CN111954682A - 针对程序性死亡配体1(pd-l1)的高亲和力中和单克隆抗体及其用途 - Google Patents

Abstract

本文公开了新颖的PD‑L1结合分子及其使用方法。所公开的PD‑L1结合分子包括中和抗PD‑L1抗体、双特异性抗体和免疫毒素。本说明书提供了所公开的PD‑L1结合分子在治疗、预防、抑制或减轻癌症或转移中的用途，或作为包括使用其他抗癌剂的治疗方案的一部分的用途。

Description

针对程序性死亡配体1(PD-L1)的高亲和力中和单克隆抗体及 其用途

本申请要求2018年3月19日提交的美国临时申请号62/644,832的权益，该临时申请全文以引用方式并入本文。

背景技术

用于治疗实体瘤的当前可用治疗策略在很大程度上起因于难以在肿瘤生长和浸润区域中达到化学治疗剂的治疗有效水平。通常，治疗是基于手术及/或放射疗法和/或化学疗法的，但是这些方法在相当大百分比的病例中产生的结果均不尽如人意。因此，显然需要改进用于治疗涉及实体瘤的癌症的当前可用疗法，及/或开发靶向所述实体瘤的新疗法。

发明内容

在一方面，本文公开了针对PD-L1的结合分子，该结合分子适用于治疗PD-L1介导的疾病和障碍。

在一方面，本文公开了分离的PD-L1结合分子，该分离的PD-L1结合分子包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如表1中所列出的一个或多个互补决定区(CDR)(例如，SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO:9和/或SEQ ID NO:10)。例如，本文公开了任何前述方面的分离的PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)，其中包含重链可变结构域的结合分子包含如以下各项中所列出的CDR：SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:9；SEQID NO:3、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:10；SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10；SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9；SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10；或SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:10。

本文还公开了任何前述方面的分离的PD-L1结合分子，该分离的PD-L1结合分子进一步包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含如表1中所列出的一个或多个CDR(例如，SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和/或SEQ ID NO:15)。例如，本文公开了任何前述方面的分离的PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)，其中包含轻链可变结构域的结合分子包含如以下各项中所列出的CDR：SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQID NO:13和SEQ ID NO:15。

本文公开的一方面为任何前述方面的PD-L1结合分子，其中PD-L1分子包含任何前述方面的重链可变结构域和轻链可变结构域两者或互补决定区(CDR)，诸如例如，包含如SEQ ID NO:1中所列出的重链可变区和/或如SEQ ID NO:2中所列出的轻链可变区的PD-L1结合分子。在一方面，任何前述方面的PD-L1结合分子可为抗体(或其片段)或免疫毒素。在一方面，本文公开了任何前述方面的抗体(或其片段)，其中该抗体(或其片段)可为中和抗体。

本文还公开了包含如SEQ ID NO:1中所列出的重链可变区和/或如SEQ ID NO:2中所列出的轻链可变区的抗体和/或免疫毒素。在一方面，本文公开了任何前述方面的任何抗体或免疫毒素的人源化形式。

本文还公开了用于治疗、预防、抑制或减轻受试者的癌症或转移(优选为PD-L1阳性癌症或肿瘤)的方法，该方法包括向所述患者施用治疗有效量的任何前述方面的抗PD-L1抗体(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)和/或抗PD-L1免疫毒素的步骤。

具体实施方式

在公开和描述本发明的化合物、组合物、制品、装置和/或方法之前，应当理解，除非另有规定，否则它们不限于特定的合成方法或特定的重组生物技术方法，或者除非另有规定，否则它们不限于特定的试剂，因而，当然也可有所变化。另外应当了解，本文使用的术语只是出于描述特定实施例的目的，并非旨在进行限制。

A.定义

如在说明书和所附权利要求书中所用，单数形式“一个”“一种”“该”和“所述”包括复数指代物，除非上下文另外明确规定不是这样。因此，例如，对“药物载体”的提及包括两个或更多这样的载体的混合物等。

范围可以在本文中表示为从“约”一个特定值和/或到“约”另一特定值。当表达此类范围时，另一实施例包括从一个特定值和/或至另一个特定值。相似地，在利用前词“约”将值表示为近似值时，应当理解，该特定值形成另一个实施例。还应当理解，每个范围的端点在相对于另一个端点和独立于另一个端点方面都是显著的。还应当理解，本文公开了许多值，并且每个值在本文中除值本身之外还被公开为“约”该特定值。例如，如果公开了值“10”，则还公开了“约10”。还应理解，当公开了“小于或等于”值、“大于或等于”值以及时，也公开了如本领域技术人员适当理解的值之间的可能范围。例如，如果公开了值“10”，则还公开了“小于或等于10”以及“大于或等于10”。还应理解，在整个申请中，数据以多种不同格式提供，并且该数据表示端点和起点，以及数据点的任何组合的范围。例如，如果公开了特定数据点“10”和特定数据点15，则应理解认为公开了大于、大于或等于、小于、小于或等于以及等于10和15以及介于10和15之间。还应理解，还公开了两个特定单元之间的每个单元。例如，如果公开了10和15，则还公开了11、12、13和14。

术语“受试者”在本文中定义为包括动物，诸如哺乳动物，包括但不限于灵长类(例如，人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。在一些实施例中，受试者是人。

向受试者“给药/施用”包括向受试者引入或递送药剂的任何途径。可通过任何合适的途径进行给药/施用，包括口服、局部、静脉、皮下、经皮、穿皮、肌肉内、关节内(intra-joint)、小动脉内、皮内、脑室内、颅内、腹腔内、病灶内、鼻内、直肠、阴道、通过吸入、通过植入的存贮器、肠外(例如，皮下、静脉、肌肉内、关节内(intra-articular)、滑膜内、胸骨内、鞘内、腹腔内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术)等。如本文所用，“并行给药”、“联合给药”、“同时给药(simultaneous administration或administered simultaneously)”意指化合物在同一时间点给药或基本上紧接着给药。在后一种情况下，该两种化合物的给药时间足够接近，以至于观察到的结果与在同一时间点给予化合物时获得的结果不可区分。“全身给药”是指通过将药剂引入或递送到受试者身体的广泛区域(例如，超过身体的50％)的途径，例如通过进入循环或淋巴系统，将药剂引入或递送给受试者。相比之下，“局部给药”是指通过一条途径向受试者引入或递送药剂，该途径将该药剂引入或递送到紧邻给药点的一个或多个区域，并且在治疗上不系统地大量引入该药剂。例如，局部给药的药剂在给药点的局部附近很容易被检测到，但在受试者身体的远侧部分不可检测到或检测到的量可以忽略不计。给药包括自我给药和他人给药。

“生物相容的”通常是指材料及其任何代谢物或降解产物通常对受试者无毒并且不对受试者造成显著的副作用。

“包含”意指组合物、方法等包括所提到的元素，但不排除其他元素。当用于定义组合物和方法时，“基本上由...组成”应指包括所提到的元素，但不包括对组合具有任何重要意义的其他元素。因此，基本上由本文所定义的元素组成的组合物不排除来自分离和纯化方法的痕量污染物和药学上可接受的载体，诸如磷酸盐缓冲盐水、防腐剂等。“由...组成”应指排除多于其他成分的痕量元素和用于给予本发明的组合物的实质性方法步骤。由这些过渡术语中的每个所定义的实施例都在本发明的范围内。

“对照”是在实验中用于比较目的的替代受试者或样本。对照可为“阳性对照”或“阴性对照”。

药剂的“有效量”是指药剂提供所需的效果的足够数量。“有效的”药剂的量将在不同受试者之间变化，取决于受试者的年龄和一般情况、特定的一种或多种药剂等许多因素。因此，并不总是能够指定量化的“有效量”。然而，任何受试者病例中的适当的“有效量”可由本领域的普通技术人员使用常规实验方法确定。此外，如本文所用，并且除非另外特别说明，否则药剂的“有效量”也可以指涵盖治疗有效量和预防有效量的量。实现治疗效应所需的药剂的“有效量”可根据诸如受试者的年龄、性别和体重等因素而变化。可调整剂量方案以提供最佳治疗反应。例如，可每天给予若干分开的剂量，或者可按照治疗情况的紧急程度按比例减少剂量。

“减少”可以指导致较小的基因表达、蛋白质表达、症状数量、疾病、组合物、病症或活动的任何变化。当含有该物质的基因产物的遗传产量与不含该物质的基因产物的遗传产量相比较小时，物质也被理解为减少基因的遗传产量。此外，举例来说，减少可以是一种障碍症状的改变，使得症状比以前观察到的要少。减少可以是统计学上显著的量的病症、症状、活动、组合物中的任何个体、中位数或平均减少。因此，只要减少非常显著，减少可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。

“抑制(Inhibit、inhibiting和inhibition)”意指降低活性、反应、病症、疾病或其他生物参数。这可以包括但不限于活动、反应、病症或疾病的完全消融。这也可以包括，例如，与未经处理的或对照水平相比，活动、反应、病症或疾病减少10％。因此，与未经处理的或对照水平相比，减少量可以是10、20、30、40、50、60、70、80、90、100％或两者之间的任何减少量。

如本文所用，术语“预防(prevent、preventing或prevention)”及其语法变体是指部分或完全延迟或阻止疾病和/或其一个或多个伴随症状的发生或复发，或阻止受试者获得或重新获得疾病或减少受试者获得或重新获得疾病或一个或多个伴随症状的风险。

“药学上可接受的”组分可指并非生物学上或以其他方式不可取的组分，即该组分可掺入本发明的药物制剂中并给予如本文所述的受试者，而不引起显著的不良生物效应或以有害的方式与包含该组分的制剂的任何其他组分相互作用。当用于提及对人体的给药时，该术语通常意味着该组分已达到毒理学和制造试验的要求标准，或者它包括在美国食品药品监督管理局所制定的非活性成分指南中。

“药学上可接受的载体”(有时称为“载体”)意指可用于制备通常安全且无毒的药物或治疗组合物的载体或赋形剂，并且包括兽医和/或人类药用或治疗用的药物可接受的载体。术语“载体”或“药学上可接受的载体”可以包括但不限于磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液(诸如油/水或水/油乳液)和/或各种类型的润湿剂。如本文所用，术语“载体”包括但不限于任何赋形剂、稀释剂、填充剂、盐、缓冲液、稳定剂、增溶剂、脂质或本领域中熟知的用于药物制剂的其他材料，并且如本文中进一步描述。

“药理活性”(或仅“活性”)，正如在“药理活性”衍生物或类似物中所用的那样，可指具有与母体化合物相同类型的药理活性并且程度大致相等的衍生物或类似物(例如，盐、酯、酰胺、缀合物、代谢物、异构体、片段等)。

“治疗剂”是指任何具有有益生物效应的组合物。有益的生物效应包括治疗效应和预防效应，其中治疗效应例如治疗障碍或其他不希望的生理病症，预防效应例如预防疾病或其他不良生理症状(例如，非免疫原性癌症)。该术语还涵盖本文中具体提及的有益剂在药学上可接受的药理活性衍生物，包括但不限于盐、酯、酰胺、前体药剂、活性代谢物、异构体、片段、类似物等。当使用术语“治疗剂”时，或者当明确标识特定的药剂时，应当理解，该术语包括药剂本身以及在药学上可接受的药理活性盐、酯、酰胺、前体药剂、缀合物、活性代谢物、异构体、片段、类似物等。

组合物(例如，包含药剂的组合物)的“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是指有效地达到所需的治疗结果的量。在一些实施例中，所需的治疗结果是控制I型糖尿病。在一些实施例中，所需的治疗结果是控制肥胖。给定治疗剂的治疗有效量通常将根据诸如所治疗的障碍或疾病的类型和严重程度以及受试者的年龄、性别和体重等因素而变化。术语还可指有效促进所需的治疗效应(如疼痛缓解)的治疗剂的量或治疗剂的递送速率(例如，随时间推移的量)。精确所需的治疗效应将根据待治疗的病症、受试者的耐受性、待给予的药剂和/或药剂制剂(例如，治疗剂的效力、制剂中的药剂浓度等)，以及本领域中的普通技术人员所理解的各种其他因素而变化。在一些情况下，在向受试者连续几天、几周或几年给予多种剂量的该组合物后，可获得所需的生物或医学反应。

在本说明书及随后的权利要求书中，将引用多个术语，将其定义为具有以下含义：

“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，并且该描述包括所述事件或情况发生的情况和所述事件或情况不发生的情况。

在整个本申请中，引用了各种出版物。这些出版物的全部公开内容据此以引用方式并入本申请，以便更全面地描述本申请所涉及的技术现状。所公开的参考文献也单独并且具体地以引用方式并入本文，参考文献中包含的材料在参考文献所依据的句子中予以讨论。

B.组合物

本发明公开了用于制备本发明所公开的组合物，以及在本文所公开的方法中使用的组合物本身。本文公开了这些及其他材料，并且应当理解，当本发明公开这些材料的组合、子集、相互作用、基团等时，虽然可能未明确公开这些化合物的各种不同的个体和集体组合和排列的具体参考，但是其中每个在本文中均得到特别考虑和描述。例如，如果公开并且讨论了特定抗PD-L1抗体并且讨论了可以对包含抗PD-L1抗体的分子的数量进行许多修改，除非指明是相反情况，否则具体考虑到抗PD-L1抗体的每种组合和排列以及可能的修改。因此，如果公开了一类分子A、B和C以及一类分子D、E和F以及组合分子的实例，则公开了A-D，那么即使未单独引用其中每一项，也认为公开了个体和集体考虑的含义组合A-E、A-F、B-D、B-E、B-F、C-D、C-E和C-F。同样，还公开了这些组合的任何子集或组合。因此，例如，将认为公开了A-E、B-F和C-E的子组。该概念适用于本申请的所有方面，包括但不限于制备和使用本发明所公开的组合物的方法中的步骤。因此，如果存在可以执行的各种附加步骤，则应当理解，这些附加步骤中的每个均可用本发明所公开的方法的任何特定实施例或实施例的组合来执行。

T细胞在抗癌免疫应答中起着至关重要的作用。T细胞活化取决于通过抗原加载的主要组织相容性复合体(MHC)呈现给T细胞受体的初始抗原特异性信号，并且取决于通过CD80/86的结合对共刺激分子CD28的活化。T细胞还表达能够下调免疫应答的共抑制分子。一种主要的共抑制受体是程序性死亡1(PD-1)。

术语“PD1”、“PD-1”和“程序性细胞死亡蛋白1”是指CD28超家族的成员，其在与其两个配体PD-L1或PD-L2相互作用时递送负信号。与其他CD28成员相比，PD-1及其配体被广泛表达，并在T细胞活化和耐受中发挥更广泛的免疫调节作用。PD-1作为在经历细胞凋亡的T细胞杂交瘤中上调的基因被分离，并且被命名为程序死亡1。PD-1具有两个配体，即程序性死亡配体1(PD-L1)和PD-L2，其中PD-L1的表达最为广泛。PD-L1也称为CD274、程序性细胞死亡1配体1(PDCD1LG1或PD-L1)或B7-H1，其是由IgC型和IgV型细胞外结构域组成的I型跨膜糖蛋白，与PD1结合。

PD-L1与PD-1的结合将抑制信号转导至T细胞，从而导致T细胞增殖的抑制、效应细胞因子分泌的减少以及可能的耗竭。通过上调PD-L1表达水平，肿瘤细胞能够逃避免疫识别和攻击。PD-L1在多种肿瘤上表达，包括乳腺癌、胃癌、肾细胞癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、黑素瘤和血液学癌症。通常，PD-1和PD-L1已被证明是不良预后因素，因为高表达水平与癌症患者的不良预后相关联。用抗PD-1和抗PD-L1抗体进行的临床前研究已显示出有希望的抗肿瘤效果，并引发了数项临床研究的开始。早期的临床试验证实了在患有难治性、晚期黑素瘤、肾癌、非小细胞肺癌和卵巢癌的患者中的客观和持久(>1年)反应。由于这些令人印象深刻的结果，II/III期研究目前正在进一步探索这些药剂的治疗功效。由于在黑色素瘤患者中令人印象深刻的疗效，FDA最近允许了派姆单抗(抗PD-1抗体)的加速批准，用于在先前疗法进展后治疗患有晚期或不可切除性黑素瘤的患者。尽管如此，仅约30％的患者看到了目前可用的抗PD-1抗体的成功结局。因此，需要新的更有效和更通用的抗PD-1/PDL-1抗体、双特异性抗体和免疫毒素。

因此，本公开涉及抗PD-L1抗体和免疫毒素，该抗PD-L1抗体和免疫毒素用于在治疗患者的肿瘤，优选PD-L1阳性肿瘤的方法中使用。本文显示出，标记的抗PD-L1抗体特异性地靶向表达PD-L1的肿瘤。因此，与毒素偶联的抗PD-L1抗体可用于治疗中，以靶向和杀死肿瘤细胞。

如本文所用，术语“免疫毒素”具有其本领域的一般含义。所谓“免疫毒素”，是指由抗体或经修饰的抗体或抗体片段(在本申请中也称为“抗体”)制成的嵌合蛋白，其连接到毒素的片段。免疫毒素的抗体共价连接到毒素的片段。优选地，毒素的片段通过接头与抗体或其片段连接。所述接头优选地选自4-巯基戊酸和6-马来酰亚胺基己酸。

术语“抗PD-L1免疫毒素”是指抗体-药物缀合物(ADC)，其中抗体部分是抗PD-L1抗体，并且其中所述抗PD-L1抗体与毒素连接。此类毒素可以是天然毒素或工程化毒素，并且可能已被去免疫以降低免疫原性。结合到其靶细胞上的PD-L1后，免疫毒素进入细胞并杀死靶细胞。如本文所用，术语“抗体”具有其本领域的一般含义。术语“抗PD-L1抗体”是指与PD-L1特异性结合的抗体。优选地，所述抗体不结合到PD-L2。

在一方面，所公开的抗PD-L1抗体可以与其他结合分子融合以产生双特异性抗体分子。此类分子可以利用PD-L1结合成分来靶向PD-L1阳性肿瘤，并且可以与针对LAG-3、TGF-β、OX40、ICOS、LIGHT以及多种其他T细胞表面抗原的抗体连接。

结合分子

如本文所用，术语“结合分子”是指完整的免疫球蛋白，包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人源化或人抗体，以及抗体片段和功能变体，其包括包含免疫球蛋白的片段的抗原结合和/或可变结构域，该片段与完整的免疫球蛋白竞争与免疫球蛋白的结合配偶体(例如，PD-L1)的特异性结合。

在一方面，所公开的PD-L1结合分子可包含抗PD-L1抗体(例如，抗PD-L1抗体)。这里广义地使用术语“抗体”，并包括多克隆抗体和单克隆抗体。如本文所用，术语“抗体”包括但不限于任何类别的完整免疫球蛋白(即，完整抗体)。除了完整的免疫球蛋白分子以外，术语“抗体”中还包括那些免疫球蛋白分子的片段或聚合物，以及人或人源化形式的免疫球蛋白分子或其片段。还公开了结合PD-L1的参与PD-L1和PD-1之间的相互作用的所公开区域的抗体。

应当理解并且在本文中考虑到，所公开的PD-L1结合分子(包括包含抗体或其片段的结合分子)结合PD-L1。然而，进一步认识到，一些PD-L1结合分子(包括包含抗体或其片段的结合分子)不仅结合PD-L1，而且中和PD-L1的生物效应(即，它们是中和结合分子)。在一方面，本文公开了PD-L1结合分子，其中PD-L1结合分子包含作为中和抗体的抗PD-L1抗体。

天然抗体通常是异四聚体糖蛋白，由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成。所公开的PD-L1结合分子，无论是单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体还是人抗体，以及抗体片段和功能变体，都可以包含全部或部分的轻链和重链。

通常，在完整抗体中，每条轻链通过一个共价二硫键与重链连接，而二硫键的数目在不同免疫球蛋白同种型的重链之间变化。每条重链和轻链还具有规则间隔的链内二硫桥。每条重链在一端具有可变结构域(V(H))，其后是多个恒定(C(H))结构域。每条轻链在其一端具有可变结构域(V(L))，并且在其另一端具有恒定(C(L))结构域，轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对齐，并且轻链的可变结构域与重链的可变结构域对齐。据信，特定的氨基酸残基在轻链可变结构域和重链可变结构域之间形成界面。来自任何脊椎动物物种的抗体的轻链可以根据它们的恒定结构域的氨基酸序列被指定为以下两种明显不同的类型中的一种：称为卡帕(κ)和拉姆达(λ)。根据其重链的恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白可分为不同类别。存在以下五大类人类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且它们中的一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如IgG-1、IgG-2、IgG-3和IgG-4；IgA-1和IgA-2。本领域技术人员将识别小鼠的可比类。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。

术语“可变的”在本文中用于描述重链和轻链的某些结构域，其在抗体间的序列不同，并且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性通常不通过抗体的可变结构域均匀地分布。可变结构域中保守性更高的部分称为框架(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR区，主要采用β-片材构型，由三个互补决定区(CDR)连接，该互补决定区形成连接并在一些情况下形成β-片材结构的一部分的环。可变性通常集中在轻链可变结构域和重链可变结构域两者中的CDR或高变区中。

每条链中的CDR通过FR区紧密靠近地保持在一起，并且与来自另一条链的CDR一起有助于形成抗体的抗原结合位点(参见Kabat E.A.等人，“Sequences of Proteins ofImmunological Interest”，National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1987))。如本文所用，术语“互补决定区”是指结合分子，诸如免疫球蛋白的可变区内的序列，其产生在形状和电荷分布与在抗原上识别的表位互补的抗原结合位点。CDR区可以对蛋白质或蛋白质片段的线性表位、不连续表位或构象表位具有特异性，或者以其天然构象存在于蛋白质上，或者在某些情况下，例如通过在SDS中增溶而以变性形式存在于蛋白质上。表位也可以由蛋白质的翻译后修饰组成。

也可以取代一个或多个CDR残基或者省略一个或多个CDR。在科学文献中已经描述了抗体，其中可以省去一个或两个CDR以用于结合。Padlan等人(1995FASEB J.9:133-139)基于公布的晶体结构分析了抗体与其抗原之间的接触区域，并得出结论，只有约五分之一至三分之一的CDR残基实际接触抗原。Padlan还发现了许多抗体，其中一个或两个CDR没有与抗原接触的氨基酸(还参见Vajdos等人，2002J Mol Biol 320:415-428)。

可以基于先前的研究，通过分子建模和/或根据经验鉴定来自位于Chothia CDR之外的Kabat CDR区域的未接触抗原的CDR残基(例如，通常不需要CDRH2中的残基H60-H65)。如果省略了CDR或其残基，则通常用占据另一个人抗体序列或此类序列的共有序列中对应位置的氨基酸取代其。CDR内的取代位置和用以取代的氨基酸也可根据经验选择。

恒定结构域不直接涉及抗体与抗原的结合，但表现出各种效应功能，诸如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。

在一方面，所公开的PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)包含可变结构域CDR中的一个或多个，如表1所示。

在一方面，本文公开了分离的PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)，该分离的PD-L1结合分子包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如表1中所列出的互补决定区(CDR)。因此，例如，一个或多个重链可变结构域CDR可包含SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:9和/或SEQ ID NO:10。在一方面，应当理解并且在本文中考虑到，本文所公开的PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)可包含重链可变结构域CDR，该重链可变结构域CDR包含来自表1中CDR列表的2个或3个重链可变结构域CDR的任何组合。因此，例如，PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)可包含如以下各项中所列出的重链可变结构域CDR：SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:7；SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:10；SEQ IDNO:4和SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:7；SEQ IDNO:4和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:10；SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQID NO:7和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:7和SEQ ID NO:10；或SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:10。在一方面，PD-L1结合分子可包含如SEQ ID NO:1中所列出的重链可变结构域。

应当理解并且在本文中考虑到，所公开的PD-L1结合分子中的重链可变结构域的公开互补决定区可以是连续的或被1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸分开。因此，本文公开了PD-L1结合分子，该PD-L1结合分子包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含至少两个CDR，其中第一CDR与第二CDR被10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸分开，并且其中第二CDR和第三CDR被25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸分开。

应当理解并且在本文中考虑到，代替或除了重链可变结构域，PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)可包含轻链可变结构域。在一方面，本文公开了分离的PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)，该分离的PD-L1结合分子包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含如表1中所列出的互补决定区(CDR)。因此，例如，一个或多个轻链可变结构域CDR可包含SEQID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和/或SEQ ID NO:15。在一方面，应当理解并且在本文中考虑到，本文所公开的PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)可包含轻链可变结构域CDR，该轻链可变结构域CDR包含来自表1中CDR列表的2个或3个轻链可变结构域CDR的任何组合。因此，例如，PD-L1结合分子可包含如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ IDNO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15。在一方面，PD-L1结合分子可包含如SEQ ID NO:2中所列出的可变轻链结构域。

应当理解并且在本文中考虑到，所公开的PD-L1结合分子中的轻链可变结构域的公开互补决定区可以是连续的或被1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸分开。因此，本文公开了PD-L1结合分子，该PD-L1结合分子包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含至少两个CDR，其中第一CDR与第二CDR被10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸分开，并且其中第二CDR和第三CDR被25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个氨基酸分开。

在一方面，应当理解并且在本文中考虑到，本文所公开的PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)可包含重链可变结构域和轻链可变结构域，每个结构域包含如表1中所列出的一个或多个互补决定区(CDR)。因此，例如，PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)可包含如以下各项中所列出的一个或多个重链可变结构域CDR：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9和/或SEQ ID NO:10和如以下各项中所列出的一个或多个轻链可变结构域CDR的组合：SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQID NO:13、SEQ ID NO:14和/或SEQ ID NO:15。因此，例如，PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)可包含如SEQ ID NO:3中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ IDNO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:4中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQID NO:5中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ IDNO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ IDNO:15；如SEQ ID NO:6中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:7中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ IDNO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:8中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ IDNO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:9中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ IDNO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:10中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ IDNO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:5中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ IDNO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQID NO:15；如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:6中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ IDNO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:7中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ IDNO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:8中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:9中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:10中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ IDNO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ IDNO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ IDNO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:7中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ IDNO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ IDNO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:8中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；如SEQID NO:4和SEQ ID NO:9中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:13和SEQ ID NO:15；如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:10中所列出的重链可变结构域CDR以及如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID 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如上所述，所公开的PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)也可为抗体的片段。如本文所用，术语“抗体或其片段”包括具有双重或多重抗原或表位特异性的嵌合抗体和杂合抗体以及片段，诸如F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv、sFv、dAb、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、二价单链抗体、双链抗体或其他双特异性抗体、三链抗体、四链抗体、包含至少足以向(多)肽赋予特异性抗原结合的免疫球蛋白片段(包括杂合片段)的(多)肽等。因此，提供保留结合其特异性抗原能力的抗体片段。例如，维持PD-L1结合活性的抗体片段包含在术语“抗体或其片段”的含义内。这些抗体和片段可以通过本领域已知的技术制备，并且可以根据实例中所述的方法和用于产生抗体和筛选抗体的特异性和活性的一般方法来筛选特异性和活性(参见Harlow和Lane，Antibodies,ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Publications,New York,(1988))。

在“抗体或其片段”的含义中还包括抗体片段和抗原结合蛋白(单链抗体)的缀合物。缀合的抗体或片段是指与效应部分或标签(诸如尤其是有毒物质、放射性物质、荧光物质、脂质体或例如在美国专利号4,704,692中所述的酶，该专利的内容据此以引用方式并入)可操作地连接或以其他方式物理或功能相关联的抗体或片段。

无论结构如何，本文公开的抗原结合片段可以与完整免疫球蛋白识别的相同抗原结合。抗原结合片段可包含肽或多肽，该肽或多肽包含结合分子的氨基酸序列的至少2个连续氨基酸残基、至少5个连续氨基酸残基、至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基、至少30个连续氨基酸残基、至少35个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基、至少125个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、至少200个连续氨基酸残基或至少250个连续氨基酸残基的氨基酸序列。

