KR20210003099A - 세포예정사 리간드 1 (pd-l1)에 대한 고 친화도 중화 단일클론 항체 및 이의 용도 - Google Patents

세포예정사 리간드 1 (pd-l1)에 대한 고 친화도 중화 단일클론 항체 및 이의 용도 Download PDF

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아베오미 코포레이션
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Abstract

본원은 신규한 PD-L1 결합 분자 및 이의 사용 방법을 개시한다. 개시된 PD-L1 결합 분자는 중화 항-PD-L1 항체, 이중특이적 항체, 및 면역독소를 포함한다. 상세한 설명은 암 또는 전이의 치료, 예방, 억제 또는 감소에서 또는 다른 항암제의 사용을 포함하는 치료 요법의 일부로서 개시된 PD-L1 결합 분자의 사용을 제공한다.

Description

세포예정사 리간드 1 (PD-L1)에 대한 고 친화도 중화 단일클론 항체 및 이의 용도
본원은 2018년 3월 19일에 출원된 미국 가특허출원 제 62/644,832호의 이익을 주장하며, 이 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다.
I. 배경
고형 종양의 치료를 위해 현재 이용가능한 치료 전략은 대부분 종양 성장 및 침윤 영역에서 치료적으로 효과적인 수준의 화학요법제를 구현함에 있어서의 어려움으로 인한 것이다. 일반적으로 치료는 수술 및/또는 방사선 요법 및/또는 화학 요법을 기반으로 하지만, 이러한 방법은 상당한 비율의 사례에서 불만족스러운 결과를 제공한다. 따라서, 고형 종양을 포함하는 암의 치료 및/또는 상기 고형 종양을 표적으로 하는 새로운 치료법을 개발하기 위해 현재 이용가능한 치료법을 개선 할 필요가 있음이 분명하다.
II. 발명의 요약
한 측면에서, PD-L1 매개 질환 및 장애의 치료에 사용하기에 적합한 PD-L1에 지시되는 결합 분자가 본원에 개시된다.
한 측면에서, 표 1에 제시된 바와 같은 하나 이상의 상보성 결정 영역 (CDR) (예를 들어, 서열 번호: 3, 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 서열 번호: 6, 서열 번호: 7, 서열 번호: 8, 서열 번호: 9, 및/또는 서열 번호: 10)을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 단리된 PD-L1 결합 분자들이 본원에 개시되어 있다. 예를 들어, 전술한 임의의 측면의 단리된 PD-L1 결합 분자들 (중화 PD-L1 결합 분자들, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함, 그러나 이에 제한되는 것은 아님)이 본원에 개시되며, 이 때 이러한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 결합 분자는 서열 번호: 3 및 서열 번호: 5; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 6; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 7; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 8; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 5; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 6; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 7; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 8; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 10; 또는 서열 번호: 4, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 10에 제시된 CDR들을 포함한다.
또한, 표 1에 제시된 바와 같은 하나 이상의 CDR (예를 들어, 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 및/또는 서열 번호: 15)을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 추가로 포함하는 전술한 임의의 측면의 단리된 PD-L1 결합 분자가 본원에 개시된다. 예를 들어, 전술한 임의의 측면의 단리된 PD-L1 결합 분자들 (중화 PD-L1 결합 분자들, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함, 그러나 이에 제한되는 것은 아님)이 본원에 개시되며, 이 때 중쇄 가변 도메인을 포함하는 상기 결합 분자는 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 CDR들을 포함한다.
한 측면에서 전술한 임의의 측면의 PD-L1 결합 분자들이 본원에 개시되며, 이 때 PD-L1 분자는 전술한 임의의 측면의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인 또는 상보성 결정 영역들 (CDR들)을 포함하는데, 가령, 예를 들면, PD-L1 결합 분자는 서열 번호: 1에 제시된 중쇄 가변 영역 및/또는 서열 번호: 2에 제시된 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 측면에서, 전술한 임의의 측면의 PD-L1 결합 분자는 항체 (또는 이의 단편) 또는 면역독소 일 수 있다. 한 측면에서, 전술한 임의의 측면의 항체 (또는 이의 단편)가 본원에 개시되며, 여기서 항체 (또는 이의 단편)는 중화 항체 일 수 있다.
또한 서열 번호: 1에 제시된 중쇄 가변 영역 및/또는 서열 번호: 2에 제시된 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 및/또는 면역독소가 본원에 개시된다. 한 측면에서, 전술한 임의의 측면의 항체 또는 면역독소의 인간화 형태가 본원에 개시된다.
또한 대상체에서 암 또는 전이, 바람직하게는 PD-L1-양성 암 또는 종양의 치료, 예방, 억제 또는 감소 방법이 개시되며, 이 방법은 전술한 임의의 측면의 치료적 유효량의 항-PD-L1 항체 (중화 PD-L1 결합 분자들, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님) 및/또는 항-PD-L1 면역독소를 상기 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
III. 상세한 설명
본 발명의 화합물, 조성물, 물품, 장치 및/또는 방법을 개시하고 설명하기에 앞서, 달리 명시되지 않는 한 특정 합성 방법 또는 특정 재조합 생명공학 방법, 또는 달리 명시되지 않는 한 특정 시약으로 제한되지 않으며, 물론 달라질 수 있음을 이해하여야 한다. 본 명세서에서 사용되는 용어는 특정 구체예들을 오직 설명을 목적으로 하는 것이며, 제한하고자 하는 것이 아님을 또한 이해하여야 한다.
A. 정의
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는, 단수형 "하나" 및 "그것"은 내용에서 명확히 달리 언급이 없는 한 복수형을 포함한다. 그러므로, 예를 들어, "약학적 담체”의 지칭은 둘 또는 그 이상의 이러한 담체들의 혼합물 등을 포함한다.
범위는 본원에서 "약" 하나의 특정 수치로부터 및/또는 "약" 또 다른 특정 수치까지와 같이 표현될 수 있다. 이러한 범위가 표현될 경우, 또다른 구체예는 하나의 특정 수치로부터 및/또는 기타 특정 수치까지를 포함한다. 이와 유사하게, 수치들이 선행사 "약”을 사용하여 근사치로 표현될 경우, 이는 특정 수치가 또 다른 구체예를 형성함을 이해할 것이다. 각 범위들의 끝점들은 다른 끝점과 관련하여 그리고 다른 끝점과 무관하게 모두 중요함을 또한 이해할 것이다. 본 명세서에 개시된 다수의 수치가 존재하고, 또한 각각의 수치는 또한 그 수치 자체 외에 그 특정 수치에 대해 "약"으로 개시되는 것으로 이해된다. 예를 들어, 수치 "10"이 개시되면 "약 10"도 개시된다. 또한, 수치가 해당 수치 "보다 작거나 같음", "해당 수치보다 크거나 같음"으로 개시되는 경우, 그리고 이들 수치들 사이의 가능한 범위들 또한 당업자에 의해 적절하게 이해되는 바와 같이 개시되는 것으로 이해된다. 예를 들어, 수치 "10"이 개시되는 경우, "10 보다 작거나 같음" 및 "10 보다 크거나 같음" 또한 개시되는 것이다. 또한 본 명세서 전반에 걸쳐, 데이터는 여러 다양한 형식들로 제공되며, 이러한 데이터는 데이터 포인트들의 임의의 조합에 대한 끝점 및 시작점, 그리고 범위들을 나타낸다. 예를 들어, 특정 데이터 포인트 "10" 및 특정 데이터 포인트 "15"가 개시된 경우, 10과 15보다 큼, 크거나 같음, 작음, 작거나 같음, 뿐만 아니라 10 내지 15가 개시된 것으로 고려된다. 또한 2 개의 특정 단위 사이의 각각의 단위가 개시되는 것으로 이해된다. 예를 들어, 10 및 15가 개시되면, 11, 12, 13 및 14도 개시된다.
본원에서 용어 "대상체”는 동물, 가령, 포유동물을 포함하는 것으로 정의되며, 영장류 (예컨대, 인간), 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 쥐, 생쥐 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 구체예들에서, 대상체는 인간이다.
대상체에 대한 "투여”는 물질을 대상체에게 도입 또는 전달하는 임의의 경로를 포함한다. 투여는 경구, 국소, 정맥내, 피하, 경피, 경진피, 근육내, 관절내, 비경구, 동맥내, 피내, 심실내, 두개내, 복강내, 병변내, 비강내, 직장, 질, 흡입에 의해, 이식된 저장소를 통해, 비경구 (예를 들어, 피하, 정맥내, 근육내, 관절내, 활막내, 줄기내, 척수강내, 복강내, 간내, 병변내 및 두개내 주사 또는 주입 기술) 등을 포함한 임의의 적절한 경로에 의해 실시 될 수 있다. 본원에 사용된 "동시적 투여", "병용 투여", "동시 투여" 또는 "동시에 투여"는 화합물이 동일한 시점에 또는 본질적으로 서로 즉시 이어서 투여되는 것을 의미한다. 후자의 경우, 두 화합물은 관찰된 결과가 화합물이 동일한 시점에 투여 될 때 구현된 결과와 구별 할 수 없을 정도로 충분히 가까운 시간에 투여된다. "전신 투여”는 대상체 신체의 광범위한 영역들 (예컨대, 신체의 50% 이상)에, 예를 들어, 순환 또는 림프계로의 유입을 통해 해당 물질을 도입 또는 전달하는 임의의 경로를 통해 물질을 대상체에게 도입 또는 전달하는 것을 지칭한다. 대조적으로, "국소 투여"는 투여 지점 영역 또는 이에 바로 인접한 영역에 해당 물질을 도입 또는 전달하는 경로를 통해 대상체에 해당 물질을 도입 또는 전달하는 것을 지칭하며 해당 물질을 치료적 상당량으로 전신적으로 도입시키지 않는다. 예를 들어, 국소 투여된 물질은 투여 지점의 국소 부근에서 쉽게 탐지 될 수 있지만, 대상체 신체의 원위 부분에서는 탐지 할 수 없거나 무시할 수 있는 양으로 탐지될 수 있다. 투여는 자가-투여 및 다른 사람에 의해 의한 투여가 포함된다.
"생체적합성"은 일반적으로 수용자에게 비-독성이고 대상체에게 어떠한 심각한 부작용도 일으키지 않는 물질 및 이의 대사산물 또는 분해 산물을 지칭한다.
"포함하는"은 조성물, 방법 등이 언급된 요소들을 포함하지만 다른 요소들을 배제하지 않음을 의미한다. 조성물 및 방법들을 정의하기 위해 사용될 때 "~으로 본질적으로 구성된"은 언급된 요소들을 포함하지만, 해당 조합에 대해 임의의 본질적으로 중요한 다른 요소들을 배제하는 것을 의미할 것이다. 따라서, 본원에 정의된 요소들로 본질적으로 구성된 조성물은 분리 및 정제 방법 및 약학적으로 허용되는 담체, 가령, 포스페이트 완충 식염수, 보존제 등으로부터의 미량의 오염물을 배제하지 않을 것이다. "~로 구성된"은 다른 성분들의 미량 이상의 요소들 및 본 발명의 조성물을 투여하기 위한 실질적인 방법 단계들을 배제하는 것을 의미할 것이다. 이러한 변화 용어들 각각에 의해 정의되는 구체예들은 본 발명의 범위에 속한다.
"대조군"은 한 실험에서 비교 목적으로 사용되는 다른 대상체 또는 샘플이다. 대조군은 "양성" 또는 "음성" 일 수 있다.
물질의 "유효량"은 원하는 효과를 제공하기에 충분한 물질의 양을 의미한다. "유효한" 물질의 양은 대상체의 연령 및 일반적인 상태, 특정 물질 또는 물질들 등과 같은 많은 요인들에 따라 대상체마다 다를 수 있다. 따라서 정량화된 "유효량"을 항상 특정할 수 있는 것은 아니다. 그러나, 임의의 대상체의 경우에 적절한 "유효량”은 관례적인 실험을 사용하여 해당 기술 분야의 통상의 당업자에 의해 결정될 수 있다. 또한, 본원에서 사용된, 그리고 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 물질의 "유효량"은 또한 치료적 유효량 및 예방적 유효량을 모두 포괄하는 양을 지칭 할 수 있다. 치료 효과를 달성하는 데 필요한 물질의 "유효량"은 대상체의 연령, 성별 및 체중과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 투약 요법은 최적의 치료 반응을 제공하도록 조정될 수 있다. 예를 들어, 여러번의 분할된 용량이 매일 투여될 수 있고 또는 용량은 나타나는 치료 상황의 긴급성에 따라 비례하여 감소될 수 있다.
"감소"는 보다 작은 유전자 발현, 단백질 발현, 증상의 양, 질환, 조성, 상태 또는 활성을 가져오는 모든 변화를 의미 할 수 있다. 해당 물질 존재시 유전자 산물의 유전적 산출량이 해당 물질 부재시 유전자 산물의 산출량보다 적을 경우, 해당 물질은 유전자의 유전적 산출량을 감소시키는 것으로 이해된다. 또한, 예를 들어, 감소는 증상이 이전에 관찰된 것보다 적어지게 하는 장애 증상들의 변화 일 수 있다. 감소는 상태, 증상, 활성, 조성에 있어서의 통계적으로 유의한 양의 개별값, 중앙값 또는 평균값 감소 일 수 있다. 그러므로, 감소는 해당 감소가 통계적으로 유의한 한 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100% 감소일 수 있다.
"억제하다", "억제하는 것" 및 "억제"는 활성, 반응, 상태, 질환 또는 기타 생물학적 매개변수를 감소시키는 것을 의미한다. 여기에는 활성, 반응, 상태 또는 질환의 완전한 제거가 포함될 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 이는 또한 예를 들어 천연 또는 대조군 수준과 비교하여 활성, 반응, 상태 또는 질환의 10% 감소를 포함 할 수 있다. 따라서, 감소는 천연 또는 대조군 수준과 비교하여 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100%, 또는 그 사이의 임의의 감소량 일 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "예방하다", "예방하는 것", "예방" 및 이의 문법적 변화형은 질환 및/또는 그에 수반되는 하나 이상의 증상의 발병 또는 재발을 부분적으로 또는 완전히 지연 또는 예방 또는 대상체가 질환을 획득 또는 재획득하는 것을 금지, 대상체가 질환 또는 그에 수반되는 하나 이상의 증상을 획득 또는 재획득할 위험을 감소시키는 방법을 지칭한다.
"약학적으로 허용되는" 성분은 생물학적으로 또는 그 이외의 바람직하지 않은 성분을 지칭 할 수 있다, 즉, 이러한 성분은 본 발명의 약학적 제형에 혼입되어, 바람직하지 않은 유의한 생물학적 효과를 유발하거나 그것이 포함된 제제의 다른 성분들과 해로운 방식으로 상호작용하지 않고 본원에 기재된 바와 같이 대상체에 투여될 수 있다. 인간 투여와 관련하여 사용되는 경우, 이 용어는 일반적으로 해당 성분이 독성학적 및 제조상의 테스트에 관하여 요구되는 표준을 충족했거나 미국 식품의약국의 비활성 성분 가이드 (Inactive Ingredient Guide)에 포함되어 있음을 의미한다.
“약학적으로 허용되는 담체" (때때로 "담체"로 지칭됨)는 일반적으로 안전하고 비독성인 약학적 또는 치료적 조성물을 제조하는데 유용한 담체 또는 부형제를 의미하며 수의학 및/또는 인간 약제 또는 치료 용도로 허용되는 담체를 포함한다. 용어 "담체" 또는 "약학적으로 허용되는 담체"는 포스페이트 완충 식염수 용액, 물, 에멀전 (가령, 오일/물 또는 물/오일 에멀전) 및/또는 다양한 유형의 습윤제를 포함 할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본원에서 사용되는 용어 "담체"는 임의의 부형제, 희석제, 충전제, 염, 완충제, 안정화제, 용해화제, 지질, 안정화제 또는 약학 제제에 있어서의 용도로 해당 분야에 널리 공지된 그리고 본원에 상세히 기재된 다른 물질을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
"약리학적 활성" 유도체 또는 유사체에서와 같이 "약리학적 활성"(또는 단순히 "활성")은 모 화합물과 동일한 유형의 그리고 대략 동일한 정도의 약리학적 활성을 가지는 유도체 또는 유사체 (예를 들어, 염, 에스테르, 아미드, 접합체, 대사산물, 이성질체, 단편 등)를 지칭 할 수 있다.
"치료제"는 유익한 생물학적 효과를 갖는 임의의 조성물을 지칭한다. 유익한 생물학적 효과는 치료 효과, 예를 들어, 장애 또는 기타 바람직하지 않은 생리적 상태의 치료 그리고 예방 효과, 예를 들어, 장애 또는 기타 바람직하지 않은 생리학적 상태 (예컨대, 비면역원성 암)의 예방을 모두 포함한다. 이 용어는 또한 본원에 구체적으로 언급된 유익한 제제의 약상 허용되는 약리학적 활성 유도체를 포함하며, 이는 염, 에스테르, 아미드, 전구물질, 활성 대사산물, 이성질체, 단편, 유사체 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 용어 "치료제"가 사용되는 경우 또는 특정 물질이 구체적으로 언급될 때, 용어는 물질 그 자체 만 아니라 약학적으로 허용되는 약리학적 활성 염, 에스테르, 아미드, 전구물질, 접합체, 활성 대사산물, 이성질체, 단편, 유사체 등을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
조성물 (예를 들어, 해당 물질을 포함하는 조성물)의 "치료적 유효량" 또는 "치료적 유효 용량"은 원하는 치료 결과를 달성하는 데 효과적인 양을 지칭한다. 일부 구체예들에서, 원하는 치료 결과는 제I형 당뇨병의 조절이다. 일부 구체예들에서, 원하는 치료 결과는 비만의 조절이다. 주어진 치료제의 치료적 유효량은 전형적으로 치료되는 장애 또는 질환의 유형 및 중증도 및 대상체의 연령, 성별 및 체중과 같은 인자와 관련하여 변화할 것이다. 이 용어는 또한 통증 완화와 같은 원하는 치료 효과를 촉진하는 데 효과적인 치료제의 양, 또는 치료제의 전달 속도 (예를 들어, 시간에 따른 양)를 지칭 할 수 있다. 정확한 원하는 치료 효과는 치료할 상태, 대상체의 내성, 투여될 물질 및/또는 물질 제형 (예를 들어, 치료제의 효능, 제제 중 해당 물질의 농도 등), 및 당업자에 의해 인식되는 다양한 다른 요인들에 따라 달라질 것이다. 일부 예에서, 원하는 생물학적 또는 의학적 반응은 수일, 수주 또는 수년의 기간에 걸쳐 대상체에게 다회 투여량의 조성물을 투여 한 후에 구현된다.
하기 본 명세서에서 그리고 청구범위에서, 수많은 용어들을 참고하며, 이 용어들은 하기 의미를 가지는 것으로 정의된다:
용어 "선택적” 또는 "선택적으로”는 후속하여 기재되는 사건 또는 상황이 발생할 수 있거나 발생할 수 없음을 의미하며, 해당 기재내용은 상기 사건 또는 상황이 발생하는 경우 그리고 발생하지 않는 경우를 포함함을 의미한다.
본원 전반에 걸쳐, 다양한 문헌들이 참고된다. 이들 문헌들의 개시내용은 본원이 속하는 기술 분야의 상태를 보다 완벽하게 기재하기 위하여 그 전문이 본원에 참고문헌으로 포함된다. 개시된 참고문헌들은 또한 그 참고문헌이 필요한 문장에서 논의되는, 참고문헌들에 포함된 재료에 대해 개별적으로 그리고 구체적으로 본원에 포함된다.
