CN112042524A - 一种快速连续培养浒苔的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及海洋藻类人工培育技术领域内一种快速连续培养浒苔的方法，包括如下步骤：第一步，取样浒苔藻体并切割分段，强光诱导浒苔成熟；第二步，释放并收集生殖细胞；第三步，生殖细胞培养；第四步，扩大培养；第五步，重复第一步～第四步。本发明的上述快速连续培养浒苔的方法，可实现4～5周批量培养出浒苔成体，浒苔平均产量可达500～700g/L，因此，具有生产周期短、培养方法稳定性高、可控性强、生产效率高的特点。

Description

一种快速连续培养浒苔的方法
技术领域
本发明涉及海洋藻类人工培育技术领域，特别涉及一种快速连续培养浒苔的方法。
背景技术
浒苔作为一种常见的大型海洋藻类，属于绿藻门、绿藻纲、石莼目、石莼科、石莼属，是一种营养、食用、药用等价值均较高的经济海藻。浒苔体内含有丰富的人体必须的多项营养物质如蛋白质、粗纤维、碳水化合物和维生素等，同时还含有不饱和脂肪酸和多种生物活性物质，属于高蛋白、低脂肪的经济海藻。另外浒苔还具有止血散结，解毒消肿的药用价值，早在本草纲目中就有记载浒苔可“烧末吹鼻止衄血，汤浸捣敷手背肿痛”。此外作为一种海洋食品，在日本等海藻消费大国，浒苔早已被用作各种食物配料，其加工而成的各种浒苔食品和保健品在市场上广泛销售。而在我国浙江等沿海地区，野生浒苔也是每年都供不应求。但是国内浒苔的人工养殖尚未见报道，因此进行浒苔的可控性、规模化养殖是未来一个发展方向。
我国目前还没有经济绿藻进入规模化栽培的报道，但是日本对浒苔等绿藻的人工育苗和规模化养殖已经开展了一定工作，然而其实现人工养殖的技术是利用绿藻的有性生殖特性，存在供苗无保证，培养周期长等不足。
发明内容
本发明针对现有绿藻养殖技术中存在的培养周期长，幼苗供应不及时培养周期长的问题，提供一种适合室内快速连续培养浒苔的方法，通过断裂人工诱导法加速浒苔藻体成熟，逐步扩大培养以实现浒苔规模化人工养殖培育技术。
本发明的目的是这样实现的，一种快速连续培养浒苔的方法，包括如下步骤：第一步，取样浒苔藻体并切割分段，光照诱导浒苔成熟；第二步，强光刺激释放并收集生殖细胞；第三步，生殖细胞培养为浒苔幼苗；第四步，浒苔幼苗扩大培养为浒苔成体；第五步，重复第一步～第四步。
本发明的快速连续培养浒苔的方法，通过前期对浒苔藻体切段，配合光照诱导，加速浒苔成熟，并通过强光刺激加快释放高密度的生殖细胞，再逐步放大培养，使生殖细胞从幼苗逐渐培养成成体，实现快速大量的养殖，并且养殖周期大大缩短，成活率和产量明显提高。
为便于快速诱导浒苔成熟，第一步具体过程为：采集浒苔成体，用灭菌海水冲洗数次，清除附生杂藻；再将浒苔成体切为1～2cm藻段，置于含f/2培养液的带盖培养皿中诱导培养2～3天，最终诱导成熟浒苔藻段颜色由绿色变成黄褐色；其中，培养条件为光强3000～3500lux，温度20～25℃，按12h光照12h黑暗的光照周期，并且每24小时更换一次 f/2培养液；所述f/2培养液按f/2培养液原液与海水按1：900～1200体积比例稀释配置，稀释前对海水进行0.45μm膜过滤并灭菌处理。本步中，通过将浒苔藻体切割短段，并通过强光诱导其快速成熟，大大缩短浒苔藻体成熟的周期。
为促进浒苔快速释放高密度的生殖细胞，第二步的具体过程为：将诱导成熟的浒苔藻段取出，吸干表面水分，置于4500～5000lux的强光下刺激其释放高密度的绿色点状的浒苔生殖细胞；使用移液器吸取高密度的浒苔生殖细胞，立即置于含f/2培养液的培养器具中，进行24h的黑暗处理，使浒苔生殖细胞均匀附着于培养器具内；所述f/2培养液与第一步中f/2培养液的稀释处理方法相同。
进一步地，所述浒苔生殖细胞为浒苔配子或孢子，浒苔藻段释放完生殖细胞后由黄色变为透明壳体。
为便于实现浒苔的放大培养，第三步的具体过程为：将附着后的浒苔生殖细胞重新恢复光照进行培养，培养条件为：光强3000～3500lux，温度20～25℃，按12h光照12h黑暗的光照周期，并且每24小时更换一次 f/2培养液，培养3～4天，当长出肉眼可见的1～2mm浒苔幼苗时，用无菌刀片刮取附着的浒苔幼苗，转移到含有充足f/2培养液的培养器具内进行通气培养6～8天，期间，每隔2天更换培养液，促使浒苔幼苗生长至10～15mm，本步中，为提高成活率，所述f/2培养液原液与海水按1：900～1200体积比例稀释配置，稀释前对海水进行0.45μm膜过滤并灭菌处理，并向稀释后的培养液中添加稀释液体积1～2%的二氧化锗溶液，所述二氧化锗溶液的浓度为1g/L。
