CN112028997B - 抗ceacam5纳米抗体 - Google Patents
抗ceacam5纳米抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112028997B CN112028997B CN202010774701.6A CN202010774701A CN112028997B CN 112028997 B CN112028997 B CN 112028997B CN 202010774701 A CN202010774701 A CN 202010774701A CN 112028997 B CN112028997 B CN 112028997B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gly
- ser
- nanobody
- ala
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3007—Carcino-embryonic Antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提出一种纳米抗体。该抗体：(1)具有SEQ ID NO：1或2或3或4或5或6所示的氨基酸序列；(2)各序列之间具有较高的序列同源性，例如80％以上的序列同源性。根据本发明实施例的核酸特异性编码前面所述的纳米抗体，所述纳米抗体能够特异性靶向CEACAM5，具有高水溶性、高耐性、高稳定性，高抗原结合性、低免疫原性以及较强的组织穿透力。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及纳米抗体及其制备方法和应用，该纳米抗体可应用于CEACAM5蛋白检测试剂及治疗性抗体的研发。
背景技术
癌胚抗原(CEA)是一种从结肠癌和胎儿肠组织中发现的蛋白，临床上较早用于肿瘤检测的标志物，在正常人的体细胞中CEA的生成量较少，而在恶性肿瘤患者的多种器官中都会有表达，能够用于肿瘤的诊断及鉴别，但是该肿瘤标准物的诊断缺少特异性。CEA很高主要出现在胰腺癌、大肠癌、乳腺癌、胃癌以及小细胞肺癌等多种肿瘤中，CEA在肿瘤患者血清中诊断的灵敏度与肿瘤有无淋巴结、肿瘤的大小以及肿瘤是否发生其他部位的转移有着密切的关系。
1993年Hamers-Casterman等在nature上报道了在骆驼血清中大量存在的一种天然缺失轻链的抗体，即重链抗体。单域重链抗体是指仅由重链抗体可变区组成的基因工程抗体，又称为VHH抗体或者纳米抗体(Nb)。与普通抗体相比，骆驼重链抗体除了缺少轻链之外，其重链可变区与铰链区之间没有CH1区。恒定区CH1是与轻链锚定的部位，在纳米抗体的基因组中存在，但在mRNA形成中被剪掉，纳米抗体靠仅有的3个CDRs就具备抗原的特异性和高亲和力，而普通抗体则需要6个CDRs，是目前已知的可结合目标抗原的最小单位。和普通抗体相比，纳米抗体分子量小，结构简单，易于进行基因改造，体积小，抗原特异性好，组织穿透力强，稳定性高，在疾病的诊断及治疗方面有广阔的应用前景。基于此，我们研发了全新的针对CEACAM5的纳米抗体，以期进一步提高抗体的功能。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种针对CEACAM5的纳米抗体，同时提供该纳米抗体的编码序列以及制备方法。
本申请的发明人采用羊驼免疫与噬菌体展示技术相互结合，开发出了靶向CEACAM5的高亲和纳米抗体。
一方面，本发明提出了一种纳米抗体。根据本发明的实施例，所述纳米抗体包括：(1)具有SEQ ID NO：1或2或3或4或5或6所示的氨基酸序列；各序列之间具有较高的序列同源性，例如80％以上的序列同源性。根据本发明实施例的纳米抗体是特异性靶向CEACAM5蛋白的抗体，能够结合天然构象的CEACAM5蛋白，并且所述纳米抗体具有如下较普通抗体的独特性质:(1)高水溶性、高耐性、高稳定性，高抗原结合性、低免疫原性以及较强的组织穿透力。
根据本发明的实施例，所述纳米抗体具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区1(FR1)具有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区1(CDR1)具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区2(FR2)具有SEQ IDNO:9所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区2(CDR2)具有SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区3(FR3)具有SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区3(CDR)具有SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区4(FR4)具有SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
根据本发明的实施例，所述纳米抗体具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区1(FR1)具有SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区1(CDR1)具有SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区2(FR2)具有SEQ IDNO:16所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区2(CDR2)具有SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区3(FR3)具有SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区3(CDR)具有SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区4(FR4)具有SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
根据本发明的实施例，所述纳米抗体具有SEQ ID NO:3所示氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区1(FR1)具有SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区1(CDR1)具有SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区2(FR2)具有SEQ IDNO:22所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区2(CDR2)具有SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区3(FR3)具有SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区3(CDR)具有SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区4(FR4)具有SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
