
<211> 165
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(165)
<223> n(134)=C/T
<400> 3
atgtgcatgt gtaaatggtt cttgctttac cataatgacc gatggaccaa gtgatggaca 60
ggcctcatac aaaatcttca gaatagaaaa gggaaagata atcaaatcag tcgaaatgaa 120
agcccctaat tatnactatg aggaatgctc ctgttaccct gattc 165

Claims (5)

1.一种用于检测奥司他韦耐药突变的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针为：
正向引物F：
5’-ATGTGCATGTGTAAATGGTTCTTGCTTTAC-3’；
反向引物及探针P：
5’-GAATCAGGGTAACAGGAGCATTCCTCATAG[FAM-dT]A[THF][BHQ1-dT]AATTAGGGGCTTTCA[C3-spacer]-3’。
2.如权利要求1所述的用于检测奥司他韦耐药突变的引物和探针，其特征在于，FAM-dT表示携带了荧光素基团FAM的胸腺嘧啶脱氧核苷酸；
THF表示四氢呋喃；
BHQ-dT表示携带了荧光淬灭基团BHQ的胸腺嘧啶脱氧核苷酸；
C3-spacer表示3’末端碱基由磷酸阻滞剂修饰。
3.一种用于检测奥司他韦耐药突变的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
核酸提取；
以上述的核酸样本为模板，利用权利要求1或2的引物和探针分别进行荧光RT-RAA等温扩增反应获得扩增曲线；
对扩增曲线分析，确定是否有奥司他韦耐药突变。
4.如权利要求3所述用于检测奥司他韦耐药突变的检测方法，其特征在于，所述荧光RT-RAA等温扩增反应的反应体系为：
Figure FDA0002692970950000011
5.如权利要求4所述用于检测奥司他韦耐药突变的检测方法，其特征在于，上述混合液加入到RT-RAA基础反应管中混匀，加入2.5μl 280mM醋酸镁溶液并充分混匀；在39℃条件下反应30min，并实时观察结果。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007095155A2 (en) * 2006-02-13 2007-08-23 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention Primers and probes for detection and discrimination of types and subtypes of influenza viruses
CN101928787A (zh) * 2010-08-20 2010-12-29 浙江省疾病预防控制中心 检测甲型h1n1流感病毒抗药性突变的引物和探针及方法
CN103328629A (zh) * 2010-11-02 2013-09-25 因姆诺莱夫公司 针对大流行性甲型流感病毒h1n1的新型疫苗
CN103562205A (zh) * 2010-12-16 2014-02-05 沃泰克斯药物股份有限公司 流感病毒复制的抑制剂
CN107574262A (zh) * 2017-10-25 2018-01-12 宁波国际旅行卫生保健中心 一种用于检测甲型h1n1病毒的荧光rt‑raa引物、探针及检测方法
CN111321233A (zh) * 2020-04-10 2020-06-23 四川国际旅行卫生保健中心(成都海关口岸门诊部) 一种检测日本吸血虫的荧光raa引物、探针及检测方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007095155A2 (en) * 2006-02-13 2007-08-23 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention Primers and probes for detection and discrimination of types and subtypes of influenza viruses
CN101928787A (zh) * 2010-08-20 2010-12-29 浙江省疾病预防控制中心 检测甲型h1n1流感病毒抗药性突变的引物和探针及方法
CN103328629A (zh) * 2010-11-02 2013-09-25 因姆诺莱夫公司 针对大流行性甲型流感病毒h1n1的新型疫苗
CN103562205A (zh) * 2010-12-16 2014-02-05 沃泰克斯药物股份有限公司 流感病毒复制的抑制剂
CN107574262A (zh) * 2017-10-25 2018-01-12 宁波国际旅行卫生保健中心 一种用于检测甲型h1n1病毒的荧光rt‑raa引物、探针及检测方法
CN111321233A (zh) * 2020-04-10 2020-06-23 四川国际旅行卫生保健中心(成都海关口岸门诊部) 一种检测日本吸血虫的荧光raa引物、探针及检测方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JUN LI等: "Reverse transcription recombinase-aided amplification assay for rapid detection of the influenza A(H1N1)pdm09 H275Y mutation that confers oseltamivir resistance", MOLECULAR ANDCELLULARPROBES, vol. 60, pages 101771 *
SUXIA DUAN等: "A probe-directed recombinase amplification assay for detection of MTHFR A1298C polymorphism associated with congenital heart disease", BIOTECHNIQUES, vol. 64, pages 211 - 217 *
YASUSHI SUZUKI等: "Identification of Oseltamivir Resistance among Pandemic and Seasonal Influenza A (H1N1) Viruses by an His275Tyr Genotyping Assay Using the Cycling Probe Method", JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, vol. 49, pages 125 - 130 *
周冬根等: "中东呼吸综合征冠状病毒RT-RAA快速检测方法的 建立及应用", 病毒学报, vol. 34, pages 45 - 51 *

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