B. 조성물
본 발명의 조성물을 제조하는데 사용되는 성분 및 본원에 개시된 방법 내에서 사용될 조성물 자체가 개시된다. 이들 재료 및 다른 재료들이 본 명세서에서 개시되며, 그리고 이들 재료의 조합, 하위부분, 상호작용, 집단 등이 개시될 때, 이들 화합물의 각각의 다양한 개별적 그리고 집합적 조합 및 순열의 특정 기준은 명시적으로 언급되지 않을 수 있으며, 이들 각각이 본 명세서에서 특이적으로 고려되고, 기술되는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들면, 특정 항-PD-L1 항체가 개시되고, 논의되고, 상기 항-PD-L1 항체를 포함하는 다수의 분자에 대해 행해질 수 있는 다수의 변형이 논의된다면, 이러한 항-PD-L1 항체의 각각 그리고 모든 조합 및 순열, 그리고 가능한 변형은 명시적으로 다른 언급이 없는 한, 특이적으로 고려된다. 따라서, 분자 A, B 및 C의 분류 뿐만 아니라 분자 D, E 및 F의 분류 및 조합 분자 A-D의 예가 개시되면, 각각이 개별적으로 언급되지 않은 경우에도, 각각은 개별적으로 그리고 집합적으로 고려되는 의미 조합, A-E, A-F, B-D, B-E, B-F, C-D, C-E, 및 C-F AD가 개시된 것으로 간주된다. 마찬가지로, 이들의 임의의 하위집합 또는 조합이 또한 개시된다. 그러므로, 예를 들면, A-E, B-F, 및 C-E의 하위-그룹이 개시된 것으로 간주될 것이다. 이러한 개념은 본 발명의 조성물을 제조하고 이용하는 방법에서 단계들을 비롯한 본 발명의 모든 측면에 적용될 수 있지만, 이에 국한되지 않는다. 따라서, 수행 될 수 있는 다양한 추가 단계가 존재하는 경우, 이들 추가 단계 각각은 개시된 방법들의 임의의 특정 구체예 또는 구체예들의 조합으로 수행 될 수 있는 것으로 이해된다.
T 세포는 항암 면역 반응에 필수적인 역할을 한다. T 세포 활성화는 T 세포 수용체에 대한 항원-부하된 주조직적합 복합체 (MHC)를 통해 제시된 초기 항원-특이적 신호, 및 CD80/86의 결합에 의한 공동자극 분자 CD28의 활성화에 따라 달라진다. T 세포는 또한 면역 반응을 하향조절할 수 있는 공동억제 분자를 발현한다. 한 가지 주요 공동억제 수용체는 세포예정사 1 (PD-1)이다.
용어 "PD1", "PD-1" 및 "세포 예정사 단백질 1"은 2개의 리간드인 PD-L1 또는 PD-12와 상호작용시 음성 신호를 전달하는 CD28 수퍼패밀리의 구성원을 지칭한다. PD-1 및 그 리간드는 다른 CD28 구성원에 비해 광범위하게 발현되고 T 세포 활성화 및 내성에서 더 넓은 범위의 면역조절 역할을 발휘한다. PD-1은 세포자멸 중인 T 세포 하이브리도마에서 상향조절된 유전자로서 분리되었고 세포예정사 1로 명명되었다. PD-1은 2개의 리간드, 세포예정사 리간드-1 (PD-L1) 및 PD-12을 가지며, 이 중 PD-L1이 가장 광범위하게 발현된다. CD274, 세포예정사 1 리간드 1 (PDCD1LG1 또는 PD-L1) 또는 B7-H1로도 공지되어 있는 PD-L1은, PD1에 결합하는 IgC- 및 IgV-유형 세포외 도메인으로 구성된 제I형 막경유 당단백질이다.
PD-L1의 PD-1에 대한 결합은 억제 신호를 T 세포로 전달하여 T 세포 증식을 억제하고, 이펙터 사이토카인의 분비를 감소시키고, 잠재적으로 고갈시킨다. PD-L1 발현 수준을 상향조절함으로써 종양 세포는 면역 인식 및 공격을 피할 수 있다. PD-L1은 유방암, 위암, 신장 세포암, 난소암, 비소 폐암, 흑색종 및 혈액암을 비롯한 다양한 종양에서 발현된다. 일반적으로 PD-1과 PD-L1은 높은 발현 수준이 암 환자의 불량한 결과와 관련이 있기 때문에 불량한 예후 인자로 입증되었다. 항-PD-1 및 항-PD-L1 항체를 사용한 전임상 연구는 유망한 항 종양 효과를 보였으며 여러 임상 조사에 착수하게 하였다. 초기 임상 시험에서 치료 불응성, 진행성 흑색종, 신장 세포 암종, 비소세포 폐암 및 난소암 환자에서 객관적이고 지속적인 (> 1 년) 반응이 입증되었다. 이러한 인상적인 결과로 인해, II/III상 연구는 현재 이러한 물질의 치료 효능을 더 연구중에 있다. 흑색종 환자의 인상적인 효능으로 인해 FDA는 최근에 기존의 치료제로 진행한 후 진행된 또는 절제불가능한 흑색종 환자의 치료제에 관하여 펨브롤리주맙 (항-PD-1 항체)을 우선적으로 승인하였다. 그럼에도 불구하고 약 30%의 환자에서만 현재 이용가능한 항-PD-1 항체를 이용하여 성공적인 결과가 나타났다. 따라서, 보다 효과적이고 보다 보편적인 새로운 항 PD-1/PDL-1 항체, 이중특이적 항체 및 면역독소가 필요하다.
따라서, 본 발명의 내용은 환자에서 종양, 바람직하게는 PD-L1 양성 종양을 치료하는 방법에 사용하기 위한 항-PD-L1 항체 및 면역독소에 관한 것이다. 본 명세서는 표지된 항-PD-L1 항체가 PD-L1을 발현하는 종양에 특이적으로 표적화됨을 보여준다. 따라서 독소에 결합된 항-PD-L1 항체는 종양 세포를 표적화하여 사멸시키기 위한 치료에 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 '면역독소"는 해당 분야의 일반적인 의미를 가진다. "면역독소"는 독소의 단편에 부착된 항체 또는 변형된 항체 또는 항체 단편 (본원에서 "항체"라고도 함)으로 만들어진 키메라 단백질을 의미한다. 면역독소의 항체는 독소 단편에 공유 부착된다. 바람직하게는, 독소 단편은 이러한 항체 또는 이의 단편에 링커에 의해 연결된다. 상기 링커는 바람직하게는 4-메르캅토발레르산 및 6-말레이미도카프로산에서 선택된다.
용어 "항-PD-L1 면역독소"는 항체 모이어티가 항-PD-L1 항체이고 및 상기 항-PD-L1 항체는 독소에 연결되어 있는 항체-약물 접합체 (ADC)를 지칭한다. 이러한 독소는 천연 또는 조작된 독소일 수 있으며, 면역원성을 감소시키기 위해 탈면역화되어 있을 수 있다. 이의 표적 세포들 상의 PD-L1에 결합시, 이러한 면역독소가 세포에 유입하여 표적 세포들을 사멸시킨다. 본원에서 사용되는 용어 "항체"는 해당 분야에서의 일반적 의미를 가진다. 용어 "항-PD-L1 항체"는 PD-L1에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. 바람직하게는, 상기 항체는 PD-12에 결합하지 않는다.
한 측면에서, 개시된 항-PD-L1 항체들은 다른 결합 분자들에 융합되어, 이중-특이적 항체 분자들을 생성할 수 있다. 이러한 분자들은 PD-L1 양성 종양에 대해 표적하기 위한 PD-L1 결합 성분을 이용할 수 있으며, 및 LAG-3, TGF-β, OX40, ICOS, LIGHT, 및 다양한 다른 T 세포 표면 항원들에 대한 항체들에 연결될 수 있다.
결합 분자
본원에서 사용되는 용어 "결합 분자"는 단일클론 항체들, 다클론 항체들, 키메라 항체들, 인간화 또는 인간 항체들을 비롯한 무손상 면역글로불린, 뿐만 아니라 면역글로불린의 결합 짝, 예컨대, PD-L1에 특이적으로 결합하기 위해 무손상 면역글로불린과 경쟁하는 면역글로불린의 단편을 포함하는 항원 결합 및/또는 가변 도메인을 포함하는 항체 단편들 및 기능적 변이체들을 지칭한다.
한 측면에서, 개시된 PD-L1 결합 분자들은 항-PD-L1 항체 (예를 들면, 항-PD-L1 항체)를 포함할 수 있다. 용어 "항체들"은 본원에서 다클론 및 단일클론 항체들 모두를 포함하는 넓은 의미로 사용된다. 본원에서 사용되는 용어 "항체”는 임의의 분류의 전체 면역글로불린 (즉, 무손상 항체)를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 무손상 면역글로불린 분자 이외에도, 용어 "항체들”에는 이들 면역글로불린 분자의 단편들 또는 중합체들, 및 면역글로불린 분자 또는 이의 단편들의 인간 또는 인간화 형태들이 포함된다. PD-L1과 PD-1 사이의 상호작용에 관여하는 개시된 PD-L1의 영역들에 결합하는 항체들 또한 개시되어 있다.
개시된 PD-L1 결합 분자 (항체 또는 이의 단편을 포함하는 결합 분자를 포함)는 PD-L1에 결합하는 것으로 이해되고 본원에서 간주된다. 그러나 일부 PD-L1 결합 분자 (항체 또는 이의 단편을 포함하는 결합 분자 포함)는 PD-L1에 결합할 뿐만 아니라 PD-L1의 생물학적 효과를 중화 (즉, 결합 분자를 중화)시킴이 추가로 인정된다. 한 측면에서, 본원은 PD-L1 결합 분자는 중화 항체인 항-PD-L1 항체를 포함하는, PD-L1 결합 분자이다.
고유 항체들은 통상적으로 2개의 동일한 경쇄 (L) 및 2개의 동일한 중쇄 (H)로 구성된 이종사량체 당단백질이다. 단일클론 항체들, 다클론 항체들, 키메라 항체들, 인간화 또는 인간 항체들이든, 뿐만 아니라 항체 단편들 및 기능적 변이체들이든 개시된 PD-L1 결합 분자는 경쇄 및 중쇄 전부 또는 이의 일부를 포함할 수 있다.
완전 항체에서, 전형적으로 각 경쇄는 하나의 공유 이황화 결합에 의해 중쇄에 연결되지만, 이황화 연결부들의 수는 상이한 면역글로불린 동형들의 중쇄들 간에 달라진다. 각 중쇄 및 경쇄는 또한 규치적으로 이격된 사슬내 이황화 가교를 가진다. 각 중쇄는 한 쪽 단부에 가변 도메인 (V(H)) 그리고 이에 수반된 수많은 불변 (C(H)) 도메인들을 가진다. 각 경쇄는 한 쪽 단부에 가변 도메인 (V(L))을 그리고 다른 쪽 단부에 불변(C(L)) 도메인을 가지며; 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제 1 불변 도메인과 함께 정렬되고, 및 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 함께 정렬된다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄와 중쇄 가변 도메인들 사이의 경계면을 형성하는 것으로 생각된다. 임의의 포유동물 종으로부터의 항체의 경쇄는 이들의 불변 도메인의 아미노산 서열들에 기초하여, 카파 (κ) 및 람다 (λ)로 불리는 두 가지 명확히 상이한 유형들 중 하나에 배정될 수 있다. 그 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 면역글로불린은 상이한 분류에 할당될 수 있다. 인간 면역글로불린에는 5 가지 주요 분류가 있다: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM, 그리고 이들 중 몇 가지는 하위분류(동형), 예를 들면, IgG-1, IgG-2, IgG-3, 및 IgG-4; IgA-1 및 IgA-2로 더 세분될 수 있다. 해당 분야의 당업자는 마우스에 대해 비등한 분류들을 알고 있을 것이다. 상이한 면역글로불린 분류에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각, 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤(mu)라고 불린다.
용어 "가변"은 본원에서 항체들간 서열이 상이한 중쇄 및 경쇄들의 특정 도메인들을 기재하기 위해 사용되며 각 특정 항체들의 그 특정 항원들에 대한 결합 및 특이성에서 사용된다. 그러나, 가변성은 항체들의 가변 도메인들 전체에 걸쳐 항상 고르게 분포되는 것은 아니다. 가변 도메인들 중 보다 많이 보존되는 부분들을 프레임워크 영역 (FR)이라 한다. 고유의 중쇄 및 경쇄의 각 가변 도메인은 3개의 상보성 결정 영역들 (CDR)에 의해 연결된, 대체로 β-쉬트 배위를 취하는 4개의 FR 영역들을 포함하며, 그리고 이는 루프 연결을 만들고, 일부 경우에는 β-쉬트 구조의 일부가 된다. 가변성은 통상적으로 경쇄 및 중쇄 가변 도메인들 모두에서 CDR들 또는 초가변 영역들에 집중된다.
각 사슬에서 CDR들은 FR 영역들에 의해 근접하게, 그리고 다른 사슬의 CDR들과 함께 유지되며, 항체의 항원 결합 부위 형성에 기여한다 (Rabat E. A. 외,"Sequences of Proteins of Immunological Interest,” National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) 참고). 본원에서 사용되는 용어 "상보성 결정 영역들”은 항원 상에서 인식되는 에피토프에 모양 및 전하 분포에 있어서 상보적인 항원 결합 부위를 생성하는 결합 분자, 가령, 면역글로불린들의 가변 영역들 내부의 서열들을 의미한다. 이러한 CDR 영역들은 그 고유의 형태로 단백질에 존재하거나, 일부 사례들에서, 예컨대, SDS에서의 용해화에 의해 변성된 단백질에 존재하는, 단백질 또는 단백질 단편들의 선형 에피토프, 불연속 에피토프, 또는 입체형태 에피토프에 대하여 특이적일 수 있다. 에피토프는 단백질들의 번역후 변형로 구성될 수 있다.
하나 이상의 CDR 잔기들의 치환 또는 하나 이상의 CDR들의 결실 또한 가능하다. 1 또는 2개의 CDR들이 결합을 위해 분포될 수 있는 항체들이 과학 문헌들에 기재되어 있다. Padlan 외 (1995 FASEB J. 9: 133-139)는 공개된 결정 구조를 기반으로 항체와 항원 사이의 접촉 영역을 분석한 결과 CDR 잔기의 약 1/5 ~ 1/3만이 실제로 항원과 접촉한다는 결론을 내렸다. Padlan은 또한 1 또는 2개 CDR들이 항원과 접촉된 아미노산들을 전혀 가지지 않았던 많은 항체들을 발견하였다 (또한 Vajdos 외. 2002 J Mol Biol 320:415-428 참고).
전술한 연구들에 기초하여 Chothia CDR들의 외부에 놓인 Kabat CDR들의 영역들로부터, 분자 모델링에 의해 및/또는 경험적으로 항원과 접촉하지 않은 CDR 잔기들을 식별할 수 있었다 (예를 들면, CDRH2에서 잔기 H60-H65는 종종 요구되지 않음). CDR 또는 이의 잔기(들)이 결실된 경우, 이는 통상적으로 또 다른 인간 항체 서열에서 이에 상응하는 위치를 차지하는 아미노산 또는 이러한 서열들의 공통으로 치환된다. CDR 내의 치환 위치 및 치환할 아미노산도 경험적으로 선택될 수 있다.
불변 도메인은 항체와 항원의 결합에 직접적으로 관여하지는 않지만, 항체 의존성 세포 독성 (ADCC)에서의 항체의 참여와 같은 다양한 효과기 기능을 나타낸다. 한 측면에서, 개시된 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)는 표 1에 제시된 가변 도메인 CDR들 중 하나 이상을 포함한다.
표 1: 식별 번호로 제시된 PD-L1 결합 분자, 중쇄 CDR1 서열, 중쇄 CDR2 서열, 중쇄 CDR3 서열, 경쇄 CDR1 서열, 경쇄 CDR2 서열, 및 경쇄 CDR3 서열.
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한 측면에서, 본원은 표 1에 제시된 하나 이상의 상보성 결정 영역들 (CDR)들 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 분리된 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 표적 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)를 개시한다. 그러므로, 예를 들면, 하나 이상의 중쇄 가변 도메인 CDR들은 서열 번호: 3, 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 서열 번호: 6, 서열 번호: 7, 서열 번호: 8, 서열 번호: 9, 및/또는 서열 번호: 10을 포함할 수 있다. 한 측면에서, 본원에 개시된 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)는 표 1의 CDR들의 목록으로부터 2 또는 3개 중쇄 가변 도메인 CDR들의 임의의 조합을 포함하는 중쇄 가변 도메인 CDR을 포함할 수 있는 것으로 이해되며 본원에서 간주된다. 그러므로, 예를 들면, PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)는 서열 번호: 3 및 서열 번호: 5; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 6; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 7; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 8; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 5; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 6; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 7; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 8; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 10; 또는 서열 번호: 4, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 10에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들을 포함할 수 있다. 한 측면에서, PD-L1 결합 분자는 서열 번호: 1에 제시된 가변 중쇄 도메인을 포함할 수 있다.
개시된 PD-L1 결합 분자에서 중쇄 가변 도메인들의 개시된 상보성 결정 영역들은 연속적이거나 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 아미노산에 의해 분리될 수 있는 것으로 이해되고 본원에서 간주된다. 그러므로, 본원은 2개 이상의 CDR들을 포함하는 중쇄 가변 도메인들을 포함하는 PD-L1 결합 분자를 개시하며, 이 때 제 1 CDR은 제 2 CDR로부터 10, 11, 12, 13, 14, 15,16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산에 의해 분리되며 및 제 2 CDR 및 제 3 CDR은 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 아미노산에 의해 분리된다.
PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)는 중쇄 가변 도메인 대신 또는 이에 더하여 경쇄 가변 도메인을 포함할 수 있는 것으로 이해되며 본원에서 간주된다. 한 측면에서, 본원은 표 1에 제시된 하나 이상의 상보성 결정 영역들 (CDR)들 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 분리된 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 표적 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)를 개시한다. 그러므로, 예를 들면, 하나 이상의 경쇄 가변 도메인 CDR들은 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 및/또는 서열 번호: 15를 포함할 수 있다. 한 측면에서, 본원에 개시된 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)는 표 1의 CDR들의 목록으로부터 2 또는 3개 경쇄 가변 도메인 CDR들의 임의의 조합을 포함하는 경쇄 가변 도메인 CDR을 포함할 수 있는 것으로 이해되며 본원에서 간주된다. 그러므로, 예를 들면, PD-L1 결합 분자는 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들을 포함할 수 있다. 한 측면에서, PD-L1 결합 분자는 서열 번호: 2에 제시된 가변 경쇄 도메인을 포함할 수 있다.
개시된 PD-L1 결합 분자에서 경쇄 가변 도메인들의 개시된 상보성 결정 영역들은 연속적이거나 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 아미노산에 의해 분리될 수 있는 것으로 이해되고 본원에서 간주된다. 그러므로, 본원은 2개 이상의 CDR들을 포함하는 경쇄 가변 도메인들을 포함하는 PD-L1 결합 분자를 개시하며, 이 때 제 1 CDR은 제 2 CDR로부터 10, 11, 12, 13, 14, 15,16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산에 의해 분리되며 및 제 2 CDR 및 제 3 CDR은 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 아미노산에 의해 분리된다.
한 측면에서, 본원에 개시된 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)는 각 도메인이 표 1에 제시된 하나 이상의 상보성 결정 영역들 (CDR)을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함할 수 있는 것으로 이해되고 본원에서 간주된다. 그러므로, 예를 들면, PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)는 서열 번호: 3, 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 서열 번호: 6, 서열 번호: 7, 서열 번호: 8, 서열 번호: 9, 및/또는 서열 번호: 10에 제시된 하나 이상의 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14 및/또는 서열 번호: 15에 제시된 하나 이상의 경쇄 가변 도메인 CDR들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 그러므로, 예를 들면, PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)는 서열 번호: 3에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 4에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 5에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 6에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 7에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 8에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 10에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 5에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 6에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 7에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 8에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 10에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 5에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 6에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 7에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 8에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 10에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 3, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 3, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 3, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 3, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 3, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 10에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 3, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 10에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 3, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 10에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 3, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 10에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 4, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 4, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 4, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 9에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 10에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 4, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 10에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 서열 번호: 4, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 10에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들; 또는 서열 번호: 4, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 10에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들 및 서열 번호: 11; 서열 번호: 12; 서열 번호: 13; 서열 번호: 14; 서열 번호: 15; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들을 포함할 수 있다. 한 측면에서, PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)는 서열 번호: 1에 제시된 가변 중쇄 도메인 및 서열 번호: 2에 제시된 가변 경쇄 도메인을 포함할 수 있다.
