CN111961664A - 一种核酸提取液 - Google Patents

一种核酸提取液 Download PDF

Info

Publication number
CN111961664A
CN111961664A CN202010932976.8A CN202010932976A CN111961664A CN 111961664 A CN111961664 A CN 111961664A CN 202010932976 A CN202010932976 A CN 202010932976A CN 111961664 A CN111961664 A CN 111961664A
Authority
CN
China
Prior art keywords
parts
nucleic acid
weight
following components
extracting solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010932976.8A
Other languages
English (en)
Inventor
刘召宏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuhan Zhongtou Hanjia Technology Co ltd
Original Assignee
Wuhan Zhongtou Hanjia Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuhan Zhongtou Hanjia Technology Co ltd filed Critical Wuhan Zhongtou Hanjia Technology Co ltd
Priority to CN202010932976.8A priority Critical patent/CN111961664A/zh
Publication of CN111961664A publication Critical patent/CN111961664A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
    • C12N15/1013—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by using magnetic beads
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Sampling And Sample Adjustment (AREA)

Abstract

本申请涉及核酸检测领域，具体公开了一种核酸提取液，原料按重量份包括以下组分：缓冲液95‑121份，免疫磁珠10‑19份，胰蛋白酶10‑26份，磷酸二氢钾20‑36份，磷酸氢二钠22‑34份，细胞裂解液5‑12份，碎膜吸附剂6‑11份，增溶剂6‑14份，杀菌剂3‑6份，稳定剂4‑8份。本申请可以减少粘液对核酸提取的影响，提高提取效率。

