CN111961655B - 口蹄疫病毒样颗粒、制备方法、疫苗组合物和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种口蹄疫病毒样颗粒、制备方法、疫苗组合物和应用。本发明的口蹄疫病毒样颗粒是由口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3、VP1构成，结构稳定，不仅温度稳定性及酸性环境稳定性增加，而且制备的疫苗组合物能快速形成特异性抗体，免疫持续期显著增长，能维持更长时间的免疫保护。

Description

口蹄疫病毒样颗粒、制备方法、疫苗组合物和应用
本申请为专利申请201510185811.8的分案申请，原案发明名称为“口蹄疫病毒样颗粒、制备方法、疫苗组合物和应用”，原案申请日为2015年4月17日。
技术领域
本发明涉及兽用生物制品领域，更具体地，本发明涉及口蹄疫病毒样颗粒、制备方法、由该病毒样颗粒制备的疫苗组合物和应用。
背景技术
口蹄疫(FMD)为一种急性、高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疾病，是哺乳类动物中感染性最强的疾病，其中偶蹄类动物染病更会造成全球重大的经济损失。遭受口蹄疫危害的动物包括牛、羊、山羊和猪。致病因子，口蹄疫病毒(FMDV)，是小核糖核酸病毒属家族的一种口疮病毒。该病毒分为7个血清型(A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2、和SAT3型)，其中我国主要流行O型、Asia1和A型口蹄疫病毒。疫苗免疫是控制此病、保护家畜免受危害的有效措施。
病毒样颗粒(VLPs)是一种在体外和/或体内表达时能够自主包装成病毒外壳结构的类病毒粒子，它们是具有病毒的相似外壳结构但不具有病毒复制能力的假病毒。VLPs疫苗能有效地激发机体产生抗感染，抗肿瘤免疫，基于病毒样颗粒设计的疫苗是一种较为理想的疫苗形式。目前研究较多的口蹄疫病毒样颗粒是由口蹄疫结构蛋白VP0、VP3和VP1构成，然而，利用该方法制备的口蹄疫病毒样颗粒结构不稳定，活性降低，不能很好的诱导机体产生有效的免疫反应。
此外，口蹄疫病毒易发生变异，尤其是我国流行的O型口蹄疫病毒CATHAY型变异株，其抗原发生较大变异，原有疫苗对其保护力明显下降，加之自身免疫原性较弱，不能诱导动物机体产生足够的免疫力。因此，筛选理想的毒株序列制备病毒样颗粒是当务之急，也符合国家提出的有效防控重大动物疫病，保障畜牧业健康可持续发展的需要。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种抗口蹄疫的疫苗组合物，所述疫苗组合物包含O型口蹄疫病毒样颗粒和/或亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒和/或A型口蹄疫病毒样颗粒和佐剂，其中，O型口蹄疫病毒样颗粒由O型口蹄疫病毒结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒由亚洲1型口蹄疫病毒结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，A型口蹄疫病毒样颗粒由A型口蹄疫病毒结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成。
优选地，本发明提供的O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ ID NO.1，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.2，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.3，VP1氨基酸序列为SEQ IDNO.4。
优选地，本发明提供的O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ ID NO.5，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.6，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.7，VP1氨基酸序列为SEQ IDNO.8。
优选地，本发明提供的O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ ID NO.9，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.10，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.11，VP1氨基酸序列为SEQ IDNO.12。
优选地，本发明提供的O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ IDNO.13，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.14，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.15，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.16。
优选地，本发明提供的O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ IDNO.17，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.18，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.19，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.20。
优选地，本发明提供的亚洲1型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ IDNO.21，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.22，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.23，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.24。
优选地，本发明提供的A型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ IDNO.25，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.26，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.27，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.28。
优选地，本发明提供的A型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ IDNO.29，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.30，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.31，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.32。
优选地，本发明提供的A型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ IDNO.33，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.34，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.35，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.36。
作为本发明的一种实施方式，本发明提供的预防和/或治疗FMDV感染的疫苗组合物包含氨基酸序列为SEQ ID NO.1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36所示的变体。
“变体”旨在表示基本上类似序列。“变体”蛋白旨在表示通过在天然蛋白中的一个或更多位点的一个或更多氨基酸的缺失或添加，和/或天然蛋白中的一个或更多位点的一个或更多氨基酸的取代而源于天然蛋白的蛋白。本发明包括的变体蛋白有生物学活性，即，它们有引发免疫应答的能力，能对FMDV攻击具有保护性反应的能力。
变体包括等位基因变体。术语"等位基因变体"指称含有导致蛋白的氨基酸序列变化及在天然的群(例如，病毒物种或变种)之内存在的多态性的多核苷酸或多肽。该天然的等位基因变异可一般导致多核苷酸或多肽的1％～5％变异。等位基因变体可通过在许多不同物种中测序目的核酸序列来鉴定，其可通过使用鉴定那些物种中的相同的遗传座位的杂交探针来容易进行。任何和全部该核酸变异及得到的氨基酸多态性或是天然的等位基因变异的结果且不改变目的基因的功能活性的变异旨在本发明的范围之内。
术语“预防”指通过其与FMDV相关的感染或疾病的症状被阻断或延迟；术语“治疗”指通过与FMDV相关的感染或疾病的症状被缓和或完全消除的过程。
术语“保护性反应”意为在动物中预防FMDV相关疾病或由FMDV导致的感染的发作或减轻存在的这样的疾病的严重性。
本发明涉及的FMDV蛋白，其有利地激发动物中的保护性反应。具体地，本发明实施方式的蛋白序列包含与其功能衍生物基本相同的氨基酸序列。
“基本上相同”可以理解为本发明的蛋白优选地具有这样的氨基酸序列，其与SEQID NO.1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36中所示的序列的部分或全部具有至少70％同源性，或甚至优选地80％同源性，或甚至更优选地90％同源性，或最优选地95％同源性。
在本文中术语“同源性”还包括与参比序列相同或类似，同时提供任何氨基酸的简单替换/修饰。可以用BLAST-P(基本局部排比检索工具)，本领域技术人员公知的程序进行该方面的同源性检索。对于相应的核酸序列，同源性涉及在本领域中已知的BLASTX和BLASTN程序。
术语“佐剂”指加入到本发明的组合物中以增加组合物的免疫原性的物质。已知的佐剂包括，但不限于：(1)氢氧化铝，皂苷(Saponine)(例如QuilA)，阿夫立定，DDA，(2)丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物，顺丁烯二酸酐和链烯基衍生物的聚合物，或(3)疫苗可以以水包油，油包水或水包油包水乳剂形式制成。
尤其是，乳剂可以基于轻液体石蜡油、类异戊二烯油，例如角鲨烷或角鲨烯；烯烃，特别是异丁烯或癸烯低聚化产生的油，带直链烷基的酸或醇形成的酯，更特别是植物油，油酸乙基酯，丙二醇二(辛酸酯/癸酸酯)，甘油三(辛酸酯/癸酸酯)，丙二醇二油酸酯；分支脂肪酸酯或醇的酯，特别是异硬脂酸酯。油与乳化剂一起使用形成乳剂。乳化剂优选非离子表面活性剂，特别是聚氧乙烯化脂肪酸(例如油酸)，脱水山梨糖醇、甘露醇(例如脱水甘露醇油酸酯)、甘油、聚甘油、丙二醇和可选地乙氧基化的油酸、异硬脂酸、蓖麻油酸、羟基硬脂酸形成的酯，脂肪醇和多元醇(例如油醇)的醚，聚氧丙稀-聚氧乙烯嵌段共聚物，特别是PluronicR，尤其是L121(参照Hunter等，1995，“The Theory and Practical ApplicationofAdjuvants”(Steward-Tull，D.E.S主编)John Wiley andSons，NY，51-94；Todd等，Vaccine，1997，15，564-570)。
特别地，丙烯酸或甲基丙烯酸聚合物通过糖或多元醇的聚链烯基醚交联。这些化合物被称作卡波姆。
优选地，本发明选用佐剂ISA 206(法国赛比克公司)，制备水包油包水乳剂。
在最终疫苗组合物中，佐剂的浓度范围是从10％到60％V/V，优选从30％到50％V/V，更优选50％V/V。
在一个实施方式中，本发明提供一种预防和/或治疗FMDV感染的疫苗组合物，由O型口蹄疫病毒样颗粒及佐剂组成，所述病毒样颗粒由O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中VP4的氨基酸序列为SEQ ID NO.1，VP2的氨基酸序列为SEQ ID NO.2，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.3，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.4。
在一个实施方式中，本发明提供一种预防和/或治疗FMDV感染的疫苗组合物，由O型口蹄疫病毒样颗粒及佐剂组成，所述病毒样颗粒由O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中VP4的氨基酸序列为SEQ ID NO.5，VP2的氨基酸序列为SEQ ID NO.6，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.7，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.8。
在一个实施方式中，本发明提供一种预防和/或治疗FMDV感染的疫苗组合物，由O型口蹄疫病毒样颗粒及佐剂组成，所述病毒样颗粒由O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中VP4的氨基酸序列为SEQ ID NO.9，VP2的氨基酸序列为SEQ ID NO.10，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.11，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.12。
在一个实施方式中，本发明提供一种预防和/或治疗FMDV感染的疫苗组合物，由O型口蹄疫病毒样颗粒及佐剂组成，所述病毒样颗粒由O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中VP4的氨基酸序列为SEQ ID NO.13，VP2的氨基酸序列为SEQ ID NO.14，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.15，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.16。
在一个实施方式中，本发明提供一种预防和/或治疗FMDV感染的疫苗组合物，由O型口蹄疫病毒样颗粒及佐剂组成，所述病毒样颗粒由O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中VP4的氨基酸序列为SEQ ID NO.17，VP2的氨基酸序列为SEQ ID NO.18，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.19，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.20。
在一个实施方式中，本发明提供一种预防和/或治疗FMDV感染的疫苗组合物，由亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒及佐剂组成，所述病毒样颗粒由亚洲1型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中VP4的氨基酸序列为SEQ ID NO.21，VP2的氨基酸序列为SEQID NO.22，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.23，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.24。
在一个实施方式中，本发明提供一种预防和/或治疗FMDV感染的疫苗组合物，由A型口蹄疫病毒样颗粒及佐剂组成，所述病毒样颗粒由A型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中VP4的氨基酸序列为SEQ ID NO.25，VP2的氨基酸序列为SEQ ID NO.26，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.27，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.28。
在一个实施方式中，本发明提供一种预防和/或治疗FMDV感染的疫苗组合物，由A型口蹄疫病毒样颗粒及佐剂组成，所述病毒样颗粒由A型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中VP4的氨基酸序列为SEQ ID NO.29，VP2的氨基酸序列为SEQ ID NO.30，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.31，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.32。
在一个实施方式中，本发明提供一种预防和/或治疗FMDV感染的疫苗组合物，由A型口蹄疫病毒样颗粒及佐剂组成，所述病毒样颗粒由A型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中VP4的氨基酸序列为SEQ ID NO.33，VP2的氨基酸序列为SEQ ID NO.34，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.35，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.36。
在一个实施方式中，本发明提供一种预防和/或治疗FMDV感染的疫苗组合物，由O型口蹄疫病毒样颗粒、亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒、A型口蹄疫病毒样颗粒和佐剂组成；
所述O型口蹄疫病毒样颗粒由O型口蹄疫病毒结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中VP4的氨基酸序列为SEQ ID NO.1，VP2的氨基酸序列为SEQ ID NO.2，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.3，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.4；
所述亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒由亚洲1型口蹄疫病毒结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中VP4的氨基酸序列为SEQ ID NO.21，VP2的氨基酸序列为SEQ ID NO.22，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.23，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.24；
所述A型口蹄疫病毒样颗粒由A型口蹄疫病毒结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中VP4的氨基酸序列为SEQ ID NO.25，VP2的氨基酸序列为SEQ ID NO.26，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.27，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.28。
本发明的另一个目的是提供一种预防和/或治疗FMDV感染的疫苗组合物的制备方法，包括：
(1)制备口蹄疫病毒样颗粒的步骤；
(2)加入佐剂，乳化的步骤。
本发明疫苗组合物还可以进一步将其他的试剂加入到本发明的组合物。例如，本发明的组合物还可以包含试剂，如：药物，免疫刺激剂(如：α-干扰素、β-干扰素、γ-干扰素、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和白介素2(IL2))，抗氧化剂，表面活性剂，着色剂，挥发性油，缓冲剂，分散剂，推进剂和防腐剂。为了制备这样的组合物，可以使用本领域公知的方法。
本发明的组合物的成分或组分的量优选地是治疗有效量。所述治疗有效量是指在组合物施用的宿主中发挥它们的免疫学作用而不导致过度副作用所必需量。所用的成分和待施用的组合物的精确的量将根据因素如治疗的疾病的类型，待治疗的动物的类型和年龄，施用的方式，以及组合物中的其它成分而变化。
优选地，本发明疫苗组合物每种病毒样颗粒含量为50-150μg/ml。
更优选地，所述疫苗组合物每种病毒样颗粒含量为100μg/ml。
本发明具有以下突出的优点：
(1)本发明提供的疫苗组合物制备安全，无减毒疫苗、灭活疫苗可能引起的致病作用；
(2)本发明提供的病毒样颗粒结构，口蹄疫的表位被有效呈递在病毒样颗粒的表面，可以很好地刺激B、T细胞，引起免疫应答；
(3)本发明提供病毒样颗粒疫苗的结构在体内血清中的半衰期长，稳定性好，有效期长，持续刺激免疫反应，尤其是O型口蹄疫病毒Ⅰ、Ⅱ病毒样颗粒，为CATHAY型变异株，解决了CATHAY型变异株一直以来免疫原性较差的问题，能很好地对机体提供免疫保护，可以有效应对CATHAY型变异株的侵袭；
(4)本发明提供的病毒样颗粒结构稳定，不仅温度稳定性及酸性环境稳定性增加，而且意外发现，本发明提供的病毒样颗粒的疫苗组合物免疫持续期比现有由结构蛋白VP0、VP3、VP1构成的病毒样颗粒的疫苗组合物显著增长，能维持更长时间的免疫保护。
序列表中：
序列1为O型口蹄疫病毒Ⅰ VP4蛋白氨基酸序列；
序列2为O型口蹄疫病毒Ⅰ VP2蛋白氨基酸序列；
序列3为O型口蹄疫病毒Ⅰ VP3蛋白氨基酸序列；
序列4为O型口蹄疫病毒Ⅰ VP1蛋白氨基酸序列；
序列5为O型口蹄疫病毒ⅡVP4蛋白氨基酸序列；
序列6为O型口蹄疫病毒ⅡVP2蛋白氨基酸序列；
序列7为O型口蹄疫病毒ⅡVP3蛋白氨基酸序列；
序列8为O型口蹄疫病毒ⅡVP1蛋白氨基酸序列；
序列9为O型口蹄疫病毒ⅢVP4蛋白氨基酸序列；
序列10为O型口蹄疫病毒ⅢVP2蛋白氨基酸序列；
序列11为O型口蹄疫病毒ⅢVP3蛋白氨基酸序列；
序列12为O型口蹄疫病毒ⅢVP1蛋白氨基酸序列；
序列13为O型口蹄疫病毒ⅣVP4蛋白氨基酸序列；
序列14为O型口蹄疫病毒ⅣVP2蛋白氨基酸序列；
序列15为O型口蹄疫病毒ⅣVP3蛋白氨基酸序列；
序列16为O型口蹄疫病毒ⅣVP1蛋白氨基酸序列；
序列17为O型口蹄疫病毒ⅤVP4蛋白氨基酸序列；
序列18为O型口蹄疫病毒ⅤVP2蛋白氨基酸序列；
序列19为O型口蹄疫病毒ⅤVP3蛋白氨基酸序列；
序列20为O型口蹄疫病毒ⅤVP1蛋白氨基酸序列；
序列21为亚洲1型口蹄疫病毒VP4蛋白氨基酸序列；
序列22为亚洲1型口蹄疫病毒VP2蛋白氨基酸序列；
序列23为亚洲1型口蹄疫病毒VP3蛋白氨基酸序列；
序列24为亚洲1型口蹄疫病毒VP1蛋白氨基酸序列；
序列25为A型口蹄疫病毒Ⅰ VP4蛋白氨基酸序列；
序列26为A型口蹄疫病毒Ⅰ VP2蛋白氨基酸序列；
序列27为A型口蹄疫病毒Ⅰ VP3蛋白氨基酸序列；
序列28为A型口蹄疫病毒Ⅰ VP1蛋白氨基酸序列；
序列29为A型口蹄疫病毒ⅡVP4蛋白氨基酸序列；
序列30为A型口蹄疫病毒ⅡVP2蛋白氨基酸序列；
序列31为A型口蹄疫病毒ⅡVP3蛋白氨基酸序列；
序列32为A型口蹄疫病毒ⅡVP1蛋白氨基酸序列；
序列33为A型口蹄疫病毒ⅢVP4蛋白氨基酸序列；
序列34为A型口蹄疫病毒ⅢVP2蛋白氨基酸序列；
序列35为A型口蹄疫病毒ⅢVP3蛋白氨基酸序列；
序列36为A型口蹄疫病毒ⅢVP1蛋白氨基酸序列。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
本发明实施例中所用PBS缓冲液如无特别说明，均采用pH7.4的PBS，配制方法：NaCl 8.0g，KCl 0.2g，KH2PO4 0.24g，Na2HPO4·12H2O 3.628g，溶于800ml蒸馏水中，用盐酸调pH值为7.4，蒸馏水定容至1000ml，121℃高压灭菌20min，室温保存。
实施例1
O型口蹄疫病毒Ⅰ病毒样颗粒(VP4、VP2、VP3、VP1)的制备
1.用作模板的口蹄疫基因片段的制备
将序列SEQ ID NO.1、2、3、4所示的O型口蹄疫病毒Ⅰ VP4、VP2、VP3、VP1氨基酸序列所示基因全长由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。所合成的基因片段全长分别为255bp、654bp、660bp、639bp。在此人工合成的口蹄疫基因片段的基础上制备本发明的口蹄疫基因的模板。
2.口蹄疫基因表达载体的构建
以前一步骤所合成的口蹄疫基因模板，分别设计引物(见表1)，扩增获得O型口蹄疫病毒Ⅰ VP4、VP2、VP3、VP1基因。
表1 O型口蹄疫病毒Ⅰ引物表
Figure BDA0002621434100000111
在PCR仪上按如下条件(见表2)进行PCR反应。
表2 PCR扩增条件
Figure BDA0002621434100000112
分别将扩增得到的VP4、VP2、VP3、VP1基因DNA片段分别与pBLUE-T Vector载体连接，将连接成功的重组克隆分别经BamH I/EcoR I、PstI/XbaI、Sac I/Sal I、Hind III/XhoI酶切消化后得到的片段，与经过相同的酶切的pET 28a载体连接，得到插入O型口蹄疫病毒Ⅰ VP4、VP2、VP3、VP1基因的阳性克隆pET28a-Ⅰ-VP4-VP2-VP3-VP1。将连接好的质粒转化到用CaCl2制备的DH5α感受态细胞中，涂布于卡那霉素抗性的固体LB培养基上，等单克隆菌落清晰可见时，挑取单克隆至含有卡那霉素的LB液体培养基中，37℃230转/分钟，培养12小时过夜，提取质粒。
3.将上述的插入O型口蹄疫病毒Ⅰ VP4、VP2、VP3、VP1基因的阳性克隆pET28a-Ⅰ-VP4-VP2-VP3-VP1转化40μl以氯化钙法制备的感受态大肠杆菌BL21(DE3)，涂布于卡那霉素抗性的固体LB培养基，37℃静置培养10-12小时至单菌落清晰可见时，挑取单克隆至含4ml卡那霉素抗性的液体LB培养基的试管，37℃，230转/分振荡培养12小时，从中取1ml菌液于-80℃冻干保存。
4.蛋白的大量表达
从-80℃中取出带有重组质粒pET28a-Ⅰ-VP4-VP2-VP3-VP1的大肠杆菌菌种接种卡那霉素抗性的50ml LB液体培养基，37℃，230转/分振荡培养12小时后，转接入1L LB液体培养基中，37℃大量表达，等OD600值达到0.6后，加入0.1mM的IPTG，诱导蛋白表达，20℃过夜。
使用发酵罐为上海保兴生物公司50L发酵罐，配制30L培养基装入发酵罐，121℃灭菌30分钟。第二天将5L种子液接入发酵罐，培养菌液浓度达到OD600大约10左右时将培养温度降至25℃，加入4gIPTG诱导培养12小时。终浓度大约为40左右(OD600)下罐，离心收集菌体大约2.5kg。
按照1g菌体对应10ml裂解液的比例重悬菌体，采用均质机以800bar压力破碎菌体4次。13500rpm，离心40min，留取上清，通过15％SDS-PAGE电泳检测，此时上清中的四个串联表达的蛋白表达量在20％左右。采用硫酸铵分级沉淀法进行蛋白粗纯，随后进行色谱纯化，纯化后的蛋白经SDS-PAGE电泳，显示目的蛋白均得到了纯化和富集。
通过磷钨酸负染及电镜观察可见口蹄疫蛋白形成了类病毒样颗粒，并且形成的类病毒样颗粒饱满，组装效率高，没有聚集。通过将口蹄疫病毒样颗粒置于4℃下放置4个月，再通过磷钨酸负染及电镜观察可见病毒样颗粒依旧颗粒饱满，无聚集现象。说明本发明筛选的序列按照四段表达制备的口蹄疫蛋白形成了稳定的类病毒样颗粒。
实施例2
O型口蹄疫病毒Ⅰ病毒样颗粒(VP0、VP3、VP1)的制备
参照实施例1的方法，按照O型口蹄疫病毒Ⅰ结构蛋白VP0、VP3、VP1基因序列分别设计引物串联表达制备病毒样颗粒。将收集到的菌体按照1g菌体对应10ml裂解液的比例重悬，采用均质机以800bar压力破碎菌体4次。13500rpm，离心40min，留取上清，通过15％SDS-PAGE电泳检测，此时上清中的三个串联表达的蛋白表达量在20％左右。采用硫酸铵分级沉淀法进行蛋白粗纯，随后进行色谱纯化，纯化后的蛋白经SDS-PAGE电泳，显示目的蛋白均得到了纯化和富集。
实施例3
O型口蹄疫病毒Ⅰ病毒样颗粒稳定性比较试验
将实施例1及实施例2制备的病毒样颗粒分别置于50℃水浴中1小时及pH6.0条件下处理30分钟，然后在电镜下观察。结果显示四段串联表达的病毒样颗粒无论是在热环境下还是在酸性条件下，其病毒样颗粒大小均匀，呈空心形态；而三段串联表达的病毒样颗粒出现聚团，颗粒大小不一。具体结果见表3。
表3口蹄疫病毒样颗粒稳定性检验
类别 VP4、VP2、VP3、VP1 VP0、VP3、VP1
50℃水浴1h 稳定 不稳定
pH6.0处理30min 稳定 不稳定
证明了本发明提供的四段串联表达(VP4、VP2、VP3、VP1)的病毒样颗粒结构的稳定性较三段串联表达(VP0、VP3、VP1)好，其有利地保障了疫苗组合物在不同环境下结构的稳定性，有利于储存与运输，保证了疫苗性状的稳定性。
实施例4
抗口蹄疫(O型口蹄疫病毒Ⅰ VP4、VP2、VP3、VP1)的疫苗组合物的制备
取实施例1制备的病毒样颗粒缓缓加入到佐剂中，加的过程不断用转速为800rpm乳化机搅拌12min，混匀，4℃保存，即为抗口蹄疫的疫苗组合物。具体配比见表4。适用于本发明的佐剂可以为本领域技术人员公知的佐剂。在本实施例中，选用佐剂ISA 206(法国赛比克公司)。
表4抗口蹄疫的疫苗组合物成分配比
疫苗1 疫苗2 疫苗3
O型口蹄疫病毒Ⅰ(μg/ml) 50 100 150
206佐剂(V/V％) 50％ 50％ 50％
实施例5
抗口蹄疫(O型口蹄疫病毒Ⅰ VP4、VP2、VP3、VP1)的疫苗组合物的免疫原性试验
1.免疫程序
利用口蹄疫O型抗体ELISA检测试剂盒筛选抗体均为阴性的6月龄的健康黄牛20头，随机分为4组，每组5头。1-3组分别为本发明实施例4制备的疫苗1、疫苗2、疫苗3免疫组，第4组为PBS对照组。免疫组免疫途径为颈部肌肉注射1ml，PBS对照组免疫等量的PBS。疫苗免疫前每头牛采血，免疫后每周采血，连续采血至免疫后21日。
2.抗体水平检测
对采集的血清使用口蹄疫O型抗体ELISA检测试剂盒进行相关抗体的检测。结果显示，疫苗免疫前所有牛只的抗体均为阴性，免疫后7天不同疫苗免疫的牛只抗体水平均开始上升，免疫后21天均能达到1：128以上。PBS对照组牛只抗体为阴性，无变化。具体结果见表5。
表5不同疫苗免疫牛只后口蹄疫ELISA抗体水平
Figure BDA0002621434100000141
证明本发明制备的病毒样颗粒能快速形成高水平的特异性抗体，解决了O型口蹄疫免疫原性较差的问题，尤其是CATHAY型变异株免疫原性较差的问题，能对机体起到很好的免疫保护作用。
实施例6
抗口蹄疫(O型口蹄疫病毒Ⅰ VP0、VP3、VP1)的疫苗组合物的制备
取实施例2制备的病毒样颗粒，按照实施例4的制备方法制备抗口蹄疫的疫苗组合物。具体配比见表6。
表6抗口蹄疫的疫苗组合物的成分配比
疫苗A
O型口蹄疫病毒Ⅰ(μg/ml) 100
206佐剂(V/V％) 50％
实施例7
抗口蹄疫(O型口蹄疫病毒Ⅰ)的疫苗组合物的免疫持续期对比试验
1.免疫程序
利用口蹄疫O型抗体ELISA检测试剂盒筛选抗体阴性的6月龄的健康黄牛15头，随机分为3组，每组5头。第1组为本发明实施例4制备的疫苗2免疫组，第2组为本发明实施例6制备的疫苗A免疫组，第3组为PBS对照组。免疫组免疫途径为颈部肌肉注射1ml，PBS对照组免疫等量的PBS。疫苗免疫前每头牛采血，免疫后每月采血，连续采血至免疫后6个月。
2.抗体水平检测
对采集的血清分别使用口蹄疫O型抗体ELISA检测试剂盒进行抗体的检测。结果显示，疫苗免疫前所有牛只的抗体均为阴性，免疫后4个月疫苗A免疫的牛只抗体水平均开始下降，而疫苗2依然保持较高的抗体水平。PBS对照组牛只抗体为阴性，无变化。详细抗体检测情况见表7。
表7免疫持续期对比试验ELISA抗体水平
Figure BDA0002621434100000151
Figure BDA0002621434100000161
证明了本发明提供的病毒样颗粒(VP4、VP2、VP3、VP1)结构，提高了稳定性，不仅温度稳定性及酸性环境稳定性增加，而且意外发现，四段串联表达的病毒样颗粒的疫苗组合物免疫持续期显著增长，能维持更长时间的免疫保护。
实施例8
亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒(VP4、VP2、VP3、VP1)的制备
将序列SEQ ID NO.21、22、23、24所示的亚洲1型口蹄疫病毒VP4、VP2、VP3、VP1氨基酸序列所示基因按照实施例1的方法分别设计引物串联表达制备病毒样颗粒。
通过磷钨酸负染及电镜观察可见口蹄疫蛋白形成了类病毒样颗粒，并且形成的类病毒样颗粒饱满，组装效率高，没有聚集。通过将口蹄疫病毒样颗粒置于4℃下放置4个月，再通过磷钨酸负染及电镜观察可见病毒样颗粒依旧颗粒饱满，无聚集现象。说明本发明筛选的序列按照四段表达制备的口蹄疫蛋白形成了稳定的类病毒样颗粒。
实施例9
亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒(VP0、VP3、VP1)的制备
参照实施例1的方法，按照亚洲1型口蹄疫病毒结构蛋白VP0、VP3、VP1基因序列分别设计引物串联表达制备病毒样颗粒。
实施例10
亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒稳定性比较试验
将实施例8及实施例9制备的病毒样颗粒分别置于50℃水浴中1小时及pH6.0条件下处理30分钟，然后在电镜下观察。结果显示四段串联表达的病毒样颗粒无论是在热环境下还是在酸性条件下，其病毒样颗粒大小均匀，呈空心形态；而三段串联表达的病毒样颗粒出现聚团，颗粒大小不一。具体结果见表8。
表8口蹄疫病毒样颗粒稳定性检验
类别 VP4、VP2、VP3、VP1 VP0、VP3、VP1
50℃水浴1h 稳定 不稳定
pH6.0处理30min 稳定 不稳定
证明了本发明提供的四段串联表达(VP4、VP2、VP3、VP1)的亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒结构的稳定性较三段串联表达(VP0、VP3、VP1)好，其有利地保障了疫苗组合物在不同环境下结构的稳定性，有利于储存与运输，保证了疫苗性状的稳定性；也进一步证明了口蹄疫病毒样颗粒四段串联表达较三段串联表达具有更好的稳定性优势。
实施例11
抗口蹄疫(亚洲1型)的疫苗组合物的制备
分别取实施例8和实施例9制备的病毒样颗粒，按照实施例4的方法制备抗口蹄疫的疫苗组合物。具体配比见9。
表9抗口蹄疫的疫苗组合物成分配比
疫苗4 疫苗B
亚洲1型口蹄疫病毒(VP4、VP2、VP3、VP1)(μg/ml) 100 0
亚洲1型口蹄疫病毒(VP0、VP3、VP1)(μg/ml) 0 100
206佐剂(V/V％) 50％ 50％
实施例12
抗口蹄疫(亚洲1型)的疫苗组合物的免疫持续期对比试验
1.免疫程序
利用口蹄疫亚洲1型抗体ELISA检测试剂盒筛选抗体阴性的6月龄的健康黄牛15头，随机分为3组，每组5头。第1组为本发明实施例11制备的疫苗4免疫组，第2组为本发明实施例11制备的疫苗B免疫组，第3组为PBS对照组。免疫组免疫途径为颈部肌肉注射1ml，PBS对照组免疫等量的PBS。疫苗免疫前每头牛采血，免疫后每月采血，连续采血至免疫后6个月。
2.抗体水平检测
对采集的血清分别使用口蹄疫亚洲1型抗体ELISA检测试剂盒进行抗体的检测。结果显示，疫苗免疫前所有牛只的抗体均为阴性，免疫后4个月疫苗B免疫的牛只抗体水平均开始下降，而疫苗4依然保持较高的抗体水平。PBS对照组牛只抗体为阴性，无变化。详细抗体检测情况见表10。
表10免疫持续期对比试验ELISA抗体水平
Figure BDA0002621434100000181
证明了本发明提供的病毒样颗粒(VP4、VP2、VP3、VP1)结构，提高了稳定性，不仅温度稳定性及酸性环境稳定性增加，而且意外发现，四段串联表达的病毒样颗粒的疫苗组合物免疫持续期显著增长，能维持更长时间的免疫保护。
实施例13
A型口蹄疫病毒Ⅰ病毒样颗粒(VP4、VP2、VP3、VP1)的制备
将序列SEQ ID NO.25、26、27、28所示的A型口蹄疫病毒Ⅰ VP4、VP2、VP3、VP1氨基酸序列所示基因按照实施例1的方法分别设计引物串联表达制备病毒样颗粒。
通过磷钨酸负染及电镜观察可见口蹄疫蛋白形成了类病毒样颗粒，并且形成的类病毒样颗粒饱满，组装效率高，没有聚集。通过将口蹄疫病毒样颗粒置于4℃下放置4个月，再通过磷钨酸负染及电镜观察可见病毒样颗粒依旧颗粒饱满，无聚集现象。说明本发明筛选的序列按照四段表达制备的口蹄疫蛋白形成了稳定的类病毒样颗粒。
实施例14
A型口蹄疫病毒Ⅰ病毒样颗粒(VP0、VP3、VP1)的制备
参照实施例1的方法，按照A型口蹄疫病毒Ⅰ结构蛋白VP0、VP3、VP1基因序列分别设计引物串联表达制备病毒样颗粒。
实施例15
A型口蹄疫病毒Ⅰ病毒样颗粒稳定性比较试验
将实施例13及实施例14制备的病毒样颗粒分别置于50℃水浴中1小时及pH6.0条件下处理30分钟，然后在电镜下观察。结果显示四段串联表达的病毒样颗粒无论是在热环境下还是在酸性条件下，其病毒样颗粒大小均匀，呈空心形态；而三段串联表达的病毒样颗粒出现聚团，颗粒大小不一。具体结果见表11。
表11口蹄疫病毒样颗粒稳定性检验
类别 VP4、VP2、VP3、VP1 VP0、VP3、VP1
50℃水浴1h 稳定 不稳定
pH6.0处理30min 稳定 不稳定
证明了本发明提供的四段串联表达(VP4、VP2、VP3、VP1)的A型口蹄疫病毒样颗粒结构的稳定性较三段串联表达(VP0、VP3、VP1)好，其有利地保障了疫苗组合物在不同环境下结构的稳定性，有利于储存与运输，保证了疫苗性状的稳定性；也进一步证明了口蹄疫病毒样颗粒四段串联表达较三段串联表达具有更好的稳定性优势。
实施例16
抗口蹄疫(A型)的疫苗组合物的制备
分别取实施例13和实施例14制备的病毒样颗粒，按照实施例4的方法制备抗口蹄疫的疫苗组合物。具体配比见12。
表12抗口蹄疫的疫苗组合物成分配比
疫苗5 疫苗C
A型口蹄疫病毒(VP4、VP2、VP3、VP1)(μg/ml) 100 0
A型口蹄疫病毒(VP0、VP3、VP1)(μg/ml) 0 100
206佐剂(V/V％) 50％ 50％
实施例17
抗口蹄疫(A型)的疫苗组合物的免疫持续期对比试验
1.免疫程序
利用口蹄疫A型抗体ELISA检测试剂盒筛选抗体阴性的6月龄的健康黄牛15头，随机分为3组，每组5头。第1组为本发明实施例16制备的疫苗5免疫组，第2组为本发明实施例16制备的疫苗C免疫组，第3组为PBS对照组。免疫组免疫途径为颈部肌肉注射1ml，PBS对照组免疫等量的PBS。疫苗免疫前每头牛采血，免疫后每月采血，连续采血至免疫后6个月。
2.抗体水平检测
对采集的血清分别使用口蹄疫A型抗体ELISA检测试剂盒进行抗体的检测。结果显示，疫苗免疫前所有牛只的抗体均为阴性，免疫后4个月疫苗C免疫的牛只抗体水平均开始下降，而疫苗5依然保持较高的抗体水平。PBS对照组牛只抗体为阴性，无变化。详细抗体检测情况见表13。
表13免疫持续期对比试验ELISA抗体水平
Figure BDA0002621434100000201
证明了本发明提供的病毒样颗粒(VP4、VP2、VP3、VP1)结构，提高了稳定性，不仅温度稳定性及酸性环境稳定性增加，而且意外发现，四段串联表达的病毒样颗粒的疫苗组合物免疫持续期显著增长，能维持更长时间的免疫保护。
实施例18
抗口蹄疫病毒样颗粒(VP4、VP2、VP3、VP1)的制备
为了进一步验证四段串联表达的口蹄疫病毒样颗粒结构稳定性及制备的疫苗组合物免疫效力的持久性是否具有普遍意义，将SEQ ID NO.5、6、7、8所示的O型口蹄疫病毒ⅡVP4、VP2、VP3、VP1氨基酸序列所示基因，SEQ ID NO.9、10、11、12所示的O型口蹄疫病毒ⅢVP4、VP2、VP3、VP1氨基酸序列所示基因，SEQ ID NO.13、14、15、16所示的O型口蹄疫病毒ⅣVP4、VP2、VP3、VP1氨基酸序列所示基因，SEQ ID NO.17、18、19、20所示的O型口蹄疫病毒ⅤVP4、VP2、VP3、VP1氨基酸序列所示基因，SEQ ID NO.29、30、31、32所示的A型口蹄疫病毒ⅡVP4、VP2、VP3、VP1氨基酸序列所示基因，SEQ ID NO.33、34、35、36所示的A型口蹄疫病毒ⅢVP4、VP2、VP3、VP1氨基酸序列所示基因按照实施例1的方法分别设计引物串联表达制备病毒样颗粒。
通过磷钨酸负染及电镜观察可见口蹄疫蛋白均形成了类病毒样颗粒，并且形成的类病毒样颗粒饱满，组装效率高，没有聚集。通过将各个口蹄疫病毒样颗粒置于4℃下放置4个月，再通过磷钨酸负染及电镜观察可见病毒样颗粒依旧颗粒饱满，无聚集现象。说明本发明筛选的序列按照四段表达制备的口蹄疫蛋白形成了稳定的类病毒样颗粒。
实施例19
抗口蹄疫病毒样颗粒稳定性试验
将实施例18制备的病毒样颗粒分别置于50℃水浴中1小时及pH6.0条件下处理30分钟，然后在电镜下观察。结果显示四段串联表达的病毒样颗粒无论是在热环境下还是在酸性条件下，其病毒样颗粒大小均匀，呈空心形态，无聚团、颗粒大小不一现象。
证明了本发明提供的四段串联表达(VP4、VP2、VP3、VP1)的口蹄疫病毒样颗粒结构稳定，其有利地保障了疫苗组合物在不同环境下结构的稳定性，有利于储存与运输，保证了疫苗性状的稳定性；也进一步证明了口蹄疫病毒样颗粒四段串联表达结构稳定具有普遍意义。
实施例20
抗口蹄疫的疫苗组合物的制备
分别取实施例18制备的病毒样颗粒，按照实施例4的方法制备抗口蹄疫的疫苗组合物。具体配比见14。
表14抗口蹄疫的疫苗组合物成分配比
疫苗6 疫苗7 疫苗8 疫苗9 疫苗10 疫苗11
O型Ⅱ(μg/ml) 100 0 0 0 0 0
O型Ⅲ(μg/ml) 0 100 0 0 0 0
O型Ⅳ(μg/ml) 0 0 100 0 0 0
O型Ⅴ(μg/ml) 0 0 0 100 0 0
A型Ⅱ(μg/ml) 0 0 0 0 100 0
A型Ⅲ(μg/ml) 0 0 0 0 0 100
206佐剂(V/V％) 50％ 50％ 50％ 50％ 50％ 50％
实施例21
抗口蹄疫的疫苗组合物的免疫持续期试验
1.免疫程序
利用口蹄疫O型、A型抗体ELISA检测试剂盒筛选抗体阴性的6月龄的健康黄牛24头，随机分为8组，每组3头。第1组、第2组、第3组、第4组、第6组和第7组分别为本发明实施例20制备的疫苗6、疫苗7、疫苗8、疫苗9、疫苗10和疫苗11免疫组，第5组和第8组为PBS对照组。免疫组免疫途径为颈部肌肉注射1ml，PBS对照组免疫等量的PBS。疫苗免疫前每头牛采血，免疫后每月采血，连续采血至免疫后6个月。
2.抗体水平检测
对采集的血清分别使用口蹄疫O型、A型抗体ELISA检测试剂盒进行抗体的检测。结果显示，疫苗免疫前所有牛只的抗体均为阴性，疫苗免疫组免疫后6个月依然保持较高的抗体水平。PBS对照组牛只抗体为阴性，无变化。详细抗体检测情况见表15。
表15抗口蹄疫的疫苗组合物的免疫持续期试验结果
Figure BDA0002621434100000221
Figure BDA0002621434100000231
证明了本发明提供的病毒样颗粒(VP4、VP2、VP3、VP1)结构，提高了稳定性，不仅温度稳定性及酸性环境稳定性增加，而且意外发现，四段串联表达的病毒样颗粒的疫苗组合物免疫持续期显著增长，能维持更长时间的免疫保护，远高于现有技术中三段串联表达的病毒样颗粒制备的疫苗组合物；进一步证明了四段串联表达的口蹄疫病毒样颗粒制备的疫苗组合物免疫效力持久具有普遍意义。
实施例22
抗口蹄疫的多价疫苗的制备
分别取实施例1制备的O型口蹄疫病毒样颗粒、实施例8制备的亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒、实施例13制备的A型口蹄疫病毒样颗粒，按照实施例4的方法制备抗口蹄疫的疫苗组合物。具体配比见16。
表16抗口蹄疫的多价疫苗组合物成分配比
疫苗12
O型口蹄疫病毒Ⅰ(μg/ml) 100
亚洲1型口蹄疫病毒(μg/ml) 100
A型口蹄疫病毒Ⅰ(μg/ml) 100
206佐剂(V/V％) 50％
实施例23
抗口蹄疫的多价疫苗组合物的免疫原性试验
1.免疫程序
利用口蹄疫O型、亚洲1型、A型抗体ELISA检测试剂盒筛选抗体均为阴性的6月龄的健康黄牛6头，随机分为2组，每组3头。1组为本发明实施例22制备的疫苗12免疫组，第2组为PBS对照组。免疫组免疫途径为颈部肌肉注射1ml，PBS对照组免疫等量的PBS。疫苗免疫前每头牛采血，免疫后每周采血，连续采血至免疫后21日。
2.抗体水平检测
对采集的血清分别使用口蹄疫O型、亚洲1型、A型抗体ELISA检测试剂盒进行相关抗体的检测。结果显示，疫苗免疫前所有牛只的抗体均为阴性，免疫后7天疫苗免疫的牛只O型、亚洲1型、A型抗体水平均开始上升，免疫后21天均能达到1：128以上。PBS对照组牛只抗体为阴性，无变化。具体结果见表17。
表17疫苗免疫牛只后口蹄疫ELISA抗体水平
Figure BDA0002621434100000241
证明本发明制备的抗口蹄疫的多价疫苗能快速形成针对O型、亚洲1型、A型高水平的特异性抗体，不仅解决了O型口蹄疫免疫原性较差的问题，尤其是CATHAY型变异株免疫原性较差的问题，能对机体起到很好的免疫保护作用，而且还意外发现本发明制备的多价疫苗产生的抗体水平较单价疫苗更高。
以上所述仅是本发明的优选实施例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，虽然本发明已以优选实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
SEQUENCE LISTING
<110> 普莱柯生物工程股份有限公司
<120> 口蹄疫病毒样颗粒、制备方法、疫苗组合物和应用
<160> 36
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 85
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅠVP4蛋白氨基酸序列
<400> 1
Gly Ala Gly Gln Ser Ser Pro Ala Thr Gly Ser Gln Asn Gln Ser Gly
1 5 10 15
Asn Thr Gly Ser Ile Ile Asn Asn Tyr Tyr Met Gln Gln Tyr Gln Asn
20 25 30
Ser Met Asp Thr Gln Leu Gly Asp Asn Ala Ile Ser Gly Gly Ser Asn
35 40 45
Glu Gly Ser Thr Asp Thr Thr Ser Thr His Thr Thr Asn Thr Gln Asn
50 55 60
Asn Asp Trp Phe Ser Lys Leu Ala Ser Ser Ala Phe Ser Gly Leu Phe
65 70 75 80
Gly Ala Leu Leu Ala
85
<210> 2
<211> 218
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅠVP2蛋白氨基酸序列
<400> 2
Asp Lys Lys Thr Glu Glu Thr Thr Leu Leu Glu Asp Arg Ile Leu Thr
1 5 10 15
Thr Arg Asn Gly His Thr Thr Ser Thr Thr Gln Ser Ser Val Gly Ile
20 25 30
Thr His Gly Tyr Ala Thr Ala Glu Asp Phe Val Asn Gly Pro Asn Thr
35 40 45
Ser Gly Leu Glu Thr Arg Val Val Gln Ala Glu Arg Phe Phe Lys Thr
50 55 60
His Leu Phe Asp Trp Val Thr Ser Asp Pro Phe Gly Arg Cys Tyr Leu
65 70 75 80
Leu Glu Leu Pro Thr Asp His Lys Gly Val Tyr Gly Ser Leu Thr Asp
85 90 95
Ser Tyr Ala Tyr Met Arg Asn Gly Trp Asp Val Glu Val Thr Ala Val
100 105 110
Gly Asn Gln Phe Asn Gly Gly Cys Leu Leu Val Ala Met Val Pro Glu
115 120 125
Leu Cys Ser Ile Glu Arg Arg Glu Leu Phe Gln Leu Thr Leu Phe Pro
130 135 140
His Gln Phe Ile Asn Pro Arg Thr Asn Met Thr Ala His Ile Lys Val
145 150 155 160
Pro Phe Val Gly Val Asn Arg Tyr Asp Gln Tyr Lys Val His Lys Pro
165 170 175
Trp Thr Leu Val Val Met Val Val Ala Pro Leu Thr Val Asn Thr Glu
180 185 190
Gly Ala Pro Gln Ile Lys Val Tyr Ala Asn Ile Ala Pro Thr Asn Val
195 200 205
His Val Ala Gly Glu Phe Pro Ser Lys Glu
210 215
<210> 3
<211> 220
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅠVP3蛋白氨基酸序列
<400> 3
Gly Ile Phe Pro Val Ala Cys Ser Asp Gly Tyr Gly Gly Leu Val Thr
1 5 10 15
Thr Asp Pro Lys Thr Ala Asp Pro Val Tyr Gly Lys Val Phe Asn Pro
20 25 30
Pro Arg Asn Met Leu Pro Gly Arg Phe Thr Asn Leu Leu Asp Val Ala
35 40 45
Glu Ala Cys Pro Thr Phe Leu His Phe Asp Gly Asp Val Pro Tyr Val
50 55 60
Thr Thr Lys Thr Asp Ser Asp Arg Val Leu Ala Gln Phe Asp Leu Ser
65 70 75 80
Leu Ala Ala Lys His Met Ser Asn Thr Phe Leu Ala Gly Leu Ala Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Gln Tyr Ser Gly Thr Val Asn Leu His Phe Met Phe Thr
100 105 110
Gly Pro Thr Asp Ala Lys Ala Arg Tyr Met Ile Ala Tyr Ala Pro Pro
115 120 125
Gly Met Glu Pro Pro Lys Thr Pro Glu Ala Ala Ala His Cys Ile His
130 135 140
Ala Glu Trp Asp Thr Gly Leu Asn Ser Lys Phe Thr Phe Ser Ile Pro
145 150 155 160
Tyr Leu Ser Ala Ala Asp Tyr Ala Tyr Thr Ala Ser Asp Ala Ala Glu
165 170 175
Thr Thr Asn Val Gln Gly Trp Val Cys Leu Phe Gln Ile Thr His Gly
180 185 190
Lys Ala Glu Gly Asp Ala Leu Val Val Leu Ala Ser Ala Gly Lys Asp
195 200 205
Phe Glu Leu Arg Leu Pro Val Asp Ala Arg Gln Gln
210 215 220
<210> 4
<211> 213
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅠVP1蛋白氨基酸序列
<400> 4
Thr Thr Ser Thr Gly Glu Ser Ala Asp Pro Val Thr Ala Thr Val Glu
1 5 10 15
Asn Tyr Gly Gly Glu Thr Gln Val Gln Arg Arg His His Thr Asp Val
20 25 30
Ser Phe Ile Leu Asp Arg Phe Val Lys Val Thr Pro Lys Asp Ser Ile
35 40 45
Asn Val Leu Asp Leu Met Gln Thr Pro Ser His Thr Leu Val Gly Ala
50 55 60
Leu Leu Arg Thr Ala Thr Tyr Tyr Phe Ala Asp Leu Glu Val Ala Val
65 70 75 80
Lys His Glu Gly Asp Leu Thr Trp Val Pro Asn Gly Ala Pro Glu Ala
85 90 95
Ala Leu Asp Asn Thr Thr Asn Pro Thr Ala Tyr His Lys Ala Pro Leu
100 105 110
Thr Arg Leu Ala Leu Pro Tyr Thr Ala Pro His Arg Val Leu Ala Thr
115 120 125
Val Tyr Asn Gly Asn Cys Lys Tyr Ala Gly Gly Ser Leu Pro Asn Val
130 135 140
Arg Gly Asp Leu Gln Val Leu Ala Gln Lys Ala Ala Arg Pro Leu Pro
145 150 155 160
Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala Ile Lys Ala Thr Arg Val Thr Glu Leu
165 170 175
Leu Tyr Arg Met Lys Arg Ala Glu Thr Tyr Cys Pro Arg Pro Leu Leu
180 185 190
Ala Val His Pro Ser Ala Ala Arg His Lys Gln Lys Ile Val Ala Pro
195 200 205
Val Lys Gln Ser Leu
210
<210> 5
<211> 85
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅡVP4蛋白氨基酸序列
<400> 5
Gly Ala Gly Gln Ser Ser Pro Ala Thr Gly Ser Gln Asn Gln Ser Gly
1 5 10 15
Asn Thr Gly Ser Ile Ile Asn Asn Tyr Tyr Met Gln Gln Tyr Gln Asn
20 25 30
Ser Met Asp Thr Gln Leu Gly Asp Asn Ala Ile Ser Gly Gly Ser Asn
35 40 45
Glu Gly Ser Thr Asp Thr Thr Ser Thr His Thr Thr Asn Thr Gln Asn
50 55 60
Asn Asp Trp Phe Ser Lys Leu Ala Ser Ser Ala Phe Ser Gly Leu Phe
65 70 75 80
Gly Ala Leu Leu Ala
85
<210> 6
<211> 218
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅡVP2蛋白氨基酸序列
<400> 6
Asp Lys Lys Thr Glu Glu Thr Thr Leu Leu Glu Asp Arg Ile Leu Thr
1 5 10 15
Thr Arg Asn Gly His Thr Thr Ser Thr Thr Gln Ser Ser Val Gly Ile
20 25 30
Thr His Gly Tyr Ala Thr Ala Glu Asp Phe Val Ser Gly Pro Asn Thr
35 40 45
Ser Gly Leu Glu Thr Arg Val Ile Gln Ala Glu Arg Phe Phe Lys Thr
50 55 60
His Leu Phe Asp Trp Val Thr Ser Asp Pro Phe Gly Arg Cys His Leu
65 70 75 80
Leu Glu Leu Pro Thr Asp His Lys Gly Ile Tyr Gly Ser Leu Thr Asp
85 90 95
Ser Tyr Ala Tyr Met Arg Asn Gly Trp Asp Val Glu Val Thr Ala Val
100 105 110
Gly Asn Gln Phe Asn Gly Gly Cys Leu Leu Val Ala Met Val Pro Glu
115 120 125
Leu Cys Ser Ile Glu Arg Arg Glu Leu Phe Gln Leu Thr Leu Phe Pro
130 135 140
His Gln Phe Ile Asn Pro Arg Thr Asn Met Thr Ala His Ile Lys Val
145 150 155 160
Pro Phe Val Gly Val Asn Arg Tyr Asp Gln Tyr Lys Val His Lys Pro
165 170 175
Trp Thr Leu Val Val Met Val Val Ala Pro Leu Thr Val Asn Thr Glu
180 185 190
Gly Ala Pro Gln Ile Lys Val Tyr Ala Asn Ile Ala Pro Thr Asn Val
195 200 205
His Val Ala Gly Glu Phe Pro Ser Lys Glu
210 215
<210> 7
<211> 220
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅡVP3蛋白氨基酸序列
<400> 7
Gly Ile Phe Pro Val Ala Cys Ser Asp Gly Tyr Gly Gly Leu Val Thr
1 5 10 15
Thr Asp Pro Lys Thr Ala Asp Pro Val Tyr Gly Lys Val Phe Asn Pro
20 25 30
Pro Arg Asn Met Leu Pro Gly Arg Phe Thr Asn Leu Leu Asp Val Ala
35 40 45
Glu Ala Cys Pro Thr Phe Leu His Phe Asp Gly Asp Val Pro Tyr Val
50 55 60
Thr Thr Lys Thr Asp Ser Asp Arg Val Leu Ala Gln Phe Asp Leu Ser
65 70 75 80
Leu Ala Ala Lys His Met Ser Asn Thr Phe Leu Ala Gly Leu Ala Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Gln Tyr Ser Gly Thr Ile Asn Leu His Phe Met Phe Thr
100 105 110
Gly Pro Thr Asp Ala Lys Ala Arg Tyr Met Ile Ala Tyr Ala Pro Pro
115 120 125
Gly Met Glu Pro Pro Arg Thr Pro Glu Ala Ala Ala His Cys Ile His
130 135 140
Ala Glu Trp Asp Thr Gly Leu Asn Ser Lys Phe Thr Phe Ser Ile Pro
145 150 155 160
Tyr Leu Ser Ala Ala Asp Tyr Ala Tyr Thr Ala Ser Asp Ala Ala Glu
165 170 175
Thr Thr Asn Val Gln Gly Trp Val Cys Leu Phe Gln Ile Thr His Gly
180 185 190
Lys Ala Glu Gly Asp Ala Leu Val Val Leu Ala Ser Ala Gly Lys Asp
195 200 205
Phe Glu Leu Arg Leu Pro Val Asp Ala Arg Gln Gln
210 215 220
<210> 8
<211> 213
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅡVP1蛋白氨基酸序列
<400> 8
Thr Thr Ser Thr Gly Glu Ser Ala Asp Pro Val Thr Ala Thr Val Glu
1 5 10 15
Asn Tyr Gly Gly Glu Thr Gln Val Gln Arg Arg His His Thr Asp Val
20 25 30
Ser Phe Ile Leu Asp Arg Phe Val Lys Val Thr Pro Lys Asp Ser Ile
35 40 45
Asn Val Leu Asp Leu Met Gln Thr Pro Pro His Thr Leu Val Gly Ala
50 55 60
Leu Leu Arg Thr Ala Thr Tyr Tyr Phe Ala Asp Leu Glu Val Ala Val
65 70 75 80
Lys His Glu Gly Asp Leu Thr Trp Val Pro Asn Gly Ala Pro Glu Thr
85 90 95
Ala Leu Asp Asn Thr Thr Asn Pro Thr Ala Tyr His Lys Ala Pro Leu
100 105 110
Thr Arg Leu Ala Leu Pro Tyr Thr Ala Pro His Arg Val Leu Ala Thr
115 120 125
Val Tyr Asn Gly Asn Cys Lys Tyr Ala Gly Gly Ser Leu Pro Asn Val
130 135 140
Arg Gly Asp Leu Gln Val Leu Ala Gln Lys Ala Ala Trp Pro Leu Pro
145 150 155 160
Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala Ile Lys Ala Thr Arg Val Thr Glu Leu
165 170 175
Leu Tyr Arg Met Lys Arg Ala Glu Thr Tyr Cys Pro Arg Pro Leu Leu
180 185 190
Ala Val His Pro Ser Ala Ala Arg His Lys Gln Lys Ile Val Ala Pro
195 200 205
Val Lys Gln Ser Leu
210
<210> 9
<211> 85
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅢVP4蛋白氨基酸序列
<400> 9
Gly Ala Gly Gln Ser Ser Pro Ala Thr Gly Ser Gln Asn Gln Ser Gly
1 5 10 15
Asn Thr Gly Ser Ile Ile Asn Asn Tyr Tyr Met Gln Gln Tyr Gln Asn