상기 기재한 바와 같이 개시된 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)는 또한 항체들의 단편들 일 수도 있다. 본원에서 사용되는 용어 "항체 또는 이의 단편들"은 이중 또는 다중 항원 또는 에피토프 특이성을 가지는 키메라 항체들 및 하이브리드 항체들, 및 단편들, 가령, F(ab‘)2, Fab’, Fab, Fv, sFv, dAb, 상보성 결정 영역 (CDR) 단편들, 단일쇄 항체들 (scFv), 이가 단일쇄 항체들, 디아바디 또는 하이브리드 단편들을 비롯하여, 상기 (폴리)펩티드 등에 특이적 항원 결합을 부여하기에 충분한 최소한 하나의 면역글로불린의 단편을 내포하는 다른 이중-특이적 항체들, 트리아바디, 테트라바디, (폴리)펩티드를 포함한다. 그러므로, 그 특이적 항원들에 결합하는 능력을 보유하는 항체들의 단편들이 제공된다. 예를 들면, PD-L1 결합 활성을 유지하는 항체들의 단편들은 이 용어 "항체 또는 이의 단편”의 의미에 포함된다. 이러한 항체 및 단편은 당업계에 공지된 기술에 의해 제조 될 수 있고 실시예에 제시된 방법 및 일반적으로 항체를생산하고 특이성 및 활성에 대해 항체를 스크리닝하는 일반적인 방법에 따라 특이성 및 활성에 대해 스크리닝 될 수 있다 (Harlow 및 Lane. Antibodies, A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Publications, New York, (1988)참고).
"항체 또는 이의 단편들"의 의미에는 또한 항체 단편들과 항원 결합 단백질 (단일 사슬 항체)의 접합체도 포함된다. 접합된 항체들 또는 단편들은, 예를 들어, 효과기 모이어티 또는 태그, 가령, 독성 물질, 방사능 물질, 형광 물질, 리포좀 또는 미국 특허 제 4,704,692호에 기재된 효소와 작동적으로 연결된 또는 달리 물리적으로 또는 기능적으로 결합된 항체들 또는 단편들을 지칭하며, 이 문헌의 내용은 본원에 참고문헌으로 포함된다.
구조에 관계없이, 본원에 개시된 항원-결합 단편들은 무손상 면역글로불린에 의해 인식되는 동일한 항원과 결합할 수 있다. 항원-결합 단편은 결합 분자의 아미노산 서열의, 2 이상의 연속 아미노산 잔기들, 5 이상의 연속 아미노산 잔기들, 10 이상의 연속 아미노산 잔기들, 15 이상의 연속 아미노산 잔기들, 20 이상의 연속 아미노산 잔기들, 25 이상의 연속 아미노산 잔기들, 30 이상의 연속 아미노산 잔기들, 35 이상의 연속 아미노산 잔기들, 40 이상의 연속 아미노산 잔기들, 50 이상의 연속 아미노산 잔기들, 60 이상의 연속 아미노산 잔기들, 70 이상의 연속 아미노산 잔기들, 80 이상의 연속 아미노산 잔기들, 90 이상의 연속 아미노산 잔기들, 100 이상의 연속 아미노산 잔기들, 125 이상의 연속 아미노산 잔기들, 150 이상의 연속 아미노산 잔기들, 175 이상의 연속 아미노산 잔기들, 200 이상의 연속 아미노산 잔기들, 또는 250 이상의 연속 아미노산 잔기들의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있다.
단편들은 또한, 다른 서열들에 부착되든 부착되지 않든 간에, 항체 또는 항체 단편의 활성이 비-변형된 항체 또는 항체 단편에 비해 유의하게 변화되거나 손상되지 않는다면, 특정 영역들 또는 특정 아미노산 잔기들의 삽입, 결실, 치환 또는 그 외 선택된 변형들을 포함할 수도 있다. 이러한 변형들은 일부 추가적인 성질, 가령, 이황화 결합을 할 수 있는 아미노산들의 제거/부가, 이의 생체 수명을 증가, 이의 분비 특성을 변화, 등을 제공할 수 있다. 임의의 사례에서, 항체 또는 항체 단편은 생물활성 특성, 가령, 그 동족 항원에 대한 특이적 결합을 보유하여야 한다. 항체 또는 항체 단편의 기능적 또는 활성 영역들은 단백질의 특정 영역의 돌연변이유발, 이어서 발현 및 발현된 폴리펩티드의 테스트에 의해 식별될 수 있다. 이러한 방법들은 당업자에게 용이하게 명백하며 항체 또는 항체 단편을 인코드하는 핵산의 부위-특이적 돌연변이유발을 포함 할 수 있다. (Zoller, M.J. Curr. Opin. Biotechnol. 3:348-354, 1992).
본원에서 사용되는 용어 "기능적 변이체"는, 모 결합 분자의 뉴클레오티드 및/또는 아미노산과 비교하여 하나 이상의 뉴클레오티드 및/또는 아미노산 만큼 변형된 뉴클레오티드 및/또는 아미노산을 포함하고 및 결합 짝, 예컨대, PD-L1 (PD-L1 포함)에 대한 결합에 있어서, 모 결합 분자와 여전히 경쟁할 수 있는 결합 분자를 지칭한다. 즉, 모 결합 분자의 아미노산 및/또는 뉴클레오티드 서열의 변형은 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드되는 또는 아미노산 서열을 포함하는 결합 분자의 결합 특성에 유의하게 영향을 주거나 이를 변경시키지 않는다, 즉, 결합 분자는 여전히 대상을 인식하여 결합 할 수 있다. 기능적 변이체는 뉴클레오티드 및 아미노산 치환, 부가 및 결실을 비롯한 보존적 서열 변형들을 가질 수 있다. 이들 변형들은 당업계에 공지된 표준 기술들, 가령, 부위-지정 돌연변이유발 및 무작위 PCR-매개된 돌연변이유발에 의해 도입될 수 있으며, 및 천연 뿐만 아니라 비천연 뉴클레오티드 및 아미노산을 포함할 수 있다.
본원에 개시된 결합 분자, 항체, 단편들, 및 변이체들은 항원 표적, 가령, 예를 들면, PD-L1에 특이적으로 결합할 수 있다. 결합 분자, 예컨대, 항체 및 이의 결합 짝, 예컨대, 항원의 상호작용과 관련하여 본원에서 사용되는 용어 "특이적으로 결합"은 이러한 상호작용이 결합 짝 상에서 특정 구조, 예컨대, 항원 결정인자 또는 에피토프의 존재에 따라 달라짐을 의미한다. 다시 말하면, 항체는 결합 짝이 다른 분자의 혼합물에 존재하는 경우 조차도 결합 짝에 우선적으로 결합하거나 이를 인식한다. 이러한 결합은 공유 또는 비-공유 상호작용 또는 이 둘의 조합에 의해 매개될 수 있다. 또한 달리 말하면, 용어 "특이적으로 결합”은 항원 또는 이의 단편에 대한 면역특이적 결합을 의미하며 다른 항원들에 대한 면역특이적 결합을 의미하는 것은 아니다. 항원에 면역특이적으로 결합하는 결합 분자는 예컨대, 방사면역측정법 (RIA), 효소-결합 면역흡착 분석법 (ELISA), BIAcore, 또는 당업계에 공지된 다른 분석법들로 결정시 다른 펩티드 또는 폴리펩티드들에 보다 낮은 친화도로 결합할 수 있다. 항원에 면역특이적으로 결합하는 결합 분자 또는 이의 단편들은 관련 항원들과 교차-반응성일 수 있다. 바람직하게는, 항원에 면역특이적으로 결합하는 결합 분자 또는 이의 단편들은 다른 항원들과 교차-반응하지 않는다.
한 측면에서, 개시된 항체 또는 본원에 개시된 결합 분자는 인산 항체 또는 인간 결합 분자일 수 있다. 용어 "인간"은, 본원에서 정의된 결합 분자에 대해 사용시, 인간으로부터 직접적으로 유래한 또는 인간 서열에 기초하여 유래한 분자를 지칭한다. 결합 분자가 인간 서열로부터 유래되거나 인간 서열에 기초하고 이후에 변형 될 때, 이는 명세서 전체에 걸쳐 사용시 여전히 인간으로 간주되어야 한다. 다시 말해서, 결합 분자에 적용될 때, 용어 인간은 인간 또는 인간 림프구에서 또는 변형된 형태로 발생하거나 발생하지 않는 가변 또는 불변 영역에 기초한 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는 결합 분자를 포함하는 것으로 한다. 따라서, 인간 결합 분자는 인간 생식계열 면역글로불린 서열에 의해 인코드되지 않은 아미노산 잔기를 포함 할 수 있고, 치환 및/또는 결실을 포함 할 수 있다 (예컨대, 예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이). 본원에서 사용된 "기초한"은 핵산 서열이 주형으로부터 정확하게, 또는, 가령, 오류가 발생하기 쉬운 PCR 방법에 의해 경미한 돌연변이와 함께 복제될 수 있는, 또는 주형과 정확히 일치하게 또는 경미한 변형과 함께 합성적으로 만들어 질 수 있는 상황을 지칭한다. 인간 서열들에 기초한 반합성 분자들 또한 본원에서 사용되는 인간인 것으로 간주된다.
선택적으로, 항체들은 다른 종들에서 생성되어 인간에서의 투여를 위해 "인간화"된다. 비-인간 (예컨대, 쥐과) 항체들의 인간화 형태들은 비-인간 면역글로불린으로부터 유래한 최소한의 서열을 내포하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 사슬들 또는 이의 단편들 (가령, Fv, Fab, Fab', F(ab')2, 또는 항체들의 다른 항원-결합 서열들)이다. 인간화 항체는 인간 면역글로불린 (수용자 항체)를 포함하며 여기서 수용자의 상보성 결정 영역 (CDR)으로부터의 잔기들은 원하는 특이성, 친화도 및 능력을 가지는 비-인간 종들 (공여자 항체), 가령, 마우스, 래트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기들로 대체된다. 일부 경우에서, 상기 인간 면역글로블린의 Fv 프레임워크 잔기는 대응하는 비-인간 잔기에 의해 대체된다. 인간화 항체들은 또한 수용자 항체에서도 도입된 CDR 또는 프레임워크 서열들에서도 발견되지 않는 잔기들을 포함할 수 있다. 일반적으로, 상기 인간화 항체는 실질적으로 최소한 하나의, 그리고 전형적으로 2개의 가변 도메인을 모두 포함하는데, 이 때 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역들은 비-인간 면역글로불린에 대응하며, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역들은 인간 면역글로불린 공통 서열의 것들이다. 상기 인간화 항체는 임의선택적으로 면역글로불린 불변 영역 (Fc)의 최소한 일부분, 전형적으로 인간 면역글로불린의 최소한 일부분을 또한 포함할 것이다 (Jones 외, Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann 외, Nature, 332:323-327 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596 (1992)).
비-인간 항체들을 인간화하는 방법들은 당업계에 널리 공지되어 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 비-인간인 공급원으로부터 항체로 유입된 하나 이상의 아미노산 잔기들을 가진다. 이러한 비-인간 아미노산 잔기들은 종종 "유입” 잔기들로 지칭되며 이는 전형적으로 "유입" 가변 도메인으로부터 취해진다. 인간화는 본질적으로 Winter 및 공동 연구자들의 방법에 따라 상응하는 인간 항체의 서열들을 설치류 CDR들 또는 CDR 서열들로 치환함으로써 실시될 수 있다 (Jones 외, Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann 외, Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen 외, Science, 239: 1534-1536 (1988)). 따라서, 이러한 "인간화" 항체들은 키메라 항체들이며 (미국 특허 제 4,816,567), 여기서 실질적으로 보다 적은 무손상 인간 가변 도메인이 상응하는 비-인간 종들의 서열로 치환되어있다. 실제로, 인간화 항체들은 전형적으로 일부 CDR 잔기들 및 가능하게는 일부 FR 잔기들이 설치류 항체들에서의 유사 부위들로부터 온 잔기들로 치환된 인간 항체들이다.
인간화 항체들을 제조함에 사용될 인간 가변 도메인들, 경쇄 및 중쇄 모두의 선택은 항원성을 감소시키기 위해 매우 중요하다. "최적-적합" 방법에 따르면, 설치류 항체의 가변 도메인 서열은 공지된 인간 가변 도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 스크리닝된다. 이어서 설치류의 서열에 가장 근접한 인간 서열이 인간화 항체의 인간 프레임워크 (FR)로서 승인된다 (Sims 외, J. Immunol., 151 :2296 (1993) 및 Chothia 외, J. Mol. Biol., 196:901 (1987)). 또 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정 하위그룹들의 모은 인간 항체들의 공통 서열로부터 유래한 특정 프레임워크를 이용한다. 동일한 프레임워크가 여러 상이한 인간화 항체들에 대하여 사용될 수 있다 (Carter 외., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); Presta 외, J Immunol., 151 :2623 (1993)).
일부 측면에서, 항원에 대한 높은 친화도 및 다른 바람직한 생물학적 성질들을 보유한 항체들이 인간화되는 것이 중요할 수 있다. 이러한 목적을 달성하기 위해, 바람직한 방법에 따라, 인간화 항체는 모체 서열 및 인간화 서열의 3차원 모델을 사용하여 모체 서열 및 다양한 개념적 인간화 생성물의 분석 과정에 의해 제조된다. 이러한 3차원 면역글로불린 모델들은 통상적으로 이용가능하며 당업자에게 잘 알려져있다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 3차원 입체 구조를 설명하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램을 사용할 수 있다. 이러한 디스플레이를 관찰하면 후보 면역글로불린 서열의 기능에 있어서 잔기의 가능한 역할의 분석, 즉, 항원에 결합하는 후보 면역글로불린의 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석이 가능하다. 이러한 방식으로, FR 잔기가 공통 및 유입 서열로부터 선택되고 조합되어, 원하는 항체 특성, 가령, 표적 항원(들)에 대한 친화도 증가가 달성 될 수 있다. 일반적으로, CDR 잔기들은 항원 결합에 영향을 줌에 있어서 직접적으로 그리고 가장 실질적으로 관여한다 (1994년 3월 공개된 WO 94/04679 참고).
단일클론 항체를 생성하는 하이브리도마 세포들이 개시되어 있다. 본원에 사용된 용어 "단일클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭한다, 즉, 이러한 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하다. 본 발명의 단일클론 항체들은 구체적으로 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분은 특정 종으로부터 유래한 또는 특정 항체 분류 또는 하위분류에 속하는 항체들의 상응하는 서열들과 동일하거나 이와 상동성이지만, 상기 쇄(들)의 잔부는 또 다른 종으로부터 유래한 또는 또 다른 항체 분류 또는 하위분류에 속하는 항체들의 상응하는 서열들과 동일하거나 이와 상동성인 "키메라” 항체들, 뿐만 아니라 필요한 활성을 나타내는 한 이러한 항체들의 단편들을 포함한다 (미국 특허 제 4,816,567 및 Morrison 외, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984) 참고).
단일클론 항체들은 Kohler 및 Milstein, Nature, 256:495 (1975) 또는 Harlow 및 Lane. Antibodies, A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Publications, New York, (1988)에 기재된 바와 같은 하이브리도마 방법들을 사용하여 제조될 수 있다. 하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물은 통상적으로 면역화 물질에 특이적으로 결합하게 될 항체들을 생성하는 또는 생성할 수 있는 림프구를 유도하기 위해 면역화 물질로 면역화된다. 대안적으로, 림프구는 시험관내에서 면역화될 수 있다. 바람직하게는, 면역화 물질은 PD-L1을 포함한다. 통상적으로, 단일클론 항체들의 생성은 면역원으로서 정제된 단백질 또는 펩티드들의 이용 가능성에 의존하였다. 보다 최근에 DNA 기반 면역화는 강력한 면역 반응을 유도하고 단일클론 항체들을 생성하는 한 방법으로서의 유망함을 보여주었다. 이러한 접근법에서, DNA-기반 면역화가 사용될 수 있는데, 이 때 인간 IgG1과의 융합 단백질로서 발현되는 PD-L1의 일부분을 인코드하는 DNA가 당업계에 공지된 방법들에 따라 (예컨대, Kilpatrick KE, 외. Gene gun delivered DNA-based immunizations mediate rapid production of murine monoclonal antibodies to the Flt-3 receptor. Hybridoma. 1998 Dec;17(6):569-76; Kilpatrick KE 외. High-affinity monoclonal antibodies to PED/PEA-15 generated using 5 microg of DNA. Hybridoma. 2000 Aug;19(4):297-302, 이들은 본원에 항체 생성 방법에 관하여 전체로 참고문헌으로 포함됨) 및 실시예에 기재된 바에 따라 숙주 동물에 주사된다.
정제된 단백질 또는 DNA를 이용한 면역화에 대한 대안적인 접근법은 배큘로바이러스에서 발현된 항원을 사용하는 것이다. 이러한 시스템의 이점들에는 생성의 용이성, 높은 발현 수준, 및 포유동물 시스템에서 관찰된 것과 매우 유사한 번역 후 변형이 포함된다. 이러한 시스템의 사용은 융합 단백질들로서 항-PD-L1 항체의 도메인들을 발현시키는 것을 포함한다. 항원은 신호 서열과 항-PD-L1 항체 뉴클레오티드 서열의 성숙 단백질 도메인 사이의 인-프레임에 유전자 단편을 삽입함으로써 생성된다. 이는 비리온 표면에 외래 단백질들을 디스플레이시킨다. 이러한 방법은 전 바이러스를 이용한 면역화를 가능하게 하여, 표적 항원들을 정제할 필요성을 제거한다.
일반적으로, 인간 기원의 세포들이 필요한 경우 단일클론 항체들의 제조 방법들에서 말초 혈액 림프구들 ("PBLs")이 사용되거나, 또는 비-인간 포유동물 공급원이 필요한 경우 비장 세포들 또는 림프절 세포들이 사용된다. 이어서 림프구는 적합한 융합화제, 가령, 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 불멸화 세포주와 융합되어, 하이브리도마 세포를 형성한다 (Goding,"Monoclonal Antibodies: Principles and Practice” Academic Press, (1986) pp. 59-103). 불멸화 세포주는 통상적으로 설치류, 소, 말, 및 인간 기원의 골수종 세포들을 비롯한, 형질전환된 포유동물 세포들이다. 통상적으로, 래트 또는 마우스 골수종 세포주가 사용된다. 하이브리도마 세포는 바람직하게는 융합되지 않은 불멸화 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에서 배양 될 수 있다. 예를 들면, 모 세포들에 효소 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 (HGPRT 또는 HPRT)가 없는 경우, 하이브리도마들에 대한 배양 배지는 통상적으로 하이포잔틴, 아미노프테린, 및 티미딘 ("HAT 배지")를 포함할 것이며, 이러한 물질들은 HGPRT-결핍 세포들의 성장을 방해한다. 바람직한 불멸화 세포주는 선택된 항체 -생성 세포들을 효율적으로 융합시키고, 이러한 세포들에 의한 안정한 높은 수준의 항체 발현을 보조하고 HAT 배지와 같은 배지에 대해 민감성인 세포주들이다. 더욱 바람직한 불멸화 세포주들은 쥐과 골수종 세포주이며, 이는 예를 들어, 캘리포니아 샌디에고 주 Salk Institute Cell Distribution Center, 및 메릴랜드 주 록빌의 미국 표준 균주 (American Type Culture Collection)로부터 얻을 수 있다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이형골수종 세포주들 또한 인간 단일클론 항체들의 제조에 관하여 기재된 바 있다 (Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur 외,"Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications” Marcel Dekker, Inc., New York, (1987) pp. 51-63). 하이브리도마 세포들이 배양되는 배양 배지는 이후 PD-L1에 대하여 지시되는 단일클론 항체들의 존재에 관해 분석될 수 있다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포들에 의해 생성된 단일클론 항체들의 결합 특이성은 면역침전법에 의해 또는 시험관내 결합 분석법, 가령, 방사면역측정법 (RIA) 또는 효소-결합 면역흡착 분석법 (ELISA)에 의해 결정된다. 이러한 기술 및 분석법은 당업계에 공지되어 있으며,하기 실시예 또는 Harlow and Lane Antibodies, A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Publications, New York, (1988)에 추가로 설명되어 있다.
원하는 하이브리도마 세포가 식별된 후, 클론들은 제한 희석에 의해 또는 FACS 분류 절차에 의해 서브클로닝되고 표준 방법에 의해 성장 될 수 있다. 이러한 목적에 적합한 배양 배지는 예를 들어 Dulbecco사의 변형 Eagle 배지 및 RPMI-1640 배지를 포함한다. 대안적으로, 하이브리도마 세포들은 포유동물에서 복수와 같이 생체내 성장될 수 있다.
서브클론들에 의해 분비된 단일클론 항체는, 예를 들어, 단백질 A-세파로스, 단백질 G, 하이드록실 아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 또는 친화성 크로마토그래피와 같은 통상적인 면역글로불린 정제 절차에 의해 배양 배지 또는 복수 액으로부터 분리 또는 정제 될 수 있다.
용어 "분리된"은, 본원에서 정의된 결합 분자에 적용될 때, 다른 단백질 또는 폴리펩티드들이 실질적으로 없는, 특히 상이한 항원 특이성을 가지는 다른 결합 분자가 없는, 그리고 또한 다른 세포 또는 조직 물질 및/또는 화학적 전구물질 또는 다른 화학물질들이 실질적으로 없는 결합 분자를 지칭한다. 예를 들면, 결합 분자가 재조합적으로 생성 될 때, 이들은 바람직하게는 실질적으로 배양 배지가 없고, 결합 분자가 화학적 합성에 의해 생성 될 때, 이들은 바람직하게는 실질적으로 화학적 전구물질 또는 다른 화학 물질이 없다, 즉, 단백질 합성에 관여하는 화학적 전구물질 또는 기타 화학물질들로부터 분리된다. 바람직하게는, 실질적으로 없음은 결합 분자가 통상적으로 시료의 약 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% W/W를, 더욱 통상적으로 약 95%를 구성하게 됨을, 그리고 바람직하게는 99% 이상의 순도가 될 것임을 의미한다.
단일클론 항체들은 또한 미국 특허 제 4,816,567에 기재된 것들과 같은 재조합 DNA 방법들에 의해 제조될 수 있다. 단일클론 항체를 인코드하는 DNA는 통상적인 과정 (예컨대, 상기 쥐과 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코드하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 이용하여)을 이용하여 용이하게 분리 및 시퀀싱될 수 있다. 하이브리도마 세포들은 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로서 기능한다. 일단 분리되면, DNA는 발현 벡터에 배치 될 수 있으며, 그 다음 달리 면역 글로불린 단백질을 생성하지 않는 유인원 COS 세포, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, 형질세포종 세포 또는 골수종 세포와 같은 숙주 세포에 형질감염되어, 재조합 숙주 세포에서 단일클론 항체들의 합성을 얻게 된다. DNA는 또한, 예를 들면, 상동성 쥐과 서열들 대신 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인들을 코딩 서열들로 치환함으로써 (미국 특허 제 4,816,567) 또는 면역글로불린 코딩 서열에 비-면역글로불린 폴리펩티드에 대한 코딩 서열의 전부 또는 일부를 공유 결합시킴으로써 변형될 수 있다. 선택적으로, 이러한 비-면역글로불린 폴리펩티드는 항체의 불변 도메인을 치환하거나 또는 항체의 하나의 항원-결합 부위의 가변 도메인들을 치환하여, PD-L1에 대한 특이성을 가지는 하나의 항원-결합 부위 (PD-L1 포함) 및 다른 항원에 대한 특이성을 가지는 또 다른 항원 결합 부위를 포함하는 키메라 2가 항체를 생성한다.
시험관내 방법들 또한 1가 항체들을 제조하기에 적합하다. 항체의 단편들, 바람직하게는, Fab 단편들을 생성하기 위한 항체들의 소화는 당업계에 공지된 관례적인 기술들을 사용하여 구현될 수 있다. 예를 들면, 소화는 파파인을 사용하여 실시될 수 있다. 파파인 소화의 예들은 1994년 12월 22일 공개된 WO 94/29348, 미국 특허 제 4,342,566, 및 Harlow 및 Lane, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York, (1988)에 기재되어 있다. 항체들의 파파인 소화는 통상적으로, 각각 하나의 항원 결합 부위를 가지며 Fab 단편들로 불리는 2개의 동일한 항원 결합 단편들, 및 잔부 Fc 단편을 생성한다. 펩신 처리는 F(ab')2 단편이라 불리는 단편을 산출하는데, 이는 2개의 항원 결합 부위들을 가지며 여전히 항원을 교차 결합시킬 수 있다.
항체 소화에서 생성되는 Fab 단편들은 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제 1 불변 도메인을 내포한다. Fab' 단편은 항체 힌지(hinge)의 영역으로부터의 하나 또는 그 이상의 시스테인을 포함하여 중쇄 도메인의 카르복시 말단에서의 추가적인 몇 개 잔기들이, Fab 단편과 상이하다. F(ab')2 단편은 힌지 영역에서 이황화 다리에 의해 연결되는 2개의 Fab’단편들을 포함하는 2가 단편이다. Fab'-SH는 본 명세서에서 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)이 유리 티올기를 보유하는 Fab’를 나타낸다. 항체 단편은 원래 이들 사이에 힌지 시스테인을 보유하는 Fab’단편 쌍으로서 생성되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링 또한 공지되어 있다.
대안적으로, 본원에 개시된 항체들은, 면역화될 때, 내생성 면역글로불린 생산없이 인간 항체들의 전체 레퍼토리를 생성할 수 있는 형질전환 동물들 (예컨대, 마우스)을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들면, 키메라 및 생식세포 계열 돌연변이체 마우스에서 항체 중쇄 결합 영역 (J(H)) 유전자의 동형접합 결실은 내인성 항체 생성을 완전히 억제시키는 것으로 설명된 바 있다. 이러한 생식세포 계열 돌연변이체 마우스에서 인간 생식세포 계열 면역글로불린 유전자 어레이를 전달하면 항원 공격접종시 인간 항체들이 생성될 것이다 (예컨대, Jakobovits 외, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551-255 (1993); Jakobovits 외., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggemann 외, Year in Immuno., 7:33 (1993) 참고). 인간 항체들은 또한 파지 디스플레이 라이브러리에서 생성될 수 있다 (Hoogenboom 외, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks 외, J. Mol. Biol., 222:581 (1991)). Cote 외. 및 Boemer 외의 기술들 또한 인간 단일클론 항체들의 제조에 이용가능하다 (Cole 외, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boemer 외, J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)).
항체의 분리된 면역원성 특이적 파라토프 또는 단편 또한 제공된다. 항체의 특이적 면역원성 에피토프는 분자의 화학적 또는 물리적 파괴에 의해 전 항체로부터 분리될 수 있다. 그리하여 수득된 정제된 단편들은 본원에 제시된 방법들에 의해 그 면역원성 및 특이성을 결정하기 위하여 테스트된다. 항체의 면역반응성 파라토프는, 선택적으로, 직접 합성된다. 면역반응성 단편은 상기 항체 아미노산으로부터 유래한 최소한 약 2 내지 5개 연속 아미노산들의 아미노산 서열로 정의된다.
항체를 포함하는 단백질을 생성하는 한 가지 방법은 단백질 화학 기술에 의해 둘 이상의 펩티드 또는 폴리펩티드를 함께 연결하는 것이다. 예를 들어, 펩티드 또는 폴리펩티드는 Fmoc (9-플루오레닐 메틸옥시카르보닐) 또는 Boc (tert-부틸옥시카르보노일) 화학을 사용하여 현재 이용가능한 실험실 장비를 사용하여 화학적으로 합성 될 수 있다. (Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA). 당업자는 항체에 상응하는 펩티드 또는 폴리펩티드가 예를 들어 표준 화학 반응에 의해 합성 될 수 있음을 쉽게 알 수 있다. 예를 들어, 펩티드 또는 폴리펩티드는 합성되고 합성 수지로부터 절단되지 않을 수 있는 반면, 항체의 다른 단편은 합성되고 이어서 수지로부터 절단되어 다른 단편에서 기능적으로 차단된 말단기를 노출시킬 수 있다. 펩티드 축합 반응에 의해, 이들 두 단편은 각각 카르복실 및 아미노 말단에서 펩티드 결합을 통해 공유 결합되어 항체 또는 이의 단편을 형성 할 수 있다. (Grant GA (1992) Synthetic Peptides: A User Guide. W.H. Freeman 및 Co., N.Y. (1992); Bodansky M 및 Trost B., Ed. (1993) Principles of Peptide Synthesis. Springer-Verlag Inc., NY. 대안적으로, 펩티드 또는 폴리펩티드는 상기 기재된 바와 같이 생체내에서 독립적으로 합성된다. 일단 분리되면, 이들 독립적인 펩티드 또는 폴리펩티드는 유사한 펩티드 축합 반응을 통해 연결되어 항체 또는 이의 단편을 형성할 수 있다.
예를 들어, 클로닝된 또는 합성 펩티드 세그먼트의 효소적 결찰은 상대적으로 짧은 펩티드 단편들이 결합되어 더 큰 펩티드 단편들, 폴리펩티드들 또는 전체 단백질 도메인들을 생성 할 수 있게 한다 (Abrahmsen L 외, Biochemistry, 30:4151 (1991)). 대안적으로, 합성 펩티드의 천연 화학적 결찰은 더 짧은 펩티드 단편들로부터 큰 펩티드 또는 폴리펩티드들을 합성적으로 제작하기 위해 이용 될 수 있다. 이 방법은 2 단계 화학 반응으로 구성된다 (Dawson 외, Synthesis of Proteins by Native Chemical Ligation. Science, 266:776-779 (1994)). 첫 번째 단계는 보호되지 않은 합성 펩티드-알파-티오에스테르와 아미노-말단 Cys 잔기를 내포하는 또 다른 보호되지 않은 펩티드 세그먼트의 화학선택적 반응으로서, 초기 공유 생성물로서 티오에스테르-연결된 중간체를 제공한다. 반응 조건의 변화없이, 이 중간체는 자발적이고 빠른 분자내 반응을 거쳐 결찰 부위에서 천연 펩티드 결합을 형성한다. 단백질 분자의 전체 합성에 이러한 천연 화학적 결찰 방법의 적용은 인간 인터루킨 8 (IL-8)의 제조에 의해 설명된다 (Baggiolini M 외. (1992) FEBS Lett. 307:97-101; Clark-Lewis I 외., J.Biol.Chem., 269: 16075 (1994); Clark-Lewis I 외, Biochemistry, 30:3128 (1991); Rajarathnam K 외, Biochemistry 33:6623-30 (1994)).
대안적으로, 화학적 결찰의 결과로서 펩티드 세그먼트들 사이에 형성된 결합이 비자연적인 (비 펩티드) 결합인 경우 보호되지 않은 펩티드 세그먼트들이 화학적으로 연결된다 (Schnolzer, M 외. Science, 256:221 (1992)). 이 기술은 단백질 도메인의 유사체 뿐만 아니라 완전한 생물학적 활성을 갖는 다량의 비교적 순수한 단백질을 합성하는데 사용되었다 (deLisle Milton RC 외, Techniques in Protein Chemistry IV. Academic Press, New York, pp. 257-267 (1992)).
또한 생물활성을 가지는 항체들의 단편들이 개시되어 있다. 폴리펩티드 단편은 아데노바이러스 또는 배큘로바이러스 발현 시스템과 같은 이의 폴리펩티드 단편들을 생성 할 수 있는 발현 시스템에서 폴리펩티드를 인코드하는 핵산을 클로닝함으로써 수득된 재조합 단백질 일 수 있다. 예를 들어, 항체와 PD-L1의 상호작용과 관련된 생물학적 효과를 유발할 수 있는 특정 하이브리도마로부터 항체의 활성 도메인을 결정할 수 있다. 예를 들어, 항체의 활성 또는 결합특이성 또는 친화도에 기여하지 않는 것으로 밝혀진 아미노산들은 각 활성의 손실없이 제거 될 수 있다. 예를 들어, 다양한 구체예에서, 아미노 또는 카르복시-말단 아미노산은 천연 또는 변형된 비-면역글로불린 분자 또는 면역글로불린 분자로부터 순차적으로 제거되고 각각의 활성은 많은 이용가능한 분석법들 중 하나에서 분석된다. 또 다른 예에서, 항체의 단편은 변형된 항체를 포함하며, 이 때 특정 위치의 자연 발생 아미노산은 하나 이상의 아미노산으로 치환되어 있으며, 그리고 아미노 말단 또는 카르복시 말단 아미노산의 일부, 또는 심지어 항체의 내부 영역은 폴리펩티드 단편 또는 다른 모이어티, 가령, 비오틴으로 대체되어 있는데, 이는 변형된 항체의 정제를 용이하게 할 수 있다. 예를 들어, 변형된 항체는 펩티드 화학을 통해 또는 2개의 폴리펩티드 단편들을 코딩하는 각각의 핵산을 발현 벡터로 클로닝함으로써 말토오스 결합 단백질에 융합 될 수 있으며, 그리하여 코딩 영역의 발현은 하이브리드 폴리펩티드를 생성한다. 하이브리드 폴리펩티드는 아밀로오스 친화성 컬럼을 통과함으로써 친화성 정제 될 수 있으며, 변형된 항체 수용체는 특정 프로테아제 인자 Xa로 하이브리드 폴리펩티드를 절단함으로써 말토오스 결합 영역으로부터 분리 될 수 있다. (예를 들면, New England Biolabs Product Catalog, 1996, 164페이지를 참고). 진핵 세포에서 하이브리드 단백질을 분리하기 위해 유사한 정제 절차를 사용할 수 있다.
단편들은 다른 서열들에 부착되든 부착되지 않든 간에, 해당 단편의 활성이 비-변형된 항체 또는 항체 단편에 비해 유의하게 변화되거나 손상되지 않는다면, 특정 영역들 또는 특정 아미노산 잔기들의 삽입, 결실, 치환 또는 그 외 선택된 변형들을 포함할 수도 있다. 이러한 변형들은 일부 추가적인 성질, 가령, 이황화 결합을 할 수 있는 아미노산들의 제거 또는 부가, 이의 생체 수명을 증가, 이의 분비 특성을 변화, 등을 제공할 수 있다. 임의의 사례에서, 단편은 결합 활성, 결합 도메인에서의 결합 조절 등과 같은 생물활성 성질을 보유하여야 한다. 항체의 기능적 또는 활성 영역들은 단백질의 특정 영역의 돌연변이유발, 이어서 발현 및 발현된 폴리펩티드의 테스트에 의해 식별될 수 있다. 이러한 방법들은 당업자에게 용이하게 명백하며 항원을 인코드하는 핵산의 부위-특이적 돌연변이유발을 포함 할 수 있다. (Zoller MJ 외. Nucl. Acids Res. 10:6487-500 (1982)).
특정 단백질, 변이체, 또는 단편과 선택적으로 결합하는 항체들을 선택하기 위해 다양한 면역분석 형태들이 사용될 수 있다. 예를 들어, 고체상 ELISA 면역분석법은 단백질, 단백질 변이체 또는 이의 단편과 선택적으로 면역반응하는 항체를 선택하기 위해 관례적으로 사용된다. 선택적 결합을 결정함에 사용될 수 있는 면역분석법 형태 및 조건들의 설명에 관하여 Harlow and Lane. Antibodies, A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Publications, New York, (1988)를 참고하라. 단일클론 항체의 결합 친화도는 예를 들어, Munson 등의, Anal. Biochem., 107:220 (1980)에 의한 Scatchard 분석법에 의해 결정될 수 있다.
또한 단일클론 항체 또는 이의 단편의 용기 및 PD-L1 분자에 대한 항-PD-L1 항체 또는 이의 단편의 결합을 탐지하기 위한 하나 이상의 시약을 포함하는 항체 시약 키트가 제공된다. 시약은 예를 들어, 형광 태그, 효소 태그 또는 기타 태그를 포함 할 수 있다. 시약은 또한 효소 반응을 위한 2차 또는 3차 항체 또는 시약을 포함 할 수 있으며, 여기서 효소 반응은 시각화 될 수 있는 생성물을 생성한다.
1. 상동성/동일성
본원에 개시된 유전자 및 단백질의 임의의 공지된 변이체 및 유도체 또는 발생할 수 있는 것들을 정의하는 한 가지 방법은 특정 공지된 서열에 대한 상동성과 관련하여 변이체 및 유도체를 정의하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 표 4는 PD-L1 중쇄 가변 도메인의 특정 서열을 제시한다. 특히, 언급된 서열에 대해 최소한, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 퍼센트 상동성을 가지는, 본원에 개시된 이러한 및 다른 유전자 및 단백질들의 변이체들이 개시되어 있다. 당업자는 2개의 단백질들 또는 핵산들, 가령, 유전자들의 상동성을 결정하는 방법을 용이하게 이해할 것이다. 예를 들어, 상동성이 최고 수준이 되도록 두 서열을 정렬한 후 상동성을 계산할 수 있다.
상동성을 계산하는 또 다른 방법은 공개된 알고리즘에 의해 실시 될 수 있다. 비교를 위한 최적의 서열 정렬은 가령, Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)의 국소 상동성 알고리즘; Needleman and Wunsch, J. MoL. Biol. 48:443 (1970)의 상동성 정렬 알고리즘; Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2444 (1988)의 유사성 방법의 조사; 이들 알고리즘의 자동화 시행 (Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI에서 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)로 실행될 수 있다.
임의의 방법이 전형적으로 사용될 수 있고 특정 예에서 이러한 다양한 방법의 결과가 다를 수 있으나, 당업자는 이러한 방법들 중 적어도 하나에서 동일성이 발견되는 경우, 서열은 언급된 동일성을 가지며 본원에 개시된 것으로 말할 수 있을 것임을 이해할 것이다.
예를 들어, 본원에서 사용된 바와 같이, 또 다른 서열에 대하여 특정 퍼센트 상동성을 가지는 것으로 언급된 서열은 상기 기재된 임의의 하나 이상의 계산 방법에 의해 계산된 언급된 상동성을 갖는 서열을 지칭한다. 예를 들면, Zuker 계산법을 사용하여 첫 번째 서열이 두 번째 서열에 대해 80 퍼센트 상동성을 가지는 것으로 계산된 경우, 임의의 다른 계산 방법들로 계산하여 첫 번째 서열이 두 번째 서열에 대해 80 퍼센트 상동성을 가지지 않는다 하더라도, 첫 번째 서열은 본원에 정의된 바와 같이, 두 번째 서열에 대하여 80 퍼센트 상동성을 가진다. 또 다른 예로서, 첫 번째 서열이 Zuker 계산법 및 Pearson 및 Lipman 계산법을 사용하여 첫 번째 서열이 두 번째 서열에 대해 80 퍼센트 상동성을 가지는 것으로 계산되는 경우, Smith 및 Waterman 계산법, Needleman 및 Wunsch 계산법, Jaeger 계산법, 또는 임의의 다른 계산법으로 계산하여 첫 번째 서열이 두 번째 서열에 대해 80 퍼센트 상동성을 가지지 않는 경우라 하더라도, 첫 번째 서열은 두 번째 서열에 대해 본원에 정의된 바와 같은 80 퍼센트 상동성을 가진다. 또한 또 다른 예로서, 각 계산법들을 사용하여 첫 번째 서열이 두 번째 서열에 대해 80 퍼센트 상동성을 가지는 것으로 계산되는 경우 첫 번째 서열은 두 번째 서열에 대해 본원에 정의된 바와 같은 80 퍼센트 상동성을 가진다 (실제로 상이한 계산법들이 종종 상이한 계산된 상동성 백분율들을 생성한다 할지라도).
