CN111999398A - 咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法 - Google Patents

咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其包括如下步骤：确定采用LC‑MS/MS检测分析参数条件，利用18种外标标准品以及9种内标标准品建立标准曲线；将血浆样品预处理，制备供试品溶液，上机测试，根据各标准曲线换算出血浆样品中各成分的含量。该咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法能够准确定量血浆样品种18种成分的含量，快速灵敏，可靠性好，便于进行代谢通路分析。

Description

咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法
技术领域
本发明涉及检测分析技术领域，尤其涉及一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法。
背景技术
咖啡因是一种从植物样本中提取出的生物碱。适度使用咖啡因有祛除疲劳、兴奋神经的作用，临床上用于治疗神经衰弱和昏迷复苏。自从人们认识到咖啡因的用途以来，咖啡因就被人为添加到多种食品和药物中。但是，大剂量或长期食用咖啡因也会对人体造成损害，特别是其具有成瘾性。
由于咖啡因与人类健康息息相关，经吸收后能完全地进入全身组织并且自由通过血-脑、胎盘、血-睾屏障，其在人体代谢系统的研究也日益深入。因此，对于与咖啡因代谢相关的多种物质进行准确定量十分必要。
但是，常规检测分析仅能够实现对与咖啡因代谢相关的单种成分或者少数几种成分的定量分析，工作量大，效率低。
发明内容
基于此，有必要提供一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，能够适用于血浆样本分析，实现快速高效定量分析咖啡因及其相关代谢物，可靠性好，还便于快速进行咖啡因代谢通路分析。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
本发明提供一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，包括如下步骤：
确定采用LC-MS/MS检测分析的参数条件，色谱条件包括：柱温38℃～42℃，流动相A为0.03％～0.05％乙酸的水，流动相B为0.03％～0.05％乙酸的乙腈，采用梯度洗脱方式；质谱条件包括：采用ESI离子源，采用MRM扫描模式；
按照所述参数条件，利用外标标准品以及内标标准品13C3-咖啡因、IS-7-甲基黄嘌呤、13C5-腺苷酸、d3-1-甲基黄嘌呤、d3-副黄嘌呤、d6-可可碱、d3-1,7-二甲基尿酸、d3-1-甲基尿酸、13C5-黄嘌呤核苷，建立1-甲基黄嘌呤、3-甲基黄嘌呤、鸟苷酸、7-甲基黄嘌呤、腺苷酸、咖啡因、副黄嘌呤、可可碱、茶碱、1,3,7-三甲基尿酸、1,7-二甲基尿酸、1-甲基尿酸、3,7-二甲基尿酸、一磷酸腺苷、肌苷、尿酸、黄嘌呤核苷以及黄嘌呤的标准曲线；
制备供试品溶液，按照所述参数条件上机测试，根据各标准曲线换算出血浆样品中咖啡因及其代谢物的成分含量。
在其中一个实施例中，所述色谱柱为ACQUITYHSS T3柱，进样量2μL。
优选地，采用流速为0.32mL/min～0.38mL/min，所述梯度洗脱的条件为：
0min，流动相A与流动相B的体积比为95:5；
0.5min，流动相A与流动相B的体积比为95:5；
5min，流动相A与流动相B的体积比为60:40；
5.1min，流动相A与流动相B的体积比5:95；
7.5min，流动相A与流动相B的体积比为5:95；
7.6min，流动相A与流动相B的体积比为95:5；
10min，流动相A与流动相B的体积比为95:5。
在其中一个实施例中，所述MRM扫描参数包括：
1-甲基黄嘌呤的离子对为167.1/110、167.1/136.02，d3-1-甲基黄嘌呤的离子对为170/110；
3-甲基黄嘌呤的离子对为167.1/124、167.1/33；
鸟苷酸的离子对为364/152、364.2/323.2；
7-甲基黄嘌呤的离子对为167/124、167/150，IS-7-甲基黄嘌呤的离子对为173.1/127.9；
腺苷酸的离子对为268.097/136、268.097/212.09，13C5-腺苷酸的离子对为273/136.1；
咖啡因的离子对为195.08/138.06、195.08/83，13C3-咖啡因的离子对为198.1/140；
副黄嘌呤的离子对为181.1/55.1、181.2/124.2，d3-副黄嘌呤的离子对为184.1/124.1；
可可碱的离子对为181/138、181/89.07，d6-可可碱的离子对为187/169；
茶碱的离子对为181.1/137.1、181.1/124.1；
1,3,7-三甲基尿酸的离子对为209.2/137、209.2/165；
1,7-二甲基尿酸的离子对为195/180、195/137，d3-1,7-二甲基尿酸的离子对为198.1/183；
1-甲基尿酸的离子对为181/138、181/86，d3-1-甲基尿酸的离子对为184.1/141；
3,7-二甲基尿酸的离子对为195/180、195/152.04；
一磷酸腺苷的离子对为346/134、346/97；
肌苷的离子对为267.1/135、267.1/108；
尿酸的离子对为166.8/96.1、167.1/124.1；
黄嘌呤核苷的离子对为283.076/151、283.076/108，13C5-黄嘌呤核苷的离子对为288/151；
以及黄嘌呤的离子对为151/108、151/80。
优选地，所述离子源温度500℃，喷雾压力为-4500/5500V，气帘气压力为35psi，辅助加热气Gas1压力为45psi，辅助加热气Gas2压力为55psi，碰撞气为Medium。
在其中一个实施例中，所述标准曲线的建立方法包括如下步骤：
利用外标标准品1-甲基黄嘌呤、3-甲基黄嘌呤、鸟苷酸、7-甲基黄嘌呤、腺苷酸、咖啡因、副黄嘌呤、可可碱、茶碱、1,3,7-三甲基尿酸、1,7-二甲基尿酸、1-甲基尿酸、3,7-二甲基尿酸、一磷酸腺苷、肌苷、尿酸、黄嘌呤核苷以及黄嘌呤和溶剂甲醇配置外标浓度为1000ng/mL、100ng/mL、10ng/mL、1ng/mL的外标混合工作液；
利用内标标准品13C3-咖啡因、IS-7-甲基黄嘌呤、13C5-腺苷酸、d3-1-甲基黄嘌呤、d3-副黄嘌呤、d6-可可碱、d3-1,7-二甲基尿酸、d3-1-甲基尿酸、13C5-黄嘌呤核苷和溶剂甲醇配置内标浓度为100ng/mL的内标混合工作液；
利用外标混合工作液、内标混合工作液和溶剂甲醇配置浓度分别为500ng/mL、200ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL和0.1ng/mL的标准品溶液，其中各浓度点内标浓度均为10ng/mL；
按照上述任一项所述的参数条件上机测试，分别建立标准曲线。
在其中一个实施例中，所述制备供试品溶液包括如下步骤：将血浆样品解冻，涡旋混匀，取50μL加入到100μL～180μL甲醇中，再加入20μL、浓度为100ng/mL的内标混合工作液，涡旋混匀，离心，取上清液，即得。优选地，所述离心的速度为11000r/min～13000r/min，时间为min～5min。
本发明的有益效果是：
与现有技术相比，本发明咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法通过筛选特定的分析条件，可实现高效定量分析生物样本中与咖啡因代谢相关的18种成分，效率高，可靠性好，适用于血浆样本及代谢通路分析。
附图说明
图1为1-甲基黄嘌呤、3-甲基黄嘌呤、7-甲基黄嘌呤、鸟苷酸、腺苷酸、咖啡因、副黄嘌呤、可可碱、茶碱的检测谱图。
图2为1,3,7-三甲基尿酸、1,7-二甲基尿酸、1-甲基尿酸、3,7-二甲基尿酸、一磷酸腺苷、肌苷、尿酸、黄嘌呤核苷、黄嘌呤的检测谱图。
图3为对比例1的总离子流图。
图4为对比例2的总离子流图。
图5为对比例3的总离子流图。
图6为对比例4的总离子流图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
试验仪器：AB SCIEX QTRAP 6500LC-MS/MS仪器。
咖啡因及其代谢物主要包括1-甲基黄嘌呤、3-甲基黄嘌呤、鸟苷酸、7-甲基黄嘌呤、腺苷酸、咖啡因、副黄嘌呤、可可碱、茶碱、1,3,7-三甲基尿酸、1,7-二甲基尿酸、1-甲基尿酸、3,7-二甲基尿酸、一磷酸腺苷、肌苷、尿酸、黄嘌呤核苷以及黄嘌呤。
实施例1
本实施例提供一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，包括如下步骤：
S1，确定采用LC-MS/MS检测分析的参数条件。
其中，色谱条件如下：
色谱柱：采用ACQΜITYHSS T3柱，规格为i.d.2.1×100mm，1.8μm。
流动相：流动相A为含0.04％乙酸的水，流动相B为含0.04％乙酸的乙腈。梯度洗脱程序如下表1所示：
表1梯度洗脱程序表
时间(min) 流速(mL/min) A(％) B(％)
0 0.35 95 5
0.5 0.35 95 5
5 0.35 60 40
5.1 0.35 5 95
7.5 0.35 5 95
7.6 0.35 95 5
10 0.35 95 5
质谱条件如下表2和表3所示：
表2质谱参数条件
离子模式 ESI-/ESI+ 气帘气 35Psi
离子喷雾电压 -4500/+5500V 温度 500℃
IonSourceGas1 45Psi IonSourceGas2 55Psi
碰撞气体 Medium中级 扫描方式 MRM多重反应监测
入口电压 -10/10V 出口电压 -12/12V
表3 MRM参数条件
Figure BDA0002577976100000061
Figure BDA0002577976100000071
Figure BDA0002577976100000081
S2，建立标准曲线。
配置外标混合工作液：分别准确称量下表4所示的外标标准品各1mg，加入超纯水溶解，分别配制成浓度为1000μg/mL的标准品单标储备液。取100μL标准品单标储备液，加入400μL超纯水、500μL纯甲醇，配制成浓度为100μg/mL标准品单标中间液。再分别各取18种标准品单标中间液10μL，加入820μL 50％甲醇水，配制成浓度为1μg/mL的外标混合工作液。再逐级稀释为1000ng/mL、100ng/mL、10ng/mL、1ng/mL的外标混合工作液。
表4外标标准品信息
Figure BDA0002577976100000082
Figure BDA0002577976100000091
配置内标混合工作液：取下表5所示的内标标准品，分别配制成浓度为100μg/mL的内标单标中间液；取10μL内标单标中间液，加入990μL、50％甲醇水，配制成浓度为1μg/mL的内标单标工作液；分别取9种1μg/mL的内标单标工作液100μL，再加入100μL 50％甲醇水，配制成浓度为100ng/mL内标混合工作液。
表5内标标准品信息
Figure BDA0002577976100000092
配置不同浓度标准品溶液：按照下表6所示用量配置：
表6不同浓度的标品溶液配置方法表
Figure BDA0002577976100000101
将不同浓度标准品溶液按照S1中的参数条件上机测试，质谱数据导入MultiQuant软件，分别根据18种标准品物质的特征离子碎片确定其色谱保留时间。其中，50ng/mL标准品溶液的出峰情况见图1和2。
由图1和图2可以看出，18种标准品物质均出峰，且峰形良好，能够实现准确定性。其中，18种标准品保留时间及对应内标结果分别见下表7:
表7标准曲线拟合结果统计表
Figure BDA0002577976100000102
Figure BDA0002577976100000111
由表7可以看出，与咖啡因代谢相关的18种物质在定量范围内均具有良好的线性(线性方程的相关系数R2>0.99)，可实现准确定量。
实施例2血浆样品测试
血浆样品来源：血浆样本A、B、C均来源于中国人民解放军总医院(301医院)。
前处理：离心管盒里装上碎冰，从-80℃冰箱中取出待测血浆样品放在装有碎冰的离心管盒里解冻(样品在冰上解冻以及后续所有操作都要求在冰上进行)至样本中没有冰块，解冻完成后，涡旋10s混匀。
制备供试品溶液：取待测血浆样品50μL，加入150μL在甲醇溶液，20μL内标混混合工作液(100ng/mL)。涡旋3min，12000r/min，4℃条件下离心10min。离心完后吸取上清液150μL转到另一个编号的离心管中，-20℃静置过夜。12000r/min，4℃条件下再离心5min，取上清液100μL。取100μL上清液装到对应进样瓶内衬管中，盖盖，用于上机分析。
按照实施例1的咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法的参数条件进行分析测试，结果如表8所示：
表8血浆样品测试结果统计表
Figure BDA0002577976100000121
实施例3方法学验证
(1)精密度
分别对同一份标准品溶液(50ng/mL)，按照实施例1的测试条件连续3天进行测试，每天测试1针，计算RSD。分别对同一份标准品溶液(50ng/mL)，按照实施例1的测试条件在一天内间隔重复测试3次，计算RSD。统计结果见下表9：
表9精密度结果统计表(N＝3)
Figure BDA0002577976100000122
Figure BDA0002577976100000131
(2)回收率
采用血浆样本D(来源于中国人民解放军总医院(301医院))作为对照按照实施例2的方法测试18种成分的基础含量，再分别添加各标准品，进行回收率测试，各样品平行测试3次。结果统计如下表10：
表10回收率结果统计表(N＝3)
Figure BDA0002577976100000132
由表10可以看出，采用本发明探索的液质联用最优测试条件，18种物质的回收率均较高。
对比例1
本对比例提供一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其确定采用LC-MS/MS检测分析参数条件的洗脱程序与实施例1不同，分别如下表11所示，测试获得的总离子流图如图3所示。
表11梯度洗脱程序表
时间(min) 流速(mL/min) A(％) B(％)
0.00 0.35 95 5
10.00 0.35 5 95
11.00 0.35 5 95
11.10 0.35 95 5
14.00 0.35 95 5
对比例2
本对比例提供一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其确定采用LC-MS/MS检测分析参数条件的洗脱程序与实施例1不同，区别如下表12所示，测试获得的总离子流图如图4所示。
表12梯度洗脱程序表
时间(min) 流速(mL/min) A(％) B(％)
0.00 0.35 95 5
3.00 0.35 95 5
7.00 0.35 5 95
9.00 0.35 5 95
9.10 0.35 95 5
12.00 0.35 95 5
对比例3
本对比例提供一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其确定采用LC-MS/MS检测分析参数条件的洗脱程序与实施例1不同，区别如下表13所示，测试获得的总离子流图如图5所示。
表13梯度洗脱程序表
时间(min) 流速(mL/min) A(％) B(％)
0.00 0.35 95 5
1.00 0.35 95 5
6.00 0.35 50 50
7.00 0.35 5 95
9.00 0.35 5 95
10.00 0.35 95 5
11.00 0.35 95 5
对比例4
本对比例提供一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其确定采用LC-MS/MS检测分析参数条件的洗脱程序与实施例1不同，区别如下表14所示，测试获得的总离子流图如图6所示。
表14梯度洗脱程序表
时间(min) 流速(mL/min) A(％) B(％)
0.00 0.35 95 5
0.50 0.35 95 5
5.00 0.35 60 40
5.10 0.35 5 95
7.50 0.35 5 95
7.60 0.35 95 5
10.00 0.35 95 5
以上实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其特征在于，包括如下步骤：
确定采用LC-MS/MS检测分析的参数条件，色谱条件包括：柱温38℃～42℃，流动相A为含0.03％～0.05％乙酸的水，流动相B为含0.03％～0.05％乙酸的乙腈，采用梯度洗脱方式；质谱条件包括：采用ESI离子源，采用MRM扫描模式；
按照所述参数条件，利用外标标准品以及内标标准品13C3-咖啡因、IS-7-甲基黄嘌呤、13C5-腺苷酸、d3-1-甲基黄嘌呤、d3-副黄嘌呤、d6-可可碱、d3-1,7-二甲基尿酸、d3-1-甲基尿酸、13C5-黄嘌呤核苷，建立1-甲基黄嘌呤、3-甲基黄嘌呤、鸟苷酸、7-甲基黄嘌呤、腺苷酸、咖啡因、副黄嘌呤、可可碱、茶碱、1,3,7-三甲基尿酸、1,7-二甲基尿酸、1-甲基尿酸、3,7-二甲基尿酸、一磷酸腺苷、肌苷、尿酸、黄嘌呤核苷以及黄嘌呤的标准曲线；
制备供试品溶液，按照所述参数条件上机测试，根据各标准曲线换算出血浆样品中咖啡因及其代谢物的成分含量。
2.根据权利要求1所述的咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其特征在于，所述色谱柱为ACQUITYHSS T3柱，进样量2μL。
3.根据权利要求2所述的咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其特征在于，所述梯度洗脱采用的流速为0.32mL/min～0.38mL/min，所述梯度洗脱的条件为：
0min，流动相A与流动相B的体积比为95:5；
0.5min，流动相A与流动相B的体积比为95:5；
5min，流动相A与流动相B的体积比为60:40；
5.1min，流动相A与流动相B的体积比5:95；
7.5min，流动相A与流动相B的体积比为5:95；
7.6min，流动相A与流动相B的体积比为95:5；
10min，流动相A与流动相B的体积比为95:5。
4.根据权利要求1所述的咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其特征在于，所述MRM扫描参数包括：
1-甲基黄嘌呤的离子对为167.1/110、167.1/136.02，d3-1-甲基黄嘌呤的离子对为170/110；
3-甲基黄嘌呤的离子对为167.1/124、167.1/33；
鸟苷酸的离子对为364/152、364.2/323.2；
7-甲基黄嘌呤的离子对为167/124、167/150，IS-7-甲基黄嘌呤的离子对为173.1/127.9；
腺苷酸的离子对为268.097/136、268.097/212.09，13C5-腺苷酸的离子对为273/136.1；
咖啡因的离子对为195.08/138.06、195.08/83，13C3-咖啡因的离子对为198.1/140；
副黄嘌呤的离子对为181.1/55.1、181.2/124.2，d3-副黄嘌呤的离子对为184.1/124.1；
可可碱的离子对为181/138、181/89.07，d6-可可碱的离子对为187/169；
茶碱的离子对为181.1/137.1、181.1/124.1；
1,3,7-三甲基尿酸的离子对为209.2/137、209.2/165，
1,7-二甲基尿酸的离子对为195/180、195/137，d3-1,7-二甲基尿酸的离子对为198.1/183；
1-甲基尿酸的离子对为181/138、181/86，d3-1-甲基尿酸的离子对为184.1/141；
3,7-二甲基尿酸的离子对为195/180、195/152.04；
一磷酸腺苷的离子对为346/134、346/97；
肌苷的离子对为267.1/135、267.1/108；
尿酸的离子对为166.8/96.1、167.1/124.1；
黄嘌呤核苷的离子对为283.076/151、283.076/108，13C5-黄嘌呤核苷的离子对为288/151；
以及黄嘌呤的离子对为151/108、151/80。
5.根据权利要求4所述的咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其特征在于，所述离子源温度500℃，喷雾压力为-4500/5500V，气帘气压力为35psi，辅助加热气Gas1压力为45psi，辅助加热气Gas2压力为55psi，碰撞气为Medium。
6.根据权利要求1至5任一项所述的咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其特征在于，所述标准曲线的建立方法包括如下步骤：
利用外标标准品1-甲基黄嘌呤、3-甲基黄嘌呤、鸟苷酸、7-甲基黄嘌呤、腺苷酸、咖啡因、副黄嘌呤、可可碱、茶碱、1,3,7-三甲基尿酸、1,7-二甲基尿酸、1-甲基尿酸、3,7-二甲基尿酸、一磷酸腺苷、肌苷、尿酸、黄嘌呤核苷以及黄嘌呤和溶剂甲醇配置外标浓度分别为1000ng/mL、100ng/mL、10ng/mL、1ng/mL的外标混合工作液；
利用内标标准品13C3-咖啡因、IS-7-甲基黄嘌呤、13C5-腺苷酸、d3-1-甲基黄嘌呤、d3-副黄嘌呤、d6-可可碱、d3-1,7-二甲基尿酸、d3-1-甲基尿酸、13C5-黄嘌呤核苷和溶剂甲醇配置内标浓度为100ng/mL的内标混合工作液；
利用外标混合工作液、内标混合工作液和溶剂甲醇配置外标浓度分别为500ng/mL、200ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL和0.1ng/mL的标准品溶液，其中各浓度点内标浓度均为10ng/mL；
按照权利要求1至5任一项所述的参数条件上机测试，分别建立标准曲线。
7.根据权利要求6所述的咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其特征在于，所述制备供试品溶液包括如下步骤：
将血浆样品解冻，涡旋混匀，取50μL加入到100μL～180μL甲醇中，再加入20μL、浓度为100ng/mL的内标混合工作液，涡旋混匀，离心，取上清液，即得。
8.根据权利要求7所述的咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法，其特征在于，所述离心的速度为11000r/min～13000r/min，时间为3min～5min。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010091129A (ko) * 2000-03-13 2001-10-23 조양호 6가지 ｃｙｐ효소의 기질 및 그의 대사물질 모두 분리가능한 단일 용매체계와 분리방법
US20070075020A1 (en) * 2005-10-03 2007-04-05 Kelm Mark A Improved process for analyzing for separating, and for isolating polar protic monomers and/or oligomers
JP2009131161A (ja) * 2007-11-02 2009-06-18 Hamamatsu Kagaku Gijutsu Kenkyu Shinkokai チャフロサイド高含有茶葉およびその製造方法
CN102095816A (zh) * 2011-01-08 2011-06-15 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种咖啡酊中生物碱的测定方法
CN102680601A (zh) * 2011-12-20 2012-09-19 山东凯盛新材料股份有限公司 乳粉中核苷酸高效液相色谱测定方法
US20190079092A1 (en) * 2016-02-10 2019-03-14 Mdb Diagnosis Group Limited Method of Diagnosing Cancer by Determining the Level of One or More Volatile Organic Compounds

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010091129A (ko) * 2000-03-13 2001-10-23 조양호 6가지 ｃｙｐ효소의 기질 및 그의 대사물질 모두 분리가능한 단일 용매체계와 분리방법
US20070075020A1 (en) * 2005-10-03 2007-04-05 Kelm Mark A Improved process for analyzing for separating, and for isolating polar protic monomers and/or oligomers
JP2009131161A (ja) * 2007-11-02 2009-06-18 Hamamatsu Kagaku Gijutsu Kenkyu Shinkokai チャフロサイド高含有茶葉およびその製造方法
CN102095816A (zh) * 2011-01-08 2011-06-15 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种咖啡酊中生物碱的测定方法
CN102680601A (zh) * 2011-12-20 2012-09-19 山东凯盛新材料股份有限公司 乳粉中核苷酸高效液相色谱测定方法
US20190079092A1 (en) * 2016-02-10 2019-03-14 Mdb Diagnosis Group Limited Method of Diagnosing Cancer by Determining the Level of One or More Volatile Organic Compounds

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ADAM S.PTOLEMY等: "Quantification of theobromine and caffeine in saliva, plasma and urine via liquid chromatography–tandem mass spectrometry: A single analytical protocol applicable to cocoa intervention studies", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B》 *
N R SCOTT等: "Determination of caffeine, theophylline and theobromine in serum and saliva using high-performance liquid chromatography", 《ANN CLIN BIOCHEM》 *
R.KLASSEN等: "HPLC Separation of Theophylline, Paraxanthine,Theobromine, Caffeine and Other Caffeine Metabolites in Biological Fluids", 《JOURNAL OF LIQUID CHROMATOGRAPHY》 *
张郁葱 等: "高效液相色谱一电喷雾质谱法同时测定人血浆中咖啡因、咪哒哇仑和代谢产物及其在药物代谢研究中的应用", 《药物分析杂志》 *
高向波: "早产儿体内咖啡因及三种初级代谢产物浓度测定及其群体药代动力学研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *

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