CN104115738A - 一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法 - Google Patents

一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，属于藻类繁育技术领域；包括种藻的采集和运输、种藻的暂养、种藻的预处理、生殖托的分离、诱导成熟、幼苗培育六个步骤，本发明方法改变传统将生殖托连同藻体一起养殖的方法，将生殖托分离成单个或单丛后再进行促熟培育，针对性更强，有利于生殖托的同步成熟，有利于精卵的大量集中排放，雌、雄生殖托可达到100%成熟、排卵、排精，减少了源于藻体的污染，减少了种藻浪费，提高了受精率和出苗率，幼苗生长速度快，成活率高，且方法简单。

Description

一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法
技术领域
本发明涉及一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，具体涉及一种将雷州马尾藻未成熟的生殖托分离，在一定条件下培养，实现雷州马尾藻雌雄生殖托同步成熟，采集受精卵育苗的方法，属于藻类繁育技术领域。
背景技术
雷州马尾藻Sargassum leizhouense Tseng et Lu（1987）是我国的褐藻马尾藻属的特有品种，藻体大型，生长快，主要分布在我国广东和海南海域，生长在低潮带及潮下带岩石上。雷州马尾藻目前主要投喂给养殖鲍鱼食用，或用于提取褐藻胶、甘露醇和碘等的原料，藻体干燥处理后还可生产饲料或饲料添加剂；另外该藻还具有开发功能食品、保健品、化工产品、医药产品，用于生态修复、水质净化等的应用前景。近几年，人类活动对海洋环境造成了较大破坏，海洋环境质量下降，海藻场日趋衰退，而作为重要工业原料的褐藻胶需求量不断增加，依靠自然生长的藻场资源，已经不能满足人们的需求。目前，雷州马尾藻的天然资源也因受到自然或人为因素地影响而逐年减少，开展人工养殖已迫在眉睫。
种苗生产是制约规模化人工养殖的关键环节，而集中采集大量健康受精卵是育苗的第一步。目前对有关羊栖菜、鼠尾藻、铜藻、瓦氏马尾藻、硇洲马尾藻、莫氏马尾藻等马尾藻属种类的育苗研究较多，国内对雷州马尾藻的研究也已经展开，除了对雷州马尾藻形态结构、分类地位和分布的研究外，还对其育苗中杂藻防治及雌雄比、密度对其幼孢子体生长的影响进行了研究，而关于诱导雷州马尾藻生殖托成熟育苗的方法未见报道。
生殖托作为雷州马尾藻的有性繁殖器官，其生长发育的好坏，直接关系到精卵排放的数量与质量，从而影响繁殖的结果。目前马尾藻规模化繁育采集天然成藻进行采苗时，通常藻体不予处理，容易污染幼苗；此外马尾藻存在多次放散精卵的特点，而生产中往往在种藻第一次放散后便将种藻捞出，致使单位质量种藻的产苗率低，并造成大量种藻资源的浪费。所以，开展离体生殖托诱导同步成熟育苗可避免以上弊端，具有重要的实践意义。
申请号为201310148775.9的“一种瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法”的专利解决的是繁育瓦氏马尾藻的人工苗种的问题。该方法采回的藻体雌、雄体数量难以确定，难以规模化育苗，同时暂养时间比较长，用水量大，管理不方便，幼体受光不均匀，并容易被污染。申请号为201310296487.8的“一种瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法”解决的是瓦氏马尾藻无性繁殖育苗的问题。无性繁殖产生的子代不存在遗传变异或变异较小，而有性繁殖使个体的基因发生变异。
发明内容
本发明旨在提供一种诱导雷州马尾藻生殖托同步成熟的育苗方法，将雷州马尾藻未成熟的生殖托分离，在一定条件下，于过滤海水中培养，实现雷州马尾藻雌雄生殖托同步发育、成熟及精卵集中排放，促熟、受精率可达100%。收集刚长出乳突状假根、自然脱落的受精卵，在一定条件下培育，提高幼苗的生长速度及成活率。
为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：
一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，包括如下步骤：
（1）雷州马尾藻种藻的采集和运输:在雷州马尾藻尚不成熟的冬季或春季，选择大潮低潮期间采集已形成生殖托、健壮、杂藻少、侧枝多、成熟度较一致的雌雄种藻，装入整理箱，采用湿运法运输至目的地。
（2）种藻的暂养：运回的雷州马尾藻种藻，先将雌、雄藻体分别暂养在用孔径50 μm滤网过滤的海水中，暂养条件：水温20-22℃，盐度26-28，光照强度介于0-60 μmol·m-2s-1之间，充气使水呈沸腾、翻滚状，暂养3-7天。
（3）种藻的预处理：用过滤海水清洗藻体表面，除去杂藻和附着物。
（4）生殖托的分离：将预处理后的种藻先用消毒刀片分别切下雌、雄生殖托枝，并用洁净的毛笔刷除生殖托表面的附着物，再用消毒刀片将生殖托分离成单个或单丛（3-5个纯生殖托）。
（5）诱导成熟：在温度23℃~30℃、光照强度60~160 μmol·m-2s-1、海水盐度26~34范围内，于光照培养箱中将离体的雌雄生殖托1:1混合、静置培养，光周期设定为12L:12D，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次，每次摇动0.5分钟，培养6-20天，雌、雄生殖托100%成熟、排卵、排精。
（6）育苗：收集步骤（5）中自然脱落、刚长出乳突状假根的受精卵，在温度20-30℃，盐度26-34，光照强度80μmol·m-2s-1，光周期12L：12D的条件下，静置培养，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次，每次摇动0.5分钟，培养18天，获得体长达7.1-8.4mm，具有2-3个藻叶的幼苗。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
（1）本发明方法改变传统将生殖托连同藻体一起养殖的方法，将生殖托分离成单个或单丛，雌、雄生殖托混合诱导成熟，提高了生殖托的成熟度，使精卵大量集中放散，减少了藻体给采苗带来的污染，减少了对种藻资源的浪费。
（2）本发明方法通过诱导离体的雌、雄生殖托成熟、排放精卵，针对性更强，有利于生殖托的同步成熟，使雌、雄生殖托100%成熟、排卵、排精，排卵量达13个/mm2，受精率达100%。提高了受精率与出苗率。
（3）本发明方法在人工控制条件下收集刚长出乳突状假根、自然脱落的幼孢子体进行培育，幼孢子体生长迅速，培养18天，幼苗长度达7-8.5mm；成活率高，成活率达92%-100%。
（4）本发明方法不受自然条件、气候变化的影响，可根据需要控制生殖托的成熟，获得人工苗种。
（5）该方法操作简单，成本低廉，适合规模化生产。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
实施例1
一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，包括如下步骤：
（1）雷州马尾藻种藻的采集和运输：在雷州马尾藻尚不成熟的冬季或春季，选择大潮低潮期间采集发育健壮、杂藻少、侧枝多、成熟度均匀一致的雌雄种藻，装入整理箱，采用湿运法运输至目的地。
（2）种藻的暂养：运回的雷州马尾藻种藻，先将雌、雄藻体分别暂养在用孔径50 μm滤网过滤的海水中，暂养条件：水温20℃，盐度26，光照强度60 μmol·m-2s-1之间，充气使水呈沸腾、翻滚状。
（3）种藻的预处理：用过滤海水清洗藻体表面，除去杂藻和附着物。
（4）生殖托的分离：将预处理后的种藻先用消毒刀片分别切下雌、雄生殖托枝，并用洁净的毛笔刷除生殖托表面的附着物，再用消毒刀片将生殖托分离成单个或单丛
（5）促熟培育：在温度30℃、光照强度60μmol·m-2s-1、海水盐度34范围内，于光照培养箱中将离体的雌雄生殖托1:1混合、静置培养，光周期设定为12L:12D，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次。培养20天，雌、雄生殖托100%成熟、排卵、排精。
（6）育苗：收集自然脱落、刚长出乳突状假根的受精卵，在温度30℃，盐度26，光照强度80μmol·m-2s-1，光周期12L：12D的条件下，静置培养，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次，每次摇动0.5分钟，培养18天，获得体长达7.5mm，具有2个藻叶的幼苗，幼苗成活率92%。
实施例2
一种诱导雷州马尾藻生殖托成熟的方法，包括如下步骤：
（1）雷州马尾藻种藻的采集和运输:在雷州马尾藻尚不成熟的冬季或春季，选择大潮低潮期间采集发育健壮、杂藻少、侧枝多、成熟度均匀一致的雌雄种藻，装入整理箱，采用湿运法运输至目的地。
（2）种藻的暂养：运回的雷州马尾藻种藻，先将雌、雄藻体分别暂养在用孔径50 μm滤网过滤的海水中，暂养条件：水温22℃，盐度28，光照强度10μmol·m-2s-1之间，充气使水呈沸腾、翻滚状。
（3）种藻的预处理：用过滤海水清洗藻体表面，除去杂藻和附着物。
（4）生殖托的分离：将预处理后的种藻先用消毒刀片分别切下雌、雄生殖托枝，并用洁净的毛笔刷除生殖托表面的附着物，再用消毒刀片将生殖托分离成单个或单丛。
（5）促熟培育：在温度23℃、光照强度120 μmol·m-2s-1、海水盐度26范围内，于光照培养箱中将离体的雌雄生殖托1:1混合、静置培养，光周期设定为12L:12D，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次。培养12天，雌、雄生殖托100%成熟、排卵、排精。
（6）育苗：收集自然脱落、刚长出乳突状假根的受精卵，在温度23℃，盐度30，光照强度80μmol·m-2s-1，光周期12L：12D的条件下，静置培养，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次，每次摇动0.5分钟，培养18天，获得体长达8.5mm，具有3个藻叶的幼苗，幼苗成活率100%。
实施例3
一种诱导雷州马尾藻生殖托成熟的方法，包括如下步骤：
（1）雷州马尾藻种藻的采集和运输:在雷州马尾藻尚不成熟的冬季或春季，选择大潮低潮期间采集发育健壮、杂藻少、侧枝多、成熟度均匀一致的雌雄种藻，装入整理箱，采用湿运法运输至目的地。
（2）种藻的暂养：运回的雷州马尾藻种藻，先将雌、雄藻体分别暂养在用孔径50 μm滤网过滤的海水中，暂养条件：水温22℃，盐度28，光照强度50 μmol·m-2s-1之间，充气使水呈沸腾、翻滚状。
（3）种藻的预处理：用过滤海水清洗藻体表面，除去杂藻和附着物。
（4）生殖托的分离：将预处理后的种藻先用消毒刀片分别切下雌、雄生殖托枝，并用洁净的毛笔刷除生殖托表面的附着物，再用消毒刀片将生殖托分离成单个或单丛。
（5）促熟培育：在温度27℃、光照强度80 μmol·m-2s-1、海水盐度30范围内，于光照培养箱中将离体的雌雄生殖托1:1混合、静置培养，光周期设定为12L:12D，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次。培养15天，雌、雄生殖托100%成熟、排卵、排精。
（6）育苗：收集自然脱落、刚长出乳突状假根的受精卵，在温度27℃，盐度34，光照强度80μmol·m-2s-1，光周期12L：12D的条件下，静置培养，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次，每次摇动0.5分钟，培养18天，获得体长达8mm，具有2个藻叶的幼苗，幼苗成活率98%。
实施例4
一种诱导雷州马尾藻生殖托成熟的方法，包括如下步骤：
（1）雷州马尾藻种藻的采集和运输:在雷州马尾藻尚不成熟的冬季或春季，选择大潮低潮期间采集发育健壮、杂藻少、侧枝多、成熟度均匀一致的雌雄种藻，装入整理箱，采用湿运法运输至目的地。
（2）种藻的暂养：运回的雷州马尾藻种藻，先将雌、雄藻体分别暂养在用孔径50 μm滤网过滤的海水中，暂养条件：水温22℃，盐度28，光照强度60 μmol·m-2s-1之间，充气使水呈沸腾、翻滚状。
（3）种藻的预处理：用过滤海水清洗藻体表面，除去杂藻和附着物。
（4）生殖托的分离：将预处理后的种藻先用消毒刀片分别切下雌、雄生殖托枝，并用洁净的毛笔刷除生殖托表面的附着物，再用消毒刀片将生殖托分离成单个或单丛。
（5）促熟培育：在温度30℃、光照强度120 μmol·m-2s-1、海水盐度34范围内，于光照培养箱中将离体的雌雄生殖托1:1混合、静置培养，光周期设定为12L:12D，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次。培养6天，雌、雄生殖托100%成熟、排卵、排精。
（6）育苗：收集自然脱落、刚长出乳突状假根的受精卵，在温度20℃，盐度26，光照强度80μmol·m-2s-1，光周期12L：12D的条件下，静置培养，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次，每次摇动0.5分钟，培养18天，获得体长达7.8mm，具有2个藻叶的幼苗，幼苗成活率100%。
实施例5
一种诱导雷州马尾藻生殖托成熟的方法，包括如下步骤：
（1）雷州马尾藻种藻的采集和运输:在雷州马尾藻尚不成熟的冬季或春季，选择大潮低潮期间采集发育健壮、杂藻少、侧枝多、成熟度均匀一致的雌雄种藻，装入整理箱，采用湿运法运输至目的地。
（2）种藻的暂养：运回的雷州马尾藻种藻，先将雌、雄藻体分别暂养在用孔径50 μm滤网过滤的海水中，暂养条件：水温21℃，盐度26，光照强度30 μmol·m-2s-1之间，充气使水呈沸腾、翻滚状。
（3）种藻的预处理：用过滤海水清洗藻体表面，除去杂藻和附着物。
（4）生殖托的分离：将预处理后的种藻先用消毒刀片分别切下雌、雄生殖托枝，并用洁净的毛笔刷除生殖托表面的附着物，再用消毒刀片将生殖托分离成单个或单丛。
（5）促熟培育：在温度27℃、光照强度160 μmol·m-2s-1、海水盐度28范围内，于光照培养箱中将离体的雌雄生殖托1:1混合、静置培养，光周期设定为12L:12D，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次。培养10天，雌、雄生殖托100%成熟、排卵、排精。
（6）育苗：收集自然脱落、刚长出乳突状假根的受精卵，在温度25℃，盐度30，光照强度80μmol·m-2s-1，光周期12L：12D的条件下，静置培养，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次，每次摇动0.5分钟，培养18天，获得体长达7mm，具有2个藻叶的幼苗，幼苗成活率95%。

Claims (6)

1.一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）种藻的采集和运输:在雷州马尾藻尚不成熟的冬季或春季，选择大潮低潮期间采集种藻，装入整理箱，采用湿运法运输至目的地；
（2）种藻的暂养：运回的雷州马尾藻种藻，先将雌、雄藻体分别在用孔径50 μm滤网过滤的海水中暂养；
（3）种藻的预处理：用经过50 μm滤网过滤的海水清洗藻体表面，除去杂藻和附着物；
（4）生殖托的分离：将预处理后的种藻先用消毒刀片分别切下雌、雄生殖托枝，并用洁净的毛笔刷除生殖托表面的附着物，再用消毒刀片将生殖托分离成单个或单丛（3-5个纯生殖托）；
（5）诱导成熟：于光照培养箱中将离体的雌雄生殖托1:1混合，静置培养，光周期设定为12L:12D，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次，培养液采用50 μm滤网过滤、煮沸冷却后的海水，每次摇动0.5分钟，培养6-20天，雌、雄生殖托成熟、排卵、排精；
（6）育苗：收集步骤（5）中自然脱落、刚长出乳突状假根的受精卵，静置培养，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次，每次摇动0.5分钟，培养18天，获得幼苗。
2.根据权利要求1所述的一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，其特征在于：步骤（1）所述的种藻发育健壮、杂藻少、侧枝多、成熟度较一致，并且雄生殖托长7-15mm，雌生殖托长4-5mm。
3.根据权利要求1所述的一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，其特征在于：步骤（2）所述的暂养条件是指水温20-22℃，盐度26-28，光照强度介于0-60 μmol·m-2s-1之间，充气使水呈沸腾、翻滚状，暂养时间为从运回实验室直至进行种藻预处理，3-7天。
4.根据权利要求1所述的一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，其特征在于：步骤（5）所述的静置培养是指在温度23℃~30℃、光照强度60~160 μmol·m-2s-1、海水盐度26~34条件下培养。
5.根据权利要求1所述的一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，其特征在于：步骤（5）所述的每天定时更换一次培养液的时间为早上9-10点；每天定时摇动培养液的时间为11∶30、15∶30、19∶30；雌、雄生殖托成熟、排精、排卵率达100%，排卵量达13个/mm2，受精率达100%。
6.根据权利要求1所述的一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，其特征在于：步骤（6）所述的每天定时更换一次培养液的时间为早上9-10点；每天定时摇动培养液的时间为11∶30、15∶30、19∶30；培养条件是指温度20-30℃，盐度26-34，光照强度40-120 μmol·m-2s-1，光周期12L:12D，幼苗体长达7.1-8.4mm，具有1-3个藻叶。
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