CN111919662A - 一种高产多糖的桑黄菌株及其培养方法与应用 - Google Patents
一种高产多糖的桑黄菌株及其培养方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111919662A CN111919662A CN202010872293.8A CN202010872293A CN111919662A CN 111919662 A CN111919662 A CN 111919662A CN 202010872293 A CN202010872293 A CN 202010872293A CN 111919662 A CN111919662 A CN 111919662A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture
- strain
- culturing
- phellinus igniarius
- polysaccharide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000123113 Phellinus igniarius Species 0.000 title claims abstract description 59
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 36
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 36
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 238000012136 culture method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 38
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 241000001727 Tropicoporus linteus Species 0.000 claims description 27
- 240000000249 Morus alba Species 0.000 claims description 23
- 235000008708 Morus alba Nutrition 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 18
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 16
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 16
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 14
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 14
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 12
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 12
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 12
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 11
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 claims description 10
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000002023 wood Substances 0.000 claims description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 8
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- 229910052602 gypsum Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000010440 gypsum Substances 0.000 claims description 8
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 8
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 8
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 7
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims description 5
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 5
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 claims description 4
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 4
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 claims description 4
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 4
- 238000004383 yellowing Methods 0.000 claims description 4
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 claims description 3
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 4
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 241000894007 species Species 0.000 abstract 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241000991728 Hymenochaetales Species 0.000 description 2
- 101100213970 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) ypt3 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 235000013606 potato chips Nutrition 0.000 description 2
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 241000222485 Agaricales Species 0.000 description 1
- 241001327634 Agaricus blazei Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 240000008397 Ganoderma lucidum Species 0.000 description 1
- 235000001637 Ganoderma lucidum Nutrition 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000123107 Phellinus Species 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000005918 in vitro anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G18/00—Cultivation of mushrooms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G18/00—Cultivation of mushrooms
- A01G18/20—Culture media, e.g. compost
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G18/00—Cultivation of mushrooms
- A01G18/40—Cultivation of spawn
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L31/00—Edible extracts or preparations of fungi; Preparation or treatment thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
- A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明提供了一种高产多糖的桑黄菌株，菌株号为S01，保藏号为CGMCC NO.20223，并提供了培养方法：杨树桑黄菌株S01依次经过母种培养、原种培养、栽培种培养和出黄阶段培养，得到桑黄子实体，还提供了应用，用于制备抗肿瘤的保健食品或者药物中。本发明杨树桑黄菌株S01遗传性稳定，该菌株经过培养得到的桑黄子实体中多糖含量可达4.36％～4.59％。在合成多糖方面能力很强，能够用于制备抗肿瘤的保健食品或者药物中。
Description
技术领域
本发明属于桑黄菌株技术领域，具体涉及一种高产多糖的桑黄菌株及其培养方法与应用。
背景技术
多糖作为一种生物反应调节剂(BRM)越来越受到研究者的关注，由于其天然、无毒副作用的特点，可能成为理想的功能性食品和药物的来源。研究发现多糖具有促进机体免疫功能、抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤和抗辐射等一系列作用，在临床上已用于治疗肝炎、艾滋病和许多其他疾病。从国内外近年来的统计资料来看，肿瘤疾病已成为仅次于心血管疾病的世界第二号“杀手”。由于放、化疗的治疗手段在杀伤癌细胞的同时，也对人体的正常组织产生毒性，造成许多严重的副作用，其作用是多途径、多环节、多靶点的，在抗肿瘤、抗病毒、抗凝血、降血糖、抗溃疡以及抗衰老等的防治上具体独特的疗效。因此，运用真菌多糖在提高机体免疫力和抗肿瘤方面的优势开发新型的真菌多糖类辅助抗肿瘤生物制品，对于提高化疗病人的免疫力有重大意义。