为便于培养浒苔幼苗长大，第四步的具体过程为：将第三步培养后长大的浒苔幼苗转移至开放式养殖池中通气培养两星期，养殖池内添加有f/2培养液，并且每星期更换一次，培养条件为：光强3000～5000lux，12h光照12h黑暗的光照周期，培养液温度为20～25℃，最终培养的浒苔成体平均长度15～20cm，湿重500～700g/L。
为加快放大培养进程，f/2培养液的稀释配比为：f/2培养液原液与海水按1：90～120的体积混合稀释，并且稀释前对海水进行0.45μm膜过滤并灭菌处理。
为促使养殖池内所有的幼苗均能进行充分的光合作用均匀长大，所述养殖池内设有电动搅拌机，用于翻搅池内浒苔藻体。
进一步地，所述养殖池内还设有恒温器，用于控制养殖池内的水温。
进一步地，所述养殖池的容量是第三步中浒苔幼苗通气培养液体积的100～150倍。
培养大约2周左右即可得到浒苔成体。
本发明的上述快速连续培养浒苔的方法，可实现4～5周批量培养出浒苔成体，并且成活率高，浒苔平均产量可达 500～700g/L，实现浒苔室内的高效连续化培养。因此，本发明的培养浒苔的方法具有生产周期短、培养方法稳定性高、可控性强、生产效率高的特点。
附图说明
图1为本发明的快速连续培养浒苔的方法的工艺流程图。
图2为诱导成熟后的浒苔藻段的取样图片。
图3为释放完生殖细胞后的浒苔藻段壳体的取样图片。
图4为浒苔幼苗的局部放大图片。
图5为扩大培养结束后的浒苔成体图片。
具体实施方式
下面结合图1所示的工艺流程图，详细说明本发明的快速连续培养浒苔的方法，依次进行如下步骤：
首先，第一步，取样浒苔藻体并切割分段，光照诱导浒苔成熟：具体过程为采集健康的浒苔成体，用灭菌海水冲洗数次，以清除附生杂藻；再将浒苔成体切为1～2cm藻段，置于含f/2培养液的带盖培养皿中诱导培养3天，培养条件为光强3000lux，温度25℃，按12h光照12h黑暗的光照周期，并且每24小时更换一次 f/2培养液。诱导成熟后的浒苔藻段抽样如图2所示，肉眼可见浒苔藻段已经从绿色变成黄褐色。本步中的f/2培养液采用市售的f/2培养液原液与孔径为0.45μm滤膜过滤后的灭菌海水按1：1000的体积比稀释配制而成。
接着，进行第二步，释放并收集生殖细胞：将诱导成熟的浒苔藻段取出，吸干表面水分，置于5000lux的强光下刺激其释放高密度浒苔生殖细胞，释放结束后，黄褐色的浒苔藻段释放出大量的绿色的生殖细胞后变成白色透明的壳体，释放生殖细胞后浒苔壳体如图3所示，已经变成透明状的空壳；放出的生殖细胞包括浒苔配子和孢子，其中，配子表现为正趋光性，聚集在强光侧，孢子表现为负趋光性，聚集在没有强光的另一侧。再使用移液器吸取释放的浒苔生殖细胞，立即置于含f/2培养液的培养器具中，进行24h的黑暗处理，使浒苔生殖细胞均匀附着于培养器具内。本步中的f/2培养液的稀释配制浓度与第一步相同。
再接着，进行第三步，生殖细胞培养：将附着后的浒苔生殖细胞重新恢复光照进行培养，培养条件为：光强3000lux，温度25℃，按12h光照12h黑暗的光照周期，并且每24小时更换一次 f/2培养液，培养4天，当长出肉眼可见的1～2mm浒苔幼苗时，用无菌刀片刮取附着的浒苔幼苗，转移到含有充足f/2培养液的培养器具内进行通气培养8天，期间，每隔2天更换培养液，促使浒苔幼苗生长至10～15mm。本步培养后的浒苔幼苗的局部放大图片如图4所示，从图中可以清淅的看出蝌蚪状浒苔幼苗。本步中的f/2培养液的稀释浓度与第一步和第二步相同，另外，为提高幼苗的存活量，在稀释后的培养液中添加浓度为1g/L的二氧化锗溶液，添加体积比例为稀释后培养液体积的1%。
最后，进行第四步，扩大培养：将第三步培养后长大的浒苔幼苗转移至容量为第三步中培养器具容量100倍的开放式养殖池中进行通气培养两星期，养殖池内添加有f/2培养液，其浓度为前第一步稀释浓度10倍，即f/2培养液原液与膜滤灭菌海水的体积比为1：100，并且每星期更换一次培养液，培养条件为：光强4000lux，12h光照12h黑暗的光照周期，培养液温度为25℃；本步扩大培养过程中，为促使养殖池内所有的幼苗均能进行充分的光合作用均匀长大，养殖池内设有电动搅拌机，用于定时间断翻搅池内浒苔藻体；为确保养殖池内培养液的温度，养殖池底部还设置有恒温加热器，以确保池内液体温度为25℃，最终培养的浒苔成体平均长度15～20cm，培养成成体的浒苔单体如图5所示，池内浒苔湿重达500～700g/L。至此完成一个培养周期的浒苔快速培养过程，每个培养周期约四周左右，浒苔平均产量可达 500～700g/L。另外根据产量的更大需求还可以重复循环上述第一步～第四步的培养过程进行更大规模的扩大培养，实现连续大量的浒苔培养。