片段，无论是否附加到其他序列，也可以包括插入、删除、替换或对特定区域或特定氨基酸残基的其他选择修饰，前提是抗体或抗体片段的活性与未经修饰的抗体或抗体片段相比没有显著的改变或损害。这些修饰可以提供一些额外的特性，如去除/添加能够二硫键合的氨基酸、增加其生物寿命、改变其分泌特性等。在任何情况下，该抗体或抗体片段必须具有生物活性特性，如与其同源抗原的特异性结合。该抗体或抗体片段的功能或活性区域可通过对蛋白质的特定区域进行诱变，然后对表达的多肽进行表达和检测来确定。这些方法对于本领域技术人员来说是显而易见的，并且可以包括编码该抗体或抗体片段的核酸的位点特异性诱变(Zoller,M.J.Curr.Opin.Biotechnol.3:348-354,1992)。

如本文所用，术语“功能变体”是指包括核苷酸和/或氨基酸序列的结合分子，该核苷酸和/或氨基酸序列与亲本结合分子的核苷酸和/或氨基酸序列相比，被一个或多个核苷酸和/或氨基酸改变，并且仍然能够与亲本结合分子竞争结合结合配偶体，例如PD-L1(包括PD-L1)。换句话说，亲本结合分子的氨基酸和/或核苷酸序列的修饰不会显著影响或改变由核苷酸序列编码或包含氨基酸序列的结合分子的结合特性，即结合分子仍然能够识别并结合其目标。功能变体可具有包括核苷酸和氨基酸取代、添加和缺失的保守序列修饰。这些修饰可以通过本领域已知的标准技术(诸如定点诱变和随机PCR介导诱变)引入，并且可以包括天然以及非天然核苷酸和氨基酸。

如本文所公开的，结合分子、抗体、片段和变体能够特异性结合抗原靶标，诸如例如，PD-L1。如本文所用，术语“特异性结合”是指结合分子(例如抗体)与其结合配偶体(例如抗原)的相互作用，意指相互作用取决于结合配偶体上特定结构(例如抗原决定簇或表位)的存在。换句话说，即使当结合配偶体存在于其他分子的混合物中时，抗体也优先结合或识别结合配偶体。结合可以通过共价或非共价相互作用或两者的组合介导。换句话说，术语“特异性结合”意指与抗原或其片段免疫特异性结合，而不是与其他抗原免疫特异性结合。与抗原免疫特异性结合的结合分子可以以较低的亲和力与其他肽或多肽结合，如通过例如放射免疫测定(RIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、BIAcore或本领域已知的其他测定法所确定的。与抗原免疫特异性结合的结合分子或其片段可以与相关抗原交叉反应。优选地，与抗原免疫特异性结合的结合分子或其片段不与其他抗原交叉反应。

在一方面，本文所公开的公开抗体或结合分子可以是人抗体或人结合分子。当应用于如本文所定义的结合分子时，术语“人”是指直接来源于人或基于人序列的分子。当结合分子来源于或基于人序列并随后被修饰时，在整个说明书中该结合分子仍然被认为是人。换句话说，当应用于结合分子时，术语“人”旨在包括具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的结合分子，该可变区和恒定区基于人或人淋巴细胞中或以修饰形式存在或不存在的可变区或恒定区。因此，人结合分子可包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基，包括取代和/或缺失(例如，通过例如体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。如本文所用，“基于”是指以下情况：核酸序列可以从模板中精确复制或具有微小突变，诸如通过易错PCR方法，或合成地使模板精确匹配或具有微小修饰。基于人序列的半合成分子也被认为是如本文所用的人。

任选地，抗体在其他物种中产生并且“人源化”以对人施用。人源化形式的非人(例如，小鼠)抗体是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如Fv、Fab、Fab'、F(ab’)2或抗体的其他抗原结合子序列)，其包含来源于非人免疫球蛋白的最小序列。人源化抗体包括人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的互补决定区(CDR)的残基被来自非人物种，诸如具有期望特异性、亲和力和能力的小鼠、大鼠或兔子(供体抗体)的CDR的残基取代。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架残基被相应的非人残基取代。人源化抗体也可包含既不在受体抗体中也不在导入的CDR或框架序列中发现的残基。通常，人源化抗体将包括基本上所有至少一个、通常两个可变结构域，其中所有或基本上所有CDR区对应于非人免疫球蛋白的那些，并且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白共有序列中的那些。人源化抗体最佳地还将包括免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常是人免疫球蛋白的恒定区)的至少一部分(Jones等人，Nature,321:522-525(1986)；Riechmann等人，Nature,332:323-327(1988)；以及Presta，Curr.Op.Struct.Biol.,2:593-596(1992))。

用于人源化非人抗体的方法是本领域熟知的。通常，人源化抗体具有从非人源引入的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常称为“导入”残基，其通常取自“导入”可变结构域。通过用啮齿动物CDR或CDR序列取代人抗体的相应序列，可以基本上按照Winter及其同事的方法(Jones等人，Nature,321:522-525(1986)；Riechmann等人，Nature,332:323-327(1988)；Verhoeyen等人，Science,239:1534-1536(1988))进行人源化。因此，此类“人源化”抗体是嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中基本上少于完整人可变结构域已被来自非人物种的对应序列取代。实际上，人源化抗体通常是人类抗体，其中一些CDR残基被啮齿动物抗体中类似位点的残基取代，且一些FR残基可能被啮齿动物抗体中类似位点的残基取代。

选择用于制备人源化抗体的人可变结构域(轻链和重链两者)非常重要，以便降低抗原性。根据“最佳配合”方法，针对已知人可变区序列的整个文库筛选啮齿动物抗体的可变结构域的序列。然后接受最接近啮齿动物序列的人序列作为人源化抗体的人框架(FR)(Sims等人，J.Immunol.,151:2296(1993)以及Chothia等人，J.Mol.Biol.,196:901(1987))。另一种方法使用来源于特定轻链或重链子组的所有人抗体的共有序列的特定框架。相同的框架可用于若干种不同的人源化抗体(Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；Presta等人，J.Immunol.,151:2623(1993))。

在一些方面，重要的是抗体被人源化，同时保留对抗原的高亲和力和其他有利的生物特性。为了实现该目标，根据优选的方法，通过使用亲本和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念性人源化产物的方法来制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常是可用的并且是本领域技术人员熟悉的。可使用说明和显示所选候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构的计算机程序。检查这些显示允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可以从共有序列和导入序列中选择和组合FR残基，使得实现期望的抗体特性，诸如增加的对靶抗原的亲和力。通常，CDR残基直接且最基本地涉及影响抗原结合(参见1994年3月3日公布的WO 94/04679)。

公开了产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群体获得的抗体，即，除了可能少量存在的可能天然发生的突变之外，构成群体的各个抗体是相同的。本文中的单克隆抗体具体包括“嵌合”抗体以及此类抗体的片段(只要它们表现出期望的活性)，其中重链和/或轻链的一部分与来源于特定物种或属于特定抗体类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的其余部分与来源于另一物种或属于另一抗体类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源(参见美国专利号4,816,567和Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。

单克隆抗体可以使用杂交瘤方法来制备，诸如在Kohler和Milstein，Nature,256:495(1975)或者Harlow和Lane，Antibodies,A Laboratory Manual，Cold Spring HarborPublications,New York,(1988)中描述的那些。在杂交瘤方法中，通常用免疫剂免疫小鼠或其他合适的宿主动物，以引发产生或能够产生与免疫剂特异性结合的抗体的淋巴细胞。或者，淋巴细胞可以在体外免疫。优选地，免疫剂包括PD-L1。传统上，单克隆抗体的产生取决于纯化蛋白质或肽的可用性，以用作免疫原。最近，基于DNA的免疫已经显示出作为引发强免疫应答和产生单克隆抗体的方式的希望。在该方法中，可以使用基于DNA的免疫，其中根据本领域已知的方法并如实例中所述，将编码作为与人IgG1的融合蛋白表达的PD-L1的一部分的DNA注射到宿主动物中(例如，Kilpatrick KE等人，Gene gun delivered DNA-based immunizations mediate rapid production of murine monoclonal antibodiesto the Flt-3receptor.Hybridoma.1998年12月，17(6):569-76；Kilpatrick KE等人，High-affinity monoclonal antibodies to PED/PEA-15generated using 5microg ofDNA.Hybridoma.2000年8月，19(4):297-302；针对抗体产生方法，这两篇文献全文以引用方式并入本文)。

用纯化蛋白质或DNA免疫的另一种方法是使用杆状病毒中表达的抗原。该系统的优点包括易于产生、高水平表达，以及与哺乳动物系统中看到的高度相似的翻译后修饰。该系统的使用涉及将抗PD-L1抗体的结构域表达为融合蛋白。通过在信号序列和抗PD-L1抗体核苷酸序列的成熟蛋白结构域之间的框内插入基因片段来产生抗原。这导致在病毒粒子表面上显示外源蛋白质。该方法允许用全病毒免疫，从而消除了纯化靶抗原的需要。

通常，如果需要人源细胞，则在产生单克隆抗体的方法中使用外周血淋巴细胞(“PBL”)，或者如果需要非人哺乳动物源，则使用脾细胞或淋巴结细胞。然后使用合适的融合剂，诸如聚乙二醇将淋巴细胞与永生化细胞系融合以形成杂交瘤细胞(Goding，“Monoclonal Antibodies:Principles and Practice”，Academic Press，(1986)第59-103页)。永生化细胞系通常是转化的哺乳动物细胞，包括啮齿动物、牛、马和人来源的骨髓瘤细胞。通常，使用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。杂交瘤细胞可以在合适的培养基中培养，该培养基优选包含抑制未融合的永生化细胞生长或存活的一种或多种物质。例如，如果亲本细胞缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT)，则杂交瘤的培养基通常将包括次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(“HAT培养基”)，这些物质阻止HGPRT缺陷细胞的生长。优选的永生化细胞系是有效融合的细胞系，通过选择的抗体生成细胞支持抗体的稳定高水平表达，并且对培养基，诸如HAT培养基非常敏感。更优选的永生化细胞系是鼠骨髓瘤细胞系，其可以例如从Salk Institute Cell Distribution Center,San Diego,Calif.和American TypeCulture Collection,Rockville,Md.获得。人骨髓瘤和小鼠-人杂交骨髓瘤细胞系也已被描述用于产生人单克隆抗体(Kozbor，J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等人，“Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications”，Marcel Dekker,Inc.,New York，(1987)第51-63页)。然后可以测定培养杂交瘤细胞的培养基中是否存在针对PD-L1的单克隆抗体。优选地，由杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性通过免疫沉淀或通过体外结合测定法，诸如放射免疫测定法(RIA)或酶联免疫吸附测定法(ELISA)来确定。此类技术和测定法是本领域已知的，并且在下面的实例或Harlow和Lane，Antibodies,ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Publications,New York,(1988)中进一步描述。

在鉴定出期望的杂交瘤细胞后，克隆可以通过有限稀释或FACS分选程序亚克隆，并通过标准方法培养。用于此目的的合适培养基包括例如Dulbecco修饰的Eagle培养基和RPMI-1640培养基。或者，杂交瘤细胞可以在哺乳动物体内作为腹水生长。

亚克隆分泌的单克隆抗体可以通过常规免疫球蛋白纯化方法(诸如例如，蛋白A-琼脂糖凝胶、蛋白G、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析)从培养基或腹水中分离或纯化。

当应用于如本文所定义的结合分子时，术语“分离的”是指基本上不含其他蛋白质或多肽的结合分子，特别是不含具有不同抗原特异性并且基本上不含其他细胞或组织材料和/或化学前体或其他化学品的其他结合分子。例如，当结合分子重组产生时，它们优选基本上不含培养基，并且当结合分子通过化学合成产生时，它们优选基本上不含化学前体或其他化学物质，即它们与涉及蛋白质合成的化学前体或其他化学物质分离。优选地，“基本上不含”意指结合分子通常包括纯度为约50％、60％、70％、80％或90％，更通常为约95％，并且优选将超过99％W/W的样品。

单克隆抗体也可以通过重组DNA方法制备，诸如美国专利号4,816,567中所述的那些。可以使用常规程序来容易地对编码单克隆抗体的DNA进行分离和测序(例如，通过使用能够与编码鼠抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。杂交瘤细胞用作此类DNA的优选来源。一旦分离，可将DNA置于表达载体中，然后将其转染到宿主细胞诸如猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、浆细胞瘤细胞或不产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞中，以获得重组宿主细胞中单克隆抗体的合成。还可以例如通过以下方式来修饰DNA：用人重链和轻链恒定结构域的编码序列取代同源小鼠序列(美国专利号4,816,567)，或共价连接到免疫球蛋白的全部编码序列或非免疫球蛋白多肽的部分编码序列。任选地，此类非免疫球蛋白多肽被抗体的恒定结构域取代或被抗体的一个抗原结合位点的可变结构域取代以形成嵌合二价抗体，其包括一个对PD-L1具有特异性的抗原结合位点(包括PD-L1)和另一个对不同抗原具有特异性的抗原结合位点。

体外方法也适用于制备单价抗体。利用本领域已知的常规技术可以消化抗体以产生其片段，特别是Fab片段。例如，可以使用木瓜蛋白酶进行消化。木瓜蛋白酶消化的实例在1994年12月22日出版的WO 94/29348和美国专利号4,342,566，以及Harlow和Lane，Antibodies,A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Publications,New York,(1988)中有所描述。木瓜蛋白酶消化抗体通常产生两个相同的抗原结合片段(被称为Fab片段)，每个片段都有一个抗原结合位点和一个残留的Fc片段。胃蛋白酶处理产生称为F(ab’)2片段的片段，其具有两个抗原结合位点并且仍然能够交联抗原。

在抗体消化中产生的Fab片段还包含轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域。Fab’片段与Fab片段的不同之处在于在重链结构域的羧基末端添加了一些残基，这些残基包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。F(ab’)2片段是二价片段，其包括在铰链区通过二硫键连接的两个Fab’片段。Fab'-SH是本文中Fab'的名称，其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离巯基基团。抗体片段最初是作为Fab’片段对(它们之间具有铰链半胱氨酸)产生的。抗体片段的其他化学偶联也是已知的。