根据本发明的实施例，所述纳米抗体具有SEQ ID NO:4所示氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区1(FR1)具有SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区1(CDR1)具有SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区2(FR2)具有SEQ IDNO:28所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区2(CDR2)具有SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区3(FR3)具有SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区3(CDR)具有SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区4(FR4)具有SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
根据本发明的实施例，所述纳米抗体具有SEQ ID NO:5所示氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区1(FR1)具有SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区1(CDR1)具有SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区2(FR2)具有SEQ IDNO:34所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区2(CDR2)具有SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区3(FR3)具有SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区3(CDR)具有SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区4(FR4)具有SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
根据本发明的实施例，所述纳米抗体具有SEQ ID NO:6所示氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区1(FR1)具有SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区1(CDR1)具有SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区2(FR2)具有SEQ IDNO:39所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区2(CDR2)具有SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区3(FR3)具有SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的互补决定区3(CDR)具有SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列，所述纳米抗体的框架区4(FR4)具有SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
根据本发明实施例的纳米抗体是特异性靶向CEACAM5蛋白的抗体，能够结合天然构象的CEACAM5蛋白，并且所述纳米抗体具有高水溶性、高耐性、高稳定性，高抗原结合性、低免疫原性以及较强的组织穿透力。
又一方面，本发明提出了一种核酸。根据本发明的实施例，所述核酸为：编码前面所述纳米抗体的核酸或其互补序列。根据本发明实施例的核酸特异性编码前面所述的纳米抗体，所述纳米抗体能够特异性靶向CEACAM5，结合天然构象的CEACAM5，具有高水溶性、高耐性、高稳定性，高抗原结合性、低免疫原性以及较强的组织穿透力。
根据本发明的实施例，所述核酸具有SEQ ID NO：43或44或45或46或47或48所示核苷酸序列。
根据本发明实施例的上述核酸所编码的蛋白具有与CEACAM5显著的高亲和活性，且该蛋白具有典型的纳米抗体的结构，即由框架区(FR1，FR2，FR3和FR4)和互补决定区(CDR1，CDR2和CDR3)构成。
需要说明的是，对于本发明权利要求书和说明书中所提及的核酸，本领域技术人员应当理解，实际包括互补双链的任意一条，或者两条。为了方便，在本权利要求书和说明书中，虽然多数情况下只给出了一条链，但实际上也公开了与之互补的另一条链。另外，本申请中的基因序列包括DNA形式或RNA形式，公开其中一种，意味着另一种也被公开。
再一方面，本发明提供了一种表达载体，其包含上述核酸。
又一方面，本发明提供了一种宿主细胞，其包含上述表达载体。
还一方面，本发明提供了上述CEACAM5纳米抗体的制备方法，包括：a)构建针对CEACAM5蛋白的纳米抗体文库；
b)亲和淘选以及淘选后的文库扩增；
c)特异性噬菌体克隆的鉴定及分析；
d)在原核表达系统中表达纯化CEACAM5纳米抗体。
有益效果：与传统抗体制备技术相比，本发明将羊驼免疫与噬菌体展示技术相互结合，充分利用了噬菌体展示技术的优势——(1)较大的库容量，筛选操作简单，通量高；(2)高效率的淘选使得成功挑选微量存在但亲和力高的噬菌体成为可能，并能通过感染细菌而得到富集；(3)可以直接得到抗体基因，便于进一步构建各种基因工程抗体，还可用于一些难于制备的抗体，如弱免疫原、毒性抗原等，以及人源化抗体。所获得纳米抗体，较传统抗体，具有明显的高水溶性、高耐性、高稳定性，高抗原结合性、低免疫原性以及较强的组织穿透力的优势。
本发明的优点如下：本发明将重组CEACAM5蛋白免疫羊驼，随后利用该羊驼外周血淋巴细胞建立了针对于CEACAM5的纳米抗体基因库，试验中将CEACAM5偶联在酶标板上，以此形式的抗原利用噬菌体展示技术筛选免疫性的纳米抗体基因库(羊驼重链抗体噬菌体展示基因库)，从而获得了针对CEACAM5特异性的纳米抗体基因，将此基因转至大肠杆菌中，从而建立了能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株。
附图说明
图1显示实施例的免疫后羊驼血清中CEACAM5抗体ELISA检测结果图。
图2显示实施例的SDS-PAGE电泳检测CEACAM5纳米抗体的表达以及纯化的结果图。
图3显示实施例的纯化的CEACAM5纳米抗体亲和力的ELISA检测结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施例进一步描述本发明，但本发明不仅限于所述实施例。
实施例1：构建针对CEACAM5蛋白的纳米抗体文库。
将重组CEACAM5蛋白与弗氏佐剂混合后免疫羊驼，共免疫4次。4次免疫结束后，提取50mL羊驼外周血淋巴细胞并提取总RNA；然后通过Nest-PCR技术克隆抗体的VHH区，并将克隆产物通过同源重组的方法插入噬菌体，以获得噬菌体展示库。
实施例2：亲和淘选以及淘选后的文库扩增。
(1)亲和淘选
1)将重组CEACAM5蛋白用PH值为9.6的碳酸盐缓冲液稀释至终浓度为5μg/mL，按100μL/孔加入酶标孔中，每个靶分子包被8孔，4℃包被过夜；
2)弃包被液，PBS洗涤3次，每孔加入300μL 3％BSA-PBS封闭液，37℃封闭1h；
3)PBS洗涤3次，加入100μL噬菌体文库，37℃孵育1h；
5)吸出未结合的噬菌体，用PBST洗涤6次，PBS洗涤2次；
6)加入100μL Gly-HCl洗脱液，37℃孵育8min，洗脱特异性结合的噬菌体；将该洗脱液转移至1.5mL无菌离心管中，迅速用10μL Tris-HCl中和缓冲液中和；
7)取10μL进行梯度稀释，测定滴度，计算淘选回收率，其余洗脱物混合后进行扩增和纯化，用于下一轮亲和淘选，改变淘选条件，淘选条件如表1:
表1亲和淘选条件
(2)淘选后文库的扩增
1)将淘选洗脱物与处于对数生长前期的E.coli TG1培养物5mL混匀，37℃，静置30min，220r/min振荡培养30min；1000g离心15min，去上清，用500μl 2×YT重悬涂布于200mm 2×YT-GA平板；