桑黄是一种珍贵的多年生大型药用真菌，素有“森林黄金”之美称，隶属于担子菌门(Basidiomycota)蘑菇纲(Agaricomycetes)锈革菌目(Hymenochaetales)锈革菌科(Hymenochaetaceae)桑黄孔菌属(Sanghuangporus)的一类多年生大型药用真菌，其对S180、胃癌的抑制作用较灵芝、巴西蘑菇等药用真菌还强，具有开发天然抗肿瘤生物制品的潜力。随着国内外专家们对桑黄的抗癌机理及药用价值研究的越来越深入，桑黄已广泛被人们所认识，市场上对桑黄的需求量越来越大。由于受生理状态的特殊性和复杂性以及外部环境的制约，桑黄在自然界中形成子实体稀少，特别是形成可用子实体需要多年，远远无法满足市场的需求。但由于桑黄是一类白腐真菌，以腐生为主兼寄生，因而对其进行人工栽培理论上是可行的，尽管我国多地已有人工栽培的模式出现，但由于技术不成熟、品种性状不稳定等因素，存在产量低，子实体质量差等问题。因此，选育出抗性强、产量高、质量好的优良菌株成了关键性的问题，对于桑黄的开发、应用具有重大意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种高产多糖的桑黄菌株及其培养方法与应用，该杨树桑黄菌株S01遗传性稳定，该菌株经过培养得到的桑黄子实体中多糖含量可达4.36％～4.59％。在合成多糖方面能力很强，能够用于制备抗肿瘤的保健食品或者药物中。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种高产多糖的桑黄菌株，其特征在于，所述桑黄菌株命名为杨树桑黄菌株S01，属于桑黄孔菌属Sanghuangporus中的杨树桑黄Sanghuangporus vaninii，保藏号为CGMCC NO.20223，菌株号为S01；已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2020年07月15日；所述杨树桑黄菌株S01的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
本发明还提供了上述的高产多糖的桑黄菌株的培养方法，将所述杨树桑黄菌株S01依次经过母种培养、原种培养、栽培种培养和出黄阶段培养，得到桑黄子实体；
所述母种培养的具体过程为：在温度为25℃～28℃的条件下暗光培养15d～20d；
所述原种培养的具体过程为：接种后，在温度为25℃～30℃的条件下暗光培养，菌丝萌发后，在温度为25℃～28℃的条件下暗光培养，待菌丝长至直径为2cm～3cm的菌圈时，抖动透气袋，摇散菌块，每隔4d～5d抖动一次，共抖动4～5次；原种培养的湿度条件为60％～70％，暗光培养总共30d～35d；
所述栽培种培养的具体过程为：接种后，在温度为25℃～30℃的条件下暗光培养，菌丝封面后，在温度为25℃～28℃的条件下暗光培养，栽培种培养的湿度条件为65％～75％，暗光培养总共45d～55d；
所述出黄阶段培养的具体过程为：菌袋发满后，后熟培养20d～30d，当有原基形成后进行割口，割口后的10d～15d内，在CO2浓度不低于5000ppm、湿度为85％～95％、光照强度为100Lux～200Lux的密闭的大棚内培养；当子实体长至2cm～3cm时，在CO2浓度为3000ppm～4000ppm、光照强度为300Lux～700Lux的通风大棚中培养60d～80d，当桑黄子实体长至直径为10cm～13cm，厚度为5cm～7cm时采收。
优选地，所述母种培养的培养基由以下重量份的原料制成：桑树木屑滤液500份～600份、去皮马铃薯滤液500份～600份、葡萄糖20份～35份、蛋白胨10份～15份、KH2PO41份～2份、琼脂粉13份～15份；所述桑树木屑滤液为质量比为1：5的桑树木屑和水混合后，在温度为100℃的条件下处理30min后过滤而得；去皮马铃薯滤液为质量分数为1：5的去皮马铃薯切块后和水混合，在温度为100℃的条件下处理20min后过滤而得。
优选地，所述原种培养的培养基由以下质量分数的原料制成：桑树木屑5％～10％、阔叶树木屑5％～10％、石膏1％～2％、KH2PO40.1％～0.3％，余量为煮泡后的小米或煮泡后的麦粒；所述煮泡后的小米或煮泡后的麦粒的含水量为60％～65％；煮泡后的小米或煮泡后的麦粒分别为小米或麦粒在温度为100℃的水中浸泡处理15min后沥干而得。
优选地，所述栽培种培养的培养基由初始料和水混合而成；所述栽培种培养的培养基的含水量为60％～65％；所述初始料由以下质量分数的原料制成：阔叶树木屑20％～35％、麸皮20％～25％、甜菜粕5％～8％、豆粉5％～8％、石膏1％～2％，余量为桑树木屑。
优选地，所述桑黄子实体的多糖含量为4.36％～4.59％。
本发明还提供了上述高产多糖的桑黄菌株的应用，所述杨树桑黄菌株S01用于制备抗肿瘤的保健食品或者药物中。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
本发明的杨树桑黄菌株S01其遗传性稳定，该菌株经过培养得到的桑黄子实体中多糖含量可达4.36％～4.59％，而桑黄孔菌属Sanghuangporus中的鲍姆桑黄的多糖含量仅为1％～2.6％，其他杨树桑黄多糖含量仅为1％～3.5％，因此本发明的菌株在合成多糖方面能力很强，具有潜在的开发应用价值，并且能够用于制备抗肿瘤的保健食品或者药物中。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。
附图说明
图1是本发明的杨树桑黄菌株S01的形态学鉴定图。
图2是本发明实施例4的桑黄多糖的体外抗肿瘤细胞实验肿瘤抑制率图。
具体实施方式
实施例1
本实施例为杨树桑黄菌株S01的鉴定：
(1)形态学鉴定
杨树桑黄菌株S01的桑黄子实体，多年生，如图1所示，图1中左图为背面图，右图为正面图，边缘为嫩黄色生长层，随着子实体生长逐渐木质化，菌盖马蹄形，背面棕褐色，腹面黄色，大小为8.3cm×6.7cm，重89.6g，菌丝整齐、浓密，萌发初期为白色，后慢慢转黄，上述描述的子实体和菌丝的生长特征，与吴声华等和戴玉成等报道的桑黄形态特征基本一致。
(2)分子鉴定
提取杨树桑黄菌株S01的总基因组DNA，采用ITS通用引物对ITS4和ITS5为引物，经rDNA ITS测序分析，确定其ITS1-5.8S-ITS2序列长度为814bp。将测得的序列在NCBI数据库中进行BLAST的结果显示，发现杨树桑黄菌株S01与杨树桑黄(Sanghuangporus vainii)最为相近；所述杨树桑黄菌株S01的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述ITS4具有具有序列表SEQ.ID.No.2的核苷酸序列；所述ITS5具有序列表SEQ.ID.No.3的核苷酸序列。
结合形态学及ITS序列，最终判断菌株S01应属于杨树桑黄(S.vaninii)的一种，菌株于2020年07月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.20223，菌株号为S01。
实施例2
本实施例为实施例1的杨树桑黄菌株S01的培养方法，将所述杨树桑黄菌株S01依次经过母种培养、原种培养、栽培种培养和出黄阶段培养，得到多糖含量为4.36％桑黄子实体；
所述母种培养的具体过程为：在温度为25℃的条件下暗光培养20d；所述母种培养的培养基由以下重量份的原料制成：桑树木屑滤液500份、去皮马铃薯滤液500份、葡萄糖20份、蛋白胨10份、KH2PO41份、琼脂粉13份；所述桑树木屑滤液为质量比为1：5的桑树木屑和水混合后，在温度为100℃的条件下处理30min后过滤而得；去皮马铃薯滤液为质量分数为1：5的去皮马铃薯切块后和水混合，在温度为100℃的条件下处理20min后过滤而得；
所述原种培养的具体过程为：接种后，在温度为25℃的条件下暗光培养，菌丝萌发后，在温度为28℃的条件下暗光培养，待菌丝长至直径为2cm～3cm的菌圈时，抖动透气袋，摇散菌块，每隔5d抖动一次，共抖动4次；原种培养的湿度条件为60％，暗光培养总共35d；所述原种培养的培养基由以下质量分数的原料制成：桑树木屑10％、阔叶树木屑5％、石膏1％、KH2PO40.1％，余量为煮泡后的麦粒；所述煮泡后的麦粒的含水量为60％；煮泡后的麦粒为麦粒在温度为100℃的水中浸泡处理15min后沥干而得；
所述栽培种培养的具体过程为：接种后，在温度为25℃的条件下暗光培养，菌丝封面后，在温度为28℃的条件下暗光培养，栽培种培养的湿度条件为65％，暗光培养总共55d；所述栽培种培养的培养基由初始料和水混合而成；所述栽培种培养的培养基的含水量为60％；所述初始料由以下质量分数的原料制成：阔叶树木屑20％、麸皮25％、甜菜粕8％、豆粉5％、石膏1％，余量为桑树木屑；
所述出黄阶段培养的具体过程为：菌袋发满后，后熟培养20d，当有原基形成后进行割口，割口后的15d内，在CO2浓度不低于5000ppm、湿度为85％、光照强度为200Lux的密闭的大棚内培养；当子实体长至2cm～3cm时，在CO2浓度为3000ppm、光照强度为300Lux的通风大棚中培养80d，当桑黄子实体长至直径为10cm～13cm，厚度为5cm～7cm时采收。
将采收后的桑黄子实体在温度为60℃的条件下干燥10h后，粉碎，过100目筛，得到桑黄粉末，向桑黄粉末中加入蒸馏水，然后在温度为95℃的条件下浸提24h，得到的滤液经减压浓缩得到水提取物，将得到的水提取物用质量分数为95％的乙醇溶液沉淀24h后，在转速为10000r/min的条件下离心10min，收集沉淀物，经冷冻干燥，得桑黄多糖；所述桑黄粉末和蒸馏水的用量比为1g:30mL。
实施例3
本实施例为实施例1的杨树桑黄菌株S01的培养方法，将所述杨树桑黄菌株S01依次经过母种培养、原种培养、栽培种培养和出黄阶段培养，得到多糖含量为4.59％桑黄子实体；
所述母种培养的具体过程为：在温度为28℃的条件下暗光培养15d；所述母种培养的培养基由以下重量份的原料制成：桑树木屑滤液600份、去皮马铃薯滤液600份、葡萄糖35份、蛋白胨15份、KH2PO42份、琼脂粉15份；所述桑树木屑滤液为质量比为1：5的桑树木屑和水混合后，在温度为100℃的条件下处理30min后过滤而得；去皮马铃薯滤液为质量分数为1：5的去皮马铃薯切块后和水混合，在温度为100℃的条件下处理20min后过滤而得；
所述原种培养的具体过程为：接种后，在温度为30℃的条件下暗光培养，菌丝萌发后，在温度为25℃的条件下暗光培养，待菌丝长至直径为2cm～3cm的菌圈时，抖动透气袋，摇散菌块，每隔4d抖动一次，共抖动5次；原种培养的湿度条件为70％，暗光培养总共30d；所述原种培养的培养基由以下质量分数的原料制成：桑树木屑5％、阔叶树木屑10％、石膏2％、KH2PO40.3％，余量为煮泡后的小米；所述煮泡后的小米的含水量为65％；煮泡后的小米为小米在温度为100℃的水中浸泡处理15min后沥干而得；
所述栽培种培养的具体过程为：接种后，在温度为30℃的条件下暗光培养，菌丝封面后，在温度为25℃的条件下暗光培养，栽培种培养的湿度条件为75％，暗光培养总共45d；所述栽培种培养的培养基由初始料和水混合而成；所述栽培种培养的培养基的含水量为65％；所述初始料由以下质量分数的原料制成：阔叶树木屑35％、麸皮20％、甜菜粕5％、豆粉8％、石膏2％，余量为桑树木屑；
所述出黄阶段培养的具体过程为：菌袋发满后，后熟培养30d，当有原基形成后进行割口，割口后的10d内，在CO2浓度不低于5000ppm、湿度为95％、光照强度为100Lux的密闭的大棚内培养；当子实体长至2cm～3cm时，在CO2浓度为4000ppm、光照强度为700Lux的通风大棚中培养60d，当桑黄子实体长至直径为10cm～13cm，厚度为5cm～7cm时采收。
将采收后的桑黄子实体在温度为60℃的条件下干燥8h后，粉碎，过100目筛，得到桑黄粉末，向桑黄粉末中加入蒸馏水，然后在温度为95℃的条件下浸提24h，得到的滤液经减压浓缩得到水提取物，将得到的水提取物用质量分数为95％的乙醇溶液沉淀24h后，在转速为10000r/min的条件下离心10min，收集沉淀物，经冷冻干燥，得桑黄多糖；所述桑黄粉末和蒸馏水的用量比为1g:30mL。
实施例4
本实施例为实施例1的杨树桑黄菌株S01制备的桑黄多糖的抗肿瘤活性。
1、细胞培养：HepG2人肝癌细胞和MCF-7人乳腺癌细胞利用DMEM培养基(加入1％青霉素)，置于37℃、饱和湿度、5％CO2培养箱中培养，隔2d换液1次。实验所用的细胞均处于对数生长期，活细胞比率大于95％。
2、桑黄多糖对癌细胞的抑制实验：取对数期的HepG2和MCF-7细胞经胰蛋白酶消化后，用DMEM培养基吹大配成1×105个/mL细胞悬液，加入96孔培养板，每孔100μL，在5％CO2、3℃培养箱中培养24h。待细胞完全贴壁后，实验组分别加入25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL样品液100μL，每组6孔；对照组加入含0.1％DMSO的无血清培养液100μL，并加入等体积的相对应多糖无血清培养液，用于MTT测定调零，培养箱中培养48h后，加入DMSO150μL，振动摇匀，用Infinite M200酶标仪(瑞士Tecan公司)测得各孔吸光度值D。
细胞的抑制率＝(正常对照组D570 nm-实验组D570 nm)/正常对照组D570 nm×100％。
由图2可知，桑黄多糖对MCF-7人乳腺癌细胞(图2中A)和MCF-7人乳腺癌细胞(图2中B)均具有一定的抑制作用，且随桑黄多糖浓度的增加抑制作用增强，在桑黄多糖的浓度为400μg/mL时，对HepG2人肝癌细胞和MCF-7人乳腺癌细胞的增殖抑制率较高，分别为53.58％和55.06％，图中control为空白对照，**表示p<0.01水平下的差异显著性。
因此，杨树桑黄菌株S01可以用于制备抗肿瘤的保健食品或者药物中。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。
序列表
<110> 杭州市农业科学研究院
<120> 一种高产多糖的桑黄菌株及其培养方法与应用
<130> 2020.8.15
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 393
<212> DNA
<213> 杨树桑黄(Sanghuangporus vaninii)
<400> 1
gcgataagta atgtgaattg cagaattcag tgaatcatcg aatctttgaa cgcaccttgc 60
gccccttggt attccgaggg gcatgcctgt ttgagtgtca tgtttatctc aaaccgctcg 120
tctttcttta attgaagggc ttgaggtttg gacttggagg tttactgctg gccgcctttc 180
gaagggggtc ggctcctctt aaatacatta gctgggcttt ggctcgcgct tacggtgtaa 240
tagttgattc cgttcaccaa cgagcgcttg cctaacgagc ttgcttctaa cggtccgctt 300
ggtcggacaa ggagttgttg ttacctcctt tttcttgaca cctttgacct caaatcaggt 360
aggattaccc gccgaactta agcatatcaa taa 393
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 杨树桑黄(Sanghuangporus vaninii)
<400> 2
tcctccgctt attgatatgc 20
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> 杨树桑黄(Sanghuangporus vaninii)
<400> 3
ggaagtaaaa gtcgtaacaa gg 22
Claims (7)
1.一种高产多糖的桑黄菌株，其特征在于，所述桑黄菌株命名为杨树桑黄菌株S01，属于桑黄孔菌属Sanghuangporus中的杨树桑黄Sanghuangporus vaninii，保藏号为CGMCCNO.20223，菌株号为S01；已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2020年07月15日；所述杨树桑黄菌株S01的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种如权利要求1所述的高产多糖的桑黄菌株的培养方法，其特征在于，将所述杨树桑黄菌株S01依次经过母种培养、原种培养、栽培种培养和出黄阶段培养，得到桑黄子实体；
所述母种培养的具体过程为：在温度为25℃～28℃的条件下暗光培养15d～20d；
所述原种培养的具体过程为：接种后，在温度为25℃～30℃的条件下暗光培养，菌丝萌发后，在温度为25℃～28℃的条件下暗光培养，待菌丝长至直径为2cm～3cm的菌圈时，抖动透气袋，摇散菌块，每隔4d～5d抖动一次，共抖动4～5次；原种培养的湿度条件为60％～70％，暗光培养总共30d～35d；
所述栽培种培养的具体过程为：接种后，在温度为25℃～30℃的条件下暗光培养，菌丝封面后，在温度为25℃～28℃的条件下暗光培养，栽培种培养的湿度条件为65％～75％，暗光培养总共45d～55d；
所述出黄阶段培养的具体过程为：菌袋发满后，后熟培养20d～30d，当有原基形成后进行割口，割口后的10d～15d内，在CO2浓度不低于5000ppm、湿度为85％～95％、光照强度为100Lux～200Lux的密闭的大棚内培养；当子实体长至2cm～3cm时，在CO2浓度为3000ppm～4000ppm、光照强度为300Lux～700Lux的通风大棚中培养60d～80d，当桑黄子实体长至直径为10cm～13cm，厚度为5cm～7cm时采收。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述母种培养的培养基由以下重量份的原料制成：桑树木屑滤液500份～600份、去皮马铃薯滤液500份～600份、葡萄糖20份～35份、蛋白胨10份～15份、KH2PO41份～2份、琼脂粉13份～15份；所述桑树木屑滤液为质量比为1：5的桑树木屑和水混合后，在温度为100℃的条件下处理30min后过滤而得；去皮马铃薯滤液为质量分数为1：5的去皮马铃薯切块后和水混合，在温度为100℃的条件下处理20min后过滤而得。
4.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述原种培养的培养基由以下质量分数的原料制成：桑树木屑5％～10％、阔叶树木屑5％～10％、石膏1％～2％、KH2PO40.1％～0.3％，余量为煮泡后的小米或煮泡后的麦粒；所述煮泡后的小米或煮泡后的麦粒的含水量为60％～65％；煮泡后的小米或煮泡后的麦粒分别为小米或麦粒在温度为100℃的水中浸泡处理15min后沥干而得。
5.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述栽培种培养的培养基由初始料和水混合而成；所述栽培种培养的培养基的含水量为60％～65％；所述初始料由以下质量分数的原料制成：阔叶树木屑20％～35％、麸皮20％～25％、甜菜粕5％～8％、豆粉5％～8％、石膏1％～2％，余量为桑树木屑。
6.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述桑黄子实体的多糖含量为4.36％～4.59％。
7.一种如权利要求1所述的高产多糖的桑黄菌株的应用，其特征在于，所述杨树桑黄菌株S01用于制备抗肿瘤的保健食品或者药物中。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010872293.8A CN111919662B (zh) | 2020-08-26 | 2020-08-26 | 一种高产多糖的桑黄菌株及其培养方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010872293.8A CN111919662B (zh) | 2020-08-26 | 2020-08-26 | 一种高产多糖的桑黄菌株及其培养方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111919662A true CN111919662A (zh) | 2020-11-13 |
| CN111919662B CN111919662B (zh) | 2021-12-21 |
Family
ID=73305810
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010872293.8A Active CN111919662B (zh) | 2020-08-26 | 2020-08-26 | 一种高产多糖的桑黄菌株及其培养方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111919662B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114591448A (zh) * | 2022-04-01 | 2022-06-07 | 浙江省林业科学研究院 | 一种桑树桑黄子实体甘露半乳聚糖及其制备和用途 |
| CN115287197A (zh) * | 2022-06-01 | 2022-11-04 | 中华全国供销合作总社济南果品研究所 | 小米发酵桑黄菌株及小米桑黄发酵产品的制备方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1096022A1 (en) * | 1998-04-30 | 2001-05-02 | Korea Institute Of Science And Technology | Immuno-stimulating polysaccharide substance from Phellinus spp. strain and use thereof |
| KR20020062047A (ko) * | 2001-01-19 | 2002-07-25 | 환인제약 주식회사 | 신규의 펠리누스 린테우스 균주 및 이로부터 분리정제된항암 면역활성 다당류 |
| CN1908181A (zh) * | 2006-08-16 | 2007-02-07 | 安徽大学 | 桑黄4.6302菌株菌质多糖及其制备方法 |
| KR20100119659A (ko) * | 2009-05-01 | 2010-11-10 | 주식회사 제이케이바이오테크 | 항암 및 면역 활성을 갖는 다당류를 생산하는 신규한 펠리누스 균주 |
| CN104285669A (zh) * | 2014-09-18 | 2015-01-21 | 淳安千岛湖桑都食用菌专业合作社 | 一株桑黄菌株及其应用 |
| CN104892793A (zh) * | 2015-05-25 | 2015-09-09 | 江苏大学 | 桑黄菌丝体多糖、制备方法及其在抗肿瘤的应用 |
| CN105993593A (zh) * | 2016-05-23 | 2016-10-12 | 浙江省农业科学院 | 一种具有抗肿瘤活性的桑黄高效工厂化袋料栽培工艺 |
-
2020
- 2020-08-26 CN CN202010872293.8A patent/CN111919662B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1096022A1 (en) * | 1998-04-30 | 2001-05-02 | Korea Institute Of Science And Technology | Immuno-stimulating polysaccharide substance from Phellinus spp. strain and use thereof |
| KR20020062047A (ko) * | 2001-01-19 | 2002-07-25 | 환인제약 주식회사 | 신규의 펠리누스 린테우스 균주 및 이로부터 분리정제된항암 면역활성 다당류 |
| CN1908181A (zh) * | 2006-08-16 | 2007-02-07 | 安徽大学 | 桑黄4.6302菌株菌质多糖及其制备方法 |
| KR20100119659A (ko) * | 2009-05-01 | 2010-11-10 | 주식회사 제이케이바이오테크 | 항암 및 면역 활성을 갖는 다당류를 생산하는 신규한 펠리누스 균주 |
| CN104285669A (zh) * | 2014-09-18 | 2015-01-21 | 淳安千岛湖桑都食用菌专业合作社 | 一株桑黄菌株及其应用 |
| CN104892793A (zh) * | 2015-05-25 | 2015-09-09 | 江苏大学 | 桑黄菌丝体多糖、制备方法及其在抗肿瘤的应用 |
| CN105993593A (zh) * | 2016-05-23 | 2016-10-12 | 浙江省农业科学院 | 一种具有抗肿瘤活性的桑黄高效工厂化袋料栽培工艺 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 冯伟林等: "桑黄‘浙黄1号’的选育报告", 《菌物学报》 * |
| 刘艳等: "桑树桑黄人工繁育技术研究", 《蚕学通讯》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114591448A (zh) * | 2022-04-01 | 2022-06-07 | 浙江省林业科学研究院 | 一种桑树桑黄子实体甘露半乳聚糖及其制备和用途 |
| CN115287197A (zh) * | 2022-06-01 | 2022-11-04 | 中华全国供销合作总社济南果品研究所 | 小米发酵桑黄菌株及小米桑黄发酵产品的制备方法 |
| CN115287197B (zh) * | 2022-06-01 | 2024-02-02 | 中华全国供销合作总社济南果品研究所 | 小米发酵桑黄菌株及小米桑黄发酵产品的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111919662B (zh) | 2021-12-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100490630C (zh) | 一种人工培育松茸子实体的方法 | |
| CN111919662B (zh) | 一种高产多糖的桑黄菌株及其培养方法与应用 | |
| Attaran Dowom et al. | Agronomic and environmental factors affecting cultivation of the winter mushroom or Enokitake: Achievements and prospects | |
| CN109370914B (zh) | 一种冬虫夏草菌丝体粉及其生产方法 | |
| KR101124783B1 (ko) | 상황버섯 균사체 배양용 배지 조성물 | |
| CN116948836B (zh) | 一种高产黄酮的灵芝菌株及其培养基、培养方法和用途 | |
| CN113308378B (zh) | 高产麦角硫因的灵芝菌株及其应用 | |
| CN114085781B (zh) | 一种灵芝菌gz及其应用 | |
| Landingin et al. | Optimization of culture conditions for mycelial growth and basidiocarp production of Cyclocybe cylindracea (Maire) | |
| Salwan et al. | Recent developments in shiitake mushrooms and their nutraceutical importance | |
| Nguyen et al. | Optimization of mycelial growth and cultivation of wild Ganoderma sinense | |
| Niazi et al. | Molecular phylogenetics and optimization of growth conditions of indigenous edible and therapeutically significant Pleurotus floridanus from Pakistan | |
| KR102551019B1 (ko) | 버섯균사체로 배양한 발효 호박씨의 추출물 제조방법 | |
| CN110331098B (zh) | 一种促进蔓枯病病原菌产孢子的方法 | |
| CN112042471A (zh) | 一种猪肚菇的工厂化生产方法 | |
| KR20150055650A (ko) | 목질진흙상황버섯 자실체의 재배방법 및 이에 의해 재배된 목질진흙상황버섯 자실체 | |
| CN112195105A (zh) | 田纳西曲霉及其应用 | |
| KR20040047730A (ko) | 펠리누스 린테우스 균사체 배양용 배지 조성물 | |
| Xiang et al. | Shiitake mushroom (Lentinula edodes (Berk.) sing.) breeding in China | |
| JP3509736B2 (ja) | 生理機能活性を有するハナビラタケの菌床作製方法 | |
| KR100706132B1 (ko) | 펠리누스 린테우스 균사체 배양용 배지 조성물 | |
| CN106797801B (zh) | 一种蝉花的人工培养方法 | |
| CN109810908B (zh) | 一种梭伦剥管孔菌新菌种和基于菌糠基质的栽培方法及其用途 | |
| CN108611279B (zh) | 一种囊孔附毛菌的驯化方法及驯化的囊孔附毛菌和应用 | |
| CN109328865B (zh) | 一种蛹虫草的制备方法及其制备的蛹虫草 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |