CN112014395A - 一种基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法，包括以下步骤：1)采集显微图像确定虫斑所在区域；2)对虫斑所在区域进行红外光谱扫描，提供红外光谱图；3)裁剪虫斑所在区域，提供萃取获得有机相的气相色谱‑质谱谱图；4)待第一有机溶剂挥发后，加入第二有机溶剂和硅烷化衍生试剂，提供虫斑的硅烷化气相色谱‑质谱谱图；5)将待测卷烟表面虫斑的红外光谱图、气相色谱‑质谱谱图、硅烷化气相色谱‑质谱谱图与虫斑特征指纹图谱中的关键特征成分进行比对，确定虫斑是否为烟草甲虫的成虫及虫卵污染。本发明结合多种分析手段获取较全面的指纹信息，鉴别结果准确可靠，且前处理简单、方法灵敏度高，是一种可以快速鉴别虫斑的方法。

Description

一种基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法
技术领域
本发明涉及卷烟产品质量领域，具体涉及一种基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法。
背景技术
黄斑烟是指卷烟表面出现黄褐色斑点的成品卷烟。卷烟国家标准GB/T 5606.3—2005中明确规定，卷烟表面出现黄斑属于较严重的质量缺陷。这不仅直接影响产品的外观质量，而且会导致卷烟产品的感官品质发生改变，对黄斑烟进行预防和管控一直是烟草行业关注的重点之一。
实际生产中，一般通过人工观察分拣的方法，根据黄斑的表观特征差异，对各生产环节进行排查，摸清原因后对烟支黄斑缺陷进行预防和管控。但人工分拣存在一定的主观性，污染源排查也十分费时费力。对黄斑组成和来源进行分析，能够有针对性地采取措施，快速准确地解决卷烟产品出现的黄斑缺陷。造成卷烟黄斑的原因众多，烟草甲虫是烟草储存和加工过程中最重要的害虫之一，烟虫在卷烟加工过程中可能会残留在卷烟纸上，是导致黄斑形成的原因之一。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法，采用红外光谱和气相色谱-质谱联用技术对烟草甲虫(卵)中的特征成分进行分析检测，建立烟草甲虫(卵)的特征成分指纹图谱，通过将待测黄斑的谱图与特征指纹图谱的有效峰进行比对，实现对虫斑的鉴别。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法，包括如下步骤：
1)采集待测卷烟表面虫斑的显微图像，确定待测卷烟表面虫斑所在区域；
2)对所述待测卷烟表面虫斑所在区域进行红外光谱扫描，提供待测卷烟表面虫斑的红外光谱图；可以利用衰减全反射红外光谱(ATR)进行红外光谱扫描；
3)裁剪所述待测卷烟表面虫斑所在区域，第一有机溶剂萃取，提供萃取获得有机相的气相色谱-质谱谱图；
4)待步骤3)中第一有机溶剂挥发后，加入第二有机溶剂和硅烷化衍生试剂进行衍生化反应，提供待测卷烟表面虫斑的硅烷化气相色谱-质谱谱图；
5)将待测卷烟表面虫斑的红外光谱图、气相色谱-质谱谱图、硅烷化气相色谱-质谱谱图与虫斑特征指纹图谱中的关键特征成分进行比对，确定待测卷烟表面虫斑是否为烟草甲虫的成虫及虫卵污染。
特征指纹图谱是样品经适当处理后，采用一定的分析手段和仪器检测得到的能够标识其特征组分的图谱。基于特征指纹图谱所反映的化学成分信息的特征性，能够有效地对不同样品进行鉴别。因此，通过虫斑特征指纹图谱的构建和解析对卷烟表面黄斑进行鉴别，能够快速准确地判断虫斑是否为烟草甲虫留下的痕迹，从而有针对性地采取防治措施，有效降低虫斑产生规模。
优选地，步骤5)中，所述虫斑特征指纹图谱通过包括如下步骤的方法获得：
a1)制备烟草甲虫的成虫及虫卵的虫斑标准样品；
a2)采集所述虫斑标准样品的显微图像，确定所述虫斑标准样品的虫斑所在区域；
a3)对所述虫斑标准样品的虫斑所在区域进行红外光谱扫描，建立虫斑的特征红外光谱图；可以利用衰减全反射红外光谱(ATR)进行红外光谱扫描；
a4)裁剪所述虫斑标准样品的虫斑所在区域，第一有机溶剂萃取，建立虫斑的特征气相色谱-质谱谱图；
a5)待步骤a4)中第一有机溶剂挥发后，加入第二有机溶剂和硅烷化衍生化试剂进行衍生化反应，建立虫斑的硅烷化特征气相色谱-质谱谱图。
更优选地，还包括如下技术特征中的至少一项：