20 25 30
Ser Met Asp Thr Gln Leu Gly Asp Asn Ala Ile Ser Gly Gly Ser Asn
35 40 45
Glu Gly Ser Thr Asp Thr Thr Ser Thr His Thr Thr Asn Thr Gln Asn
50 55 60
Asn Asp Trp Phe Ser Lys Leu Ala Ser Ser Ala Phe Ser Gly Leu Phe
65 70 75 80
Gly Ala Leu Leu Ala
85
<210> 10
<211> 218
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅢVP2蛋白氨基酸序列
<400> 10
Asp Lys Lys Thr Glu Glu Thr Thr Leu Leu Glu Asp Arg Ile Leu Thr
1 5 10 15
Thr Arg Asn Gly His Thr Thr Ser Thr Thr Gln Ser Ser Val Gly Val
20 25 30
Thr Tyr Gly Tyr Ala Thr Ala Glu Asp Phe Val Ser Gly Pro Asn Thr
35 40 45
Ser Gly Leu Glu Thr Arg Val Val Gln Ala Glu Arg Phe Phe Lys Thr
50 55 60
His Leu Phe Asp Trp Val Thr Gly Asp Pro Phe Gly Arg Cys Tyr Leu
65 70 75 80
Leu Glu Leu Pro Thr Asp His Lys Gly Val Tyr Gly Ser Leu Thr Asp
85 90 95
Ser Tyr Ala Tyr Met Arg Asn Gly Trp Asp Val Glu Val Thr Ala Val
100 105 110
Gly Asn Gln Phe Asn Gly Gly Cys Leu Leu Val Ala Met Val Pro Glu
115 120 125
Leu Cys Ser Ile Asp Lys Arg Glu Leu Tyr Gln Leu Thr Leu Phe Pro
130 135 140
His Gln Phe Ile Asn Pro Arg Thr Asn Met Thr Ala His Ile Thr Val
145 150 155 160
Pro Phe Val Gly Val Asn Arg Tyr Asp Gln Tyr Lys Val His Lys Pro
165 170 175
Trp Thr Leu Val Val Met Val Val Ala Pro Leu Thr Val Asn Thr Glu
180 185 190
Gly Ala Pro Gln Ile Lys Val Tyr Ala Asn Ile Ala Pro Thr Asn Val
195 200 205
His Val Ala Gly Glu Phe Pro Ser Lys Glu
210 215
<210> 11
<211> 220
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅢVP3蛋白氨基酸序列
<400> 11
Gly Ile Phe Pro Val Ala Cys Ser Asp Gly Tyr Gly Gly Leu Val Thr
1 5 10 15
Thr Asp Pro Lys Thr Ala Asp Pro Ala Tyr Gly Lys Val Phe Asn Pro
20 25 30
Pro Arg Asn Met Leu Pro Gly Arg Phe Thr Asn Phe Leu Asp Val Ala
35 40 45
Glu Ala Cys Pro Thr Phe Leu His Phe Glu Gly Asp Val Pro Tyr Val
50 55 60
Thr Thr Lys Thr Asp Ser Asp Arg Val Leu Ala Gln Phe Asp Leu Ser
65 70 75 80
Leu Ala Ala Lys His Met Ser Asn Thr Phe Leu Ala Gly Leu Ala Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Gln Tyr Ser Gly Thr Ile Asn Leu His Phe Met Phe Thr
100 105 110
Gly Pro Thr Asp Ala Lys Ala Arg Tyr Met Ile Ala Tyr Ala Pro Pro
115 120 125
Gly Met Glu Pro Pro Lys Thr Pro Glu Ala Ala Ala His Cys Ile His
130 135 140
Ala Glu Trp Asp Thr Gly Leu Asn Ser Lys Phe Thr Phe Ser Ile Pro
145 150 155 160
Tyr Leu Ser Ala Ala Asp Tyr Ala Tyr Thr Ala Ser Asp Ala Ala Glu
165 170 175
Thr Thr Asn Val Gln Gly Trp Val Cys Leu Phe Gln Ile Thr His Gly
180 185 190
Lys Ala Asp Gly Asp Ala Leu Val Val Leu Ala Ser Ala Gly Lys Asp
195 200 205
Phe Glu Leu Arg Leu Pro Val Asp Ala Arg Thr Gln
210 215 220
<210> 12
<211> 213
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅢVP1蛋白氨基酸序列
<400> 12
Thr Thr Ser Thr Gly Glu Ser Ala Asp Pro Val Thr Ala Thr Val Glu
1 5 10 15
Asn Tyr Gly Gly Glu Thr Gln Val Gln Arg Arg Gln His Thr Asp Val
20 25 30
Ser Phe Ile Leu Asp Arg Phe Val Lys Val Thr Pro Lys Asp Gln Ile
35 40 45
Asn Val Leu Asp Leu Met Gln Thr Pro Ala His Thr Leu Val Gly Ala
50 55 60
Leu Leu Arg Thr Ala Thr Tyr Tyr Phe Ala Asp Leu Glu Val Ala Val
65 70 75 80
Lys His Glu Gly Asn Leu Thr Trp Val Pro Asn Gly Ala Pro Glu Thr
85 90 95
Ala Leu Asp Asn Thr Thr Asn Pro Thr Ala Tyr His Lys Ala Pro Leu
100 105 110
Thr Arg Leu Ala Leu Pro Tyr Thr Ala Pro His Arg Val Leu Ala Thr
115 120 125
Val Tyr Asn Gly Asn Cys Lys Tyr Asp Glu Ser Pro Val Thr Asn Val
130 135 140
Arg Gly Asp Leu Gln Val Leu Ala Gln Lys Ala Ala Arg Thr Leu Pro
145 150 155 160
Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala Val Lys Ala Thr Arg Val Thr Glu Leu
165 170 175
Leu Tyr Arg Met Lys Arg Ala Glu Thr Tyr Cys Pro Arg Pro Leu Leu
180 185 190
Ala Ile His Pro Ser Glu Ala Arg His Lys Gln Lys Ile Val Ala Pro
195 200 205
Val Lys Gln Leu Leu
210
<210> 13
<211> 85
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅣVP4蛋白氨基酸序列
<400> 13
Gly Ala Gly Gln Ser Ser Pro Thr Thr Gly Ser Gln Asn Gln Ser Gly
1 5 10 15
Asn Thr Gly Ser Ile Ile Asn Asn Tyr Tyr Met Gln Gln Tyr Gln Asn
20 25 30
Ser Met Asp Thr Gln Leu Gly Asp Asn Ala Ile Ser Gly Gly Ser Asn
35 40 45
Glu Gly Ser Thr Asp Thr Thr Ser Thr His Thr Asn Asn Thr Gln Asn
50 55 60
Asn Asp Trp Phe Ser Lys Leu Ala Asn Thr Ala Phe Ser Gly Leu Phe
65 70 75 80
Gly Ala Leu Leu Ala
85
<210> 14
<211> 218
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅣVP2蛋白氨基酸序列
<400> 14
Asp Lys Lys Thr Glu Glu Thr Thr Leu Leu Glu Asp Arg Ile Leu Thr
1 5 10 15
Thr Arg Asn Gly His Thr Thr Ser Thr Thr Gln Ser Ser Val Gly Val
20 25 30
Thr Tyr Gly Tyr Ala Thr Ala Glu Asp Phe Val Ser Gly Pro Asn Thr
35 40 45
Ser Gly Leu Glu Thr Arg Val Val Gln Ala Glu Arg Phe Phe Lys Thr
50 55 60
His Leu Phe Asp Trp Gly Thr Asn Asp Ser Phe Gly Arg Cys His Leu
65 70 75 80
Leu Glu Leu Pro Thr Asp His Lys Gly Val Tyr Gly Ser Leu Thr Asp
85 90 95
Ser Tyr Ala Tyr Met Arg Asn Gly Trp Asp Val Glu Val Thr Ala Val
100 105 110
Gly Asn Gln Phe Asn Gly Gly Cys Leu Leu Val Ala Met Val Pro Glu
115 120 125
Leu Cys Ser Ile Thr Lys Arg Glu Leu Tyr Gln Leu Thr Leu Phe Pro
130 135 140
His Gln Phe Ile Asn Pro Arg Thr Asn Met Thr Ala His Ile Thr Val
145 150 155 160
Pro Tyr Leu Gly Val Asn Arg Tyr Asp Gln Tyr Lys Val His Lys Pro
165 170 175
Trp Thr Leu Val Val Met Val Val Ala Pro Leu Thr Val Asn Asn Glu
180 185 190
Gly Ala Pro Gln Ile Lys Val Tyr Ala Asn Ile Ala Pro Thr Asn Val
195 200 205
His Val Ala Gly Glu Leu Pro Ser Lys Glu
210 215
<210> 15
<211> 220
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅣVP3蛋白氨基酸序列
<400> 15
Gly Ile Phe Pro Val Ala Cys Ser Asp Gly Tyr Gly Gly Leu Val Thr
1 5 10 15
Thr Asp Pro Lys Thr Ala Asp Pro Val Tyr Gly Lys Val Phe Asn Pro
20 25 30
Pro Arg Asn Leu Leu Pro Gly Arg Phe Thr Asn Leu Leu Asp Val Ala
35 40 45
Glu Ala Cys Pro Thr Phe Leu His Phe Asp Gly Asp Val Pro Tyr Val
50 55 60
Val Thr Lys Thr Asp Ser Asp Arg Val Leu Ala Gln Phe Asp Leu Ser
65 70 75 80
Leu Ala Ala Lys His Met Ser Asn Thr Phe Leu Ala Gly Leu Ala Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ala Gln Tyr Ser Gly Thr Ile Asn Leu His Phe Met Phe Thr
100 105 110
Gly Pro Thr Asp Ala Lys Ala Arg Tyr Met Val Ala Tyr Ala Pro Pro
115 120 125
Gly Met Glu Pro Pro Lys Thr Pro Glu Ala Ala Ala His Cys Ile His
130 135 140
Ala Glu Trp Asp Thr Gly Leu Asn Ser Lys Phe Thr Phe Ser Ile Pro
145 150 155 160
Tyr Leu Ser Ala Ala Asp Tyr Ala Tyr Thr Ala Ser Asp Val Ala Glu
165 170 175
Thr Thr Asn Val Gln Gly Trp Val Cys Leu Phe Gln Ile Thr His Gly
180 185 190
Lys Ala Asp Gly Asp Ala Leu Val Val Leu Ala Ser Ala Gly Lys Asp
195 200 205
Phe Asp Leu Arg Leu Pro Val Asp Ala Arg Thr Gln
210 215 220
<210> 16
<211> 213
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅣVP1蛋白氨基酸序列
<400> 16
Thr Thr Ser Ala Gly Glu Ser Ala Asp Pro Val Thr Thr Thr Val Glu
1 5 10 15
Asn Tyr Gly Gly Glu Thr Gln Val Gln Arg Arg Gln His Thr Asp Val
20 25 30
Ala Phe Ile Leu Asp Arg Phe Val Lys Val Lys Pro Gln Glu Gln Val
35 40 45
Asn Val Leu Asp Leu Met Gln Ile Pro Ala His Thr Leu Val Gly Ala
50 55 60
Leu Leu Arg Thr Ala Thr Tyr Tyr Phe Ser Asp Leu Glu Leu Ala Val
65 70 75 80
Lys His Glu Gly Asp Leu Thr Trp Val Pro Asn Gly Ala Pro Glu Thr
85 90 95
Ala Leu Asp Asn Thr Thr Asn Pro Thr Ala Tyr His Lys Glu Pro Leu
100 105 110
Thr Arg Leu Ala Leu Pro Tyr Thr Ala Pro His Arg Val Leu Ala Thr
115 120 125
Val Tyr Asn Gly Ser Ser Lys Tyr Gly Asp Ala Ser Thr Asn Asn Val
130 135 140
Arg Gly Asp Leu Gln Val Leu Val Lys Lys Ala Glu Arg Ala Leu Pro
145 150 155 160
Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala Ile Lys Ala Ala Arg Val Thr Glu Leu
165 170 175
Leu Tyr Arg Met Lys Arg Ala Glu Thr Tyr Cys Pro Arg Pro Leu Leu
180 185 190
Ala Ile Gln Pro Ser Thr Ala Arg Arg Lys Gln Lys Ile Val Ala Pro
195 200 205
Ala Lys Gln Leu Leu
210
<210> 17
<211> 85
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅤVP4蛋白氨基酸序列
<400> 17
Gly Ala Gly Gln Ser Ser Pro Thr Thr Gly Ser Gln Asn Gln Ser Gly
1 5 10 15
Asn Thr Gly Ser Ile Ile Asn Asn Tyr Tyr Met Gln Gln Tyr Gln Asn
20 25 30
Ser Met Asp Thr Gln Leu Gly Asp Asn Ala Ile Ser Gly Gly Ser Asn
35 40 45
Glu Gly Ser Thr Asp Thr Thr Ser Thr His Thr Asn Asn Thr Gln Asn
50 55 60
Asn Asp Trp Phe Ser Lys Leu Ala Asn Ser Ala Leu Ser Gly Leu Phe
65 70 75 80
Gly Ala Leu Leu Ala
85
<210> 18
<211> 218
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅤVP2蛋白氨基酸序列
<400> 18
Asp Lys Lys Thr Glu Glu Thr Thr Leu Leu Glu Asp Arg Ile Leu Thr
1 5 10 15
Thr Arg Asn Gly His Thr Thr Ser Thr Thr Gln Ser Ser Val Gly Val
20 25 30
Thr Tyr Gly Tyr Ala Thr Ala Glu Asp Phe Val Ser Gly Pro Asn Thr
35 40 45
Ser Gly Leu Glu Thr Arg Val Val Gln Ala Glu Arg Phe Phe Lys Thr
50 55 60
His Leu Phe Asp Trp Val Thr Ser Asp Pro Phe Gly Arg Cys His Met
65 70 75 80
Leu Glu Leu Pro Thr Asp His Lys Gly Val Tyr Gly Ser Leu Thr Asp
85 90 95
Ser Tyr Ala Tyr Met Arg Asn Gly Trp Asp Val Glu Val Thr Ala Val
100 105 110
Gly Asn Gln Phe Asn Gly Gly Cys Leu Leu Val Ala Met Val Pro Glu
115 120 125
Leu Cys Ser Ile Asn Lys Arg Glu Leu Tyr Gln Leu Thr Leu Phe Pro
130 135 140
His Gln Phe Ile Asn Pro Arg Thr Asn Met Thr Ala His Ile Thr Val
145 150 155 160
Pro Tyr Val Gly Val Asn Arg Tyr Asp Gln Tyr Lys Val His Lys Pro
165 170 175
Trp Thr Leu Val Val Met Val Val Ala Pro Leu Thr Val Asn Asn Glu
180 185 190
Gly Ala Pro Gln Ile Lys Val Tyr Ala Asn Ile Ala Pro Thr Asn Val
195 200 205
Tyr Val Ala Gly Glu Phe Pro Ser Lys Glu
210 215
<210> 19
<211> 220
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅤVP3蛋白氨基酸序列
<400> 19
Gly Ile Phe Pro Val Ala Cys Ser Asp Gly Tyr Gly Gly Leu Val Thr
1 5 10 15
Thr Asp Pro Lys Thr Ala Asp Pro Val Tyr Gly Lys Val Phe Asn Pro
20 25 30
Pro Arg Asn Leu Leu Pro Gly Arg Phe Thr Asn Leu Leu Asp Val Ala
35 40 45
Glu Ala Cys Pro Thr Phe Leu His Phe Glu Gly Asp Val Pro Tyr Val
50 55 60
Thr Thr Lys Thr Asp Ser Asp Arg Val Leu Ala Gln Phe Asp Leu Ser
65 70 75 80
Leu Ala Ala Lys His Met Ser Asn Thr Phe Leu Ala Gly Leu Ala Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Gln Tyr Ser Gly Thr Ile Asn Leu His Phe Met Phe Thr
100 105 110
Gly Pro Thr Asp Ala Lys Ala Arg Tyr Met Ile Ala Tyr Ala Pro Pro
115 120 125
Gly Met Glu Pro Pro Lys Thr Pro Glu Ala Ala Ala His Cys Ile His
130 135 140
Ala Glu Trp Asp Thr Gly Leu Asn Ser Lys Phe Thr Phe Ser Ile Pro
145 150 155 160
Tyr Leu Ser Ala Ala Asp Tyr Ala Tyr Thr Ala Ser Asp Val Ala Glu
165 170 175
Thr Thr Asn Val Gln Gly Trp Val Cys Leu Phe Gln Ile Thr His Gly
180 185 190
Lys Ala Asp Gly Asp Ala Leu Ile Val Leu Ala Ser Ala Gly Lys Asp
195 200 205
Phe Asp Leu Arg Leu Pro Val Asp Ala Arg Thr Gln
210 215 220
<210> 20
<211> 213
<212> PRT
<213> O型口蹄疫病毒ⅤVP1蛋白氨基酸序列
<400> 20
Thr Thr Ser Ala Gly Glu Ser Ala Asp Pro Val Thr Ala Thr Val Glu
1 5 10 15
Asn Tyr Gly Gly Glu Thr Gln Val Gln Arg Arg Gln His Thr Asp Ile
20 25 30
Ser Phe Ile Leu Asp Arg Phe Val Lys Val Thr Pro Lys Asp Gln Ile
35 40 45
Asn Val Leu Asp Leu Met Gln Ile Pro Ala His Thr Leu Val Gly Ala
50 55 60
Leu Leu Arg Thr Ala Thr Tyr Tyr Phe Ser Asp Leu Glu Leu Ala Val
65 70 75 80
Lys His Lys Gly Asp Leu Thr Trp Val Pro Asn Gly Ala Pro Glu Thr
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Ala Leu Asp Asn Thr Thr Asn Pro Thr Ala Tyr His Lys Ala Pro Leu
100 105 110
Thr Arg Leu Ala Leu Pro Tyr Thr Ala Pro His Arg Val Leu Ala Thr
115 120 125
Val Tyr Asn Gly Ser Cys Lys Tyr Ser Asp Ala Arg Val Ser Asn Val
130 135 140
Arg Gly Asp Leu Gln Val Leu Ala Gln Lys Ala Glu Arg Ala Leu Pro
145 150 155 160
Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala Ile Lys Ala Thr Arg Val Thr Glu Leu
165 170 175
Leu Tyr Arg Met Lys Arg Ala Glu Thr Tyr Cys Pro Arg Pro Leu Leu
180 185 190
Ala Ile Gln Pro Ser Asp Ala Arg His Lys Gln Lys Ile Val Ala Pro
195 200 205
Ala Lys Gln Leu Leu
210
<210> 21
<211> 85
<212> PRT
<213> 亚洲1型口蹄疫病毒VP4蛋白氨基酸序列
<400> 21
Gly Ala Gly Gln Ser Ser Pro Ala Thr Gly Ser Gln Asn Gln Ser Gly
1 5 10 15
Asn Thr Gly Ser Ile Ile Asn Asn Tyr Tyr Met Gln Gln Tyr Gln Asn
20 25 30
Ser Met Asp Thr Gln Leu Gly Asp Asn Ala Ile Ser Gly Gly Ser Asn
35 40 45
Glu Gly Ser Thr Asp Thr Thr Ser Thr His Thr Asn Asn Thr Gln Asn
50 55 60
Asn Asp Trp Phe Ser Arg Leu Ala Ser Ser Ala Phe Ser Gly Leu Phe
65 70 75 80
Gly Ala Leu Leu Ala
85
<210> 22
<211> 218
<212> PRT
<213> 亚洲1型口蹄疫病毒VP2蛋白氨基酸序列
<400> 22
Asp Lys Lys Thr Glu Glu Thr Thr Leu Leu Glu Asp Arg Ile Leu Thr
1 5 10 15
Thr Arg Asn Gly His Thr Thr Ser Thr Thr Gln Ser Ser Val Gly Val
20 25 30
Thr Tyr Gly Tyr Ala Val Ala Glu Asp Ala Val Ser Gly Pro Asn Thr
35 40 45
Ser Gly Leu Glu Thr Arg Val Thr Gln Ala Glu Arg Phe Phe Lys Lys
50 55 60
His Leu Phe Asp Trp Thr Pro Asp Leu Ser Phe Gly His Cys His Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Pro Ser Glu His Lys Gly Val Phe Gly Ser Leu Met Ser
85 90 95
Ser Tyr Ala Tyr Met Arg Asn Gly Trp Asp Ile Glu Val Thr Ala Val
100 105 110
Gly Asn Gln Phe Asn Gly Gly Cys Leu Leu Val Ala Leu Val Pro Glu
115 120 125
Leu Lys Glu Leu Asp Thr Arg Gln Lys Tyr Gln Leu Thr Leu Phe Pro
130 135 140
His Gln Phe Ile Asn Pro Arg Thr Asn Met Thr Ala His Ile Asn Val
145 150 155 160
Pro Tyr Val Gly Val Asn Arg Tyr Asp Gln Tyr Glu Leu His Lys Pro
165 170 175
Trp Thr Leu Val Val Met Val Val Ala Pro Leu Thr Val Lys Thr Gly
180 185 190
Gly Ser Glu Gln Ile Lys Val Tyr Met Asn Ala Ala Pro Thr Tyr Val
195 200 205
His Val Ala Gly Glu Leu Pro Ser Lys Glu
210 215
<210> 23
<211> 219
<212> PRT
<213> 亚洲1型口蹄疫病毒VP3蛋白氨基酸序列
<400> 23
Gly Ile Val Pro Val Ala Cys Val Asp Gly Tyr Gly Asn Met Val Thr
1 5 10 15
Thr Asp Pro Lys Thr Ala Asp Pro Val Tyr Gly Lys Val Ser Asn Pro
20 25 30
Pro Arg Thr Ser Phe Pro Gly Arg Phe Thr Asn Phe Leu Asp Val Ala
35 40 45
Glu Ala Cys Pro Thr Phe Leu Arg Phe Gly Glu Val Pro Phe Val Lys
50 55 60
Thr Val Asn Ser Gly Asp Arg Leu Leu Ala Lys Phe Asp Val Ser Leu
65 70 75 80
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85 90 95
Tyr Thr Gln Tyr Ser Gly Thr Met Asn Ile His Phe Met Phe Thr Gly
100 105 110
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115 120 125
Met Thr Pro Pro Thr Asp Pro Glu Arg Ala Ala His Cys Ile His Ser
130 135 140
Glu Trp Asp Thr Gly Leu Asn Ser Lys Phe Thr Phe Ser Ile Pro Tyr
145 150 155 160
Leu Ser Ala Ala Asp Tyr Ala Tyr Thr Ala Ser Asp Val Ala Glu Thr
165 170 175
Thr Ser Val Gln Gly Trp Val Cys Ile Tyr Gln Ile Thr His Gly Lys
180 185 190
Ala Glu Gly Asp Ala Leu Val Val Ser Val Ser Ala Gly Lys Asp Phe
195 200 205
Glu Phe Arg Leu Pro Val Asp Ala Arg Gln Gln
210 215
<210> 24
<211> 209
<212> PRT
<213> 亚洲1型口蹄疫病毒VP1蛋白氨基酸序列
<400> 24
Thr Thr Thr Thr Gly Glu Ser Ala Asp Pro Val Thr Thr Thr Val Glu
1 5 10 15
Asn Tyr Gly Gly Glu Thr Gln Thr Ala Arg Arg Leu His Thr Asp Val
20 25 30
Ala Phe Val Leu Asp Arg Phe Val Lys Leu Thr Gln Pro Lys Ser Thr
35 40 45
Gln Thr Leu Asp Leu Met Gln Ile Pro Ser His Thr Leu Val Gly Ala
50 55 60
Leu Leu Arg Ser Ala Thr Tyr Tyr Phe Ser Asp Leu Glu Val Ala Leu
65 70 75 80
Val His Thr Gly Pro Val Thr Trp Val Pro Asn Gly Ala Pro Lys Thr
85 90 95
Ala Leu Asn Asn His Thr Asn Pro Thr Ala Tyr Gln Lys Gln Pro Ile
100 105 110
Thr Arg Leu Ala Leu Pro Tyr Thr Ala Pro His Arg Val Leu Ser Thr
115 120 125
Val Tyr Asn Gly Lys Thr Thr Tyr Gly Glu Glu Ser Ser Arg Arg Gly
130 135 140
Asp Leu Ala Ala Leu Ala Arg Arg Val Asn Asn Arg Leu Pro Thr Ser
145 150 155 160
Phe Asn Tyr Gly Ala Val Lys Ala Asp Thr Ile Thr Glu Leu Leu Ile
165 170 175
Arg Met Lys Arg Ala Glu Thr Tyr Cys Pro Arg Pro Leu Leu Ala Leu
180 185 190
Asp Thr Thr Gln Asp Arg Arg Lys Gln Lys Ile Ile Ala Pro Glu Lys
195 200 205
Gln
<210> 25
<211> 85
<212> PRT
<213> A型口蹄疫病毒ⅠVP4蛋白氨基酸序列
<400> 25
Gly Ala Gly Gln Ser Ser Pro Ala Thr Gly Ser Gln Asn Gln Ser Gly
1 5 10 15
Asn Thr Gly Ser Ile Ile Asn Asn Tyr Tyr Met Gln Gln Tyr Gln Asn
20 25 30
Ser Met Asp Thr Gln Leu Gly Asp Asn Ala Ile Ser Gly Gly Ser Asn
35 40 45
Glu Gly Ser Thr Asp Thr Thr Ser Thr His Thr Thr Asn Thr Gln Asn
50 55 60
Asn Asp Trp Phe Ser Lys Leu Ala Ser Ser Ala Phe Thr Gly Leu Phe
65 70 75 80
Gly Ala Leu Leu Ala
85
<210> 26
<211> 218
<212> PRT
<213> A型口蹄疫病毒ⅠVP2蛋白氨基酸序列
<400> 26
Asp Lys Lys Thr Glu Glu Thr Thr Leu Leu Glu Asp Arg Ile Leu Thr
1 5 10 15
Thr Arg Asn Gly His Thr Thr Ser Thr Thr Gln Ser Ser Val Gly Val
20 25 30
Thr Tyr Gly Tyr Ser Thr Gly Glu Asp His Val Ser Gly Pro Asn Thr
35 40 45
Ser Gly Leu Glu Thr Arg Val Val Gln Ala Glu Arg Phe Phe Lys Lys
50 55 60
His Leu Phe Asp Trp Thr Thr Asp Lys Pro Phe Gly His Ile Glu Lys
65 70 75 80
Leu Glu Leu Pro Thr Asp His Lys Gly Val Tyr Gly Gln Leu Val Asp
85 90 95
Ser Phe Ala Tyr Met Arg Asn Gly Trp Asp Val Glu Val Ser Ala Val
100 105 110
Gly Asn Gln Phe Asn Gly Gly Cys Leu Leu Val Ala Met Val Pro Glu
115 120 125
Phe Lys Glu Phe Thr Thr Arg Glu Lys Tyr Gln Leu Thr Leu Phe Pro
130 135 140
His Gln Phe Ile Ser Pro Arg Thr Asn Met Thr Ala His Ile Thr Val
145 150 155 160
Pro Tyr Leu Gly Val Asn Arg Tyr Asp Gln Tyr Asn Lys His Lys Pro
165 170 175
Trp Thr Leu Val Val Met Val Val Ser Pro Leu Thr Thr Ser Ser Ile
180 185 190
Gly Ala Ser Gln Ile Lys Val Tyr Thr Asn Ile Ala Pro Thr His Val
195 200 205
His Val Ala Gly Glu Leu Pro Ser Lys Glu
210 215
<210> 27
<211> 221
<212> PRT
<213> A型口蹄疫病毒ⅠVP3蛋白氨基酸序列
<400> 27
Gly Ile Val Pro Val Ala Cys Ser Asp Gly Tyr Gly Gly Leu Val Thr
1 5 10 15
Thr Asp Pro Lys Thr Ala Asp Pro Ala Tyr Gly Met Val Tyr Asn Pro
20 25 30
Pro Arg Thr Asn Tyr Pro Gly Arg Phe Thr Asn Leu Leu Asp Val Ala
35 40 45
Glu Ala Cys Pro Thr Phe Leu Cys Phe Asp Asp Gly Lys Pro Tyr Val
50 55 60
Val Thr Arg Thr Asp Glu Gln Arg Leu Leu Ala Lys Phe Asp Leu Ser
65 70 75 80
Leu Ala Ala Lys His Met Ser Asn Thr Tyr Leu Ser Gly Ile Ala Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ala Gln Tyr Ser Gly Thr Ile Asn Leu His Phe Met Phe Thr
100 105 110
Gly Ser Thr Asp Ser Lys Ala Arg Tyr Met Val Ala Tyr Val Pro Pro
115 120 125
Gly Val Thr Thr Pro Pro Asp Thr Pro Glu Arg Ala Ala His Cys Ile
130 135 140
His Ala Glu Trp Asp Thr Gly Leu Asn Ser Lys Phe Thr Phe Ser Ile
145 150 155 160
Pro Tyr Val Ser Ala Ala Asp Tyr Ala Tyr Thr Ala Ser Asp Val Ala
165 170 175
Asp Thr Thr Asn Val Gln Gly Trp Val Cys Ile Tyr Gln Ile Thr His
180 185 190
Gly Lys Ala Glu Gln Asp Thr Leu Val Val Ser Val Ser Ala Gly Lys
195 200 205
Asp Phe Glu Leu Arg Leu Pro Ile Asp Pro Arg Ala Gln
210 215 220
<210> 28
<211> 212
<212> PRT
<213> A型口蹄疫病毒ⅠVP1蛋白氨基酸序列
<400> 28
Thr Thr Ala Thr Gly Glu Ser Ala Asp Pro Val Thr Thr Thr Val Glu
1 5 10 15
Asn Tyr Gly Gly Glu Thr Gln Val Gln Arg Arg His His Thr Asp Val
20 25 30
Ser Phe Ile Met Asp Arg Phe Val Gln Ile Lys Pro Val Ser Pro Thr
35 40 45
His Val Ile Asp Leu Met Gln Thr His Gln His Gly Leu Val Gly Ala
50 55 60
Met Leu Arg Ala Ala Thr Tyr Tyr Phe Ser Asp Leu Glu Ile Val Val
65 70 75 80
Asn His Thr Gly Arg Leu Thr Trp Val Pro His Gly Ala Pro Glu Ala
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Ala Leu Asp Asn Thr Ser Asn Pro Thr Ala Tyr His Lys Ala Pro Phe
100 105 110
Thr Arg Leu Ala Leu Pro Tyr Thr Ala Pro His Arg Val Leu Ala Thr
115 120 125
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130 135 140
Asp Leu Gly Ser Leu Ala Ala Arg Leu Ala Ala Gln Leu Pro Ala Ser
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Phe Asn Tyr Gly Ala Ile Arg Ala Thr Glu Ile Gln Glu Leu Leu Val
165 170 175
Arg Met Lys Arg Ala Glu Leu Tyr Cys Pro Arg Pro Leu Leu Ala Val
180 185 190
Glu Val Thr Ser Gln Asp Arg His Lys Gln Lys Ile Ile Ala Pro Ala
195 200 205
Lys Gln Leu Leu
210
<210> 29
<211> 85
<212> PRT
<213> A型口蹄疫病毒ⅡVP4蛋白氨基酸序列
<400> 29
Gly Ala Gly Gln Ser Ser Pro Ala Thr Gly Ser Gln Asn Gln Ser Gly
1 5 10 15
Asn Thr Gly Ser Ile Ile Asn Asn Tyr Tyr Met Gln Gln Tyr Gln Asn
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Ser Met Asp Thr Gln Leu Gly Asp Asn Ala Ile Ser Gly Gly Ser Asn
35 40 45
Glu Gly Ser Thr Asp Thr Thr Ser Thr His Thr Thr Asn Thr Gln Asn
50 55 60
Asn Asp Trp Phe Ser Lys Leu Ala Ser Ser Ala Phe Ser Gly Leu Phe
65 70 75 80
Gly Ala Leu Leu Ala
85
<210> 30
<211> 218
<212> PRT
<213> A型口蹄疫病毒ⅡVP2蛋白氨基酸序列
<400> 30
Asp Lys Lys Thr Glu Glu Thr Thr Leu Leu Glu Asp Arg Ile Leu Thr
1 5 10 15
Thr Arg Asn Gly His Thr Thr Ser Thr Thr Gln Ser Ser Val Gly Val
20 25 30
Thr Tyr Gly Tyr Ser Thr Gly Glu Asp His Val Ser Gly Pro Asn Thr
35 40 45
Ser Gly Leu Glu Thr Arg Val Val Gln Ala Glu Arg Phe Phe Lys Lys
50 55 60
His Leu Phe Asn Trp Thr Pro Asp Lys Ala Phe Gly His Leu Glu Lys
65 70 75 80
Leu Glu Leu Pro Asn Asp His Thr Gly Val Tyr Gly His Leu Val Asp
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Ser Phe Ala Tyr Met Arg Asn Gly Trp Asp Val Glu Val Ser Ala Val
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Gly Asn Gln Phe Asn Gly Gly Cys Leu Leu Val Ala Met Val Pro Glu
115 120 125
Trp Lys Glu Phe Thr Met Arg Glu Lys Tyr Gln Leu Thr Leu Phe Pro
130 135 140
His Gln Phe Ile Ser Pro Arg Thr Asn Met Thr Ala His Ile Thr Val
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Pro Tyr Leu Gly Val Asn Arg Tyr Asp Gln Tyr Lys Lys His Lys Pro
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Trp Thr Leu Val Val Met Val Val Ser Pro Leu Thr Thr Ser Thr Ile
180 185 190
Ser Ala Gly Glu Ile Lys Val Tyr Ala Asn Ile Ala Pro Thr His Val
195 200 205
His Val Ala Gly Glu Leu Pro Ser Lys Glu
210 215
<210> 31
<211> 221
<212> PRT
<213> A型口蹄疫病毒ⅡVP3蛋白氨基酸序列
<400> 31
Gly Ile Val Pro Val Ala Cys Ser Asp Gly Tyr Gly Gly Leu Val Thr
1 5 10 15
Thr Asp Pro Lys Thr Ala Asp Pro Val Tyr Gly Met Val Tyr Asn Pro
20 25 30
Pro Arg Thr Asn Tyr Pro Gly Arg Phe Thr Asn Leu Leu Asp Val Ala
35 40 45
Glu Ala Cys Pro Thr Phe Leu Cys Phe Asp Asp Gly Lys Pro Tyr Val
50 55 60
Val Thr Arg Thr Asp Ala Gln Arg Leu Leu Ala Lys Phe Asp Val Ser
65 70 75 80
Leu Ala Ala Lys His Met Ser Asn Thr Tyr Leu Ser Gly Leu Ala Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ala Gln Tyr Ser Gly Thr Ile Asn Leu His Phe Met Phe Thr
100 105 110
Gly Ser Thr Asp Ser Lys Ala Arg Tyr Met Val Ala Tyr Val Pro Pro
115 120 125
Gly Val Glu Thr Pro Pro Asp Thr Pro Glu Gln Ala Ala His Cys Ile
130 135 140
His Ala Glu Trp Asp Thr Gly Leu Asn Ser Lys Phe Thr Phe Ser Ile
145 150 155 160
Pro Tyr Val Ser Ala Ala Asp Tyr Ala Tyr Thr Ala Ser Asp Val Ala
165 170 175
Glu Thr Thr Asn Val Gln Gly Trp Val Cys Ile Tyr Gln Ile Thr His
180 185 190
Gly Lys Ala Glu Gln Asp Thr Leu Val Val Ser Val Ser Ala Gly Lys
195 200 205
Asp Phe Glu Leu Arg Leu Pro Ile Asp Pro Arg Ala Gln
210 215 220
<210> 32
<211> 213
<212> PRT
<213> A型口蹄疫病毒ⅡVP1蛋白氨基酸序列
<400> 32
Thr Thr Thr Thr Gly Glu Ser Ala Asp Pro Val Thr Thr Thr Val Glu
1 5 10 15
Asn Tyr Gly Gly Glu Thr Gln Val Gln Arg Arg Gln His Thr Asp Val
20 25 30
Ser Phe Ile Met Asp Arg Phe Val Arg Ile Thr Ala Val Ser Pro Thr
35 40 45
His Val Ile Asp Leu Met Arg Thr His Gln His Gly Leu Val Gly Ala
50 55 60
Leu Leu Arg Ala Ala Thr Tyr Tyr Phe Ser Asp Leu Glu Ile Val Val
65 70 75 80
Arg His Glu Gly Asn Leu Thr Trp Val Pro Asn Gly Ala Pro Glu Ala
85 90 95
Ala Leu Val Asn Thr Ser Asn Pro Thr Ala Tyr His Lys Ala Pro Phe
100 105 110
Thr Arg Leu Ala Leu Pro Tyr Thr Ala Pro His Arg Val Leu Ala Thr
115 120 125
Val Tyr Asn Gly Thr Ser Lys Tyr Ser Ala Pro Gly Ala Gly Arg Arg
130 135 140
Gly Asp Leu Gly Pro Leu Ala Ala Arg Thr Ala Ala Gln Leu Pro Ala
145 150 155 160
Ser Phe Asn Phe Gly Ala Val Arg Ala Thr Thr Ile His Glu Leu Leu
165 170 175
Val Arg Met Lys Arg Ala Glu Leu Tyr Cys Pro Arg Pro Leu Met Ala
180 185 190
Val Glu Val Ser Ser Gln Asp Arg His Lys Gln Lys Ile Ile Ala Pro
195 200 205
Ala Lys Gln Leu Leu
210
<210> 33
<211> 85
<212> PRT
<213> A型口蹄疫病毒ⅢVP4蛋白氨基酸序列
<400> 33
Gly Ala Gly Gln Ser Ser Pro Ala Thr Gly Ser Gln Asn Gln Ser Gly
1 5 10 15
Asn Thr Gly Ser Ile Ile Asn Asn Tyr Tyr Met Gln Gln Tyr Gln Asn
20 25 30
Ser Met Ser Thr Gln Leu Gly Asp Asn Thr Ile Ser Gly Gly Ser Asn
35 40 45
Glu Gly Ser Thr Asp Thr Thr Ser Thr His Thr Thr Asn Thr Gln Asn
50 55 60
Asn Asp Trp Phe Ser Lys Leu Ala Ser Ser Ala Phe Thr Gly Leu Phe
65 70 75 80
Gly Ala Leu Leu Ala
85
<210> 34
<211> 218
<212> PRT
<213> A型口蹄疫病毒ⅢVP2蛋白氨基酸序列
<400> 34
Asp Lys Lys Thr Glu Glu Thr Thr Leu Leu Glu Asp Arg Ile Leu Thr
1 5 10 15
Thr Arg Asn Gly His Thr Thr Ser Thr Thr Gln Ser Ser Val Gly Val
20 25 30
Thr Tyr Gly Tyr Ser Thr Glu Glu Asp His Val Ala Gly Pro Asn Thr
35 40 45
Ser Gly Leu Glu Thr Arg Val Val Gln Ala Glu Arg Phe Phe Lys Lys
50 55 60
Phe Leu Phe Asp Trp Thr Thr Asp Lys Pro Phe Gly Tyr Leu Thr Lys
65 70 75 80
Leu Glu Leu Pro Thr Asp His His Gly Val Phe Gly His Leu Val Asp
85 90 95
Ser Tyr Ala Tyr Met Arg Asn Gly Trp Asp Val Glu Val Ser Ala Val
100 105 110
Gly Asn Gln Phe Asn Gly Gly Cys Leu Leu Val Ala Met Val Pro Glu
115 120 125
Trp Lys Ala Phe Asp Thr Arg Glu Lys Tyr Gln Leu Thr Leu Phe Pro
130 135 140
His Gln Phe Ile Ser Pro Arg Thr Asn Met Thr Ala His Ile Thr Val
145 150 155 160
Pro Tyr Leu Gly Val Asn Arg Tyr Asp Gln Tyr Lys Lys His Lys Pro
165 170 175
Trp Thr Leu Val Val Met Val Leu Ser Pro Leu Thr Val Ser Asn Thr
180 185 190
Ala Ala Pro Gln Ile Lys Val Tyr Ala Asn Ile Ala Pro Thr Tyr Val
195 200 205
His Val Ala Gly Glu Leu Pro Ser Lys Glu
210 215
<210> 35
<211> 221
<212> PRT
<213> A型口蹄疫病毒ⅢVP3蛋白氨基酸序列
<400> 35
Gly Ile Phe Pro Val Ala Cys Ala Asp Gly Tyr Gly Gly Leu Val Thr
1 5 10 15
Thr Asp Pro Lys Thr Ala Asp Pro Val Tyr Gly Lys Val Tyr Asn Pro
20 25 30
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35 40 45
Glu Ala Cys Pro Thr Phe Leu Arg Phe Asp Asp Gly Lys Pro Tyr Val
50 55 60
Val Thr Arg Ala Asp Asp Thr Arg Leu Leu Ala Lys Phe Asp Val Ser
65 70 75 80
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85 90 95
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Gly Ser Thr Asp Ser Lys Ala Arg Tyr Met Val Ala Tyr Ile Pro Pro
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Gly Val Glu Thr Pro Pro Asp Thr Pro Glu Glu Ala Ala His Cys Ile
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165 170 175
Glu Thr Thr Asn Val Gln Gly Trp Val Cys Val Tyr Gln Ile Thr His
180 185 190
Gly Lys Ala Glu Asn Asp Thr Leu Leu Val Ser Ala Ser Ala Gly Lys
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Asp Phe Glu Leu Arg Leu Pro Ile Asp Pro Arg Thr Gln
210 215 220
<210> 36
<211> 212
<212> PRT
<213> A型口蹄疫病毒ⅢVP1蛋白氨基酸序列
<400> 36
Thr Thr Thr Thr Gly Glu Ser Ala Asp Pro Val Thr Thr Thr Val Glu
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Asn Tyr Gly Gly Asp Thr Gln Val Gln Arg Arg His His Thr Asp Val
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Gly Phe Ile Met Asp Arg Phe Val Lys Ile Asn Ser Leu Ser Pro Thr
35 40 45
His Val Ile Asp Leu Met Gln Thr His Lys His Gly Ile Val Gly Ala
50 55 60
Leu Leu Arg Ala Ala Thr Tyr Tyr Phe Ser Asp Leu Glu Ile Val Val
65 70 75 80
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Ala Leu Ser Asn Thr Ser Asn Pro Thr Ala Tyr Asn Lys Ala Pro Phe
100 105 110
Thr Arg Leu Ala Leu Pro Tyr Thr Ala Pro His Arg Val Leu Ala Thr
115 120 125
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130 135 140
Asp Leu Gly Ser Ile Ala Ala Arg Val Ala Thr Gln Leu Pro Ala Ser
145 150 155 160
Phe Asn Tyr Gly Ala Ile Gln Ala Gln Ala Ile His Glu Leu Leu Val
165 170 175
Arg Met Lys Arg Ala Glu Leu Tyr Cys Pro Arg Pro Leu Leu Ala Ile
180 185 190
Lys Val Thr Ser Gln Asp Arg Tyr Lys Gln Lys Ile Ile Ala Pro Ala
195 200 205
Lys Gln Leu Leu
210

Claims (12)

1.一种O型口蹄疫病毒样颗粒，其特征在于，所述病毒样颗粒由O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中，所述结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1的氨基酸序列分别为SEQ ID NO.5、6、7、8所示。
2.一种抗口蹄疫的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包含权利要求1所述的O型口蹄疫病毒样颗粒和佐剂。
3.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述组合物中病毒样颗粒含量为50-150μg/ml。
4.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述组合物中病毒样颗粒含量为100μg/ml。
5.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述组合物进一步包含亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒和A型口蹄疫病毒样颗粒；所述亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒由亚洲1型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，所述A型口蹄疫病毒样颗粒由A型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成；
其中，所述亚洲1型口蹄疫病毒结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1的氨基酸序列分别为SEQID NO.21、22、23、24所示；
所述A型口蹄疫病毒结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1的氨基酸序列分别为SEQ ID NO.25、26、27、28或SEQ ID NO.29、30、31、32或SEQ ID NO.33、34、35、36所示。
6.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述佐剂包括氢氧化铝、皂苷、阿夫立定、DDA、丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物或顺丁烯二酸酐和链烯基衍生物的聚合物。
7.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述佐剂为ISA 206。
8.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述佐剂的含量为10％-60％V/V。
9.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述佐剂的含量为30％-50％V/V。
10.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述佐剂的含量为50％V/V。
11.一种制备权利要求2-10中任一项所述疫苗组合物的方法，其中，所述方法包括：
1）制备口蹄疫病毒样颗粒的步骤；
2）加入佐剂，乳化的步骤。
12.权利要求1所述的病毒样颗粒以及权利要求2-10中任一项所述的疫苗组合物在制备抗口蹄疫相关的药物中的应用。
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