Description

一种核酸提取液
技术领域
本申请涉及核酸检测领域，更具体地说，它涉及一种核酸提取液。
背景技术
核酸检测是用来检测疾病的常用方法，人体染病后，病毒会侵入到人体的正常细胞中，并在细胞中进行繁殖，利用核酸检测提取细胞中的病毒DNA或者RNA，即可知道人体是否染病。
申请号为CN202010158812.4的中国专利，公开了一种磁珠法细菌核酸提取液，包括以下组分：稀土化合物、酸性缓冲液、表面活性剂和螯合剂；其中稀土化合物选自稀土盐，稀土盐选自稀土氯化盐、稀土硫酸盐或稀土硝酸盐，轻稀土元素选自La、Ce、Nd或Eu。
针对上述相关技术，发明人认为：在对宫颈细胞或者口腔细胞进行检测的时候，由于细胞表面粘附大量的粘液，会降低对核酸的提取效率。
发明内容
为了减少粘液对核酸提取的影响，本申请提供一种核酸提取液。
本申请提供的一种核酸提取液，采用如下的技术方案：
一种核酸提取液，原料按重量份包括以下组分：缓冲液95-121份，免疫磁珠10-19份，胰蛋白酶10-26份，磷酸二氢钾20-36份，磷酸氢二钠22-34份，细胞裂解液5-12份，碎膜吸附剂6-11份，增溶剂6-14份，杀菌剂3-6份，稳定剂4-8份。
通过采取上述技术方案，胰蛋白酶作为一种可以选择性水解蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链的酶，可以很好地稀释细胞样品外侧的粘液，使得细胞样品充分分散在提取液中，从而细胞裂解液可以充分作用于细胞样品，使得细胞样品发生溶胀变形并破裂，使得细胞样品内部的核酸释放到提取液中；此时免疫磁珠上的抗体即可以与病毒核酸上的抗原发生特异性结合，从而在规定的磁场中，可以将病毒核酸分离出来。
而且在细胞样品碎裂的过程中，碎膜吸附剂可以吸附破碎的细胞膜，减少细胞膜对免疫磁珠工作的影响，增溶剂可以促使提取液可以收纳更多的破碎细胞膜，使得细胞样品得到充分的破碎；杀菌剂可以减少外界环境中细菌对提取液的影响，进而减少对核酸提取的影响，稳定剂、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾则是维持提取液的稳定性，使得核酸提取过程顺利地进行。
优选的，原料按重量份包括以下组分：缓冲液105-110份，免疫磁珠14-16份，胰蛋白酶16-18份，磷酸二氢钾26-29份，磷酸氢二钠24-26份，细胞裂解液7-9份，碎膜吸附剂8-10份，增溶剂9-11份，杀菌剂4-5份，稳定剂5-7份。
通过采取上述技术方案，进一步优化提取液中各个组分的含量，可以使得各个组分达到更好的配比，从而进一步减少粘液对核酸提取的影响，提高对核酸的提取效率。
优选的，原料按重量份包括以下组分：缓冲液108份，免疫磁珠15份，胰蛋白酶17份，磷酸二氢钾28份，磷酸氢二钠25份，细胞裂解液8份，碎膜吸附剂9份，增溶剂10份，杀菌剂5份，稳定剂5份。
通过采取上述技术方案，进一步确定提取液中各个组分的含量，可以使得各个组分达到更好的配比，从而进一步减少粘液对核酸提取的影响，大大提高对核酸的提取效率优选的，所述碎膜吸附剂按重量份包括以下组分：磷脂酰胆碱5-11份，乙醇36-48份，蔗糖脂肪酸酯12-22份。
通过采取上述技术方案，由于细胞膜主要成分是磷脂双分子层，磷脂是一种由甘油、脂肪酸和磷酸等所组成的分子，磷酸“头”部是亲水的，脂肪酸“尾”部是疏水的；蔗糖脂肪酸酯是一种双亲性分子，蔗糖的—OH基为亲水基，脂肪酸的碳链部分为亲油基，蔗糖脂肪酸酯中的双亲性分子可以与磷脂中的双亲性分子作用，使得破碎的细胞膜与被蔗糖脂肪酸酯吸附；同时乙醇由于具有极性的羟基，可以促进破碎细胞膜的分散，磷脂酰胆碱即为磷脂，利用相似相容的原料，可以进一步提高蔗糖脂肪酸酯对破碎细胞膜的吸附。
优选的，所述碎膜吸附剂按重量份还包括以下组分：糖醇钙锌液5-9份。
通过采取上述技术方案，糖醇钙锌液可以为提取液提供钙离子和锌离子，从而可以提高破碎细胞膜在提取液中的分散和传递，从而使得破碎的细胞膜可以顺利与蔗糖脂肪酸酯相遇，进而提高蔗糖脂肪酸酯对破碎细胞膜的吸附效率；而且钙离子可以提高胰蛋白酶的活性，进一步降低粘液对核酸提取的影响。
优选的，所述增溶剂按重量份包括以下组分：羟基化卵磷脂10-21份，十二烷基硫酸钠11-19份，异丁醇26-33份。
通过采取上述技术方案，羟基化卵磷脂由于羟基的引入，仅有很强的亲水性，可以很好地降低水的提取液的表面张力，使得破碎的细胞膜可以更好地分散溶解在提取液中；十二烷基硫酸钠作为一种阴离子表面活性剂，同样可以提高破碎的细胞膜在提取液中的分散，异丁醇作为一种高级溶剂，具有极性的羟基，可以进一步提高破碎细胞膜在提取液中的分散，而且异丁醇具有很好的抗氧化作用，可以进一步提高提取液的稳定性。
优选的，所述杀菌剂按重量份包括以下组分：葡萄糖酸钠20-36份，聚六亚甲基双胍8-15份。
通过采取上述技术方案，聚六亚甲基双胍是一种环保型的高分子聚合物杀菌消毒剂，可以无副作用地作用于提取液，很好地对提取液进行杀菌，减少提取液的变质；葡萄糖酸钠则是可以提高提取液中的水的稳定性，从而提高提取液整体的稳定性，而且糖醇钙锌液与葡萄糖酸钠的络合作用相配合，使得钙离子浓度适中，从而进一步提高胰蛋白酶的活性，提高提取液的对核酸的提取效率。
优选的，所述稳定剂按重量份包括以下组分：胎牛血清5-16份，乙二胺四乙酸15-36份，山梨酸醇14-22份。
通过采用上述技术方案，胎牛血清取自剖腹产的胎牛，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少，胎牛血清可以对免疫磁珠形成封闭，从而可以减少免疫磁珠受到环境中其他抗原的影响而降低与病毒抗原结合的效率；乙二胺四乙酸则作为抗凝剂，可以有效抑制提取液的凝结，山梨酸醇具有良好的保湿作用，也可以提高提取液的稳定性。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、由于本申请采用胰蛋白酶，由于胰蛋白酶与对细胞样品外侧的粘液进行分解，从而可以使得其他组分更好地作用于细胞样品，提高对细胞样品的提取效率。
2、本申请中的碎膜吸附剂可以吸附破碎的细胞膜，减少细胞膜对免疫磁珠工作的影响，同时，增溶剂可以促使提取液可以收纳更多的破碎细胞膜，使得细胞样品得到充分的破碎。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。
Figure BDA0002670917650000031
Figure BDA0002670917650000041
实施例一：
一种核酸提取液，原料按重量份包括以下组分：缓冲液95份，免疫磁珠12份，胰蛋白酶10份，磷酸二氢钾23份，磷酸氢二钠22份，细胞裂解液7份，碎膜吸附剂6份，增溶剂8份，杀菌剂3份，稳定剂5份。
其中：
缓冲液为Tris-HCl缓冲液，浓度为0.05mol/L。
碎膜吸附剂按重量份包括以下组分：磷脂酰胆碱5份，乙醇38份，蔗糖脂肪酸酯12份。
增溶剂按重量份包括以下组分：羟基化卵磷脂10份，十二烷基硫酸钠14份，异丁醇26份。
杀菌剂按重量份包括以下组分：葡萄糖酸钠20份，聚六亚甲基双胍10份。
稳定剂按重量份包括以下组分：胎牛血清5份，乙二胺四乙酸16，山梨酸醇14份。
核酸提取液的使用方法包括以下步骤：
将缓冲液、胰蛋白酶、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、细胞裂解液、碎膜吸附剂、增溶剂、杀菌剂和稳定剂混合均匀得到储备液；
将检测细胞样品放入储备液中后，以300瓦的功率震荡10分钟；向储备液中加入免疫磁珠，300瓦的功率的震荡条件下混合15分钟，即可对病毒进行富集，然后对富集病毒后的免疫磁珠进行蒸馏水洗涤，再将免疫磁珠和被吸附的病毒加入蒸馏水中，然后放置水浴锅中温育后磁分离，小心吸取上清液即可。
实施例二：
一种核酸提取液，原料按重量份包括以下组分：缓冲液100份，免疫磁珠10份，胰蛋白酶12份，磷酸二氢钾20份，磷酸氢二钠25份，细胞裂解液5份，碎膜吸附剂8份，增溶剂6份，杀菌剂5份，稳定剂4份。
其中：
缓冲液为Tris-HCl缓冲液，浓度为0.05mol/L。
碎膜吸附剂按重量份包括以下组分：磷脂酰胆碱7份，乙醇36份，蔗糖脂肪酸酯15份。
增溶剂按重量份包括以下组分：羟基化卵磷脂13份，十二烷基硫酸钠11份，异丁醇28份。
杀菌剂按重量份包括以下组分：葡萄糖酸钠25份，聚六亚甲基双胍8份。
稳定剂按重量份包括以下组分：胎牛血清7份，乙二胺四乙酸15份，山梨酸醇16份。
核酸提取液的使用方法包括以下步骤：
将缓冲液、胰蛋白酶、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、细胞裂解液、碎膜吸附剂、增溶剂、杀菌剂和稳定剂混合均匀得到储备液；
将检测细胞样品放入储备液中后，以300瓦的功率震荡10分钟；向储备液中加入免疫磁珠，300瓦的功率的震荡条件下混合15分钟，即可对病毒进行富集，然后对富集病毒后的免疫磁珠进行蒸馏水洗涤，再将免疫磁珠和被吸附的病毒加入蒸馏水中，然后放置水浴锅中温育后磁分离，小心吸取上清液即可。
实施例三：
一种核酸提取液，原料按重量份包括以下组分：缓冲液111份，免疫磁珠16份，胰蛋白酶18份，磷酸二氢钾29份，磷酸氢二钠30份，细胞裂解液9份，碎膜吸附剂8份，增溶剂11份，杀菌剂5份，稳定剂7份。
其中：
缓冲液为Tris-HCl缓冲液，浓度为0.05mol/L。
碎膜吸附剂按重量份包括以下组分：磷脂酰胆碱8份，乙醇44份，蔗糖脂肪酸酯18份。
增溶剂按重量份包括以下组分：羟基化卵磷脂17份，十二烷基硫酸钠18份，异丁醇31份。
杀菌剂按重量份包括以下组分：葡萄糖酸钠25份，聚六亚甲基双胍12份。
稳定剂按重量份包括以下组分：胎牛血清11份，乙二胺四乙酸25份，山梨酸醇17份。
核酸提取液的使用方法包括以下步骤：
将缓冲液、胰蛋白酶、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、细胞裂解液、碎膜吸附剂、增溶剂、杀菌剂和稳定剂混合均匀得到储备液；
将检测细胞样品放入储备液中后，以300瓦的功率震荡10分钟；向储备液中加入免疫磁珠，300瓦的功率的震荡条件下混合15分钟，即可对病毒进行富集，然后对富集病毒后的免疫磁珠进行蒸馏水洗涤，再将免疫磁珠和被吸附的病毒加入蒸馏水中，然后放置水浴锅中温育后磁分离，小心吸取上清液即可。
实施例四：
一种核酸提取液，原料按重量份包括以下组分：缓冲液121份，免疫磁珠18份，胰蛋白酶26份，磷酸二氢钾33份，磷酸氢二钠34份，细胞裂解液10份，碎膜吸附剂11份，增溶剂12份，杀菌剂6份，稳定剂7份。
其中：
缓冲液为Tris-HCl缓冲液，浓度为0.05mol/L。
碎膜吸附剂按重量份包括以下组分：磷脂酰胆碱11份，乙醇44份，蔗糖脂肪酸酯22份。
增溶剂按重量份包括以下组分：羟基化卵磷脂21份，十二烷基硫酸钠17份，异丁醇33份。
杀菌剂按重量份包括以下组分：葡萄糖酸钠36份，聚六亚甲基双胍14份。
稳定剂按重量份包括以下组分：胎牛血清16份，乙二胺四乙酸35份，山梨酸醇22份。
核酸提取液的使用方法包括以下步骤：
将缓冲液、胰蛋白酶、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、细胞裂解液、碎膜吸附剂、增溶剂、杀菌剂和稳定剂混合均匀得到储备液；
将检测细胞样品放入储备液中后，以300瓦的功率震荡10分钟；向储备液中加入免疫磁珠，300瓦的功率的震荡条件下混合15分钟，即可对病毒进行富集，然后对富集病毒后的免疫磁珠进行蒸馏水洗涤，再将免疫磁珠和被吸附的病毒加入蒸馏水中，然后放置水浴锅中温育后磁分离，小心吸取上清液即可。
实施例五：
一种核酸提取液，原料按重量份包括以下组分：缓冲液119份，免疫磁珠19份，胰蛋白酶25份，磷酸二氢钾36份，磷酸氢二钠32份，细胞裂解液12份，碎膜吸附剂10份，增溶剂14份，杀菌剂5份，稳定剂8份。
其中：
缓冲液为Tris-HCl缓冲液，浓度为0.05mol/L。
碎膜吸附剂按重量份包括以下组分：磷脂酰胆碱10份，乙醇48份，蔗糖脂肪酸酯10份。
增溶剂按重量份包括以下组分：羟基化卵磷脂20份，十二烷基硫酸钠19份，异丁醇30份。
杀菌剂按重量份包括以下组分：葡萄糖酸钠33份，聚六亚甲基双胍15份。
稳定剂按重量份包括以下组分：胎牛血清15份，乙二胺四乙酸36份，山梨酸醇20份。
核酸提取液的使用方法包括以下步骤：
将缓冲液、胰蛋白酶、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、细胞裂解液、碎膜吸附剂、增溶剂、杀菌剂和稳定剂混合均匀得到储备液；
将检测细胞样品放入储备液中后，以300瓦的功率震荡10分钟；向储备液中加入免疫磁珠，300瓦的功率的震荡条件下混合15分钟，即可对病毒进行富集，然后对富集病毒后的免疫磁珠进行蒸馏水洗涤，再将免疫磁珠和被吸附的病毒加入蒸馏水中，然后放置水浴锅中温育后磁分离，小心吸取上清液即可。
实施例六：
一种核酸提取液，原料按重量份包括以下组分：缓冲液105份，免疫磁珠14份，胰蛋白酶16份，磷酸二氢钾26份，磷酸氢二钠24份，细胞裂解液7份，碎膜吸附剂8份，增溶剂9份，杀菌剂4份，稳定剂5份。
其中：
缓冲液为Tris-HCl缓冲液，浓度为0.05mol/L。
碎膜吸附剂按重量份包括以下组分：磷脂酰胆碱10份，乙醇40份，蔗糖脂肪酸酯20份。
增溶剂按重量份包括以下组分：羟基化卵磷脂18份，十二烷基硫酸钠14份，异丁醇28份。
杀菌剂按重量份包括以下组分：葡萄糖酸钠28份，聚六亚甲基双胍12份。
稳定剂按重量份包括以下组分：胎牛血清10份，乙二胺四乙酸16份，山梨酸醇17份。
核酸提取液的使用方法包括以下步骤：
将缓冲液、胰蛋白酶、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、细胞裂解液、碎膜吸附剂、增溶剂、杀菌剂和稳定剂混合均匀得到储备液；
将检测细胞样品放入储备液中后，以300瓦的功率震荡10分钟；向储备液中加入免疫磁珠，300瓦的功率的震荡条件下混合15分钟，即可对病毒进行富集，然后对富集病毒后的免疫磁珠进行蒸馏水洗涤，再将免疫磁珠和被吸附的病毒加入蒸馏水中，然后放置水浴锅中温育后磁分离，小心吸取上清液即可。
实施例七：
一种核酸提取液，原料按重量份包括以下组分：缓冲液108份，免疫磁珠15份，胰蛋白酶17份，磷酸二氢钾28份，磷酸氢二钠25份，细胞裂解液8份，碎膜吸附剂9份，增溶剂10份，杀菌剂5份，稳定剂5份。
其中：
缓冲液为Tris-HCl缓冲液，浓度为0.05mol/L。
碎膜吸附剂按重量份包括以下组分：磷脂酰胆碱8份，乙醇38份，蔗糖脂肪酸酯16份。
增溶剂按重量份包括以下组分：羟基化卵磷脂18份，十二烷基硫酸钠16份，异丁醇28份。
杀菌剂按重量份包括以下组分：葡萄糖酸钠33份，聚六亚甲基双胍14份。
稳定剂按重量份包括以下组分：胎牛血清10份，乙二胺四乙酸26份，山梨酸醇17份。
核酸提取液的使用方法包括以下步骤：
将缓冲液、胰蛋白酶、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、细胞裂解液、碎膜吸附剂、增溶剂、杀菌剂和稳定剂混合均匀得到储备液；
将检测细胞样品放入储备液中后，以300瓦的功率震荡10分钟；向储备液中加入免疫磁珠，300瓦的功率的震荡条件下混合15分钟，即可对病毒进行富集，然后对富集病毒后的免疫磁珠进行蒸馏水洗涤，再将免疫磁珠和被吸附的病毒加入蒸馏水中，然后放置水浴锅中温育后磁分离，小心吸取上清液即可。
实施例八：
一种核酸提取液，原料按重量份包括以下组分：缓冲液110份，免疫磁珠16份，胰蛋白酶18份，磷酸二氢钾29份，磷酸氢二钠26份，细胞裂解液9份，碎膜吸附剂10份，增溶剂11份，杀菌剂5份，稳定剂7份。
其中：
缓冲液为Tris-HCl缓冲液，浓度为0.05mol/L。
碎膜吸附剂按重量份包括以下组分：磷脂酰胆碱8份，乙醇38份，蔗糖脂肪酸酯16份。
增溶剂按重量份包括以下组分：羟基化卵磷脂18份，十二烷基硫酸钠16份，异丁醇28份。
杀菌剂按重量份包括以下组分：葡萄糖酸钠33份，聚六亚甲基双胍14份。
稳定剂按重量份包括以下组分：胎牛血清10份，乙二胺四乙酸26份，山梨酸醇17份。
核酸提取液的使用方法包括以下步骤：
将缓冲液、胰蛋白酶、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、细胞裂解液、碎膜吸附剂、增溶剂、杀菌剂和稳定剂混合均匀得到储备液；
将检测细胞样品放入储备液中后，以300瓦的功率震荡10分钟；向储备液中加入免疫磁珠，300瓦的功率的震荡条件下混合15分钟，即可对病毒进行富集，然后对富集病毒后的免疫磁珠进行蒸馏水洗涤，再将免疫磁珠和被吸附的病毒加入蒸馏水中，然后放置水浴锅中温育后磁分离，小心吸取上清液即可。
实施例九：
与实施例一相比，碎膜吸附剂按重量份还包括以下组分：糖醇钙锌液5份。
实施例十：
与实施例一相比，碎膜吸附剂按重量份还包括以下组分：糖醇钙锌液7份。
实施例十一：
与实施例一相比，碎膜吸附剂按重量份还包括以下组分：糖醇钙锌液9份。
对比例一：
与实施例一相比，不添加胰蛋白酶。
对比例二：
与实施例一相比，不添加碎膜吸附剂。
对比例三：
与实施例一相比，碎膜吸附剂中不添加磷脂酰胆碱。
对比例四：
与实施例九相比，碎膜吸附剂中不添加蔗糖脂肪酸酯。
对比例五：
与实施例九相比，将碎膜吸附剂中的蔗糖脂肪酸酯替换成等量的失水山梨醇单油酸酯。
对比例六：
与实施例九相比，将增溶剂中的羟基化卵磷脂替换成等量的卵磷脂。
对比例七：
与实施例九相比，将增溶剂中的十二烷基硫酸钠替换成等量的十二烷基磺酸钠。
对比例八：
与实施例一相比，将稳定剂中的胎牛血清替换成等量的成牛血清。
性能检测：
对照组：
准备对照提取液，提取液的组分按重量份包括以下组分：缓冲液(缓冲液为Tris-HCl缓冲液，浓度为0.05mol/L)95份，磷酸二氢钾23份，磷酸氢二钠22份，细胞裂解液7份，免疫磁珠12份。
将缓冲液、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、细胞裂解液混合均匀得到储备液；
将检测细胞样品放入储备液中后，以300瓦的功率震荡10分钟；向储备液中加入免疫磁珠，300瓦的功率的震荡条件下混合15分钟，即可对病毒进行富集，然后对富集病毒后的免疫磁珠进行蒸馏水洗涤，再将免疫磁珠和被吸附的病毒加入蒸馏水中，然后放置水浴锅中温育后磁分离，小心吸取上清液，将上层清液转移至病毒保存液(上海泽叶生物有限公司,非冻型拭子病毒保存液)中，准备293T细胞(293T细胞提前一天种于孔板中)，用病毒保存液中的所有病毒感染293T细胞，感染2天后，在荧光显微镜下观察荧光蛋白(GFP)个数M1。
实验组，用与对照组同样的取样拭子取感染HPV病毒的宫颈细胞，细胞浓度为3×10-6个/m。
利用实施例一至实施例十一和对比例一至对比例八的提取液提取病毒核酸，并将最终的上层清液转移到与对照组相同的病毒保存液中，准备293T细胞(293T细胞提前一天种于孔板中)，用病毒保存液中的所有病毒感染293T细胞，感染2天后，在荧光显微镜下观察荧光蛋白(GFP)个数M2。
计算实验组相对于对照组的病毒提取倍数N＝M2÷M1。
表1
Figure BDA0002670917650000111
表2
Figure BDA0002670917650000112
由实施例一至实施例八的检测结果可知，本申请的核酸提取液具有良好的提取效率。
由对比例一的检测结果可知，胰蛋白酶的加入，通过分解粘液，可以进一步提高对核酸的提取效率。
由对比例二至对比例五的检测结果可知，本申请中碎膜吸附剂的加入，可以进一步提高对核酸的提取效率。
由对比例六和对比例七的检测结果可知，本申请中增溶剂的加入，可以提高对核酸的提取效率。
由对比例八的检测结果可知，本申请稳定剂中胎牛血清的加入，可以进一步提高对核酸的提取效率。
由实施例九至实施例十一的检测结果可知，本申请碎膜吸附剂中糖醇钙锌液的加入，可以进一步提高对核酸的提取效率。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (8)

1.一种核酸提取液，其特征在于：原料按重量份包括以下组分：缓冲液95-121份，免疫磁珠10-19份，胰蛋白酶10-26份，磷酸二氢钾20-36份，磷酸氢二钠22-34份，细胞裂解液5-12份，碎膜吸附剂6-11份，增溶剂6-14份，杀菌剂3-6份，稳定剂4-8份。
2.根据权利要求1所述的一种核酸提取液，其特征在于：原料按重量份包括以下组分：缓冲液105-110份，免疫磁珠14-16份，胰蛋白酶16-18份，磷酸二氢钾26-29份，磷酸氢二钠24-26份，细胞裂解液7-9份，碎膜吸附剂8-10份，增溶剂9-11份，杀菌剂4-5份，稳定剂5-7份。
3.根据权利要求2所述的一种核酸提取液，其特征在于：原料按重量份包括以下组分：缓冲液108份，免疫磁珠15份，胰蛋白酶17份，磷酸二氢钾28份，磷酸氢二钠25份，细胞裂解液8份，碎膜吸附剂9份，增溶剂10份，杀菌剂5份，稳定剂5份。
4.根据权利要求1所述的一种核酸提取液，其特征在于：所述碎膜吸附剂按重量份包括以下组分：磷脂酰胆碱5-11份，乙醇36-48份，蔗糖脂肪酸酯12-22份。
5.根据权利要求4所述的一种核酸提取液，其特征在于：所述碎膜吸附剂按重量份还包括以下组分：糖醇钙锌液5-9份。
6.根据权利要求1所述的一种核酸提取液，其特征在于：所述增溶剂按重量份包括以下组分：羟基化卵磷脂10-21份，十二烷基硫酸钠11-19份，异丁醇26-33份。
7.根据权利要求1所述的一种核酸提取液，其特征在于：所述杀菌剂按重量份包括以下组分：葡萄糖酸钠20-36份，聚六亚甲基双胍8-15份。
8.根据权利要求1所述的一种核酸提取液，其特征在于：所述稳定剂按重量份包括以下组分：胎牛血清5-16份，乙二胺四乙酸15-36份，山梨酸醇14-22份。
CN202010932976.8A 2020-09-08 2020-09-08 一种核酸提取液 Pending CN111961664A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010932976.8A CN111961664A (zh) 2020-09-08 2020-09-08 一种核酸提取液

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010932976.8A CN111961664A (zh) 2020-09-08 2020-09-08 一种核酸提取液

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111961664A true CN111961664A (zh) 2020-11-20

Family

ID=73392536

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010932976.8A Pending CN111961664A (zh) 2020-09-08 2020-09-08 一种核酸提取液

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111961664A (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0198474A1 (en) * 1985-04-15 1986-10-22 SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. Hepatitis B surface antigen formed by recombinant DNA techniques, vaccines, diagnostics, cell lines and methods of forming same
CN111424031A (zh) * 2020-03-20 2020-07-17 浙江安诺优达生物科技有限公司 适于冠状病毒提取、纯化和保存的复合缓冲液和试剂盒
CN111449054A (zh) * 2020-05-21 2020-07-28 南京健邦锦源医疗科技有限公司 一种新型细胞保存液及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0198474A1 (en) * 1985-04-15 1986-10-22 SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. Hepatitis B surface antigen formed by recombinant DNA techniques, vaccines, diagnostics, cell lines and methods of forming same
CN111424031A (zh) * 2020-03-20 2020-07-17 浙江安诺优达生物科技有限公司 适于冠状病毒提取、纯化和保存的复合缓冲液和试剂盒
CN111449054A (zh) * 2020-05-21 2020-07-28 南京健邦锦源医疗科技有限公司 一种新型细胞保存液及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李妮妮等: "聚六亚甲基胍类消毒剂性能及其应用研究进展", 日用化学品科学, vol. 38, no. 9, pages 37 *
黄晟;姜敬哲;王江勇;许新;: "基于病毒宏基因组技术侦测牡蛎体内病毒", 南方水产科学, no. 05, pages 40 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5460866B2 (ja) 敗血症の質量分析法診断
Moe et al. Plaque assay for Ebola virus
JP6533468B2 (ja) 目的の核酸の特異的な単離方法
CN111450236B (zh) 一种用于阻断冠状病毒感染的制剂
JP2023539822A (ja) 血液培養物から細菌を単離するための血液細胞溶解薬
CN111088319B (zh) 一种灭活型病毒样本rna保存液及其制备方法
AU2013225974A1 (en) Formulations and process for isolating viable microorganism from positive blood cultures
CN112779316A (zh) 一种灭活型病毒保存液及其制备方法
JPH09176043A (ja) 魚類用のイリドウイルス感染症ワクチンと診断剤並びにこれ等の製法
CN112931487B (zh) 一种病毒保存液及其应用
CN111961664A (zh) 一种核酸提取液
CN112608978A (zh) 一种新型核酸免提取保存液
CN102242173B (zh) 一种石斑鱼虹彩病毒囊膜蛋白的提取方法
CN112725293B (zh) 一种双水相萃取浓缩纯化猪塞内卡病毒粒子的方法
CN111500460B (zh) 一种用于血液中微生物快速纯化和富集的提取液及纯化和富集方法与应用
Levine et al. Late stage synchronization of respiratory syncytial virus replication
IL23187A (en) Production of vaccines
CN116590283B (zh) 一种细胞结合增强剂和去除人源游离核酸的方法
CN114306584B (zh) 蛋白酶k及其复合酶在制备病毒抑制剂中的应用
CN111944871B (zh) 一种磁珠病毒提取液及其使用方法
RU2441666C1 (ru) Комплексный антиген вируса кори, используемый в качестве компонента иммуноферментной тест-системы для диагностики антител к вирусу кори
CN111869658A (zh) 一种灭活病毒保存液及其制备方法
CN117025553A (zh) 一种在非超低温下保持病毒活力的病毒保存液及其制备方法
CN116694491A (zh) 幽门螺杆菌运送培养基及其制备方法和应用
WO2023052798A1 (en) New virus transport medium

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination