具体实施方式
下列制备例、实施例和药理活性测试实施例进一步阐明本发明,但并不限制本发明的范围。
实施例1:2-萘-2-基八氢吡咯[3,4-c]吡咯
步骤1:
2-溴代萘1-a(10.7g,52mmol,1.1eq),六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(10g,47mmol,1eq)加入150mL甲苯,甲苯溶液中加入Pd2(dba)3(2.16g,2.36mmol,0.05eq),BINAP(2.35g,3.78mmol,0.08eq),叔丁醇钾(7.9g,70.8mmol,1.5eq),反应N2保护,外温105度加热10h。150ml乙酸乙酯稀释反应液,过滤,少量乙酸乙酯洗涤滤渣,滤液加入300ml饱和氯化钠溶液洗涤,有机相无水硫酸钠干燥,旋干,得到褐色油状物16g,油状物加入100ml乙醇打浆,大量固体析出,室温搅拌2h固体分散均匀,过滤,滤饼50度烘3h,得到1-b,灰色固体15.2g,收率95.3%。
步骤2:
化合物1-b(15.2g)加入100ml甲醇中,加入80ml浓盐酸,室温搅拌2h。反应液加500ml水稀释,400ml甲基叔丁基醚萃取除去小极性杂质,水相使用200ml 5M NaOH溶液调pH至9,加入600ml二氯甲烷萃取,有机相加入300ml饱和氯化钠溶液洗涤,无水硫酸钠干燥,旋干,得到黄色固体10.8g。ESI-MS(m/z):239.17[M+H]+.HPLC>95%.
实施例2:2-甲基-5-(萘-2-基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯
步骤1:
实施例1的产物(7.5g,31.6mmol)加入120ml甲酸乙酯中,加入三乙胺(17.6ml,126.6mmol,4eq),体系外温60度加热3h。100ml乙酸乙酯稀释,有机相使用200ml饱和氯化铵溶液洗涤,接着使用200ml饱和氯化钠溶液洗涤,无水硫酸钠干燥,旋干,得到化合物2-a,淡黄色固体8.4g,收率99.8%。
步骤2:
化合物2-a(8.4g,31.6mmol)加入120ml干燥四氢呋喃中,加入1M硼烷四氢呋喃溶液(63.2ml,63.2mmol,2eq),反应液逐渐溶清,N2保护下外温68度2h。反应液冰浴,7.9ml盐酸(3eq)溶于100ml甲醇,滴加到反应液中,产生大量气泡,反应液外温68度加热10h。旋干反应液,残液加水80ml,水相用20ml 5M NaOH溶液调pH至9,加入200ml DCM萃取,有机相加入200ml饱和氯化钠溶液洗涤,无水硫酸钠干燥,旋干,得到固体8g。ESI-MS(m/z):253.35[M+H]+.HPLC>95%.
实施例3:5-(苯并[b]噻吩-4-基)八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
步骤1:
0℃下向3-a(2.27g,10mmol)及三乙胺(1.01g,10mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液滴加二氯亚砜(1.2g,10mmol),滴加完毕后升到20℃反应5小时。加入水淬灭反应,分液,有机层浓缩并柱层析(EA:PE=1:15至1:5)得到化合物3-b(1.25g,收率60%)。
步骤2:
0℃下向双联硼酸频哪醇酯(2.54g,10mmol)、氯化亚铜(25mg,0.25mmol)及配体xantphos(145mg,0.25mmol)的THF(30mL)溶液加叔丁醇钾(1.12g,10mmol),氮气保护,加完毕后升到20℃反应30min后滴加3-b(1.23g,5mmol)的THF(2mL)溶液;室温反应过夜。反应液直接加硅胶拌样过柱(EA:PE=1:15至1:5)得到化合物3-c(800mg,收率48%)。
步骤3:
化合物3-c(340mg,1mmol)、4-溴苯并噻吩(213mg,1mmol)、碳酸铯(326mg,1mmol)及dppfPdCl2(73.2mg,0.1mmol)的二氧六环(10mL)溶液在氮气保护下80℃反应过夜。反应液直接加硅胶拌样过柱(EA:PE=1:15至1:5)得到化合物3-d(40mg,收率12%)。
步骤4:
化合物3-d(66mg,0.2mmol)溶于甲醇(1mL),加入4N HCl甲醇溶液(1mL),室温反应1h。反应液浓缩干加入甲基叔丁基醚打浆得到标题化合物,类白色固体40mg。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.88(d,1H),7.69(d,1H),7.54(d,1H),7.46(d,1H),7.23(t,1H),3.28(m,2H),3.20(m,2H),3.08(m,1H),2.90(m,2H),2.39(m,2H),1.37(m,2H).ESI-MS(m/z):244.20[M+H]+.
实施例4:5-(苯并噻吩-5-基)八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
步骤1:
化合物4-a(340mg,1mmol)、5-溴苯并噻吩(213mg,1mmol)、碳酸铯(326mg,1mmol)及dppfPdCl2(73.2mg,0.1mmol)加入二氧六环(10mL)中,氮气保护80℃反应过夜。反应液直接加硅胶拌样过柱(EA:PE=1:15至1:5)得到化合物4-b(43mg,收率14%)。
步骤2:
将化合物4-b(66mg,0.2mmol)溶于甲醇(1mL),加入4N盐酸甲醇溶液(1mL),室温反应1h。反应液浓缩干加入甲叔醚打浆得到标题化合物,类白色固体38mg。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.00(d,1H),7.81(d,1H),7.62(d,1H),7.43(dd,1H),7.33(d,1H),3.28(m,2H),3.20(m,2H),3.09(m,1H),2.90(m,2H),2.40(m,2H),1.37(m,2H).ESI-MS(m/z):244.20[M+H]+.
实施例5:6-(苯并[b]噻吩-4-基)十氢环庚烷[c]吡咯盐酸盐
步骤1:
0℃下向化合物5-a(2.55g,10mmol)及三乙胺(1.01g,10mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液滴加二氯亚砜(1.2g,10mmol),滴加完毕后升到20℃反应5小时。加入水淬灭反应,分液,有机层浓缩并柱层析(EA:PE=1:15至1:5)得到化合物5-b(1.5g,收率55%)。
步骤2:
0℃下向双联硼酸频哪醇酯(2.54g,10mmol)、氯化亚铜(25mg,0.25mmol)及配体xantphos(145mg,0.25mmol)的THF(30mL)溶液加叔丁醇钾(1.12g,10mmol),氮气保护,加完后升到20℃反应30min后滴加化合物5-b(1.37g,5mmol)的THF(2mL)溶液;室温反应过夜。反应液直接加硅胶拌样过柱(EA:PE=1:15至1:5)得到化合物5-c(900mg,收率50%)。
步骤3:
化合物5-c(360mg,1mmol)、4-溴苯并噻吩(213mg,1mmol)、碳酸铯(326mg,1mmol)及dppfPdCl2(73.2mg,0.1mmol)的二氧六环(10mL)溶液在氮气保护下80℃反应过夜。反应液直接加硅胶拌样过柱(EA:PE=1:15至1:5)得到化合物5-d(45mg,收率13%)。
步骤4:
化合物5-d(74mg,0.2mmol)溶于甲醇(1mL),加入4N盐酸甲醇溶液(1mL),室温反应1h。反应液浓缩干加入甲基叔丁基醚打浆得到标题化合物,类白色固体48mg。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.90(d,1H),7.70(d,1H),7.56(d,1H),7.47(d,1H),7.24(t,1H),3.52(m,3H),2.87(dd,2H),2.53(m,2H),1.89(m,6H),1.56(m,2H).ESI-MS(m/z):272.28[M+H]+.
实施例6:2-(萘-2-基)十氢吡咯[3,4-d]吖庚因马来酸盐
步骤1:
化合物6-a(200mg,0.66mmol,1eq),2-溴代萘(137mg,0.66mmol,1eq),Pd2(dba)3(30mg,0.033mmol,0.05eq),BINAP(33mg,0.053mmol,0.08eq),叔丁醇钾(222mg,1.98mmol,3eq)加入5ml二氧六环中,氮气保护,外温105度加热8h。过滤,乙酸乙酯洗涤滤饼,滤液水洗,饱和氯化钠洗,干燥,旋干,硅胶柱层析得到化合物6-b粗品,油状物153mg。
步骤2及步骤3:
化合物6-b(153mg,0.43mmol,1eq)溶于氯仿,加入1-氯乙基氯甲酸乙酯(93μl,0.86mmol,2eq),外温70度加热4h。旋干反应液,加入甲醇,70度加热回流1h。加水,加入1ml浓盐酸,甲叔醚除杂,水相调pH至9,DCM萃取,有机相饱和食盐水洗,干燥,旋干,柱层析,得到固体95mg,THF中成马来酸盐,烘干得到标题化合物,白色固体98mg。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46(br,2H),7.73(d,1H),7.70(d,1H),7.63(d,1H),7.34(t,1H),7.15(t,1H),7.06(dd,1H),6.79(d,1H),6.02(s,2H),3.70(dd,2H),3.37(m,2H),3.00(m,4H),2.70(br,2H),2.00-1.79(m,4H).ESI-MS(m/z):267.37[M+H]+.
实施例7:6-(苯并噻吩-5-基)十氢吡咯[3,4-d]吖庚因马来酸盐
步骤1:
将820mg原料7-a、1.1eq原料5-溴苯并噻吩、0.05eq Pd2(dba)3,0.08eq BINAP混合于甲苯中,室温下搅拌5min,再加入2eq叔丁醇钾,氮气置换三次,80℃反应过夜。滤除不溶物,滤渣用乙酸乙酯洗,合并滤液,食盐水洗,干燥、浓缩后硅胶柱层析得产物870mg,用少量二氯甲烷打浆得到化合物7-b,白色固体780mg。
步骤2:
将化合物7-b溶于甲醇中,加入盐酸,室温下搅拌1h,反应毕,加水,加MTBE,弃去有机相,水相分出调pH至弱碱性,再加DCM萃取,有机相再用食盐水洗一次,干燥浓缩得油状物,于THF中成马来酸盐,烘干得标题化合物,淡黄色固体920mg。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(d,2H),7.75(d,1H),7.62(d,1H),7.26(d,1H),7.19(d,1H),6.99(dd,1H),6.09(s,2H),3.83(dd,2H),3.35(brs,2H),3.18(ddd,2H),2.77(d,2H),2.56(q,2H),1.66-1.85(m,4H).ESI-MS(m/z):273.28[M+H]+.
实施例8:5-(萘-1-基)八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
步骤1:
取500mg 1-溴代萘溶解到5mL THF,氮气保护,外温-80度冷却,控制内温小于-70度将1.05eq.n-BuLi(2.5M)滴加至1-溴代萘的THF溶液中,-70度搅拌1h以形成8-b,控制内温小于-70度将0.8eq.原料8-a(溶解于3mL THF)滴加至反应中,缓慢升温至-40度搅拌12h。氯化铵水溶液淬灭后,乙酸乙酯/水分层,浓缩乙酸乙酯相得粗品8-c。
步骤2:
粗品8-c溶解到5mL甲醇中,加入2mL浓盐酸,65度回流1h。降温至室温,丙酮浓缩置换两次,再用丙酮打浆,过滤烘干后得到140mg 8-d。
步骤3:
取90mg化合物8-d溶解到5mL醋酸溶液中,加入20mg 10%Pd/C,氢气置换后25度反应24h。过滤反应液,用5ml 20%NaOH碱化醋酸相,10mL DCM分层,浓缩有机相。冰水浴,加入3mL HCl-二氧六环成盐,过滤固体,5mL石油醚打浆,过滤烘干后得到26mg标题化合物,白色固体。ESI-MS m/z 238.32[M+H]+.
实施例9:5-(3,4-二氯苯基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
步骤1:
500mg 3,4-二氯溴苯9-b(1eq)加入到5ml新蒸的THF中,氮气保护下降温至-80度。滴加丁基锂溶液(2.5M,1.1eq),体系溶清。在此温度下加入含300mg 9-a的2ml THF溶液(0.6eq)中,然后自然升温至室温反应。用氯化铵淬灭反应体系,乙酸乙酯和水萃取,干燥、浓缩柱层析得到90mg中间体9-c。
步骤2:
将中间体9-c加入到2ml甲醇中,加入1ml浓盐酸,加热回流3小时。浓缩体系至干,加入丙酮打浆得到42mg标题化合物,白色片状晶体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.66(d,1H),7.51(d,1H),7.45(dd,1H),6.17(m,1H),3.81(m,1H),3.57-3.26(m,4H),3.15(m,2H),2.74(m,1H).
实施例10:2-(苯并[b]噻吩-7-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以7-溴代苯并[b]噻吩代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(苯并[b]噻吩-7-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯。
将碱式产物用甲醇溶解,1.05eq马来酸溶于四氢呋喃中,滴加入碱式产物的甲醇溶液中,室温搅拌5min,浓缩,加入四氢呋喃打浆,室温搅拌3h,过滤,滤饼50度烘3h,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,2H),7.72(d,1H),7.46(d,1H),7.43(d,1H),7.29(t,1H),6.77(d,1H),6.02(s,2H),3.47-3.60(m,4H),3.27-3.37(m,2H),3.03-3.15(m,4H).ESI-MS(m/z):245.22[M+H]+.
实施例11:2-(苯并[b]噻吩-7-基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯草酸盐
除了以实施例10的碱式产物代替实施例1的产物以外,以与实施例2相同的方式制备2-(苯并[b]噻吩-7-基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯。
将碱式产物用甲醇溶解,1.05eq草酸溶于四氢呋喃中,滴加入碱式产物的甲醇溶液中,室温搅拌5min,浓缩,加入四氢呋喃打浆,室温搅拌3h,过滤,滤饼50度烘3h,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.59(brs,2H),7.72(d,1H),7.47(d,1H),7.44(d,1H),7.29(t,1H),6.79(d,1H),3.64(dd,2H),3.52(dd,2H),3.24(t,2H),3.13(m,2H),3.01(m,2H),2.80(s,3H).ESI-MS(m/z):259.27[M+H]+.
实施例12:2-(苯并[b]噻吩-4-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以4-溴代苯并[b]噻吩代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备碱式产物,参照实施例10成马来酸盐,得到2-(苯并[b]噻吩-4-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78(s,2H),7.67(d,1H),7.64(d,1H),7.55(d,1H),7.24(t,1H),6.76(d,1H),6.02(s,2H),3.51(dd,2H),3.43(dd,2H),3.23(dd,2H),3.04-3.20(m,4H).ESI-MS(m/z):245.21[M+H]+.
实施例13:2-(苯并[b]噻吩-4-基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯氢溴酸盐
除了以实施例12的碱式产物代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-(苯并[b]噻吩-4-基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,采用40%氢溴酸水溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液,参照实施例10成氢溴酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.80(d,1H),7.56-7.72(m,3H),7.26(t,1H),6.82(dd,1H),3.89(td,1H),3.61(dd,1H),3.20-3.55(m,5H),2.92-3.11(m,3H),2.87(dd,3H).ESI-MS(m/z):259.30[M+H]+.
实施例14:2-(苯并[b]噻吩-5-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以5-溴代苯并[b]噻吩代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备碱式产物,参照实施例10成马来酸盐,得到2-(苯并[b]噻吩-5-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78(s,2H),7.79(d,1H),7.65(d,1H),7.29(d,1H),7.08(d,1H),6.88(dd,1H),6.01(s,2H),3.44-3.52(m,2H),3.39(dd,2H),3.26-3.30(m,2H),3.07-3.17(m,4H).ESI-MS(m/z):245.18[M+H]+.
实施例15:2-(苯并[b]噻吩-5-基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯盐酸盐
除了以实施例14的碱式产物代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-(苯并[b]噻吩-5-基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,采用氯化氢甲醇溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液、参照实施例10成盐酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06(m,3H),7.73(t,1H),7.63(dd,1H),7.43(t,1H),3.97(m,4H),3.85(d,1H),3.75(m,1H),3.65-3.46(m,3H),3.43(dd,1H),3.01(d,3H).ESI-MS(m/z):259.23[M+H]+.
实施例16:2-(3,4-二氯苯基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯
除了以1-溴-3,4-二氯苯代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(3,4-二氯苯基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯。
1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ7.29(d,1H),6.84(d,1H),6.65(dd,1H),3.59(m,2H),3.42(m,2H),3.33(m,2H),3.27-3.18(m,4H).ESI-MS(m/z):257.29[M+H]+.
实施例17:2-(3,4-二氯苯基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯
除了以实施例16的产物代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-(3,4-二氯苯基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.20(d,1H),6.67(d,1H),6.44(dd,1H),3.37(t,2H),3.14(dd,2H),2.97(m,2H),2.70(t,2H),2.46(dd,2H),2.33(s,3H).ESI-MS(m/z):271.24[M+H]+.
实施例18:2-(苯并呋喃-4-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯盐酸盐
除了以4-溴苯并呋喃代替2-溴代萘,以与实施例1相同的方式制备2-(苯并呋喃-4-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,采用氯化氢甲醇溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液、参照实施例10成盐酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.46(d,2H),7.84(d,1H),7.16(d,1H),7.13(t,1H),6.98(d,1H),6.41(d,1H),3.40-3.60(m,6H),3.06-3.15(m,4H).ESI-MS(m/z):229.19[M+H]+.
实施例19:2-(苯并[b]噻吩-6-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以6-溴苯并[b]噻吩代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(苯并呋喃-4-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例10成马来酸盐得到标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(s,2H),7.69(d,1H),7.35(d,1H),7.25(d,1H),7.18(d,1H),6.85(dd,1H),6.02(s,2H),3.48(m,2H),3.40(dd,2H),3.33(m,2H),3.05-3.17(m,4H).ESI-MS(m/z):245.39[M+H]+.
实施例20:2-(苯并呋喃-7-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯
除了以7-溴苯并呋喃代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(苯并呋喃-7-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.90(d,1H),7.03(m,2H),6.86(d,1H),6.51(d,1H),3.56(m,2H),3.24(dd,2H),2.94(m,2H),2.78(m,2H),2.62(m,2H).ESI-MS(m/z):229.34[M+H]+.
实施例21:2-(苯并呋喃-5-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以5-溴苯并呋喃代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(苯并呋喃-7-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例10成马来酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78(s,2H),7.86(d,1H),7.43(d,1H),6.86(d,1H),6.81(dd,1H),6.76(dd,1H),6.02(s,2H),3.47(m,2H),3.37(m,2H),3.22(m,2H),3.05-3.15(m,4H).ESI-MS(m/z):229.27[M+H]+.
实施例22:2-(苯并[b]噻吩-2-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以2-溴苯并[b]噻吩代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(苯并[b]噻吩-2-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例10成马来酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.81(s,2H),7.68(d,1H),7.45(d,1H),7.21(td,1H),7.03(t,1H),6.09(s,1H),6.02(s,2H),3.37-3.49(m,4H),3.33(m,2H),3.09-3.20(m,4H).ESI-MS(m/z):245.18[M+H]+.
实施例23:2-(苯并[b]噻吩-3-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以3-溴苯并[b]噻吩代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(苯并[b]噻吩-3-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例10成马来酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(s,2H),7.96(dd,1H),7.91(dd,1H),7.38(m,2H),6.78(s,1H),6.02(s,2H),3.50(m,2H),3.26-3.46(m,2H),3.17(d,2H),3.01-3.11(m,4H).ESI-MS(m/z):245.18[M+H]+.
实施例24:2-(萘-1-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以1-溴代萘代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(萘-1-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例10成马来酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(s,2H),8.15(m,1H),7.89(m,1H),7.59(d,1H),7.52(m,2H),7.42(t,1H),7.11(d,1H),6.01(s,2H),3.57(m,2H),3.28(d,2H),3.19(dd,2H),3.09(d,4H).ESI-MS m/z 239.27[M+H]+.
实施例25:2-乙基-5-(萘-2-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯草酸盐
除了以乙酸乙酯代替甲酸乙酯,以与实施例2相同的方式制备2-乙基-5-(萘-2-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例11成草酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.75(d,1H),7.72(d,1H),7.68(d,1H),7.36(m,1H),7.18(m,2H),6.92(d,1H),3.59(br,2H),3.51(m,2H),3.32(m,2H),3.13(m,6H),1.2(t,3H).ESI-MS m/z 267.40[M+H]+.
实施例26:2-甲基-5-(萘-1-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯草酸盐
除了以实施例24的碱式产物代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-甲基-5-(萘-1-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例11成草酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.18(m,1H),7.88(m,1H),7.59(d,1H),7.52(m,2H),7.41(t,1H),7.11(d,1H),3.62(br,2H),3.28(d,2H),3.08(m,6H),2.86(s,3H).ESI-MS m/z253.33[M+H]+.
实施例27:2-(2,3-二氯苯基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以1-溴-2,3-二氯苯代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(2,3-二氯苯基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例10成马来酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(s,2H),7.29(m,2H),7.10(dd,1H),6.01(s,2H),3.53(m,2H),3.34(d,2H),3.00(m,6H).ESI-MS m/z 257.23[M+H]+.
实施例28:2-(2,3-二氯苯基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯草酸盐
除了以实施例27的碱式产物代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-(2,3-二氯苯基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例11成草酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.29(m,2H),7.10(dd,1H),3.58(m,2H),3.32(d,2H),3.00(m,6H),2.77(s,3H).ESI-MS m/z 271.23[M+H]+.
实施例29:2-(6-氟萘-2-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以2-溴-6-氟萘代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(6-氟萘-2-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例10成马来酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.88(s,2H),7.76(d,1H),7.74(d,1H),7.52(dd,1H),7.28(td,1H),7.19(dd,1H),6.95(d,1H),6.02(s,2H),3.43(m,6H),3.12(m,4H).ESI-MS m/z 257.31[M+H]+.
实施例30:2-(6-氟萘-2-基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以实施例29的碱式产物代替实施例1的产物以外,以与实施例2相同的方式制备2-(6-氟萘-2-基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例10成马来酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.76(dt,2H),7.53(dd,1H),7.29(td,1H),7.24(dd,1H),7.01(d,1H),6.02(s,2H),3.54(m,4H),3.24(m,6H),2.84(s,3H).ESI-MS m/z 271.29[M+H]+.
实施例31:2-(1-氟萘-2-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以2-溴-1-氟萘代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(1-氟萘-2-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例10成马来酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(s,2H),7.86(m,2H),7.67(d,1H),7.51(m,1H),7.35(m,1H),7.25(t,1H),6.02(s,2H),3.49(m,6H),3.10(m,4H).ESI-MS m/z 257.25[M+H]+.
实施例32:2-(1-氟萘-2-基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以实施例31的碱式产物代替实施例1的产物以外,以与实施例2相同的方式制备2-(1-氟萘-2-基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例10成马来酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.89(d,1H),7.86(d,1H),7.68(d,1H),7.52(m,1H),7.37(m,1H),7.28(t,1H),6.02(s,2H),3.60(m,2H),3.31(br,6H),3.13(br,2H),2.85(s,3H).ESI-MS m/z 271.33[M+H]+.
实施例33:3-(六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)异喹啉马来酸盐
除了以3-溴-异喹啉代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备3-(六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)异喹啉,参照实施例10成马来酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.96(s,1H),8.85(s,2H),7.86(d,1H),7.66(d,1H),7.53(m,1H),7.24(m,1H),6.69(s,1H),6.07(s,2H),3.52(m,6H),3.14(m,4H).ESI-MS m/z240.32[M+H]+.
实施例34:3-(5-甲基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)异喹啉马来酸盐
除了以实施例33的碱式产物代替实施例1的产物以外,以与实施例2相同的方式制备3-(5-甲基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)异喹啉,参照实施例10成马来酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.98(s,1H),7.87(d,1H),7.67(d,1H),7.54(t,1H),7.26(t,1H),6.75(s,1H),6.06(s,2H),3.48(m,6H),2.85(s,3H),2.77(m,2H),2.50(m,2H).ESI-MS m/z 254.41[M+H]+.
实施例35:6-(3,4-二氯苯基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因
步骤1:
将800mg原料7-a、1.1eq原料3,4-二氯溴苯、0.05eq Pd2(dba)3,0.08eq BINAP混合于甲苯中,室温下搅拌5min,再加入2eq叔丁醇钾,氮气置换三次,80℃反应过夜。滤除不溶物,滤渣用乙酸乙酯洗,合并滤液,食盐水洗,干燥、浓缩后硅胶柱层析得产物35-a 850mg。
步骤2:
将化合物35-a溶于甲醇中,加入盐酸,室温下搅拌1h,反应毕,加水,加MTBE,弃去有机相,水相分出调pH至弱碱性,加DCM萃取,有机相再用食盐水洗一次,干燥浓缩、柱层析得标题化合物,白色固体。ESI-MS(m/z):285.22[M+H]+.
实施例36:6-(苯并[b]噻吩-7-基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因马来酸盐
除了以7-溴-苯并[b]噻吩代替5-溴苯并噻吩以外,以与实施例7相同的方式制备6-(苯并[b]噻吩-7-基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因马来酸盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(s,2H),7.71(d,1H),7.50(d,1H),7.43(d,1H),7.30(t,1H),6.94(d,1H),6.02(s,2H),3.49(m,4H),3.08(m,2H),2.85(m,2H),2.66(m,2H),1.90(m,4H).ESI-MS m/z 273.29[M+H]+.
实施例37:6-(2,3-二氯苯基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因马来酸盐
除了以1-溴-2,3-二氯苯代替5-溴苯并噻吩以外,以与实施例7相同的方式制备6-(2,3-二氯苯基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因马来酸盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(s,2H),7.26(m,2H),7.13(dd,1H),6.02(s,2H),3.43(m,2H),3.23(m,2H),2.91(m,2H),2.81(m,2H),2.63(m,2H),1.86(m,4H).ESI-MS m/z285.38[M+H]+.
实施例38:6-(苯并[b]噻吩-4-基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因马来酸盐
除了以4-溴-苯并[b]噻吩代替5-溴苯并噻吩以外,以与实施例7相同的方式制备6-(苯并[b]噻吩-4-基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因马来酸盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(s,2H),7.69(d,1H),7.55(d,1H),7.37(d,1H),7.24(t,1H),6.87(d,1H),6.02(s,2H),3.45(m,4H),3.05(m,2H),2.85(m,2H),2.66(m,2H),1.93(m,4H).ESI-MS m/z 273.47[M+H]+.
实施例39:6-(萘-2-基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因马来酸盐
除了以2-溴代萘代替5-溴苯并噻吩以外,以与实施例7相同的方式制备6-(萘-2-基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因马来酸盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,2H),7.72(d,1H),7.68(d,1H),7.63(d,1H),7.33(td,1H),7.26(dd,1H),7.16(td,1H),7.00(d,1H),6.01(s,2H),3.90(m,2H),3.30(m,4H),2.78(m,2H),2.56(m,2H),1.76(m,4H).ESI-MS(m/z):267.27[M+H]+.
实施例40:2-甲基-6-(萘-2-基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因草酸盐
除了以实施例39的碱式产物代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-甲基-6-(萘-2-基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因,参照实施例11成草酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.69(m,3H),7.31(m,2H),7.17(t,1H),7.04(d,1H),4.01(m,2H),3.52(m,2H),3.17(m,2H),2.72(m,7H),1.78(m,4H).ESI-MS(m/z):281.36[M+H]+.
实施例41:2-(苯并[b]噻吩-4-基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因马来酸盐
除了以4-溴-苯并[b]噻吩代替2-溴代萘以外,以与实施例6相同的方式制备2-(苯并[b]噻吩-4-基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因马来酸盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(s,1H),8.37(s,1H),7.62(d,1H),7.58(d,1H),7.40(d,1H),7.19(t,1H),6.60(d,1H),6.04(s,2H),3.72(m,2H),3.38(m,2H),3.01(m,4H),2.65(m,2H),1.90(m,4H).ESI-MS m/z 273.39[M+H]+.
实施例42:2-(3,4-二氯苯基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因马来酸盐
除了以1-溴-3,4-二氯苯代替2-溴代萘以外,以与实施例6相同的方式制备2-(3,4-二氯苯基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因马来酸盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(br,1H),7.34(d,1H),6.70(d,1H),6.52(dd,1H),6.02(s,2H),3.53(m,2H),3.33(m,2H),2.94(m,4H),2.65(m,2H),1.85(m,4H).ESI-MS m/z285.38[M+H]+.
实施例43:2-(苯并[b]噻吩-7-基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因马来酸盐
除了以7-溴-苯并[b]噻吩代替2-溴代萘以外,以与实施例6相同的方式制备2-(苯并[b]噻吩-7-基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因马来酸盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(s,1H),8.39(s,1H),7.68(d,1H),7.40(d,1H),7.36(d,1H),7.24(t,1H),6.64(d,1H),6.03(s,2H),3.79(m,2H),3.38(m,2H),3.00(m,4H),2.67(m,2H),1.89(m,4H).ESI-MS m/z 273.40[M+H]+.
实施例44:5-(苯并[b]噻吩-6-基)八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
除了以6-溴苯并噻吩代替4-溴苯并噻吩以外,以与实施例3相同的方式制备5-(苯并[b]噻吩-6-基)八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.07(d,1H),7.73(d,1H),7.57(d,1H),7.47(dd,1H),7.35(d,1H),3.28(m,2H),3.20(m,2H),3.09(m,1H),2.90(m,2H),2.40(m,2H),1.37(m,2H).ESI-MS m/z 244.20[M+H]+.
实施例45:5-(苯并[b]噻吩-7-基)八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
除了以7-溴苯并噻吩代替4-溴苯并噻吩以外,以与实施例3相同的方式制备5-(苯并[b]噻吩-7-基)八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.83(d,1H),7.65(d,1H),7.50(m,2H),7.28(t,1H),3.28(m,2H),3.20(m,2H),3.09(m,1H),2.90(m,2H),2.40(m,2H),1.37(m,2H).ESI-MS m/z244.22[M+H]+.
实施例46:6-(苯并[b]噻吩-5-基)十氢环庚烷[c]吡咯盐酸盐
除了以5-溴苯并噻吩代替4-溴苯并噻吩以外,以与实施例5相同的方式制备6-(苯并[b]噻吩-5-基)十氢环庚烷[c]吡咯盐酸盐。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.02(d,1H),7.82(d,1H),7.64(d,1H),7.45(dd,1H),7.35(d,1H),3.52(m,3H),2.87(dd,2H),2.53(m,2H),1.89(m,6H),1.56(m,2H).ESI-MS m/z272.27[M+H]+.
实施例47:6-(苯并[b]噻吩-6-基)十氢环庚烷[c]吡咯盐酸盐
除了以6-溴苯并噻吩代替4-溴苯并噻吩以外,以与实施例5相同的方式制备6-(苯并[b]噻吩-6-基)十氢环庚烷[c]吡咯盐酸盐。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.08(d,1H),7.75(d,1H),7.58(d,1H),7.48(dd,1H),7.36(d,1H),3.53(m,3H),2.87(dd,2H),2.52(m,2H),1.89(m,6H),1.56(m,2H).ESI-MS m/z272.29[M+H]+.
实施例48:5-(苯并噻吩-7-基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
除了以7-溴苯并噻吩代替3,4-二氯溴苯以外,以与实施例9相同的方式制备5-(苯并噻吩-7-基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐。
ESI-MS m/z 242.27[M+H]+.
实施例49:5-(苯并[b]噻吩-2-基)八氢环戊烷[c]吡咯-5-醇
除了以2-溴苯并噻吩代替3,4-二氯溴苯以外,以与实施例9中的化合物9-c的相同的制备方法制备中间体49-a。
取该中间体110mg加入到3ml甲苯中,加入550mg酸性硅胶,加热回流过夜。浓缩溶剂,柱层析得产物50mg。用石油醚打浆得到26mg标题化合物,类白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.81(d,1H),7.69(d,1H),7.28(m,2H),7.17(s,1H),3.06(d,2H),2.97-2.82(m,4H),2.49(dd,2H),2.07(d,2H).ESI-MS m/z 260.14[M+H]+.
实施例50:5-(苯并噻吩-2-基)八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
除了以2-溴苯并噻吩代替4-溴苯并噻吩以外,以与实施例3相同的方式制备5-(苯并噻吩-2-基)八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.78(d,1H),7.70(d,1H),7.28(m,2H),7.15(s,1H),3.46(m,1H),3.40-3.24(m,4H),3.08(m,2H),2.55(m,2H),1.69(m,2H).ESI-MS m/z 244.24[M+H]+.
实施例51:5-(苯并噻吩-2-基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
除了以2-溴苯并噻吩代替3,4-二氯溴苯以外,以与实施例9相同的方式制备5-(苯并噻吩-2-基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.62(br,1H),9.15(br,1H),7.91(m,1H),7.81(m,1H),7.35(m,3H),5.99(m,1H),3.67(m,1H),3.43-3.24(m,2H),3.17(m,2H),3.10-2.93(m,2H),2.77(m,1H).ESI-MS m/z 242.25[M+H]+.
实施例52:5-(苯并呋喃-2-基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
除了以2-溴苯并呋喃代替3,4-二氯溴苯以外,以与实施例9相同的方式制备5-(苯并呋喃-2-基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.30(br,2H),7.63(d,1H),7.56(d,1H),7.31(t,1H),7.24(t,1H),6.88(s,1H),6.18(m,1H),3.71(m,1H),3.34(m,2H),3.18(m,2H),2.99(m,2H),2.69(m,1H).ESI-MS m/z 226.21[M+H]+.
实施例53:5-(苯并呋喃-2-基)八氢环戊烷[c]吡咯-5-醇
除了以2-溴苯并呋喃代替3,4-二氯溴苯以外,以与实施例9中的化合物9-c的相同的制备方法制备中间体53-a。
取该中间体120mg和600mg酸性硅胶溶解到3.5mL甲苯中,升温至90度反应1h,过柱得到纯品并用石油醚50度热打浆,过滤烘干后得到15mg标题化合物,淡黄色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.53(d,1H),7.43(d,1H),7.21(m,2H),6.69(s,1H),3.23(d,2H),3.01(d,4H),2.57(dd,2H),2.03(d,2H).ESI-MS m/z 244.14[M+H]+.
实施例54:5-(萘-2-基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
除了以2-溴代萘代替3,4-二氯溴苯以外,以与实施例9相同的方式制备5-(萘-2-基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.85(m,4H),7.76(dd,1H),7.48(m,2H),6.24(m,1H),3.86(m,1H),3.60-3.24(m,5H),3.20(dd,1H),2.91(d,1H).
实施例55:5-(萘-2-基)八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
除了以2-溴代萘代替4-溴苯并噻吩以外,以与实施例3相同的方式制备5-(萘-2-基)八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.33(br,1H),7.82(m,4H),7.59(dd,1H),7.47(m,2H),3.32(m,1H),3.15(m,4H),2.92(m,2H),2.29(m,2H),1.72(m,2H).ESI-MS m/z 238.23[M+H]+.
实施例56:5-(萘-1-基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯二盐酸盐
除了以1-溴代萘代替3,4-二氯溴苯以外,以与实施例9相同的方式制备5-(萘-1-基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯二盐酸盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.31(br,2H),7.95-7.83(m,4H),7.77(dd,1H),7.50(m,2H),6.28(d,1H),3.70(br,1H),3.40(dd,1H),3.33(dd,1H),3.23-3.05(m,3H),2.99(dd,1H),2.81(d,1H).ESI-MS m/z 236.32[M+H]+.
实施例57:2-甲基-5-(萘-2-基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯
取实施例54(60mg)溶解到1mL甲醛溶液(40%)中,75度搅拌4h。冰水浴加入2当量NaBH4,恢复至室温反应10h,二氯甲烷/水分层,浓缩有机相,石油醚打浆,烘干后得到45mg标题化合物,白色固体。
ESI-MS m/z 250.39[M+H]+.
实施例58:2-甲基-5-(萘-2-基)八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
取实施例57(30mg)溶解到5mL醋酸溶液中,加入5mg 10%Pd/C,氢气置换后25度反应24h,质谱显示原料反应完。过滤反应液,并用5ml 20%NaOH碱化醋酸相,10mL DCM分层,浓缩有机层。冰水浴,3mL HCl-二氧六环成盐,过滤固体,5mL石油醚打浆,过滤烘干后得到8mg标题化合物,白色固体。
ESI-MS m/z 252.43[M+H]+.
实施例59:5-(苯并呋喃-2-基)-2-甲基-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
除了以实施例52的产物代替实施例54的产物以外,以与实施例57相同的方式制备5-(苯并呋喃-2-基)-2-甲基-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯,然后采用氯化氢甲醇溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液、参照实施例10成盐酸盐得到标题化合物。
ESI-MS m/z 240.39[M+H]+.
实施例60:5-(苯并呋喃-2-基)-2-甲基八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
取实施例59(50mg)溶解到5mL醋酸溶液中,加入5mg 10%Pd/C,氢气置换后25度反应24h,质谱显示原料反应完。过滤反应液,并用5ml 20%NaOH碱化醋酸相,10mL DCM分层,浓缩有机层。冰水浴,3mL HCl-二氧六环成盐,过滤固体,5mL石油醚打浆,过滤烘干后得到10mg标题化合物,白色固体。
ESI-MS m/z 242.36[M+H]+.
实施例61:5-(苯并噻吩-2-基)-2-甲基-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
除了以实施例51的产物代替实施例54的产物以外,以与实施例57相同的方式制备5-(苯并噻吩-2-基)-2-甲基-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯,采用氯化氢甲醇溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液、参照实施例10成盐酸盐得到标题化合物。
ESI-MS m/z 256.23[M+H]+.
实施例62:5-(苯并噻吩-2-基)-2-甲基八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
取实施例61(45mg)溶解到5mL醋酸溶液中,加入20mg 10%Pd/C,氢气置换后25度反应24h,质谱显示原料反应完。过滤反应液,并用5ml 20%NaOH碱化醋酸相,10mL DCM分层,浓缩有机层。冰水浴,3mL HCl-二氧六环成盐,过滤固体,5mL石油醚打浆,过滤烘干后得到5mg标题化合物,白色固体。
ESI-MS m/z 258.31[M+H]+.
实施例63:5-(3,4-二氯苯基)八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐
除了以1-溴-3,4-二氯苯代替4-溴苯并噻吩以外,以与实施例3相同的方式制备5-(3,4-二氯苯基)八氢环戊烷[c]吡咯盐酸盐。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.73(d,1H),7.45(m,2H),3.47(m,2H),3.37(m,1H),3.05(m,2H),2.93(m,2H),1.96(m,2H),1.82(m,2H).ESI-MS m/z 256.27[M+H]+.
实施例64:1-(苯并噻吩-5-基)八氢吡咯[3,4-b]吡咯马来酸盐
除了以5-溴苯丙噻吩代替2-溴代萘,并以六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-甲酸叔丁酯代替六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯以外,以与实施例1相同的方式制备1-(苯并噻吩-5-基)八氢吡咯[3,4-b]吡咯,参照实施例10成马来酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.88(s,2H),7.80(d,1H),7.66(d,1H),7.29(d,1H),7.03(d,1H),6.81(d,1H),6.01(s,2H),4.29(t,1H),3.62(m,1H),3.48(m,1H),3.33(m,1H),3.19(m,4H),2.17(m,1H),1.94(m,1H).ESI-MS(m/z):245.21[M+H]+.
实施例65:1-(苯并噻吩-5-基)-5-甲基八氢吡咯[3,4-b]吡咯草酸盐
除了以实施例64的碱式产物代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备1-(苯并噻吩-5-基)-5-甲基八氢吡咯[3,4-b]吡咯,参照实施例11成草酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(brs,2H),7.79(d,1H),7.65(d,1H),7.29(d,1H),7.02(d,1H),6.80(d,1H),4.34(m,1H),3.59(m,1H),3.47(m,1H),3.24(m,5H),2.72(s,3H),2.15(m,1H),1.95(m,1H).ESI-MS(m/z):259.22[M+H]+.
实施例66:2-(2,3-二甲基苯基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以1-溴-2,3-二甲基苯代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(2,3-二甲基苯基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯,参照实施例10成马来酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.68(s,2H),7.02(t,1H),6.87(m,2H),6.02(s,2H),3.52(m,2H),2.98(m,6H),2.86(m,2H),2.21(s,3H),2.16(s,3H).ESI-MS(m/z):217.23[M+H]+.
实施例67:2-(2,3-二甲基苯基)-5-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯草酸盐
除了以实施例66的碱式产物代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-(2,3-二甲基苯基)-5-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯,参照实施例11成草酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.02(t,1H),6.87(m,2H),3.59(m,2H),2.82-3.06(m,8H),2.80(s,3H),2.21(s,3H),2.17(s,3H).ESI-MS(m/z):231.30[M+H]+.
实施例68:2-(4-氟苯并[b]噻吩-6-基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯二盐酸盐
除了以6-溴-4-氟苯并[b]噻吩代替2-溴代萘,以与实施例1相同的方式制备2-(4-氟苯并[b]噻吩-6-基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯,采用氯化氢甲醇溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液、参照实施例10成盐酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(brs,2H),7.40(d,1H),7.27(d,1H),6.99(s,1H),6.65(dd,1H),3.34-3.50(m,6H),2.98-3.18(m,4H).ESI-MS(m/z):263.18[M+H]+.
实施例69:2-(6-氟苯并噻吩-4-基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯二盐酸盐
除了以4-溴-6-氟苯并噻吩代替2-溴代萘,以与实施例1相同的方式制备2-(6-氟苯并噻吩-4-基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯,采用氯化氢甲醇溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液、参照实施例10成盐酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.57(d,1H),7.47(d,1H),7.25(dd,1H),6.63(dd,1H),3.65(m,2H),3.55(m,2H),3.18-3.36(m,6H).ESI-MS(m/z):263.13[M+H]+.
实施例70:2-(6-氟苯并噻吩-4-基)-5-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯草酸盐
除了以实施例69的碱式产物代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-(6-氟苯并噻吩-4-基)-5-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯,参照实施例11成草酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63(m,2H),7.41(dd,1H),6.59(dd,1H),3.57(m,2H),3.49(m,2H),3.24(m,2H),3.12(m,4H),2.81(s,3H).ESI-MS(m/z):277.24[M+H]+.
实施例71:2-甲基-5-(萘-1-基)-1,2,3,3a,4,6a-六氢环戊烷[c]吡咯
取实施例56(50mg)溶解到1mL甲醛溶液(40%)中,75度搅拌4h。冰水浴加入2当量NaBH4,恢复至室温反应10h,二氯甲烷/水分层,浓缩有机相,石油醚打浆,烘干后得到40mg标题化合物,白色固体。
ESI-MS m/z 250.44[M+H]+.
实施例72:2-(3,6-二甲氧基萘-2-基)-5-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯二盐酸盐
除了以2-溴-3,6-二甲氧基萘代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备中间体2-(3,6-二甲氧基萘-2-基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯。然后以该中间体代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-(3,6-二甲氧基萘-2-基)-5-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯,采用氯化氢甲醇溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液、参照实施例10成盐酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.13(m,1H),7.77(m,1H),7.45(m,1H),7.25(br,1H),7.08(m,1H),4.10(s,3H),4.15-3.96(m,4H),3.91(s,3H),3.84(m,2H),3.65-3.38(m,4H),3.02(m,3H).ESI-MS(m/z):313.43[M+H]+.
实施例73:2-(2,3-二甲氧基苯)-5-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯二盐酸盐
除了以1-溴-2,3-二甲氧基苯代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备中间体2-(2,3-二甲氧基苯)八氢吡咯[3,4-c]吡咯。然后以该中间体代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-(2,3-二甲氧基苯)-5-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯,采用氯化氢甲醇溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液、参照实施例10成盐酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.40(d,1H),7.19(t,1H),7.11(t,1H),6.96(d,1H),4.05-3.81(m,10H),3.76(m,2H),3.55(m,1H),3.40(m,2H),3.19(m,1H),2.99(m,3H),.ESI-MS(m/z):263.38[M+H]+.
实施例74:2-(苯并[d][1,3]二恶英-4-基)-5-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯二盐酸盐
除了以4-溴-苯并[d][1,3]二恶英代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备中间体2-(苯并[d][1,3]二恶英-4-基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯。然后以该中间体代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-(苯并[d][1,3]二恶英-4-基)-5-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯,采用氯化氢甲醇溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液、参照实施例10成盐酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ6.83(m,1H),6.70(t,1H),6.63(d,1H),5.97(d,2H),3.95(dd,1H),3.77(t,2H),3.69(d,1H),3.50-3.35(m,4H),3.28(m,1H),3.14(m,1H),2.95(m,3H).ESI-MS(m/z):247.31[M+H]+.
实施例75:2-(1,3-二氟萘基-2-基)-5-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯二盐酸盐
除了以2-溴-1,3-二氟萘代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备中间体2-(1,3-二氟萘基-2-基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯。然后以该中间体代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-(1,3-二氟萘基-2-基)-5-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯,采用氯化氢甲醇溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液、参照实施例10成盐酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.93(d,1H),7.78(d,1H),7.48(m,2H),7.41(d,1H),3.99(m,1H),3.63-3.39(m,6H),3.30(m,1H),3.12(m,1H),2.95(m,4H).ESI-MS(m/z):289.32[M+H]+.
实施例76:2-(3-氟萘基-2-基)-5-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯二盐酸盐
除了以2-溴-3-氟萘代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备中间体2-(3-氟萘基-2-基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯。然后以该中间体代替实施例1的产物,并以盐酸代替马来酸,以与实施例2相同的方式制备2-(3-氟萘基-2-基)-5-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯,采用氯化氢甲醇溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液、参照实施例10成盐酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.75(d,1H),7.71(d,1H),7.49(dd,1H),7.39(t,1H),7.33(t,1H),7.28(dd,1H),4.00(dd,1H),3.64(m,3H),3.44(dd,1H),3.34(m,1H),3.22(m,2H),3.06(dd,1H),3.00-2.90(m,4H).ESI-MS(m/z):271.32[M+H]+.
实施例77:5-(苯并[b]噻吩-4-基)八氢吡咯并[3,4-b]吡咯盐酸盐
除了以4-溴苯丙噻吩代替2-溴代萘,以六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-甲酸叔丁酯代替六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯,以与实施例1相同的方式制备5-(苯并[b]噻吩-4-基)八氢吡咯并[3,4-b]吡咯,采用氯化氢甲醇溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液、参照实施例10成盐酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.79(brs,1H),9.39(brs,1H),7.62(m,2H),7.46(d,1H),7.21(t,1H),6.70(d,1H),4.62(m,1H),3.97(m,1H),3.36(m,3H),3.11(m,2H),2.97(m,1H),2.03(m,2H).ESI-MS(m/z):245.17[M+H]+.
实施例78:2-([1,1'-联苯]-2-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯盐酸盐
除了以2-溴-1,1'-联苯代替2-溴代萘,以与实施例1相同的方式制备2-([1,1'-联苯]-2-基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,采用氯化氢甲醇溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液、参照实施例10成盐酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.21(brs,1H),9.09(brs,1H),7.49(m,4H),7.35(t,1H),7.28(td,1H),7.15(dd,1H),7.04(m,2H),3.32(m,2H),2.78(m,4H),2.69(m,2H),2.61(m,2H).ESI-MS(m/z):265.26[M+H]+.
实施例79:2-(2-(甲氧基甲基)苯基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯二盐酸盐
除了以1-溴-2-(甲氧基甲基)苯代替2-溴代萘,以与实施例1相同的方式制备2-(2-(甲氧基甲基)苯基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,采用氯化氢甲醇溶液代替实施例10中的马来酸的四氢呋喃溶液、参照实施例10成盐酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.23(brs,2H),7.33(m,1H),7.24(m,1H),7.02(m,2H),4.44(s,2H),3.47(m,2H),3.32(s,3H),3.06(m,2H),2.96(m,6H).ESI-MS(m/z):233.29[M+H]+.
实施例80:2-(3-甲氧基苯基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯草酸盐
除了以1-溴-3-甲氧基苯代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备中间体2-(3-甲氧基苯基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯。然后以该中间体代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-(3-甲氧基苯基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例11成草酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.08(t,1H),6.29(td,2H),6.20(t,1H),3.71(s,3H),3.53(m,2H),3.35(m,2H),3.14(m,4H),3.02(m,2H),2.76(s,3H).ESI-MS(m/z):233.30[M+H]+.
实施例81:2-甲基-5-(4-(三氟甲基)苯基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯草酸盐
除了以1-溴-4-(三氟甲基)苯代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备中间体2-(4-(三氟甲基)苯基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯(ESI-MS(m/z):257.32[M+H]+)。然后以该中间体代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-甲基-5-(4-(三氟甲基)苯基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例11成草酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.50(d,2H),6.75(d,2H),3.50(m,2H),3.42(m,2H),3.36(m,2H),3.17(m,2H),3.08(m,2H),2.76(s,3H).ESI-MS(m/z):271.21[M+H]+.
实施例82:2-(2-氟苯基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以1-溴-2-氟苯代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(2-氟苯基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例10成马来酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(s,2H),7.11(m,1H),7.06(m,1H),6.85(m,2H),6.01(s,2H),3.48(m,2H),3.35(m,2H),3.20(m,2H),3.02(m,4H).ESI-MS(m/z):207.18[M+H]+.
实施例83:2-(2-氟苯基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯草酸盐
除了以实施例82的碱式产物代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-(2-氟苯基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例11成草酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.09(m,2H),6.88(m,2H),3.55(m,2H),3.36(d,2H),3.08(m,4H),2.97(m,2H),2.77(s,3H).ESI-MS(m/z):221.28[M+H]+.
实施例84:2-(2-乙氧基苯基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以1-溴-2-乙氧基苯代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(2-乙氧基苯基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例10成马来酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(s,2H),6.88(m,3H),6.77(dd,1H),6.02(s,2H),4.01(m,2H),3.53(m,2H),3.36(d,2H),2.94(m,6H),1.37(t,3H).ESI-MS(m/z):233.26[M+H]+.
实施例85:2-(2-乙氧基苯基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯草酸盐
除了以实施例84的碱式产物代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-(2-乙氧基苯基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例11成草酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.89(m,2H),6.85(m,1H),6.78(dd,1H),4.01(m,2H),3.73(m,2H),3.41(m,2H),3.02(m,2H),2.82(s,3H),2.50(m,4H),1.38(t,3H).ESI-MS(m/z):247.30[M+H]+.
实施例86:2-甲基-5-(邻甲苯基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯草酸盐
除了以邻溴甲苯代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备中间体2-甲基-5-(邻甲基苯基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯(ESI-MS(m/z):203.34[M+H]+)。然后以该中间体代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-甲基-5-(邻甲苯基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯,参照实施例11成草酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(brs,2H),7.12(m,2H),6.95(m,2H),3.62(m,2H),3.08(d,2H),2.97(m,4H),2.85(m,2H),2.79(s,3H),2.28(s,3H).ESI-MS(m/z):217.31[M+H]+.
实施例87:2-(5-氟-2-甲氧基苯基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯马来酸盐
除了以1-溴-2-甲氧基-5-氟苯代替2-溴代萘以外,以与实施例1相同的方式制备2-(5-氟-2-甲氧基苯基)八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例10成马来酸盐得到标题化合物。
ESI-MS(m/z):237.20[M+H]+.
实施例88:2-(5-氟-2-甲氧基苯基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯草酸盐
除了以实施例87的碱式产物代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备2-(5-氟-2-甲氧基苯基)-5-甲基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯,参照实施例11成草酸盐得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.71(brs,2H),6.90(dd,1H),6.66(ddd,1H),6.58(dd,1H),3.76(s,3H),3.59(m,2H),3.38(d,2H),2.97(m,6H),2.77(s,3H).ESI-MS(m/z):251.31[M+H]+.
实施例89:6-(2,3-二氯苯基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因盐酸盐
除了以2,3-二氯溴苯代替2-溴代萘以外,以与实施例6相同的方式制备6-(2,3-二氯苯基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因,参照实施例3成盐酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4):δ7.66(dd,J=8.1,1.3Hz,1H),7.54(dd,J=8.1,1.3Hz,1H),7.22(t,J=8.1Hz,1H),3.65(d,J=7.7Hz,1H),3.62(d,J=7.7Hz,1H),3.55(d,J=6.6Hz,1H),3.52(d,J=6.6Hz,1H),3.11–2.95(m,4H),2.79(m,2H),2.11–2.02(m,2H),1.95(m,2H).ESI-MS(m/z):285.35[M+H]+
实施例90:6-(2,4-二氯苯基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因盐酸盐
除了以2,4-二氯溴苯代替2-溴代萘以外,以与实施例6相同的方式制备6-(2,4-二氯苯基)十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因,参照实施例3成盐酸盐,得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4):δ7.68(d,J=8.6Hz,1H),7.59(d,J=2.4Hz,1H),7.27(dd,J=8.6,2.4Hz,1H),3.65(d,J=7.7Hz,1H),3.62(d,J=7.7Hz,1H),3.56(d,J=6.5Hz,1H),3.52(d,J=6.5Hz,1H),3.13–2.95(m,4H),2.81(m,2H),2.12–1.91(m,4H).ESI-MS(m/z):285.35[M+H]+.
实施例91:6-(3,4-二氯苯基)-2-甲基十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因盐酸盐
除了以实施例35代替实施例1的产物,以与实施例2相同的方式制备6-(3,4-二氯苯基)-2-甲基十氢吡咯并[3,4-d]吖庚因,参照实施例3成盐酸盐,得到标题化合物。
ESI-MS(m/z):299.30[M+H]+.HPLC:95.99%.
实施例92 7-(5-甲基六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮二盐酸盐
以5-溴-3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮和2-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯为原料,参照实施例1步骤的方法制备7-(5-甲基六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮,参照实施例3成盐酸盐,得到标题化合物。1H NMR(400MHz,Methanol-d4):δ7.06(m,3H),3.94(m,1H),3.73(d,J=11.8Hz,1H),3.70–3.30(m,8H),3.03–2.89(m,5H),2.56(m,2H).ESI-MS(m/z):272.34[M+H]+.
实施例93 5-(5-甲基六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮二盐酸盐
以2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-5-基三氟甲烷磺酸酯和2-甲基八氢吡咯[3,4-c]吡咯为原料,参照实施例1步骤的方法制备5-(5-甲基六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮,参照实施例3成盐酸盐,得到标题化合物。1H NMR(400MHz,Methanol-d4):δ6.95(t,J=8.0Hz,1H),6.49(dd,J=8.2,1.0Hz,1H),6.37(dd,J=7.9,1.0Hz,1H),3.93(m,1H),3.73(d,J=11.9Hz,1H),3.70–3.34(m,8H),2.97(d,3H),2.89(t,J=7.7Hz,2H),2.52(t,J=7.7Hz,2H).ESI-MS(m/z):272.33[M+H]+.
药理实验
1.5-HTT再摄取活性测试
根据文献(Journal of Neuroscience Methods,2008,169(1):168-176)的记载,采用基于荧光的非放射性高通量筛选体系进行化合物的5-HTT再摄取活性测试。该测试按照Molecular Devices公司关于他们的神经递质转运蛋白摄取测定试剂盒(Neurotransmitter transporter uptake assay kit)的说明书进行。
具体操作如下:
1)第一天将每孔20μl含有20000个HEK293-hSERT细胞种到384孔板中,37℃孵育过夜。
2)第二天,阳性对照化合物和测试化合物用0.1%BSA缓冲液稀释。
3)将细胞板从孵育箱中取出,从孔中吸取细胞培养介质,每个孔加入25μl测试溶液。阴性对照孔中加入25μl含有BSA的缓冲溶液,阳性对照孔中加入25μl阳性溶液。
4)37℃孵育30min,然后每孔加入25μl染液,37℃孵育30min。
5)Flexstation 3读板后利用Prism软件处理数据,结果见表1。
表1:
在以上测定中,优选的本发明化合物显示低于200nM(IC50)血清素再摄取抑制浓度。更优选的化合物显示低于100nM的抑制浓度,最优选的化合物显示低于50nM的抑制浓度,特别令人感兴趣的化合物显示低于10nM的血清素再摄取抑制浓度。
2.5-HT3受体亲和力活性测试
细胞膜由表达了人重组5-HT3受体的HEK293细胞制备,膜浓度每孔2.2μg,同位素配体3H-BRL 43694的浓度为0.5nM,非特异性结合化合物MDL 72222的浓度为10μM。
1)将1μl的待测化合物转移到分析板中,以及1μl连续稀释的阳性对照MDL 72222和1μl的DMSO阴性对照。
2)铺板,将100μl膜储备液加入到测试板中。
3)加入100μl同位素标记的配体3H-BRL 43694。
4)密封测试板,在常温下孵育1小时。
5)将50μl洗涤剂0.3%聚乙烯亚胺加入到每个孔中,在室温下浸泡Unifilter-96GF/C过滤板至少30min。
6)当结合实验结束后,用GF/C过滤板过滤反应液混合物,然后用冷缓冲液洗4次。
7)在50℃条件下干燥过滤板。
8)干燥后,用密封胶带封闭过滤板底部,加入50μl闪烁液(Perkin ElmerMicroscint20cocktail)。用密封膜封闭过滤板顶部。
9)用Perkin Elmer MicroBeta2读数仪计数过滤板上捕获的3H,用GraphPadPrism 5软件分析数据,结果见表2。
表2:
根据表2可以看出,本发明化合物具有5-HT3受体高亲和力,可用于治疗5-HT3受体相关的中枢神经系统类疾病。5-HT3受体位于突触后膜,调节不同脑区抑制性GABA中间神经元从而调节各种神经递质的释放。血清素作用于5-HT3受体能降低各种神经递质的释放,因此,拮抗5-HT3受体引起去抑制,从而增加神经递质的释放。5-HT3拮抗剂能够增强SSRIs类抗抑郁药的效果。动物试验表明,将5-HT3拮抗剂昂丹司琼和帕罗西汀合用能够增强帕罗西汀的抗抑郁效果。昂丹司琼能够部分阻止帕罗西汀对中缝背核5-HT神经元放电的抑制作用,并增强帕罗西汀诱导的海马细胞外5-HT释放(Pharmacology,Biochemistry and Behavior2015,131,136-142.)。
抑郁症患者常伴有慢性疼痛。慢性躯体疼痛与抑郁症紧密关联,而且其严重程度与抑郁症严重程度呈正相关。纤维肌痛是一个以广泛疼痛为特征的慢性疼痛疾病。临床证据表明,5-HT3R拮抗剂格拉司琼、昂丹司琼和托烷司琼可显著减少纤维肌痛(ArthritisRes Ther,2006,8(4),212.),因此预期具有5-HT3R拮抗作用的抗抑郁药物能够缓解抑郁症患者的疼痛病症。
大量研究证据表明5-HT能系统和其他神经递质系统如胆碱能、多巴胺能、谷氨酸能系统在控制学习和记忆方面存在相互作用。大脑皮质和背侧海马都是与记忆有关的重要结构。5-HT能神经元的兴奋可刺激胆碱能神经元释放乙酰胆碱。5-HT3R拮抗剂可以在不影响乙酰胆碱稳态释放的前提下,抑制5-HT的调节释放乙酰胆碱,阻止认知损伤。将老鼠的5-HT3R过度表达已被证明可增强学习记忆和注意力。有文献报道昂丹司琼能改善患者记忆力,降低认知功能损害(Pharmacology&therapeutics,2010,128(1):146-169.)。
根据以上实施例可以看出,根据本发明的部分化合物具有5-HTT/5-HT3受体多靶点作用,有利于调节脑内神经递质平衡,对中枢神经系统类疾病具有较好疗效。因此,可以通过多靶点的协同作用快速起效并减少药物引起的副作用。
3.体内药效试验(小鼠强迫游泳模型)
实验动物:C57BL/6小鼠(上海西普尔-必凯实验动物有限公司),雄性,6周,体重15-20g。ICR小鼠(上海西普尔-必凯实验动物有限公司),雄性,6周,体重20-25g。所有订购小鼠在标准环境下饲养2-3周后再进行实验。
强迫游泳实验(Forced swimming test,FST):强迫游泳设备中水位为45cm,水温25℃,实验开始前将小鼠置于实验房间适应环境1h。实验开始时将小鼠置于设备中,时长6min,整个过程用摄像头记录,分析数据时只统计最后4min小鼠的不动时间,其结果用mean±SD表示。
悬尾实验(Tail suspension test,TST):用医用胶布将小鼠尾部固定在设备上,时长6min,整个过程用摄像头记录,分析数据时只统计最后4min小鼠的不动时间。
结果采用单因素方差分析进行统计。受试化合物在以下剂量(表3)均可显著降低小鼠不动时间,与空白组相比具有显著性差异。po:口服给药;ip:腹腔给药。FST:强迫游泳实验;TST:悬尾实验。
表3:
本发明化合物不仅活性强,而且口服有效,具有药效剂量低、毒副作用小等特点,对中枢神经系统领域的疾病具有疗效,尤其对重度抑郁症(MDD)、焦虑症、强迫症等疾病疗效好。