通过上述快速连续培养浒苔的方法，可实现4～5周批量培养出浒苔成体，浒苔平均产量可达 500～700g/L。因此，本发明的培养浒苔的方法具有生产周期短、培养方法稳定性高、可控性强、生产效率高的特点。

Claims (10)

1.一种快速连续培养浒苔的方法，其特征在于，包括如下步骤：
第一步，取样浒苔藻体并切割分段，光照诱导浒苔成熟；
第二步，强光刺激释放并收集生殖细胞；
第三步，生殖细胞培养为浒苔幼苗；
第四步，浒苔幼苗扩大培养为浒苔成体；
第五步，重复第一步～第四步。
2.根据权利要求1所述的快速连续培养浒苔的方法，其特征在于，第一步具体过程为：采集浒苔成体，用灭菌海水冲洗数次，清除附生杂藻；再将浒苔成体切为1～2cm藻段，置于含f/2培养液的带盖培养皿中诱导培养2～3天，最终诱导成熟浒苔藻段颜色由绿色变成黄褐色；其中，培养条件为光强3000～3500lux，温度20～25℃，按12h光照12h黑暗的光照周期，并且每24小时更换一次 f/2培养液；所述f/2培养液按f/2培养液原液与海水按1：900～1200体积比例稀释配置，稀释前对海水进行0.45μm膜过滤并灭菌处理。
3.根据权利要求2所述的快速连续培养浒苔的方法，其特征在于，第二步的具体过程为：将诱导成熟的浒苔藻段取出，吸干表面水分，置于4500～5000lux的强光下刺激其释放高密度的绿色点状的浒苔生殖细胞；使用移液器吸取高密度的浒苔生殖细胞，立即置于含f/2培养液的培养器具中，进行24h的黑暗处理，使浒苔生殖细胞均匀附着于培养器具内；所述f/2培养液与第一步中f/2培养液的稀释处理方法相同。
4.根据权利要求3所述的快速连续培养浒苔的方法，其特征在于，所述浒苔生殖细胞为浒苔配子或孢子，浒苔藻段释放完生殖细胞后由黄色变为透明壳体。
5.根据权利要求3所述的快速连续培养浒苔的方法，其特征在于，第三步的具体过程为：将附着后的浒苔生殖细胞重新恢复光照进行培养，培养条件为：光强3000～3500lux，温度20～25℃，按12h光照12h黑暗的光照周期，并且每24小时更换一次 f/2培养液，培养3～4天，当长出肉眼可见的1～2mm浒苔幼苗时，用无菌刀片刮取附着的浒苔幼苗，转移到含有充足f/2培养液的培养器具内进行通气培养6～8天，期间，每隔2天更换培养液，促使浒苔幼苗生长至10～15mm，本步中，所用的f/2培养液通过如下方法稀释配制：f/2培养液原液与海水按1：900～1200体积比例稀释配置，稀释前对海水进行0.45μm膜过滤并灭菌处理，并向稀释后的培养液中添加稀释液体积1～2%的二氧化锗溶液，所述二氧化锗溶液的浓度为1g/L。
6.根据权利要求5所述的快速连续培养浒苔的方法，其特征在于，第四步的具体过程为：将第三步培养后长大的浒苔幼苗转移至开放式养殖池中通气培养两星期，养殖池内添加有f/2培养液，并且每星期更换一次，培养条件为：光强为3000～5000lux，12h光照12h黑暗的光照周期，培养液温度为20～25℃，最终培养的浒苔成体平均长度15～20cm，湿重500～700g/L。
7.根据权利要求6所述的快速连续培养浒苔的方法，其特征在于，第四步，f/2培养液的稀释配比为：f/2培养液原液与海水按1：90～120的体积混合稀释，并且稀释前对海水进行0.45μm膜过滤并灭菌处理。
8.根据权利要求6所述的快速连续培养浒苔的方法，其特征在于，所述养殖池内设有电动搅拌机，用于定时翻搅池内浒苔藻体。
9.根据权利要求6所述的快速连续培养浒苔的方法，其特征在于，所述养殖池内还设有恒温加热器，用于控制养殖池内的水温。
10.根据权利要求6所述的快速连续培养浒苔的方法，其特征在于，所述养殖池的容量是第三步中浒苔幼苗通气培养液体积的100～150倍。
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