2. 펩티드
a) 단백질 변이체들
본원에서 논의된 바와 같이 공지되어 있는 본원에 개시된 PD-L1 결합 분자 및 PD-L1 결합 CDR들 및 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 수많은 변이체들이 존재하며 본원에서 고려된다. 또한, 공지된 기능적 균주 변이체들에 대하여 또한 개시된 방법들 및 조성물에서 기능하는 PD-L1 결합 분자 및 PD-L1 결합 CDR들 및 중쇄 및 경쇄 가변 영역들의 유도체들이 존재한다. 당업자는 단백질 변이체들 및 유도체들을 잘 이해할 것이며 이는 아미노산 변형들을 포함할 수 있다. 예를 들면, 아미노산 변형들은 통상적으로 다음 3개 분류들 중 하나 이상에 속한다: 치환, 삽입 또는 결실 변이체. 본원에서 사용되는 "삽입"은 모체, 종종 천연 분자와 비교하여 각각 하나 이상의 아미노산 또는 뉴클레오티드 잔기들의 부가를 생성하는 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열의 변화를 지칭한다. 삽입은 아미노 및/또는 카르복실 말단 융합 뿐만 아니라 단일 또는 다수 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 삽입은 일반적으로 아미노 또는 카르복실 말단 융합의 삽입들 보다 작은 삽입, 예를 들면, 1 내지 4개 잔기들 정도의 삽입이 될 것이다. 실시예에 기재된 것과 같은 면역원성 융합 단백질 유도체는 시험관내 교차 결합에 의해 또는 융합을 인코드하는 DNA로 형질전환된 재조합 세포 배양에 의해 표적 서열에 면역원성을 부여하기에 충분히 큰 폴리펩티드를 융합함으로써 제조된다. 결실은 단백질 서열에서 하나 이상의 아미노산 잔기의 제거를 특징으로 한다. 전형적으로, 단백질 분자 내의 어느 한 부위에서 약 2 내지 6 개 이하의 잔기가 결실된다. 이들 변이체는 일반적으로 단백질을 코딩하는 DNA에서 뉴클레오티드의 부위 특이적 돌연변이 유발에 의해 제조되고, 이에 의해 변이체를 코딩하는 DNA를 생성한 후 재조합 세포 배양에서 DNA를 발현시킨다. 공지된 서열을 갖는 DNA의 미리결정된 부위에서 치환 돌연변이를 만드는 기술, 예를 들어, M13 프라이머 돌연변이유발 및 PCR 돌연변이유발이 잘 알려져있다. 아미노산 치환은 일반적으로 단일 잔기들의 치환이지만 한 번에 여러 다른 위치에서 발생할 수 있고; 삽입은 일반적으로 약 1 내지 10개의 아미노산 잔기 정도가 될 것이며; 결실은 약 1 내지 30개 잔기 범위가 될 것이다. 결실 또는 삽입은 바람직하게는 인접한 쌍들, 즉, 2개 잔기들의 결실 또는 2개 잔기들의 삽입으로 만들어진다. 치환, 결실, 삽입 또는 이들의 임의의 조합을 결합하여 최종 구조체에 도달 할 수 있다. 돌연변이들은 해당 서열을 리딩 프레임 밖으로 위치하게 해서는 안되며 바람직하게는 2차 mRNA 구조를 생성할 수 있는 상보적 영역들을 생성하지 않을 것이다. 치환 변이체는 적어도 하나의 잔기가 제거되고 그 자리에 상이한 잔기가 삽입 된 것이다. 이러한 치환은 일반적으로 다음 표 5에 따라 이루어지며 보존적 치환으로 지칭된다.
표 4: 아미노산 약어
Figure pct00002
표 5: 아미노산 치환
Figure pct00003
기능 또는 면역학적 동일성의 실질적인 변화는 표 5에 있는 것보다 덜 보존적인 치환들을 선택, 즉, (a) 치환 영역의 폴리펩티드 골격의 구조, 예를 들면, 쉬트 또는 나선형 입체구조, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지함에 대한 그 효과가 보다 유의하게 상이한 잔기들을 선택함으로써 만들어진다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 구조적 또는 화학적 성질을 가지는 아미노산 잔기로 대체되는 치환을 포함한다. 유사한 측쇄들을 가지는 아미노산 잔기들의 패밀리가 당업계에 정의되어 있다. 이들 패밀리들은 염기성 측쇄 (가령, 리산, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (가령, 아스파르트산, 글루타민산), 전하를 띄지 않는 극성 측쇄(가령, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄 (가령, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-가지 측쇄 (가령, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (가령, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 가지는 아미노산들을 포함한다.
일반적으로 단백질 특성에서 가장 큰 변화를 일으킬 것으로 예상되는 치환은 (a) 친수성 잔기, 예컨대, 세릴 또는 트레오닐이, 소수성 잔기, 예컨대, 류실, 이소류실, 페닐알라닐, 발릴 또는 알라닐에 대해 (또는 이에 의해) 치환되는; (b) 시스테인 또는 프롤린이 임의의 다른 잔기에 대해 (또는 이에 의해) 치환되는; (c) 양전기 측쇄를 가지는 잔기, 예컨대, 리실, 아르기닐, 또는 히스티딜이 음전기 잔기, 예컨대, 글루타밀 또는 아스파르틸에 대해 (또는 이에 의해) 치환되는; 또는 (d) 벌크 측쇄를 가지는 잔기, 예컨대, 페닐알라닌이 하나의 측쇄를 가지지 않는 잔기, 예컨대, 글리신에 대해 (또는 이에 의해) 치환되는, 이 경우, (e) 황화 및/또는 당화 부위들의 수를 증가시킴에 의한 치환들이 될 것이다.
하나의 아미노산 잔기를 생물학적 및/또는 화학적으로 유사한 다른 잔기로 대체하는 것은 보존적 치환으로 당업자에게 알려져있다. 예를 들어, 보존적 치환은 하나의 소수성 잔기를 다른 것으로 대체하거나 하나의 극성 잔기를 다른 것으로 대체하는 것이다. 이러한 치환은 조합들, 가령, 예를 들어, Gly, Ala; Val, Ile, Leu; Asp, Glu; Asn, Gln; Ser, Thr; Lys, Arg; 및 Phe, Tyr을 포함한다. 각각의 명시적으로 개시된 서열의 이러한 보존적으로 치환된 변이체들은 본원에서 제공되는 모자이크 폴리펩티드에 포함된다.
N-당화 (Asn-X-Thr/Ser) 또는 O-당화 (Ser 또는 Thr)를 위한 부위들을 삽입하기 위해 치환 또는 결실 돌연변이유발이 사용될 수 있다. 시스테인 또는 다른 불안정한 잔기들의 결실 또한 바람직할 수 있다. 잠재적 단백질분해 부위, 예컨대, Arg의 결실 또는 치환은, 예를 들어, 염기성 잔기 중 하나를 결실시키거나 하나를 글루타미닐 또는 히스티딜 잔기로 치환함으로써 구현된다.
특정한 번역후 유도체화는 발현된 폴리펩티드에 대한 재조합 숙주 세포의 작용의 결과이다. 글루타미닐 및 아스파라기닐 잔기는 종종 상응하는 글루타밀 및 아스파릴 잔기들로 번역후 탈아미드화된다. 대안으로, 이들 잔기는 약산성 조건하에서 탈아미드화된다. 다른 번역후 변형에는 프롤린 및 리신의 수산화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 하이드록실 그룹의 인산화, 리신, 아르기닌 및 히스티딘 측쇄의 o-아미노 그룹의 메틸화 (T.E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W. H. Freeman & Co., San Francisco pp 79-86 [1983]), N-말단 아민의 아세틸화 및 일부 경우에 C-말단 카르복실의 아미드화가 포함된다.
본원에 개시된 단백질의 변이체 및 유도체를 정의하는 한 가지 방법은 특정 공지된 서열에 대한 상동성/동일성과 관련하여 변이체 및 유도체를 정의하는 것으로 이해된다. 예를 들면, 서열 번호: 1 및 2. 구체적으로 언급된 서열에 대해 최소한 70% 또는 75% 또는 80% 또는 85% 또는 90% 또는 95% 상동성을 갖는 본원에 개시된 이들 및 다른 단백질의 변이체가 개시된다. 당업자는 2개의 단백질들의 상동성을 결정하는 방법을 용이하게 이해할 것이다. 예를 들어, 상동성이 최고 수준이 되도록 두 서열을 정렬한 후 상동성을 계산할 수 있다.
상동성을 계산하는 또 다른 방법은 공개된 알고리즘에 의해 실시 될 수 있다. 비교를 위한 최적의 서열 정렬은 가령, Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)의 국소 상동성 알고리즘; Needleman and Wunsch, J. MoL. Biol. 48:443 (1970)의 상동성 정렬 알고리즘; Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2444 (1988)의 유사성 방법의 조사; 이들 알고리즘의 자동화 시행 (Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI에서 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)로 실행될 수 있다.
예를 들어, Zuker, M. Science 244:48-52, 1989, Jaeger 외. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:7706-7710, 1989, Jaeger 외, Methods Enzymol. 183:281-306, 1989에 개시된 알고리즘에 의하여 핵산들에 애해 동일한 유형들의 상동성을 얻을 수 있다.
보존적 돌연변이 및 상동성에 대한 설명은, 가령, 변이체가 보존적 돌연변이인 특정 서열에 대해 최소한 70% 상동성을 갖는 구체예들에서와 같이, 임의의 조합으로 함께 조합 될 수 있는 것으로 이해된다.
본 명세서가 다양한 단백질 및 단백질 서열을 논의하는 경우, 이러한 단백질 서열을 인코드 할 수 있는 핵산들 또한 개시되어 있는 것으로 이해된다. 이것은 특정 단백질 서열과 관련된 모든 축퇴 서열, 즉, 하나의 특정 단백질 서열을 인코드하는 서열을 갖는 모든 핵산, 뿐만 아니라 개시된 단백질 서열의 변이체 및 유도체를 인코드하는 축퇴 핵산을 포함하는 모든 핵산을 포함 할 것이다. 따라서, 각각의 특정 핵산 서열이 본원에 기재되지 않을 수 있지만, 각각 그리고 모든 서열은 사실상 개시된 단백질 서열을 통해 본원에 개시되고 기재되는 것으로 이해된다. 또한, 예를 들면, 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 또는 14의 보존적 유도체, 가령, 발린 (V)에 대한 이소류신 (I)의 치환이 개시된다. 이 돌연변이에 대해 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14의 이러한 특정 유도체를 인코드하는 모든 핵산 서열 또한 개시된 것으로 이해된다.
개시된 조성물에 혼입 될 수 있는 수많은 아미노산 및 펩티드 유사체가 존재하는 것으로 이해된다. 예를 들면, 표 4 및 표 5에 제시된 아미노산과 상이한 기능적 치환기를 갖는 수많은 D 아미노산 또는 아미노산들이 존재한다. 자연 발생 펩티드들의 반대 입체 이성질체, 뿐만 아니라 펩티드 유사체들의 입체 이성질체가 개시되어 있다. 이들 아미노산들은 tRNA 분자를 선택 아미노산으로 채우고, 예를 들면, 유사체 아미노산을 펩티드 사슬에 부위 특이적 방식으로 삽입하기 위해 앰버 코돈들을 사용하여 유전자 구조체들을 조작함으로써, 폴리펩티드 사슬들에 용이하게 통합될 수 있다.
펩티드와 유사하지만 천연 펩티드 연결부를 통해 연결되지 않는 분자를 생성 할 수 있다. 예를 들면, 아미노산 또는 아미노산 유사체들에 대한 연결부들은 CH2NH--, --CH2S--, --CH2--CH2--, --CH=CH-- (시스 및 트랜스), --COCH2--, -CH(OH)CH2--, 및 --CHH2SO-- (이들 그리고 다른 것들은 Spatola, A. F. in Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides, and Proteins, B. Weinstein, eds., Marcel Dekker, New York, p. 267 (1983); Spatola, A. F., Vega Data (March 1983), Vol. 1, Issue 3, Peptide Backbone Modifications (일반적 검토); Morley, Trends Pharm Sci (1980) pp. 463-468; Hudson, D. 외, Int J Pept Prot Res 14: 177-185 (1979) (--CH2NH--, CH2CH2--); Spatola 외. Life Sci 38: 1243-1249 (1986) (--CH H2--S); Hann J Chem. Soc Perkin Trans. I 307-314 (1982) (--CH--CH--, 시스 및 트랜스); Almquist 외. J. Med. Chem. 23: 1392-1398 (1980) (--COCH2--); Jennings-White 외. Tetrahedron Lett 23:2533 (1982) (--COCH2--); Szelke 외. European Appln, EP 45665 CA (1982): 97:39405 (1982) (--CH(OH)CH2--); Holladay 외. Tetrahedron. Lett 24:4401-4404 (1983) (--C(OH)CH2--); 및 Hruby Life Sci 31: 189-199 (1982) (--CH2--S--)를 포함할 수 있으며; 이들 각각은 본원에 참고문헌으로 포함된다. 특히 바람직한 비-펩티드 연결부는 --CH2NH--이다. 펩티드 유사체들은 b-알라닌, g-아미노부티르산, 등과 같이 결합 원자들 사이에 하나 이상의 원자를 가질 수 있는 것으로 이해된다.
아미노산 유사체들 및 유사체들 및 펩티드 유사체들은 종종 개선된 또는 필요한 성질들, 가령, 보다 경제적인 생산, 보다 큰 화학적 안정성, 개선된 약리학적 특성 (반감기, 흡수, 역가, 효능 등), 변경된 특이성 (예컨대, 생물학적 활성들의 광범위한 스펙트럼), 감소된 항원성 및 기타를 가진다.
D 아미노산은 펩티다제 등에 의해 인식되지 않기 때문에 D-아미노산은 보다 안정한 펩티드를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 공통 서열의 하나 이상의 아미노산의 동일한 유형의 D-아미노산 (예컨대, L-리신 대신 D-리신)으로의 전체 치환을 사용하여 보다 안정한 펩티드들을 생성할 수 있다. 시스테인 잔기를 사용하여 2개 이상의 펩티드들을 함께 고리화 또는 부착할 수 있다. 이는 펩티드들을 특정 입체구조로 제한하는데 유용할 수 있다.
한 측면에서, 개시된 PD-L1 결합 분자는 표지를 추가로 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 표지는 형광 염료, 결합 쌍의 구성원, 가령, 비오틴/스트렙타비딘, 금속 (예컨대, 금), 방사능 치환기, 또는 분자와 특이 적으로 상호 작용할 수 있는 에피토프 태그를 포함 할 수 있으며, 이는 가령, 착색된 기질 또는 형광을 생성함으로써 탐지될 수 있다. 단백질을 탐지가능하게 표지하기에 적합한 물질에는 형광 염료 (본 명세서에서 형광색소 및 형광단이라고도 공지됨) 및 색채 기질과 반응하는 효소 (예컨대, 홀스래디쉬 퍼옥시다제)가 포함된다. 형광 염료들은 매우 적은 양으로 탐지될 수 있기 때문에 본 발명의 실시에서 이들의 사용은 일반적으로 바람직하다.
형광단은 발광하는 화합물 또는 분자들이다. 일반적으로 형광단은 한 파장에서 전자기 에너지를 흡수하고 두 번째 파장에서 전자기 에너지를 방출한다. 대표적인 형광단들에는, 1,5 IAEDANS; 1, 8-ANS; 4-메틸룸벨리페론; 5-카르복시-2,7-디클로로플루오레세인; 5-카르복시플루오레세인 (5-FAM); 5-카르복시나프토플루오레세인; 5-카르복시테트라메틸로다민 (5-TAMRA); 5-하이드록시 트립타민 (5-HAT); 5-ROX (카르복시-X-로다민); 6-카르복시로다민 6G; 6-CR 6G; 6-JOE; 7-아미노-4-메틸쿠마린; 7-아미노액티노마이신 D (7-AAD); 7-하이드록시-4- 1 메틸쿠마린; 9-아미노-6-클로로-2-메톡시아크리딘 (ACMA); ABQ; 산 푹신; 아크리딘 오렌지; 아크리딘 레드; 아크리딘 옐로우; 아크리플라빈; 아크리플라빈 포일겐 (Acriflavin Feulgen) SITS A; 에쿠오린 (광단백질); AFPs - 자가형광 단백질 - (Quantum Biotechnologies) see sgGFP, sgBFP; 알렉사 플루오르 350™; 알렉사 플루오르 430™; 알렉사 플루오르 488™; 알렉사 플루오르 532™; 알렉사 플루오르 546™; 알렉사 플루오르 568™; 알렉사 플루오르 594™; 알렉사 플루오르 633™; 알렉사 플루오르 647™; 알렉사 플루오르 660™; 알렉사 플루오르 680™; 알리자린 컴플렉손; 알리자린 레드; 알로피코시아닌 (APC); AMC, AMCA-S; 아미노메틸쿠마린 (AMCA); AMCA-X; 아미노액티노마이신 D; 아미노쿠마린; 아닐린 블루; 안트로실 스테아레이트; APC-Cy7; APTRA-BTC; APTS; 아스트라존 브릴리언트 레드 4G; 아스트라존 오렌지 R; 아스트라존 레드 6B; 아스트라존 옐로우 7 GLL; 아타브린; ATTO-TAG™ CBQCA; ATTO-TAG™ FQ; 아우라민; 아우로포스핀 G; 아우로포스핀; BAO 9 (비스아미노페닐옥사디아졸); BCECF (높은 pH); BCECF (낮은 pH); 베르베린 술페이트; 베타락타마제; BFP 블루 쉬프티드 GFP (Y66H); 블루 형광 단백질; BFP/GFP FRET; Bimane; 비스벤제미드; 비스벤즈이미드 (회흐스트); 비스-BTC; 블랑코포르 FFG; 블랑코포르 SV; BOBO™ -1; BOBO ™ -3; 보디피492/515; 보디피493/503; 보디피500/5l0; 보디피; 505/515; 보디피 530/550; 보디피 542/563; 보디피 558/568; 보디피 564/570; 보디피 576/589; 보디피 581/591; 보디피 630/650-X; 보디피 650/665-X; 보디피 665/676; 보디피 Fl; 보디피 FL ATP; 보디피 Fl-세라마이드; 보디피 R6G SE; 보디피 TMR; 보디피 TMR-X 접합체; 보디피 TMR-X, SE; 보디피 TR; 보디피 TR ATP; 보디피 TR-X SE; BO-PRO™ -1; BO-PRO™ -3; 브릴리언트 술포플라빈 FF; BTC; BTC-5N; 칼세인; 칼세인 블루; 칼슘 크림손 - ; 칼슘 그린; 칼슘 그린-1 Ca2+ 염료; 칼슘 그린-2 Ca2+; 칼슘 그린-5N Ca2+; 칼슘 그린-C18 Ca2+; 칼슘 오렌지; 칼코플루오르 화이트; 카르복시-X-로다민 (5-ROX); 캐스케이드 블루™; 캐스케이드 옐로우; 카테콜아민; CCF2 (GeneBlazer); CFDA; CFP (시안 형광 단백질); CFP/YFP FRET; 클로로필; 크로모마이신 A; 크로모마이신 A; CL-NERF; CMFDA; 코엘렌테라진; 코엘렌테라진 cp; 코엘렌테라진 f; 코엘렌테라진 fcp; 코엘렌테라진 h; 코엘렌테라진 hcp; 코엘렌테라진 ip; 코엘렌테라진 n; 코엘렌테라진 O; 쿠마린 팔로이딘; C-피코시아닌; CPM I 메틸쿠마린; CTC; CTC 포르마잔; Cy2™; Cy3.1 8; Cy3.5™; Cy3™; Cy5.1 8; Cy5.5™; Cy5™; Cy7™; 시안 GFP; 사이클릭 AMP 플루오로센서 (FiCRhR); 답실; 단실; 단실 아민; 단실 카다베린; 단실 클로라이드; 단실 DHPE; 단실 플루오라이드; DAPI; 다폭실; 다폭실 2; 다폭실 3’DCFDA; DCFH (디클로로디하이드로플루오레세인 디아세테이트); DDAO; DHR (디하이드로로다민 123); 디-4-ANEPPS; 디-8-ANEPPS (비율 없음); DiA (4-디 16-ASP); 디클로로디하이드로플루오레세인 디아세테이트 (DCFH); DiD- 친유성 추적자; DiD (DilC18(5)); DIDS; 디하이드로로다민 123 (DHR); Dil (DilC18(3)); I 디니트로페놀; DiO (DiOC18(3)); DiR; DiR (DilC18(7)); DM-NERF (높은 pH); DNP; 도파민; DsRed; DTAF; DY-630-NHS; DY-635-NHS; EBFP; ECFP; EGFP; ELF 97; 에오신; 에리트로신; 에리트로신 ITC; 에티듐 브로마이드; 에티듐 동형이량체-1 (EthD-1); 유크리신; 유코라이트; 유로피움 (111) 클로라이드; EYFP; 패스트 블루; FDA; 포일겐 (Feulgen) (파라로사닐린); FIF (포름알데히드 유도된 형광); FITC; 플라조 오렌지; 플루오-3; 플루오-4; 플루오레세인 (FITC); 플루오레세인 디아세테이트; 플루오로-에메랄드; 플루오로-골드 (하이드록시스틸바미딘); 플루오르-루비; 플루오르X; FM 1-43™; FM 4-46; 퓨라 레드™ (높은 pH); 퓨라 레드™/플루오-3; 퓨라-2; 퓨라-2/BCECF; 제나크릴 브릴리언트 레드 B; 제나크릴 브릴리언트 옐로우 10GF; 제나크릴 핑크 3G; 제나크릴 옐로우 5GF; GeneBlazer; (CCF2); GFP (S65T); GFP 레드 쉬프티드 (rsGFP); GFP 야생형 비-UV 여기 (wtGFP); GFP 야생형, UV 여기 (wtGFP); GFPuv; 글록살릭 애시드; 그래뉼라 블루; 헤마토포르피린; 회흐스트 33258; 회흐스트 33342; 회흐스트 34580; HPTS; 하이드록시 쿠마린; 하이드록시스틸바미딘 (플루오로골드); 하이드록시트립타민; 인도-1, 고 칼슘; 인도-1 저 칼슘; 인도디카르보시아닌 (DiD); 인도트리카르보시아닌 (DiR); 인트라화이트 Cf; JC-1; JO JO-1; JO-PRO-1; 레이저프로; 라우로단; LDS 751 (DNA); LDS 751 (RNA); 류코포르 PAF; 류코포르 SF; 류코포르 WS; 리스아민 로다민; 리스아민 로다민 B; 칼세인/에티듐 동형이량체; LOLO-1; LO-PRO-1; ; 루시퍼 옐로우; 리소 트랙커 블루; 리소 트랙커 블루-화이트; 리소 트랙커 그린; 리소 트랙커 레드; 리소 트랙커 옐로우; 리소센서 블루; 리소센서 그린; 리소센서 옐로우/블루; 마그 그린; 막달라 레드 (플록신 B); 마그-퓨라 레드; 마그-퓨라-2; 마그-퓨라-5; 마그-인도-1; 마그네슘 그린; 마그네슘 오렌지; 말라카이트 그린; 마리나 블루; I 맥실론 브릴리언트 플라빈 10 GFF ; 맥실론 브릴리언트 플라빈 8 GFF; 메로시아닌; 메톡시 쿠마린; 미토트랙커 그린 FM; 미토트랙커 오렌지; 미토트랙커 레드; 미트라마이신; 모노브로모비만; 모노브로모비만 (mBBr-GSH); 모노클로로비만; MPS (메틸 그린 피로닌 스틸벤); NBD; NBD 아민; 나일 레드; 니트로벤족세디돌; 노르아드레날린; 뉴클리어 패스트 레드; i 뉴클리어 옐로우; 닐로산 브릴리언트 라빈 E8G; 오레곤 그린™; 오레곤 그린™ 488; 오레곤 그린™ 500; 오레곤 그린™ 514; 퍼시픽 블루; 파라로사닐린 (포일겐); PBFI; PE-Cy5; PE-Cy7; PerCP; PerCP-Cy5.5; PE-텍사스레드 (레드 613); 필록신 B (막달라 레드); 포르와이트 AR; 포르와이트 BKL; 포르와이트 Rev; 포르와이트 RPA; 포스핀 3R; 포토레지스트; 피코에리트린 B [PE]; 피코에리트린 R [PE]; RK26 (Sigma); PKH67; PMIA; 폰토크롬 블루 블랙; POPO-1; POPO-3; PO-PRO-1; PO- 1 PRO-3; 프리뮬린; 프로시온 옐로우; 프로피듐 아이오다이드 (PI); PyMPO; 피렌; 피로닌; 피로닌 B; 피로잘 브릴리언트 플라빈 7GF; QSY 7; 퀴나크린 머스터드; 레조루핀; RH 414; 로드-2; 로다민; 로다민 110; 로다민 123; 로다민 5 GLD; 로다민 6G; 로다민 B; 로다민 B 200; 로다민 B 엑스트라; 로다민 BB; 로다민 BG; 로다민 그린; 로다민 팔리시딘; 로다민: 팔로이딘; 로다민 레드; 로다민 WT; 로즈 벵갈; R-피코시아닌; R-피코에리트린 (PE); rsGFP; S65A; S65C; S65L; S65T; 사파이어 GFP; SBFI; 세로토닌; 쉐브론 브릴리언트 레드 2B; 쉐브론 브릴리언트 레드 4G; 쉐브론 I 브릴리언트 레드 B; 쉐브론 오렌지; 쉐브론 옐로우 L; sgBFP™ (수퍼 글로우 BFP); sgGFP™ (수퍼 글로우 GFP); SITS (프리뮬린; 스틸벤 이소티오술포닉 애시드); SNAFL 칼세인; SNAFL-1; SNAFL-2; SNARF 칼세인; SNARF1; 소듐 그린; 스펙트럼아쿠아; 스펙트럼그린; 스펙트럼오렌지; 스펙트럼 레드; SPQ (6-메톡시- N-(3 술포프로필) 퀴놀리늄); 스틸벤; 술포로다민 B 및 C; 술포로다민 엑스트라; SYTO 11; SYTO 12; SYTO 13; SYTO 14; SYTO 15; SYTO 16; SYTO 17; SYTO 18; SYTO 20; SYTO 21 ; SYTO 22; SYTO 23; SYTO 24; SYTO 25; SYTO 40; SYTO 41 ; SYTO 42; SYTO 43; SYTO 44; SYTO 45; SYTO 59; SYTO 60; SYTO 61 ; SYTO 62; SYTO 63; SYTO 64; SYTO 80; SYTO 81; SYTO 82; SYTO 83; SYTO 84; SYTO 85; SYTOX 블루; SYTOX 그린; SYTOX 오렌지; 테트라사이클린; 테트라메틸로다민 (TRITC); 텍사스 레드™; 텍사스 레드-X™ 접합체; 티아디카르보시아닌 (DiSC3); 티아진 레드 R; 티아졸 오렌지; 티오플라빈 5; 티오플라빈 S; 티오플라빈 TON; 티올라이트; 티오졸 오렌지; 티노폴 CBS (칼코플루오르 화이트); TIER; TO-PRO-1; TO-PRO-3; TO-PRO-5; TOTO-1; TOTO-3; 트리컬러 (PE-Cy5); TRITC 테트라메틸로다민이소티오시아네이트; 트루 블루; 트루 레드; 울트라라이트; 우라닌 B; 유비텍스 SFC; wt GFP; WW 781; X-로다민; XRITC; 자일렌 오렌지; Y66F; Y66H; Y66W; 옐로우 GFP; YFP; YO-PRO-1; YO- PRO 3; YOYO-1; YOYO-3; Sybr 그린; 티아졸 오렌지 (삽입 염료); 반도체 나노입자들, 가령, 양자점; 또는 케이지형 형광단 (빛 또는 기타 전자기 에너지원으로 활성화 될 수 있음), 또는 이들의 조합이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다.
방사성 핵종과 같은 개질제 유닛은 할로겐화에 의해 본원에 기재된 임의의 화합물에 통합되거나 직접 부착 될 수 있다. 본 구체예에서 유용한 방사성핵종의 예에는 삼중수소, 아이오딘-125, 아이오딘-131, 아이오딘-123, 아이오딘-124, 아스타틴-210, 탄소-11, 탄소-14, 질소-13, 불소-18이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 또 다른 측면에서, 방사성핵종은 연결 그룹에 부착되거나 킬레이트 그룹에 의해 결합 될 수 있으며, 이어서 화합물에 직접 또는 링커에 의해 부착된다. 이러한 측면에서 유용한 방사성핵종들의 예들에는, Tc-99m, Re-1 86, Ga-68, Re-188, Y-90, Sm-153, Bi-212, Cu-67, Cu-64, 및 Cu-62가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 이와 같은 방사성표지 기술은 방사성 의약품 산업에서 관례적으로 사용된다.
방사성표지된 화합물은 신경 질환 (예를 들어, 신경퇴행성 질환) 또는 정신 상태를 진단하거나 포유동물 (예를 들어, 인간)에서 이러한 질환 또는 상태의 진행 또는 치료를 추적하기 위한 영상화제로서 유용하다. 본원에 기재된 방사성표지된 화합물은 양전자 방출 단층 촬영 (PET) 또는 단일 광자 방출 컴퓨터 단층 촬영 (SPECT)과 같은 영상화 기술과 함께 편리하게 사용될 수 있다.
표지는 직접적이거나 간접적 일 수 있다. 직접 표지화에서 탐지 항체 (관심 분자에 대한 항체) 또는 탐지 분자 (항체에 의해 관심 분자에 결합 될 수 있는 분자)는 표지를 포함한다. 표지의 탐지는 탐지 항체 또는 탐지 분자의 존재를 나타내며, 이는 결국 각각 관심 분자 또는 관심 분자에 대한 항체의 존재를 나타낸다. 간접 표지화에서, 또 다른 분자 또는 모이어티가 면역복합체와 접촉되거나 또는 면역복합체의 부위에서 생성된다. 예를 들어, 신호-생성 분자 또는 모이어티, 가령, 효소는 탐지 항체 또는 탐지 분자에 부착되거나 결합 될 수 있다. 신호-생성 분자는 면역복합체 부위에서 탐지가능한 신호를 생성 할 수 있다. 예를 들어, 효소는 적절한 기질과 함께 공급될 때 면역복합체 부위에서 가시적이거나 탐지가능한 생성물을 생성할 수 있다. ELISA는 이러한 유형의 간접 표지화를 사용한다.
간접 표지화의 또 다른 예로서, 관심 분자 또는 관심 분자에 대한 항체 (일차 항체)에 결합 할 수 있는 또 다른 분자 (이는 결합제로 지칭될 수 있음), 가령, 일차 항체에 대한 이차 항체가 면역복합체와 접촉 될 수 있다. 또 다른 분자는 표지 또는 신호-생성 분자 또는 모이어티를 가질 수 있다. 또 다른 분자는 항체일 수 있으며, 그러므로 이차 항체로 명명될 수 있다. 일차 항체에 대한 이차 항체의 결합은 제 1 (또는 일차) 항체 및 관심 분자와 함께 소위 샌드위치를 형성할 수 있다. 면역 복합체들은 이차 면역 복합체들의 형성을 가능하게 하기에 효과적인 조건하에서 그리고 충분한 시기 동안 표지된 이차 항체와 접촉될 수 있다. 이어서 이차 면역 복합체들을 일반적으로 세척하여 비-특이적으로 결합된 표지된 이차 항체들을 제거할 수 있으며, 이후 이차 면역 복합체들에 남아있는 표지를 탐지할 수 있다. 또 다른 분자는 또한 비오틴/아바딘 쌍과 같이 서로 결합 할 수 있는 한 쌍의 분자들 또는 모이어티들 중 하나 이거나 이를 포함할 수 있다. 이러한 방식에서, 탐지 항체 또는 탐지 분자는 상기 쌍의 다른 하나의 구성원을 포함하여야 한다.
다른 간접 표지화 방식들에는 2단계 접근법에 의한 일차 면역 복합체들의 탐지가 포함된다. 예를 들면, 관심 분자 또는 상응하는 항체에 대한 결합 친화도를 가지는 분자 (이는 제 1 결합제로 지칭될 수 있음), 가령, 항체를 사용하여 상기 기재한 바와 같은 이차 면역 복합체들을 형성할 수 있다. 세척 후, 이차 면역 복합체들은 다시 면역 복합체들을 형성 (그러므로 삼차 면역 복합체들을 형성)을 가능하게 하기에 효과적인 조건하에서 그리고 충분한 시기 동안 제 1 결합제에 대한 결합 친화도를 가지는 또 다른 분자 (이는 제 2 결합제로 지칭될 수 있음)와 접촉될 수 있다. 제 2 결합제는 탐지가능한 표지 또는 신호-생성 분자 또는 모이어티에 연결될 수 있으며, 이렇게 형성된 삼차 면역 복합체들의 탐지를 가능하게 한다. 이러한 시스템은 신호 증폭을 제공할 수 있다.
3. 약학적 담체/약학 생성물의 전달
전술한 바와 같이, 조성물은 또한 약학적으로 허용되는 담체 (본원에서 약학적으로 허용되는 부형제라고도 지칭됨)에서 생체내 투여 될 수 있다. "약학적으로 허용되는"은 생물학적으로 또는 다른 방식으로 비활성이 아닌 물질을 의미한다, 즉, 이러한 물질은, 약학 조성물 내부에 함유되는 다른 성분들 중 어느 하나와 유해한 방식으로 상호작용하거나 바람직하지 않은 생물학적 효과를 유발하지 않고, 핵산 또는 벡터와 함께 대상체에 투여될 수 있다. 담체는 당연히 당업자에게 잘 알려진 바와 같이, 활성 성분의 임의의 분해를 최소화하고 대상체의 부작용을 최소화하도록 선택 될 것이다. 그러므로, 한 측면에서, 본원에 개시된 임의의 PD-L1 결합 분자를 포함하는 약학 조성물이 본원에 개시된다.
조성물은 경구, 비경구 (예컨대, 정맥내), 근육내 주사, 복강내 주사, 경피, 체외, 국소 등으로 투여 될 수 있으며, 국소 비강내 투여 또는 흡입에 의한 투여를 포함한다. 본원에서 사용되는 "국소 비강내 투여"는 콧구멍들 중 하나 또는 둘 모두를 통해 조성물을 코 및 비강으로 전달하는 것을 의미하고, 분무 메커니즘 또는 액적 메커니즘에 의한 전달, 또는 핵산 또는 벡터의 에어로졸화를 통한 전달을 포함 할 수 있다. 흡입제에 의한 조성물의 투여는 분무 또는 액적 메커니즘에 의한 전달을 통해 코 또는 입을 통해 이루어질 수 있다. 삽관을 통해 호흡계의 모든 영역 (예컨대, 폐)으로 직접 전달될 수도 있다. 필요한 조성물의 정확한 양은 대상체의 종, 연령, 체중 및 일반적인 상태, 치료할 알레르기 질환의 중증도, 사용된 특정 핵산 또는 벡터, 투여 방식 등에 따라 대상체마다 다를 수 있다. 그러므로, 모든 조성물에 대하여 정확한 양을 특정할 수는 없다. 그러나, 적절한 양은 본원에 기재된 내용을 토대로 단지 관례적인 실험을 하여 당업자가 결정할 수 있다.
사용되는 경우, 조성물의 비경구 투여는 일반적으로 주사로 특징된다. 주사제는 전형적인 형태들로, 액체 용액 또는 현탁액으로서, 주사 전 액체에서의 현탁액에 적합한 고체 형태들로서, 또는 에멀전으로서 제조될 수 있다. 비경구 투여용으로 보다 최근에 개발된 접근법은 일정한 용량이 유지되도록 느린 방출 또는 지속 방출 시스템을 사용하는 것을 포함한다. 예컨대, 본원에 참고문헌으로 포함된 미국 특허 제 3,610,795호를 참고하라.
상기 물질은 용액, 현탁액 (예를 들어, 마이크로입자, 리포좀 또는 세포에 혼입됨)으로 존재할 수 있다. 이들은 항체, 수용체 또는 수용체 리간드를 통해 특정 세포 유형에 표적될 수 있다. 다음 참고 문헌은 특정 단백질을 종양 조직에 표적하기 위해 이러한 기술을 사용한 예이다 (Senter, 외, Bioconjugate Chem., 2:447-451, (1991); Bagshawe, K.D., Br. J. Cancer, 60:275-281, (1989); Bagshawe, 외., Br. J. Cancer, 58:700-703, (1988); Senter, 외, Bioconjugate Chem., 4:3-9, (1993); Battelli, 외., Cancer Immunol. Immunother., 35:421-425, (1992); Pietersz 및 McKenzie, Immunolog. Reviews, 129:57-80, (1992); 및 Roffler, 외, Biochem. Pharmacol, 42:2062-2065, (1991)). 운반체, 가령, "스텔스" 및 기타 항체 접합된 리포좀 (결장 암종에 대해 표적화하는 지질 매개된 약물을 포함), 세포 특이적 리간드들을 통한 DNA의 수용체 매개된 표적화, 림프구 유도된 종양 표적화, 및 생체내에서 쥐과 신경교종 세포의 고도로 특이적인 치료 레트로바이러스 표적화. 다음 참고 문헌은 특정 단백질을 종양 조직에 표적하기 위해 이러한 기술을 사용한 예이다 (Hughes 외, Cancer Research, 49:6214-6220, (1989); 및 Litzinger 및 Huang, Biochimica et Biophysica Acta, 1104: 179-187, (1992)). 일반적으로 수용체는 항시적 또는 리간드 유도된 세포내이입 경로에 관여한다. 이러한 수용체는 클라트린으로 코팅된 구덩이에 모여 클라트린으로 코팅된 소포체를 통해 세포로 들어가고, 수용체들이 분류되는 산성화된 엔도좀을 통과한 다음 세포 표면으로 회수되거나 세포내 저장되거나 리소좀에서 분해된다. 내재화 경로는 영양소 흡수, 활성화된 단백질의 제거, 거대분자의 제거, 바이러스 및 독소의 기회적 진입, 리간드의 해리 및 분해, 수용체-수준 조절과 같은 다양한 기능을 제공한다. 많은 수용체들은 세포 유형, 수용체 농도, 리간드 유형, 리간드 원자가, 및 리간드 농도에 따라 하나 이상의 세포내 경로를 따른다. 수용체-매개 세포내이입의 분자 및 세포 메커니즘이 검토된 바 있다 (Brown and Greene, DNA and Cell Biology 10:6, 399-409 (1991)).
a) 약학적으로 허용되는 담체
항체를 포함하는 조성물은 약학적으로 허용되는 담체와 조합하여 치료적으로 사용될 수 있다.
적합한 담체 및 이들의 제제들은 Remington: The Science and Practice of Pharmacy (19th ed.) ed. A.R. Gennaro, Mack Publishing Company, Easton, PA 1995에 기재되어 있다. 전형적으로, 적절한 양의 약학적으로 허용되는 염을 제제에 사용하여 제제를 등장성이 되게 한다. 약학적으로 허용되는 담체의 예들에는 식염수, 링거 용액 및 덱스트로스 용액이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 용액의 pH는 바람직하게는 약 5 내지 약 8, 및 더욱 바람직하게는 약 7 내지 약 7.5이다. 또 다른 담체들은 서방형 제제들, 가령, 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체들의 반투과성 매트릭스를 포함하며, 이러한 매트릭스들은 성형된 물품의 형태, 예컨대, 필름, 리포좀 또는 마이크로입자의 형태이다. 예를 들어, 투여되는 조성물의 투여 경로 및 농도에 따라 특정 담체들이 보다 바람직할 수 있음은 당업자에게 자명할 것이다.
약학적 담체들은 당업자에게 공지되어 있다. 이들은 가장 일반적으로, 생리적 pH에서 멸균수, 식염수 및 완충 용액과 같은 용액을 포함하여 인간에게 약물을 투여하기 위한 표준 담체가 될 것이다. 조성물은 근육내 또는 피하로 투여 될 수 있다. 다른 화합물은 당업자에 의해 사용되는 표준 절차에 따라 투여 될 것이다.
약학 조성물은 선택된 분자 이외에도 담체, 증점제, 희석제, 완충제, 보존제, 표면 활성제 등을 포함 할 수 있다.
약학 조성물은 또한 항균제, 항염증제, 마취제 등과 같은 하나 이상의 활성 성분을 포함 할 수 있다.
약학 조성물은 국소 또는 전신 치료가 바람직한지 여부 및 치료될 부위에 따라 다양한 방식으로 투여 될 수 있다. 투여는 국소 (안과, 질, 직장, 비강 포함), 경구, 흡입 또는 비경구, 예를 들어 정맥내 점적, 피하, 복강내 또는 근육내 주사로 투여 될 수 있다. 개시된 항체는 정맥내, 복강내, 근육내, 피하, 공동내 또는 경피로 투여 될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균 수성 또는 비-수성 용액, 현탁액 및 에멀전이 포함된다. 비-수성 용매들의 예들에는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 가령, 올리브 오일, 및 주사가능한 유기 에스터, 가령, 에틸 올레이트가 포함된다. 수성 담체들에는, 식염수 및 완충 매질을 포함한, 물, 알콜/수용액, 글리세롤, 에멀전 또는 현탁액이 포함된다. 비경구 운반체에는 염화나트륨 용액, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 염화나트륨, 젖산 링거 또는 고정 오일이 포함된다. 정맥내 운반체들은 체액 및 영양소 보충제, 전해질 보충제, 가령, 링거 덱스트로스 등에 기반한 것들을 포함한다. 보존제 및 다른 첨가제들, 가령, 예를 들어, 항균제, 항산화제, 착화제, 및 불활성 기체 등 또한 존재할 수 있다.
국소 투여를 위한 제형들은 연고, 로션, 크림, 겔, 점적약, 좌제, 스프레이, 액체 및 분말을 포함할 수 있다. 종래의 약학적 담체, 수성의 분말 또는 유성 염기, 증점제 등이 필요하거나 바람직할 수 있다.
경구 투여용 조성물은 분말 또는 과립, 물 또는 비-수성 매질 중의 현탁액 또는 용액, 캡슐, 샤셋 또는 정제를 포함한다. 증점제, 착향제, 희석제, 유화제, 분산 보조제 또는 결합제가 바람직할 수 있다.
일부 조성물들은 잠재적으로 무기산, 가령, 염산, 브롬화수소산, 과염소산, 질산, 티오시안산, 황산, 및 인산과 유기산, 가령, 포름산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 말레산, 및 푸마르산의 반응에 의해, 또는 무기 염기, 가령, 수산화나트륨, 수산화 암모늄, 수산화 칼륨과 유기 염기, 가령, 모노-, 디-, 트리알킬 및 아릴 아민 및 치환된 에탄올아민의 반응에 의해 형성되는, 약학적으로 허용되는 산- 또는 염기- 부가염으로서 투여될 수 있다.
4. 치료적 사용 및 치료 방법
조성물을 투여하기 위한 효과적인 투여량 및 일정은 경험적으로 결정될 수 있으며, 이러한 결정은 당업자의 능력 범위에 속한다. 조성물의 투여를 위한 투여량 범위는 장애의 증상들이 영향을 받는 원하는 효과를 생성하기에 충분히 크다. 투여량은 유해 부작용, 가령, 원치않는 교차 반응, 아나필락시스 반응, 등을 유발할 만큼 많지 않아야 한다. 일반적으로, 투여량은 환자의 연령, 상태, 성별 및 질환 정도, 투여 경로 또는 다른 약물이 요법에 포함되는지 여부에 따라 달라질 것이며, 당업자에 의해 결정될 수있다. 금기 사항이 있는 경우 개별 의사가 투여량을 조정할 수 있다. 투여량들은 달라질 수 있으며 하루 또는 수일 동안 매일 1 이상의 용량 투여로 투여될 수 있다. 해당 분류의 약학적 제품들에 대한 적절한 투여량에 관한 지침을 문헌에서 찾을 수 있다. 예를 들어, 항체에 대한 적절한 용량 선택에 대한 지침은 항체의 치료적 사용에 관한 문헌, 예를 들어, Handbook of Monoclonal Antibodies, Ferrone 외, eds., Noges Publications, Park Ridge, NJ, (1985) ch. 22 및 pp. 303-357; Smith 외 Antibodies in Human Diagnosis and Therapy, Haber 외, eds., Raven Press, New York (1977) pp. 365-389에서 찾을 수 있다. 단독으로 사용되는 항체의 전형적인 일일 투여량은 상기 요인들에 따라 하루에 약 1pg/kg 내지 최대 100mg/kg 체중 또는 그 이상의 범위가 될 수 있다.
한 측면에서, 본원에 개시된 임의의 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)는 제어되지 않는 세포 증식이 발생하는 임의의 질환, 가령, 암 및 전이를 치료, 예방, 억제 또는 감소시키기 위해 사용될 수 있는 것으로 본원에서 이해되고 간주된다. 개시된 조성물이 치료에 사용될 수 있는 대표적인, 그러나 비-제한적인 암들의 목록은 다음과 같다: 림프종, B 세포 림프종, T 세포 림프종, 균상식육종, 호지킨병, 골수성 백혈병, 방광암, 뇌암, 신경계암, 두경부암, 두경부 편평세포 암종, 소세포 폐암 및 비소세포 폐암과 같은 폐암, 신경모세포종/교모세포종, 난소암, 피부암, 간암, 흑색종, 입, 목, 후두 및 폐의 편평세포암종, 자궁경부암, 자궁경부암종, 유방암 및 상피암, 신장암, 비뇨생식기암, 폐암, 식도암종, 두경부암종, 대장암, 조혈암; 고환암; 결장암, 직장암, 전립선암 또는 췌장암.
한 측면에서, 본원에 개시된 임의의 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)를 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 암 또는 전이를 치료, 예방, 억제 및/또는 감소시키는 방법이 본원에 개시된다. 예를 들면, 한 측면에서, 표 1에 제시된 하나 이상의 상보성 결정 영역들 (CDR)들 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 분리된 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 표적 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)를 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 암 또는 전이를 치료, 예방, 억제, 및/또는 감소시키는 방법이 본원에 개시된다. 그러므로, 예를 들면, 대상체의 암 또는 전이를 치료, 예방, 억제 및/또는 감소시키는 방법은 서열 번호: 3, 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 서열 번호: 6, 서열 번호: 7, 서열 번호: 8, 서열 번호: 9, 및/또는 서열 번호: 10을 포함할 수 있는 하나 이상의 중쇄 가변 도메인 CDR들을 포함하는 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)를 대상체에 투여하는 것을 포함할 수 있다. 한 측면에서, 대상체의 암 또는 전이를 치료, 예방, 억제 및/또는 감소시키는 상기 개시된 방법에서 사용되는 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)는 표 1의 CDR들의 목록으로부터 2 또는 3개 중쇄 가변 도메인 CDR들의 임의의 조합을 포함하는 중쇄 가변 도메인 CDR을 포함할 수 있는 것으로 이해되며 본원에서 간주된다. 그러므로, 예를 들면, 대상체의 암 또는 전이를 치료, 예방, 억제 및/또는 감소시키는 상기 개시된 방법은 서열 번호: 3 및 서열 번호: 5; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 6; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 7; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 8; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 5; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 6; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 7; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 8; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 10; 또는 서열 번호: 4, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 10에 제시된 중쇄 가변 도메인 CDR들을 포함하는 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 한 측면에서, 대상체의 암 또는 전이를 치료, 예방, 억제 및/또는 감소시키는 방법은 서열 번호: 1에 제시된 가변 중쇄 도메인을 포함하는 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)를 대상체에 투여하는 것을 포함할 수 있다.
한 측면에서, 표 1에 제시된 하나 이상의 상보성 결정 영역들 (CDR)들 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 분리된 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 표적 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)를 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 암 또는 전이를 치료, 예방, 억제, 및/또는 감소시키는 방법이 본원에 개시된다. 그러므로, 예를 들면, 대상체의 암 또는 전이를 치료, 예방, 억제 및/또는 감소시키는 방법은 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 및/또는 서열 번호: 15를 포함할 수 있는 하나 이상의 경쇄 가변 도메인 CDR들을 포함하는 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)를 대상체에 투여하는 것을 포함할 수 있다. 한 측면에서, 대상체의 암 또는 전이를 치료, 예방, 억제 및/또는 감소시키는 상기 개시된 방법에서 사용되는 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)는 표 1의 CDR들의 목록으로부터 2 또는 3개 경쇄 가변 도메인 CDR들의 임의의 조합을 포함하는 경쇄 가변 도메인 CDR을 포함할 수 있는 것으로 이해되며 본원에서 간주된다. 그러므로, 예를 들면, 대상체의 암 또는 전이를 치료, 예방, 억제 및/또는 감소시키는 상기 개시된 방법은 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 경쇄 가변 도메인 CDR들을 포함하는 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 한 측면에서, 대상체의 암 또는 전이를 치료, 예방, 억제 및/또는 감소시키는 방법은 서열 번호: 2에 제시된 가변 경쇄 도메인을 포함하는 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)를 대상체에 투여하는 것을 포함할 수 있다. 한 측면에서, PD-L1 결합 분자는 서열 번호: 1에 제시된 가변 중쇄 도메인 및 서열 번호: 2에 제시된 가변 경쇄 도메인을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "치료", "치료하다" 또는 "치료하는 것"은 대상체에서 질환 또는 상태 (가령, 예를 들어, 염증 상태 또는 암)의 영향 중 하나 이상을 감소시키는 방법을 지칭한다. 따라서 개시된 방법에서 치료는 확립된 감염 또는 감염 증상의 중증도의 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 감소를 의미 할 수 있다. 예를 들어, 염증 상태 또는 암을 치료하는 방법은 대조군과 비교하여 대상체에서 상기 상태 또는 암의 하나 이상의 증상이 10% 감소하는 경우 치료로 간주된다. 따라서 감소는 천연 또는 대조 수준과 비교하여 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 또는 10%와 100% 사이의 임의의 퍼센트 감소 일 수 있다. 치료는 반드시 이러한 상태 또는 질환 또는 이러한 상태나 질환의 증상들의 치유 또는 완전한 제거를 지칭하는 것은 아님이 이해된다. 본원에서 논의되는 치료는 예방적 또는 치료적일 수 있음이 본원에서 이해되고 간주된다. 따라서, 한 측면에서 대상체에게 PD-L1 결합 분자를 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 염증성 질환 또는 상태의 중증도를 치료하거나 감소시키는 방법이 존재한다. 또한 대상체에게 PD-L1 결합 분자를 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 염증성 질환 또는 상태의 발병을 예방 또는 감소시키는 방법이 개시된다.
본원에서 사용되는 용어인 감염을 예방하다, 예방하는 것, 및 예방은, 대상체가 하나 이상의 감염 증상들을 나타내기 시작하기 전 또는 거의 이와 동시에 발생하는 활동, 예를 들어, 치료제(예컨대, 본원에 개시된 조성물)의 투여를 지칭하며, 이는 하나 이상의 감염 증상들의 발병 또는 악화를 억제 또는 지연시키거나 하나 이상의 감염 증상들의 재발을 지연시킨다. 본원에서 사용되는, 저하, 감소 또는 억제에 대한 지칭은 대조군 수준에 대한 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상의 변화를 포함한다. 예를 들어, 개시된 방법들은 대상체에서 염증 상태 또는 질환, 또는 염증 상태 또는 질환의 증상들의 발병, 악화 또는 재발이, 염증 상태 또는 질환을 감소시키기 위한 PD-L1 결합 분자를 제공받지 못한 대조 대상체들과 비교하여 약 10% 감소되는 경우, 예방인 것으로 간주된다.
본원에 개시된 임의의 PD-L1 결합 분자 (중화 PD-L1 결합 분자, 가령, 예를 들면, 중화 항-PD-L1 항체들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)를 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 암 또는 전이를 치료, 예방, 억제, 또는 감소하는 개시된 방법들은 암 또는 전이의 감소, 억제, 치료 및/또는 제거에 추가로 도움을 주는 임의의 항암제 (가령, 예를 들면, 젬시타빈)의 투여를 포함할 수 있는 것으로 이해되고 본원에서 간주된다. 본원에 개시된 대상체의 암 또는 전이를 감소, 억제, 치료 및/또는 제거하는 방법을 위해 개시된 약학 조성물 이외에 추가 치료제로서 개시된 생체반응성 하이드로겔, 및/또는 생체반응성 하이드로겔 매트릭스에서 사용될 수 있는 항암제는 해당 분야에 공지된 임의의 항암제를 포함할 수 있으며, 아베마시클립, 아비라테론 아세테이트, 아비트렉세이트 (메토트렉세이트), 아브락산 (파클리탁셀 알부민-안정화 나노입자 제제), ABVD, ABVE, ABVE-PC, AC, AC-T, 애드세트리스 (브렌툭시맙 베도틴), ADE, 아도트라스투주맙 엠탄신, 아드리아마이신 (독소루비신 하이드로클로라이드), 아파티닙 디말레에이트, 아프니토르 (에베롤리무스), 아킨제오 (네투피탄트 및 팔로노세트론 하이드로클로라이드), 알다라 (이미퀴모드), 알데스류킨, 알레센자 (알렉티닙), 알렉티닙, 알렘투주맙, 알림타 (페메트렉시드 디소듐), 알리코파 (코판리시브 하이드로클로라이드), 주사용 알케란 (멜팔란 하이드로클로라이드), 알케란 정제 (멜팔란), 알록시 (팔로노세트론 하이드로클로라이드), 알룬브리그 (브리가티닙), 암보클로린 (클로람부실), 암보클로린 (클로람부실), 아미포스틴, 아미노레불린산, 아나스트로졸, 아프레피탄트, 아레디아 (파미드로네이트 디소듐), 아리미덱스 (아나스트로졸), 아로마신 (엑세메스탄), 아라논 (넬라라빈), 아르세닉 트리옥사이드, 아르제라 (오파투무맙), 아스파라기나제 에르위니아 크리산테미, 아테졸리주맙, 아바스틴 (베바시주맙), 아벨루맙, 악시티닙, 아자시티딘, 바벤시오(아벨루맙), BEACOPP, 베세눔 (카르무스틴), 벨레오다크 (벨리노스타트), 벨리노스타트, 벤다무스틴 하이드로클로라이드, BEP, 베스폰사 (이노투주맙 오조가마이신) , 베바시주맙, 벡사로텐, 벡사르 (토시투모맙 및 아이오딘 I 131 토시투모맙), 비칼루타미드, BiCNU (카르무스틴), 블레오마이신, 블리나투모맙, 블린사이토 (블리나투모맙), 보르테조밉, 보술리프 (보수티닙), 보수티닙, 브렌툭시맙 베도틴, 브리가티닙, BuMel, 부술판, 부술펙스 (부술판), 카바지탁셀, 카보메틱스 (카보잔티닙-S-말레이트), 카보잔티닙-S-말레이트, CAF, 캄파스 (알렘투주맙), 캄프토사르 , (이리노테칸 하이드로클로라이드), 카페시타빈, 카폭스, 카락 (플루오로우라실-외용), 카르보플라틴, 카르보플라틴-탁솔, 카르필조밉, 카르무브리스 (카르무스틴), 카르무스틴, 카르무스틴 임플란트, 카소덱스 (비칼루타미드), CEM, 세리티닙, 세루비딘 (다우노루비신 하이드로클로라이드), 서바릭스 (재조합 HPV 이가 백신), 세툭시맙, CEV, 클로람부실, 클로람부실-프레드니손, CHOP, 시스플라틴, 클래드리빈, 클라펜 (사이클로포스파미드), 클로파라빈, 클로파렉스 (클로파라빈), 클로라르 (클로파라빈), CMF, 코비메티닙, 코메트리크 (카보잔티닙-S-말레이트), 코판리시브 하이드로클로라이드, COPDAC, COPP, COPP-ABV, 코스메젠 (닥티노마이신), 코텔릭 (코비메티닙), 크리조티닙, CVP, 사이클로포스파미드, 사이포스 (이포스파미드), 사이람자 (라무시루맙), 사이타라빈, 사이타라빈 리포좀, 사이토사르-U (사이타라빈), 사이톡산 (사이클로포스파미드), 다브라페닙, 다카르바진, 다코젠 (데시타빈), 닥티노마이신, 다라투모맙, 다르잘렉스 (다라투무맙), 다사티닙, 다우노루비신 하이드로클로라이드, 다우노루비신 하이드로클로라이드 및 사이타라빈 리포좀, 데시타빈, 데피브로타이드 소듐, 데피텔리오 (데피브로타이드 소듐), 데가렐릭스, 데니류킨 디프티톡스, 데노수맙, 데포시트 (사이타라빈 리포좀), 덱사메타손, 덱스라족산 하이드로클로라이드, 디누툭시맙, 도세탁셀, 독실 (독소루비신 하이드로클로라이드 리포좀), 독소루비신 하이드로클로라이드, 독소루비신 하이드로클로라이드 리포좀, 독스-SL (독소루비신 하이드로클로라이드 리포좀), DTIC-돔 (다카르바진), 더발루맙, 에푸덱스 (플루오로우라실-외용), 엘리텍 (라스부리카제), 엘렌스 (에피루비신 하이드로클로라이드), 엘로투주맙, 엘록사틴 (옥살리플라틴), 엘트롬보파그 올라민, 에멘드 (아프레피탄트), 엠플리시티 (엘로투주맙), 에나시데닙 메실레이트, 엔잘루타미드, 에피루비신 하이드로클로라이드 , EPOCH, 에르비툭스 (세툭시맙), 에르불린 메실레이트, 에리베지 (비스모데깁), 에를로티닙 하이드로클로라이드, 에르위나제 (아스파라기나제 에르위니아 크리산테미) , 에티올 (아미포스틴), 에토포포스 (에토포시드 포스페이트), 에토포시드, 에토포시드 포스페이트, 에바세트 (독소루비신 하이드로클로라이드 리포좀), 에베롤리무스, 에비스타, (랄록시펜 하이드로클로라이드), 에보멜라 (멜팔란 하이드로클로라이드), 엑세메스탄, 5-FU (플루오로우라실 주사), 5-FU (플루오로우라실-외용), 파레스톤 (토레미펜), 파리닥 (파노비노스타트), 파슬로덱스 (풀베스트란트), FEC, 페마라 (레트로졸), 필그라스팀, 플루다라 (플루다라빈 포스페이트), 플루다라빈 포스페이트, 플루오로플렉스 (플루오로우라실-외용), 플루오로우라실 주사, 플루오로우라실-외용, 플루타미드, 폴렉스 (메토트렉세이트), 폴렉스 PFS (메토트렉세이트), 폴피리, 폴피리-베바시줌AB, 폴피리-세툭시맙, 폴피리 녹스, 폴폭스, 폴로틴 (프랄라트렉세이트), FU-1V, 풀베스트란트, 가르다실 (재조합 HPV 4가 백신), 가르다실 9 (재조합 HPV 9가 백신), 가싸이바 (오비누투주맙), 게피티닙, 젬시타빈 하이드로클로라이드, 젬시타빈-시스플라틴, 젬시타빈-옥살리플라틴, 젬투주맙 오조가미신, 젬자르 (젬시타빈 하이드로클로라이드), 길로트리프 (아파티닙 디말레에이트), 글리벡 (이마티닙 메실레이트), 글리아델 (카르무스틴 임플란트), 글리아델 웨이퍼 (카르무스틴 임플란트), 글루카르피다제, 고세렐린 아세테이트, 할라벤 (에리불린 메실레이트), 헤만지올 (프로프라놀롤 