a11)步骤a1)中，收集烟草甲虫的成虫及虫卵，将烟草甲虫成虫及虫卵挤压在卷烟纸上，制得烟草甲虫的成虫及虫卵的虫斑标准样品；
a31)步骤a3)中，红外光谱扫描范围为4000cm-1～700cm-1；
a41)步骤a4)中，所述第一有机溶剂为正己烷；
a42)步骤a4)中，气相色谱工作条件：色谱柱，DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)毛细管柱；升温程序，初始温度50～70℃保持2min，以10～12℃/min升到320℃，维持20min；进样口温度280～300℃；载气He，流速为1～2mL/min；不分流进样，溶剂延迟5min；
a43)步骤a4)中，质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，扫描范围45～800m/z，离子源温度280℃，传输线温度320℃；
a44)步骤a4)中，对总离子流图各色谱峰中与NIST14 LIBRARY标准质谱库匹配度80％以上的化合物进行定性分析，建立虫斑的气相色谱-质谱特征成分数据库；
a45)步骤a4)中，胆固醇和胆甾-3,5-二烯为烟草甲虫成虫的关键特征成分，油酸和胆固醇为烟草甲虫虫卵的关键特征成分；
a51)步骤a5)中，所述第二有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺；
a52)步骤a5)中，所述衍生化试剂为BSTFA-TMCS；
a53)步骤a5)中，气相色谱工作条件：色谱柱，DB-1MS(30m×0.25mm×0.5μm)毛细管柱；升温程序，初始温度100～120℃保持5min，以2～4℃/min升到210℃，再以10～12℃/min升到300℃，维持15min；进样口温度280～300℃；载气He，流速为1～2mL/min；不分流进样，溶剂延迟5min；
a54)步骤a5)中，质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，扫描范围45～800m/z，离子源温度230℃，传输线温度280℃；
a55)步骤a5)中，对总离子流图各色谱峰中与NIST14 LIBRARY标准质谱库匹配度80％以上的化合物进行定性分析，建立虫斑的硅烷化-气相色谱-质谱特征成分数据库；
a56)步骤a5)中，棕榈酸、尿酸、油酸、硬脂酸和海藻糖为烟草甲虫成虫和烟草甲虫虫卵的关键特征成分。
更优选地，步骤5)中，通过比较红外特征吸收峰、色谱峰保留时间、特征离子和质谱检索匹配度信息的一致性，鉴别待测卷烟表面虫斑是否为烟草甲虫的成虫及虫卵污染。
进一步更优选地，将待测卷烟表面虫斑的红外光谱图与虫斑的特征红外光谱图进行比对，若谱图轮廓基本相符且含有1500～1600cm-1和1600～1700cm-1红外特征吸收峰，初步判断待测卷烟表面虫斑是否为烟草甲虫的成虫及虫卵污染。
更优选地，步骤5)中，将待测卷烟表面虫斑的气相色谱-质谱图和硅烷化气相色谱-质谱图与虫斑的特征气相色谱-质谱谱图和硅烷化特征气相色谱-质谱谱图进行比对，对烟草甲虫虫斑的特征峰进行确认：保留时间相差小于0.1min、荷质比相差小于0.1且质谱匹配度大于80％，关键特征成分为胆固醇、尿酸、棕榈酸、油酸、硬脂酸和海藻糖。
优选地，还包括如下技术特征中的至少一项：
b1)所述第一有机溶剂为正己烷；
b2)所述第二有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺；
b3)所述衍生化试剂为BSTFA-TMCS。
优选地，红外光谱扫描范围为4000cm-1～700cm-1。
优选地，步骤4)中，还包括如下技术特征中的至少一项：
41)气相色谱工作条件：色谱柱，DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)毛细管柱；升温程序，初始温度50～70℃保持2min，以10～12℃/min升到320℃，维持20min；进样口温度280～300℃；载气He，流速为1～2mL/min；不分流进样，溶剂延迟5min；
42)质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，扫描范围45～800m/z，离子源温度280℃，传输线温度320℃。
优选地，步骤5)中，还包括如下技术特征中的至少一项：
51)气相色谱工作条件：色谱柱，DB-1MS(30m×0.25mm×0.5μm)毛细管柱；升温程序，初始温度100～120℃保持5min，以2～4℃/min升到210℃，再以10～12℃/min升到300℃，维持15min；进样口温度280～300℃；载气He，流速为1～2mL/min；不分流进样，溶剂延迟5min；
52)质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，扫描范围45～800m/z，离子源温度230℃，传输线温度280℃。
本发明与现有技术相比，具有以下优势中的至少一项：
1)将多种检测分析方法相结合，建立了虫斑的多谱学多指标成分的特征图谱，提高了鉴别的准确性和可靠性。
2)显微红外分析将光学显微镜与红外光谱相结合，灵敏度高，样品无需制样，能够对微米区域内的斑点进行无损检测，可实现卷烟表面微小斑点痕量污染物的快速分析。
3)利用气相色谱-质谱分析对虫斑中的挥发性特征成分进行分析，并结合硅烷化衍生化方法对难挥发性成分进行分析，获得全面的特征指纹图谱，基于多指标成分的特征图谱能够对虫斑进行准确的鉴别。分析方法灵敏度高，样品前处理方法简单。
4)基于三种特征图谱建立虫斑的综合鉴别体系，与人工排查相比更为客观、准确和高效。
附图说明
图1为烟草甲成虫和虫卵的红外光谱图。
图2为烟草甲成虫和虫卵的气相色谱-质谱总离子流图。
烟草甲成虫：(1)～(10)C16-C44烷烃类物质；(11)胆固醇；(12)胆甾-3,5-二烯。
烟草甲虫卵：(1)油酸；(2)对甲氧基肉桂酸辛酯；(3)油酸酰胺；(4)胆固醇；(5)胆甾-3,5-二烯。
图3为烟草甲成虫和虫卵的硅烷化-气相色谱-质谱总离子流图。
其中，(A)24～39min，(B)39～52min。
烟草甲成虫：(1)柠檬酸；(2)棕榈酸；(3)葡萄糖酸；(4)尿酸；(5)亚油酸；(6)油酸；(7)硬脂酸；(8)海藻糖。
烟草甲虫卵：(1)十二烷酸；(2)柠檬酸；(3)肉豆蔻酸；(4)9-十六碳烯酸；(5)棕榈酸；(6)葡萄糖酸；(7)尿酸；(8)十七烷酸；(9)亚油酸；(10)油酸；(11)硬脂酸；(12)正二十酸；(13)海藻糖。
图4为本发明实施例的待测样品的红外光谱图。
图5为本发明实施例的待测样品的气相色谱-质谱总离子流图。
图6为本发明实施例的待测样品的硅烷化-气相色谱-质谱总离子流图。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
以下实施例使用的试剂及仪器如下：
1.试剂：衍生化试剂为BSTFA+TMCS(99:1)硅烷化试剂，购自Supelco公司；正己烷、DMF为色谱级试剂。
2.仪器：红外分析采用Thermo公司的Nicolet iN10傅里叶变换显微红外光谱仪；气相色谱柱为安捷伦公司的DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)和DB-1MS(30m×0.25mm×0.5μm)毛细管柱。
具体包括以下步骤：
1.标准样品制备
收集烟草甲虫的成虫及虫卵，用玻璃或金属板将烟草甲虫成虫及虫卵挤压在卷烟纸上，制成烟草甲成虫及虫卵的黄斑样品。
2.虫斑的红外光谱分析
采集虫斑样品的显微图像，利用衰减全反射红外光谱(ATR)对采集到的显微图像中虫斑所在区域进行红外光谱扫描(扫描范围为4000cm-1～700cm-1)，建立虫斑的特征红外光谱图。图1为烟草甲成虫和虫卵的红外图谱，1500～1600cm-1为酰胺II带，包括C-N伸缩和N-H弯曲振动，1600～1700cm-1为酰胺I带，包括C＝O和双键的伸缩振动，可反映蛋白质的二级结构。
3.虫斑的气相色谱-质谱(GC-MS)分析
裁剪虫斑置于色谱瓶中，加入50μL正己烷进行萃取，采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用仪对虫斑中的主要成分进行分离，获得虫斑的特征气相色谱-质谱谱图(图2)，对总离子流图各色谱峰中与NIST14 LIBRARY标准质谱库匹配度80％以上的化合物进行定性分析。选取12个特征色谱峰作为烟草甲成虫的特征成分：
(1)23.74min，荷质比57.0、71.0和85.0；
(2)23.98min，荷质比57.0、71.0和85.0；
(3)24.27min，荷质比57.0、71.0和85.0；
(4)24.68min，荷质比57.0、71.0和85.0；
(5)24.88min，荷质比57.0、71.0和85.0；
(6)25.14min，荷质比57.0、71.0和85.0；
(7)25.35min，荷质比57.0、71.0和85.0；
(8)25.53min，荷质比57.0、71.0和85.0；
(9)26.18min，荷质比57.0、71.0和85.0；
(10)26.43min，荷质比57.0、71.0和85.0；
(11)26.76min，荷质比386.2、301.3和353.3，胆固醇；
(12)27.53min，荷质比368.4、353.2和105.0，胆甾-3,5-二烯。
其中(1)～(10)为C16-C44烷烃类物质，是昆虫表皮蜡质的主要成分；(11)和(12)为成虫的关键特征成分。
选取5个特征色谱峰作为烟草甲虫卵的特征成分：
(1)19.45min，荷质比55.0、69.0和83.0，油酸；
(2)20.89min，荷质比178.0、161.0和133.0，对甲氧基肉桂酸辛酯；
(3)21.21min，荷质比59.0、72.0和55.0，油酸酰胺；
(4)26.77min，荷质比386.2、301.3和353.3，胆固醇；
(5)27.56min，荷质比368.4、353.2和105.0，胆甾-3,5-二烯。
其中(1)和(4)为虫卵的关键特征成分。
气相色谱工作条件：色谱柱，DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)毛细管柱；升温程序，初始温度60℃保持2min，以10℃/min升到320℃，维持20min；进样口温度300℃；载气He，流速为1.5mL/min；不分流进样，溶剂延迟5min。
质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，扫描范围45～800m/z，离子源温度280℃，传输线温度320℃。
4.虫斑的硅烷化-气相色谱-质谱(硅烷化-GC-MS)分析
待步骤3)色谱瓶中的正己烷挥发完全后，加入N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和衍生化试剂(1:1)50μL，在70℃下衍生化反应30min后，采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用仪进行分离，获得虫斑的硅烷化特征气相色谱-质谱谱图，对总离子流图各色谱峰中与NIST14LIBRARY标准质谱库匹配度80％以上的化合物进行定性分析。
选取8个特征色谱峰作为烟草甲成虫的特征成分：
(1)32.24min，荷质比73.0、147.0和273.0，柠檬酸；
(2)39.85min，荷质比117.0、73.0和313.3，棕榈酸；
(3)40.40min，荷质比73.0、147.0和333.0，葡萄糖酸；
(4)42.21min，荷质比73.0、441.0和456.0，尿酸；
(5)44.16min，荷质比73.0、129.0和337.3，亚油酸；
(6)44.34min，荷质比339.0、117.0和129.0，油酸；
(7)44.83min，荷质比73.0、117.0和341.0，硬脂酸；
(8)51.09min，荷质比361.0、191.0和73.0，海藻糖。
其中(2)、(4)、(6)、(7)和(8)为关键特征成分。
选取13个特征色谱峰作为烟草甲虫卵的特征成分：
(1)24.32min，荷质比73.0、117.0和257.0，十二烷酸；
(2)32.22min，荷质比73.0、147.0和273.0，柠檬酸；
(3)32.34min，荷质比73.0、117.0和285.0，肉豆蔻酸；
(4)38.92min，荷质比117.0、129.0和311.0，9-十六碳烯酸；
(5)39.90min，荷质比117.0、73.0和313.0，棕榈酸；
(6)40.39min，荷质比73.0、147.0和333.0，葡萄糖酸；
(7)42.21min，荷质比73.0、441.0和456.0，尿酸；
(8)42.89min，荷质比73.0、117.0和327.0，十七烷酸；
(9)44.15min荷质比73.0、129.0和337.3，亚油酸；
(10)44.34min，荷质比339.0、117.0和129.0，油酸；
(11)44.83min，荷质比73.0、117.0和341.0，硬脂酸；
(12)47.45min，荷质比117.0、73.0和369.0，正二十酸；
(13)51.09min，荷质比361.0、191.0和73.0，海藻糖。
其中(5)、(7)、(10)、(11)和(13)为关键特征成分。
气相色谱工作条件：色谱柱，DB-1MS(30m×0.25mm×0.5μm)毛细管柱；升温程序，初始温度120℃保持5min，以2.5℃/min升到210℃，再以10℃/min升到300℃，维持15min；进样口温度280℃；载气He，流速为1.2mL/min；不分流进样，溶剂延迟5min。
质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，扫描范围45～800m/z，离子源温度230℃，传输线温度280℃。
5.黄斑烟分析
待鉴别黄斑分别进行步骤2、3和4的分析检测，获得红外光谱图、气相色谱-质谱图和硅烷化-气相色谱-质谱图。将待测黄斑的红外光谱图与虫斑标准红外谱图进行比对，若谱图轮廓基本相符且含有1500～1600cm-1和1600～1700cm-1红外特征吸收峰，可以初步判断为虫斑污染。进一步验证，将待测黄斑的气相色谱-质谱图和硅烷化-气相色谱-质谱图与虫斑的特征标准谱图进行比对，对虫斑的特征峰进行确认，要求保留时间相差小于0.1min、荷质比相差小于0.1且质谱匹配度大于80％，关键特征成分为胆固醇、尿酸、棕榈酸、油酸、硬脂酸和海藻糖。
通过综合比较红外特征吸收峰、色谱峰保留时间、特征离子、质谱检索匹配度等信息的一致性，鉴别黄斑是否为烟草甲成虫或虫卵污染。
实施例
对某批次存在黄斑质量缺陷的成品卷烟，经裁剪、萃取、硅烷化等不同前处理后，进行红外光谱、气相色谱-质谱、硅烷化-气相色谱-质谱分析，将谱图与虫斑的特征谱图进行比对。
1.虫斑的红外光谱分析
采集待测卷烟表面虫斑的显微图像，利用衰减全反射红外光谱(ATR)对采集到的显微图像中虫斑所在区域进行红外光谱扫描(扫描范围为4000cm-1～700cm-1)。图4为待测样品的红外谱图，谱图中没有酰胺I带(1600～1700cm-1)和II(1500～1600cm-1)带的特征峰，与虫斑的特征谱图不符。
2.虫斑的气相色谱-质谱(GC-MS)分析
裁剪虫斑置于色谱瓶中，加入50μL正己烷进行萃取，采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用仪对虫斑中的主要成分进行分离。图5为待测样品的气相色谱-质谱总离子流图，按照保留时间相差小于0.1min、荷质比相差小于0.1且质谱匹配度大于80％的一致性要求，样品中检出的成分只有对甲氧基肉桂酸辛酯，缺乏胆固醇的特征峰。
气相色谱工作条件：色谱柱，DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)毛细管柱；升温程序，初始温度60℃保持2min，以10℃/min升到320℃，维持20min；进样口温度300℃；载气He，流速为1.5mL/min；不分流进样，溶剂延迟5min。
质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，扫描范围45～800m/z，离子源温度280℃，传输线温度320℃。
3.虫斑的硅烷化-气相色谱-质谱(硅烷化-GC-MS)分析
待色谱瓶中的正己烷挥发完全后，加入N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和衍生化试剂(1:1)50μL，在70℃下衍生化反应30min后，采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用仪进行分离。图6为待测样品的硅烷化-气相色谱-质谱总离子流图，按照保留时间相差小于0.1min、荷质比相差小于0.1且质谱匹配度大于80％的一致性要求，样品中检出的成分有棕榈酸、油酸、硬脂酸，但缺少尿酸、海藻糖的特征峰。
气相色谱工作条件：色谱柱，DB-1MS(30m×0.25mm×0.5μm)毛细管柱；升温程序，初始温度120℃保持5min，以2.5℃/min升到210℃，再以10℃/min升到300℃，维持15min；进样口温度280℃；载气He，流速为1.2mL/min；不分流进样，溶剂延迟5min。
质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，扫描范围45～800m/z，离子源温度230℃，传输线温度280℃。
综合以上比对结果，判断该批次黄斑烟为非烟草甲导致的污染。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (10)

1.一种基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)采集待测卷烟表面虫斑的显微图像，确定待测卷烟表面虫斑所在区域；
2)对所述待测卷烟表面虫斑所在区域进行红外光谱扫描，提供待测卷烟表面虫斑的红外光谱图；
3)裁剪所述待测卷烟表面虫斑所在区域，第一有机溶剂萃取，提供萃取获得有机相的气相色谱-质谱谱图；
4)待步骤3)中第一有机溶剂挥发后，加入第二有机溶剂和硅烷化衍生试剂进行衍生化反应，提供待测卷烟表面虫斑的硅烷化气相色谱-质谱谱图；
5)将待测卷烟表面虫斑的红外光谱图、气相色谱-质谱谱图、硅烷化气相色谱-质谱谱图与虫斑特征指纹图谱中的关键特征成分进行比对，确定待测卷烟表面虫斑是否为烟草甲虫的成虫及虫卵污染。
2.如权利要求1所述的基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法，其特征在于，步骤5)中，所述虫斑特征指纹图谱通过包括如下步骤的方法获得：
a1)制备烟草甲虫的成虫及虫卵的虫斑标准样品；
a2)采集所述虫斑标准样品的显微图像，确定所述虫斑标准样品的虫斑所在区域；
a3)对所述虫斑标准样品的虫斑所在区域进行红外光谱扫描，建立虫斑的特征红外光谱图；
a4)裁剪所述虫斑标准样品的虫斑所在区域，第一有机溶剂萃取，建立虫斑的特征气相色谱-质谱谱图；
a5)待步骤a4)中第一有机溶剂挥发后，加入第二有机溶剂和硅烷化衍生化试剂进行衍生化反应，建立虫斑的硅烷化特征气相色谱-质谱谱图。
3.如权利要求2所述的基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法，其特征在于，还包括如下技术特征中的至少一项：
a11)步骤a1)中，收集烟草甲虫的成虫及虫卵，将烟草甲虫成虫及虫卵挤压在卷烟纸上，制得烟草甲虫的成虫及虫卵的虫斑标准样品；
a31)步骤a3)中，红外光谱扫描范围为4000cm-1～700cm-1；
a41)步骤a4)中，所述第一有机溶剂为正己烷；
a42)步骤a4)中，气相色谱工作条件：色谱柱，DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)毛细管柱；升温程序，初始温度50～70℃保持2min，以10～12℃/min升到320℃，维持20min；进样口温度280～300℃；载气He，流速为1～2mL/min；不分流进样，溶剂延迟5min；
a43)步骤a4)中，质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，扫描范围45～800m/z，离子源温度280℃，传输线温度320℃；
a44)步骤a4)中，对总离子流图各色谱峰中与NIST14 LIBRARY标准质谱库匹配度80％以上的化合物进行定性分析，建立虫斑的气相色谱-质谱特征成分数据库；
a45)步骤a4)中，胆固醇和胆甾-3,5-二烯为烟草甲虫成虫的关键特征成分，油酸和胆固醇为烟草甲虫虫卵的关键特征成分；
a51)步骤a5)中，所述第二有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺；
a52)步骤a5)中，所述衍生化试剂为BSTFA-TMCS；
a53)步骤a5)中，气相色谱工作条件：色谱柱，DB-1MS(30m×0.25mm×0.5μm)毛细管柱；升温程序，初始温度100～120℃保持5min，以2～4℃/min升到210℃，再以10～12℃/min升到300℃，维持15min；进样口温度280～300℃；载气He，流速为1～2mL/min；不分流进样，溶剂延迟5min；
a54)步骤a5)中，质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，扫描范围45～800m/z，离子源温度230℃，传输线温度280℃；
a55)步骤a5)中，对总离子流图各色谱峰中与NIST14 LIBRARY标准质谱库匹配度80％以上的化合物进行定性分析，建立虫斑的硅烷化-气相色谱-质谱特征成分数据库；
a56)步骤a5)中，棕榈酸、尿酸、油酸、硬脂酸和海藻糖为烟草甲虫成虫和烟草甲虫虫卵的关键特征成分。
4.如权利要求2所述的基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法，其特征在于，步骤5)中，通过比较红外特征吸收峰、色谱峰保留时间、特征离子和质谱检索匹配度信息的一致性，鉴别待测卷烟表面虫斑是否为烟草甲虫的成虫及虫卵污染。
5.如权利要求4所述的基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法，其特征在于，将待测卷烟表面虫斑的红外光谱图与虫斑的特征红外光谱图进行比对，若谱图轮廓基本相符且含有1500～1600cm-1和1600～1700cm-1红外特征吸收峰，初步判断待测卷烟表面虫斑是否为烟草甲虫的成虫及虫卵污染。
6.如权利要求2所述的基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法，其特征在于，步骤5)中，将待测卷烟表面虫斑的气相色谱-质谱图和硅烷化气相色谱-质谱图与虫斑的特征气相色谱-质谱谱图和硅烷化特征气相色谱-质谱谱图进行比对，对烟草甲虫虫斑的特征峰进行确认：保留时间相差小于0.1min、荷质比相差小于0.1且质谱匹配度大于80％，关键特征成分为胆固醇、尿酸、棕榈酸、油酸、硬脂酸和海藻糖。
7.如权利要求1所述的基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法，其特征在于，还包括如下技术特征中的至少一项：
b1)所述第一有机溶剂为正己烷；
b2)所述第二有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺；
b3)所述衍生化试剂为BSTFA-TMCS。
8.如权利要求1所述的基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法，其特征在于，红外光谱扫描范围为4000cm-1～700cm-1。
9.如权利要求1所述的基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法，其特征在于，步骤4)中，还包括如下技术特征中的至少一项：
41)气相色谱工作条件：色谱柱，DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)毛细管柱；升温程序，初始温度50～70℃保持2min，以10～12℃/min升到320℃，维持20min；进样口温度280～300℃；载气He，流速为1～2mL/min；不分流进样，溶剂延迟5min；
42)质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，扫描范围45～800m/z，离子源温度280℃，传输线温度320℃。
10.如权利要求1所述的基于特征指纹图谱鉴别卷烟表面虫斑的方法，其特征在于，步骤5)中，还包括如下技术特征中的至少一项：
51)气相色谱工作条件：色谱柱，DB-1MS(30m×0.25mm×0.5μm)毛细管柱；升温程序，初始温度100～120℃保持5min，以2～4℃/min升到210℃，再以10～12℃/min升到300℃，维持15min；进样口温度280～300℃；载气He，流速为1～2mL/min；不分流进样，溶剂延迟5min；
52)质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，扫描范围45～800m/z，离子源温度230℃，传输线温度280℃。
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