或者，可以利用转基因动物(例如，小鼠)制备所公开的抗体，该转基因动物在免疫后能够采用在不存在内源性免疫球蛋白产生的情况下产生完整的人抗体库。例如，已经描述了嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(J(H))基因的同合型缺失导致完全抑制内源性抗体产生。在这种种系突变小鼠中转移人种系免疫球蛋白基因阵列将导致在抗原攻击后产生人抗体(参见例如Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:2551-255(1993)；Jakobovits等人，Nature,362:255-258(1993)；Bruggemann等人，Year in Immuno.,7:33(1993))。人抗体也可以在噬菌体展示文库中产生(Hoogenboom等人，J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.,222:581(1991))。Cote等人和Boerner等人的技术也可用于制备人单克隆抗体(Cole等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,AlanR.Liss，第77页(1985)；Boerner等人，J.Immunol.,147(1):86-95(1991))。

还提供了抗体的分离的免疫原性特异性互补位或片段。可以通过分子的化学或机械破坏从整个抗体中分离抗体的特异性免疫原性表位。通过本文教导的方法测试由此获得的纯化片段，以确定它们的免疫原性和特异性。任选地，抗体的免疫反应性互补位被直接合成。免疫反应性片段定义为衍生自抗体氨基酸序列的至少约2至5个连续氨基酸的氨基酸序列。

产生包含抗体的蛋白质的一种方法是通过蛋白质化学技术将两种或更多种肽或多肽连接在一起。例如，可以使用目前可用的实验室设备，使用Fmoc(9-芴甲氧羰基)或Boc(叔丁氧羰基)化学品来化学合成肽或多肽。(Applied Biosystems,Inc.,Foster City,CA)。本领域技术人员可以容易地理解，例如，对应于抗体的肽或多肽可以通过标准化学反应合成。例如，可合成肽或多肽而不从其合成树脂切割，而抗体的另一片段可合成并随后从树脂切割，从而在另一片段上暴露功能性阻断的末端基团。通过肽缩合反应，这两个片段可以分别经由它们的羧基和氨基末端的肽键共价连接，以形成抗体或其片段。(Grant GA(1992)Synthetic Peptides:A User Guide.W.H.Freeman and Co.，N.Y.(1992)；BodanskyM和Trost B.编辑，(1993)Principles of Peptide Synthesis.Springer-Verlag Inc.,NY)。或者，肽或多肽如上所述在体内独立合成。一旦分离，这些独立的肽或多肽可经由类似的肽缩合反应连接以形成抗体或其片段。

例如，克隆或合成肽片段的酶促连接允许相对较短的肽片段连接以产生更大的肽片段、多肽或完整的蛋白质结构域(Abrahmsen L等人，Biochemistry,30:4151(1991))。或者，合成肽的天然化学连接可用于从较短的肽片段合成构建较大的肽或多肽。该方法由两步化学反应组成(Dawson等人，Synthesis of Proteins by Native ChemicalLigation.Science,266:776-779(1994))。第一步是未保护合成肽-α-硫酯与另一个包含氨基末端Cys残基的未保护肽片段的化学选择性反应，得到硫酯连接的中间体作为初始共价产物。在不改变反应条件的情况下，该中间体进行自发的快速分子内反应，以在连接位点处形成天然肽键。通过人白介素8(IL-8)的制备说明了这种天然化学连接方法在蛋白质分子的全合成中的应用(Baggiolini M等人，(1992)FEBS Lett.307:97-101；Clark-Lewis I等人，J.Biol.Chem.,269:16075(1994)；Clark-Lewis I等人，Biochemistry,30:3128(1991)；Rajarathnam K等人，Biochemistry 33:6623-30(1994))。

或者，未保护的肽片段是化学连接的，其中由于化学连接而在肽片段之间形成的键是非天然(非肽)键(Schnolzer,M等人，Science,256:221(1992))。该技术已被用于合成蛋白质结构域的类似物以及具有完整生物活性的大量相对较纯的蛋白质(deLisle MiltonRC等人，Techniques in Protein Chemistry IV.Academic Press,New York，第257-267页(1992))。

还公开了具有生物活性的抗体片段。多肽片段可以是通过在能够产生其多肽片段的表达系统，诸如腺病毒或杆状病毒表达系统中克隆编码多肽的核酸而获得的重组蛋白。例如，可以确定来自特定杂交瘤的抗体的活性结构域，该特定杂交瘤可以引起与抗体与PD-L1的相互作用相关联的生物效应。例如，可以除去发现对抗体的活性或结合特异性或亲和力无贡献的氨基酸而不损失各自的活性。例如，在各种实施例中，从天然或修饰的非免疫球蛋白分子或免疫球蛋白分子中依次去除氨基或羧基末端氨基酸，并在许多可用测定中的一个中测定各自的活性。在另一个实例中，抗体片段包括修饰的抗体，其中在特定位置处至少一个氨基酸已经被天然存在的氨基酸取代，并且氨基末端或羧基末端氨基酸的一部分或甚至抗体的内部区域，已被多肽片段或其他部分诸如生物素取代，其可促进修饰抗体的纯化。例如，可以通过肽化学将修饰的抗体与麦芽糖结合蛋白融合，或者将编码两个多肽片段的相应核酸克隆到表达载体中，使得编码区的表达产生杂合多肽。杂合多肽可以通过使其通过直链淀粉亲和柱进行亲和纯化，并且通过用特异性蛋白酶因子Xa切割杂合多肽，可以将修饰的抗体受体与麦芽糖结合区分开。(参见例如New England Biolabs ProductCatalog,1996，第164页)。类似的纯化程序也可用于从真核细胞中分离杂合蛋白。

无论是否连接到其他序列，片段包括特定区域或特定氨基酸残基的插入、缺失、取代或其他选择的修饰，前提条件是，与未修饰的抗体或抗体片段相比，片段的活性没有显著改变或受损。这些修饰可以提供一些附加的性质，诸如为氨基酸去除或添加二硫键、增加其生物寿命、改变其分泌特性等。在任何情况下，该片段必须具有生物活性，诸如结合活性、在结合结构域处的结合的调节等。可以通过诱变蛋白质的特定区域，然后表达和测试表达的多肽来鉴定抗体的功能或活性区域。这些方法对于本领域技术人员来说是显而易见的，并且可以包括编码抗原的核酸的位点特异性诱变。(Zoller MJ等人，Nucl.Acids Res.10:6487-500(1982))。

多种免疫测定形式可用于选择与特定蛋白质、变体或片段选择性地结合的抗体。例如，通常使用固相ELISA免疫测定法来选择与蛋白质、蛋白质变体或其片段选择性免疫反应的抗体。参见Harlow和Lane，Antibodies,A Laboratory Manual，Cold Spring HarborPublications,New York,(1988)中对于可用于确定选择性结合的免疫测定形式和条件的描述。单克隆抗体的结合亲和力可以例如通过Munson等人，Anal.Biochem,107:220(1980)的斯卡查德分析来确定。

还提供了抗体试剂盒，该抗体试剂盒包括单克隆抗体或其片段的容器和用于检测抗PD-L1抗体或其片段与PD-L1分子的结合的一种或多种试剂。该试剂可包括例如荧光标签、酶标签或其他标签。该试剂还可以包括用于酶促反应的二抗、三抗或试剂，其中酶促反应产生可以可视化的产物。

1.同源性/同一性

应当理解，定义本文公开的基因和蛋白质的任何已知变体和衍生物或可能出现的那些的一种方法是通过依据与特定已知序列的同源性定义变体和衍生物。例如，表4列出了PD-L1重链可变结构域的特定序列。具体公开了本文公开的这些和其他基因和蛋白质的变体，这些变体与所述序列具有至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的同源性。本领域技术人员容易理解如何确定两种蛋白质或核酸，例如基因的同源性。例如，可以在比对两个序列之后计算同源性，使得同源性处于其最高水平。

计算同源性的另一种方法可以通过公开的算法进行。用于比较的序列的最佳比对可以通过Smith和Waterman Adv.Appl.Math.2:482(1981)的局部同源性算法，通过Needleman和Wunsch,J.MoL Biol.48:443(1970)的同源性比对算法，通过Pearson和Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:2444(1988)的相似性搜索法，通过这些算法的计算机化实现(威斯康星州遗传学软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，GeneticsComputer Group,575Science Dr.,Madison,WI)，或通过检验来进行。

应当理解，通常可以使用任何方法，并且在某些情况下，这些不同方法的结果可能不同，但是本领域技术人员理解，如果使用这些方法中的至少一种找到同一性，则该序列将被认为具有所述同一性，并在本文公开。

例如，如本文所用，被列举为与另一序列具有特定百分比同源性的序列是指具有通过上述任何一种或多种计算方法计算出的所列举的同源性的序列。例如，如果使用Zuker计算方法计算出第一序列与第二序列具有80％的同源性，则即使通过任何其他计算方法计算的，第一序列与第二序列不具有80％的同源性，第一序列与第二序列仍具有80％的同源性，如本文所定义。作为另一个实例，如果使用Zuker计算方法以及Pearson和Lipman计算方法计算出第一序列与第二序列具有80％的同源性，则即使通过Smith和Waterman计算方法、Needleman和Wunsch计算方法、Jaeger计算方法，或任何其他计算方法计算的，第一序列与第二序列不具有80％的同源性，第一序列与第二序列仍具有80％的同源性，如本文所定义。作为又一个实例，如果使用每种计算方法计算出第一序列与第二序列具有80％的同源性，则第一序列与第二序列具有80％的同源性，如本文所定义(尽管，在实践中，不同的计算方法通常会导致不同的计算的同源性百分比)。

2.肽

a)蛋白质变体

如本文所讨论的，本文公开的PD-L1结合分子和PD-L1结合CDR以及重链和轻链可变区的许多变体是已知的并且是本文中考虑到的。另外，对于已知的功能性菌株变体，存在PD-L1结合分子和PD-L1结合CDR以及重链和轻链可变区的衍生物，其也在所公开的方法和组合物中起作用。蛋白质变体和衍生物是本领域技术人员熟知的，并且可以涉及氨基酸序列修饰。例如，氨基酸序列修饰通常属于以下三类中的一类或多类：取代变体、插入变体或缺失变体。如本文所用，“插入”是指氨基酸或核苷酸序列中的变化，与亲本(通常是天然存在的)分子相比，分别导致添加一个或多个氨基酸或核苷酸残基。插入包括氨基和/或羧基末端融合以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。插入通常是比氨基或羧基末端融合的那些更小的插入，例如，大约一至四个残基。免疫原性融合蛋白衍生物，诸如实例中描述的那些，是通过以下方式来制备的：融合足够大的多肽，以通过体外交联或通过用编码融合体的DNA转化的重组细胞培养物赋予靶序列免疫原性。缺失的特征在于从蛋白质序列中去除一个或多个氨基酸残基。通常，在蛋白质分子内的任何一个位点缺失不超过约2至6个残基。这些变体通常通过编码蛋白质的DNA中核苷酸的位点特异性诱变来制备，从而产生编码变体的DNA，然后在重组细胞培养物中表达DNA。在具有已知序列的DNA中的预定位点处进行取代突变的技术是众所周知的，例如，M13引物诱变和PCR诱变。氨基酸取代通常是单个残基，但可以一次发生在多个不同的位置，插入通常将为约1至10个氨基酸残基的顺序，并且缺失将在约1至30个残基的范围内。缺失或插入优选在相邻对中进行，即缺失2个残基或插入2个残基。取代、缺失、插入或其任何组合可以组合以获得最终构建体。突变不得将序列置于阅读框之外，并且优选地不会形成可产生二级mRNA结构的互补区。取代变体是其中已去除至少一个残基并在其位置插入不同残基的变体。此类取代通常根据下表5进行，并称为保守取代。

表4：氨基酸缩写

表5：氨基酸取代

原始残基示例性保守取代，其他在本领域中是已知的。

通过选择比表5中的取代更不保守的取代来进行功能或免疫同一性的显著变化，即选择在维持(a)取代区域中多肽骨架的结构(例如像片状或螺旋构象)、(b)靶位点处分子的电荷或疏水性或(c)侧链的大部分的方面效果更显著不同的残基。保守氨基酸取代包括其中氨基酸残基被具有相似结构或化学性质的氨基酸残基取代的氨基酸取代。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中定义。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸)、具有β-支化侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳香侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。

通常预期会在蛋白质性质中产生最大变化的取代是其中(a)亲水残基(例如，丝氨酰或苏氨酰)被(或由)疏水残基(例如，亮氨酰、异亮氨酰、苯丙氨酰、缬氨酰或丙氨酰)取代，(b)半胱氨酸或脯氨酸被(或由)任何其他残基取代，(c)具有带正电荷的侧链的残基(例如，赖氨酰、精氨酰或组氨酰)被(或由)带负电荷的残基(例如，谷氨酰或天冬氨酰)取代，或者(d)具有庞大侧链的残基(例如，苯丙氨酸)被(或由)不具有侧链的残基(例如，甘氨酸)取代，在这种情况下，(e)通过增加硫酸化和/或糖基化位点的数量的取代。

用生物学上和/或化学上相似的一个氨基酸残基取代另一个氨基酸残基是本领域技术人员已知的保守取代。例如，保守取代将一个疏水残基取代为另一个疏水残基，或将一个极性残基取代为另一个极性残基。取代包括组合，诸如例如Gly、Ala；Val、Ile、Leu；Asp、Glu；Asn、Gln；Ser、Thr；Lys、Arg；以及Phe、Tyr。每种明确公开的序列的这种保守取代的变体包括在本文提供的镶嵌多肽中。

可以采用取代或缺失诱变来插入N-糖基化(Asn-X-Thr/Ser)或O-糖基化(Ser或Thr)的位点。缺失半胱氨酸或其他不稳定残基也可能是理想的。潜在蛋白水解位点(例如Arg)的缺失或取代，例如，通过缺失碱性残基中的一个或用谷氨酰胺酰或组氨酰残基取代一个碱性残基来完成。

某些翻译后衍生化是重组宿主细胞对表达多肽的作用的结果。谷氨酰胺酰和天冬酰胺酰残基经常在翻译后脱酰胺成相应的谷氨酰和天冬酰残基。或者，这些残基在温和的酸性条件下脱酰胺。其他翻译后修饰包括脯氨酸和赖氨酸的羟基化，丝氨酰或苏氨酰残基的羟基基团的磷酸化，赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的o-氨基基团的甲基化(T.E.Creighton,Proteins:Structure and Molecular Properties，W.H.Freeman&Co.,San Francisco，第79-86页[1983])，N-末端胺的乙酰化，以及在某些情况下，C-末端羧基的酰胺化。

应当理解，定义本文公开的蛋白质的变体和衍生物的一种方法是通过依据与特定已知序列的同源性/同一性定义变体和衍生物。例如，SEQ ID NO:1和2。具体公开了本文公开的这些和其他蛋白质的变体，这些变体与所述序列具有至少70％或75％或80％或85％或90％或95％的同源性。本领域技术人员容易理解如何确定两种蛋白质的同源性。例如，可以在比对两个序列之后计算同源性，使得同源性处于其最高水平。

计算同源性的另一种方法可以通过公开的算法进行。用于比较的序列的最佳比对可以通过Smith和Waterman Adv.Appl.Math.2:482(1981)的局部同源性算法，通过Needleman和Wunsch,J.MoL Biol.48:443(1970)的同源性比对算法，通过Pearson和Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:2444(1988)的相似性搜索法，通过这些算法的计算机化实现(威斯康星州遗传学软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，GeneticsComputer Group,575Science Dr.,Madison,WI)，或通过检验来进行。

可通过例如以下文献中公开的算法来获得相同类型的核酸同源性：Zuker,M.Science 244:48-52,1989；Jaeger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:7706-7710,1989；Jaeger等人，Methods Enzymol.183:281-306,1989。

应当理解，保守突变和同源性的描述可以以任何组合组合在一起，诸如与特定序列具有至少70％同源性的实施例，其中变体是保守突变。

由于本说明书讨论了各种蛋白质和蛋白质序列，因此应当理解，还公开了可编码那些蛋白质序列的核酸。这将包括与特定蛋白质序列相关的所有简并序列，即具有编码一种特定蛋白质序列的序列的所有核酸以及编码所公开的蛋白质序列的变体和衍生物的所有核酸，包括简并核酸。因此，虽然本文中可能没有写出每个特定的核酸序列，但应当理解，实际上通过公开的蛋白质序列在本文公开和描述了每个序列。另外，例如，用公开的SEQ IDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的保守衍生物，诸如异亮氨酸(I)取代缬氨酸(V)。应当理解，对于该突变，还公开了编码SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的该特定衍生物的所有核酸序列。

应当理解，存在可被掺入所公开的组合物中的许多氨基酸和肽类似物。例如，存在许多D氨基酸或具有与表4和表5中所示的氨基酸不同的功能取代基的氨基酸。公开了天然存在的肽的相反立体异构体，以及肽类似物的立体异构体。通过用所选择的氨基酸装载tRNA分子并使利用例如琥珀密码子以位点特异性方式将类似物氨基酸插入肽链的基因构建体工程化，可以容易地将这些氨基酸掺入多肽链中。

可以产生类似于肽但不经由天然肽键连接的分子。例如，氨基酸或氨基酸类似物的键可包括CH₂NH--、--CH₂S--、--CH₂--CH₂--、--CH＝CH--(顺式和反式)、--COCH₂--、--CH(OH)CH₂--和--CHH₂SO—(这些键和其他键可见于以下参考文献中：Spatola,A.F.，Chemistry and Biochemistry of Amino Acids,Peptides,and Proteins，B.Weinstein编辑，Marcel Dekker,New York，第267页(1983)；Spatola,A.F.，Vega Data(1983年3月)，第1卷，第3期，Peptide Backbone Modifications(general review)；Morley，Trends PharmSci(1980)，第463-468页；Hudson,D.等人，Int J Pept Prot Res 14:177-185(1979)(--CH₂NH--,CH₂CH₂--)；Spatola等人，Life Sci38:1243-1249(1986)(--CH H₂--S)；HannJ.Chem.Soc Perkin Trans.I 307-314(1982)(--CH--CH--，顺式和反式)；Almquist等人，J.Med.Chem.23:1392-1398(1980)(--COCH₂--)；Jennings-White等人，Tetrahedron Lett23:2533(1982)(--COCH₂--)；Szelke等人，European Appln,EP 45665CA(1982):97:39405(1982)(--CH(OH)CH₂--)；Holladay等人，Tetrahedron.Lett 24:4401-4404(1983)(--C(OH)CH₂--)；以及Hruby Life Sci 31:189-199(1982)(--CH₂--S--)；其中每一篇文献都以引用方式并入本文。特别优选的非肽键是--CH₂NH--。应当理解，肽类似物可在键原子之间具有多于一个原子，诸如b-丙氨酸、g-氨基丁酸等。

氨基酸类似物和类似物和肽类似物通常具有增强的或期望的性质，诸如更经济的生产、更好的化学稳定性、增强的药理学性质(半衰期、吸收、效力、功效等)、改变的特异性(例如，广谱的生物活性)、降低的抗原性等。

D-氨基酸可用于产生更稳定的肽，因为D氨基酸不被肽酶等识别。用相同类型的D-氨基酸(例如，用D-赖氨酸代替L-赖氨酸)系统取代共有序列的一个或多个氨基酸可用于产生更稳定的肽。半胱氨酸残基可用于将两个或更多个肽环化或连接在一起。这有利于将肽限制为特定构象。

在一方面，所公开的PD-L1结合分子可以进一步包括标记。如本文所用，标记可包括荧光染料、结合对的成员诸如生物素/链霉亲和素、金属(例如，金)、放射性取代基或可与可检测的分子特异性相互作用的表位标签，诸如通过产生有色底物或荧光来检测。适于可检测地标记蛋白质的物质包括荧光染料(本文中也称为荧色物和荧光团)以及与比色底物反应的酶(例如，辣根过氧化物酶)。在本发明的实践中通常优选使用荧光染料，因为它们可以以非常低的量检测。

荧光团是发光的化合物或分子。通常，荧光团以一个波长吸收电磁能并以第二波长发射电磁能。代表性荧光团包括但不限于1,5IAEDANS；1,8-ANS；4-甲基伞形酮；5-羧基-2,7-二氯荧光素；5-羧基荧光素(5-FAM)；5-羧基萘酚荧光素；5-羧基四甲基罗丹明(5-TAMRA)；5-羟色胺(5-HAT)；5-ROX(羧基-X-罗丹明)；6-羧基罗丹明6G；6-CR 6G；6-JOE；7-氨基-4-甲基香豆素；7-氨基放线菌素D(7-AAD)；7-羟基-4-I甲基香豆素；9-氨基-6-氯-2-甲氧基吖啶(ACMA)；ABQ；酸性品红；吖啶橙；吖啶红；吖啶黄；锥虫黄；锥虫黄孚尔根SITSA；水母发光蛋白(光蛋白)；AFP-自体荧光蛋白质-(量子生物技术)参见sgGFP、sgBFP；AlexaFluor 350^TM；Alexa Fluor 430^TM；Alexa Fluor 488^TM；Alexa Fluor 532^TM；Alexa Fluor546^TM；Alexa Fluor 568^TM；Alexa Fluor 594^TM；Alexa Fluor 633^TM；Alexa Fluor 647^TM；Alexa Fluor 660^TM；Alexa Fluor 680^TM；茜素络合指示剂；茜素红；别藻蓝蛋白(APC)；AMC、AMCA-S；氨甲基香豆素(AMCA)；AMCA-X；氨基放线菌素D；氨基香豆素；苯胺蓝；硬脂酸蒽；APC-Cy7；APTRA-BTC；APTS；阿斯屈拉崇亮红4G；阿斯屈拉崇橙R；阿斯屈拉崇红6B；阿斯屈拉崇黄7GLL；阿的平；ATTO-TAG^TM CBQCA；ATTO-TAG^TM FQ；金胺；Aurophosphine G；Aurophosphine；BAO 9(双氨基苯基恶二唑)；BCECF(高pH)；BCECF(低pH)；硫酸黄连素；β-内酰胺酶；BFP蓝移GFP(Y66H)；蓝色荧光蛋白；BFP/GFP FRET；Bimane；Bisbenzemide；Bisbenzimide(Hoechst)；双BTC；布兰科福尔FFG；布兰科福尔SV；BOBO^TM-1；BOBO^TM-3；氟硼荧492/515；氟硼荧493/503；氟硼荧500/510；氟硼荧505/515；氟硼荧530/550；氟硼荧542/563；氟硼荧558/568；氟硼荧564/570；氟硼荧576/589；氟硼荧581/591；氟硼荧630/650-X；氟硼荧650/665-X；氟硼荧665/676；氟硼荧Fl；氟硼荧FL ATP；氟硼荧Fl-神经酰胺；氟硼荧R6G SE；氟硼荧TMR；氟硼荧TMR-X缀合物；氟硼荧TMR-X、SE；氟硼荧TR；氟硼荧TR ATP；氟硼荧TR-X SE；BO-PRO^TM-1；BO-PRO^TM-3；亮磺基黄素FF；BTC；BTC-5N；钙黄绿素；钙黄绿素蓝；钙红-；钙绿；钙绿-1Ca²⁺染料；钙绿-2Ca²⁺；钙绿-5N Ca²⁺；钙绿-C18 Ca²⁺；钙橙；钙荧光白；羧基-X-罗丹明(5-ROX)；级联蓝^TM；级联黄；儿茶酚胺；CCF2(GeneBlazer)；CFDA；CFP(青色荧光蛋白)；CFP/YFP FRET；叶绿素；色霉素A；CL-NERF；CMFDA；腔肠素；腔肠素cp；腔肠素f；腔肠素fcp；腔肠素h；腔肠素hcp；腔肠素ip；腔肠素n；腔肠素O；香豆素鬼笔环肽；C-藻蓝蛋白；CPM I甲基香豆素；CTC；CTC甲臜；Cy2^TM；Cy3.1 8；Cy3.5^TM；Cy3^TM；Cy5.1 8；Cy5.5^TM；Cy5^TM；Cy7^TM；青色GFP；环腺苷酸氟传感器(FiCRhR)；Dabcyl；丹酰；丹酰胺；丹酰尸胺；丹酰氯；丹酰DHPE；丹酰氟；DAPI；Dapoxyl；Dapoxyl 2；Dapoxyl 3’DCFDA；DCFH(二氯双氢荧光素二乙酸酯)；DDAO；DHR(二氢罗丹明123)；二-4-ANEPPS；二-8-ANEPPS(非定比)；DiA(4-Di16-ASP)；二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH)；DiD-亲脂示踪剂；DiD(DilC18(5))；DIDS；二氢罗丹明123(DHR)；Dil(DilC18(3))；I二硝基苯酚；DiO(DiOC18(3))；DiR；DiR(DilC18(7))；DM-NERF(高pH)；DNP；多巴胺；DsRed；DTAF；DY-630-NHS；DY-635-NHS；EBFP；ECFP；EGFP；ELF 97；伊红；赤藓红；赤藓红ITC；溴化乙锭；溴乙啡锭二聚体-1(EthD-1)；Euchrysin；EukoLight；氯化铕(111)；EYFP；速蓝；FDA；孚尔根(副品红)；FIF(甲醛诱导的荧光)；FITC；Flazo Orange；Fluo-3；Fluo-4；荧光素(FITC)；荧光素二乙酸酯；荧光祖母绿；荧光金(羟芪巴脒)；Fluor-Ruby；FluorX；FM 1-43^TM；FM 4-46；Fura Red^TM(高pH)；Fura Red^TM/Fluo-3；Fura-2；Fura-2/BCECF；Genacryl亮红B；Genacryl亮黄10GF；Genacryl粉红3G；Genacryl黄5GF；GeneBlazer；(CCF2)；GFP(S65T)；GFP红移(rsGFP)；非UV激发的GFP野生型(wtGFP)；UV激发的GFP野生型(wtGFP)；GFPuv；Gloxalic Acid；粒状蓝；血卟啉；Hoechst 33258；Hoechst 33342；Hoechst34580；HPTS；羟基香豆素；羟芪巴脒(荧光金)；羟色胺；Indo-1高钙；Indo-1低钙；吲哚二碳菁(DiD)；吲哚三碳菁(DiR)；Intrawhite Cf；JC-1；JO JO-1；JO-PRO-1；LaserPro；Laurodan；LDS 751(DNA)；LDS 751(RNA)；Leucophor PAF；Leucophor SF；Leucophor Ws；丽丝胺罗丹明；丽丝胺罗丹明B；钙黄绿素/溴乙啡锭二聚体；LOLO-1；LO-PRO-1；荧光黄；溶酶体蓝色探针；溶酶体蓝白探针；溶酶体绿色探针；溶酶体红色探针；溶酶体黄色探针；LysoSensor蓝；LysoSensor绿；LysoSensor黄/蓝；Mag绿；萘红(根皮红B)；Mag-Fura红；Mag-Fura-2；Mag-Fura-5；Mag-lndo-1；镁绿；镁橙；孔雀绿；海蓝；I Maxilon Brilliant Flavin10GFF；Maxilon Brilliant Flavin 8GFF；部花青；甲氧基香豆素；线粒体绿色荧光探针Fm；线粒体橙色荧光探针；线粒体红色荧光探针；光辉霉素；单溴二胺；单溴二胺(mBBr-GSH)；单氯二胺；MPS(甲基绿派洛宁二苯乙烯)；NBD；NBD胺；尼罗红；硝基苯并噁二唑；去甲肾上腺素；核固红；i核黄；Nylosan Brilliant lavin E8G；俄勒冈绿^TM；俄勒冈绿^TM 488；俄勒冈绿^TM 500；俄勒冈绿^TM 514；太平洋蓝；副品红(孚尔根)；PBFI；PE-Cy5；PE-Cy7；PerCP；PerCP-Cy5.5；PE-TexasRed(红613)；根皮红B(萘红)；Phorwite AR；Phorwite BKL；Phorwite Rev；Phorwite RPA；磷化氢3R；光致抗蚀剂；藻红蛋白B[Pe]；藻红蛋白R[PE]；PKH26(Sigma)；PKH67；PMIA；Pontochrome蓝黑；POPO-1；POPO-3；PO-PRO-1；PO-I PRO-3；樱草灵；普施安黄；Propidium lodid(Pl)；PyMPO；芘；派洛宁；派洛宁B；Pyrozal BrilliantFlavin 7GF；QSY7；芥奎吖因；试卤灵；RH 414；Rhod-2；罗丹明；罗丹明110；罗丹明123；罗丹明5GLD；罗丹明6G；罗丹明B；罗丹明B 200；碱性玫瑰精；罗丹明BB；罗丹明BG；罗丹明绿；罗丹明Phallicidine；罗丹明：鬼笔环肽；罗丹明红；罗丹明WT；玫瑰红；R-藻蓝蛋白；R-藻红蛋白(PE)；rsGFP；S65A；S65C；S65L；S65T；宝石蓝GFP；SBFI；血清素；Sevron亮红2B；Sevron亮红4G；Sevron I亮红B；Sevron橙；Sevron黄L；sgBFP^TM(超级发光BFP)；sgGFP^TM(超级发光GFP)；SITS(樱草灵；二苯乙烯异硫代磺酸)；SNAFL钙黄绿素；SNAFL-1；SNAFL-2；SNARF钙黄绿素；SNARF1；钠绿；SpectrumAqua；Spectrum绿；Spectrum橙；Spectrum红；SPQ(-甲氧基-N-(3磺丙基)喹啉)；二苯乙烯；磺酰罗丹明B和C；超磺酰罗丹明；SYTO 11；SYTO 12；SYTO 13；SYTO 14；SYTO 15；SYTO 16；SYTO 17；SYTO 18；SYTO 20；SYTO 21；SYTO 22；SYTO 23；SYTO24；SYTO 25；SYTO 40；SYTO 41；SYTO 42；SYTO 43；SYTO 44；SYTO 45；SYTO 59；SYTO 60；SYTO 61；SYTO 62；SYTO 63；SYTO 64；SYTO 80；SYTO 81；SYTO 82；SYTO 83；SYTO 84；SYTO85；SYTOX蓝；SYTOX绿；SYTOX橙；四环素；四甲基罗丹明(TRITC)；德克萨斯红^TM；德克萨斯红-X^TM缀合物；硫代二碳花菁(DiSC3)；噻嗪红R；噻唑橙；硫磺素5；硫磺素S；硫磺素TON；Thiolyte；硫唑橙；Tinopol CBS(钙荧光白)；TIER；TO-PRO-1；TO-PRO-3；TO-PRO-5；TOTO-1；TOTO-3；TriColor(PE-Cy5)；TRITC四甲基罗丹明异硫代氰酸酯；True蓝；Tru红；Ultralite；荧光素钠B；Uvitex SFC；wt GFP；WW 781；X-罗丹明；XRITC；二甲酚橙；Y66F；Y66H；Y66W；Yellow GFP；YFP；YO-PRO-1；YO-PRO 3；YOYO-1；YOYO-3；Sybr绿；噻唑橙(内螯合染料)；半导体纳米粒子诸如量子点；或封闭荧光团(可用光或其他电磁能源活化)，或它们的组合。

改性剂单元，诸如放射性核素可通过卤化并入或直接连接到本文所述的任何化合物上。可用于该实施例的放射性核素的实例包括但不限于氚、碘-125、碘-131、碘-123、碘-124、砹-210、碳-11、碳-14、氮-13、氟-18。在另一方面，放射性核素可以连接到连接基团或通过螯合基团结合，然后螯合基团直接或通过连接基团连接到化合物。可用于该方面的放射性核素的实例包括但不限于Tc-99m、Re-186、Ga-68、Re-188、Y-90、Sm-153、Bi-212、Cu-67、Cu-64和Cu-62。诸如这些的放射性标记技术通常用于放射性药物工业中。

放射性标记的化合物可用作诊断神经疾病(例如，神经变性疾病)或精神病症或跟踪哺乳动物(例如人)中这种疾病或病症的进展或治疗的显像剂。本文所述的放射性标记的化合物可以方便地与成像技术结合使用，诸如正电子发射计算机断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)。

标记可以是直接或间接的。在直接标记中，检测抗体(所关注分子的抗体)或检测分子(可以通过所关注分子的抗体结合的分子)包括标记。对标记的检测表明存在检测抗体或检测分子，其继而分别表明存在所关注分子或所关注分子的抗体。在间接标记中，使另外的分子或部分与免疫复合物接触或在免疫复合物的位点处产生。例如，信号产生分子或部分(诸如酶)可以与检测抗体或检测分子连接或相关联。然后，信号产生分子可以在免疫复合物的位点处产生可检测的信号。例如，当提供有合适的底物时，酶可以在免疫复合物的位点处产生可见的或可检测的产物。ELISA使用这种类型的间接标记。

作为间接标记的另一个实例，可以与所关注分子或所关注分子的抗体(一抗)结合的另外的分子(可以称为结合剂)，诸如与一抗结合的第二抗体，可以与免疫复合物接触。另外的分子可以具有标记或信号产生分子或部分。另外的分子可为抗体，因此可以称为二抗。将二抗与一抗结合可以与第一(或一级)抗体和所关注分子形成所谓的“三明治”。免疫复合物可以在有效条件下与标记的二抗接触，并持续足以允许形成二级免疫复合物的一段时间。然后通常可以清洗二级免疫复合物以去除任何非特异性结合的标记的二抗，并且可以检测二级免疫复合物中的剩余标记。另外的分子也可以是或包括可以彼此结合的一对分子或部分中的一个，诸如生物素/亲和素对。在这种模式下，检测抗体或检测分子应包括该对中的另一个成员。

其他间接标记模式包括通过两步法检测一级免疫复合物。例如，如上所述，对所关注分子或相应抗体具有结合亲和力的分子(可以称为第一结合剂)，诸如抗体，可以用于形成二级免疫复合物。洗涤后，二级免疫复合物可以与对第一结合剂具有结合亲和力的另一种分子(可以称为第二结合剂)接触，同样是在有效条件下并持续足以允许形成免疫复合物的一段时间(从而形成三级免疫复合物)。第二结合剂可以与可检测的标记或信号产生分子或部分连接，从而允许检测由此形成的三级免疫复合物。该系统可以供信号放大。

3.药物载体/药品的递送

如上所述，组合物还可以在药学上可接受的载体(本文中也称为药学上可接受的赋形剂)中体内施用。所谓“药学上可接受”意指在生物学上或其他方面不具有惰性的材料，即，该材料可与核酸或载体一起施用于受试者，而不会造成任何不期望的生物效应或以有害方式与包含其的药物组合物的任何其他组分相互作用。如本领域技术人员所熟知，该载体将自然地被选择，以最小化该活性成分的任何降解，并最小化该受试者中的任何不利副作用。因此，在一方面，本文公开了包含本文公开的任何PD-L1结合分子的药物组合物。

可经口服、肠外(例如静脉)、肌肉注射、腹腔注射、经皮、体外、局部等方式给药，包括局部鼻内给药或通过吸入剂给药。如本文所用，“局部鼻内给药”意指通过一个或两个鼻孔将该组合物递送至鼻腔和鼻腔通道，且可包括通过喷雾机制或液滴机制递送，或通过核酸或载体的喷雾化递送。通过吸入剂的组合物的给药是通过鼻腔或口腔、通过喷雾或液滴机制递送。通过插管，递送也可以直接到达呼吸系统的任何区域(例如肺)。所需组合物的确切数量因受试者而异，具体取决于受试者的物种、年龄、体重和一般情况、所治疗过敏性障碍的严重程度、所使用的特定核酸或载体、其给药方式等。因此，不可能为每种组合物指定确切数量。然而，适当的量可以由本领域的普通技术人员通过仅使用本文给出教导的常规实验来确定。

该组合物的肠外给药(如果使用)通常以注射为特征。注射剂可以制备成常规形式，可以是液体溶液或悬浮液，也可以是适于在注射前在液体中溶解悬浮液的固体形式，或者是乳剂。最近修订的肠外给药方法包括使用缓释或缓释系统，以保持恒定剂量。参见，例如，美国专利号3,610,795，其通过引用并入本文。

材料可以是溶液、悬浮液(例如，并入微粒、脂质体或细胞中)。它们可能通过抗体、受体或受体配体靶向于特定的细胞类型。以下参考文献是利用该技术将特定蛋白质靶向肿瘤组织的实例(Senter等人，Bioconjugate Chem.，2:447-451，(1991)；Bagshawe、K.D.，Br.J.Cancer，60:275-281，(1989)；Bagshawe等人，Br.J.Cancer，58:700-703，(1988)；Senter等人，Bioconjugate Chem.，4:3-9，(1993)；Battelli等人，CancerImmunol.Immunother.，35:421-425，(1992)；Pietersz和McKenzie，Immunolog.Reviews，129:57-80，(1992)；以及Roffler等人，Biochem.Pharmacol，42:2062-2065，(1991))。“隐形”和其他抗体缀合的脂质体(包括脂质介导的针对结肠癌的药物)、通过细胞特异性配体的受体介导的DNA靶向、淋巴细胞介导的肿瘤靶向和体内小鼠胶质瘤细胞的高特异性治疗性逆转录病毒靶向等载体。以下参考文献是利用该技术将特定蛋白质靶向肿瘤组织的实例(Hughes等人，Cancer Research，49:6214-6220，(1989)；以及Litzinger和Huang，Biochimica et Biophysica Acta，1104:179-187，(1992))。一般来说，受体参与内吞作用的途径，无论是组成性的还是配体诱导的。这些受体聚集在网格蛋白所包被的小窝中，通过网格蛋白所包被的囊泡进入细胞，通过对受体进行分类的酸化的核内体，然后循环到细胞表面、在细胞内储存，或在溶酶体中降解。内化途径具有多种功能，如营养吸收、活化蛋白去除、大分子清除、病毒和毒素的机会性进入、配体的解离和降解、以及受体水平的调节等。根据细胞类型、受体浓度、配体类型、配体价态和配体浓度，许多受体遵循不止一个细胞内途径。综述了受体介导的内吞作用的分子和细胞机制(Brown和Greene，DNA and CellBiology 10:6，399-409(1991))。

a)药学上可接受的载体

所述组合物包括抗体，可在治疗上与药学上可接受的载体结合使用。

合适的载体及其制剂在以下文献中有所描述：Remington:The Science andPractice of Pharmacy(第19版)，A.R.Gennaro,Mack Publishing Company,Easton,PA1995。通常，在该制剂中使用适当量的药学上可接受的盐以使该制剂等渗。药学上可接受的载体的实例包括但不限于生理盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。该溶液的pH值优选为约5至约8，且更优选为约7至约7.5。进一步的载体包括缓释制剂，如含有抗体的固体疏水性聚合物的半透膜基质，其基质为成型制品的形式，例如，膜、脂质体或微粒。对于本领域技术人员来说，显而易见的是，某些载体可能更可取，例如取决于给药途径和给药组合物的浓度。

本领域技术人员已知药物载体。这些通常是给人类给予药物的标准载体，包括无菌水、生理盐水和生理pH下的缓冲液等溶液。这些组合物可以肌肉注射或皮下注射。其他化合物将根据本领域技术人员使用的标准程序给予。

药物组合物可包括载体、增稠剂、稀释剂、缓冲剂、防腐剂、表面活性剂等以及所选择的分子。药物组合物还可包括一种或多种活性成分，如抗菌剂、抗炎剂、麻醉剂等。

根据是否需要局部或全身治疗以及治疗区域的不同，药物组合物可以多种方式给予。给药可以是局部(包括眼、阴道、直肠、鼻内)、口服、吸入或肠外，例如静脉滴注、皮下、腹腔或肌肉注射。所公开的抗体可经静脉、腹腔、肌肉、皮下、腔内或经皮给予。

用于肠外给药的制剂包括无菌水溶液或非水溶液、悬浮液和乳剂。非水溶剂的实例有丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油)和可注射有机酯(如油酸乙酯)。水载体包括水、酒精/水溶液、乳剂或悬浮液，包括生理盐水和缓冲介质。肠外载体包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏或固定油。静脉注射载体包括液体和营养补充剂、电解质补充剂(如基于林格氏葡萄糖的补充剂)等。防腐剂和其他添加剂也可以存在，诸如例如，抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。

局部给药制剂可包括软膏、乳液、面霜、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末。传统的药物载体、水、粉末或油性碱、增稠剂等可能是必要的或可取的。

口服给药组合物包括粉末或颗粒、水或非水介质中的悬浮液或溶液、胶囊、袋剂或片剂。增稠剂、香料、稀释剂、乳化剂、分散助剂或粘合剂可能是可取的。

一些组合物可潜在地作为药学上可接受的酸或碱加成盐给予，并通过无机酸(如盐酸、氢溴酸、高氯酸、硝酸、硫氰酸、硫酸和磷酸)和有机酸(如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸和延胡索酸)反应形成，或无机碱(如氢氧化钠、氢氧化铵、氢氧化钾)和有机碱(如一、二、三烷基和芳基胺及取代乙醇胺)反应形成。

4.治疗用途和治疗方法

可以凭经验确定给予组合物的有效剂量和时间表，并且进行这种确定在本领域技术范围内。组合物的给药剂量范围应足够大，以产生所需的效果，从而影响障碍的症状。剂量不应太大以致引起不利副作用，例如不希望的交叉反应、过敏反应等。通常，剂量将随患者的年龄、病症、性别和疾病程度、给予途径或方案中是否包括其他药物而变化，并且可以通过本领域技术人员来确定。如果有任何禁忌症，也可以由个体医生来调整剂量。剂量可以变化，并且可以每天一剂量或多剂量施用，持续一天或几天。对于给定类别的药品，可以在文献中找到针对适当剂量的指南。例如，在抗体治疗用途的文献中可以找到选择适当剂量抗体的指南，例如，Handbook of Monoclonal Antibodies，Ferrone等人编，NogesPublications，Park Ridge,N.J.，(1985)第22章和第303-357页；Smith等人，Antibodiesin Human Diagnosis and Therapy，Haber等人编，Raven Press，New York(1977)，第365-389页。根据上述因素，单独使用的抗体的典型每日剂量可能在每天约1μg/kg至100mg/kg体重或以上的范围内。

在一方面，应当理解并且在本文中考虑到，本文公开的任何PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)可用于治疗、预防、抑制或减轻发生不受控制的细胞增殖的任何疾病，诸如癌症和转移。所公开的组合物可用于治疗的代表性但不限于以下的癌症列表：淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、霍奇金病、骨髓性白血病、膀胱癌、脑癌、神经系统癌、头颈癌、头颈部鳞状细胞癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌等肺癌、神经母细胞瘤/胶质母细胞瘤、卵巢癌、皮肤癌、肝癌、黑色素瘤、口腔鳞癌、咽喉鳞癌、喉癌和肺鳞癌、宫颈癌、子宫颈癌、乳腺癌、以及上皮癌、肾癌、泌尿生殖道癌、肺癌、食管癌、头颈癌、大肠癌、造血癌、睾丸癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌或胰腺癌。

在一方面，本文公开了治疗、预防、抑制和/或减轻受试者的癌症或转移的方法，该方法包括向受试者施用本文所公开的PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)中的任一者。例如，在一方面，本文公开了治疗、预防、抑制和/或减轻受试者的癌症或转移的方法，该方法包括向受试者施用分离的PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)，该分离的PD-L1结合分子包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如表1中所列出的互补决定区(CDR)。因此，例如，治疗、预防、抑制和/或减轻受试者的癌症或转移的方法可包括向受试者施用PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)，该PD-L1结合分子包含一个或多个重链可变结构域CDR，其可包含SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9和/或SEQ ID NO:10。在一方面，应当理解并且在本文中考虑到，所公开的治疗、预防、抑制和/或减轻受试者的癌症或转移的方法中使用的PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)可包含重链可变结构域CDR，该重链可变结构域CDR包含来自表1中CDR列表的2个或3个重链可变结构域CDR的任何组合。因此，例如，治疗、预防、抑制和/或减轻受试者的癌症或转移的方法可包括施用PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)，该PD-L1结合分子包含如以下各项中所列出的重链可变结构域CDR：SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3、SEQID NO:7和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:5和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:7和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10；或SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:10。在一方面，治疗、预防、抑制和/或减轻受试者的癌症或转移的方法可包括向受试者施用PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)，该PD-L1结合分子包含如SEQ ID NO:1中所列出的重链可变结构域。

在一方面，本文公开了治疗、预防、抑制和/或减轻受试者的癌症或转移的方法，该方法包括向受试者施用分离的PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)，该分离的PD-L1结合分子包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含如表1中所列出的互补决定区(CDR)。因此，例如，治疗、预防、抑制和/或减轻受试者的癌症或转移的方法可包括向受试者施用PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)，该PD-L1结合分子包含一个或多个轻链可变结构域CDR，其可包含SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和/或SEQ ID NO:15。在一方面，应当理解并且在本文中考虑到，所公开的治疗、预防、抑制和/或减轻受试者的癌症或转移的方法中使用的PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)可包含轻链可变结构域CDR，该轻链可变结构域CDR包含来自表1中CDR列表的2个或3个轻链可变结构域CDR的任何组合。因此，例如，治疗、预防、抑制和/或减轻受试者的癌症或转移的方法可包括施用PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)，该PD-L1结合分子包含如以下各项中所列出的轻链可变结构域CDR：SEQ ID NO11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:13和SEQ ID NO:15。在一方面，治疗、预防、抑制和/或减轻受试者的癌症或转移的方法可包括向受试者施用PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)，该PD-L1结合分子包含如SEQ ID NO:2中所列出的可变轻链结构域。在一方面，PD-L1结合分子包含如SEQ ID NO:1中所列出的可变重链结构域和如SEQ ID NO:2中所列出的可变轻链结构域。

如本文所用，术语“治疗(treatment)”、“治疗(treat)”或“治疗(treating)”是指减轻受试者疾病或病症(诸如例如，炎性病症或癌症)的影响中的一种或多种的方法。因此，在所公开的方法中，治疗可以指已确定感染或感染的症状的严重性降低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。例如，如果与对照相比，受试者的病症或癌症的一种或多种症状减少了10％，则认为治疗炎性病症或癌症的方法是治疗。因此，与天然或对照水平相比、减少量可以是10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或在10％和100％之间的任何百分比减少。应当理解，治疗不一定指治愈，完全消融病症或疾病、或者病症或疾病的症状。应当理解并且在本文中考虑到，本文所讨论的治疗可以是预防性的或治疗性的。因此，一方面是在治疗或减轻受试者的炎性疾病或病症的严重性的方法，该方法包括向受试者施用PD-L1结合分子。还公开了预防或减轻受试者的炎性疾病或病症的发作的方法，该方法包括向受试者施用PD-L1结合分子。

如本文所用，术语预防(prevent)、预防(preventing)和预防(prevention)感染是指在受试者开始表现出感染的一种或多种症状之前或大约同时发生的作用，例如治疗剂(例如，本文所公开的组合物)的施用，其抑制或延迟感染的一种或多种症状的发作或恶化，或延迟该一种或多种症状的复发。如本文所用，相对于对照水平，所参考的减轻、降低或抑制包括变化10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大。例如，当与未接受用于减轻炎性病症或疾病的PD-L1结合分子的对照受试者相比时，如果受试者的炎性病症或疾病或者炎性病症或疾病的症状的发作、恶化或复发减少约10％，则认为所公开的方法是预防。

应当理解并且在本文中考虑到，所公开的包括施用本文所公开的任何PD-L1结合分子(包括但不限于中和PD-L1结合分子，诸如例如，中和抗PD-L1抗体)的治疗、预防、抑制或减轻受试者的癌症或转移的方法可以进一步包括施用将进一步有助于减轻、抑制、治疗和/或消除癌症或转移的任何抗癌剂(诸如例如，吉西他滨)。除了所公开的药物组合和/或用于本文所公开的减轻、抑制、治疗和/或消除受试者的癌症或转移的方法的生物反应性水凝胶基质以外，可用于所公开的生物反应性凝胶中或用作另外的治疗剂的抗癌剂可包括本领域已知的任何抗癌剂，包括但不限于Abemaciclib、醋酸阿比特龙、Abitrexate(氨甲蝶呤)、Abraxane(白蛋白稳定化的紫杉醇纳米颗粒制剂)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、AC-T、Adcetris(维本妥昔单抗)、ADE、Ado-曲妥珠单抗、Adriamycin(盐酸多柔比星)、马来酸阿法替尼、Afinitor(依维莫司)、Akynzeo(奈妥吡坦和盐酸帕洛诺司琼)、Aldara(咪喹莫特)、阿地介白素、Alecensa(艾乐替尼)、艾乐替尼、阿仑单抗、Alimta(培美曲塞二钠)、Aliqopa(盐酸库潘尼西)、注射用Alkeran(盐酸美法仑)、Alkeran片(美法仑)、Aloxi(盐酸帕洛诺司琼)、Alunbrig(布吉他滨)、Ambochlorin(苯丁酸氮芥)、Amboclorin(苯丁酸氮芥)、氨磷汀、氨基乙酰丙酸、阿纳托唑、阿瑞匹坦、Aredia(帕米膦酸二钠)、Arimidex(阿纳托唑)、Aromasin(依西美坦)Arranon(奈拉滨)、三氧化二砷、Arzerra(奥法木单抗)、天冬酰胺酶菊欧文菌、阿特朱单抗、Avastin(贝伐单抗)、阿维鲁单抗、阿昔替尼、阿扎胞苷、Bavencio(阿维鲁单抗)、BEACOPP、Becenum(卡莫司汀)、Beleodaq(贝利司他)、贝利司他、盐酸苯达莫司汀、BEP、Besponsa(奥英妥珠单抗)、贝伐单抗、蓓萨罗丁、Bexxar(托西莫单抗和碘I 131托西莫单抗)、比卡鲁胺、BiCNU(卡莫司汀)、博来霉素、博纳吐单抗、Blincyto(Blinatumomab)、硼替佐米、Bosulif(博舒替尼)、博舒替尼、本妥昔单抗、布加替尼、BuMel、白消安、Busulfex(白消安)、卡巴他赛、Cabometyx(苹果酸卡博替尼)、苹果酸卡博替尼、CAF、Campath(阿仑单抗)、Camptosar(盐酸伊立替康)、卡培他滨、CAPOX、Carac(外用氟尿嘧啶)、卡铂、卡铂-紫杉醇、卡非佐米、Carmubris(卡莫司汀)、卡莫司汀、卡莫司汀植入物、Casodex(比卡鲁胺)、CEM、色瑞替尼、Cerubidine(盐酸柔红霉素)、Cervarix(重组HPV二价疫苗)、西妥昔单抗、CEV、苯丁酸氮芥、苯丁酸氮芥-强的松、CHOP、顺铂、克拉屈滨、Clafen(环磷酰胺)、氯法拉滨、Clofarex(氯法拉滨)、Clolar(氯法拉滨)、CMF、考比替尼、Cometriq(苹果酸卡博替尼)、盐酸库潘尼西、COPDAC、COPP、COPP-ABV、Cosmegen(更生霉素)、Cotellic(考比替尼)、克唑替尼、CVP、环磷酰胺、Cyfos(异环磷酰胺)、Cyramza(雷莫芦单抗)、阿糖孢苷、阿糖胞苷脂质体、Cytosar-U(阿糖孢苷)、Cytoxan(环磷酰胺)、达拉菲尼、达卡巴嗪、Dacogen(地西他滨)、更生霉素、达雷木单抗、Darzalex(达雷木单抗)、达沙替尼、盐酸柔红霉素、盐酸柔红霉素和阿糖胞苷脂质体、地西他滨、去纤维蛋白多核苷酸钠、Defitelio(去纤维蛋白多核苷酸钠)、地加瑞克、地尼白介素、地诺单抗、DepoCyt(阿糖胞苷脂质体)、地塞米松、盐酸右雷佐生、定妥昔单抗、多西他赛、Doxil(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸多柔比星、盐酸多柔比星脂质体、Dox-SL(盐酸多柔比星脂质体)、DTIC-Dome(达卡巴嗪)、度伐单抗、Efudex(外用氟尿嘧啶)、Elitek(拉布立酶)、Ellence(盐酸表柔比星)、艾洛珠单抗、Eloxatin(奥沙利铂)、艾曲波帕、Emend(阿瑞匹坦)、Empliciti(艾洛珠单抗)、甲磺酸恩西地平、恩杂鲁胺、盐酸表柔比星、EPOCH、Erbitux(西妥昔单抗)、甲磺酸艾日布林、Erivedge(维莫地吉)、盐酸埃罗替尼、Erwinaze(天冬酰胺酶菊欧文菌)、Ethyol(氨磷汀)、Etopophos(磷酸依托泊苷)、依托泊苷、磷酸依托泊苷、Evacet(盐酸多柔比星脂质体)、依维莫司、Evista(盐酸雷洛昔芬)、Evomela(盐酸美法仑)、依西美坦、5-FU(氟尿嘧啶注射液)、5-FU(外用氟尿嘧啶)、Faresto(托瑞米芬)、Farydak(帕比司他)、Faslodex(氟维司群)、FEC、Femara(来曲唑)、非格司亭、Fludara(磷酸氟达拉滨)、磷酸氟达拉滨、Fluoroplex(外用氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶注射液、外用氟尿嘧啶、氟他米特、Folex(氨甲蝶呤)、Folex PFS(氨甲蝶呤)、伊立替康、伊立替康-贝伐单抗、伊立替康-西妥昔单抗、FOLFIRINOX、奥沙利铂、Folotyn(普拉曲沙)、FU-LV、氟维司群、Gardasil(重组PV四价疫苗)、Gardasil 9(重组HPV单价疫苗)、Gazyva(阿托珠单抗)、吉非替尼、盐酸吉西他滨、吉西他滨-顺铂、吉西他滨-奥沙利铂、吉妥单抗、Gemzar(盐酸吉西他滨)、Gilotrif(马来酸阿法替尼)、Gleevec(甲磺酸伊马替尼)、Gliadel(卡莫司汀植入物)、Gliadel wafer(卡莫司汀植入物)、羧肽酶、醋酸戈舍瑞林、Halaven(甲磺酸艾日布林)、Hemangeol(盐酸普萘洛尔)、Herceptin(曲妥单抗)、HPV二价疫苗、重组HPV单价疫苗、重组HPV四价疫苗、重组Hycamtin(盐酸拓扑替康)、Hydrea(羟基脲)、羟基脲、地塞米松、Ibrance(帕博西尼)、替伊莫单抗、依鲁替尼、ICE、Iclusig(盐酸帕纳替尼)、Idamycin(盐酸伊达比星)、盐酸伊达比星、艾代拉里斯、Idhifa(甲磺酸恩西地平)、Ifex(异环磷酰胺)、异环磷酰胺、Ifosfamidum(异环磷酰胺)、IL-2(阿地白介素)、甲磺酸伊马替尼、Imbruvica(依鲁替尼)、Imfinzi(德瓦鲁单抗)、咪喹莫特、Imlygic(Talimogene Laherparepvec)、Inlyta(阿昔替尼)、奥英妥珠单抗、干扰素Alfa-2b、重组白细胞介素-2(阿地白介素)、Intron A(重组干扰素Alfa-2b)、碘I 131托西莫单抗和托西莫单抗、易普利姆玛、Iressa(吉非替尼)、盐酸伊立替康、盐酸伊立替康脂质体、Istodax(罗米地辛)、伊沙匹隆、枸橼酸艾沙佐米、Ixempra(伊沙匹隆)、Jakafi(磷酸鲁索替尼)、JEB、Jevtana(卡巴他赛)、Kadcyla(Ado-曲妥珠单抗)、Keoxifene(盐酸雷洛昔芬)、Kepivance(帕利夫明)、Keytruda(派姆单抗)、Kisqali(瑞博西尼)、Kymriah(Tisagenlecleucel)、Kyprolis(卡非佐米)、醋酸兰瑞肽、二甲苯磺酸拉帕替尼、Lartruvo(奥拉单抗)、来那度胺、甲磺酸乐伐替尼、Lenvima(甲磺酸乐伐替尼)、来曲唑、亚叶酸钙、Leukeran(苯丁酸氮芥)、醋酸亮丙瑞林、Leustatin(克拉屈滨)、Levulan(氨基乙酰丙酸)、Linfolizin(苯丁酸氮芥)、LipoDox(盐酸多柔比星脂质体)、洛莫司丁、Lonsurf(三氟尿苷和盐酸地匹福林)、Lupron(醋酸亮丙瑞林)、Lupron Depot(醋酸亮丙瑞林)、Lupron Depot-Ped(醋酸亮丙瑞林)、Lynparza(奥拉帕尼)、Marqibo(硫酸长春新碱脂质体)、Matulane(盐酸丙卡巴肼)、盐酸氮芥、醋酸甲地孕酮、Mekinist(曲美替尼)、美法仑、盐酸美法仑、巯嘌呤、美司钠、Mesnex(美司钠)、Methazolastone(替莫唑胺)、氨甲蝶呤、氨甲蝶呤LPF(氨甲蝶呤)、溴化甲基纳曲酮、Mexate(氨甲蝶呤)、Mexate-AQ(氨甲蝶呤)、米哚妥林、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、Mitozytrex(丝裂霉素C)、MOPP、Mozobil(普乐沙福)、Mustargen(盐酸氮芥)、Mutamycin(丝裂霉素C)、Myleran(白消安)、Mylosar(阿扎胞苷)、Mylotarg(吉妥单抗)、NanoparticlePaclitaxel(白蛋白稳定化的紫杉醇纳米颗粒制剂)、Navelbine(酒石酸长春瑞滨)、耐昔妥珠单抗、奈拉滨、Neosar(环磷酰胺)、马来酸来那替尼、Nerlynx(马来酸来那替尼)、奈妥吡坦和盐酸帕洛诺司琼、Neulasta(乙二醇化非格司亭)、Neupogen(非格司亭)、Nexavar(甲苯磺酸索拉非尼)、Nilandron(尼鲁米特)、尼罗替尼、尼鲁米特、Ninlaro(枸橼酸艾沙佐米)、尼拉帕尼甲苯磺酸盐一水合物、纳武单抗、Nolvadex(枸橼酸它莫西芬)、Nplate(咯咪珀咯)、阿托珠单抗、Odomzo(索尼德吉)、OEPA、奥法木单抗、OFF、奥拉帕尼、奥拉单抗、高三尖杉酯碱、Oncaspar(培门冬酶)、盐酸昂丹司琼、Onivyde(盐酸伊立替康脂质体)、Ontak(地尼白介素)、Opdivo(纳武单抗)、OPPA、奥斯替尼、奥沙利铂、紫杉醇、白蛋白稳定化的紫杉醇纳米颗粒制剂、PAD、帕博西尼、帕利夫明、盐酸帕洛诺司琼、盐酸帕洛诺司琼和奈妥吡坦、帕米膦酸二钠、帕尼单抗、帕比司他、Paraplat(卡铂)、Paraplatin(卡铂)、盐酸帕唑帕尼、PCV、PEB、培门冬酶、乙二醇化非格司亭、聚乙二醇干扰素α-2b、PEG-Intron(聚乙二醇干扰素α-2b)、派姆单抗、培美曲塞二钠、Perjeta(帕妥珠单抗)、帕妥珠单抗、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)、普乐沙福、泊马度胺、Pomalyst(泊马度胺)、盐酸帕纳替尼、Portrazza(耐昔妥珠单抗)、普拉曲沙、强的松、盐酸丙卡巴肼、Proleukin(阿地白介素)、Prolia(狄诺塞麦)、Promacta(艾曲波帕)、盐酸普萘洛尔、Provenge(西普鲁塞-T)、Purinethol(巯嘌呤)、Purixan(巯嘌呤)、镭223二氯、盐酸雷洛昔芬、雷莫芦单抗、拉布立酶、R-CHOP、R-CVP、重组人类乳突病毒(HPV)二价疫苗、重组人类乳突病毒(HPV)单价疫苗、重组人类乳突病毒(HPV)四价疫苗、重组干扰素α-2b、瑞戈非尼、Relistor(溴化甲基纳曲酮)、R-EPOCH、Revlimid(来那度胺)、Rheumatrex(氨甲蝶呤)、瑞博西尼、R-ICE、Rituxan(利妥昔单抗)、Rituxan Hycela(利妥昔单抗和人类透明质酸酶)、利妥昔单抗、利妥昔单抗和人类透明质酸酶、罗拉匹坦盐酸盐罗米地辛、咯咪珀咯、Rubidomycin(盐酸柔红霉素)、Rubraca(瑞卡帕布樟脑磺酸盐)、瑞卡帕布樟脑磺酸盐、磷酸鲁索替尼、Rydapt(米哚妥林)、SclerosolIntrapleural Aerosol(滑石)、硼替佐米、西普鲁塞-T、Somatuline Depot(醋酸兰瑞肽)、索尼德吉、甲苯磺酸索拉非尼、Sprycel(达沙替尼)、STANFORD V、无菌滑石粉(滑石)、Steritalc(滑石)、Stivarga(瑞戈非尼)、苹果酸舒尼替尼、Sutent(苹果酸舒尼替尼)、Sylatron(聚乙二醇干扰素α-2b)、Sylvant(硼替佐米)、Synribo(高三尖杉酯碱)、Tabloid(硫鸟嘌呤)、TAC、Tafinlar(达拉菲尼)、Tagrisso(奥斯替尼)、滑石、TalimogeneLaherparepvec、枸橼酸它莫西芬、Tarabine PFS(阿糖孢苷)、Tarceva(盐酸埃罗替尼)、Targretin(蓓萨罗丁)、Tasigna(尼罗替尼)、Taxol(紫杉醇)、Taxotere(多西他赛)、Tecentriq(阿特朱单抗)、Temodar(替莫唑胺)、替莫唑胺、西罗莫司脂化物、萨力多胺、Thalomid(萨力多胺)、硫鸟嘌、噻替派、Tisagenlecleucel、Tolak(外用氟尿嘧啶)、盐酸拓扑替康、托瑞米芬、Torisel(西罗莫司脂化物)、托西莫单抗和碘I 131托西莫单抗、Totect(盐酸右雷佐生)、TPF、曲贝替定、曲美替尼、曲妥单抗、Treanda(盐酸苯达莫司汀)、三氟尿苷和盐酸地匹福林、Trisenox(三氧化二砷)、Tykerb(二甲苯磺酸拉帕替尼)、Unituxin(定妥昔单抗)、尿苷三乙酸酯、VAC、凡德他尼、VAMP、Varubi(盐酸罗拉吡坦)、Vectibix(帕尼单抗)、VeIP、Velban(硫酸长春碱)、Velcade(硼替佐米)、Velsar(硫酸长春碱)、维莫非尼、Venclexta(维奈托克)、维奈托克、Verzenio(玻玛西林)、Viadur(醋酸亮丙瑞林)、Vidaza(阿扎胞苷)、硫酸长春碱、Vincasar PFS(硫酸长春新碱)、硫酸长春新碱、硫酸长春新碱脂质体、酒石酸长春瑞滨、VIP、维莫地吉、Vistogard(尿苷三乙酸酯)、Voraxaze(羧肽酶)、伏立诺他、Votrient(盐酸帕唑帕尼)、Vyxeos(盐酸柔红霉素和阿糖胞苷脂质体)、Wellcovorin(亚叶酸钙)、Xalkori(克唑替尼)、Xeloda(卡培他滨)、XELIRI、XELOX、Xgeva(狄诺塞麦)、Xofigo(镭223二氯)、Xtandi(恩杂鲁胺)、Yervoy(易普利姆玛)、Yondelis(曲贝替定)、Zaltrap(阿柏西普)、Zarxio(非格司亭)、Zejula(尼拉帕尼甲苯磺酸盐一水合物)、Zelboraf(维莫非尼)、Zevalin(替伊莫单抗)、Zinecard(盐酸右雷佐生)、阿柏西普、Zofran(盐酸昂丹司琼)、Zoladex(醋酸戈舍瑞林)、唑来膦酸、Zolinza(伏立诺他)、Zometa(唑来膦酸)、Zydelig(艾代拉里斯)、Zykadia(色瑞替尼)和/或Zytiga(醋酸阿比特龙)。

C.实例

提出以下实施例是为了向本领域普通技术人员提供关于如何制备和评估本文所要求保护的化合物、组合物、制品、装置和/或方法的完整公开和描述，并且旨在纯粹地示范并且非旨在限制公开。已经努力确保关于数字(例如，量、温度等)的准确性，但是应该考虑一些误差和偏差。除非另有说明，否则份数是重量份，温度为℃或处于环境温度，并且压力为大气压或接近大气压。

1.实例1

过表达小鼠Ig-α、小鼠Ig-β和人白介素6的转基因小鼠以2周的间隔腹腔注射重组人PD-L1(R&D Systems)。如通过血清ELISA测量建立了显著的免疫应答后，收集淋巴结、脾和骨髓细胞，用磁珠减去表面表达IgM同种型抗体的B细胞，并使用MoFlo荧光激活的细胞分选仪来针对剩余细胞结合PD-L1的能力对其进行分选。

将对PD-L1结合呈阳性的细胞分选到96孔板中，进行单细胞RT-PCR以扩增可变区，并且将可变区克隆到含有重链人IgG1或IgG4恒定区或轻链人Igk恒定区的表达载体中。将所得重链和轻链克隆对转染到CHO细胞中，并用蛋白A树脂纯化所得抗体蛋白。

使用流式细胞术测量抗体结合天然细胞表面PD-L1的能力。简而言之，将纯化的抗体分别与细胞混合，并将荧光标记的二抗添加到细胞-抗体混合物中。当细胞通过流式细胞仪时，对于与PD-L1结合有特异性的抗体显著增加了细胞的荧光。

在体外细胞报告基因测定中评估了抗体破坏在其表面膜结合的PD-L1上展示的细胞与在其表面膜结合的PD-1上展示的另一个细胞相互作用的能力，并计算了IC50浓度(表2)。

表2：在PD-L1/PD-1相互作用的双细胞阻断测定中每种抗体的活性的识别号和IC50

名称	IC50
		ABM101	0.05
ABM102	0.32
		ABM103	0.08
ABM118	0.08
		ABM139	0.08

*IC50以微克/毫升表示

ABM101在PD-1/PD-L1报告基因测定中具有最好的效力，并被选择用于人源化。将CDR移植到各种人框架上，并且ABM101.11是具有最佳表达水平的最有效的人源化抗体(表3)。

表3：所选择的命名为ABM101的小鼠抗体的人源化变体的识别号、人同种型、IC50、针对人PD-L1的解离常数和针对食蟹猴的解离常数。

序列

SEQ ID NO:1：ABM101.11重链

QVQLVQSGpEVKKPGASVKVSCKaSGYTFTENSMHWVrQSHGKsLEWmGGINPNNGGTSYNQKFKGkvTmTTDKSTSTAYMELRSLTSDDTAVYYCARPYYYGYREDYFDYWGQGTTLTVSS

SEQ ID NO:2：ABM101.11轻链

EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASSSVSYMYWYQQKPGQAPRPLIYLTSNLASGIPDRFSGSGSGTDYTLTISRLEPEDFAVYYCQQWSSYPPTFGQGTKVEIKR

序列表

<110> 阿贝奥姆公司

<120> 针对程序性

死亡配体 1 (PD-L1) 的高亲和力中和单克隆抗体及其用途

<130> 10841-006WO1

<160> 15

<170> PatentIn 版本 3.5

<210> 1

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 1

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Asn

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Val Thr Met Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Pro Tyr Tyr Tyr Gly Tyr Arg Glu Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 2

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 2

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Pro Leu Ile Tyr

35 40 45

Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 3

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 3

Glu Asn Ser Met His

1 5

<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 4

Glu Tyr Thr Met His

1 5

<210> 5

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 5

Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 6

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 6

Gly Ile Asp Pro Asn Asn Gly Gly Thr Trp Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 7

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 7

Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Trp Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 8

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 8

Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Trp Tyr Asn Arg Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 9

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 9

Pro Tyr Tyr Tyr Gly Tyr Arg Glu Asp Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 10

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 10

Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Arg Glu Asp Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 11

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 11

Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr

1 5 10

<210> 12

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 12

Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr

1 5 10

<210> 13

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 13

Tyr Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 14

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 14

Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Pro Thr

1 5

<210> 15

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 15

Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr

1 5

Claims (16)

1.一种分离的PD-L1结合分子，其包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含如以下各项中所列出的至少一个CDR：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10。

2.根据权利要求1所述的分离的PD-L1结合分子，其中所述包含重链可变结构域的结合分子包含如以下各项中所列出的所述CDR：SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:3和SEQID NO:6；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:9；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:4和SEQ IDNO:6；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:4和SEQ IDNO:9；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9；SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQID NO:8和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:6和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10；或SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:8和SEQ ID NO:10。

3.根据权利要求2所述的分离的PD-L1结合分子，其包含如SEQ ID NO:1中所列出的所述重链可变结构域。

4.根据权利要求1所述的分离的PD-L1结合分子，其进一步包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含如以下各项中所列出的至少一个CDR：SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15。

5.根据权利要求4所述的分离的PD-L1结合分子，其中所述包含轻链可变结构域的结合分子包含如以下各项中所列出的所述CDR：SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ IDNO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15。

6.根据权利要求5所述的分离的PD-L1结合分子，其包含如SEQ ID NO:2中所列出的所述轻链可变结构域。

7.根据权利要求6所述的分离的PD-L1结合分子，其中所述结合分子包含如SEQ ID NO:1中所列出的重链可变结构域。

8.一种分离的PD-L1结合分子，其包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含如以下各项中所列出的至少一个CDR：SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15。

9.根据权利要求8所述的分离的PD-L1结合分子，其中所述包含重链可变结构域的结合分子包含如以下各项中所列出的所述CDR：SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ IDNO:14；SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQID NO:14；或SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的分离的PD-L1结合分子，其中所述结合分子为抗体。

11.根据权利要求1-9中任一项所述的分离的PD-L1结合分子，其中所述结合分子为免疫毒素。

12.一种含有或包含重链可变区SEQ ID NO:1的抗体。

13.一种含有或包含轻链可变区SEQ ID NO:2的抗体。

14.一种含有或包含重链可变区SEQ ID NO:1和轻链可变区SEQ ID NO:2两者的抗体。

15.根据权利要求10所述的分离的PD-L1结合分子或根据权利要求12-14中任一项所述的抗体，其中所述抗体为中和抗体。

16.一种通过施用一定量的权利要求1-11或15所述的PD-L1结合分子或权利要求12-15所述的抗体中的任一者来治疗或预防癌症或与癌症相关的细胞增殖性疾病的方法。