2)用10ml 2×YT液体培养基刮菌，取500μl悬液加入50ml 2×YT液体培养基中，37℃振摇30min；按cell:phage＝1:20的比例加入M13K07辅助噬菌体，37℃静置30min，220r/min振荡培养30min；将培养物分装于离心管中，25℃，5000r/min，10min，细胞沉淀以50mL 2×YT-AK液体培养基重悬，30℃，230r/min振荡培养过夜；
3)将过夜培养物4℃，10000r/min离心20min，将上清转移至新离心管，加入1/5体积的PEG-NaCl，混匀后置于4℃2h以上；
4)4℃，10000r/min，20min，去除上清，将沉淀重悬于1mL PBS中，加入1/5体积的PEG/NaCl，混匀后置于4℃1h以上；
5)4℃，12000r/min，2min，去除上清，将沉淀悬浮于200μL PBS中，即为扩增产物，测定滴度，用于下一轮淘选或者分析。
实施例3：特异性噬菌体克隆的鉴定及分析。
(1)噬菌粒的救援
1)从第一轮淘选洗脱物滴度的平板上，用灭菌牙签各随机挑取96个单克隆接种于1mL 2×YT-A中，37℃，220r/min振荡培养8h；
2)取200μL上述培养物，按cell：phage＝1：20的比例加入M13K07噬菌体，37℃，静置15min，220r/min振荡培养45min；
3)补加800μL体积的2×YT-AK，30℃，振荡培养过夜；
4)第二天12000rpm离心2min，取上清，用于单克隆ELISA鉴定。
(2)阳性噬菌体克隆的鉴定
1)将重组CEACAM5蛋白用PH值为9.6的碳酸盐缓冲液稀释至终浓度为2μg/mL，按100μL/孔加入酶标孔中，4℃包被过夜；
2)弃包被液，PBST洗涤3次，每孔加入300μL 5％脱脂牛奶，37℃封闭1h；
3)PBST洗涤3次，每孔加入50μL噬菌体培养菌液上清和50μL 5％脱脂牛奶，37℃，孵育1h；
4)PBST洗涤5次，加入辣根过氧化物酶标记的抗M13抗体(用5％脱脂奶粉按1:10000稀释)，100μL/孔，37℃作用1h；
5)PBST洗板6次。加入TMB显色液显色，100μL/孔，37℃，7min，加入终止液终止反应，50μL/孔，于450nm下测光密度。
(3)阳性噬菌体克隆的序列分析
将阳性克隆进行测序分析。
实施例4：在原核表达系统中表达纯化CEACAM5纳米抗体。
1)将前面测序分析获得不同克隆株的VHH片段克隆到BL21(DE3)原核表达载体中；
2)涂布LB平板(50ug/ml卡那霉素)；
3)挑选单个菌落接种在15mL含有卡那霉素的LB培养液中，37℃摇床培养过夜；
4)接种1mL的过夜菌种至300mL LB培养基中，37℃摇床培养，培养到OD值达到0.6-1时，加入IPTG，16℃摇床培养16-20h；
5)离心收菌，将菌体破碎以获得抗体粗提液；
6)经镍柱离子亲和层析纯化抗体蛋白，采用咪唑梯度洗脱法，低浓度咪唑洗脱液(30mmol)用于洗去杂带，高浓度咪唑洗脱液(200mmol，500mmol)最终可制备纯度达90％以上的蛋白。
通过上述方法，本发明得到6种CEACAM5纳米抗体:A94；B7；B41；B47；B80；B95。
序列表自由文本。
以下的序列表的数字标题<223>中记载了“人工序列(Artificial Sequence)”的说明。具体而言，序列表的序号1，2，3，4，5，6所表示的氨基酸序列分别为纳米抗体A94；B7；B41；B47；B80；B95的全氨基酸序列，序列表的序号7，8，9，10，11，12所表示的氨基酸序列分别为纳米抗体A94的FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3的氨基酸序列，序列表的序号14，15，16，17，18，19所表示的氨基酸序列分别为纳米抗体B7的FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3的氨基酸序列，序列表的序号20，21，22，23，24，25所表示的氨基酸序列分别为纳米抗体B41的FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3的氨基酸序列，序列表的序号26，27，28，29，30，31所表示的氨基酸序列分别为纳米抗体B47的FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3的氨基酸序列，序列表的序号32，33，34，35，36所表示的氨基酸序列分别为纳米抗体B80的FR1，CDR1，FR2，CDR2，CDR3的氨基酸序列，序列表的序号37，38，39，40，41，42所表示的氨基酸序列分别为纳米抗体B95的FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3的氨基酸序列，序列表的序号18为纳米抗体B7；B80的FR3的共同氨基酸序列，序列表的序号13为纳米抗体A94；B7；B41；B47；B80；B95的FR4的共同氨基酸序列，序列表的序号43，44，45，46，47，48所表示的碱基序列分别为纳米抗体A94；B7；B41；B47；B80；B95的编码序列。
序列表
<110> 中山大学附属第五医院
<120> 抗CEACAM5纳米抗体
<160> 48
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体A94氨基酸序列
<400> 1
Glu Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Arg Ser Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Tyr Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Glu Glu Arg Glu
35 40 45
Phe Val Ala Gly Ile Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Tyr Ala Thr
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Thr Ser Met Thr Trp Tyr Gly Asn Asn Arg Ala Ser
100 105 110
Glu Tyr Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 2
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B7氨基酸序列
<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Pro Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Ile Ser Ile Phe Ser Ile Asp
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Ile Thr Thr Val Gly Ser Ala Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Ala Val Trp Gly His Trp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 3
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B41氨基酸序列
<400> 3
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Leu Phe Arg Ile Asn
20 25 30
Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Ile Thr Ser Ala Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Phe Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Thr Pro Trp Pro Val Gly Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 4
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B47氨基酸序列
<400> 4
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ile Asp Met Thr Asp
20 25 30
Phe Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ile Val
35 40 45
Ala Val Ile Arg Pro Asp Gly Ser Pro Asp Tyr Leu Gln Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Thr Asp Asn Ala Lys Arg Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Leu Cys Asn
85 90 95
Tyr Val Leu Gln Tyr Lys Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 5
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B80氨基酸序列
<400> 5
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Thr Ser Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly
85 90 95
Thr Cys Phe Glu Gly Leu Gly Pro Glu Gln Val Asn Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 6
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B95氨基酸序列
<400> 6
Glu Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Phe Asp Thr Phe Ser Ile His
20 25 30
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Val Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Ile Thr Ser Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Glu Pro Phe Arg Leu Phe Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 7
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体A94的FR1
<400> 7
Glu Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser
20 25
<210> 8
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体A94的CDR1
<400> 8
Gly Arg Ser Phe Ser Ser Tyr Thr Tyr Gly
1 5 10
<210> 9
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体A94的FR2
<400> 9
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Glu Glu Arg Glu Phe Val Ala
1 5 10 15
Gly
<210> 10
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体A94的CDR2
<400> 10
Ile Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
1 5
<210> 11
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体A94的FR3
<400> 11
Ala Tyr Ala Thr Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
1 5 10 15
Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp
20 25 30
Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 12
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> (1)..(1)
<223> 纳米抗体A94的CDR3
<400> 12
Ala Ala Thr Ser Met Thr Trp Tyr Gly Asn Asn Arg Ala Ser Glu Tyr
1 5 10 15
Ala Tyr
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体共有的FR4
<400> 13
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 14
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B7的FR1
<400> 14
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Pro Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 15
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B7的CDR1
<400> 15
Ile Ser Ile Phe Ser Ile Asp Ala
1 5
<210> 16
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B7的FR2
<400> 16
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10 15
Ala
<210> 17
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B7的CDR2
<400> 17
Ile Thr Thr Val Gly Ser Ala
1 5
<210> 18
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B7的FR3
<400> 18
Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
1 5 10 15
Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp
20 25 30
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 19
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B7的CDR3
<400> 19
Asn Ala Val Trp Gly His Trp Asp
1 5
<210> 20
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B41的FR1
<400> 20
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 21
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B41的CDR1
<400> 21
Gly Ser Leu Phe Arg Ile Asn Ala
1 5
<210> 22
