CN111990296A - 一种适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及保健食品功效评价技术领域，为满足改善睡眠的保健食品功效评价需求，公开一种适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法，以斑马鱼为模型生物，设置正常对照组、阳性对照组、模型对照组和待测保健食品组，使用行为分析设备测试处理后的斑马鱼的活动指标，然后分析、比较、计算测试结果，评价待测保健食品改善睡眠功效。适合仙芝楼牌芝宁胶囊等12种保健食品的改善睡眠效果的评价，并且可以评价较宽的浓度范围，同时以斑马鱼为模式生物，与现有技术中采用哺乳动物如小鼠相比，评价时间缩短至24h，且不用预实验，而且由于斑马鱼饲养成本低，体积小，发育周期短、单次产卵次数高的特点能同时进行多个供试品的评价，相比小鼠更经济。
Description
技术领域
本发明涉及保健食品功效评价技术领域，具体涉及一种适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法。
背景技术
现代社会中很多人由于各种原因出现失眠的情况，精神状态不佳，为具有改善睡眠功效的保健食品带来了市场。目前保健食品的种类繁多，有以褪黑素、γ-氨基丁酸、镁化合物、茶氨酸、烟酰胺等化合物为主要有效成分的保健食品，还有以百合、莲子心、北五味子、当归、地黄、白芍等中药成分炮制得到的保健食品，如何评价这些保健食品的改善睡眠功效对于保障消费者的权益，同时为市场推荐优质产品具有重要意义。但是因为各种保健食品组成相差较大，改善睡眠的原理也大相径庭，往往一种评价模型很难适应多种保健食品的评价需求，而针对不同的保健食品设置不同的评价模型无疑会增加评价成本，保健食品之间量化的可比性也大大降低。
目前评价改善睡眠效果一般采用哺乳动物模型(小鼠)，采用成年小鼠，单一性别，18～22g，每组10～15只，以人体推荐的10倍为其中一个剂量组，另设二个剂量组。受试样本给予时间为30天，必要时可延长至45天，具体实验方法有：直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠(或巴比妥钠)阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验。但是采用哺乳动物饲评价睡眠功效存在以下不足：饲养成本高、发育周期长等特点无法同时进行多个供试样品的评价，否则成本大大增加；认定指标较多，工作量大，例如延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠(或巴比妥钠)阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验，三项实验中二项阳性且无明显直接睡眠作用，才能判断该受试样品具有改善睡眠功能作用。由于动物自身固有生物学特征和习性，如鼠类活动在夜间比白天活跃，与人类的作息时间相反，这类实验应尽量安排在夜间同一时间进行为宜，而白天实验的结果准确性不好判定；哺乳动物改善睡眠功能检测方法除直接睡眠实验外，所有实验要先进行预实验，不仅增加了工作量延长实验时间，还用到更多的模式生物。
发明内容
为满足改善睡眠的保健食品功效评价需求，本发明的目的在于提供一种适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法，以实现采用一种评价模型对多种保健食品改善睡眠功效的评价。
本发明提供如下的技术方案：
一种适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法，以斑马鱼为模型生物，设置正常对照组、阳性对照组、模型对照组和待测保健食品组进行分析评价，包括以下步骤：
(1)设置正常对照组：将斑马鱼置于含水的孔板中，每孔中设置每尾斑马鱼/80～120μL水，至少静置24小时，然后转移斑马鱼至空白的孔板中，设置方式为每孔1尾斑马鱼，水量180～220μL；
(2)设置阳性对照组：按照正常对照组的规格设置，其中在静置相同的时间之前，以水溶方式向斑马鱼给予可改善睡眠的阳性药剂，在转移斑马鱼至空白的孔板中加水后，以水溶方式向斑马鱼给予可引起行为躁动的造模剂；
(3)设置模型对照组：按照正常对照组的规格设置，在转移斑马鱼至空白的孔板中加水后，以水溶方式向斑马鱼给予阳性对照组相同浓度的造模剂；
(4)设置待测保健食品组：按照正常对照组的规格设置，其中在静置相同的时间之前，以水溶方式向斑马鱼给予待测保健样品，在转移斑马鱼至空白的孔板中加水后，以水溶方式向斑马鱼给予与模型对照组相同浓度的造模剂；
(5)分析测试：使用行为分析设备测试正常对照组、阳性对照组、模型对照组和待测保健食品对照组处理后的斑马鱼的活动指标，然后分析、比较、计算测试结果，评价待测保健食品改善睡眠功效。
本发明的评价方法设置正常对照组、模型对照组、待测保健食品组和阳性对照组，通过模型对照组、正常对照组和阳性对照组对比评价待测保健食品组的行为表现，实现对保健食品改善睡眠功效的全面和准确评价，同时以斑马鱼为模型生物替代小鼠等哺乳动物，斑马鱼与人类基因同源性高达87％，其信号传导通路与人类基本近似，生物结构和生理功能与哺乳动物高度相似，且跟人类一样具属于昼行性动物，相对于小鼠实验的30～45天，评价时间缩短至24h，而且不用进行预实验，同时由于斑马鱼饲养成本低，体积小，发育周期短、单次产卵次数高的特点能同时进行多个供试品的评价，相比小鼠更经济。
作为本发明方法的优选，所述斑马鱼为亲鱼受精后5天孵化出的斑马鱼幼鱼。此时的斑马鱼幼鱼活动量正常，且适应性好。
作为本发明方法的优选，所述模型对照组所用造模剂为卡地阿唑，所述造模剂的施加浓度为4～6mM。卡地阿唑可诱导斑马鱼既有躁狂症又有抑郁症的双相精神障碍，引起斑马鱼失眠。
作为本发明方法的优选，所述改善睡眠功效的阳性药剂为苯妥英钠，所述阳性药剂的施加浓度为40～50μg/mL。设置阳性药组可验证实验模型合理性，且能筛选出具有改善睡眠功效的产品。本申请的发明人在前期研究中发现，由于不同保健食品的组分差异较大，而且改善睡眠的机理也各不相同，因此改善睡眠的效果有较大的差异，尤其表现在用量上。因此如何能够准确判定保健食品具有一定程度的睡眠改善功效，选择合适的阳性药剂非常重要。一些效果发挥较慢的保健食品的睡眠改善效果在试验时间内可能仅有较弱的效果表现，而过于灵敏的阳性药剂将不能有效捕捉这种效果，而灵敏性不够高的阳性药剂也将导致保健食品的假性效果评价。因此发明人综合考虑待测保健食品的组分、药效和机理，通过筛选选择苯妥英钠作为适合多种待测保健食品评价的阳性药剂。
作为本发明方法的优选，所述保健食品为仙芝楼牌芝宁胶囊、汤臣倍健褪黑素片、修正牌褪黑素胶囊、仁和褪黑素维生素B6片、百合康牌褪黑素维生素B6胶囊、康恩贝褪黑素安瓶、以岭晚必安酸枣仁油软胶囊、天美健捷尔灵初胶囊、脑白金口服液、藏誉堂天麻灵芝酸枣仁胶囊、静心口服液和贡尖梅朵牌红景天五味子口服液中的一种。本发明的评价方法适用于上述褪黑素类型、中药类型的保健食品的改善睡眠功效评价。
作为本发明方法的优选，所述各保健食品适用于斑马鱼的浓度评价范围为：仙芝楼牌芝宁胶囊27.75～888μg/mL、汤臣倍健褪黑素片5.5～176μg/mL、修正牌褪黑素胶囊7～224μg/mL、仁和褪黑素维生素B6片3.5～112μg/mL、百合康牌褪黑素维生素B6胶囊2.125～68μg/mL、康恩贝褪黑素安瓶8.375～268μg/mL、以岭晚必安酸枣仁油软胶囊13.875～444μg/mL、天美健捷尔灵初胶囊12.5～400μg/mL、脑白金口服液8.75～70μL/mL、藏誉堂天麻灵芝酸枣仁胶囊22.25～712μg/mL、静心口服液1～32μL/mL、贡尖梅朵牌红景天五味子口服液0.75～24μL/mL。本发明的评价方法不仅适合多种保健食品的效果评价，而且由于不同的保健食品的施加量不同，本发明的评价方法在各自保健食品的一个较宽的浓度范围内均适用，满足多种保健食品、多浓度的保健效果评价，具有积极的技术应用价值。
作为本发明方法的优选，所述活动指标为斑马鱼的觉醒活动量和斑马鱼的总运动距离。本申请中的觉醒活动量为斑马鱼运动速度大于20mm/s时的总运动距离。发明人在研究中发现，并非觉醒活动量相对模型对照组降低就表示睡眠得到改善，这有可能是因为待测样品引起的斑马鱼中毒所致，因此，发明人经过分析引入斑马鱼的总运动距离作为修正，当觉醒运动量和总运动距离均小于模型对照组，且总运动距离大于正常对照组时，判定睡眠效果得到改善。
作为本发明方法的优选，所述计算测试结果指计算改善睡眠效率，所述改善睡眠效率＝(模型对照组-待测保健食品组)/(模型对照组-正常对照组)*100％。
本发明的有益效果如下：
本发明的评价方法适合仙芝楼牌芝宁胶囊等12种不同类型和组成的保健食品的改善睡眠效果的评价，并且可以评价较宽的浓度范围，同时以斑马鱼为模式生物，与现有技术中采用哺乳动物如小鼠相比，评价时间缩短至24h，且不用预实验，而且由于斑马鱼饲养成本低，体积小，发育周期短、单次产卵次数高的特点能同时进行多个供试品的评价，相比小鼠更经济。
附图说明
图1为不同浓度仙芝楼牌芝宁胶囊处理后的斑马鱼的行为轨迹图。
图中，A黑色区域表示斑马鱼慢速运动的轨迹，B灰色区域表示斑马鱼快速运动的轨迹，C浅灰色区域表示斑马鱼中速运动的轨迹。
具体实施方式
下面就本发明的具体实施方式作进一步说明。
如无特别说明，本发明中所采用的原料均可从市场上购得或是本领域常用的，如无特别说明，下述实施例中的方法均为本领域的常规方法。
下述实施例中所用行为分析设备为斑马鱼三维运动轨迹实施跟踪系统ViewPointApplication Manager Zebra Lad 3.11。
实施例1
一种适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法，以斑马鱼为模型生物，设置正常对照组、阳性对照组、模型对照组和待测保健食品组进行分析评价，以仙芝楼牌芝宁胶囊为待测保健食品说明，包括以下步骤：
(1)设置正常对照组：随机选取受精后5天(即5dpf)野生型AB品系斑马鱼幼鱼于六孔板中，每孔设置斑马鱼30尾，含水量为3mL；静置保持24小时；
(2)设置阳性对照组：随机选取5dpf野生型AB品系斑马鱼幼鱼于六孔板中，每孔设置斑马鱼30尾，含水量为3mL；以水溶方式向斑马鱼给予可改善睡眠的阳性药剂苯妥英钠，浓度为40μg/mL，静置保持24小时；然后转移斑马鱼至空白的96孔板中，每孔设置斑马鱼1尾，水量200μL，然后以水溶方式向斑马鱼给予造模剂卡地阿唑，给予浓度为5mM；
(3)设置模型对照组：随机选取5dpf野生型AB品系斑马鱼幼鱼于六孔板中，每孔设置斑马鱼30尾，含水量为3mL，静置保持24小时，再分别转移至空白的96孔板中，每孔设置斑马鱼1尾，水量200μL，然后以水溶方式向斑马鱼给予造模剂卡地阿唑，给予浓度为5mM；(4)设置待测保健食品组：随机选取5dpf野生型AB品系斑马鱼幼鱼于六孔板中，每孔设置斑马鱼30尾，含水量为3mL；以水溶方式向斑马鱼给予仙芝楼牌芝宁胶囊，仙芝楼牌芝宁胶囊的给与浓度依次为27.75、55.5、111、222、444、888μg/mL；然后将各浓度下的斑马鱼静置保持24小时，再分别转移至空白的96孔板中，每孔设置斑马鱼1尾，水量200μL，然后以水溶方式向斑马鱼给予造模剂卡地阿唑，给予浓度为5mM；
(5)立即使用行为分析设备测试正常对照组、阳性对照组、模型对照组和待测保健食品对照组处理后的斑马鱼的活动指标总运动距离和觉醒活动量，然后分析、比较、计算测试结果，评价待测保健食品改善睡眠功效；并解剖斑马鱼观察有无毒性；
计算测试结果指以觉醒活动量为参数计算改善睡眠效率，所述改善睡眠效率＝(模型对照组-待测保健食品组)/(模型对照组-正常对照组)*100％。
其中，各组处理后的斑马鱼的行为轨迹图见图1所示，其中A黑色区域表示斑马鱼慢速运动的轨迹，B灰色区域(行为分析设备实际得到的彩色图片，对应图片中红色区域)表示斑马鱼快速运动的轨迹，代表斑马鱼失眠状态，C浅灰色区域(行为分析设备实际得到的彩色图片，对应图片中绿色区域)表示斑马鱼中速运动的轨迹。从图中各实验组对比可以看出，斑马鱼造模成功。毒性测试结果见表1所示，觉醒活动量和总运动距离以及改善睡眠效率结果见表2。
实施例2
一种适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法，以斑马鱼为模型生物，设置正常对照组、阳性对照组、模型对照组和待测保健食品组进行分析评价，以仙芝楼牌芝宁胶囊为待测保健食品说明，包括以下步骤：
(1)设置正常对照组：随机选取5dpf野生型AB品系斑马鱼幼鱼于六孔板中，每孔设置斑马鱼30尾，含水量为3.6mL；静置保持24小时；
(2)设置阳性对照组：随机选取5dpf野生型AB品系斑马鱼幼鱼于六孔板中，每孔设置斑马鱼30尾，含水量为3.6mL；以水溶方式向斑马鱼给予可改善睡眠的阳性药剂苯妥英钠，浓度为50μg/mL，静置保持24小时；然后转移斑马鱼至空白的96孔板中，每孔设置斑马鱼1尾，水量220μL，然后以水溶方式向斑马鱼给予造模剂卡地阿唑，给予浓度为6mM；
(3)设置模型对照组：随机选取5dpf野生型AB品系斑马鱼幼鱼于六孔板中，每孔设置斑马鱼30尾，含水量为3.6mL，静置保持24小时，再分别转移至空白的96孔板中，每孔设置斑马鱼1尾，水量220μL，然后以水溶方式向斑马鱼给予造模剂卡地阿唑，给予浓度为6mM；(4)设置待测保健食品组：随机选取5dpf野生型AB品系斑马鱼幼鱼于六孔板中，每孔设置斑马鱼30尾，含水量为3.6mL；以水溶方式向斑马鱼给予仙芝楼牌芝宁胶囊，仙芝楼牌芝宁胶囊的给与浓度依次为27.75、55.5、111、222、444、888μg/mL；然后将各浓度下的斑马鱼静置保持24小时，再分别转移至空白的96孔板中，每孔设置斑马鱼1尾，水量220μL，然后以水溶方式向斑马鱼给予造模剂卡地阿唑，给予浓度为6mM；
(5)立即使用行为分析设备测试正常对照组、阳性对照组、模型对照组和待测保健食品对照组处理后的斑马鱼的活动指标总运动距离和觉醒活动量，然后分析、比较、计算测试结果，评价待测保健食品改善睡眠功效；并解剖斑马鱼观察有无毒性；
计算测试结果指以觉醒活动量为参数计算改善睡眠效率，所述改善睡眠效率＝(模型对照组-待测保健食品组)/(模型对照组-正常对照组)*100％。
该实施例评价结果与实施例1相近，在测试浓度范围内，仙芝楼牌芝宁胶囊可以改善睡眠。
实施例3
一种适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法，以斑马鱼为模型生物，设置正常对照组、阳性对照组、模型对照组和待测保健食品组进行分析评价，以仙芝楼牌芝宁胶囊为待测保健食品说明，包括以下步骤：
(1)设置正常对照组：随机选取5dpf野生型AB品系斑马鱼幼鱼于六孔板中，每孔设置斑马鱼30尾，含水量为2.4mL；静置保持25小时；
(2)设置阳性对照组：随机选取5dpf野生型AB品系斑马鱼幼鱼于六孔板中，每孔设置斑马鱼30尾，含水量为2.4mL；以水溶方式向斑马鱼给予可改善睡眠的阳性药剂苯妥英钠，浓度为40μg/mL，静置保持25小时；然后转移斑马鱼至空白的96孔板中，每孔设置斑马鱼1尾，水量180μL，然后以水溶方式向斑马鱼给予造模剂卡地阿唑，给予浓度为4mM；
(3)设置模型对照组：随机选取5dpf野生型AB品系斑马鱼幼鱼于六孔板中，每孔设置斑马鱼30尾，含水量为2.4mL，静置保持25小时，再分别转移至空白的96孔板中，每孔设置斑马鱼1尾，水量180μL，然后以水溶方式向斑马鱼给予造模剂卡地阿唑，给予浓度为4mM；(4)设置待测保健食品组：随机选取5dpf野生型AB品系斑马鱼幼鱼于六孔板中，每孔设置斑马鱼30尾，含水量为2.4mL；以水溶方式向斑马鱼给予仙芝楼牌芝宁胶囊，仙芝楼牌芝宁胶囊的给与浓度依次为27.75、55.5、111、222、444、888μg/mL；然后将各浓度下的斑马鱼静置保持25小时，再分别转移至空白的96孔板中，每孔设置斑马鱼1尾，水量180μL，然后以水溶方式向斑马鱼给予造模剂卡地阿唑，给予浓度为4mM；
(5)立即使用行为分析设备测试正常对照组、阳性对照组、模型对照组和待测保健食品对照组处理后的斑马鱼的活动指标总运动距离和觉醒活动量，然后分析、比较、计算测试结果，评价待测保健食品改善睡眠功效；并解剖斑马鱼观察有无毒性；
计算测试结果指以觉醒活动量为参数计算改善睡眠效率，所述改善睡眠效率＝(模型对照组-待测保健食品组)/(模型对照组-正常对照组)*100％。
该实施例评价结果与实施例1相近，在测试浓度范围内，仙芝楼牌芝宁胶囊可以改善睡眠。
实施例4
与实施例1不同之处在于，以汤臣倍健褪黑素片为待测保健食品，测试浓度见表1所示。毒性测试结果见表1所示，觉醒活动量和总运动距离以及改善睡眠效率结果见表2。
实施例5
与实施例1不同之处在于，以修正牌褪黑素胶囊为待测保健食品，测试浓度见表1所示。毒性测试结果见表1所示，觉醒活动量和总运动距离以及改善睡眠效率结果见表2。
实施例6
与实施例1不同之处在于，以仁和褪黑素维生素B6片为待测保健食品，测试浓度见表1所示。毒性测试结果见表1所示，觉醒活动量和总运动距离以及改善睡眠效率结果见表2。
实施例7
与实施例1不同之处在于，以百合康牌褪黑素维生素b6胶囊为待测保健食品，测试浓度见表1所示。毒性测试结果见表1所示，觉醒活动量和总运动距离以及改善睡眠效率结果见表2。
实施例8
与实施例1不同之处在于，以康恩贝褪黑素安瓶为待测保健食品，测试浓度见表1所示。毒性测试结果见表1所示，觉醒活动量和总运动距离以及改善睡眠效率结果见表2。
实施例9
与实施例1不同之处在于，以以岭晚必安酸枣仁油软胶囊为待测保健食品，测试浓度见表1所示。毒性测试结果见表1所示，觉醒活动量和总运动距离以及改善睡眠效率结果见表2。
实施例10
与实施例1不同之处在于，以天美健捷尔灵初胶囊为待测保健食品，测试浓度见表1所示。毒性测试结果见表1所示，觉醒活动量和总运动距离以及改善睡眠效率结果见表2。
实施例11
与实施例1不同之处在于，以脑白金口服液为待测保健食品，测试浓度见表1所示。毒性测试结果见表1所示，觉醒活动量和总运动距离以及改善睡眠效率结果见表2。
实施例12
与实施例1不同之处在于，以脑白金口服液为待测保健食品，测试浓度见表1所示。毒性测试结果见表1所示，觉醒活动量和总运动距离以及改善睡眠效率结果见表2。
实施例13
与实施例1不同之处在于，以藏誉堂天麻灵芝酸枣仁胶囊为待测保健食品，测试浓度见表1所示。毒性测试结果见表1所示，觉醒活动量和总运动距离以及改善睡眠效率结果见表2。
实施例14
与实施例1不同之处在于，以静心口服液为待测保健食品，测试浓度见表1所示。毒性测试结果见表1所示，觉醒活动量和总运动距离以及改善睡眠效率结果见表2。
实施例15
与实施例1不同之处在于，以静心口服液为待测保健食品，测试浓度见表1所示。毒性测试结果见表1所示，觉醒活动量和总运动距离以及改善睡眠效率结果见表2。
实施例16
与实施例1不同之处在于，以贡尖梅朵牌红景天五味子口服液为待测保健食品，测试浓度见表1所示。毒性测试结果见表1所示，觉醒活动量和总运动距离以及改善睡眠效率结果见表2。
1.毒性测试
结果如表1所示，与正常对照组、模型对照组和阳性对照组对比观察，并在测试完成后解剖，确认待测保健食品对斑马鱼的毒性情况，结果如表1所示。
表1待测保健食品毒性测试结果
从上表中可以看出，在测试剂量范围内，上述保健食品对斑马鱼均无毒性作用。
2.改善睡眠效果评价
立即使用行为分析设备测试正常对照组、阳性对照组、模型对照组和待测保健食品对照组处理后的斑马鱼的活动指标总运动距离和觉醒活动量，然后分析、比较、计算测试结果，评价待测保健食品改善睡眠功效；并解剖斑马鱼观察有无毒性；
计算测试结果指以觉醒活动量为参数计算改善睡眠效率，所述改善睡眠效率＝(模型对照组-待测保健食品组)/(模型对照组-正常对照组)*100％，结果见表2所示。
表2改善睡眠功效结果评价
从上表中可以看出，在测试浓度范围内，上述保健食品均有改善睡眠的效果。
需要说明的是，由于不同批次的斑马鱼幼鱼的活动力有所不同，因此不同保健食品测试时的正常对照组、模型对照组和阳性对照组的测试结果有所不同，同一保健食品不同批次试验的测试结果也有所不同，如实施例11和实施例12。但是同一批次内的正常对照组、模型对照组、阳性对照组合待测保健食品组的斑马鱼的活动力相近，整体表现一致。
当待测保健食品为固体时，给与浓度单位为μg/mL；当待测保健食品为液体时，给予浓度单位为μL/mL。
Claims (8)
1.一种适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法，其特征在于，以斑马鱼为模型生物，设置正常对照组、阳性对照组、模型对照组和待测保健食品组进行分析评价，包括以下步骤：
（1）设置正常对照组：将斑马鱼置于含水的孔板中，每孔中设置每尾斑马鱼/80～120µL水，至少静置24小时，然后转移斑马鱼至空白的孔板中，设置方式为每孔1尾斑马鱼，水量180～220µL；
（2）设置阳性对照组：按照正常对照组的规格设置，其中在静置相同的时间之前，以水溶方式向斑马鱼给予可改善睡眠的阳性药剂，在转移斑马鱼至空白的孔板中加水后，以水溶方式向斑马鱼给予可引起行为躁动的造模剂；
（3）设置模型对照组：按照正常对照组的规格设置，在转移斑马鱼至空白的孔板中加水后，以水溶方式向斑马鱼给予阳性对照组相同浓度的造模剂；
（4）设置待测保健食品组：按照正常对照组的规格设置，其中在静置相同的时间之前，以水溶方式向斑马鱼给予待测保健样品，在转移斑马鱼至空白的孔板中加水后，以水溶方式向斑马鱼给予与模型对照组相同浓度的造模剂；
（5）分析测试：使用行为分析设备测试正常对照组、阳性对照组、模型对照组和待测保健食品对照组处理后的斑马鱼的活动指标，然后分析、比较、计算测试结果，评价待测保健食品改善睡眠功效。
2.根据权利要求1所述的适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法，其特征在于，所述斑马鱼为亲鱼受精5天以后孵化出的斑马鱼幼鱼。
3.根据权利要求1所述的适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法，其特征在于，所述模型对照组所用造模剂为卡地阿唑，所述造模剂的施加浓度为4～6mM。
4.根据权利要求1所述的适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法，其特征在于，所述改善睡眠功效的阳性药剂为苯妥英钠，所述阳性药剂的施加浓度为40～50µg/mL。
5.根据权利要求1所述的适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法，其特征在于，所述保健食品为仙芝楼牌芝宁胶囊、汤臣倍健褪黑素片、修正牌褪黑素胶囊、仁和褪黑素维生素B6片、百合康牌褪黑素维生素B6胶囊、康恩贝褪黑素安瓶、以岭晚必安酸枣仁油软胶囊、天美健捷尔灵初胶囊、脑白金口服液、藏誉堂天麻灵芝酸枣仁胶囊、静心口服液和贡尖梅朵牌红景天五味子口服液中的一种。
6.根据权利要求5所述的适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法，其特征在于，所述各保健食品适用于斑马鱼的浓度评价范围为：仙芝楼牌芝宁胶囊27.75～888µg/mL、汤臣倍健褪黑素片5.5～176µg/mL、修正牌褪黑素胶囊7～224µg/mL、仁和褪黑素维生素B6片3.5～112µg/mL、百合康牌褪黑素维生素B6胶囊2.125～68µg/mL、康恩贝褪黑素安瓶8.375～268µg/mL、以岭晚必安酸枣仁油软胶囊13.875～444µg/mL、天美健捷尔灵初胶囊12.5～400µg/mL、脑白金口服液8.75～140µL/mL、藏誉堂天麻灵芝酸枣仁胶囊22.25～712µg/mL、静心口服液1～32µL/mL、贡尖梅朵牌红景天五味子口服液0.75～24µL/mL。
7.根据权利要求1所述的适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法，其特征在于，所述活动指标为斑马鱼的觉醒活动量和斑马鱼的总运动距离。
8.根据权利要求7所述的适用于评价多种保健食品改善睡眠功效的方法，其特征在于，所述计算测试结果指以觉醒活动量为参数计算改善睡眠效率，所述改善睡眠效率=(模型对照组-待测保健食品组)/(模型对照组-正常对照组)*100%。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20220624 Address after: Room 217, floor 2, building 1, yard 35, Zhenxing Road, Changping District, Beijing 100010 Patentee after: Beijing huantezhi fish Youjian Biotechnology Co.,Ltd. Address before: Room 1201-1212, building a, phase I, Zhongdan Ecological Life Science Industrial Park, No. 3-1, xinjinhu Road, Jiangbei new district, Nanjing, Jiangsu Province Patentee before: Nanjing Xinhuan Detection Technology Co.,Ltd. |
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| TR01 | Transfer of patent right |