하이드로클로라이드), 헤르셉틴 (트라스투주맙), HPV 이가 백신, 재조합, HPV 9가 백신, 재조합, HPV 4가 백신, 재조합, 하이캄틴 (토포테칸 하이드로클로라이드), 하이드레아 (하이드록시우레아), 하이드록시우레아, 하이퍼-CVAD, 이브란스 (팔보시클립), 이브리투모맙 티욱세탄, 이브루티닙, ICE, 이클루식 (포나티닙 하이드로클로라이드), 이다마이신 (이다루비신 하이드로클로라이드), 이다루비신 하이드로클로라이드, 이델라리십, 이드히파 (에나시데닙 메실레이트), 이펙스 (이포스파미드), 이포스파미드, 이포스파미둠 (이포스파미드), IL-2 (알데스류킨), 이마티닙 메실레이트, 임브루비카 (이브루티닙), 임핀지 (더발루맙), 이미퀴모드, 임리직 (탈리모젠 라헤르파렙벡), 인라이타 (악시티닙), 이노투주맙 오조가미신, 인터페론 알파-2b, 재조합, 인터루킨-2 (알데스류킨), 인트론 A (재조합 인터페론 알파-2b), 아이오딘 I 131 토시투모맙 및 토시투모맙, 이필리무맙, 이레싸 (게피티닙), 이리노테칸 하이드로클로라이드, 이리노테칸 하이드로클로라이드 리포좀, 이스토닥스 (로미뎁신), 익사베필론, 일사조밉 시트레이트, 익셈프라 (익사베필론), 자카피 (룩솔리티닙 포스페이트), JEB, 제브타나 (카바지탁셀), 카드실라 (아도-트라스투주맙 엠탄신), 케옥시펜 (랄록시펜 하이드로클로라이드), 케피반스 (팔리페르민), 케이트루다 (펨브롤리주맙), 키스칼리 (리보시클립), 킴리아 (티사젠렉류셀), 키프롤리스 (카르필조밉), 란레오티드 아세테이트, 라파티닙 디토실레이트, 라르트루보 (올라라투맙), 레날리도마이드, 렌바티닙 메실레이트, 렌비마 (렌바티닙 메실레이트), 레트로졸, 류코보린 칼슘, 류케란 (클로람부실), 류프롤리드 아세테이트, 류스타틴 (클래드리빈), 레불란 (아미노레불린산), 린폴리진 (클로람부실), 리포독스 (독소루비신 하이드로클로라이드 리포좀), 로무스틴, 론서프 (트리플루리딘 및 티피라실 하이드로클로라이드), 루프론 (류프롤리드 아세테이트), 루프론 데포 (류프롤리드 아세테이트), 루프론 데포-페드 (류프롤리드 아세테이트), 린파르자 (올라파립), 마르퀴보 (빈크리스틴 설페이트 리포좀), 마툴란 (프로카르바진 하이드로클로라이드), 메클로레타민 하이드로클로라이드, 메게스트롤 아세테이트, 메키니스트 (트라메티닙), 멜팔란, 멜팔란 하이드로클로라이드, 메르캅토퓨린, 메스나, 메스넥스 (메스나), 메타졸라스톤 (테모졸로마이드), 메토트렉세이트, 메토트렉세이트 LPF (메토트렉세이트), 메틸날트렉손 브로마이드, 멕세이트 (메토트렉세이트), 멕세이트-AQ (메토트렉세이트), 미도스타우린, 미토마이신 C, 미톡산트론 하이드로클로라이드, 미토자이트렉스 (미토마이신 C), MOPP, 모조빌 (플레릭사포르), 무스타르겐 (메클로레타민 하이드로클로라이드) , 뮤타마이신 (미토마이신 C), 마일레란 (부술판), 마일로사르 (아자시티딘), 마일로타그 (젬투주맙 오조가미신), 나노입자 파클리탁셀 (파클리탁셀 알부민-안정화 나노입자 제제), 나벨빈 (비노렐빈 타르트레이트), 네시투무맙, 넬라라빈, 네오사르 (사이클로포스파미드), 네라티닙 말레에이트, 너링스 (네라티닙 말레에이트), 네투피탄트 및 팔로노세트론 하이드로클로라이드, 뉴라스타 (페그필그라스팀), 뉴포겐 (필그라스팀), 넥사바르 (소라페닙 토실레이트), 닐란드론 (닐루타미드), 닐로티닙, 닐루타미드, 닌라로 (일사조밉 시트레이트), 니라파립 토실레이트 모노하이드레이트, 니볼루맙, 놀바덱스 (타목시펜 시트레이트), 엔플레이트 (로미플로스팀), 오비누투주맙, 오돔조 (소니데깁), OEPA, 오파투무맙, OFF, 올라파립, 올라라투맙, 오마세탁신 메페숙시네이트, 온카스파르 (페가스파르가제), 온단세트론 하이드로클로라이드, 오니바이드 (이리노테칸 하이드로클로라이드 리포좀), 온탁 (데니류킨 디프티톡스), 옵디보 (니볼루맙), OPPA, 오시메르티닙, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파클리탁셀 알부민-안정화 나노입자 제제, PAD, 팔보시클립, 팔리페르민, 팔로노세트론 하이드로클로라이드, 팔로노세트론 하이드로클로라이드 및 네투피탄트, 파미드로네이트 디소듐, 파니투모맙, 파노비노스타트, 파라플라트 (카르보플라틴), 파라플라틴 (카르보플라틴), 파조파닙 하이드로클로라이드, PCV, PEB, 페가스파르가제, 페그필그라스팀, 페그인터페론 알파-2b, PEG-인트론 (페그인터페론 알파-2b), 펨브롤리주맙, 페메트렉시드 디소듐, 퍼제타 (퍼투주맙), 퍼투주맙, 플라티놀 (시스플라틴), 플라티놀-AQ (시스플라틴), 플레릭사포르, 포말리도마이드, 포말리스트 (포말리도마이드), 포나티닙 하이드로클로라이드, 포트라자 (네시투무맙), 프랄라트렉세이트, 프레드니손, 프로카르바진 하이드로클로라이드 , 프로류킨 (알데스류킨), 프롤리아 (데노수맙), 프로막타 (엘트롬보파그 올라민), 프로프라놀롤 하이드로클로라이드, 프로벤지 (시풀류셀-T), 퓨리네톨 (메르캅토퓨린), 퓨릭산 (메르캅토퓨린), 라듐 223 디클로라이드, 랄록시펜 하이드로클로라이드, 라무시루맙, 라스부리카제, R-CHOP, R-CVP, 재조합 인간 파필로마바이러스 (HPV) 이가 백신, 재조합 인간 파필로마바이러스 (HPV) 9가 백신, 재조합 인간 파필로마바이러스 (HPV) 4가 백신, 재조합 인터페론 알파-2b, 레고라페닙, 렐리스토 (메틸날트렉손 브로마이드), R-EPOCH, 레블리미드 (레날리도마이드), 류마트렉스 (메토트렉세이트), 리보시클립, R-ICE, 리툭산 (리툭시맙), 리툭산 하이셀라 (리툭시맙 및 하이알루로니다제 인간), 리툭시맙, 리툭시맙 및 , 하이알루로니다제 인간, ,로라피탄트 하이드로클로라이드, 로미뎁신, 로미플로스팀, 루비도마이신 (다우노루비신 하이드로클로라이드), 루브라카 (루카파립 캄실레이트), 루카파립 캄실레이트, 룩솔리티닙 포스페이트, 라이답트 (미도스타우린), 슬레로졸 (Sclerosol) 흉막내 에어로졸 (활석), 실툭시맙, 시풀류셀-T, 소마툴린 데포 (란레오티드 아세테이트), 소니데깁, 소라페닙 토실레이트, 스프라이셀 (다사티닙), 스탠포드 V, 멸균 활석 분말 (활석), 스테리탈크 (활석), 스티바가 (레고라페닙), 수니티닙 말레이트, 수텐트 (수니티닙 말레이트), 실라트론 (페그인터페론 알파-2b), 실반트 (실툭시맙), 신리보 (오마세탁신 메페숙시네이트), 타블로이드 (티오구아닌), TAC, 타핀라르 (다브라페닙), 타그리소 (오시메르티닙), 활석, 탈리모젠 라헤르파렙벡, 타목시펜 시트레이트, 타라빈 PFS (사이타라빈), 타르세바 (에를로티닙 하이드로클로라이드), 타르그레틴 (벡사로텐), 타시그나 (닐로티닙), 탁솔 (파클리탁셀), 탁소테레 (도세탁셀), 테센트리크, (아테졸리주맙), 테모다르 (테모졸로마이드), 테모졸로마이드, 템시롤리무스, 탈리도마이드, 탈로미드 (탈리도마이드), 티오구아닌, 티오테파, 티사젠렉류셀, 톨락 (플루오로우라실- 외용), 토포테칸 하이드로클로라이드, 토레미펜, 토리셀 (템시롤리무스), 토시투모맙 및 아이오딘 I 131 토시투모맙, 토텍 (덱스라족산 하이드로클로라이드), TPF, 트라벡테딘, 트라메티닙, 트라스투주맙, 트레안다 (벤다무스틴 하이드로클로라이드), 트리플루리딘 및 티피라실 하이드로클로라이드, 트리세녹스 (아르세닉 트리옥사이드), 타이커브 (라파티닙 디토실레이트), 유니툭신 (디누툭시맙), 우리딘 트리아세테이트, VAC, 반데타닙, VAMP, 바루비 (로라피탄트 하이드로클로라이드), 벡티빅스 (파니투모맙), VelP, 벨반 (빈블라스틴 설페이트), 벨케이드 (보르테조밉), 벨사르 (빈블라스틴 설페이트), 베무라페닙, 벤클렉스타 (베네토클락스), 베네토클락스, 베르제니오 (아베마시클립), 비아두르 (류프롤리드 아세테이트), 비다자 (아자시티딘), 빈블라스틴 설페이트, 빈카사르 PFS (빈크리스틴 설페이트), 빈크리스틴 설페이트, 빈크리스틴 설페이트 리포좀, 비노렐빈 타르트레이트, VIP, 비스모데깁, 비스토가드 (우리딘 트리아세테이트), 보락사제 (글루카르피다제), 보리노스타트, 보트리엔트 (파조파닙 하이드로클로라이드), 바이제오스 (다우노루비신 하이드로클로라이드 및 사이타라빈 리포좀), 웰코보린 (류코보린 칼슘), 잴코리 (크리조티닙), 젤로다 (카페시타빈), 젤리리, 젤록스, 엑스제바 (데노수맙), 조피고 (라듐 223 디클로라이드), 엑스탄디 (엔잘루타마이드), 예르보이 (이필리무맙), 욘델리스 (트라벡테딘), 잘트랩 (지브-아플리베르셉트), 작시오 (필그라스팀), 제줄라 (니라파립 토실레이트 모노하이드레이트), 젤보라프 (베무라페닙), 제발린 (이브리투모맙 티욱세탄), 지네카드 (덱스라족산 하이드로클로라이드), 지브-아플리베르셉트, 조프란 (온단세트론 하이드로클로라이드), 졸라덱스 (고세렐린 아세테이트), 졸레드로닉 애시드, 졸린자 (보리노스타트), 조메타 (졸레드로닉 애시드), 자이델릭 (이델라리십), 자이카디아 (세리티닙), 및/또는 자이티가 (아비라테론 아세테이트)가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다.
C. 실시예
하기 실시예는 본원에서 청구되는 조성물 및 방법들을 실시, 제조, 및 평가하는 방법에 관한 설명을 해당 분야의 통상의 당업자에게 제공하기 위하여 제시되며, 단순히 예시인 것으로 간주되고 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니다. 수치들 (예컨대, 양, 온도, 등)에 관하여 정확도를 보장하기 위하여 노력을 하였으나, 어느 정도의 오차 및 편차를 고려하여야 한다. 달리 지시되지 않는 한, 부는 중량부이고, 온도는 ℃ 또는 주위 온도이고, 압력은 대기압이거나 대기압에 가깝다.
1. 실시예 1
마우스 Ig-알파, 마우스 Ig-베타 및 인간 인터루킨 6을 과발현하는 트랜스제닉 마우스에 재조합 인간 PD-L1 (R&D Systems)을 2주 간격으로 복강내 주사하였다. 혈청 ELISA로 측정하여 상당한 면역반응이 나타난 후, 림프절, 비장 및 골수 세포를 수확하고, IgM 동형 항체를 발현하는 B 세포 표면을 자기 비드로 빼고 나머지 세포를 PD-L1에 결합하는 능력에 대해 MoFlo 형광-활성화 세포 분류기를 사용하여 분류했다.
PD-L1 결합에 양성인 세포를 96-웰 플레이트로 분류하고 단일 세포 RT-PCR을 수행하여 가변 영역을 증폭하고 가변 영역을 중쇄 인간 IgG1 또는 IgG4 불변 영역 또는 경쇄 인간 IgK 불변 영역을 포함하는 발현 벡터로 클로닝했다. 생성된 중쇄 및 경쇄 클론 쌍을 CHO 세포에 형질감염시키고 생성된 항체 단백질을 단백질 A 수지로 정제하였다.
고유 세포 표면 PD-L1에 결합하는 항체의 능력은 유세포 분석을 사용하여 측정되었다. 간단히 말해서, 정제된 항체를 세포와 개별적으로 혼합하고 형광으로 표지된 2차 항체를 세포-항체 혼합물에 첨가했다. 세포가 유세포 분석기를 통과했을 때 PD-L1에 대한 결합에 특이적인 항체는 세포의 형광을 유의하게 증가시켰다.
표면 막 결합 PD-L1에서 제시되는 세포와 표면 막 결합 PD-1에서 제시되는 또 다른 세포의 상호작용을 방해하는 항체의 능력을 시험관내 세포 리포터 분석법으로 평가하고 IC50 농도를 계산했다. (표 2).
표 2: PD-L1/PD-1 상호작용의 2-세포 차단 분석에서 각 항체의 식별번호 및 활성의 IC50
Figure pct00004
*IC50은 밀리리터 당 마이크로그램으로 나타냄
ABM101은 PD-L1/PD-1 리포터 분석에서 최고의 효능을 보였으며 인간화를 위해 선택되었다. CDR들은 다양한 인간 프레임워크에 이식되었고 ABM101.11은 최고의 발현 수준을 가진 가장 강력한 인간화 항체였다 (표 3).
표 3: ABM101로 표시된 선택된 마우스 항체의 인간화된 변이체의, 식별 번호, 인간 동형, IC50, 인간 PD-L1에 대한 해리 상수, 및 시노몰구스 원숭이에 대한 해리 상수.
Figure pct00005
서열
서열 번호: 1: ABM101.11 중쇄
Figure pct00006
서열 번호: 2: ABM101.11 경쇄
Figure pct00007
SEQUENCE LISTING <110> ABEOME CORPORATION <120> HIGH AFFINITY NEUTRALIZING MONOCLONAL ANTIBODIES TO PROGRAMMED DEATH LIGAND 1 (PD-L1) AND USES THEREOF <130> 10841-006WO1 <160> 15 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Asn 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Val Thr Met Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Pro Tyr Tyr Tyr Gly Tyr Arg Glu Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 2 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Pro Leu Ile Tyr 35 40 45 Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 3 Glu Asn Ser Met His 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 4 Glu Tyr Thr Met His 1 5 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 5 Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 6 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 6 Gly Ile Asp Pro Asn Asn Gly Gly Thr Trp Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 7 Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Trp Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 8 Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Trp Tyr Asn Arg Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 9 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 9 Pro Tyr Tyr Tyr Gly Tyr Arg Glu Asp Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 10 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 10 Pro Tyr Tyr Tyr Gly Ser Arg Glu Asp Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 11 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 11 Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr 1 5 10 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 12 Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr 1 5 10 <210> 13 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 13 Tyr Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 14 Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Pro Thr 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 15 Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr 1 5

Claims (16)

  1. 서열 번호: 3, 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 서열 번호: 6, 서열 번호: 7, 서열 번호: 8, 서열 번호: 9, 또는 서열 번호: 10에 제시된 하나 이상의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 분리된 PD-L1 결합 분자.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인을 포함하는 결합 분자는 서열 번호: 3 및 서열 번호: 5; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 6; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 7; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 8; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 5; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 6; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 7; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 8; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 3, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 3, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 9; 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4, 서열 번호: 6, 및 서열 번호: 10; 서열 번호: 4, 서열 번호: 7, 및 서열 번호: 10; 또는 서열 번호: 4, 서열 번호: 8, 및 서열 번호: 10에 제시된 CDR들을 포함하는, 분리된 PD-L1 결합 분자.
  3. 청구항 2에 있어서, 서열 번호: 1에 제시된 가변 중쇄 도메인을 포함하는, 분리된 PD-L1 결합 분자.
  4. 청구항 1에 있어서, 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 또는 서열 번호: 15에 제시된 하나 이상의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 추가로 포함하는, 분리된 PD-L1 결합 분자.
  5. 청구항 4에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인을 포함하는 결합 분자는 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 CDR들을 포함하는, 분리된 PD-L1 결합 분자.
  6. 청구항 5에 있어서, 서열 번호: 2에 제시된 가변 경쇄 도메인을 포함하는, 분리된 PD-L1 결합 분자.
  7. 청구항 6에 있어서, 상기 결합 분자는 서열 번호: 1에 제시된 가변 중쇄 도메인을 포함하는, 분리된 PD-L1 결합 분자.
  8. 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 또는 서열 번호: 15에 제시된 하나 이상의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 분리된 PD-L1 결합 분자.
  9. 청구항 8에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인을 포함하는 결합 분자는 서열 번호: 11 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 13; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 12 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 서열 번호: 11, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15; 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 14; 또는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 및 서열 번호: 15에 제시된 CDR들을 포함하는, 분리된 PD-L1 결합 분자.
  10. 청구항 1-9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 분자는 항체인, 분리된 PD-L1 결합 분자.
  11. 청구항 1-9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 분자는 면역독소인, 분리된 PD-L1 결합 분자.
  12. 서열 번호: 1의 중쇄 가변 영역을 내포 또는 포함하는 항체.
  13. 서열 번호: 2의 경쇄 가변 영역을 내포 또는 포함하는 항체.
  14. 서열 번호: 1의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 2의 경쇄 가변 영역 모두를 내포 또는 포함하는 항체.
  15. 청구항 10 또는 청구항 12-14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 중화 항체인, 분리된 PD-L1 결합 분자 또는 항체.
  16. 청구항 1-11 또는 15 중 어느 한 항의 PD-L1 결합 분자 또는 청구항 12-15 중 어느 한 항의 항체의 일정량을 투여함으로써 암 또는 암-관련 세포 증식 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
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