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B41的FR2
<400> 22
Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10 15
Ala
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B41的CDR2
<400> 23
Ile Thr Ser Ala Gly Ser Thr
1 5
<210> 24
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B41的FR3
<400> 24
Asn Tyr Ala Asp Phe Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn
1 5 10 15
Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp
20 25 30
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 25
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B41的CDR3
<400> 25
Asn Thr Pro Trp Pro Val Gly Arg Asp Tyr
1 5 10
<210> 26
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B47的FR1
<400> 26
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 27
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B47的CDR1
<400> 27
Gly Ser Ile Asp Met Thr Asp Phe
1 5
<210> 28
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B47的FR2
<400> 28
Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ile Val Ala
1 5 10 15
Val
<210> 29
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B47的CDR2
<400> 29
Ile Arg Pro Asp Gly Ser Pro
1 5
<210> 30
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B47的FR3
<400> 30
Asp Tyr Leu Gln Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Thr Asp Asn
1 5 10 15
Ala Lys Arg Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp
20 25 30
Thr Ala Val Tyr Leu Cys
35
<210> 31
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B47的CDR3
<400> 31
Asn Tyr Val Leu Gln Tyr Lys Asn Tyr
1 5
<210> 32
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B80的FR1
<400> 32
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 33
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B80的CDR1
<400> 33
Gly Phe Ser Leu Asp Tyr Tyr Ala
1 5
<210> 34
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B80的FR2
<400> 34
Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser
1 5 10 15
Cys
<210> 35
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B80的CDR2
<400> 35
Ile Thr Ser Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 36
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B80的CDR3
<400> 36
Gly Thr Cys Phe Glu Gly Leu Gly Pro Glu Gln Val Asn Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 37
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B95的FR1
<400> 37
Glu Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 38
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B95的CDR1
<400> 38
Phe Asp Thr Phe Ser Ile His Ala
1 5
<210> 39
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B95的FR2
<400> 39
Met Gly Trp Tyr Arg Gln Val Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10 15
Ala
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B95的CDR2
<400> 40
Ile Thr Ser Ser Gly Gly Thr
1 5
<210> 41
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B95的FR3
<400> 41
Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
1 5 10 15
Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Gly Asp
20 25 30
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 42
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CONFLICT
<222> ()..()
<223> 纳米抗体B95的CDR3
<400> 42
Asn Glu Pro Phe Arg Leu Phe Asp
1 5
<210> 43
<211> 405
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> conflict
<222> ()..()
<223> 编码纳米抗体A94的核苷酸序列
<400> 43
gaggtgcagg tggtggagtc agggggagga ttggtgcagc ctgggggctc tctgagactc 60
tcctgtacag cctctggacg cagcttcagc tcctatacct atggcatggg ctggttccgc 120
caggctccag gtgaggagcg tgagtttgta gcaggtatta gcacgagtgg tggtaccgct 180
gcctatgcaa cctccgtgaa gggccgattc accatctcca gagacaacgc caagaacacg 240
gtgtatctgc aaatgaacag cctgaaacct gaggacacgg gcgtttatta ctgtgcagct 300
acgagtatga cctggtacgg gaacaaccgt gcatctgagt atgcctactg gggccagggg 360
acccaggtca ccgtctcctc agcgcaccac agcgaagacc ccagc 405
<210> 44
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> gene
<222> ()..()
<223> 编码纳米抗体B7的核苷酸序列
<400> 44
gaggtgcagc tggtggagtc ggggggaggc ttggtgccgg cgggggggtc tctgagactc 60
tcctgtgcag cctctataag catcttcagt atcgatgcca tgggctggtt ccgccaggct 120
ccagggaagc agcgcgagtt ggtcgcagct attactacgg tgggtagcgc gaactatgca 180
gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaacac ggtgtatctg 240
caaatgaaca gcctgaaacc tgaggacaca gccgtctatt actgtaatgc agtctggggc 300
cactgggact ggggccaggg gacccaggtc accgtctcct cagaacccaa gacaccaaaa 360
ccacaacca 369
<210> 45
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> gene
<222> ()..()
<223> 编码纳米抗体B41的核苷酸序列
<400> 45
cagttgcagc tcgtggagtc tggtggaggc ttggtgcagg ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggaag cctcttcagg atcaatgcca tggcctggtt ccgccaggct 120
ccagggaagc agcgcgagtt ggtcgcagct attactagtg ctggtagtac aaactatgca 180
gatttcgtga agggccgatt caccatctcc gcagacaacg ccaagaacac gctgtatctg 240
caaatgaaca gcctgaaacc tgaggacaca gccgtctatt actgtaatac accctggccc 300
gtagggaggg actactgggg ccaggggacc caggtcaccg tctcctcaga acccaagaca 360
ccaaaaccac aacca 375
<210> 46
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> gene
<222> ()..()
<223> 编码纳米抗体B47的核苷酸序列
<400> 46
gaggtgcagc tggtggagtc agggggaggc ttggtgcagg ctggggggtc tctgagactc 60
tcctgtaaag cctctggaag catcgacatg accgatttta tggcatggta ccgccaagct 120
ccagggaagg agcgcgaaat agtcgcagtc attcgtccgg atggtagtcc agactatctg 180
cagtccgtga agggccgctt caccatctcc acggacaacg ccaagaggtc gctgtatctg 240
caaatgaaca gcctgaaacc tgaggataca gccgtctatt tgtgtaatta tgtactacaa 300
tacaaaaact actggggcca ggggacccag gtcaccgtct cctcagcgca ccacagcgaa 360
gaccccagc 369
<210> 47
<211> 390
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> gene
<222> ()..()
<223> 编码纳米抗体B80的核苷酸序列
<400> 47
caggtgcagc tcgtggagtc tggtggaggc ttggtgcagc ctggggggtc tctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cagtttggat tattatgcca taggctggtt ccgccaggcc 120
ccagggaagg agcgtgaggg ggtctcatgt attactagta gtggtagcac aaactatgca 180
gactccgtga agggccggtt caccatctcc agagacaacg ccaagaacac ggtgtatctg 240
caaatgaaca gcctgaaacc tgaggacaca gccgtttatt actgtgggac ctgcttcgag 300
gggttggggc ctgagcaggt gaatgactac tggggccagg ggacccaggt caccgtctcc 360
tcagaaccca agacaccaaa accacaacca 390
<210> 48
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> gene
<222> ()..()
<223> 编码纳米抗体B95的核苷酸序列
<400> 48
gaggtgcagg tggtggagtc tgggggaggc ttggtgcagg ctggggggtc tctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcttttga cacgttcagt atacatgcca tgggctggta ccgccaggtt 120
ccagggaagc agcgcgaatt ggtcgcagct attactagta gtggcggcac aaactacgca 180
gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaacac ggtgtatctg 240
caaatgaaca gcctgaaacc tggagacaca gccgtctatt actgtaatga accgtttcgc 300
ctcttcgact ggggccaggg gacccaggtc accgtctcct cagcgcacca cagcgaagac 360
cccagc 366
Claims (4)
1.一种针对CEACAM5的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示；
其框架区为SEQ ID NO:20所示的FR1，SEQ ID NO:22所示的FR2，SEQ ID NO:24所示的FR3，SEQ ID NO:13所示的FR4；
其互补决定区为SEQ ID NO:21所示的CDR1，SEQ ID NO:23所示的CDR2，SEQ ID NO:25所示的CDR3。
2.一种核酸，其特征在于，所述核酸为：编码权利要求1所述纳米抗体的核酸或其互补序列。
3.一种表达载体，其包含权利要求2所述的核酸。
4.一种宿主细胞，其包含权利要求3所述的表达载体。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110398032.1A CN113201070B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110398005.4A CN113234164B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110398073.0A CN113105549B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202010774701.6A CN112028997B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110398067.5A CN113105548B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110397962.5A CN113278074B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010774701.6A CN112028997B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
Related Child Applications (5)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110398073.0A Division CN113105549B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110398032.1A Division CN113201070B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110397962.5A Division CN113278074B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110398067.5A Division CN113105548B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110398005.4A Division CN113234164B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112028997A CN112028997A (zh) | 2020-12-04 |
| CN112028997B true CN112028997B (zh) | 2021-08-13 |
Family
ID=73582002
Family Applications (6)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110398005.4A Active CN113234164B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110398067.5A Active CN113105548B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110397962.5A Active CN113278074B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110398032.1A Active CN113201070B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110398073.0A Active CN113105549B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202010774701.6A Active CN112028997B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
Family Applications Before (5)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110398005.4A Active CN113234164B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110398067.5A Active CN113105548B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110397962.5A Active CN113278074B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110398032.1A Active CN113201070B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
| CN202110398073.0A Active CN113105549B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | 抗ceacam5纳米抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (6) | CN113234164B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114716551B (zh) * | 2021-11-12 | 2023-01-24 | 深圳市人民医院 | 靶向rage的纳米抗体及其应用 |
| CN114617983B (zh) * | 2022-05-16 | 2022-08-09 | 中山大学附属第五医院 | 一种氟-18标记的cea分子靶向化合物及其制备方法和应用 |
| CN114656568A (zh) * | 2022-05-25 | 2022-06-24 | 中山大学附属第五医院 | 一种ceacam5靶向的近红外荧光纳米抗体探针及其制备方法和应用 |
| CN116178556B (zh) * | 2023-01-09 | 2024-01-09 | 南方医科大学第三附属医院（广东省骨科研究院） | 靶向ceacam5的纳米抗体及其制备方法与应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108341876A (zh) * | 2017-01-22 | 2018-07-31 | 中国人民解放军第四军医大学 | 抗人ceacam5单克隆抗体及其制备方法和应用 |
| CN108484779A (zh) * | 2018-04-14 | 2018-09-04 | 深圳市国创纳米抗体技术有限公司 | 一种纳米抗体与人胎盘碱性磷酸酶的融合蛋白及应用 |
| CN109180815A (zh) * | 2012-11-20 | 2019-01-11 | 赛诺菲 | 抗ceacam5抗体及其用途 |
| CN109897107A (zh) * | 2017-12-08 | 2019-06-18 | 深圳华大生命科学研究院 | 纳米抗体及其制备方法 |
| CN109897110A (zh) * | 2017-12-08 | 2019-06-18 | 深圳华大生命科学研究院 | 纳米抗体及其制备方法 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7232888B2 (en) * | 2002-07-01 | 2007-06-19 | Massachusetts Institute Of Technology | Antibodies against tumor surface antigens |
| EP2585476A4 (en) * | 2010-06-22 | 2014-01-22 | Neogenix Oncology Inc | ANTIGENS AND ANTIBODIES SPECIFIC TO COLON AND PANCREATIC CANCER |
| WO2013054320A1 (en) * | 2011-10-11 | 2013-04-18 | Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. | Antibodies to carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule (ceacam) |
| CN109053884A (zh) * | 2015-11-02 | 2018-12-21 | 东南大学 | Wasabi蛋白纳米抗体及其编码序列与应用 |
| CN106749667B (zh) * | 2016-12-04 | 2020-07-14 | 深圳市国创纳米抗体技术有限公司 | 一种抗癌胚抗原的纳米抗体及其应用 |
| CN107880130B (zh) * | 2017-12-17 | 2021-06-18 | 深圳市国创纳米抗体技术有限公司 | 一种具有高亲和力的抗癌胚抗原纳米抗体及应用 |
| CN108659131B (zh) * | 2018-05-28 | 2021-09-14 | 长春力太生物技术有限公司 | 一种抗ceacam-5的单域抗体及其应用 |
| CN108659130B (zh) * | 2018-05-28 | 2021-09-10 | 长春力太生物技术有限公司 | 一种抗癌胚抗原纳米抗体及其应用 |
-
2020
- 2020-08-04 CN CN202110398005.4A patent/CN113234164B/zh active Active
- 2020-08-04 CN CN202110398067.5A patent/CN113105548B/zh active Active
- 2020-08-04 CN CN202110397962.5A patent/CN113278074B/zh active Active
- 2020-08-04 CN CN202110398032.1A patent/CN113201070B/zh active Active
- 2020-08-04 CN CN202110398073.0A patent/CN113105549B/zh active Active
- 2020-08-04 CN CN202010774701.6A patent/CN112028997B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109180815A (zh) * | 2012-11-20 | 2019-01-11 | 赛诺菲 | 抗ceacam5抗体及其用途 |
| CN108341876A (zh) * | 2017-01-22 | 2018-07-31 | 中国人民解放军第四军医大学 | 抗人ceacam5单克隆抗体及其制备方法和应用 |
| CN109897107A (zh) * | 2017-12-08 | 2019-06-18 | 深圳华大生命科学研究院 | 纳米抗体及其制备方法 |
| CN109897110A (zh) * | 2017-12-08 | 2019-06-18 | 深圳华大生命科学研究院 | 纳米抗体及其制备方法 |
| CN108484779A (zh) * | 2018-04-14 | 2018-09-04 | 深圳市国创纳米抗体技术有限公司 | 一种纳米抗体与人胎盘碱性磷酸酶的融合蛋白及应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| "Identification of CEACAM5 as a Biomarker for Prewarning and Prognosis in Gastric Cancer";Jinfeng Zhou等;《J Histochem Cytochem》;20151231;第63卷(第12期);全文 * |
| "Inhibition of adhesion, invasion, and metastasis by antibodies targeting CEACAM6 (NCA-90) and CEACAM5 (Carcinoembryonic Antigen)";Rosalyn D Blumenthal等;《Cancer Res》;20051001;第65卷(第19期);全文 * |
| "抗CEACAM5纳米抗体在大肠杆菌中的高效周质表达";王准等;《科学技术与工程》;20190108;第19卷(第1期);全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113105548B (zh) | 2022-03-29 |
| CN112028997A (zh) | 2020-12-04 |
| CN113201070A (zh) | 2021-08-03 |
| CN113105549A (zh) | 2021-07-13 |
| CN113105549B (zh) | 2022-04-01 |
| CN113278074B (zh) | 2022-03-29 |
| CN113105548A (zh) | 2021-07-13 |
| CN113278074A (zh) | 2021-08-20 |
| CN113234164A (zh) | 2021-08-10 |
| CN113234164B (zh) | 2022-04-01 |
| CN113201070B (zh) | 2022-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112028997B (zh) | 抗ceacam5纳米抗体 | |
| CN111320694B (zh) | 一种由重链抗体的可变区组成的纳米抗体gn2及其制备方法和应用 | |
| CN110590952B (zh) | 一种抗ca125糖类抗原的高亲和力纳米抗体及其应用 | |
| CN114262377B (zh) | 一种阻断cd70与其配体cd27结合的抗人cd70纳米抗体的制备方法及其编码序列 | |
| CN113150152B (zh) | 一种人源t细胞表面抑制性分子的特异性纳米抗体及其应用 | |
| CN111825767B (zh) | 一种人表皮生长因子受体2的单域抗体、检测试剂盒及其应用 | |
| CN114106187B (zh) | 一种靶向ogt的特异性鲨鱼单域抗体及其制备方法和应用 | |
| CN110423277B (zh) | Pd-1的纳米抗体及其临床应用 | |
| CN113416248B (zh) | 一种纳米抗体及其应用 | |
| CN112625133A (zh) | 一种cdk2纳米抗体及其应用 | |
| CN110396128B (zh) | 抗cd19纳米抗体的制备 | |
| CN113150141B (zh) | 一种抗重组人碱性成纤维细胞生长因子纳米抗体及其应用 | |
| CN110423273B (zh) | 抗绿脓杆菌外毒素a纳米抗体及其应用 | |
| CN114409792B (zh) | 抗EphB4纳米抗体 | |
| CN114057880A (zh) | 一种dll3单克隆抗体 | |
| CN113461825A (zh) | 一种抗pd-l2纳米抗体及其应用 | |
| CN114702590B (zh) | 抗c-MET纳米抗体、编码核酸及其应用 | |
| CN114920843B (zh) | 一种mhcⅱ配体、融合蛋白及其在动物免疫中的应用 | |
| CN116813766B (zh) | 高通透性抗钙调蛋白融合纳米抗体及其制备方法及其应用 | |
| CN112062848B (zh) | 抗cd47单克隆抗体及其应用 | |
| CN108059677B (zh) | 全人源抗pdl-1单链抗体b36及其应用 | |
| CN110054675B (zh) | 免疫原性多肽以及抗ttc36抗体cp4-3及应用 | |
| CN116023492A (zh) | 一种阻断pd1与pdl1结合的抗人pdl1纳米抗体的制备方法及其编码序列 | |
| CN116023482A (zh) | 靶向冠状病毒的中和抗体、其抗原结合片段及其用途 | |
| CN112210009A (zh) | 一种针对pd1的单域抗体及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |