CN111909131A - Erbb/btk抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了抑制ErbB(例如EGFR或Her2)，尤其是ErbB的突变形式以及BTK的化合物，其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或立体异构体，以及包含所述化合物的药物组合物。所述化合物和所述药物组合物可以有效地治疗ErbB(特别是ErbB的突变形式)或BTK相关疾病，包括癌症。

Description

ERBB/BTK抑制剂
本申请是申请号为201980006427.3、申请日为2019年1月28日、发明名称为“ERBB/BTK抑制剂”的中国发明专利申请的分案申请。原申请为国际申请号为PCT/CN2019/073355的国家阶段申请，该国际申请要求申请日为2018年1月31日、申请号为PCT/CN2018/074791的PCT专利申请和申请日为2018年11月30日、申请号为PCT/CN2018/118569的PCT专利申请的优先权。上述所有申请均通过引用并入本申请。
发明领域
本申请涉及抑制ErbB(例如EGFR或Her2)，尤其是ErbB的突变形式，和/或抑制布鲁顿氏酪胺酸激酶(Bruton′s tyrosine kinase，BTK)的化合物。本申请还涉及包含一种或多种所述化合物作为活性成分的药物组合物，以及所述化合物在制造用于治疗与ErbB(例如EGFR或Her2)的突变形式和/或与BTK有关的病症的药物中的用途。
背景
ErbB家族受体酪氨酸激酶通过在酪胺酸磷酸化残基处发生的磷酸化事件激活次级信息传递效应子，将信号从细胞外部传输至内部。这些信号调节多个细胞过程，包括增殖、碳水化合物利用、蛋白质合成、血管生成、细胞生长以及细胞存活。ErbB家族信号传导失调将调节增殖、侵袭、转移、血管生成以及肿瘤细胞存活并且可能与许多人类癌症，包括肺癌、头颈癌和乳癌相关联。有关ErbB受体信号传导及其在肿瘤形成中之参与情况的详细评述提供于《新英格兰医学杂志》(New England Journal of Medicine)，2008，第358卷：1160-74以及《生物化学与生物物理学研究通讯》(Biochemical and BiophVsicalResearch Communications)，2004，第319卷：1-11中。
已发现，EGFR在许多癌症，如神经胶质瘤和非小细胞肺癌中过表达和/或突变。临床上，现有可用的靶向EGFR的抗癌药物，包括例如吉非替尼(gefitinib)
Figure BDA0002577093870000011
埃罗替尼(erlotinib)
Figure BDA0002577093870000013
拉帕替尼(lapatinib)
Figure BDA0002577093870000012
帕尼单抗(panitumumab)(VECTIBIX)、西妥昔单抗(cetuximab)(ERBITUX)、奥希替尼(osimertinib)(TAGRISSO、AZD9291)以及阿法替尼(afatinib)(GIOTRIF)。在大部分复发、获得耐药性的患者中，已在至少一半此类临床上耐药的患者中检测到EGFR在残基T790M处的突变。此外，T790M突变也可能是预先存在的，例如，存在带有L858R/T790M突变且从未接受过吉非替尼治疗的患者，并且种系EGFR T790M突变与某些家族性肺癌有关，表明T790M突变可能存在独立的致癌作用。当前正在开发的药物，包括第二代共价抑制剂，如BIBW2992、HKI-272和PF-0299804，有效针对耐受现有药物的T790M突变，但由于并行抑制野生型(WT)EGFR而展现剂量限制性毒性。在超过60％的用吉非替尼或埃罗替尼治疗的NSCLC患者中也有报告不良作用，如皮疹和腹泻，这些不良作用被认为与正常皮肤和肠道细胞中的WT EGFR信号传导路径抑制有关(Zhou CC等人，《临床肿瘤学杂志》(Journal of ClinicalOncology)，2011，第12卷：735-42；Mok TS等人，《新英格兰医学杂志》，2009，第361卷：947-57)。
在约4-9.2％的EGFR突变型肺癌中发现了EGFR外显子20插入(Mitsudomin和Yatabe，FEBSJ.，2010；277(2)：301-8)，其中大部分是在EGFR激酶结构域C-螺旋后的环内编码外显子20的氨基酸767至774的区域中发生(Yasuda等人，《柳叶刀-肿瘤学》(LancetOncol.)，2012；13(1)：e23-31)。据报导，带有典型EGFR外显子20插入突变的肺癌患者对吉非替尼或埃罗替尼或阿法替尼不起反应(Yasuda等人，《柳叶刀-肿瘤学》，2012，13(1)：e23-31；Yasuda等人，《科学·转化医学》(Sci Transl Med.)，2013，5(216)：216ra177)。
Her2过度表达可在乳癌、卵巢癌、膀胱癌、非小细胞肺癌以及若干其它肿瘤类型中发生。临床上可用的靶向Her2的抗癌药物包括曲妥珠单抗(Trastuzumab)(又称为赫赛汀(Herceptin))。尽管有三分之二的乳癌患者对赫赛汀反应良好，但一些Her2阳性乳癌患者对该药物不起反应。可能的情形是，无反应患者组可能在Her2中具有耐药性突变。在约2-4％不抽烟的非小细胞肺癌患者中还发现在Her2外显子20中的密码子775处出现四氨基酸YVMA插入突变，并且发现具有此类Her2YVMA突变的患者大部分对已知EGFR抑制剂具有抗性(Arcila等人，《临床癌症研究》(Clin Cancer Res.)，2012，18：4910-4918)。
布鲁顿氏酪胺酸激酶(BTK)是src相关Tec家族细胞质酪氨酸激酶的成员，这些细胞质酪氨酸激酶主要在B细胞中表达，并且分布于淋巴系统、造血和血液系统中。BTK在B细胞的B细胞受体信号传导路径中起关键作用，是B细胞发育、激活和存活必需的。因此，开发出BTK抑制剂，旨在治疗与BCR信号传导相关的B细胞恶性病，如慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin′s lymphoma，NHL)、套细胞淋巴瘤(MCL)以及弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。BTK还参与促进铎样受体(Toll-like receptor)信号传导，由此调控巨噬细胞激活和促炎性细胞因子的产生。若干研究展示，BTK与TLR信号传导路径之间的交互作用介导下游级联的反式激活。此外，还发现BTK在免疫调控中起重要作用。BTK已成为不仅用于治疗B细胞恶性病，而且用于治疗自身免疫疾病的引人注目的目标。(参见Ping等人，《肿瘤靶向》(Oncotarget)，2017，8(24)：39218-39229)。靶向BTK的抗癌药物现可用于临床，包括依鲁替尼(Ibrutinib)，这是一种被批准用于治疗CLL套细胞淋巴瘤(MCL)和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom′s macroglobulinemia，WM)的不可逆小分子BTK抑制剂。
因此，仍需要开发新ErbB(尤其是EGFR或Her2)抑制剂，这些抑制剂相对于WTEGFR，对突变型EGFR具有较佳选择性，或相对于WT Her2，对突变型Her2具有较佳选择性。还需要开发新颖的BTK抑制剂。
发明内容
在一个方面，本申请提供一种由式(I)表示的化合物：
Figure BDA0002577093870000031
或其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体。
在另一方面，本申请提供一种药物组合物，其包含一种或多种式(I)化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体。
在另一方面，本申请还提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体，或具有前述一种或多种的药物组合物，其用作抑制ErbB，优选抑制EGFR或HER2，更优选抑制EGFR或HER2的一种或多种突变形式的药物。
在又另一方面，本申请提供所述式(I)化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体，或具有前述一种或多种的药物组合物在制造用于抑制受试者体内的ErbB，优选抑制EGFR或HER2，更优选抑制EGFR或HER2的一种或多种突变形式的药物中的用途。
在另一方面，本申请提供了一种通过使用一种或多种式(I)化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体，或具有前述一种或多种的药物组合物来抑制ErbB，优选抑制EGFR或HER2，更优选抑制EGFR或HER2的一种或多种突变形式的方法。
在另一方面，本申请提供一种通过使用所述式(I)化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体，或具有前述一种或多种的药物组合物来治疗ErbB相关病症(例如癌症)的方法。
在另一方面，本申请提供了一种式(I)化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体与第二治疗剂，优选抗肿瘤剂的组合。
在另一方面，本申请提供了式(I)化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体与第二治疗剂，优选抗肿瘤剂的组合使用。
发明详述
化合物
在一个方面，本申请提供式(I)化合物：
Figure BDA0002577093870000041
或其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体，
其中，
A1是N或CR8；
A2、A3、A4及A5各自独立地是N或CR9，其中A2、A3、A4及A5中至多一个是N；
R1和R2各自独立地是氢或C1-12烷基，其任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：卤素、羟基、-NRaRb、C1-12烷基、C1-12烷氧基、3-10元饱和或不饱和碳环基、3-10元饱和或不饱和杂环基，其中C1-12烷基、C1-12烷氧基、3-10元饱和或不饱和碳环基、3-10元饱和或不饱和杂环基各自可未被取代或者被C1-12烷基单取代或多取代，
其中，Ra和Rb各自独立地选自氢或C1-12烷基，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基或C1-12烷氧基，
或Ra和Rb连同其所结合的氮原子一起形成3-10元饱和或不饱和杂环基，其任选地被卤素、羟基或C1-12烷基单取代或多取代；
或，R1和R2连同其所结合的氮原子一起形成任选地包含一个或多个选自N、O和S的额外杂原子的3-12元单环或多环，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：卤素、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、-NRaRb或-C1-12烷基-NRaRb；
R3是H、C1-12烷基或-C1-12烷基-NRaRb；
R4和R5各自独立地是C1-6烷基，其任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基，
或，R4和R5连同其所结合的碳原子一起形成任选地包含一个或多个选自N、O和S的额外杂原子的3-10元单环或多环，其可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基，
R6是氢或C1-12烷基，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基，
R7是氢或C1-12烷基，其可任选地被以下基团单取代或多取代：氘、氚、卤素或羟基，
R8是氢、氘、氚、卤素、氰基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基，其可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素或C1-12烷基；
R9是不存在、氢、氘、氚、卤素、氰基、羟基、C1-12烷基、或C1-12烷氧基，其可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素或C1-12烷基；
n是0、1、2、3或4；
各R独立地是氢、氘、氚、卤素、氰基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、3-10元饱和或不饱和碳环基或与所结合的环稠合的3-10元饱和或不饱和杂环基，所述基团可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素或C1-12烷基。
在一些实施方式中，式(I)中的A1是N。在一些实施方式中，式(I)中的A1是CR8，其中R8是氢、氘、氚、卤素、氰基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基，其可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素或C1-12烷基。在一些实施方式中，式(I)中的A1是CH。
在一些实施方式中，本申请的化合物由式(Ia)表示：
Figure BDA0002577093870000061
或其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体，
其中，
A2、A3、A4及A5各自独立地是N或CR9，其中A2、A3、A4及A5中至多一个是N；
R1和R2各自独立地是氢或C1-12烷基，其任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：卤素、羟基、-NRaRb、C1-12烷基、C1-12烷氧基、3-10元饱和或不饱和碳环基、3-10元饱和或不饱和杂环基，其中C1-12烷基、C1-12烷氧基、3-10元饱和或不饱和碳环基、3-10元饱和或不饱和杂环基各自可未被取代或者被C1-12烷基单取代或多取代，
其中，Ra和Rb各自独立地选自氢或C1-12烷基，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基或C1-12烷氧基，
或Ra和Rb连同其所结合的氮原子一起形成3-10元饱和或不饱和杂环基，其任选地被卤素、羟基或C1-12烷基单取代或多取代；
或，R1和R2连同其所结合的氮原子一起形成任选地包含一个或多个选自N、O和S的额外杂原子的3-12元单环或多环，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：卤素、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、-NRaRb或-C1-12烷基-NRaRb；
R3是H、C1-12烷基或-C1-12烷基-NRaRb；
R4和R5各自独立地是C1-6烷基，其任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基，
或，R4和R5连同其所结合的碳原子一起形成任选地包含一个或多个选自N、O和S的杂原子的3-10元单环或多环，其可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基，
R6是氢或C1-12烷基，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基，
R7是氢或C1-12烷基，其可任选地被以下基团单取代或多取代：氘、氚、卤素或羟基，
R9是不存在、氢、氘、氚、卤素、氰基、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基，其可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素或C1-12烷基；
n是0、1、2、3或4；
各R独立地是氢、氘、氚、卤素、氰基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、3-10元饱和或不饱和碳环基或与所结合的环稠合的3-10元饱和或不饱和杂环基，其可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素或C1-12烷基。
在一些实施方式中，本申请的化合物由式(Ib)表示：
Figure BDA0002577093870000071
或其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体，
其中，
A2、A3、A4及A5各自独立地是N或CR9，其中A2、A3、A4及A5中至多一个是N；
R1和R2各自独立地是氢或C1-12烷基，其任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：卤素、羟基、-NRaRb、C1-12烷基、C1-12烷氧基、3-10元饱和或不饱和碳环基、3-10元饱和或不饱和杂环基，其中C1-12烷基、C1-12烷氧基、3-10元饱和或不饱和碳环基、3-10元饱和或不饱和杂环基各自可未被取代或者被C1-12烷基单取代或多取代，
其中，Ra和Rb各自独立地选自氢或C1-12烷基，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基或C1-12烷氧基，
或Ra和Rb连同其所结合的氮原子一起形成3-10元饱和或不饱和杂环基，其任选地被卤素、羟基或C1-12烷基单取代或多取代；
或，R1和R2连同其所结合的氮原子一起形成任选地包含一个或多个选自N、O和S的额外杂原子的3-12元单环或多环，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：卤素、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、-NRaRb或-C1-12烷基-NRaRb；
R3是H、C1-12烷基或-C1-12烷基-NRaRb；
R4和R5各自独立地是C1-6烷基，其任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基，
或，R4和R5连同其所结合的碳原子一起形成任选地包含一个或多个选自N、O和S的杂原子的3-10元单环或多环，其可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基，
R6是氢或C1-12烷基，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基，
R7是氢或C1-12烷基，其可任选地被以下基团单取代或多取代：氘、氚、卤素或羟基，
R8是氢、氘、氚、卤素、氰基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基，其可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素或C1-12烷基；
R9是不存在、氢、氘、氚、卤素、氰基、羟基、C1-12烷基、或C1-12烷氧基，其可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素或C1-12烷基；
n是0、1、2、3或4；
各R独立地是氢、氘、氚、卤素、氰基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、3-10元饱和或不饱和碳环基或与所结合的环稠合的3-10元饱和或不饱和杂环基，其可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素或C1-12烷基。
在一些实施方式中，式(I)、式(Ia)或式(Ib)中的A2、A3、A4和A5之一是N且其余各自独立地是CR9。在一些实施方式中，式(I)、式(Ia)或式(Ib)中的A2、A3、A4和A5各自独立地是CR9。在一些实施方式中，当式(I)、式(Ia)或式(Ib)中的A2、A3、A4或A5是进一步被R取代的CR9时，R9不存在。
在一些实施方式中，n是2，A2和A5是CH，A3和A4各自独立地是进一步被R取代的CH，R独立地是卤素。
在一些实施方式中，式(I)、式(Ia)或式(Ib)中的R1和R2各自独立地是被取代或未被取代的C1-12烷基，其可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：卤素、羟基、-NRaRb、C1-12烷基、C1-12烷氧基、3-10元饱和或不饱和碳环基、3-10元饱和或不饱和杂环基，其中C1-12烷基、C1-12烷氧基、3-10元饱和或不饱和碳环基、3-10元饱和或不饱和杂环基各自可未被取代或者被C1-12烷基单取代或多取代，
其中，Ra和Rb各自独立地选自氢或C1-12烷基，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基或C1-12烷氧基，
或Ra和Rb连同其所结合的氮原子一起形成3-10元饱和或不饱和杂环基，其任选地被卤素、羟基或C1-12烷基单取代或多取代。
在一些实施方式中，式(I)、式(Ia)或式(Ib)中的R1和R2连同其所结合的氮原子一起形成任选地包含一个或多个选自N、O和S的额外杂原子的3-12元单环或多环，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：卤素、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、-NRaRb或-C1-12烷基-NRaRb，
其中，Ra和Rb各自独立地选自氢或C1-12烷基，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基或C1-12烷氧基，
或Ra和Rb连同其所结合的氮原子一起形成3-10元饱和或不饱和杂环基，其任选地被卤素、羟基或C1-12烷基单取代或多取代。
在一些实施方式中，式(I)、式(Ia)或式(Ib)中的R1和R2各自独立地选自：
Figure BDA0002577093870000091
其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷氧基或C1-12烷基，其中C1-12烷基可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素或羟基。
在一些实施方式中，式(I)、式(Ia)或式(Ib)中的R1和R2各自独立地选自：
Figure BDA0002577093870000101
在一些实施方式中，式(I)、式(Ia)或式(Ib)中的R1和R2连同其所结合的氮原子一起形成选自以下的3-12元单环或多环：
Figure BDA0002577093870000102
其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：卤素、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、-NRaRb或-C1-12烷基-NRaRb。
在一些实施方式中，式(I)、式(Ia)或式(Ib)中的R1和R2连同其所结合的氮原子一起形成：
Figure BDA0002577093870000111
在一些实施方式中，式(I)、式(Ia)或式(Ib)中的R4和R5各自独立地是被取代或未被取代的C1-6烷基，其可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基。在一些实施方式中，式(I)、式(Ia)或式(Ib)中的R4和R5各自独立地是未被取代的C1-6烷基。
在一些实施方式中，式(I)、式(Ia)或式(Ib)中的R4和R5连同其所结合的碳原子一起形成任选地包含一个或多个选自N、O和S的杂原子的3-10元单环或多环，其可任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基。
在一些实施方式中，式(I)、式(Ia)或式(Ib)中的R6是氢、氘或氚。
在一些实施方式中，式(I)、式(Ia)或式(Ib)中的R7是甲基、二氟甲基或三氟甲基。
示例性的式(I)化合物1-98陈述于下表1中。
表1.示例性化合物1-98
Figure BDA0002577093870000121
Figure BDA0002577093870000131
Figure BDA0002577093870000141
Figure BDA0002577093870000151
Figure BDA0002577093870000161
Figure BDA0002577093870000171
Figure BDA0002577093870000181
Figure BDA0002577093870000191
Figure BDA0002577093870000201
Figure BDA0002577093870000211
Figure BDA0002577093870000221
Figure BDA0002577093870000231
Figure BDA0002577093870000241
Figure BDA0002577093870000251
Figure BDA0002577093870000261
Figure BDA0002577093870000271
Figure BDA0002577093870000281
Figure BDA0002577093870000291
Figure BDA0002577093870000301
Figure BDA0002577093870000311
应了解，为清楚起见而在单独实施例的上下文中描述的本申请的某些特征也可组合提供于单一实施方式中。相反，为简洁起见而在单个实施例的上下文中描述的本申请的各种特征也可分开地或以任何适合子组合形式提供。
在本申请多处，描述了连接取代基。在结构明确需要连接基团的情况下，关于该基团所列的马库什变量(markush variable)应理解为连接基团。例如，如果结构中需要连接基团，且该变量的马库什组定义列举了“烷基”，则应理解，则应当理解所述“烷基”表示连接性亚烷基。
如本文所使用，当提到化学基团时，术语“被取代”意思指所述化学基团有一个或多个氢原子被移除且被取代基置换。如本文所使用，术语“取代基”具有本领域中已知的普通含义并且指共价连接至，或适当时，稠合至母基团的化学部分。如本文所使用，术语“任选被取代”或“任选被……取代”意思指化学基团可以不具有取代基(即，未被取代)或可以具有一个或多个取代基(即，被取代)。应理解，在给定原子处的取代受价态限制。
如本文所使用，术语“Ci-j”指示碳原子数量的范围，其中i和j是整数并且碳原子数量的范围包括端点(即，i和j)以及端点之间的每个整数点在内，且其中i∈{1、2、3、4、5、6、7、8、9或10}，j大于i，j∈{2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40}。例如，C1-6指示一至六个碳原子的范围，包括一个碳原子、二个碳原子、三个碳原子、四个碳原子、五个碳原子及六个碳原子。
如本文所使用，术语“烷基”无论是作为另一个术语的一部分还是独立地使用，都是指饱和或不饱和烃链，而不饱和烃链可以进一步细分成具有至少一个双键或三键的烃链(烯基或炔基)。以上提到的烃链可以是直链的或支链的。术语“Ci-j烷基”是指具有i至i个碳原子的烷基。在一些实施方式中，烷基含有1至12个、1至8个、1至6个、1至4个、1至3个或1至2个碳原子。饱和烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基；高级同系物，例如2-甲基-1-丁基、正戊基、3-戊基、正己基、1，2，2-三甲基丁基等。不饱和烷基的实例包括但不限于乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、仲丁烯基、乙炔基、丙炔-1-基、丙炔-2-基等。
如本文所使用，术语“卤代”和“卤素”是指选自氟、氯、溴和碘的原子。
如本文所使用，术语“氰基”是指式-CN的基团。
如本文所使用，术语“羟基”是指式-OH的基团。
如本文所使用，术语“烷氧基”无论是作为另一个术语的一部分还是独立地使用，都是指式-O-烷基的基团。术语“Ci-j烷氧基”意思指烷氧基的烷基部分具有i至j个碳原子。在一些实施方式中，烷基部分具有1至12个、1至10个、1至8个、1至6个、1至5个、1至4个、1至3个或1至2个碳原子。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和异丙氧基)、叔丁氧基等。
如本文所使用，术语“碳环基”无论是作为另一个术语的一部分还是独立地使用，都是指所有环原子都是碳且含有至少三个成环碳原子的任何环。在一些实施方式中，碳环基可以含有3至12个成环碳原子、3至10个成环碳原子、3至8个成环碳原子或4至8个成环碳原子。碳环基可以是饱和或部分不饱和的。在一些实施方式中，碳环基可以是饱和环烷基。在一些实施方式中，碳环基可以是在环系统中含有至少一个双键的不饱和环烷基。在一些实施方式中，不饱和碳环基可以含有一个或多个芳香环。
碳环基可以包括单环或多环(例如具有2、3或4个稠环、桥连环或螺环)。单环碳环基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚三烯基等。如本文所使用，术语“螺环”是指二个环通过单一共用原子连接的环系统；术语“稠合环”是指二个环共用二个相邻原子的环系统；并且术语“桥连环”是指二个环共用三个或三个以上原子的环系统。螺碳环基的实例包括但不限于螺[5.5]十一烷、螺戊二烯、螺[3.6]癸烷等。稠合碳环基的实例包括但不限于萘、苯并芘、蒽、二氢苊、芴、苊烯等。桥连碳环基的实例包括但不限于双环[2，2，1]庚烯基、双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷、双环[3.3.1]壬烷、双环[3.3.3]十一烷等。
如本文所使用，术语“杂环基”是指一个或多个(例如1、2或3个)环原子被杂原子置换的碳环基，所述杂原子包括但不限于氧、硫、氮、磷等。在一些实施方式中，杂环基是饱和杂环基。在一些实施方式中，杂环基是在环系统中具有一个或多个双键的不饱和杂环基。在一些实施方式中，不饱和杂环基可以含有一个或多个芳香环。
杂环基可以包括单环或多环(例如具有2、3或4个稠合环、桥连环或螺环)。示例性单环杂环基包括但不限于吡咯烷基、四氢呋喃、哌啶基、哌嗪基、吗啉基等。螺杂环基的实例包括但不限于螺吡喃、螺噁嗪等。稠合杂环基的实例包括但不限于喹啉、异喹啉、喹嗪、喹唑啉、蝶啶、色烯、异色烯、吲哚、异吲哚、吲哚嗪、吲唑、嘌呤、苯并呋喃、异苯并呋喃、苯并咪唑、苯并噻吩、咔唑、吩嗪、吩噻嗪、菲啶等基团。桥连杂环基的实例包括但不限于吗啡烷、六亚甲基四胺、1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)等。
如本文所使用，术语“i-j元”是指具有i至j个成环原子的碳环基或杂环基。例如，“3-8元碳环基”是指具有3至10个(例如3、4、5、6、7、8、9或10个)成环成员的碳环基；“3-10元杂环基”是指具有3至10个(例如3、4、5、6、7、8、9或10个)成环成员的杂环基。在一些实施方式中，碳环基或杂环基是3-10元、3-8元、3-6元或4-6元的。例如，哌啶基是6元杂环基的实例，吡唑基是5元杂环基的实例，吡啶基是6元杂环基的实例，且1，2，3，4-四氢萘是10元碳环基的实例。
如本文所使用，术语“芳香族基团”或“芳香环”是指在至少一个环中的成环原子之间具有交替的双键和单键的单环或多环碳环基或杂环基部分。在一些实施方式中，芳香环具有5至12个、5至10个、5至8个、6至12个、6至10个或6至8个成环原子(即，5-12元、5-10元、5-8元、6-12元、6-10元或6-8元的)。碳环芳香族基团的实例包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基、茚满基、茚基等。在一些实施方式中，杂环芳香族基团是5元或6元的。示例性5元杂环芳香族基团是噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，3，4-三唑基、四唑基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基等。示例性6元杂环芳香族基团是吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基及哒嗪基。
除非另外说明，否则本申请的“化合物”意图涵盖所描绘的结构的所有立体异构体、几何异构体和互变异构体。
术语“立体异构体”是指不对称化合物(例如具有一个或多个不对称取代的碳原子，即“不对称中心”)的多种立体异构构型(例如对映异构体、非对映异构体和外消旋体)。含有不对称中心的本申请化合物可以分离成有光学活性(对映异构体或非对映异构体)或无光学活性(外消旋)形式。术语“对映异构体”包括不可重叠的互为镜像的立体异构体对。一对对映异构体的1∶1混合物是一种“外消旋混合物”。术语“非对映异构体(diastereomer/diastereoisomer)”包括具有至少二个不对称原子但不互为镜像的立体异构体。含有一个或多个不对称中心的某些化合物可以产生对映异构体、非对映异构体或其它立体异构形式，其它立体异构形式可根据Cahn-Ingold-Prelog R-S系统在各不对称中心处依绝对构型将其定义为(R)-或(S)-。拆分的化合物，其绝对构型未知的，可以在不对称中心处使用术语“或”标示。有关如何自外消旋混合物制备光学活性形式的方法是本领域中已知的，如通过HPLC拆分或立体选择性合成。
“几何异构体”或“顺式和反式异构体”是指具有相同结构式但官能团在三维空间中旋转成不同取向的化合物。术语“互变异构体”包括质子转移互变异构体，它是具有相同结构式和总电荷的化合物的异构质子化状态。质子转移互变异构体的实例包括但不限于酮-烯醇对、酰胺-亚胺酸对、内酰胺-内酰亚胺对、烯胺-亚胺对，以及环状形式，在环状形式中，质子可以占用杂环系统的两个或更多个位置，例如1H-咪唑和3H-咪唑、1H-1，2，4-三唑、2H-1，2，4-三唑和4H-1，2，4-三唑、1H-异吲哚和2H-异吲哚，以及1H-吡唑和2H-吡唑。互变异构体可以处于平衡状态或通过适当取代而空间锁定成一种形式。除非另外说明，否则本申请中通过名称或结构标识为一种特定互变异构形式的本申请化合物意图包括其它互变异构形式。
本申请的“化合物”还意图涵盖化合物中原子的所有同位素。原子的同位素包括具有相同原子序数但原子量不同的原子。例如，本申请的“化合物”中的氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴或碘意图还包括其同位素，如但不限于：1H、2H、3H、11C、12C、13C、14C、14N、15N、16O、17O、18O、31P、32P、32S、33S、34S、36S、17F、19F、35Cl、37Cl、79Br、81Br、127I及131I。在一些实施方式中，氢包括氕、氘和氚。在一些实施方式中，碳包括12C和13C。
还应理解，本申请的“化合物”可以呈溶剂化形式以及非溶剂化形式，例如水合形式、固体形式存在，并且本申请意图涵盖所有这些溶剂化形式和非溶剂化形式。
还应理解，本申请的“化合物”可以呈药学上可接受的盐或酯形式存在。
如本文所使用，术语“药学上可接受”是指在合理医学判断的范围内，适合与人类和动物的组织接触使用，而无过高毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，并与合理的效益/风险比相称的化合物、材料、组合物和/或剂型。在一些实施方式中，药学上可接受的化合物、材料、组合物和/或剂型是指被监管机构(如美国食品药品监督管理局(U.S.Foodand Drug Administration)、中国国家食品药品监督管理总局(China Food and DrugAdministration)或欧洲药品管理局(European Medicines Agency))批准，或公认药典(如美国药典(U.S.Pharmacopoeia)、中国药典(China Pharmacopoeia)或欧洲药典(EuropeanPharmacopoeia))中所列的可用于动物特别是人类的那些。
如本文所使用，“药学上可接受的盐”是指本申请化合物的衍生物，其中母体化合物通过将现有酸性部分(例如羧基等)或碱性部分(例如胺、碱等)转化成其盐形式进行修饰。在许多情况下，本申请化合物能够因氨基和/或羧基或其类似基团的存在而形成酸和/或碱盐。并且“药学上可接受的盐”包括保持母体化合物的生物有效性和特性且通常在生物学上或其它方面无不利影响的酸加成盐或碱盐。
如本文所使用，“药学上可接受的……酯”是指在体内水解的酯并且包括易于在人体内分解而留下母体化合物或其盐的那些酯。此类酯可以用作如本文所定义的前药。酯可以与本文所描述的化合物上的胺、羟基或羧基侧链形成。例如，如果所公开的化合物含有醇官能团，则可以通过用酸性基团，如包括但不限于羧酸、磷酸、次膦酸、亚磺酸、磺酸以及硼酸基团置换醇基的氢原子来形成酯。制备此类酯的程序和具体基团是本领域技术人员已知的并且可以容易地在如以全文引用的方式并入本文中的Greene和Wuts，《有机合成中的保护基(Protective Groups in Organic Synthesis)》，第3版，John Wiley&Sons，纽约州纽约(New York，NY)，1999等参考来源中找到。
适合的本申请化合物的药学上可接受的盐包括例如酸加成盐，这种盐可以衍生自例如无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等)或有机酸(例如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、顺丁烯二酸、丙二酸、琥珀酸、反丁烯二酸、酒石酸、苯均三酸、柠檬酸、乳酸、苯乙酸、苯甲酸、扁桃酸、甲烷磺酸、萘二磺酸、乙烷磺酸、甲苯磺酸、三氟乙酸、水杨酸、磺基水杨酸等)。在一些实施方式中，本申请化合物的药学上可接受的盐是甲酸盐。在一些实施方式中，本申请化合物的药学上可接受的盐是TFA盐。适合的本申请化合物的药学上可接受的盐还包括例如碱加成盐，这种盐可以衍生自例如无机碱(例如钠、钾、铵盐以及周期表第I至XII列中金属如钙、镁、铁、银、锌、铜等的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐)或有机碱(例如伯胺、仲胺和叔胺、被取代的胺(包括天然存在的被取代的胺)、环胺、碱性离子交换树脂等)。某些有机胺包括但不限于异丙胺、苯乍生(benzathine)、胆碱盐、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪以及缓血酸胺。本领域技术人员应理解，除实例中所显示的盐外，其它用于形成酸/碱加成盐的酸或碱也是可能的。其它适合的盐的清单可以见于例如《雷明登氏药学全书(Remington′s Pharmaceutical Sciences)》，第20版，Mack Publishing Company，宾夕法尼亚州伊斯顿(Easton，Pa.)，(1985)；以及Stahl和Wermuth的《药用盐手册：特性、选择和应用(Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use)》(Wiley-VCH，德国魏因海姆(Weinheim，Germany)，2002)。
本申请还包括本申请化合物的活性中间物、活性代谢物和前药。如本文所使用，“活性中间物”是指合成工艺过程中的中间化合物，其展现与最终合成的化合物相同或基本上相同的生物活性。
如本文所使用，“活性代谢物”是指通过在动物或人体内代谢或生物转化产生的本申请化合物或其盐或前药的分解或最终产物，其展现与指定化合物相同或基本上相同的生物活性。此类代谢物可以由例如施用的化合物或盐或前药氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺、酯化、去酯化、酶裂解等得到。
如本文所使用，“前药”是指当施用给动物或人类受试者时释放活性母体药物的任何化合物或偶联物。前药可以通过修饰化合物中存在的官能团制备，其方式使得修饰在常规操作中或在体内裂解为母体化合物。前药包括羟基、氨基、硫氢基或羧基键结至任何基团，使得当将其施用给哺乳动物受试者时分别裂解形成游离羟基、氨基、硫氢基或羧基的化合物。前药的实例包括但不限于本申请化合物中醇和胺官能团的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物。前药的制备和使用论述于T.Higuchi和V.Stella，“作为新颖递送系统的前药(Pro-drugs as Novel Delivery Systems)”，《美国化学会会议论文集(A.C.S.SymposiumSeries)》第14卷，以及《药物设计中的生物可逆载剂(Bioreversible Carriers in DrugDesign)》，Edward B.Roche编，American Pharmaceutical Association and PergamonPress，1987，二者在此以全文引用的方式并入。
除非另外说明，否则“ErbB”或“野生型ErbB”是指正常ErbB家族成员。在一方面，本申请提供ErbB家族激酶(例如EGFR、Her2、Her3和/或Her4)的抑制性化合物。在一些实施方式中，本申请的化合物可以抑制ErbB家族激酶的野生型(WT)和突变形式。在一些实施方式中，相较于相应WT ErbB家族激酶，本申请的化合物是ErbB家族激酶中至少一个突变的选择性抑制剂。如本文所使用，术语“突变”是指ErbB蛋白质的任何突变，“突变体”或“突变形式”是指含有所述突变的蛋白质。ErbB的示例性突变包括但不限于EGFR中的L858R、T790M、G719S、G719X、delE746-A750、A763_Y764insFQEA、V769_D770insASV、H773_V774insNPH等，以及Her2中的外显子20insYVMA。在一些实施方式中，相较于WT EGFR，本申请的化合物是EGFR中的至少一个突变的选择性抑制剂。在一些实施方式中，相较于WT Her2，本申请的化合物是Her2中至少一个突变的选择性抑制剂。在一些实施方式中，所述EGFR中的至少一个突变是点突变(例如L858R、T790M)。在一些实施方式中，所述EGFR中的至少一个突变是缺失突变(例如delE746-A750)。在一些实施方式中，所述EGFR中的至少一个突变是插入突变(例如EGFR外显子20 V769_D770insASV、外显子20 H773_V774insNPH)。在一些实施方式中，所述EGFR中的至少一个突变是活化突变(例如L858R、G719S或delE746-A750)。在一些实施方式中，所述EGFR中的至少一个突变是耐药性突变(例如外显子20_T790M)。在某些实施方式中，EGFR的至少一个突变是T790M。在一些实施方式中，所提供的化合物选择性抑制T790M/L858R共突变，并且避开WT EGFR抑制作用。
如本文所使用，在与对WT EGFR/Her2的抑制相比较时使用的术语“选择性抑制”意思指，所提供的化合物在本文所描述的至少一种分析(例如生物化学或细胞分析)中，是对EGFR/Her2中至少一个突变(即，至少一个点突变、至少一个缺失突变、至少一个插入突变、至少一个活化突变、至少一个耐药性突变或至少一个缺失突变与至少一个点突变的组合)更为有效的抑制剂。在一些实施方式中，在与对EGFR抑制相比较时使用的术语“选择性抑制”意思指，所提供的化合物作为如本文所定义和描述的EGFR中至少一个突变的抑制剂的效力是其对WT EGFR的至少100倍、至少50倍、至少45倍、至少40倍、至少35倍、至少30倍、至少25倍、至少20倍、至少15倍、至少10倍、至少5倍、至少4倍、至少3倍、至少2倍、至少1.5倍或至少1.25倍。在一些实施方式中，在与对WT EGFR抑制相比较时使用的术语“选择性抑制”意思指，所提供的化合物作为如本文所定义和描述的EGFR中至少一个突变的抑制剂的效力是其对WT EGFR的高达1500倍、高达1200倍、高达1000倍、高达800倍、高达600倍、高达400倍、高达200倍、高达100倍、高达50倍、高达10倍。如本文所使用，术语“避开WT EGFR”意思指，上文和此处所定义和描述的针对EGFR中至少一个突变的所述选择性抑制剂在如本文所描述的至少一种分析(例如实施例中详细描述的生物化学或细胞分析)的检测上限内不能抑制WT EGFR。在一些实施方式中，术语“避开WT EGFR”意思指，所提供的化合物以至少10μM、至少9μM、至少8μM、至少7μM、至少6μM、至少5μM、至少3μM、至少2μM或至少1μM的IC50抑制WTEGFR。
在一些实施方式中，本申请的化合物抑制WT EGFR和/或突变型EGFR的磷酸化，其IC50值是0.1-1000nM，优选地是0.1-600nM、1-600nM、0.1-500nM、1-500nM、0.1-400nM、1-400nM、0.1-300nM、1-300nM、0.1-200nM、1-200nM、0.1-100nM、1-100nM、0.1-80nM、0.1-50nM、0.1-40nM、0.1-30nM、0.1-20nM、0.1-10nM或0.1-5nM，更优选地是0.1-20nM、0.1-10nM或0.1-5nM。
在一些实施方式中，本申请的化合物抑制WT Her2和/或突变型Her2的磷酸化，其IC50值是0.1-1000nM，优选地是0.1-600nM、1-600nM、0.1-500nM、1-500nM、0.1-400nM、1-400nM、0.1-300nM、1-300nM、0.1-200nM、1-200nM、0.1-100nM、1-100nM、0.1-80nM、0.1-50nM、0.1-40nM、0.1-30nM、0.1-20nM、0.1-10nM或0.1-5nM，更优选地是0.1-20nM、0.1-10nM或0.1-5nM。
在一些实施方式中，本申请的化合物抑制带有WT EGFR和/或突变型EGFR的细胞的增殖，其GI50值是1-1000nM，优选地是1-800nM、1-600nM、1-500nM、1-400nM、1-300nM、1-300nM、1-200nM、1-100nM、1-80nM、1-60nM、1-40nM、1-20nM或1-10nM，更优选地是1-300nM、1-200nM、1-100nM、1-80nM、1-60nM、1-40nM、1-20nM或1-10nM。
在一些实施方式中，本申请的化合物抑制带有WT Her2和/或突变型Her2的细胞增殖，其GI50值是1-1000nM，优选地是1-800nM、1-600nM、1-500nM、1-400nM、1-300nM、1-300nM、1-200nM、1-100nM、1-80nM、1-60nM、1-40nM、1-20nM或1-10nM，更优选地是1-300nM、1-200nM、1-100nM、1-80nM、1-60nM、1-40nM、1-20nM或1-10nM。
在一些实施方式中，本申请的化合物抑制带有BTK的细胞的增殖，其GI50值是1-1000nM，大于1000nM、大于2000nM或大于3000nM，优选地是1-800nM、1-600nM、1-500nM、1-400nM、1-300nM、1-300nM、1-200nM、1-100nM、1-80nM、1-60nM、1-40nM、1-20nM或1-10nM，更优选地是1-300nM、1-200nM、1-100nM、1-80nM、1-60nM、1-40nM、1-20nM或1-10nM。
在一些实施方式中，针对EGFR突变体的化合物的IC50和/或GI50比针对野生型EGFR的化合物的IC50和/或GI50高至少2倍、3倍、4倍、5倍，优选地10倍、20倍、30倍、50倍或100倍。
合成方法
本文提供的化合物，包括其盐、酯、水合物或溶剂化物或立体异构体的合成在实施例中的合成方案中说明。本文提供的化合物可以使用任何已知的有机合成技术制备并且可以根据多种可能的合成途径中的任一种合成，并因此，这些方案只是例示性的且无意限制可以用于制备本文提供的化合物的其它可能的方法。此外，方案中的步骤是为了更好地说明且在适当时可以改变。出于研究和可能提交给管理机构的目的，实施例中化合物的实施例是在中国合成。
用于制备本申请化合物的反应可以在适合溶剂中进行，这些溶剂可以由有机合成领域的技术人员容易地选择。适合溶剂可以在反应进行的温度下(例如在从溶剂的冷冻温度至溶剂的沸腾温度范围内的温度)基本上不与起始物质(反应物)、中间物或产物反应。指定反应可以在一种溶剂或多于一种溶剂的混合物中进行。取决于特定反应步骤，用于特定反应步骤的适合溶剂可以由本领域技术人员选择。
本申请化合物的制备可涉及各种化学基团的保护和脱保护。对于保护和脱保护的需求，以及适当保护基的选择可以由本领域技术人员容易地确定。保护基的化学性质可以见于例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts，《有机合成中的保护基》，第3版，Wiley&Sons，Inc.，纽约(1999)，其以全文引用的方式并入本文中。
反应可以根据本领域中已知的任何适合方法监测。例如，可以通过光谱手段，如核磁共振波谱(NMR，例如1H或13C)、红外光谱(IR)、分光光度法(例如紫外-可见光)、质谱(MS)，或通过色谱法，如高压液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱(LCMS)或薄层色谱(TLC)来监测产物形成。本领域的技术人员可以利用多种方法，包括高效液相色谱法(HPLC)(“制备型LC-MS纯化：改善的化合物特异性方法优化(Preparative LC-MS Purification：ImprovedCompound Specific Method Optimization)”，Karl F.Blom，Brian Glass，RichardSparks，Andrew P.Combs，《组合化学杂志(J.Combi.Chem.)》，2004，6(6)，874-883，以全文引用的方式并入本文中)和正相二氧化硅色谱法纯化化合物。
本文所使用的缩写定义如下：“1×”或“×1”表示一次，“2×”或“×2”表示两次，“3×”或“×3”表示三次，“4×”或“×4”表示四次，“5×”或“×5”表示五次，“℃”表示摄氏度，“eq”或“eq.”表示当量，“g”表示克，“mg”表示毫克，“L”表示升，“mL”或“ml”表示毫升，“μL”表示微升，“N”表示当量浓度，“M”表示摩尔浓度，“mmol”表示毫摩尔，“min”表示分钟，“h”或“hr”表示小时，“r.t.”或“rt”表示室温，“atm”表示大气压，“psi”表示磅/平方英寸，“conc.”表示浓缩，“sat”或“sat′d”表示饱和，“MS”或“Mass Spec”表示质谱，“ESI”表示电喷雾电离质谱，“LCMS”表示液相色谱质谱法，“HPLC”表示高压液相色谱，“RP”表示逆相，“TLC”或“tlc”表示薄层色谱法，“SM”表示起始物质，“NMR”表示核磁共振波谱，“1H”表示质子，“δ”表示德耳塔(delta)，“s”表示单峰，“d”表示二重峰，“t”表示三重峰，“q”表示四重峰，“m”表示多重峰，“br”表示宽峰，并且“Hz”表示赫兹。“α”、“β”、“R”、“S”、“E”以及“Z”是本领域技术人员熟悉的立体化学名称。
在本文提供的化合物的合成中使用的化学试剂的缩写列于下：
Figure BDA0002577093870000401
Figure BDA0002577093870000411
Figure BDA0002577093870000421
Figure BDA0002577093870000431
药物组合物
本申请提供了包含至少一种本申请的化合物的药物组合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含多于一种本申请的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含一种或多种本申请的化合物和药学上可接受的载剂。
药学上可接受的载剂是本领域中的常规药物载剂，其可以按药学领域中众所周知的方式制备。在一些实施方式中，本申请的化合物可以与药学上可接受的载剂混合以制备药物组合物。
如本文所使用，术语“药学上可接受的载剂”是指将本文提供的化合物从一个位置、体液、组织、器官(内部或外部)或身体的一部分载运或运输至另一位置、体液、组织、器官或身体的一部分所涉及的药学上可接受的材料、组合物或媒剂，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或囊封材料。药学上可接受的载剂可以是能够用于接触动物组织，而无过高毒性或不良作用的媒剂、稀释剂、赋形剂或其它材料。示例性药学上可接受的载剂包括糖、淀粉、纤维素、麦芽、黄芪胶、明胶、林格氏溶液(Ringer′s solution)、海藻酸、等渗生理盐水、缓冲剂等。可以用于本申请中的药学上可接受的载剂包括本领域中普遍知道的那些，如以引用的方式并入本文中的《雷明登氏药学全书》，Mack Pub.Co.，新泽西州(NewJersey)(1991)中公开那些。
可以充当药学上可接受的载剂的材料的一些实例包括：(1)糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素和其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)粉末状黄芪胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂、如可可脂和栓剂蜡；(9)油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原质水；(17)等渗生理盐水；(18)林格氏溶液；(19)醇，如乙醇和丙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；以及(21)药物配制物中采用的其它无毒可相容物质，如丙酮。
药物组合物可视需要含有药学上可接受的辅助物质以接近生理条件，如pH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂等，例如乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。
药物组合物的形式取决于多种标准，包括但不限于施用途径、疾病程度或欲施用的剂量。
所述药物组合物可以被配制成经口、鼻、直肠、经皮、静脉内或肌肉内施用。根据希望的施用途径，所述药物组合物可以被配制成片剂、胶囊、丸剂、糖衣药丸、散剂、颗粒剂、药囊、扁囊剂、口含锭、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气雾剂(呈固体形式或在液体介质中)、喷雾剂、油膏、糊浆、乳膏、洗剂、凝胶剂、贴片、吸入剂或栓剂形式。
药物组合物可以被配制用于在通过采用本领域中已知的程序施用给患者之后，提供活性成分的快速、持续或延迟释放。在一些实施方式中，药物组合物被配制成持续释放形式。如本文所使用，术语“持续释放形式”是指活性剂自药物组合物释放以使其变得在较长时间段(延长释放)内或在某一位置(控制释放)可供受试者，主要是受试者的胃肠道生物吸收。在一些实施方式中，所述较长时间段可以是约1小时至24小时、2小时至12小时、3小时至8小时、4小时至6小时、1至2天或更长时间。在某些实施方式中，所述较长时间段是至少约4小时、至少约8小时、至少约12小时或至少约24小时。所述药物组合物可以被配制成片剂形式。例如，活性剂的释放速率不仅可以通过活性剂溶解于胃肠液中且随后独立于pH而自片剂或丸剂扩散进行控制，而且还受片剂崩解和溶蚀的物理过程影响。在一些实施方式中，“控制释放的医学应用(Medical Applications of Controlled Release)”，Langer和Wise(编)，CRC Pres.，佛罗里达州波卡拉顿(Boca Raton，Florida)(1974)；“控制性药物生物利用率(Controlled Drug Bioavailability)”，《药品设计和性能(Drug Product Designand Performance)》，Smolen和Ball(编)，Wiley，纽约(1984)；Ranger和Peppas，1983，《高分子科学-高分子化学评述(J Macromol.Sci.Rev.Macromol Chem.)》23：61中所公开的聚合材料可以用于持续释放；还参见Levy等人，1985，《科学(Science)》228：190；During 等人，1989，《神经学年评(Ann.Neurol.)》25：351；Howard等人，1989，《神经外科杂志(J.Neurosurg.)》71：105。以上参考文献都以全文引用的方式并入本文中。
在某些实施方式中，药物组合物包含约0.0001mg至约5000mg本申请的化合物(例如约0.0001mg至约10mg、约0.001mg至约10mg、约0.01mg至约10mg、约0.1mg至约10mg、约1mg至约10mg、约5mg至约10mg、约5mg至约20mg、约5mg至约30mg、约5mg至约40mg、约5mg至约50mg、约10mg至约100mg、约20mg至约100mg、约30mg至约100mg、约40mg至约100mg、约50mg至约100mg、约50mg至约200mg、约50mg至约300mg、约50mg至约400mg、约50mg至约500mg、约100mg至约200mg、约100mg至约300mg、约100mg至约400mg、约100mg至约500mg、约200mg至约500mg、约300mg至约500mg、约400mg至约500mg、约500mg至约1000mg、约600mg至约1000mg、约700mg至约1000mg、约800mg至约1000mg、约900mg至约1000mg、约1000mg至约2000mg、约2000mg至约3000mg、约3000mg至约4000mg或约4000mg至约5000mg)。每天每位受试者的适合剂量可以是约5mg至约500mg，优选地是约5mg至约50mg、约50mg至约100mg或约50mg至约500mg。
在某些实施方式中，所述药物组合物可以被配制成单位剂型，每次剂量含有约0.0001mg至约10mg、约0.001mg至约10mg、约0.01mg至约10mg、约0.1mg至约10mg、约1mg至约10mg、约5mg至约10mg、约5mg至约20mg、约5mg至约30mg、约5mg至约40mg、约5mg至约50mg、约10mg至约100mg、约20mg至约100mg、约30mg至约100mg、约40mg至约100mg、约50mg至约100mg、约50mg至约200mg、约50mg至约300mg、约50mg至约400mg、约50mg至约500mg、约100mg至约200mg、约100mg至约300mg、约100mg至约400mg、约100mg至约500mg、约200mg至约500mg、约300mg至约500mg、约400mg至约500mg、约500mg至约1000mg、约600mg至约1000mg、约700mg至约1000mg、约800mg至约1000mg、约900mg至约1000mg、约1000mg至约2000mg、约2000mg至约3000mg、约3000mg至约4000mg或约4000mg至约5000mg本申请的化合物。术语“单位剂型”是指适合以单一剂量用于人类受试者和其他哺乳动物的物理离散单位，每个单位含有经计算以产生所希望的治疗作用的预定量的活性材料与适合药物载剂的组合。在一些实施方式中，药物组合物包含一种或多种本申请的化合物作为第一活性成分，并且还包含第二活性成分。第二活性成分可以是本领域中已知的任何抗癌剂，例如细胞信号转导抑制剂、细胞信号转导抑制剂、烷化剂、拓扑异构酶抑制剂、免疫治疗剂、有丝分裂抑制剂、抗激素剂、化学治疗药物、EGFR抑制剂、BTK抑制剂、CTLA-4抑制剂、MEK抑制剂、PD-L1抑制剂、OX40激动剂等。用于治疗癌症或肿瘤的抗癌剂的代表性实例可包括但不限于索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、达沙替尼(dasatinib)、伏立诺他(vorinostat)、坦罗莫司(temsirolimus)、依维莫司(everolimus)、帕唑帕尼(pazopanib)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、阿多-曲妥珠单抗美坦新(ado-trastuzumab emtansine)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、西妥昔单抗(cetuximab)、兰比珠单抗(ranibizumab)、哌加他尼(pegaptanib)、帕尼单抗(panitumumab)、曲美单抗(tremelimumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、伊派利单抗(ipilimumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、度伐单抗(durvalumab)、克卓替尼(crizotinib)、卢佐替尼(ruxolitinib)、紫杉醇(paclitaxel)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、吉西他滨(gemcitabine)、他莫昔芬(tamoxifen)、雷诺昔芬(raloxifene)、环磷酰胺、苯丁酸氮芥(chromabucil)、卡莫司汀(carmustine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、放线菌素(actinomycin)、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、蒽环霉素(anthracycline)、博莱霉素(bleomycin)、丝裂霉素C、(mitomycin-C)、伊立替康(irinotecan)、拓朴替康(拓朴替康)、替尼泊苷白细胞介素(teniposide interleukin)、干扰素等。在一些实施方式中，第二活性剂是以下一种或多种：贝伐单抗、帕博利珠单抗、纳武单抗、伊派利单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、度伐单抗、克卓替尼。
治疗方法
本申请提供一种治疗与ErbB(包括例如EGFR或Her2)、尤其是ErbB突变有关的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种本申请的化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体或药物组合物。
本申请还提供了一种治疗与BTK有关的疾病的方法。在某些实施方式中，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种本申请的化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体或药物组合物。
如本文所使用，术语“与ErbB有关的疾病”或“ErbB相关性疾病”是指发作或发展或二者都与ErbB的表达或活性有关的疾病。实例包括但不限于免疫相关疾病、增生性病症、癌症和其它疾病。
如本文所使用，术语“与EGFR有关的疾病”或“EGFR相关性疾病”或“与Her2有关的疾病”或“Her2相关性疾病”是指视具体情况，发作或发展或二者都与EGFR或Her2的基因组变化、表达或活性有关的疾病。实例包括但不限于免疫相关疾病、增生性病症、癌症和其它疾病。
如本文所使用，术语“与BTK有关的疾病”或“BTK相关性疾病”是指视具体情况，发作或发展或二者都与BTK的基因组变化、表达或活性有关的疾病。在某些实施方式中，BTK相关性疾病包括肿瘤疾病和自身免疫疾病。肿瘤疾病包括但不限于淋巴瘤和白血病。自身免疫疾病包括但不限于类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮和干燥综合症(Sjogren′ssyndrome)。
如本文所使用，术语“治疗(treatment/treat/treating)”是指逆转、缓解如本文所描述的疾病或病症或其一种或多种症状，延迟其发作或抑制其进展。在一些实施方式中，治疗可以在出现了一种或多种症状后施用。在其它实施方式中，治疗可以在无症状存在下施用。例如，治疗可以在症状发作之前施用给易感个体(例如根据症状史和/或根据遗传学或其它易感因素)。也可以在症状消退之后继续治疗，例如以预防或延迟其复发。
在一些实施方式中，本文提供的一种或多种化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体或药物组合物是通过肠胃外途径或非肠胃外途径施用。在一些实施方式中，所述一种或多种化合物、其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或立体异构体或药物组合物是经口、经肠、经颊、经鼻、鼻内、经粘膜、经表皮、透皮、经皮、经眼、肺、舌下、经直肠、经阴道、经表面、皮下、静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊椎内或胸骨内施用。
本文提供的化合物可以呈纯的形式、与其它活性成分组合或呈本申请的药物组合物形式施用。在一些实施方式中，本文提供的化合物可以与本领域中已知的一种或多种抗癌剂组合同时或依序施用给有需要的受试者。在一些实施方式中，施用是一天一次、一天两次、一天三次或每两天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、一周一次进行。
在一些实施方式中，本文提供的一种或多种化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体或药物组合物是经口施用的。对于经口施用，实现所希望的目标的任何剂量都是适当的。在一些实施方式中，适合日剂量是在约0.001-5000mg之间，优选地在0.1mg与5g之间，更优选地在5mg与1g之间，更优选地在10mg与500mg之间，并且施用是一天一次、一天两次、一天三次、每天或一周3-5天进行。在一些实施方式中，本文提供的一种或多种化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体或药物组合物的剂量在每天约0.0001mg、优选地0.001mg、0.01mg、0.1mg、1mg、10mg、50mg、100mg、200mg、250mg、500mg、750mg、1000mg、2000mg、3000mg、4000mg或到约5000mg之间的范围内。
化合物的用途
在某些实施方式中，本申请提供了本申请的化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体或药物组合物在制造用于治疗与ErbB(例如EGFR、Her2、Her3或Her4)有关的疾病的药物中的用途。在某些实施方式中，本申请提供了本申请的化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体或药物组合物在制造用于治疗与突变型ErbB有关的疾病的药物中的用途。在一些实施方式中，突变型ErbB是突变型EGFR。在一些实施方式中，突变型ErbB是突变型Her2。在某些实施方式中，所述与ErbB有关的疾病是与突变型ErbB有关的疾病，包括癌症。
在某些实施方式中，本申请提供了本申请的化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体或药物组合物在制造用于治疗与BTK有关的疾病的药物中的用途。在某些实施方式中，本申请提供了本申请的化合物、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物或立体异构体或药物组合物在制造用于治疗与BTK有关的疾病的药物中的用途。在某些实施方式中，所述与BTK有关的疾病包括癌症。
确切地说，所述癌症包括但不限于白血病、神经胶母细胞瘤、黑素瘤、软骨肉瘤、胆管癌、骨肉瘤、淋巴瘤、肺癌、腺瘤、骨髓瘤、肝细胞癌、肾上腺皮质癌、胰腺癌、乳癌、膀胱癌、前列腺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、结肠直肠癌、卵巢癌、子宫颈癌、脑癌、食道癌、骨癌、睾丸癌、皮肤癌、肾癌、间皮瘤、神经母细胞瘤、甲状腺癌、头颈癌、食道癌、眼癌、前列腺癌、鼻咽癌或口腔癌。在一些实施方式中，所述癌症是肺癌、乳癌、卵巢癌、膀胱癌或神经胶母细胞瘤。在一些实施方式中，所述癌症是肺癌(例如非小细胞肺癌、小细胞肺癌、腺癌、鳞状细胞肺癌和大细胞肺癌)。在一些实施方式中，所述癌症是转移性肺癌。在一些实施方式中，所述癌症是具有一种或多种ErbB突变(例如EGFR或Her2的点突变、缺失突变、插入突变、活化突变或耐药性突变)的癌症。
本申请中的化合物和其药物组合物可以用于预防或治疗哺乳动物，尤其是人的任一种与ErbB/BTK(表达或活性)有关的疾病或病况的发作或发展。在一些实施方式中，本申请中的化合物和其药物组合物可以用于预防或治疗哺乳动物，尤其是人的任一种与突变型ErbB有关的疾病或病况的发作或发展。
在此类情形中，本申请还提供一种筛选患者的方法，所筛选的患者适于用单独本申请的化合物或药物组合物或其与其它成分(例如第二活性成分，例如抗癌剂)的组合治疗。所述方法包括对来自患者的肿瘤样品进行测序并检测所述患者体内ErbB(例如EGFR或Her2)或BTK的积累或检测所述患者体内ErbB(例如EGFR或Her2)或BTK的突变状态。
实施例
以下进一步阐明本申请的通用方法。本申请的化合物可以通过本领域中已知的方法制备。以下说明本申请的优选化合物的具体制备方法。不过，这些具体的制备方法决不限定本申请化合物的制备方法。
合成实施例
以下实施例中化合物的结构通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)表征。NMR位移(δ)是以10-6(ppm)为单位给出。1H-NMR谱图是在BrukerAVANCE NMR(400MHz)谱仪上使用ICON-NMR(在TopSpin程序控制下)，或在Varian 400MR NMR或Varian VNMR400 NMR(400MHz)谱仪(在VnmrJ程序控制下)，利用四甲基硅烷作为内标以二甲亚砜-d6(DMSO-d6)或CDCl3或CD3OD或D2O(来自Aldrich或Cambridge Isotope Lab.，Inc.)记录。
MS测量是使用Shimadzu 2010质谱仪或Agilent 6110A MSD或1969ATOF质谱仪，使用电喷雾、化学和电子碰撞电离方法，由一系列仪器进行。
高效液相色谱(HPLC)测量是在Shimadzu LC-20A系统或Shimadzu LC-2010HT系列，或Agilent 1200LC或Agilent 1100系列上，使用Ultimate XB-C18色谱柱(3.0*50mm，3μm或3.0*150mm，3μm)，或Xbridge shieldRP18色谱柱(5μm，50mm*2.1mm)或Xtimate C18色谱柱(3μm，2.1*30mm)，或MERCK RP18 2.5-2mm，或Agilent Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(4.6mm*150mm，5μm)等进行。
使用Yantai Huanghai HSGF254硅胶或Anhui Liang Chen Gui Yuan板进行薄层色谱法。用于薄层色谱法(TLC)的硅胶板是0.15mm-0.2mm。通过TLC分离和纯化产物所使用的硅胶板是0.4mm-0.5mm。
纯化色谱柱使用硅胶作为载体(100-200、200-300或300-400目，由YantaiHuanghai co.或Anhui Liang Chen Gui Yuan co.等制造)，或在Teledyne ISCO combi-flash或Biotage快速色谱系统中的快速柱(二氧化硅-CS快速柱，40-60μm，或逆相C18色谱柱20-35μm，由Agela Technologies等制造)或由Agela Technologies制造的快速柱二氧化硅-CS(40-60μm)或C18色谱柱(20-40μm)中进行纯化色谱法。根据化合物的量进行调整色谱柱的大小。
本申请的已知起始物质可以通过使用或根据本领域中已知的方法合成，或可以购自Alfa Aesar、Langcaster、TCI、Aldrich、Bepharm和Scochem(或PharmaBlock、Bide、Amatek、Stru Chem、Firster Pharmaceutical、Titan(Adamas)等)。
除非另外说明，否则实施例中的反应都是在氩气或氮气气氛下进行。氩气或氮气气氛是指，反应烧瓶被连接至体积约1L的氩气或氮气球。氢化通常是在压力下进行。除非另外说明，否则实施例中的反应温度是环境温度，即20℃-30℃。
实施例中的反应进程通过TLC监测。用于反应的洗脱剂系统包括二氯甲烷-甲醇系统和石油醚-乙酸乙酯系统。溶剂的体积比是根据化合物的不同极性进行调整。
用于化合物纯化的柱色谱法的洗脱系统以及TLC的洗脱剂系统包括二氯甲烷-甲醇系统和石油醚-乙酸乙酯系统。溶剂的体积比根据化合物的不同极性进行调整。可以添加少量碱性或酸性试剂(0.1％-1％)，如甲酸、或乙酸、或TFA、或氨水进行调整。
实施例1
(R)-N-(2-(3-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-5-(4-(2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000511
用于制备化合物1b的程序：
在冰-水浴下，在0-5℃下向化合物1a(25g，1.0eq，133.59mmol)于THF(250mL)中的溶液中添加CH3MgBr(222.65mL，5.0eq，667.95mmol)。在26-36℃下搅拌所得黑色混合物2小时，直至TLC(石油醚/EtOAc＝5/1(v/v))显示起始物质(Rf＝0.70)被消耗。用饱和NH4Cl水溶液(500mL)稀释反应混合物并用EtOAc(2×300mL)萃取。减压浓缩合并的有机层并在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1(v/v))纯化，得到呈黄色油状的化合物1b(22g，88％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.678min，MS(ESI)m/z＝169.9[M+H-18]+。
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)δ6.97(dd，J＝8.9，12.7Hz，1H)，6.52(dd，J＝7.3，12.8Hz，1H)，1.57(s，6H)。
用于制备化合物1c的程序：
向化合物1b(1g，5.3mmol)和DIEA(1g，7.9mmol)于CH2Cl2(10mL)中的溶液中添加2，4-二氯-1，3，5-三嗪(0.96g，6.4mmol)。在26-34℃下搅拌混合物12小时。反应物直接在硅胶上通过柱色谱法(20％EtOAc/石油醚(v/v))纯化，得到呈白色固体状的标题产物1c(900mg，56％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.803min，MS(ESI)m/z＝300.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.84(s，1H)，8.68(s，1H)，8.10(s，1H)，7.46(dd，J＝8.8，12.4Hz，1H)，6.35(br s，1H)，1.51(s，6H)。
用于制备化合物1d的程序：
向化合物1c(300mg，1.0mmol)和4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(185mg，1.0mmol)于n-BuOH(10mL)中的溶液中添加TFA(0.1mL)。在26-33℃下搅拌所得混合物2小时。通过过滤收集沉淀的固体，接着在高真空下干燥，得到呈黄色固体状的标题产物1d(400mg，纯度99％，88％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.828min，MS(ESI)m/z＝451.1[M+H]+。
用于制备化合物1e的程序：
在100℃下，将化合物1d(1.144g，2.76mmol)、(R)-N，N-二甲基哌啶-3-胺盐酸盐(500mg，3.04mmol)和K2CO3(764mg，5.52mmol)于DMSO(30mL)中的溶液搅拌12小时。将反应混合物添加至冷水(200mL)中。沉淀析出黄色固体，接着残余物在硅胶上通过柱色谱法(梯度洗脱剂：CH2Cl2/MeOH从100/0至90/10)纯化，得到呈黄色固体状的标题产物1e(298mg，84.0％纯度，20％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.717min，MS(ESI)m/z＝523.5[M+H]+。
用于制备化合物1f的程序：
在1atm的H2下，在25℃下将化合物1e(298mg，0.57mmol)和Pd/C(30mg，0.1eq)于MeOH(10mL)中的溶液搅拌1小时。通过硅藻土过滤反应物质并用甲醇(5mL×3)洗涤。合并滤液并真空蒸发，得到呈褐色油状的标题产物(206mg，73％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.630min，MS(ESI)m/z＝493.3[M+H]+。
用于制备实施例1的程序：
在0℃下，向1f(194mg，0.39mmol)和DIEA(78mg，1.5eq，0.59mmol)于DMF(5mL)中的溶液逐滴添加丙烯酰氯(39mg，0.43mmol)。在25℃下搅拌混合物2小时。反应物通过制备型HPLC纯化(色谱柱：Phenomenex Gemini C18 150*25mm*5μm；条件：30-40％B(A：0.05％氨水溶液；B：CH3CN)；流动速率：25mL/min)。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例1(47.2mg，20％产率)。
LCMS：在0-60AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝2.100min，MS(ESI)m/z＝547.1[M+H]+。
HPLC：在0-60_AB_1.2ml.met.chromatography(Ultimate C18 3.0um 3.0*50mm)中，Rt＝3.88min；SFC：Rt＝3.763min，纯度96.5％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.67(br s，1H)，9.91(br s，1H)，8.85(s，1H)，8.41(s，1H)，8.30(d，J＝8.0Hz，1H)，7.61(br s，1H)，7.35-7.30(m，2H)，7.04(t，J＝7.5Hz，1H)，6.72(s，1H)，6.50-6.27(m，2H)，5.82(br d，J＝11.0Hz，1H)，5.60(s，1H)，4.06-3.95(m，1H)，3.07(br s，1H)，2.89(br s，1H)，2.67(br s，2H)，2.45-2.38(m，1H)，2.34(s，6H)，1.98(br s，2H)，1.80(s，6H)，1.72-1.68(m，2H)，1.68-1.64(m，2H)。
实施例2
N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-(4-(2-(1-羟基环丙基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000531
用于制备化合物2b的程序：
在-60℃下，向化合物2a(50g，253.5mmol)于THF(500mL)中的混合物中经30分钟逐滴添加n-BuLi(140mL，2.5M，354.8mmol)，在-60℃下搅拌混合物1小时。接着，添加2-氟苯甲酸(32g，228.1mmol)并在室温下搅拌所得混合物20小时。在0℃下，利用NH4Cl水溶液(1000mL)淬灭反应。用EtOAc(300mL×3)萃取所得混合物。合并的有机层经Mg2SO4脱水并真空浓缩。残余物在硅胶上通过柱色谱法(石油醚∶EtOAc＝3∶1)纯化，得到呈无色油状的化合物2b(25g，31％产率)。
LCMS：Rt＝0.753min(MERCK RP18 2.5-2mm)，MS(ESI)m/z＝318.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.17(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.64-7.56(m，1H)，7.49(d，J＝7.6Hz，1H)，7.40-7.35(m，2H)，7.31-7.25(m，5H)，7.24-7.16(m，4H)，4.18(s，4H)。
用于制备化合物2c的程序：
向化合物2b(25g，70.89mmol)和K2CO3(29.4g，212.67mmol)于DMF(500mL)中的混合物中添加MeI(20.1g，141.78mmol)。接着，在25℃下搅拌反应混合物1小时。将反应混合物倒入水(1200mL)中，并用EtOAc(400mL×3)萃取。用盐水(300mL×3)洗涤合并的有机层，经硫酸钠脱水，过滤，并浓缩滤液，得到呈黄色油状的化合物2c(27g，粗品)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.822min，MS(ESI)m/z＝332.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.72(dd，J＝1.6Hz，8.0Hz，1H)，7.34-7.23(m，11H)，7.00-6.95(m，2H)，4.27(s，4H)，3.91(s，3H)。
用于制备化合物2d的程序：
在氮气球下，在80℃下向化合物2c(27g，81.47mmol)于THF(250mL)中的混合物中逐滴添加Ti(OiPr)4(6.9mg，24.44mmol)。接着，添加EtMgBr(109mL，325.88mmol)，并在80℃下搅拌反应混合物1小时。将反应混合物倒入饱和NH4Cl溶液(200mL)中，并用EtOAc(80mL×3)萃取。用盐水(60mL)洗涤合并的有机层，经硫酸钠脱水，过滤，并浓缩滤液，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(10％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈黄色油状的化合物2d(17g，63％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.760min，MS(ESI)m/z＝330.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.87(brs，1H)，7.25-7.15(m，6H)，7.14-7.08(m，5H)，7.05-6.97(m，2H)，6.92(dd，J＝1.2Hz，8.0Hz，1H)，4.11(s，4H)，1.09-1.03(m，2H)，0.93-0.87(m，2H)。
用于制备化合物2e的程序：
在氢气球下，向化合物2d(0.5g，1.52mmol)于MeOH(8mL)中的混合物中添加Pd/C(潮湿)(100mg)和AcOH(0.1mL)。在20-25℃下搅拌反应混合物40小时。过滤反应混合物，并浓缩滤液并在硅胶上通过柱色谱法(石油醚∶EtOAc＝3∶1)纯化，得到呈无色油状的化合物2e(200mg，29％产率)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.19-7.12(m，2H)，6.75-6.70(m，2H)，4.30(brs，2H)，1.19-1.15(m，2H)，0.10-0.95(m，2H)。
用于制备化合物2f的程序：
向化合物2e(200mg，1.34mmol)和DIEA(346mg，2.68mmol)于CH2Cl2(8mL)中的混合物中添加2，4-二氯-1，3，5-三嗪(241mg，1.61mmol)。接着，在25℃下搅拌反应混合物12小时。浓缩反应混合物，并在硅胶上通过柱色谱法(30％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈黄色油状的1-(2-((4-氯-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)环丙醇2f(220mg，62％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.718min，MS(ESI)m/z＝262.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.79(brs，1H)，8.55(s，1H)，8.19(s，1H)，7.41-7.33(m，1H)，7.33-7.30(m，1H)，7.18-7.13(m，1H)，1.28-1.24(m，2H)，1.03-0.99(m，2H)。
用于制备化合物2g的程序：
Figure BDA0002577093870000551
向4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(20g，0.11mol)和K2CO3(29g，0.22mol)于DMF(200mL)中的溶液中添加N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(13g，0.13mol)。在25℃下搅拌混合物48小时。用1L水处理反应物并用EtOAc(300mL×3)萃取。用盐水(500mL×3)洗涤合并的有机层。有机层经硫酸钠脱水，过滤并真空浓缩滤液，得到呈红色油状的化合物2g(30g，100％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.125min，MS(ESI)m/z＝269.0[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ7.28(s，1H)，6.62(s，1H)，3.92(s，3H)，3.17(t，J＝7.2Hz，2H)，2.50(t，J＝7.2Hz，2H)，2.25(s，6H)。
用于制备化合物2h的程序：
向化合物2f(140mg，0.53mmol)和化合物2g(56mg，0.58mmol)于n-BuOH(5mL)中的混合物中添加TFA(0.5ml)。接着，在22-28℃下搅拌反应混合物12小时。浓缩反应混合物并在硅胶上通过柱色谱法(5％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到呈褐色油状的化合物2h(160mg，61％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.682min，MS(ESI)m/z＝495.3[M+H]+。
用于制备化合物2i的程序：
向化合物2h(110mg，0.22mmol)和NH4Cl(59mg，1.10mmol)于MeOH(5mL)和水(0.5mL)中的混合物中添加Zn(72mg，1.10mmol)。接着，在90℃下搅拌反应混合物1小时。过滤反应混合物，并浓缩滤液，得到呈褐色油状的化合物2i(140mg，粗品)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.636min，MS(ESI)m/z＝465.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.24(brs，1H)，7.83(brs，1H)，7.60(brs，1H)，7.71-7.40(m，2H)，7.20-6.93(m，1H)，6.61(s，1H)，3.80(s，3H)，3.20-2.85(m，2H)。2.70-2.25(m，11H)，1.16-1.08(m，2H)，0.91-0.82(m，2H)。
用于制备实施例2的程序：
在0℃下，向化合物2i(140mg，0.21mmol)和DIEA(54mg，0.42mmol)于DMF(2mL)中的混合物中添加丙烯酰氯(21mg，0.23mmol)。在24-27℃下搅拌反应混合物0.5小时。反应混合物通过制备型HPLC纯化：[色谱柱：Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10μm；条件：35-65％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：30ml/min]。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例2(32.0mg，6％产率)。
LCMS：在10-80CD_3min_220&254色谱(B：XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝1.999min，MS(ESI)m/z＝519.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.34(brs，1H)，10.05(brs，1H)，8.78(brs，1H)，8.37-8.31(m，2H)，7.60(brs，1H)，7.30-7.24(m，2H)，6.95(t，J＝7.6Hz，1H)，6.71(s，1H)，6.23-6.21(m，2H)，5.64(t，J＝6.0Hz，1H)，3.81(s，3H)，2.81-2.78(m，2H)，2.63(s，3H)，2.23-2.18(m，9H)，1.31-1.22(m，2H)，0.97-0.94(m，2H)。
HPLC：在10-80CD_1.2ml色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝3.56min。
实施例3
N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-(4-(6-氟-4-(2-羟基丙-2-基)吡啶-3-基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000571
用于制备化合物3b的程序：
向化合物3a(700mg，4.48mmol)于EtOAc(20mL)和MeOH(20mL)中的溶液中添加TMSCH2N2(4.48mL，8.97mmol，2M的己烷溶液)。在27-34℃(室温)下搅拌混合物1.5小时。减压浓缩反应混合物并在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝5/1)纯化，得到呈白色固体状的化合物3b(650mg，85％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.576min，MS(ESI)m/z＝170.8[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.78(s，1H)，7.30(d，J＝2.6Hz，1H)，5.47(br s，2H)，3.94(s，3H)。
用于制备化合物3c的程序：
在0-5℃下，向化合物3b(650mg，3.82mmol)于THF(40mL)中的溶液中添加CH3MgBr(5.1mL，3M的乙醚溶液)。在26-33℃下搅拌混合物1.5小时。通过添加NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应混合物，接着用EtOAc(3×40mL)萃取。用盐水洗涤有机层，并减压浓缩并在硅胶上通过柱色谱法纯化(石油醚/EtOAc＝3/1)，得到呈浅黄色固体状的化合物3c(600mg，92％产率)。
LCMS：在10-80_7min_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝1.572min，MS(ESI)m/z＝283.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.47(d，J＝1.4Hz，1H)，6.58(d，J＝1.6Hz，1H)，1.62-1.58(m，6H)。
用于制备化合物3d的程序：
向化合物3c(600mg，3.52mmol)和DIEA(683mg，5.95mmol)于CH2Cl2(40mL)中的溶液中添加2，4-二氯-1，3，5-三嗪(581mg，3.87mmol)。在26-33℃(室温)下搅拌所得混合物2小时。减压浓缩反应物并在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1/1)纯化，得到呈白色固体状的化合物3d(650mg，65％产率)。
LCMS：在10-80CD_3MIN_220&254.1cm色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝1.299min，MS(ESI)m/z＝283.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.85-9.51(m，1H)，8.97(br s，1H)，8.54(br s，1H)，6.85(d，J＝1.6Hz，1H)，2.97-2.37(m，1H)，1.70(s，6H)。
用于制备化合物3e的程序：
向化合物3d(600mg，2.11mmol)和化合物2g(624mg，2.32mmol)于n-BuOH(10mL)中的溶液中添加TFA(0.1mL)。在26-32℃下搅拌所得混合物18小时。通过添加NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应混合物，接着用EtOAc(3×40mL)萃取。用盐水(40mL)洗涤有机层，干燥并减压浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(CH2Cl2/MeOH＝10/1)纯化，得到呈红色固体状的化合物3e(80mg，7.3％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝0.662min，MS(ESI)m/z＝516.2[M+H]+。
用于制备化合物3f的程序：
向化合物3e(80mg，0.16mmol)于THF(1mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加Zn(30mg，0.47mmol)和NH4Cl(25mg，0.47mmol)。在N2下，在50℃下搅拌混合物1.5小时。通过添加NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应混合物，接着用EtOAc(3×40mL)萃取。用盐水洗涤有机层，干燥并减压浓缩，得到呈褐色固体状的化合物3f(35mg)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝0.596min，MS(ESI)m/z＝486.2[M+H]+。
用于制备实施例3的程序：
向化合物3f(35mg，0.07mmol)和DIEA(14mg，0.11mmol)于DMF(1mL)中的溶液中添加溶于DMF(1mL)中的丙烯酰氯(6.5mg，0.07mmol)。在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应物通过制备型HPLC[色谱柱：Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10μm；条件：43-53％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：30ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例3(4.2mg，10.8％产率)。
LCMS：在10-80CD_7MIN_220&254.1cm色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝3.921min，MS(ESI)m/z＝540.3[M+H]+。
HPLC：在10-80_cd_1.2ML.MET.chromatography(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝3.26min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.40(br s，1H)，10.11(br s，1H)，9.88(br s，1H)，9.01(s，1H)，8.34(s，1H)，7.62(br s，1H)，6.78(s，1H)，6.71(s，1H)，6.30(br s，3H)，5.75-5.63(m，1H)，3.81(s，3H)，2.81(br s，2H)，2.63(s，3H)，2.21(br s，8H)，1.71(s，6H)。
实施例4
N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000601
用于制备化合物4a的程序：
在N2下，在27-34℃下将化合物1d(400mg，0.89mmol)、N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(91mg，0.89mmol)和K2CO3(184mg，1.45mmol)于DMF(5mL)中的溶液搅拌2小时。将混合物逐滴添加至水(50mL)中，并在室温下搅拌所得混合物15分钟。通过过滤收集沉淀的固体，接着在高真空下干燥，得到呈橙色固体状的标题产物4a(270mg，57％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.707min，MS(ESI)m/z＝533.1[M+H]+。
用于制备化合物4b的程序：
化合物4a(270mg，0.50mmol)和Pd/C(20mg)于MeOH(10mL)中的溶液用氢气吹扫并脱气3次，接着在H2(15psi)下，在27-34℃下搅拌2小时。通过硅藻土过滤反应物质并用甲醇(3×5mL)洗涤。合并滤液并真空蒸发，得到呈黑色油状的标题产物4b(200mg，93％产率)。
LCMS：在10-80AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝1.224min，MS(ESI)m/z＝503.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.02(s，1H)，8.17-8.12(m，2H)，7.66(s，1H)，6.98(dd，J＝11.2，8.8Hz，2H)，6.58(s，1H)，3.73(s，3H)，2.87-2.84(m，2H)，2.55(s，3H)，2.32(t，J＝6.8Hz，2H)，2.15(s，6H)，1.55(s，6H)。
用于制备实施例4的程序：
在0℃下，向化合物4b(100mg，0.20mmol)和DIEA(38mg，0.30mmol)于DMF(3mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(18mg，0.20mmol)。在26-33℃下搅拌混合物2小时。反应物通过制备型HPLC(色谱柱：Phenomenex Gemini C18 150*25mm*5μm；45-75％B(A：0.05％氨水溶液；B：CH3CN)；流动速率：30mL/min)纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例4(14.5mg，纯度95.7％，13％产率)。
LCMS：在10-80CD_3min_220&254.1cm，色谱(Xtimate C18，2.1*30mm 3μm)中，Rt＝2.053min，MS(ESI)m/z＝557.3[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ml.met.chromatography(Ultimate C18 3.0um 3.0*50mm)中，Rt＝4.88min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.69(s，1H)，10.45(s，1H)，9.99(s，1H)，8.43(s，1H)，8.34(dd，J＝8.0，12.8Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.13(dd，J＝8.4，12.0Hz，1H)，6.80(s，1H)，6.39(s，2H)，5.78(d，J＝11.2Hz，1H)，3.90(s，3H)，2.90(s，2H)，2.72(s，3H)，2.29(s，8H)，1.79(s，6H)。
实施例5
(E)-N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺
Figure BDA0002577093870000611
用于制备实施例5的程序：
在28-35℃下，将化合物4b(80mg，0.16mmol)、化合物5a(31mg，0.19mmol)、HATU(91mg，0.24mmol)和DIEA(62mg，0.48mmol)于CH2Cl2(4mL)中的混合物搅拌2小时。反应物通过制备型HPLC(色谱柱：Phenomenex Gemini C18 150*25mm*5μm；55-85％B(A：0.05％氨水溶液；B：CH3CN)；流动速率：30mL/min)纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例5(17.8mg，18％产率)。
LCMS：在0-60AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝1.755min，MS(ESI)m/z＝614.3[M+H]+。
HPLC：在0-60CD_1.2ml.met.色谱(Ultimate C18 3.0um 3.0*50mm)中，Rt＝2.15min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.69(s，1H)，10.29(s，1H)，9.98(s，1H)，8.42(s，1H)，8.33(dd，J＝13.2，8.0Hz，1H)，7.69(s，1H)，7.12(dd，J＝12.0，8.8Hz，1H)，6.92(td，J＝15.2，6.0Hz，1H)，6.79(s，1H)，6.25(s，1H)，3.89(s，3H)，3.73(s，1H)，3.18(d，J＝5.6Hz，2H)，2.89(t，J＝5.2Hz，2H)，2.71(s，3H)，2.33(s，8H)，2.30(s，6H)，1.79(s，6H)。
实施例6
N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-(4-(4-(2-羟基丙-2-基)-6-甲基吡啶-3-基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000621
用于制备化合物6b的程序：
向化合物6a(4.0g，23.2mmol)于EtOAc/MeOH＝1∶1(60mL)中的溶液中添加TMSCH2N2(23.2mL，46.4mmol，2M的己烷溶液)。在24-30℃下搅拌所得混合物30分钟。将反应混合物倒入H2O(30mL)中，并用EtOAc(50mL×3)萃取。用水(20mL×3)和盐水(20mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈黄色固体状的标题化合物6b(3.1g，67.7％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.672min，MS(ESI)m/z＝186.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.79(br s，2H)，3.84(s，3H)。
用于制备化合物6c的程序：
在0℃下，向化合物6b(3.1g，16.6mmol)于THF(40mL)中的溶液中逐滴添加CH3MgBr(22.2mL，66.5mmol，3M的乙醚溶液)。在N2下，在26-34℃下搅拌所得混合物1.5小时。将反应混合物倒入饱和NH4Cl(100mL)中，接着用EtOAc(100mL×3)萃取。用水(30mL×3)和盐水(30mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈黄色固体状的标题化合物6c(2.79g，85.6％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-Q MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.471min，MS(ESI)m/z＝187.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.71(s，1H)，6.98(s，1H)，5.63(s，2H)，5.52(s，1H)，1.46(s，6H)。
用于制备化合物6d的程序：
向化合物6c(1.0g，5.36mmol)、甲基硼酸(1.28g，21.44mmol)和K2CO3(1.48g，10.72mmol)于H2O/二噁烷＝1∶5(20mL)中的溶液中添加Pd(PPh3)4(929mg，0.15eq，0.80mmol)。在N2下，在100℃下加热反应混合物24小时。过滤反应混合物，并真空浓缩滤液，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(4％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到呈黄色固体状的化合物6d(235mg，26.1％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.142min，MS(ESI)m/z＝167.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.79(s，1H)，6.81(s，1H)，5.34(s，1H)，5.25(br s，2H)，2.26(s，3H)，1.46(s，6H)。
用于制备化合物6e的程序：
Figure BDA0002577093870000631
在10℃下，向化合物6e1(100g，537.2mmol)和DIEA(138.9g，1074.4mmol)于CH2Cl2(1500mL)中的搅拌溶液添加化合物6e2(96.7g，644.6mmol)，接着在25℃下搅拌1小时。直接真空浓缩反应混合物，得到粗产物，用CH2Cl2(800mL)湿磨30分钟，过滤并用CH2Cl2(100mL×2)洗涤固体饼。真空干燥滤饼，得到呈黄色固体状的标题化合物6e(118g，73％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.760min，MS(ESI)m/z＝299.9[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，DMSO-d6)δ10.27(s，1H)，8.60(s，1H)，8.37(d，J＝8.0Hz，1H)，7.41(d，J＝13.6Hz，1H)，3.95(s，3H)。
用于制备化合物6f的程序：
在50℃下，将化合物6d(200mg，1.20mmol)和化合物6e(433mg，1.44mmol)于吡啶(6mL)中的混合物加热12小时。真空浓缩反应混合物，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(5％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到呈深褐色固体状的化合物6f(240mg，16％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.688min，MS(ESI)m/z＝430.1[M+H]+。
用于制备化合物6g的程序：
向化合物6f(240mg，0.191mmol)和化合物N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(29mg，0.286mmol)于DMF(5mL)中的溶液中添加K2CO3(53mg，0.382mmol)。在27-34℃下搅拌反应混合物12小时。将反应混合物倒入H2O(30mL)中，并用EtOAc(30mL×3)萃取。用水(20mL×3)和盐水(20mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈橙色油状的化合物6g(120mg，91.8％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.633min，MS(ESI)m/z＝512.2[M+H]+。
用于制备化合物6h的程序：
向化合物6g(90mg，0.131mmol)于MeOH/H2O＝2/1(9mL)中的溶液中添加Zn(26mg，0.394mmol)和NH4Cl(21mg，0.394mmol)。在90℃下加热所得混合物3小时，直至TLC(CH2Cl2/MeOH＝5/1(v/v))显示一个主要点(Rf＝0.25)并且起始物质(Rf＝0.5)完全消耗。用CHCl3/异丙醇＝3/1(20mL×3)萃取反应混合物。合并的有机层经Na2SO4脱水，接着真空浓缩，得到呈褐色固体状的化合物6h(85mg，94％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.571min，MS(ESI)m/z＝482.3[M+H]+。
用于制备实施例6的程序：
在0℃下，向化合物6h(85mg，0.123mmol)和DIEA(24mg，0.185mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(11mg，0.123mmol)。在0℃下搅拌所得混合物1小时。过滤反应混合物且滤液通过制备型HPLC(色谱柱：Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10μm；条件：25-55％B(A：0.05％氨水，B：CH3CN)；流动速率：30ml/min)纯化并冻干，得到呈白色固体状的不纯产物，通过制备型TLC进一步纯化(CH2Cl2∶MeOH＝7∶1(v/v))，得到呈白色固体状的实施例6(18.4mg，27.9％产率)。
LCMS：在10-80CD_3min_220&254色谱(ACSSH-LCMS-AS A：Xtimate C18，2.1*30mm，3μm；B：XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝1.969min，MS(ESI)m/z＝537.3[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.40(br s，1H)，10.20(br s，1H)，9.93(br s，1H)，9.32(s，1H)，8.39(s，1H)，7.67(br s，1H)，7.04(s，1H)，6.77(s，1H)，6.47-6.27(m，2H)，6.14(brs，1H)，5.80-5.69(m，1H)，3.87(s，3H)，2.90-2.84(m，2H)，2.69(s，3H)，2.53(s，3H)，2.31-2.25(m，8H)，1.75(s，6H)。
实施例7
N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-(4-(2-(2-羟基丙-2-基)-6-甲基吡啶-3-基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000661
用于制备化合物7b的程序：
向化合物7a(5g，26.73mmol)于无水THF(70mL)中的混合物中添加DMAP(6.35g，53.46mmol)。在室温下搅拌反应混合物10分钟，添加(Boc)2O(17.50g，80.19mmol)，接着在室温下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(5-10％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈浅黄色固体状的所希望的产物7b(10g，96.6％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-Q MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.875min，MS(ESI)m/z＝388.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.40(d，J＝7.6Hz，1H)，7.14(d，J＝7.6Hz，1H)，2.57(s，3H)，1.41(s，18H)。
用于制备化合物7c的程序：
在氮气下，向化合物7b(3.5g，9.04mmol)于无水MeOH(50mL)和无水DMF(150mL)中的混合物中添加Pd(OAc)2(150mg，0.1eq，0.904mmol)，随后添加DPPF(501mg，0.904mmol)和Et3N(1.37g，13.56mmol)。在CO气氛(50Psi)下，在80℃下搅拌所得混合物16小时。过滤反应混合物，并将滤液倒入水(10mL)中，再搅拌10分钟，用EtOAc(20mL×3)萃取。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层，经无水Na2SO4脱水并真空浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(5-8％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈白色固体状的化合物7c(2.0g，60.4％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-Q MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.812min，MS(ESI)m/z＝367.1[M+H]+。
用于制备化合物7d的程序：
向化合物7c(2.0g，5.46mmol)于无水THF(20mL)中的混合物中添加MeMgBr(9.1mL，27.3mmol，3M的乙醚溶液)。在氮气气氛下，在0℃下搅拌所得混合物2.5小时。将反应混合物倒入NH4Cl水溶液(25mL)中，搅拌10分钟，接着用EtOAc(30mL×3)萃取。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层，经无水Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈黄色油状的标题产物7d(1.4g，49.8％产率)，不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-Q MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.616min，MS(ESI)m/z＝267.1[M+H]+。
用于制备化合物7e的程序：
向化合物7d(1.4g，1.13mmol)于无水CH2Cl2(9mL)中的混合物中添加TFA(3mL)。在室温下搅拌所得混合物16小时。将反应混合物倒入NaHCO3水溶液(25mL)中以调至pH＝8.0，搅拌10分钟，接着用EtOAc(25mL×3)萃取。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层，经无水Na2SO4脱水并真空浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(梯度洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝20/1(v/v))纯化，得到呈白色固体状的化合物7e(230mg，26.3％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-Q MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.129min，MS(ESI)m/z＝167.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ6.97(d，J＝8.4Hz，1H)，6.86(d，J＝8.0Hz，1H)，2.35(s，3H)，1.58(s，6H)。
用于制备化合物7f的程序：
向化合物7e(311mg，2.076mmol)于无水CH2Cl2(5mL)中的混合物中添加DIEA(358mg，2.768mmol)，随后添加化合物2，4-二氯-1，3，5-三嗪(230mg，1.0eq，1.384mmol)。在25℃下搅拌所得混合物1.5小时。将反应混合物倒入水(20mL)和EtOAc(20mL)中，搅拌5分钟，接着用EtOAc(30mL×3)萃取。用盐水(40mL)洗涤合并的有机层，经无水Na2SO4脱水并真空浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过快速柱色谱法(15-30％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈灰白色固体状的化合物7f(290mg，74.9％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-Q MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.352min，MS(ESI)m/z＝279.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.93-9.54(m，1H)，8.50(s，1H)，8.30(br d，J＝14.4Hz，1H)，7.12(br d，J＝8.4Hz，1H)，3.07-2.87(m，1H)，2.51(s，3H)，1.69(s，6H)。
用于制备化合物7g的程序：
向化合物7f(290mg，1.038mmol)于n-BuOH(10mL)中的混合物中添加化合物2g(289mg，1.038mmol)和TFA(0.1mL)。在室温下搅拌所得混合物16小时，得到深红色混浊溶液。直接真空浓缩混合物，得到粗残余物，在硅胶上通过快速柱色谱法(0至15％MeOH/含1％氨水的CH2Cl2)纯化，得到呈黄色固体状的化合物7g(110mg，20.7％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-Q MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.604min，MS(ESI)m/z＝512.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.91(br s，1H)，8.36(br s，1H)，8.24(br s，1H)，7.47(brs，1H)，7.15(br d，J＝8.4Hz，1H)，6.66(s，1H)，3.96(s，3H)，3.29(t，J＝7.2Hz，2H)，2.89(s，3H)，2.54(s，3H)，2.28(s，6H)，1.69(s，8H)。
用于制备化合物7h的程序：
向化合物7g(110mg，0.215mmol)于MeOH/H2O＝5/1(6mL)中的溶液中添加Zn(70mg，1.075mmol)和NH4Cl(58mg，5.0eq，1.075mmol)。在90℃下加热所得混合物3小时。过滤反应混合物，并用CH2Cl2(20mL×3)萃取滤液。用水(10mL×3)和盐水(10mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈褐色固体状的化合物7h(93mg，79.6％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱((ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.554min，MS(ESI)m/z＝482.1[M+H]+。
用于制备实施例7的程序：
在0℃下，向化合物7h(93mg，0.171mmol)和DIEA(33mg，1.5eq，0.256mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(15mg，1.0eq，0.171mmol)。在0℃下搅拌所得混合物1小时。真空浓缩反应混合物，得到粗产物，通过制备型TLC(CH2Cl2∶MeOH＝7∶1(v/v))纯化，得到呈黄色固体状的不纯产物。粗产物再通过制备型HPLC纯化(色谱柱：Waters Xbridge 150*255μm；条件：30-55％B(A：0.05％氨水，B：CH3CN)；流动速率：25ml/min)并冻干，得到呈黄色固体状的实施例7(20.3mg，22.2％产率)。
LCMS：在10-80CD_3min_220&254色谱(ACSSH-LCMS-AS A：Xtimate C18，2.1*30mm，3μm；B：XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝2.002min，MS(ESI)m/z＝536.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.34(br s，2H)，9.95(br s，1H)，8.43(d，J＝8.4Hz，1H)，8.37(br s，1H)，7.64(br s，1H)，7.07(d，J＝8.4Hz，1H)，6.77(s，1H)，6.52-6.31(m，2H)，5.77(br d，J＝10.4Hz，1H)，3.87(s，3H)，2.88(t，J＝4.8Hz，2H)，2.70(s，3H)，2.49(s，3H)，2.28(s，8H)，1.78(s，6H)。
实施例8
N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-(4-(2-(2-羟基丙-2-基)吡啶-3-基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000691
用于制备化合物8b的程序：
向化合物8a(1.0g，6.57mmol)于CH2Cl2(20mL)中的溶液中添加(Boc)2O(3.6g，16.42mmol)和DMAP(1.2g，1.5eq，9.85mmol)。在28-38℃下搅拌所得混合物4小时。减压浓缩反应混合物，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1(v/v))纯化，得到呈白色固体状的化合物8b(2.5g，99％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.784min，MS(ESI)m/z＝353.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.63(dd，J＝1.4，4.6Hz，1H)，7.85(dd，J＝1.5，8.0Hz，1H)，7.69(dd，J＝4.8，8.0Hz，1H)，3.94(s，3H)，1.36(s，18H)。
用于制备化合物8c的程序：
在0℃下，化合物8b(2.3g，6.52mmol)于THF(30mL)中的溶液用氮气吹扫并脱气3次并将MeMgBr(10.87mL)逐滴添加至其中。在29-34℃下搅拌所得混合物1小时。用饱和NH4Cl水溶液(10mL)稀释反应混合物并用EtOAc(2×20mL)萃取。减压浓缩合并的有机层并在硅胶上通过色谱柱(石油醚/EtOAc＝10/1)纯化，得到呈白色固体状的化合物8c(1g，61％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.697min，MS(ESI)m/z＝253.0[M+H]+。
用于制备化合物8d的程序：
向化合物8c(1g，1.0eq，3.70mmol)于CH2Cl2(6mL)中的溶液中添加TFA(2mL)。在29-36℃下搅拌所得混合物1小时。减压浓缩反应混合物，得到呈黄色油状(TFA盐)的化合物8d(1.2g，94％产率)。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.85(dd，J＝1.0，5.3Hz，1H)，7.72(dd，J＝1.3，8.5Hz，1H)，7.61(dd，J＝5.5，8.5Hz，1H)，1.70(s，6H)。
用于制备化合物8e的程序：
向化合物8d(200mg，1.0eq，0.67mmol)于吡啶(5mL)中的溶液中添加化合物6e(256mg，1.1eq，0.74mmol)。在28-36℃下搅拌所得混合物6小时。减压浓缩反应混合物并在硅胶上通过柱色谱法(CH2Cl2/MeOH＝10/1)纯化，得到呈黄色固体状的化合物8e(240mg，58％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.687min，MS(ESI)m/z＝438.1[M+H]+。
用于制备化合物8f的程序：
向化合物8e(240mg，1.0eq，0.58mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加K2CO3(160mg，2.0eq，1.16mmol)和化合物N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(118mg，2.0eq，1.16mmol)。在28-36℃下搅拌所得混合物2小时。用H2O(200mL)稀释反应混合物并用EtOAc(2×100mL)萃取。用盐水(100mL)洗涤合并的有机层，经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(CH2Cl2/MeOH＝10/1)纯化，得到呈黄色固体状的化合物8f(170mg，59％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.643min，MS(ESI)m/z＝498.2[M+H]+。
用于制备化合物8g的程序：
向化合物8f(170mg，1.0eq，0.34mmol)于MeOH(10mL)和H2O(5mL)中的溶液中添加Zn(111mg，5.0eq，1.70mmol)和NH4Cl(182mg，10.0eq，3.40mmol)。在80℃下搅拌所得混合物2小时。减压浓缩反应混合物并用EtOAc(2×10mL)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈白色固体状的化合物8g(140mg，88％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.554min，MS(ESI)m/z＝468.2[M+H]+。
用于制备实施例8的程序：
向化合物8g(140mg，1.0eq，0.30mmol)和DIEA(58mg，1.5eq，0.45mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(27mg，1.0eq，0.30mmol)。在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应混合物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：28-58％B(A：0.05％NH3H2O；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例8(58.7mg，37％产率)。
LCMS：在10-80CD_3min_220&254色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝1.844min，MS(ESI)m/z＝522.3[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ml色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝3.65min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.85(br s，1H)，10.41(br s，1H)，9.99(br s，1H)，8.69(d，J＝7.0Hz，1H)，8.41(s，1H)，8.23(dd，J＝1.5，4.5Hz，1H)，7.68(br s，1H)，7.23(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，6.79(s，1H)，6.48-6.41(m，1H)，6.37(br d，J＝10.0Hz，1H)，5.78(br d，J＝11.0Hz，1H)，3.88(s，3H)，2.88(br s，2H)，2.71(s，3H)，2.28(s，8H)，1.83(s，6H)。
实施例9
N-(5-(4-(3，4-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000721
用于制备化合物9b的程序：
向化合物9a(340mg，1.0eq，1.18mmol)于CH2Cl2(6mL)中的溶液中添加TFA(2mL)。在26-32℃下搅拌所得混合物2小时。减压浓缩所得混合物，得到呈黄色固体状的TFA盐形式的化合物9b(400mg，94％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(Agilent Pursit 5 C18 20*2.0mm)中，Rt＝0.698min，MS(ESI)m/z＝188.1[M+H]+。
用于制备化合物9c的程序：
向化合物9b(286mg，1.0eq，0.95mmol)于吡啶(10mL)中的溶液中添加化合物6e(400mg，1.1eq，1.05mmol)。在50℃下搅拌所得混合物6小时。减压浓缩反应混合物，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1/1(v/v))纯化，得到呈黄色固体状的化合物9c(200mg，42％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 25-2mm)中，Rt＝0.946min，MS(ESI)m/z＝451.1[M+H]+。
用于制备化合物9d的程序：
向化合物9c(200mg，0.44mmol)于DMF(5mL)中的溶液中添加K2CO3(122mg，0.88mmol)和化合物N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(54mg，0.53mmol)。在26-33℃下搅拌所得混合物2小时。将反应混合物倒至H2O(50mL)上并过滤。减压浓缩滤饼，得到呈黄色固体状的化合物9d(200mg，85％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 25-2mm)中，Rt＝0.807min，MS(ESI)m/z＝533.2[M+H]+。
用于制备化合物9e的程序：
向化合物9d(200mg，0.38mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在H2(氢气球，30Psi)下，在26-34℃(室温)下搅拌2小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈褐色固体状的化合物9e(150mg，78％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mmm)中，Rt＝0.752min，MS(ESI)m/z＝503.2[M+H]+。
用于制备实施例9的程序：
向化合物9e(150mg，0.30mmol)和DIEA(58mg，0.45mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加化合物丙烯酰氯(27mg，0.30mmol)。在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应混合物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：42-72％B(A：0.05％NH3H2O；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例9(39.4mg，23％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.784min，MS(ESI)m/z＝557.0[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝3.12min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.29(br s，1H)，10.45(br s，1H)，9.89(br s，1H)，8.38(s，1H)，8.14(br dd，J＝5.2，7.2Hz，1H)，7.65(br s，1H)，7.09(q，J＝9.2Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.44-6.29(m，2H)，6.08(br s，1H)，5.81-5.74(m，1H)，3.88(s，3H)，2.92-2.84(m，2H)，2.70(s，3H)，2.35-2.20(m，8H)，1.88(d，J＝3.6Hz，6H)。
实施例10
N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-(4-(2-(3-羟基氧杂环丁烷-3-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000741
用于制备化合物10a的程序：
向化合物苯胺(5g，53.69mmol)于CHCl3(80mL)中的混合物中添加Boc2O(23.4g，107.38mmol)。在70℃下搅拌反应混合物12小时。直接真空浓缩反应混合物，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(2％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈白色固体状的标题化合物10a(8g，100％产率)。LCMS：在5-95AB_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.793min，MS(ESI)m/z＝137.9[M+55]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.38(d，J＝8.0Hz，2H)，7.33-7.28(m，2H)，7.08-7.03(m，1H)，6.50(brs，1H)，1.54(s，9H)。
用于制备化合物10b的程序：
在-78℃下，向化合物10a(3.0g，1.55mmol)于THF(50mL)中的溶液中逐滴添加t-BuLi(30mL，38.81mmol)，在-78℃下保持1小时。使反应混合物升温至0℃，保持15分钟，接着将其冷却至-78℃。在-78℃下，逐滴添加氧杂环丁烷-3-酮(3.36g，46.61mmol)，保持15分钟。在-78℃下搅拌所得混合物1小时。通过添加100mL水淬灭反应，接着用EtOAc(3×100mL)萃取。用盐水(3×100mL)洗涤有机层，干燥并真空浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚∶EtOAc＝3/1(v/v))纯化，得到呈白色固体状的化合物10b(580mg，14.1％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.722min，MS(ESI)m/z＝209.9[M-55]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.09(s，1H)，7.65(d，J＝7.8Hz，1H)，7.40(dd，J＝1.4，7.8Hz，1H)，7.34-7.29(m，1H)，7.16-7.11(m，1H)，4.88(d，J＝7.0Hz，2H)，4.71(d，J＝7.0Hz，2H)，1.45(s，9H)。
用于制备化合物10c的程序：
向化合物10b(500mg，1.89mmol)于MeOH(20mL)和H2O(10mL)中的溶液中添加K2CO3(780mg，5.66mmol)。在70℃下搅拌所得混合物2小时。用EtOAc(3×50mL)萃取反应混合物。用盐水洗涤合并的有机层，干燥并真空浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝3/1(v/v))纯化，得到呈褐色固体状的化合物10c(240mg，77.1％产率)。
LCMS：在10-80CD_3MIN_220&254；XBrige Shield RP18 2.1*50mm中，Rt＝0.553min，MS(ESI)m/z＝166.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.14(d，J＝7.8Hz，1H)，7.05-6.99(m，1H)，6.70(d，J＝7.8Hz，1H)，6.59(dt，J＝1.0，7.4Hz，1H)，6.18(brs，1H)，4.89(d，J＝6.8Hz，2H)，4.79(s，2H)，4.71(d，J＝6.8Hz，2H)。
用于制备化合物10d的程序：
向化合物10c(500mg，1.89mmol)于MeOH(20mL)和H2O(10mL)中的溶液中添加K2CO3(780mg，5.66mmol)。在70℃下搅拌所得混合物2小时。用EtOAc(3×50mL)萃取反应混合物。用盐水洗涤合并的有机层，干燥并真空浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝3/1(v/v))纯化，得到呈褐色固体状的化合物10d(240mg，77.1％产率)。
LCMS：在10-80CD_3MIN_220&254；XBrige Shield RP18 2.1*50mm中，Rt＝0.553min，MS(ESI)m/z＝166.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-J6)δ7.14(d，J＝7.8Hz，1H)，7.05-6.99(m，1H)，6.70(d，J＝7.8Hz，1H)，6.59(dt，J＝1.0，7.4Hz，1H)，6.18(brs，1H)，4.89(d，J＝6.8Hz，2H)，4.79(s，2H)，4.71(d，J＝6.8Hz，2H)。
用于制备化合物10e的程序：
向化合物10d(220mg，1.33mmol)于吡啶(10mL)中的溶液中添加化合物6e(439mg，1.47mmol)。在50℃下搅拌所得混合物18小时。减压浓缩反应混合物并在硅胶上通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝15/1(v/v))纯化，得到呈褐色固体状的化合物10e(150mg，26.3％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.723min，MS(ESI)m/z＝429.1[M+H]+。
用于制备化合物10f的程序：
向化合物10e(190mg，0.44mmol)和K2CO3(122mg，0.89mmol)于DMF(2mL)中的溶液添加化合物N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(54mg，0.53mmol)。在25-33℃下搅拌混合物2小时。向反应物中添加10mL水，并用EtOAc(10mL×3)萃取混合物。用盐水(10mL×3)洗涤合并的有机层，干燥并真空浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝15/1(v/v))纯化，得到呈褐色固体状的化合物10f(140mg，62％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.714min，MS(ESI)m/z＝511.3[M-OH]+。
用于制备化合物10g的程序：
在N2下，向化合物10f(130mg，0.25mmol)于MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(13mg)。在H2下(15Psi)，在26-31℃下搅拌混合物1小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈褐色油状的化合物10g(95mg，78％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(5-95AB_1.5MIN_1500)中，Rt＝0.669min，MS(ESI)m/z＝481.3[M+H]+。
用于制备实施例10的程序：
向化合物10h(85mg，0.18mmol)和DIEA(34mg，0.26mmol)于DMF(1mL)中的溶液中添加溶于DMF(1mL)中的丙烯酰氯(16mg，0.18mmol)。在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：25-50％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈褐色固体状的实施例10(25.2mg，26.7％产率)。
LCMS：在10-80CD_7MIN_220&254色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝3.452min，MS(ESI)m/z＝535.3[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ML色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝2.91min。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.08(s，1H)，8.85(br s，1H)，8.47-8.33(m，2H)，8.23(s，1H)，7.92(br s，1H)，7.38(brd，J＝6.6Hz，1H)，7.08(br s，1H)，6.98(s，1H)，6.83(brs，1H)，6.47-6.33(m，1H)，6.27-6.17(m，1H)，5.75(br d，J＝11.4Hz，1H)，4.86(br d，J＝6.8Hz，2H)，4.70(brd，J＝7.0Hz，2H)，3.76(s，3H)，2.85(br t，J＝5.6Hz，2H)，2.71(s，3H)，2.34-2.28(m，2H)，2.20(s，6H)。
实施例11
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000771
用于制备化合物11b的程序：
在0℃下，向化合物11a(2.0g，9.83mmol)于THF(20mL)中的溶液中逐滴添加CH3MgBr(16.4mL，49.2mmol，3M的乙醚溶液)。在N2下，在27-34℃下搅拌所得混合物2小时。将反应混合物倒入饱和NH4Cl(100mL)中，并用EtOAc(30mL×3)萃取。用水(20mL×3)和盐水(20mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈褐色油状的化合物11b(2.0g，95％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.558min，MS(ESI)m/z＝185.9[M-OH]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.91(d，J＝10.8Hz，1H)，6.63(d，J＝6.4Hz，1H)，1.64(s，6H)。
用于制备化合物11c的程序：
在50℃下，将化合物11b(1.9g，9.3mmol)和化合物6e(2.8g，9.3mmol)于吡啶(20mL)中的混合物加热12小时。真空浓缩反应混合物，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(50％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈浅黄色固体状的化合物11c(2.6g，60％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.821min，MS(ESI)m/z＝467.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.73(br s，1H)，9.42(br s，1H)，8.49(s，1H)，8.33(br s，1H)，7.54(s，1H)，7.09(d，J＝10.4Hz，1H)，6.78(d，J＝12.0Hz，1H)，4.03(s，3H)，2.51(brs，1H)，1.71(s，6H)。
用于制备化合物11d的程序：
向化合物11d(740mg，1.59mmol)和K2CO3(439mg，3.18mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(244mg，2.39mmol)。在26-31℃下搅拌反应混合物4小时。在冰水浴下将反应混合物逐滴添加至H2O(100mL)中，接着过滤，用H2O(15mL×3)洗涤滤饼，并在高真空中干燥，得到呈橙色固体状的化合物11e(800mg，91.65％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.717min，MS(ESI)m/z＝549.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.70(br s，1H)，9.00(br s，1H)，8.39(br s，2H)，7.42(brs，1H)，7.08(d，J＝10.5Hz，1H)，6.64(s，1H)，3.95(s，3H)，3.28(t，J＝7.2Hz，2H)，2.88(s，3H)，2.57(t，J＝7.2Hz，2H)，2.25(s，6H)，1.69(s，6H)。
用于制备化合物11e的程序：
向化合物11d(200mg，0.364mmol)于8mL MeOH/H2O＝5/1(v/v)中的溶液中添加Zn(119mg，1.82mmol)和NH4Cl(97mg，1.82mmol)。在90℃下加热所得混合物1小时。过滤反应混合物，并真空浓缩滤液，得到残余物，用CH2Cl2(30mL)溶解，用水(20mL×3)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈褐色油状的化合物11e(180mg，95.3％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.679min，MS(ESI)m/z＝519.1[M+H]+。
用于制备实施例11的程序：
在0℃下，向化合物11e(180mg，0.35mmol)和DIEA(68mg，0.53mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(32mg，0.35mmol)。在0℃下搅拌所得混合物1小时。利用H2O(0.1mL)淬灭反应，接着过滤。滤液通过制备型HPLC(色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：52-82％B(A：0.05％氨水，B：CH3CN)；流动速率：25ml/min)纯化并冻干，得到呈白色固体状的实施例11(52.9mg，26.4％产率)。
LCMS：在10-80CD_3min_220&254色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝2.124min，MS(ESI)m/z＝573.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.60(br s，1H)，10.44(br s，1H)，9.96(br s，1H)，8.47(d，J＝7.6Hz，1H)，8.42(s，1H)，7.69(br s，1H)，7.10(d，J＝10.8Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.49-6.28(m，2H)，6.18(br s，1H)，5.91-5.65(m，1H)，3.88(s，3H)，2.88(t，J＝5.6Hz，2H)，2.70(s，3H)，2.27(s，8H)，1.77(s，6H)。
实施例12
N-(5-(4-(4-氯-5-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000801
用于制备化合物12b的程序：
在0℃下，向化合物12a(2g，13.74mmol)于CH2Cl2(20mL)中的溶液中添加ICl(3.3g，20.61mmol)。在27-34℃下搅拌所得混合物2小时。减压浓缩反应混合物并在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1)纯化，得到呈褐色固体状的化合物12b(2.5g，67％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18 25-2mm)中，Rt＝0.811min，MS(ESI)m/z＝271.8[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.59(d，J＝8.0Hz，1H)，6.62(d，J＝11.6Hz，1H)。
用于制备化合物12c的程序：
向化合物12b(450mg，1.66mmol)于MeOH(10mL)和DMF(20mL)中的溶液中添加Pd(OAc)2(38mg，0.17mmol)、DPPF(94mg，0.17mmol)和Et3N(504mg，4.98mmol)。所得混合物用CO吹扫和脱气3次，接着在CO(50Psi)下，在80℃下搅拌24小时。过滤反应混合物并用EtOAc(50mL)稀释。用盐水(50mL)洗涤有机层，干燥并减压浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50/1(v/v))纯化，得到呈白色固体状的化合物12c(320mg，95％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 25-2mm)中，Rt＝0.941min，MS(ESI)m/z＝203.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)δ7.83(d，J＝8.4Hz，1H)，6.59(d，J＝11.6Hz，1H)，3.85(s，3H)。
用于制备化合物12d的程序：
在0℃下，向化合物12c(320mg，1.57mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加CH3MgBr(2.62mL，7.85mmol)。在26-31℃下搅拌所得混合物2小时。用饱和NH4Cl水溶液(10mL)稀释反应混合物并用EtOAc(2×20mL)萃取。减压浓缩合并的有机层并在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1(v/v))纯化，得到呈无色油状的化合物12d(250mg，78％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 25-2mm)中，Rt＝0.826min，MS(ESI)m/z＝185.9[M+H-18]+。
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)δ7.08(d，J＝8.4Hz，1H)，6.49(d，J＝11.6Hz，1H)，1.57(s，6H)。
用于制备化合物12e的程序：
向化合物12d(200mg，0.98mmol)于CH2Cl2(10mL)中的溶液中添加DIEA(253mg，1.96mmol)和2，4-二氯-1，3，5-三嗪(162mg，1.08mmol)。在26-32℃下搅拌所得混合物2小时。减压浓缩反应物并在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1(v/v))纯化，得到呈白色固体状的化合物12e(210mg，67％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 25-2mm)中，Rt＝0.971min，MS(ESI)m/z＝316.9[M+H]+。
用于制备化合物12f的程序：
向化合物12e(210mg，0.66mmol)和化合物2g(177mg，0.66mmol)于n-BuOH(5mL)中的溶液中添加TFA(0.05mL)。在26-33℃下搅拌所得混合物1小时。减压浓缩反应混合物并在硅胶上通过柱色谱法(CH2Cl2/MeOH＝10/1(v/v))纯化，得到呈褐色油状的化合物12f(150mg，41％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 25-2mm)中，Rt＝0.821min，MS(ESI)m/z＝549.1[M+H]+。
用于制备化合物12g的程序：
向化合物12f(150mg，0.27mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中添加10％Pd/C(15mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在H2下(30Psi)，在26-34℃(室温)下搅拌2小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈褐色固体状的化合物12g(110mg，78％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.771min，MS(ESI)m/z＝519.1[M+H]+。
用于制备实施例12的程序：
向化合物12g(110mg，0.21mmol)和DIEA(41mg，0.32mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(19mg，0.21mmol)。在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应混合物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：50-80％B(A：0.05％NH3H2O；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例12(13.5mg，11％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.167min，MS(ESI)m/z＝573.0[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝3.38min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.85(br s，1H)，10.45(br s，1H)，9.96(br s，1H)，8.43(s，1H)，8.39(d，J＝11.8Hz，1H)，7.72(br s，1H)，7.29(d，J＝8.4Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.43-6.32(m，2H)，6.10(br s，1H)，5.81-5.73(m，1H)，3.88(s，3H)，2.91-2.85(m，2H)，2.70(s，3H)，2.35-2.20(m，8H)，1.78(s，6H)。
实施例13
N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-(4-(2-(2-羟基丙-2-基)-4-(三氟甲基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000831
用于制备化合物13b的程序：
在26-32℃下，向化合物13a(0.92g，4.2mmol)和Boc2O(3.17g，14.7mmol)于THF(15mL)中的溶液中添加DMAP(256mg，2.1mmol)。在26-32℃下搅拌反应4小时。真空浓缩反应溶液，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(0-10％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈灰白色固体状的所希望的产物化合物13b(1.43g，81.2％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝1.078min，MS(ESI)m/z＝442.1[M+23]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.28(d，J＝1.6Hz，1H)，7.95(dd，J＝2.0，8.4Hz，1H)，7.53(d，J＝8.4Hz，1H)，3.93(s，3H)，1.36(s，18H)。
用于制备化合物13c的程序：
在冰水浴中，向化合物13b(1.43g，3.41mmol)于THF(25mL)中的溶液中逐滴添加MeMgBr(4.54mL，13.63mmol，3M的乙醚溶液)。在26-32℃下搅拌混合物3小时。向反应物中添加饱和NH4Cl(30mL)并用EtOAc(50mL×3)萃取水层。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层并经Na2SO4脱水，过滤并真空浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(3-30％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈黄色固体状的所希望的产物化合物13c(0.84g，77.8％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.889min，MS(ESI)m/z＝246.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ8.22(d，J＝8.8Hz，1H)，7.54-7.51(m，2H)，1.64(s，6H)，1.54(s，9H)。
用于制备化合物13d的程序：
在冰水浴中，向化合物13c(640mg，2.0mmol)于CH2Cl2(10mL)中的溶液中逐滴添加HCl/EtOAc(20mL，4M)。在26-34℃下搅拌混合物6小时。反应混合物用饱和NaHCO3碱化至pH＝8并用EtOAc(70mL×3)萃取。用盐水(50mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4脱水，过滤并真空浓缩，得到粗品，通过快速柱色谱法(3-30％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈黄色油状的所希望的产物化合物13d(260mg，45.1％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.726min，MS(ESI)m/z＝202.0[M-17]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ7.33(s，1H)，7.23(d，J＝8.8Hz，1H)，6.74(d，J＝8.4Hz，1H)，1.63(s，6H)。
用于制备化合物13e的程序：
在0℃下，向化合物13d(260mg，1.18mmol)和DIEA(304mg，2.56mmol)的溶液中添加2，4-二氯-1，3，5-三嗪(267mg，1.78mmol)。在28-34℃下搅拌反应4小时后，用饱和NH4Cl(5mL)淬灭反应并用EtOAc(50ml×3)萃取水层。用盐水(50mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4脱水，过滤并真空浓缩，得到粗品(320mg)，通过快速柱色谱法(3-30％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈白色固体状的化合物13e(200mg，50.8％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.832min，MS(ESI)m/z＝332.9[M+H]+。
用于制备化合物13f的程序：
在冰水浴中，向化合物13e(200mg，0.61mmol)和化合物2g(183mg，0.68mmol)于n-BuOH(10mL)中的溶液中逐滴添加TFA(0.8mL)。在28-34℃下搅拌混合物2小时。直接真空浓缩反应溶液，得到粗残余物，在硅胶上通过快速柱色谱法(用0-15％MeOH/二氯甲烷洗脱)纯化，得到不纯物(350mg)，通过制备型TLC(MeOH/CH2Cl2＝10/1)进一步纯化，得到呈褐色固体状的化合物13f(80mg，50.8％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.755min，MS(ESI)m/z＝565.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm8.48-8.43(m，2H)，7.63(d，J＝8.4Hz，1H)，7.52-7.48(m，2H)，6.96(s，1H)，4.00(s，3H)，3.40(t，J＝6.4Hz，2H)，2.90(s，3H)，2.65(t，J＝6.4Hz，2H)，2.30(s，6H)，1.75(s，6H)。
用于制备化合物13g的程序：
在H2(15Psi)下，将化合物13f(80mg，0.14mmol)和Pd/C(70mg，10％)于EtOAc(30mL)中的混合物搅拌30分钟。过滤反应物并用EtOAc(50mL)洗涤滤饼。真空浓缩滤液，得到呈灰色固体状的化合物13g(60mg，80.0％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.712min，MS(ESI)m/z＝535.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.83-9.80(m，1H)，8.39(d，J＝8.8Hz，1H)，8.27-8.25(m，1H)，7.77(s，1H)，7.68-7.49(m，2H)，7.41(s，1H)，6.59(s，1H)，3.95(s，3H)，2.88(t，J＝6.8Hz，2H)，2.59(s，3H)，2.37(t，J＝6.8Hz，2H)，2.35-2.34(m，2H)，2.25(s，6H)，2.21-2.20(m，1H)，1.67(s，6H)。
用于制备实施例13的程序：
在冰水浴中，经30分钟向化合物12g(60mg，0.112mmol)和DIEA(29mg，0.224mmol)于DMF(1mL)中的混合物中逐滴添加化合物丙烯酰氯(16.5mg于1mL DMF)中。在0-5℃下搅拌反应30分钟后，反应物变为褐色溶液。用H2O(45mg)淬灭反应，接着直接通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝10/1)纯化，得到呈白色固体状的实施例13(18.2mg，27.5％产率)。
LCMS：在0-60AB_4.0min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.698min，MS(ESI)m/z＝589.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ10.88(br s，1H)，10.37(br s，1H)，9.89(br s，1H)，8.46(d，J＝8.4Hz，1H)，8.36(s，1H)，7.64(br s，1H)，7.54-7.43(m，2H)，6.71(s，1H)，6.39-6.22(m，2H)，5.71(brd，J＝11.2Hz，1H)，3.81(s，3H)，2.81(m，2H)，2.63(s，3H)，2.21(m，8H)，1.75(s，6H)。
实施例14
N-(5-(4-(4-氯-3-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000861
用于制备化合物14b的程序：
在60℃下，将化合物14a(5g，34.35mmol)和Boc2O(15g，68.70mmol)于THF(80mL)中的溶液搅拌12小时。直接真空浓缩反应混合物，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(2％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈黄色固体状的化合物14b(8.2g，69％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.866min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.36(d，J＝9.6Hz，1H)，7.19(t，J＝6.8Hz，1H)，6.87(d，J＝7.6Hz，1H)，6.45(s，1H)，1.45(s，9H)。
用于制备化合物14c的程序：
在N2下，在-78℃下向化合物14b(8g，32.56mmol)于THF(120mL)中的溶液中添加t-BuLi(1.3M)(50mL，65.12mmol)。搅拌1小时后，添加DMF(3.6g，48.84mmol)，并在-78至33℃下搅拌反应混合物16小时。用饱和NH4Cl溶液(300mL)淬灭反应混合物，接着用EtOAc(200mL×3)萃取。用盐水(100mL)洗涤合并的有机层，经硫酸钠脱水，并真空浓缩，得到呈黄色固体状的化合物14c(8.2g，92％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.929min。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ10.49(brs，1H)，10.28(s，1H)，8.18(dd，J＝0.8Hz，9.2Hz，1H)，7.48(t，J＝8.8Hz，1H)，1.46(s，9H)。
用于制备化合物14d的程序：
在N2下，在0℃下向化合物14c(4g，14.62mmol)于THF(40mL)中的溶液中添加MeMgBr(3.0M)(19.5mL，58.48mmol)。在0℃下搅拌反应混合物2小时。用饱和NH4Cl溶液(80mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL×3)萃取。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层，经硫酸钠脱水，并真空浓缩，得到呈黄色油状的化合物14d(4g，94％产率)，不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.871min。
用于制备化合物14e的程序：
在N2下，在0℃下向化合物14d(4g，14.62mmol)于CH2Cl2(40mL)中的溶液中添加DMP(9.3g，21.93mmol)。在0℃下搅拌反应混合物2小时。添加饱和NaHCO3溶液(40mL)和饱和Na2SO3溶液(30mL)，并在25-33℃下搅拌混合物30分钟，分离有机层并用CH2Cl2(30mL)萃取。用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，经硫酸钠脱水，并真空浓缩，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(1％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈黄色固体状的化合物14e(2.5g，59％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.924min，MS(ESI)m/z＝187.9[M-101+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.20(brs，1H)，8.19(d，J＝9.6Hz，1H)，7.47(t，J＝9.2Hz，1H)，2.67(d，J＝8.0Hz，1H)，1.52(s，9H)。
用于制备化合物14f的程序：
在N2下，在0℃下向化合物14e(2.5g，8.69mmol)于THF(40mL)中的溶液中添加MeMgBr(3.0M)(10mL，30.42mmol)。在0℃下搅拌反应混合物2小时。用饱和NH4Cl溶液(80mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL×3)萃取。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层，经硫酸钠脱水，并真空浓缩，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(0.5％EtOAc/石油醚)纯化，回收得到化合物14e(1.2g)，随后用2％EtOAc/石油醚洗脱，得到呈黄色固体状的标题产物14f(1.5g，57％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝1.066min，MS(ESI)m/z＝270.1[M-55+Na]+.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.67(brs，1H)，7.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.23(t，J＝8.4Hz，1H)，1.75(d，J＝3.6Hz，6H)，1.51(s，9H)。
用于制备化合物14g的程序：
在N2下，在0℃下向化合物14f(1.5g，4.94mmol)于CH2Cl2(15mL)中的溶液中添加TFA(5mL)。在36-34℃下搅拌反应混合物1小时。真空浓缩反应混合物，得到呈黄色油状的化合物14g(700mg，94％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.652min，MS(ESI)m/z＝185.9[M-OH]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.92(t，J＝8.0Hz，1H)，6.24(dd，J＝1.2Hz，8.4Hz，1H)，1.65(d，J＝3.6Hz，6H)。
用于制备化合物14h的程序：
在50℃下，将化合物14g(200mg，0.98mmol)和化合物6e(294mg，0.98mmol)于吡啶(1.5mL)中的溶液搅拌4小时。直接真空浓缩反应混合物，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(EtOAc∶石油醚＝7∶3(v/v))纯化，得到呈褐色固体状的标题产物14h(150mg，21％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.864min，MS(ESI)m/z＝467.0[M+H]+。
用于制备化合物14i的程序：
向化合物14h(150mg，0.32mmol)和K2CO3(89mg，0.64mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(39mg，0.39mmol)。在28-33℃下搅拌反应混合物2小时。将反应混合物倒入水(10mL)中，并搅拌30分钟。过滤混合物，并用水(10mL×3)洗涤滤饼。在高真空中干燥滤饼，得到呈黄色固体状的化合物14i(240mg，粗品)。
LCMS：在5-95AB_220&254色谱(B：XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝0.738min，MS(ESI)m/z＝549.1[M+H]+。
用于制备化合物14j的程序：
向化合物14i(200mg，0.35mmol)和NH4Cl(95mg，1.75mmol)于MeOH(4mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加Zn(115mg，1.75mmol)。在90℃下搅拌反应混合物2小时。过滤反应混合物，并将滤液倒入水(50mL)中，用EtOAc(25mL×3)萃取。用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，经硫酸钠脱水，过滤并真空浓缩滤液，得到呈黑色固体状的化合物14j(180mg，粗品)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.699min，MS(ESI)m/z＝519.1[M+H]+。
用于制备实施例14的程序：
在0℃下，向14j(180mg，粗品，0.35mmol)和DIEA(90mg，0.70mmol)于DMF(3mL)中的混合物中添加丙烯酰氯(32mg，0.35mmol)。在26-32℃下搅拌反应混合物0.5小时。反应混合物通过制备型HPLC纯化：[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：65-95％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：30ml/min]。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例14(24.5mg，12％产率)。
LCMS：在10-80CD_3min_220&254色谱(B：XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝2.204min，MS(ESI)m/z＝573.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.61(brs，1H)，10.30(brs，1H)，9.86(s，1H)，8.40(s，1H)，8.27(d，J＝8.8Hz，1H)，7.66(brs，1H)，7.35-7.26(m，1H)，6.75(brs，1H)，6.40(d，J＝16.0Hz，1H)，6.01(brs，1H)，5.78(d，J＝11.2Hz，1H)，3.88(s，3H)，3.07-2.87(m，2H)，2.71(s，3H)，2.58-2.13(m，8H)，1.87(d，J＝3.6Hz，6H)。
HPLC：在10-80CD_1.2ml色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝3.86min。
实施例15
N-(5-(4-(4，5-二氯-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000901
用于制备化合物15b的程序：
向化合物15a(2.0g，9.71mmol)于EtOAc(40mL)和MeOH(40mL)中的溶液中添加TMSCHN2(9.7mL，25.78mmol，2M的己烷溶液)。在26-33℃下搅拌混合物1.5小时。减压浓缩反应混合物，得到呈白色固体状的化合物15b(2.0g，94.1％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.988min，MS(ESI)m/z＝187.8[M-31]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.85(s，1H)，6.72(s，1H)，5.71(br s，2H)，3.80(s，3H)。
用于制备化合物15c的程序：
在0-5℃下，向化合物15b(1.0g，4.54mmol)于THF(30mL)中的溶液中添加CH3MgBr(6mL，3M的乙醚溶液)。在26-34℃下搅拌混合物1.5小时(黄色溶液)。通过添加NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应混合物，接着用EtOAc(3×100mL)萃取。用盐水(3×100mL)洗涤有机层，并减压浓缩，得到呈白色固体状的化合物15c(950mg，95％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.867min，MS(ESI)m/z＝201.8[M-OH]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.13(s，1H)，6.70(s，1H)，1.64(s，6H)。
用于制备化合物15d的程序：
向化合物15c(500mg，2.27mmol)于吡啶(5mL)中的溶液中添加化合物6e(749mg，2.50mmol)。在50℃下搅拌所得混合物18小时。减压浓缩反应混合物并在硅胶上通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝15/1(v/v))纯化，得到呈褐色固体状的化合物15d(300mg，29.2％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.991min，MS(ESI)m/z＝483.1[M+H]+。
用于制备化合物15e的程序：
向化合物15d(300mg，0.62mmol)和K2CO3(171mg，1.24mmol)于DMF(4mL)中的溶液中添加N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(76mg，0.74mmol)。在28-33℃下搅拌混合物2小时。向反应物中添加10mL水并用EtOAc(10mL×3)萃取。用盐水(10mL×3)洗涤合并的有机层，经硫酸钠脱水并真空浓缩，得到粗品，在硅胶上通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝15/1(v/v))纯化，得到呈褐色固体状的化合物15e(250mg，71％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.745min，MS(ESI)m/z＝565.1[M+H]+。
用于制备化合物15f的程序：
向化合物15e(220mg，0.39mmol)于MeOH(5mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加Zn(127mg，1.95mmol)和NH4Cl(208mg，3.89mmol)。在N2下，在70℃下搅拌混合物1.5小时(变为褐色混合物)。通过添加NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应混合物，接着用EtOAc(3×10mL)萃取。用盐水(3×10mL)洗涤有机层，干燥并真空浓缩，得到化合物15f(190mg，91.4％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.799min，MS(ESI)m/z＝535.1[M+H]+。
用于制备实施例15的程序：
向化合物15f(190mg，0.35mmol)和DIEA(69mg，0.53mmol)于DMF(1mL)中的溶液中添加溶于DMF(1mL)中的丙烯酰氯(32mg，0.35mmol)。在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：25-55％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例15(37.8mg，12.2％产率)。
LCMS：在10-80CD_7MIN_220&254色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝5.084min，MS(ESI)m/z＝589.3[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ML色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝4.32min。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.32(br s，1H)，10.03(s，1H)，9.15(br s，1H)，8.42(br s，1H)，8.29(br d，J＝14.8Hz，2H)，7.38(br s，1H)，7.03(br s，1H)，6.43-6.34(m，1H)，6.33(s，1H)，6.25-6.13(m，1H)，5.73(br d，J＝11.6Hz，1H)，3.78(s，3H)，2.86(br t，J＝5.6Hz，2H)，2.72(s，3H)，2.37-2.30(m，2H)，2.21(s，6H)，1.52(s，6H)。
实施例16
N-(5-(4-(4-氯-3，5-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000921
用于制备化合物16b的程序：
在0-5℃下，向化合物16a(5.0g，28.89mmol)于EtOAc(50mL)和MeOH(50mL)中的溶液中添加TMSCHN2(29mL，57.76mmol，2M的己烷溶液)。在28-36℃(室温)下搅拌混合物1.5小时。减压浓缩反应混合物，得到呈褐色固体状的化合物16b(4.8g，82.5％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.882min，MS(ESI)m/z＝187.8[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ6.05-5.94(m，2H)，5.93-5.72(m，2H)，3.76(s，3H)。
用于制备化合物16c的程序：
将化合物16b(2.70g，14.42mmol)于i-PrOH(50mL)中的搅拌溶液冷却至0℃并分数份添加NCS(2.02g，15.15mmol)，在0℃至30℃下搅拌所得黄色悬浮液12小时，同时用LCMS监测(逐渐变澄清)。直接真空浓缩反应混合物，得到粗产物，在硅胶上通过快速柱色谱法(条件：65-75％B(A：0.05％TFA/水；B：MeOH)；流动速率：40ml/min)纯化，得到呈白色固体状的化合物16c(1000mg纯度87.20％及500mg起始物质)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.905min，MS(ESI)m/z＝189.9[M-32]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.04(br s，2H)，6.61(dd，J＝1.8，11.8Hz，1H)，3.82(s，3H)。
用于制备化合物16d的程序：
在0-5℃下，向化合物16c(500mg，2.26mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加CH3MgBr(3mL，3M的乙醚溶液)。在24-29℃下搅拌黄色溶液1.5小时(黄色溶液)。通过添加NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应混合物，接着用EtOAc(3×10mL)萃取。用盐水(3×10mL)洗涤有机层，并直接真空浓缩，得到呈白色固体状的化合物16d(450mg，74％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.900min，MS(ESI)m/z＝203.9[M-OH]+。
用于制备化合物16e的程序：
向化合物16d(450mg，2.03mmol)和DIEA(394mg，3.05mmol)于CH2Cl2(10mL)中的溶液中添加2，4-二氯-1，3，5-三嗪(335mg，2.23mmol)。在24-29℃(室温)下搅拌所得白色混合物2小时。通过添加NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应混合物，接着用EtOAc(3×10mL)萃取。用盐水(3×10mL)洗涤有机层，并直接真空浓缩，得到呈白色固体状的化合物16e(500mg，30％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.927min，MS(ESI)m/z＝334.9[M+H]+。
用于制备化合物16f的程序：
向化合物16e(100mg×3，0.90mmol)和化合物2g(80mg，0.30mmol)于n-BuOH(2mL)中的三份独立溶液中添加TFA(0.02mL)。在25-33℃下搅拌所得混合物3小时(红色混合物)。直接真空浓缩反应混合物，得到粗产物，在硅胶上通过快速柱色谱法(条件：87-89％B(A：0.05％TFA/水；B：MeOH)；流动速率：40ml/min)纯化，得到呈红色固体状的化合物16f(150mg，纯度97.18％，30％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.792min，MS(ESI)m/z＝567.3[M+H]+。
用于制备化合物16g的程序：
向化合物16f(150mg，0.26mmol)于MeOH(5mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加Zn(87mg，1.32mmol)和NH4Cl(142mg，2.65mmol)。在N2下，在70℃下搅拌混合物1.5小时(黑色混合物)。通过添加NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应混合物，接着用EtOAc(3×10mL)萃取。用盐水(3×10mL)洗涤有机层，干燥并直接真空浓缩，得到呈褐色油状的化合物16g(120mg，84.6％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.802min，MS(ESI)m/z＝537.1[M+H]+。
用于制备实施例16的程序：
向化合物16g(120mg，0.22mmol)和DIEA(43mg，0.33mmol)于DMF(1mL)中的溶液中添加溶于DMF(1mL)中的丙烯酰氯(20mg，0.22mmol)。在0℃下搅拌30分钟所得褐色混合物。反应物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：62-92％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例16(27.6mg，21％产率)。
LCMS：在10-80CD_3MIN_220&254色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝2.310min，MS(ESI)m/z＝591.2[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ML色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm)中，Rt＝4.78min。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.23(br s，1H)，10.05(br s，1H)，9.24(brs，1H)，8.35-8.27(m，2H)，7.01(s，1H)，6.82(br s，1H)，6.42(br s，1H)，6.18(br d，J＝16.8Hz，1H)，5.72(br d，J＝10.8Hz，1H)，3.77(s，3H)，2.90(br s，2H)，2.77-2.68(m，3H)，2.45-2.31(m，2H)，2.24(br s，6H)，1.61(br s，6H)。
实施例17
N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-((3aR，6aR)-5-甲基六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-1(2H)-基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000951
用于制备化合物17b的程序：
向化合物1d(200mg，0.444mmol)和K2CO3(123mg，0.888mmol)于DMSO(6mL)中的溶液中添加化合物17a(67mg，0.533mmol)。在85℃下搅拌反应混合物1小时(由淡黄色变为橙色)。在冰水浴下，将反应混合物逐滴添加至H2O(80mL)中并通过过滤收集沉淀的固体，用H2O(15mL×3)洗涤滤饼，接着在高真空中干燥，得到呈橙色固体状的化合物17b(200mg，81％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.717min，MS(ESI)m/z＝＝557.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.24(br s，2H)，8.03(br s，1H)，7.21(dd，J＝8.4，12.0Hz，1H)，6.58(s，1H)，4.56-4.39(m，1H)，3.96(s，3H)，3.61(dt，J＝6.8，10.4Hz，1H)，3.18(t，J＝8.8Hz，1H)，3.07(quin，J＝7.6Hz，1H)，2.83(t，J＝8.8Hz，1H)，2.79-2.69(m，1H)，2.39(dd，J＝7.2，9.6Hz，1H)，2.26(s，3H)，2.20(dd，J＝3.2，10.0Hz，1H)，2.14-2.02(m，1H)，1.92(dd，J＝6.4，12.4Hz，1H)，1.60(s，6H)。
用于制备化合物17c的程序：
向化合物17b(200mg，0.36mmol)于MeOH(15mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，20mg)。在氢气球(15Psi)下，在25-31℃下搅拌反应混合物3小时。过滤反应混合物，并真空浓缩滤液，得到呈浅灰绿色固体状的化合物17c(168mg，88.6％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.675min，MS(ESI)m/z＝527.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.21(br s，2H)，7.47(br s，1H)，7.22(dd，J＝9.0，12.4Hz，1H)，6.86(s，1H)，4.15-4.03(m，1H)，3.79(s，3H)，3.48-3.38(m，1H)，3.00-2.88(m，1H)，2.74-2.65(m，2H)，2.62(d，J＝10.0Hz，1H)，2.45(dd，J＝7.8，9.2Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.19-2.09(m，2H)，1.85-1.71(m，1H)，1.60(s，6H)。
用于制备实施例17的程序：
在冰水浴下，向化合物17c(155mg，0.294mmol)和DIEA(57mg，0.441mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(27mg，0.294mmol)。在5-10℃下搅拌所得混合物0.5小时。利用H2O(0.1mL)淬灭反应，接着过滤。滤液通过制备型HPLC(色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：30-60％B(A：0.05％氨水，B：CH3CN)；流动速率：25ml/min)纯化并冻干，得到呈白色固体状的实施例17(39.1mg，22.90％产率)。
LCMS：在10-80CD_3min_220&254.1cm色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝1.990min，MS(ESI)m/z＝581.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.65(br s，1H)，9.90(br s，1H)，9.59(br s，1H)，8.40(s，1H)，8.32(dd，J＝8.0，12.8Hz，1H)，7.67(br s，1H)，7.10(dd，J＝8.8，12.0Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.56-6.44(m，1H)，6.44-6.33(m，1H)，6.00(br s，1H)，5.76(d，J＝10.0Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.68(dd，J＝4.4，7.8Hz，1H)，3.22(t，J＝7.2Hz，1H)，2.93-2.78(m，3H)，2.72(d，J＝10.0Hz，1H)，2.29(s，5H)，1.90(dd，J＝4.4，10.4Hz，1H)，1.87-1.80(m，1H)，1.76(s，6H)。
实施例18
N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-(甲基(2-(吡咯烷-1-基)乙基)氨基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000961
用于制备化合物18b的程序：
向化合物1d(200mg，1.0eq，0.44mmol)和K2CO3(243mg，4.0eq，1.76mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加化合物18a(133mg，1.5eq，0.66mmol)。在85℃下搅拌所得混合物4小时，同时颜色从浅黄色变为深黄色。将反应混合物倒入冰水(50mL)中且黄色固体沉淀。通过过滤收集沉淀的黄色固体，接着用CH2Cl2(30mL)溶解，经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物18b(230mg，93％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.754min，MS(ESI)m/z＝559.3[M+H]+。
用于制备化合物18c的程序：
向化合物18b(230mg，1.0eq，0.41mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(23mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在氢气球(15Psi)下，在25-28℃(室温)下搅拌1小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈褐色固体状的化合物18c(200mg，92％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.678min，MS(ESI)m/z＝529.1[M+H]+。
用于制备实施例18的程序：
向化合物18c(200mg，1.0eq，0.38mmol)和DIEA(98mg，2.0eq，0.76mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中添加溶于DMF(0.5mL)中的丙烯酰氯(34mg，1.0eq，0.38mmol)。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应混合物通过RP-HPLC(反相HPLC)[色谱柱：反相色谱柱；条件：50-70％B(A：0.25％NH3HCO3；B：MeOH)；流动速率：40ml/min]纯化，减压浓缩洗脱份并冻干，得到呈白色固体状的化合物实施例18(45.7mg，20％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.716min，MS(ESI)m/z＝583.2[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝3.24min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.65(br s，1H)，9.89(br s，2H)，8.40(s，1H)，8.32(dd，J＝8.0，12.8Hz，1H)，7.67(br s，1H)，7.10(dd，J＝8.4，12.0Hz，1H)，6.74(s，2H)，6.38(d，J＝16.8Hz，1H)，5.77(br d，J＝10.8Hz，1H)，3.88(s，3H)，3.06(br s，2H)，2.91-2.74(m，4H)，2.70(s，5H)，1.94(br s，4H)，1.76(s，6H)。
实施例19
(R)-N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(2-((二甲基氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000981
用于制备化合物19a的程序：
向化合物1d(300mg，1.0eq，0.67mmol)和K2CO3(926mg，10.0eq，6.70mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加(R)-1-(氮杂环丁烷-2-基)-N，N-二甲基甲胺三氟乙酸盐(2.0g，10.0eq，6.70mmol)。在85℃下搅拌所得混合物4小时，同时颜色从浅黄色变为深黄色。将反应混合物倒入冰水(50mL)中且黄色固体沉淀。通过过滤收集沉淀的固体并用CH2Cl2(20mL)溶解，经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物19a(300mg)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.734min，MS(ESI)m/z＝567.2[M+Na]+。
用于制备化合物19b的程序：
向化合物19a(300mg，1.0eq，0.55mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(30mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在H2(氢气球，15Psi)下，在24-29℃下搅拌2小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈褐色固体状的化合物19b(270mg)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.679min，MS(ESI)m/z＝515.3[M+H]+。
用于制备实施例19的程序：
向化合物19b(270mg，1.0eq，0.52mmol)和DIEA(134mg，2.0eq，1.04mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中添加溶于DMF(0.5mL)中的丙烯酰氯(47mg，1.0eq，0.52mmol)。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应混合物通过制备型HPLC[色谱柱：WatersXbridge 150*25 5μm；条件：20-50％B(A：0.05％NH3H2O；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例19(77.5mg)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.658min，MS(ESI)m/z＝568.8[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝2.89min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.49(br s，1H)，9.40(br s，1H)，8.94(br s，1H)，8.38(s，1H)，8.30(dd，J＝7.9，12.9Hz，1H)，7.67-7.44(m，1H)，7.09(dd，J＝8.7，12.2Hz，1H)，6.63(s，1H)，6.43-6.29(m，2H)，5.80(br d，J＝10.3Hz，1H)，4.30-4.17(m，1H)，3.90(s，3H)，3.86(br s，1H)，3.58(q，J＝8.0Hz，1H)，2.66(dd，J＝5.9，12.9Hz，1H)，2.49-2.37(m，2H)，2.26(s，6H)，2.15-2.05(m，1H)，1.74(s，6H)。
实施例20
(R)-N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-(甲基((1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870000991
用于制备化合物20b的程序：
向化合物1d(300mg，0.666mmol)和K2CO3(184mg，1.332mmol)于DMSO(6mL)中的溶液中添加化合物20a(160mg，0.793mmol)。在85℃下搅拌反应混合物6小时，同时从浅黄色变为橙色。在冰水浴下，将反应混合物逐滴添加至H2O(80mL)中且固体沉淀析出，通过过滤收集并用H2O(15mL×3)洗涤滤饼，真空干燥，得到呈橙色固体状的化合物20b(300mg，81％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.731min，MS(ESI)m/z＝559.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.37(br s，1H)，8.27(br s，1H)，8.05(br s，1H)，7.22(dd，J＝8.8，12.4Hz，1H)，6.83(s，1H)，3.97(s，3H)，3.54(dd，J＝5.2，13.6Hz，1H)，3.23-3.00(m，2H)，2.90(s，3H)，2.67-2.54(m，1H)，2.44(s，3H)，2.29(q，J＝9.2Hz，1H)，2.12-1.97(m，1H)，1.81-1.68(m，2H)，1.60(s，6H)，1.57-1.47(m，1H)。
用于制备化合物20c的程序：
向化合物20b(300mg，0.537mmol)于MeOH(15mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，30mg)。在氢气球(15Psi)下，在25-31℃下搅拌反应混合物3小时。过滤反应混合物，并真空浓缩滤液，得到呈褐色固体状的化合物20c(260mg，79.4％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.686min，MS(ESI)m/z＝529.2[M+H]+。
用于制备实施例20的程序：
在冰水浴中，向化合物20c(260mg，0.427mmol)和DIEA(83mg，0.64mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(39mg，0.427mmol)。在5-10℃下搅拌所得混合物0.5小时。利用H2O(0.1mL)淬灭反应，接着过滤，滤液通过制备型HPLC(色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：50-80％B(A：0.05％氨水，B：CH3CN)；流动速率：25ml/min)纯化并冻干，得到呈白色固体状的实施例20(44.4mg，17.9％产率)。
LCMS：在10-80CD_3min_220&254.1cm色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝2.208min，MS(ESI)m/z＝583.3[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ML色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝4.39min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.58(br s，1H)，10.08(br s，1H)，10.01(br s，1H)，8.40(s，1H)，8.31(dd，J＝8.0，13.2Hz，1H)，7.65(br s，1H)，7.10(dd，J＝8.8，12.0Hz，1H)，6.71(s，1H)，6.39(br s，1H)，6.38(br s，1H)，6.04(br s，1H)，5.77(t，J＝5.6Hz，1H)，3.88(s，3H)，3.18-3.03(m，1H)，2.87-2.80(m，1H)，2.74(s，3H)，2.71-2.64(m，2H)，2.56(s，3H)，2.41-2.33(m，1H)，1.97(qd，J＝8.8，12.4Hz，1H)，1.79-1.72(m，8H)，1.43-1.35(m，1H)。
实施例21
(R)-N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(2-((二甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001001
用于制备化合物21b的程序：
在90℃下，将化合物1d(150mg，0.33mmol)、化合物21a(101mg，0.50mmol)和K2CO3(91mg，0.66mmol)于DMSO(3mL)中的溶液搅拌3小时。将反应混合物倒入冰水(15mL)中，接着搅拌30分钟，收集沉淀的固体并将滤饼溶解于CH2Cl2(35mL)中，经硫酸钠脱水，过滤并真空浓缩滤液，得到呈黄色固体状的化合物21b(220mg，粗品)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.75(brs，1H)，8.88(brs，1H)，8.30(s，1H)，8.17(s，1H)，7.26(s，1H)，7.01(dd，J＝8.4Hz，12.0Hz，1H)，6.63(s，1H)，3.88(s，3H)，3.58-3.50(m，1H)，2.61-2.56(m，2H)，2.36-2.28(m，1H)，2.26-2.19(m，7H)，1.96-1.91(m，1H)，1.83-1.65(m，3H)，1.62(s，6H)。
用于制备化合物21c的程序：
在氢气球下，在25-31℃下将化合物21b(200mg粗品，0.33mmol)和Pd/C(20mg)于MeOH(3mL)中的溶液搅拌1小时(深色混合物)。过滤反应混合物，并真空浓缩滤液，得到呈绿色固体状的化合物21c(180mg，粗品)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.75(brs，1H)，8.29-8.15(m，2H)，7.80-7.50(m，2H)，7.01(dd，J＝9.2Hz，12.4Hz，1H)，6.64(s，1H)，3.74(s，3H)，3.36-3.31(m，2H)，2.60-2.53(m，1H)，2.25-2.15(m，2H)，2.13(s，6H)，1.87-1.82(m，2H)，1.68-1.63(m，1H)，1.61-1.56(m，7H)。
用于制备实施例21的程序：
在0℃下，向化合物21c(180mg，粗品，0.33mmol)和DIEA(85mg，0.66mmol)于DMF(3mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(30mg，0.33mmol)。在0℃下搅拌黑色混合物1小时。反应混合物通过制备型HPLC纯化：[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：40-70％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例21(40.6mg，经3个步骤21％)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.856min，MS(ESI)m/z＝583.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.65(brs，1H)，10.06(brs，1H)，9.88(s，1H)，8.40(s，1H)，8.32(dd，J＝8.0Hz，12.8Hz，1H)，7.68(s，1H)，7.10(dd，J＝8.8Hz，12.4Hz，1H)，6.71(s，1H)，6.41-6.30(m，2H)，6.05(brs，1H)，5.78(dd，J＝3.2Hz，8.0Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.33-3.28(m，2H)，3.02-2.93(m，1H)，2.29(dd，J＝8.0Hz，12.4Hz，1H)，2.17-2.07(m，7H)，2.01-1.84(m，3H)，1.76(s，6H)，1.72-1.64(m，1H)。
HPLC：在10-80AB_1.2ml色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝3.26min。
实施例22
N-(2-((2-(双(甲基-d3)氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-((4，5-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基)氨基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001021
用于制备化合物22b的程序：
向化合物22a(500mg，2.87mmol)和K2CO3(793mg，5.74mmol)于THF(20mL)中的溶液中添加CD3I(624mg，4.30mmol)。在26-33℃下搅拌混合物1小时，同时固体沉淀析出。接着，将CD3I(208mg，0.5eq，1.43mmol)添加至混合物中并在26-33℃下再搅拌1小时。过滤反应混合物并减压浓缩有机层，得到呈无色固体状的化合物22b(300mg，50％产率)。LCMS：在0-60AB_2MIN_E.M色谱(Xtimate C18，2.1×30mm，3μm)中，Rt＝0.743min，MS(ESI)m/z＝209.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.24-3.18(m，1H)，3.12(t，J＝6.8Hz，1H)，2.78(br s，3H)，2.62(br t，J＝6.7Hz，1H)，2.34-2.26(m，1H)，1.38(s，9H)。
用于制备化合物22c的程序：
向化合物22b(300mg，1.0eq，1.44mmol)于CH2Cl2(5mL)中的溶液中添加HCl-二噁烷(5mL，4M)。在22-27℃下搅拌所得混合物2小时。减压浓缩反应混合物，得到呈黄色油状的化合物22c(250mg，95％产率)。
LCMS：在0-60AB_2MIN_E.M色谱(Xtimate C18，2.1×30mm，3μm)中，Rt＝0.098min，MS(ESI)m/z＝109.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.43-3.37(m，1H)，3.36-3.22(m，1H)，3.16(br s，2H)，2.56(br s，3H)。
用于制备化合物22d的程序：
向化合物22c(250mg，0.55mmol)和K2CO3(304mg，2.20mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加化合物6d(250mg，1.38mmol)。在22-27℃下搅拌所得混合物12小时，同时颜色从浅褐色变为深黄色。用EtOAc(20mL)稀释反应混合物并用盐水(2×30mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(CH2Cl2/MeOH＝10/1)纯化，得到呈黄色固体状的化合物22d(90mg，30％产率)。
LCMS：在10-80AB_7min_220&254.1cm色谱(Xtimate C18 2.1×30mm)中，Rt＝2.414min，MS(ESI)m/z＝539.0[M+H]+。
用于制备化合物22e的程序：
向化合物22d(90mg，1.0eq，0.17mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(9mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在氢气球(15Psi)下，在23-28℃下搅拌2小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈无色油状的化合物22e(70mg，81％产率)。通过LCMS确定结构和纯度(Rt＝0.698分钟，509.4[M+H]+)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.698min，MS(ESI)m/z＝509.4[M+H]+。
用于制备实施例22的程序：
在0℃下，向化合物22e(70mg，0.14mmol)和DIEA(36mg，0.28mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中逐滴添加化合物丙烯酰氯(13mg，0.14mmol)于DMF(0.5mL)中的溶液。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应混合物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge150×25 5μm；条件：38-68％B(A：0.05％NH3H2O；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例22(21.9mg，28％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1×30mm)中，Rt＝1.790min，MS(ESI)m/z＝563.0[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3×50mm 3μm)中，Rt＝3.06min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.68(br s，1H)，10.46(br s，1H)，9.97(br s，1H)，8.41(s，1H)，8.32(dd，J＝8.0，12.8Hz，1H)，7.69(br s，1H)，7.11(dd，J＝8.8，12.2Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.44-6.30(m，2H)，6.11(br s，1H)，5.80-5.73(m，1H)，3.88(s，3H)，2.88(br s，2H)，2.71(s，3H)，2.29(br s，2H)，1.77(s，6H)。
实施例23
N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(3-((二甲基氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001041
用于制备化合物23b的程序：
在90℃下，将化合物1d(150mg，0.318mmol)、化合物23a(60mg，0.318mmol)和K2CO3(175mg，1.27mmol)于DMSO(2mL)中的混合物搅拌3小时(褐色悬浮液)。用冰水(8mL)淬灭反应，接着过滤，并用H2O(5mL)洗涤滤饼，在高真空中干燥，得到呈黄色固体状的化合物23b(180mg，74.3％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.710min，MS(ESI)m/z＝545.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.05(brs，1H)，8.98(brs，1H)，8.37(s，1H)，8.24(s，1H)，7.28(m，1H)，7.11-7.05(m，1H)，5.97(s，1H)，4.17(d，J＝8.0Hz，2H)，3.93(s，3H)，3.67-3.63(m，2H)，2.95-2.88(m，1H)，2.57(d，J＝7.6Hz，2H)，2.43(s，6H)，1.69(s，6H)。
用于制备化合物23c的程序：
在氢气球下，在23-28℃下将化合物23b(180mg，0.33mmol)和Pd/C(180mg，10％)于EtOAc(20mL)和MeOH(5mL)中的混合物搅拌3小时(变为褐色混合物)。过滤反应物并用EtOAc(50mL)冲洗滤饼，真空浓缩滤液，得到呈黄色固体状的化合物23c(140mg，82.3％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.660min，MS(ESI)m/z＝515.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 9.63(brs，1H)，8.23-8.17(m，2H)，7.59(s，1H)，7.49(s，1H)，7.04-6.98(m，1H)，6.17(m，1H)，3.94(t，J＝7.2Hz，2H)，3.50(s，3H)，3.41(t，J＝7.6Hz，2H)，2.85-2.77(m，1H)，2.55-2.48(m，2H)，2.17(s，6H)，1.59(s，6H)。
用于制备实施例23的程序：
在冰水浴下，经1小时向化合物23c(140mg，0.27mmol)和DIEA(105mg，0.81mmol)于DMF(3mL)中的混合物中逐滴添加丙烯酰氯(29.9mg，0.33mmol)于DMF(1mL)中的溶液。在0-5℃下搅拌反应30分钟(褐色溶液)后，用H2O(0.1mL)淬灭反应且所得溶液直接通过制备型HPLC[Waters Xbridge 150*25.5μm；条件：37-57％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈黄色固体状的实施例23(32.4mg，20.9％产率)。
LCMS：在0-60AB_4.0min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.172min，MS(ESI)m/z＝569.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.35-8.27(m，2H)，7.50(s，1H)，7.30-7.27(m，1H)，7.10-7.25(m，1H)，6.41-6.27(m，3H)，5.80(d，J＝10.0Hz，2H)，3.99(t，J＝7.6Hz，2H)，3.87(s，3H)，3.50(t，J＝7.2Hz，2H)，2.94-2.87(m，1H)，2.54(d，J＝8.0Hz，2H)，2.23(s，6H)，1.71(s，6H)。
HPLC：Rt＝2.24min。HPLC-P Venusil XBP C18 3*50mm，方法\0-60AB_1.2ML.MET
实施例24
N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-(甲基(2-(哌啶-1-基)乙基)氨基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001061
用于制备化合物24b的程序：
向化合物24a(1.0g，6.77mmol)和甲胺(1.4g，20.31mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加溶于5ml水中的KOH(760mg，13.55mmol)和催化量的KI(225mg，1.35mmol)。在50℃至80℃下加热所得混合物18小时。用HCl(1M)处理反应物以调至pH＝7，接着用EtOAc(3×10mL)萃取。用盐水(3×10mL)洗涤有机层，干燥并减压浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(CH2Cl2/MeOH＝10/1(v/v))纯化，得到呈无色油状的化合物24b(120mg，12.5产率)。
LCMS：在10-80CD_4MIN(XBrige Shield RP18 2.1×50mm)中，Rt＝1.688min(MSDTIC)，MS(ESI)m/z＝143.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.57-2.47(m，2H)，2.46-2.30(m，8H)，2.28-2.15(m，2H)，1.59-1.54(m，5H)，1.42(br d，J＝5.2Hz，2H)。
用于制备化合物24c的程序：
向化合物1d(190mg，0.42mmol)和K2CO3(116mg，0.84mmol)于DMSO(2mL)中的溶液中添加化合物24b(60mg，0.42mmol)。在28-33℃下搅拌混合物2小时。反应混合物在硅胶上通过快速柱色谱法(条件：65-75％B(A：0.05％TFA/水；B：MeOH)；流动速率：40ml/min))纯化，得到呈红色固体状的化合物24c(90mg，37.3％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.805min，MS(ESI)m/z＝573.2[M+H]+。
用于制备化合物24d的程序：
在N2保护下，向化合物24c(90mg，0.16mmol)于MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg)。在氢气球(15Psi)下，在26-33℃下搅拌黑色混合物1小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈褐色油状的化合物24d(70mg，82.1％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.764min，MS(ESI)m/z＝543.1[M-OH]+。
用于制备实施例24的程序：
向化合物24d(70mg，0.13mmol)和DIEA(25mg，0.19mmol)于DMF(1mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(12mg，0.13mmol)于DMF(1mL)中的溶液。在0℃下搅拌所得褐色混合物30分钟。反应物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150×25 5μm；条件：40-70％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例24(12.9mg，16.8％产率)。
LCMS：在10-80CD_7MIN_220&254色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝5.224min，MS(ESI)m/z＝597.3[M+H]+。
HPLC：Rt＝4.81纯度96.87％(220nm)；10-80_CD_1.2mL.MET(XBridge Shield RP18 2.1×50mm 5μm)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.26(br s，1H)，9.33(s，1H)，9.14(br s，1H)，8.25(s，1H)，8.14(s，1H)，7.26(br s，1H)，6.96(br s，1H)，6.59(dd，J＝10.4，16.8Hz，1H)，6.31-6.12(m，2H)，5.72(br d，J＝10.4Hz，1H)，3.77(s，3H)，2.98(br t，J＝6.4Hz，2H)，2.70(s，3H)，2.40-2.22(m，6H)，1.57-1.44(m，10H)，1.37(br d，J＝4.0Hz，2H)，1.24(br s，1H)。
实施例25
N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-((3aS，6aS)-5-甲基六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-1(2H)-基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001071
用于制备化合物25b的程序：
向化合物1d(200mg，0.444mmol)和K2CO3(123mg，0.888mmol)于DMSO(4mL)中的溶液中添加化合物25a(196mg，1.554mmol)。在85℃下搅拌浅黄色反应混合物3小时(从褐色变为橙色)。在冰水浴下，将反应混合物逐滴添加至H2O(40mL)中，同时固体沉淀析出。通过过滤收集沉淀的固体并用H2O(15mL×3)洗涤，接着在高真空中干燥，得到呈橙色固体状的化合物25b(230mg，89.8％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.709min，MS(ESI)m/z＝557.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.04(br s，1H)，8.30(br s，1H)，8.19(s，1H)，7.48(brs，1H)，7.06(dd，J＝8.4，12.0Hz，1H)，6.37(s，1H)，4.45-4.33(m，1H)，3.92(s，3H)，3.53(dt，J＝6.4，10.4Hz，1H)，3.15(t，J＝8.4Hz，1H)，3.01(quin，J＝7.2Hz，1H)，2.67(t，J＝8.8Hz，1H)，2.61-2.51(m，1H)，2.39(br dd，J＝6.4，9.2Hz，1H)，2.23(d，J＝9.2Hz，1H)，2.19(s，3H)，2.12-1.99(m，1H)，1.86(dd，J＝6.0，12.4Hz，1H)，1.65(s，6H)。
用于制备化合物25c的程序：
向化合物25b(230mg，0.338mmol)于MeOH(15mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，25mg)。在氢气球(15Psi)下，在22-28℃下搅拌反应混合物3小时。过滤反应混合物，并真空浓缩滤液，得到呈灰绿色油状的化合物25c(180mg，82％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.667min，MS(ESI)m/z＝527.2[M+H]+。
用于制备实施例25的程序：
在冰水浴下，向化合物25c(170mg，0.33mmol)和DIEA(64mg，0.50mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(29mg，0.33mmol)。在5-10℃下搅拌所得混合物0.5小时。利用H2O(0.1mL)淬灭反应，接着过滤，滤液通过制备型HPLC(色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：30-60％B(A：0.05％氨水，B：CH3CN)；流动速率：25ml/min)纯化并冻干，得到呈白色固体状的实施例25(48.0mg，25.1％产率)。
LCMS：在10-80CD_3min_220&254(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝1.982min，MS(ESI)m/z＝581.3[M+H]+。
HPLC：Rt＝3.94纯度96.04％(220nm)；10-80_CD_1.2mL.MET(XBridge Shield RP18 2.1*50mm 5μm)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.66(br s，1H)，9.92(br s，1H)，9.59(br s，1H)，8.40(s，1H)，8.33(dd，J＝8.0，12.8Hz，1H)，7.68(br s，1H)，7.10(dd，J＝8.8，12.0Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.53-6.34(m，2H)，5.99(br s，1H)，5.76(d，J＝9.6Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.72-3.60(m，1H)，3.21(t，J＝7.2Hz，1H)，2.92-2.78(m，3H)，2.71(d，J＝10.0Hz，1H)，2.33-2.31(m，1H)，2.29(s，3H)，2.23-2.17(m，1H)，1.90(dd，J＝4.0，10.0Hz，1H)，1.87-1.80(m，1H)，1.76(br s，6H)。
实施例26
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-(甲基(2-(哌啶-1-基)乙基)氨基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001091
用于制备化合物26b的程序：
向化合物26a(1.0g，6.77mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加DIEA(1.8g，13.55mmol)和甲胺盐酸盐(10mL，20.31mmol，2M的THF溶液)。搅拌所得混合物18小时。用HCl(1M)处理反应物以调至pH＝7，接着用EtOAc(3×10mL)萃取。用盐水(3×10mL)洗涤有机层，干燥并减压浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(CH2Cl2/MeOH＝10/1(v/v))纯化，得到呈无色油状的化合物26b(120mg，12.5％产率)。
LCMS：在10-80CD_4MIN(XBrige Shield RP18 2.1×50mm)中，Rt＝1.688min，MS(ESI)m/z＝143.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.57-2.47(m，2H)，2.46-2.30(m，8H)，2.28-2.15(m，2H)，1.59-1.54(m，5H)，1.42(br d，J＝5.0Hz，2H)。
用于制备化合物26c的程序：
向化合物26b(197mg，0.42mmol)和K2CO3(116mg，0.84mmol)于DMSO(2mL)中的溶液中添加化合物11c(60mg，0.42mmol)。在23-28℃下搅拌混合物2小时。通过Biotage快速反相C-18柱色谱法，用MeOH/H2O(55％至60％的甲醇水溶液)洗脱对其进行纯化，得到呈红色固体状的化合物26c(150mg，60.4％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.826min，MS(ESI)m/z＝589.1[M+H]+。
用于制备化合物26d的程序：
向化合物26c(150mg，0.26mmol)于MeOH(5mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加Zn(87mg，1.32mmol)和NH4Cl(142mg，2.65mmol)。在N2下，在70℃下搅拌混合物1.5小时(黑色混合物)。通过添加NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应混合物，接着用EtOAc(3×10mL)萃取。用盐水(3×10mL)洗涤有机层，干燥并直接真空浓缩，得到呈褐色油状的化合物26d(120mg，84.4％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.783min，MS(ESI)m/z＝559.1[M-OH]+。
用于制备实施例26的程序：
在0℃下，向化合物26d(120mg，0.21mmol)和DIEA(42mg，0.32mmol)于DMF(1mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(19mg，0.21mmol)于DMF(1mL)中的溶液。在0℃下搅拌所得褐色混合物30分钟。反应物通过Biotage快速反相C-18柱色谱法[条件：75-80％B(A：0.05％NH4HCO3水溶液；B：CH3CN)；流动速率：40ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例26(47.2mg，35.9％产率)。
LCMS：在10-80CD_7MIN_220&254色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝5.365min，MS(ESI)m/z＝613.3[M+H]+。
HPLC：Rt＝4.83纯度97.09％(220nm)，10-80_CD_1.2mL.MET(XBridge Shield RP18 2.1×50mm 5μm)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.19(br s，1H)，9.34(br s，1H)，9.08(br s，1H)，8.25(s，1H)，8.12(s，1H)，7.26(br s，1H)，6.97(br s，1H)，6.60(br s，1H)，6.30(s，1H)，6.19(br d，J＝17.1Hz，1H)，5.72(br d，J＝10.3Hz，1H)，3.79(s，3H)，2.98(br s，2H)，2.69(s，3H)，2.34(br s，6H)，1.57-1.31(m，13H)。
实施例27
(R)-N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001111
用于制备化合物27a的程序：
向化合物1d(180mg，0.40mmol)、K2CO3(110.6mg，0.80mmol)于DMSO(4mL)中的溶液中添加(R)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺(54.8mg，0.48mmol)。在24-27℃下搅拌所得混合物2小时。将反应混合物与浸浴1359-035的混合物合并，并在搅拌下，小心地倒入水(50mL)中，黄色固体沉淀。通过过滤收集沉淀的固体并用CH2Cl2(20mL)溶解，经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物27a(210mg，87％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.705min，MS(ESI)m/z＝545.1[M+H]+。
用于制备化合物27b的程序：
向化合物27a(210mg，0.39mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(35mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在氢气球(15Psi)下，在23-29℃下搅拌2小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈褐色固体状的化合物27b(170mg，84.7％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.667min，MS(ESI)m/z＝515.2[M+H]+。
用于制备实施例27的程序：
向化合物27b(100mg，0.19mmol)和DIEA(50mg，0.38mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加溶于DMF(1mL)中的丙烯酰氯(17mg，0.19mmol)。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物20分钟。利用三滴水淬灭反应混合物并通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝7/1(v/v))纯化，得到呈白色固体状的不纯产物(100mg)，再通过制备型HPLC(色谱柱：Waters Xbridge150*25 5μm：30-60％B(A：水(0.05％氨水v/v)，B：CH3CN)，流动速率：25mL/min)纯化，得到呈白色固体状的实施例27(15mg，13.9％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.651min，MS(ESI)m/z＝568.9[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝3.17min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.59(br s，1H)，9.80(br s，1H)，8.49(br s，1H)，8.40(s，1H)，8.33(dd，J＝8.0，13.2Hz，1H)，7.64(br s，1H)，7.10(dd，J＝8.4，12.2Hz，1H)，6.76(s，1H)，6.40-6.36(m，2H)，5.84-5.78(m，1H)，3.88(s，3H)，3.15-3.07(m，4H)，2.90(br t，J＝7.2Hz，1H)，2.31(s，6H)，2.19(dt，J＝7.2，12.8Hz，1H)，2.00-1.90(m，1H)，1.76(s，6H)，3.87(s，3H)，2.40(s，6H)。
实施例28
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-((3aR，6aR)-5-甲基六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-1(2H)-基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001121
用于制备化合物28b的程序：
向化合物11c(300mg，0.64mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加碳酸钾(450mg，3.25mmol)和化合物28a(120mg，0.95mmol)。在85℃下搅拌混合物3小时。将混合物倒入冰水(30mL)中且固体沉淀析出。通过抽吸过滤分离固体并真空干燥，得到呈橙色固体状的化合物28b(320mg，87％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18，2.1×30mm，3μm)中，Rt＝1.868min，MS(ESI)m/z＝573.2[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.60(s，1H)，8.85(s，1H)，8.30(s，1H)，7.32(s，1H)，7.00(d，J＝10.4Hz，1H)，6.32(s，1H)，4.40-4.29(m，1H)，3.88(s，3H)，3.53-3.43(m，1H)，3.18-3.08(m，1H)，3.01-2.90(m，1H)，2.61-2.55(m，1H)，2.47-2.40(m，1H)，2.39-2.33(m，1H)，2.24-2.17(m，1H)，2.13(s，3H)，2.05-1.95(m，1H)，1.86-1.75(m，1H)，1.62(s，6H)。
用于制备化合物28c的程序：
向化合物28b(200mg，0.35mmol)于甲醇/水(5mL/1mL)中的溶液中添加NH4Cl(112mg，2.09mmol)和Zn(114mg，1.75mmol)。在氮气下，在90℃下搅拌所得混合物1小时。将混合物倒入水(20mL)中并用二氯甲烷(15mL×4)萃取。合并的有机层经硫酸钠脱水，过滤并真空浓缩，得到褐色胶状物，在硅胶上通过快速柱色谱法(0至10％甲醇/CH2Cl2)纯化，得到呈绿色固体状的化合物28c(110mg，57.8％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.716min，MS(ESI)m/z＝543.0[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，DMSO-d6)δ10.15(s，1H)，8.82(br.s，1H)，8.42(s，1H)，8.24(s，1H)，7.27(d，J＝10.4Hz，1H)，6.80(br.s，3H)，6.29(s，1H)，4.28-4.20(m，1H)，3.69(s，3H)，3.07-2.95(m，2H)，2.70-2.59(m，2H)，2.53(s，3H)，2.49-2.36(m，2H)，2.32-2.18(m，1H)，2.15-2.02(m，1H)，1.85-1.72(m，1H)，1.52(s，6H)。
用于制备实施例28的程序：
在0℃下，向化合物28c(90mg，0.17mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加DIEA(43mg，0.33mmol)，随后分三次添加丙烯酰氯(15mg，0.17mmol)。用水淬灭混合物并与前一批料合并以通过制备型HPLC进一步纯化(色谱柱：Waters Xbridge 150×25，5μm，条件：46％-66％B(A：水/10mM NH4HCO3，B：CH3CN)，流动速率：25mL/min)，得到呈白色固体状的实施例28(29.4mg，23.8％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1×30mm)中，Rt＝1.870min，MS(ESI)m/z＝597.1[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ml色谱(XBridge Shield RP 18 2.1×50mm 5μm)中，Rt＝3.84min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.53(s，1H)，9.85(s，1H)，9.52(s，1H)，8.40(d，J＝7.2Hz，1H)，8.34(s，1H)，7.60(s，1H)，7.02(d，J＝10.8Hz，1H)，6.70(s，1H)，6.42(br.s，1H)，6.35-6.26(m，1H)，5.98(br.s，1H)，5.69(d，J＝10.8Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.65-3.53(m，1H)，3.19-3.09(m，1H)，2.85-2.73(m，3H)，2.72-2.56(m，1H)，2.31-2.08(m，5H)，1.84-1.75(m，2H)，1.69(s，6H)。
实施例29
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-(甲基(2-(吡咯烷-1-基)乙基)氨基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001141
用于制备化合物29b的程序：
向化合物11c(200mg，0.43mmol)和K2CO3(119mg，0.86mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加化合物29a(105mg，0.52mmol)。在85℃下搅拌所得混合物4小时，同时颜色从浅黄色变为深黄色。将反应混合物倒入冰水(50mL)中且黄色固体沉淀。通过过滤收集沉淀的固体并用CH2Cl2(30mL)溶解，经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物29b(230mg，93％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.814min，MS(ESI)m/z＝575.1[M+H]+。
用于制备化合物29c的程序：
向化合物29b(230mg，0.40mmol)于MeOH(10mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加Zn(130mg，2.00mmol)和NH4Cl(214mg，4.00mmol)。在80℃下搅拌所得混合物2小时。过滤反应混合物并减压浓缩滤液，得到残余物，使其在EtOAc(2×10mL)与水(10mL)之间分配。合并的有机层经无水Na2SO4脱水，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体状的化合物29c(180mg，82％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.766min，MS(ESI)m/z＝545.1[M+H]+。
用于制备实施例29的程序：
向化合物29c(180mg，0.33mmol)和DIEA(85mg，0.66mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(30mg，0.33mmol)于DMF(0.5mL)中的溶液。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应混合物通过RP-HPLC(反相HPLC)[色谱柱：反相色谱柱；条件：42-72％B(A：0.25％NH3HCO3；B：MeOH)；流动速率：40ml/min]纯化。减压浓缩洗脱份并冻干，得到呈白色固体状的实施例29(47.4mg，20％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1×30mm)中，Rt＝1.912min，MS(ESI)m/z＝599.0[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3×50mm3μm)中，Rt＝3.41min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.61(br s，1H)，10.06(br s，1H)，9.96(br s，1H)，8.48(d，J＝7.6Hz，1H)，8.43(s，1H)，7.69(br s，1H)，7.10(d，J＝10.8Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.38(br d，J＝4.8Hz，2H)，6.13(br s，1H)，5.80-5.72(m，1H)，3.88(s，3H)，2.95(br s，2H)，2.69(s，3H)，2.55(br s，4H)，2.42(br s，2H)，1.83(br s，4H)，1.78(s，6H)。
实施例30
(R)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-(甲基((1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001151
用于制备化合物30a的程序：
向化合物11c(180mg，0.386mmol)和K2CO3(107mg，0.772mmol)于DMSO(3mL)中的溶液中添加(R)-N-甲基-1-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲胺(93mg，0.463mmol)。在85℃下搅拌反应混合物1小时(从黄色变为深橙色)。在冰水浴下，将反应混合物逐滴添加至H2O(40mL)中且固体沉淀析出。通过过滤收集固体并用H2O(15mL×3)洗涤，接着真空干燥，得到呈橙色固体状的化合物30a(227mg，82％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.743min，MS(ESI)m/z＝575.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.96(br s，1H)，8.88(br s，1H)，8.29(br s，2H)，7.51(brs，1H)，7.02(d，J＝10.4Hz，1H)，6.62(s，1H)，3.89(s，3H)，3.48-3.39(m，1H)，3.07(dd，J＝7.6，13.2Hz，1H)，3.01-2.95(m，1H)，2.80(s，3H)，2.54-2.43(m，1H)，2.34(s，3H)，2.22-2.15(m，1H)，2.02-1.91(m，1H)，1.75-1.65(m，2H)，1.63(s，6H)，1.54-1.46(m，1H)。
用于制备化合物30b的程序：
向化合物30a(227mg，0.316mmol)于MeOH/H2O＝5/1(5mL)中的溶液中添加Zn(124mg，6.0eq，1.896mmol)和NH4Cl(101mg，1.896mmol)。在90℃下加热所得混合物1小时(从橙色变为褐色)。过滤反应混合物，并真空浓缩滤液，得到粗残余物，用CH2Cl2(20mL)溶解，用水(15mL×3)洗涤，接着经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈褐色固体状的化合物30b(170mg，98％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.700min，MS(ESI)m/z＝545.2[M+H]+。
用于制备实施例30的程序：
在冰水浴下，向化合物30b(170mg，0.312mmol)和DIEA(60mg，0.468mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(28mg，0.312mmol)。在5-10℃下搅拌所得混合物10分钟。利用H2O(0.1mL)淬灭反应，接着过滤，滤液通过制备型HPLC(色谱柱：Waters Xbridge 150*255μm；条件：50-80％B(A：0.05％氨水，B：CH3CN)；流动速率：25ml/min)纯化，接着冻干，得到实施例30(78.1mg，41.8％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-D Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.983min，MS(ESI)m/z＝599.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.52(br s，1H)，10.09(br s，1H)，10.02(br s，1H)，8.46(d，J＝7.2Hz，1H)，8.41(s，1H)，7.65(br s，1H)，7.09(d，J＝10.8Hz，1H)，6.71(s，1H)，6.39(br s，1H)，6.38(br s，1H)，6.11(br s，1H)，5.77(t，J＝5.6Hz，1H)，3.88(s，3H)，3.20-3.02(m，1H)，2.89-2.78(m，1H)，2.74(s，3H)，2.71-2.63(m，2H)，2.56(s，3H)，2.45-2.30(m，1H)，2.06-1.88(m，1H)，1.77(br s，6H)，1.73-1.69(m，2H)，1.45-1.32(m，1H)。
实施例31
(R)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(2-((二甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001171
用于制备化合物31a的程序：
在85℃下，将化合物11c(180mg，0.38mmol)、(R)-N，N-二甲基-1-(吡咯烷-2-基)-甲胺二盐酸盐(74mg，0.58mmol)和K2CO3(106.6mg，0.77mmol)于DMSO(2mL)中的溶液搅拌1小时。在搅拌下，在冰水浴中将反应混合物添加至H2O(10mL)中，通过过滤收集沉淀的固体，接着用DCM(30mL)溶解，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈橙色油状的产物31a(310mg，88％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.758min，MS(ESI)m/z＝575.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCh)δ9.79(br s，1H)，8.86(br s，1H)，8.34(br s，2H)，7.33(brs，1H)，7.05(d，J＝10.4Hz，1H)，6.68(s，1H)，4.13-3.98(m，1H)，3.93(s，4H)，3.70-3.58(m，1H)，3.58(dt，J＝6.0，10.4Hz，2H)，2.46-2.31(m，2H)，2.05-1.93(m，1H)，1.92-1.79(m，9H)，1.73-1.62(m，6H)。
用于制备化合物31b的程序：
向化合物31a(300mg，0.52mmol)于MeOH/H2O＝5/1(9mL)中的溶液中添加Zn(170.55mg，2.61mmol)和NH4Cl(139.5mg，2.61mmol)。在90℃下加热所得混合物1小时。过滤反应混合物，并真空浓缩滤液，得到粗残余物，用CH2Cl2(30mL)溶解，用水(30mL×2)和盐水(30mL)洗涤，接着经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈褐色固体状的产物31b(160mg，56％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.693min，MS(ESI)m/z＝545.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.58(br s，1H)，8.35(br d，J＝7.2Hz，1H)，7.81(br s，1H)，7.71-7.48(m，1H)，7.07(br d，J＝10.4Hz，1H)，6.71(br s，1H)，5.30(s，1H)，4.05-3.85(m，2H)，3.81(br s，3H)，3.52-3.33(m，2H)，2.69-2.59(m，2H)，2.29-2.15(m，8H)，1.68(br d，J＝4.4Hz，6H)。
用于制备实施例31的程序：
在0℃下，向化合物31b(90mg，0.165mmol)和DIEA(31.9mg，0.53mmol)于DMF(2mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(14.9mg，0.165mmol)。在0℃下搅拌所得混合物1小时。利用H2O(0.1mL)淬灭反应，接着过滤，合并滤液并通过制备型HPLC(色谱柱：Gemini 150*25 5μm；流动相A：含0.05％氨水v/v的水，流动相B：DMF，流动速率：25ml/min，梯度时间：10min，特征说明：35％-65％)进一步纯化，得到呈黄色固体状的实施例31(20.1mg，11.4％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(ACSSH-LCMS-AS A：Xtimate C18，2.1*30mm，3μm；B：XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝1.826min，MS(ESI)m/z＝599.3[M+H]+。
HPLC：Rt＝3.9810-80_CD_1.2ml.met XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.59(br s，1H)，10.05(br s，1H)，9.89(br s，1H)，8.56-8.32(m，2H)，7.67(br s，1H)，7.09(d，J＝10.8Hz，1H)，6.69(s，1H)，6.37(br s，2H)，6.08(br s，1H)，5.86-5.72(m，1H)，3.86(s，3H)，3.31(br s，2H)，3.08-2.86(m，1H)，2.39(br s，1H)，2.29-2.13(m，6H)，2.09-1.91(m，3H)，1.76(s，8H)。
实施例32
N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-(4-(6-(2-羟基丙-2-基)-1-甲基-1H-吲哚-5-基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001191
用于制备化合物32a的程序：
向2-氟-4-甲基苯甲酸(10.0g，64.87mmol)于EtOAc(100mL)和MeOH(100mL)中的溶液中添加TMSCHN2(64.87mL，129.75mmol，2M的己烷溶液)。在28-36℃(室温)下搅拌混合物1.5小时。减压浓缩反应混合物，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1(v/v))纯化，得到呈白色固体状的化合物32a(9g，82.5％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.780min，MS(ESI)m/z＝169.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.76(t，J＝7.8Hz，1H)，6.93(d，J＝7.4Hz，1H)，6.88(d，J＝12.0Hz，1H)，3.84(s，3H)，2.32(s，3H)。
用于制备化合物32b的程序：
在0-5℃下，向化合物32a(9.0g，53.52mmol)于H2SO4(100mL)中的溶液中分数份添加KNO3(10.8g，107.04mmol)。在28-36℃下搅拌所得混合物1小时。减压浓缩反应混合物，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1)纯化，得到呈褐色固体状的化合物32b(10g，87％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.781min，MS(ESI)m/zNA。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.66(d，J＝6.6Hz，1H)，7.16(d，J＝10.6Hz，1H)，3.98(s，3H)，2.69(s，3H)。
用于制备化合物32c的程序：
向化合物32b(6.0g，28.15mmol)于DMSO(100mL)中的溶液中添加化合物二苯甲胺(8.3g，42.22mmol)和DIEA(7.3g，56.29mmol)。在120℃(室温)下搅拌混合物1.5小时。减压浓缩反应混合物，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1(v/v))纯化，得到呈褐色固体状的化合物32c(4.8g，44％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.947min，MS(ESI)m/z＝391.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.46(s，1H)，7.33-7.22(m，10H)，6.96(s，1H)，4.44(s，4H)，3.91(s，3H)，2.54(s，3H)。
用于制备化合物32d的程序：
向化合物32c(4.8g，12.30mmol)于DMF(20mL)中的溶液中添加DMF-DMA(4.4g，36.88mmol)，在150℃下搅拌混合物2小时。减压浓缩反应混合物，接着添加CH2Cl2(20mL)和Pd/C(480mg)并在氢气气氛(15Psi)下搅拌混合物2小时。过滤反应物，并将CH2Cl2(100mL)和H2O(300mL)添加至过滤物中。分离有机层并用盐水(3×100mL)洗涤，干燥并真空浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝5/1(v/v))纯化，得到呈褐色固体状的化合物32d(3.0g，66.7％产率)。
LCMS：在10-80AB_3MIN_220&254色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝1.395min，MS(ESI)m/z＝371.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.18(br s，1H)，7.98-7.93(m，1H)，7.63(s，1H)，7.42(t，J＝2.8Hz，1H)，7.35(s，2H)，7.34(s，2H)，7.31(s，1H)，7.27(s，1H)，7.25(s，2H)，7.23(s，1H)，7.18(s，1H)，6.31(br s，1H)，4.12(s，4H)，3.86(s，3H)。
用于制备化合物32e的程序：
向化合物32d(2.7g，7.29mmol)和Cs2CO3(7.1g，21.87mmol)于丙酮(50mL)中的溶液中添加CH3I(1.6g，10.93mmol)。在18-25℃下搅拌所得悬浮液18小时。过滤反应混合物并用NH4Cl水溶液(20mL)处理滤液，接着用CH2Cl2(25mL×2)萃取。干燥合并的有机层并减压浓缩，得到呈褐色固体状的化合物32e(2.6g，92.9％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5MIN_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.849min，MS(ESI)m/z＝385.2[M+H]+。
用于制备化合物32f的程序：
向化合物32e(3.5g，9.10mmol)于MeOH(50mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，300mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气三次，接着在氢气球(15Psi)下，在29-40℃下搅拌18小时。过滤反应混合物并减压浓缩滤液，得到呈褐色固体状的化合物32f(1.6g，86.5％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5MIN_220&254.1cm色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.536min，MS(ESI)m/z＝205.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.91(s，1H)，7.11(d，J＝3.2Hz，1H)，6.87(s，1H)，6.24(d，J＝2.4Hz，1H)，5.31(br s，2H)，3.93(s，3H)，3.76(s，3H)。
用于制备化合物32g的程序：
在0-5℃下，向化合物32f(1.0g，4.90mmol)于THF(50mL)中的溶液中逐滴添加CH3MgBr(8.2mL，3M的乙醚溶液)。在17-21℃下搅拌混合物1.5小时。通过添加NH4Cl水溶液(100mL)淬灭反应混合物，接着用EtOAc(3×100mL)萃取。用盐水(3×100mL)洗涤合并的有机层，干燥并减压浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20/1(v/v))纯化，得到呈褐色固体状的化合物32g(700mg，70％产率)。
LCMS：在10-80AB_7min_220&254.1cm色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.865min，MS(ESI)m/z＝186.9[M-17]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.14(s，1H)，6.98-6.96(m，2H)，6.27(d，J＝2.4Hz，1H)，4.11-3.80(m，2H)，3.74(s，3H)，1.77(s，6H)。
用于制备化合物32h的程序：
向化合物32g(200mg，0.98mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加化合物6e(323mg，1.08mmol)。在50℃下搅拌所得混合物2小时。在搅拌下，将反应物倒入冰水(50mL)中且黄色固体沉淀析出。通过过滤收集固体并用CH2Cl2(20mL)溶解，接着经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物32h(380mg，83.1％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.796min，MS(ESI)m/z＝490.1[M+Na]+。
用于制备化合物32i的程序：
向化合物32h(300mg，0.64mmol)于DMSO(4mL)中的溶液中添加N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(131mg，1.28mmol)，接着在14-19℃下搅拌2小时。在搅拌下，将反应物倒入冰水(50mL)中且黄色固体沉淀析出。通过过滤收集固体并用CH2Cl2(60mL)溶解，接着经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物32i(280mg，80％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.703min，MS(ESI)m/z＝550.2[M+H]+。
用于制备化合物32j的程序：
在N2下，向化合物32i(250mg，0.45mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(25mg，10％)。在氢气球(15Psi)下，在15-21℃下搅拌所得黑色混合物1小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈褐色油状的化合物32j(200mg，84.7％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.653min，MS(ESI)m/z＝520.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.47(br s，1H)，8.24(s，2H)，7.96(br s，1H)，7.73(br s，1H)，7.07(d，J＝2.4Hz，1H)，6.67-6.64(m，1H)，6.50(d，J＝2.4Hz，1H)，3.81-3.79(m，6H)，3.49(s，3H)，2.91(br t，J＝6.8Hz，2H)，2.62(s，4H)，2.37(br t，J＝6.8Hz，2H)，2.26-2.22(m，6H)，1.77(s，6H)。
用于制备实施例32的程序：
在0℃下，向化合物32j(200mg，0.38mmol)和DIEA(75mg，0.58mmol)于DMF(1mL)中的溶液中逐滴添加溶于DMF(1mL)中的丙烯酰氯(35mg，0.38mmol)。在0℃下搅拌所得褐色混合物30分钟。反应物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：30-50％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化，接着冻干，得到呈白色固体状的实施例32(57.8mg，26.2％产率)。LCMS：在10-80CD_7MIN_220&254色谱(XBrige Shield RP182.1*50mm)中，Rt＝4.478min，MS(ESI)m/z＝574.3[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2mL.MET(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝3.90min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.61(br s，1H)，10.42(br s，1H)，10.03(br s，1H)，8.41-8.39(m，2H)，7.59(br s，1H)，7.02(d，J＝2.8Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.48-6.44(m，2H)，6.37-6.30(m，1H)，6.00(br s，1H)，5.78(br d，J＝10.8Hz，1H)，3.88(s，3H)，3.79(s，3H)，2.88(br t，J＝5.2Hz，2H)，2.71(s，3H)，2.27(s，8H)，1.90(s，6H)。
实施例33
(R)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001231
用于制备化合物33a的程序：
向化合物11c(200mg，0.43mmol)和K2CO3(119mg，0.86mmol)于DMSO(4mL)中的溶液中添加化合物(R)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺(59mg，0.51mmol)。在24-27℃下搅拌所得混合物1小时。将反应混合物倒入水(50mL)中且黄色固体沉淀。通过过滤收集黄色固体并用CH2Cl2(20mL)溶解，经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的标题产物33a(220mg，91％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.789min，MS(ESI)m/z＝583.1[M+Na]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.69(br s，1H)，8.91(br s，1H)，8.38(br s，2H)，7.35(brs，1H)，7.08(d，J＝10.4Hz，1H)，6.28(s，1H)，3.92(s，3H)，3.59-3.51(m，1H)，3.37-3.31(m，1H)，3.23-3.18(m，1H)，3.15-3.07(m，1H)，2.86-2.75(m，1H)，2.29(s，6H)，2.25-2.15(m，1H)，1.99-1.88(m，1H)，1.69(s，6H)。
用于制备化合物33b的程序：
向化合物33a(220mg，0.39mmol)、Zn(224mg，4.19mmol)于MeOH/H2O(6mL，5/1)中的溶液中添加NH4Cl(236mg，3.6mmol)。在90℃下搅拌所得混合物2小时。过滤反应混合物并真空浓缩，得到残余物，用CH2Cl2(20mL)溶解，用水(15mL×3)洗涤，经Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈褐色固体状的标题产物33b(180mg，87％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.732min，MS(ESI)m/z＝531.2[M+H]+。
用于制备实施例33的程序：
向化合物33b(180mg，0.34mmol)和DIEA(66mg，0.51mmol)于DMF(2mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(31mg，0.34mmol)于DMF(0.5mL)中的溶液。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物20分钟。用三滴水淬灭反应混合物并通过制备型HPLC(色谱柱：Waters Xbridge150*25 5μm：30-60％B(A：水(0.05％氨水v/v)，B：CH3CN)，流动速率：25mL/min)纯化，得到呈白色固体状的标题产物实施例33(53.6mg，27％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.726min，MS(ESI)m/z＝584.9[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝2.85min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.53(br s，1H)，9.79(br s，1H)，8.54-8.45(m，2H)，8.41(s，1H)，7.64(br s，1H)，7.09(d，J＝10.8Hz，1H)，6.75(s，1H)，6.40-6.35(m，2H)，5.84-5.79(m，1H)，3.87(s，3H)，3.14-3.06(m，4H)，2.93-2.84(m，1H)，2.30(s，6H)，2.23-2.13(m，1H)，2.00-1.90(m，1H)，1.76(s，6H)。
实施例34
N-(5-(4-(4-环丙基-5-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001251
用于制备化合物34b的程序：
在氮气气氛下，向化合物34a(1.0g，4.91mmol)于二噁烷(20mL)和H2O(4mL)中的溶液中添加环丙基硼酸(1.1g，12.28mmol)，随后添加Pd(OAc)2(772mg，3.44mmol)、PCy3(1.9g，6.87mmol)和Cs2CO3(4.8g，3.0eq，14.73mmol)。用N2使所得混合物脱气1分钟并在微波下，在100℃下搅拌1小时。过滤反应混合物并用EtOAc(50mL)稀释，用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水，减压浓缩，得到残余物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝100/1(v/v))纯化，得到呈褐色固体状的化合物34b(700mg，68％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.797min，MS(ESI)m/z＝209.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.45(d，J＝8.8Hz，1H)，6.41(d，J＝12.4Hz，1H)，3.82(s，3H)，1.88-1.81(m，1H)，0.89-0.81(m，2H)，0.60-0.50(m，2H)。
用于制备化合物34c的程序：
在0℃下，向化合物34b(700mg，3.35mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加CH3MgBr(5.58mL，16.75mmol)。在24-26℃下搅拌所得混合物2小时。用饱和NH4Cl水溶液(10mL)稀释反应混合物并用EtOAc(2×20mL)萃取，减压浓缩合并的有机层并在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1)纯化，得到呈无色油状的化合物34c(450mg，64％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.672min，MS(ESI)m/z＝191.9[M+H-18]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ6.65-6.56(m，1H)，6.34(d，J＝12.8Hz，1H)，1.84-1.72(m，1H)，1.44(s，6H)，0.82-0.75(m，2H)，0.55-0.48(m，2H)。
用于制备化合物34d的程序：
向化合物34c(400mg，1.91mmol)于CH2Cl2(10mL)中的溶液中添加DIEA(494mg，3.82mmol)和2，4-二氯-1，3，5-三嗪(315mg，2.10mmol)。在24-27℃下搅拌所得混合物2小时。减压浓缩反应物并在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1(v/v))纯化，得到呈无色油状的化合物34d(450mg，73％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.999min，MS(ESI)m/z＝323.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.69-8.44(m，1H)，7.99(br d，J＝14.0Hz，1H)，6.93(d，J＝8.4Hz，1H)，2.08-2.02(m，1H)，1.59(s，6H)，1.02-0.93(m，2H)，0.77-0.68(m，2H)。
用于制备化合物34e的程序：
向化合物34d(450mg，1.39mmol)和B(259g，1.39mmol)于n-BuOH(5mL)中的溶液中添加TFA(0.05mL)。在25-30℃下搅拌所得混合物3小时，同时灰色固体沉淀析出。过滤反应混合物并用30mL石油醚洗涤滤饼，减压干燥，得到呈灰色固体状的化合物34e(450mg，68％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.890min，MS(ESI)m/z＝473.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.80(s，1H)，8.31(br s，1H)，8.16-7.58(m，1H)，7.15(d，J＝12.8Hz，1H)，6.91(d，J＝8.4Hz，1H)，4.02(s，3H)，1.99(br s，1H)，1.59(s，6H)，0.95(br d，J＝7.2Hz，2H)，0.74-0.67(m，2H)。
用于制备化合物34f的程序：
向化合物34e(150mg，0.32mmol)和K2CO3(88mg，0.64mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(49mg，0.48mmol)。在22-32℃下搅拌所得混合物12小时，同时颜色从浅褐色变为深黄色。将反应混合物倒入冰水(50mL)中且黄色固体沉淀析出。过滤沉淀的固体并用CH2Cl2(30mL)溶解，经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物34f(150mg，84％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RPl8e 25-2mm)中，Rt＝0.831min，MS(ESI)m/z＝555.2[M+H]+。
用于制备化合物34g的程序：
向化合物34f(150mg，0.27mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(15mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在氢气球(15Psi)下，在23-29℃下搅拌2小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈褐色油状的化合物34g(130mg，92％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.765min，MS(ESI)m/z＝525.1[M+H]+。
用于制备实施例34的程序：
向化合物34g(130mg，0.25mmol)和DIEA(85mg，0.66mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中添加溶于DMF(0.5mL)中的丙烯酰氯(30mg，0.33mmol)。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应混合物通过RP-HPLC(反相HPLC)[色谱柱：反相色谱柱；条件：0-30％B(A：0.25％NH3HCO3；B：MeOH)；流动速率：40ml/min]纯化，接着冻干，得到呈白色固体状的实施例34(24.4mg，17％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.994min，MS(ESI)m/z＝601.3[M+Na]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝3.41min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.72(br s，1H)，10.39(br s，1H)，9.97(br s，1H)，8.41(s，1H)，8.11(d，J＝12.4Hz，1H)，7.66(br s，1H)，6.86(d，J＝8.4Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.45-6.30(m，2H)，5.93(br s，1H)，5.79-5.72(m，1H)，3.88(s，3H)，2.92-2.83(m，2H)，2.70(s，3H)，2.33-2.23(m，8H)，2.06-1.97(m，1H)，1.76(s，6H)，0.97-0.86(m，2H)，0.73-0.65(m，2H)。
实施例35
(S)-N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(3-((二甲基氨基)甲基)吗啉基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001281
用于制备化合物35b的程序：
在0-5℃下，向化合物35a(1.4g，6.44mmol)于CH2Cl2(40mL)中的溶液中分数份添加DMP(4.1g，9.67mmol)。在0-5℃下搅拌所得白色混合物1小时。用NaHCO3水溶液(30mL)处理反应物，用EtOAc(3×20mL)萃取。用盐水(3×20mL)洗涤合并的有机层，干燥并减压浓缩，得到粗品，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝5/1(v/v))纯化，得到呈浅黄色油状的化合物35b(1.1g，79.7％产率)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.60(br d，J＝10.0Hz，1H)，4.52-4.36(m，2H)，3.94-3.67(m，2H)，3.60(dd，J＝4.4，12.2Hz，2H)，3.05-2.79(m，1H)，1.43-1.36(m，9H)。
用于制备化合物35c的程序：
向化合物35b(1.0g，4.65mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加Me2N.HCl(1.1g，13.94mmol)、NaOAc(572mg，6.97mmol)，在24-26℃下搅拌白色混合物2小时，接着添加NaBH3CN(584mg，9.29mmol)，在22-27℃下搅拌所得混合物18小时。通过添加NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应混合物，用EtOAc(3×10mL)萃取。用盐水(3×10mL)洗涤合并的有机层，干燥并真空浓缩，得到呈无色油状的化合物35c(800mg，70.5％产率)。
LCMS：在10-80CD_4MIN_E.M，XBrige Shield RP18 2.1*50mm中，Rt＝2.519min，MS(ESI)m/z＝245.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.99-3.63(m，2H)，3.46-3.33(m，1H)，2.98(br s，1H)，2.71(br t，J＝10.8Hz，1H)，2.31-2.18(m，6H)，1.41(s，9H)。
用于制备化合物35d的程序：
向化合物35c(500mg，2.30mmol)于CH2Cl2(6mL)中的溶液中添加TFA(2mL)。在22-32℃下搅拌所得无色溶液3小时。直接真空浓缩反应溶液，得到呈无色油状的三氟乙酸盐形式的化合物35d(300mg，61.1％产率)。
LCMS：在10-80CD_4MIN_E.M；XBrige Shield RP18 2.1*50mm中，Rt＝0.306min，MS(ESI)m/z＝145.2[M-OH]+。
用于制备化合物35e的程序：
向化合物35d(187mg，0.42mmol)和K2CO3(116mg，0.84mmol)于DMSO(2mL)中的溶液中添加化合物1d(60mg，0.42mmol)。在28-33℃下搅拌混合物2小时。通过Biotage快速反相C-18柱色谱法，用MeOH/H2O(56％至60％的甲醇水溶液)洗脱直接对其进行纯化，得到呈红色固体状的所希望的产物35e(50mg，20.9％产率)，直接用于下一步骤中。
用于制备化合物35f的程序：
在N2保护下，向化合物35e(90mg，0.16mmol)于MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg)。在氢气球(15Psi)下，在26-33℃下搅拌黑色混合物1小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈褐色油状的化合物35f(70mg，82.1％产率)。
LCMS：在10-80CD_3MIN_220&254中，Rt＝1.791min；XBrige Shield RP18 2.1*50mm MS(ESI)m/z＝545.3[M+H]+。
用于制备实施例35的程序：
向化合物35f(70mg，0.13mmol)和DIEA(25mg，0.19mmol)于DMF(1mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(12mg，0.13mmol)于DMF(1mL)中的溶液。在0℃下搅拌所得褐色混合物30分钟。反应物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：35-65％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例35(11.9mg，16.8％产率)。
LCMS：在10-80CD_3MIN_220&254中，Rt＝1.816min；XBrige Shield RP18 2.1*50mm，MS(ESI)m/z＝599.3[M+H]+。
HPLC：Rt＝3.45纯度92.56％(220nm)，10-80_CD_1.2mL.MET(XBridge Shield RP18 2.1*50mm 5μm)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.29(br s，1H)，9.14(s，2H)，8.31(s，1H)，8.27(s，1H)，7.26(br s，1H)，7.11(s，1H)，6.64(br dd，J＝10.4，17.1Hz，1H)，6.27(s，1H)，6.18(brd，J＝16.8Hz，1H)，5.73(br d，J＝10.4Hz，1H)，4.02(br d，J＝9.2Hz，1H)，3.78(s，5H)，3.55-3.48(m，1H)，3.28(br s，1H)，2.85(br s，2H)，2.68(br s，1H)，2.34(s，1H)，2.25(brt，J＝11.2Hz，1H)，2.01(s，6H)，1.92(br d，J＝9.2Hz，1H)，1.52(br s，6H)。
实施例36
(N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺)
Figure BDA0002577093870001301
用于制备化合物36a的程序：
向化合物11b(500mg，2.46mmol)和DIEA(634mg，4.92mmol)于异丙醇(10mL)中的溶液中添加2，4-二氯嘧啶(442mg，2.95mmol)。在90℃下加热所得混合物27小时。真空浓缩反应混合物，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(25-40％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈灰白色固体状的化合物36a(390mg，50.14％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.796min，MS(ESI)m/z＝315.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.12(d，J＝6.0Hz，1H)，8.08(br d，J＝6.8Hz，1H)，7.31(d，J＝10.8Hz，1H)，6.70(d，J＝6.0Hz，1H)，1.57(s，6H)。
用于制备化合物36b的程序：
在50℃下，将化合物36a(760mg，2.4mmol)和4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(448mg，2.4mmol)于TFA/n-BuOH＝1/10(11mL)中的溶液加热4小时，再添加30mg化合物4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺并在50℃下再延长反应时间22小时。过滤反应混合物并用石油醚(20mL×3)洗涤固体饼，接着在高真空中干燥，得到呈灰白色固体状的化合物36b(960mg，86％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.753min，MS(ESI)m/z＝466.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.52(d，J＝8.0Hz，1H)，7.96(d，J＝6.8Hz，1H)，7.84(d，J＝7.2Hz，1H)，7.33(d，J＝10.8Hz，1H)，7.20(d，J＝12.8Hz，1H)，6.48(d，J＝7.2Hz，1H)，4.00(s，3H)，1.59(s，6H)。
用于制备化合物36c的程序：
向化合物36b(200mg，0.43mmol)和K2CO3(119mg，0.86mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(66mg，0.644mmol)。在22-32℃下搅拌反应混合物15小时(从褐色变为深橙色)。在冰水浴下，在搅拌下将反应混合物逐滴添加至H2O(40mL)中且固体沉淀析出。通过过滤收集固体并用H2O(15mL×3)洗涤，接着在高真空中干燥，得到呈橙色固体状的化合物36c(210mg，89％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.669min，MS(ESI)m/z＝548.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.60(s，1H)，7.99(d，J＝6.0Hz，1H)，7.95(d，J＝7.6Hz，1H)，7.26(d，J＝10.8Hz，1H)，6.82(s，1H)，6.20(d，J＝6.0Hz，1H)，3.99(s，3H)，3.24(t，J＝7.4Hz，2H)，2.85(s，3H)，2.59(t，J＝7.2Hz，2H)，2.28(s，6H)，1.59(s，6H)。
用于制备化合物36d的程序：
向化合物36c(200mg，0.365mmol)于MeOH/H2O＝5/1(5mL)中的溶液中添加Zn(143mg，2.190mmol)和NH4Cl(117mg，2.190mmol)。在90℃下加热所得混合物2小时(从橙色变为褐色)。过滤反应混合物，并真空浓缩滤液，得到粗残余物，用CH2Cl2(20mL)溶解并用水(15mL×3)洗涤，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈褐色固体状的化合物36d(170mg，89.9％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.646min，MS(ESI)m/z＝518.2[M+H]+。
用于制备实施例36的程序：
在冰水浴中，向化合物36d(170mg，0.329mmol)和DIEA(64mg，0.494mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(30mg，1.0eq，0.329mmol)。在5-10℃下搅拌所得混合物10分钟。利用H2O(0.1mL)淬灭反应，接着过滤，滤液通过制备型HPLC(色谱柱：Xtimate C18150*25mm*5μm；条件：53-83％B(A：0.04％NH3·H2O+10mM NH4HCO3，B：CH3CN)；流动速率：25ml/min)纯化，接着冻干，得到呈灰白色固体状的实施例36(17.0mg，8.1％产率)。
LCMS：在10-80CD_3min_220&254色谱(ACSSH-LCMS-AS A：Xtimate C18，2.1*30mm，3μm；B：XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝2.356min，MS(ESI)m/z＝572.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.34(brs，1H)，9.72(s，1H)，9.43(s，1H)，8.02(d，J＝6.0Hz，1H)，7.46(s，1H)，7.41(d，J＝7.2Hz，1H)，7.08(d，J＝10.8Hz，1H)，6.69(s，1H)，6.36-6.21(m，3H)，6.02(br s，1H)，5.70-5.63(m，1H)，3.79(s，3H)，2.85-2.78(m，2H)，2.61(s，3H)，2.20(s，8H)，1.66(s，6H)。
实施例37
N-(2-((2-(双(甲基-d3)氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-((4-氯-5-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基)氨基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001331
用于制备化合物37b的程序：
向化合物37a(500mg，2.87mmol)和K2CO3(793mg，5.74mmol)于THF(10mL)中的三份独立溶液中添加CD3I(624mg，4.30mmol)。在24-26℃下搅拌混合物1小时，同时白色固体沉淀析出。过滤三份反应混合物并减压浓缩有机层，得到粗残余物，用EtOAc(20mL)稀释并用H2O(20mL)洗涤，接着经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈无色油状的化合物37b(350mg，19％产率)。
LCMS：在0-60AB_2MIN_E.M色谱(Xtimate C18，2.1*30mm，3μm)中，Rt＝0.744min，MS(ESI)m/z＝209.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.19-3.13(m，1H)，3.13-3.10(m，1H)，2.68(br d，J＝6.4Hz，3H)，2.56(t，J＝6.8Hz，1H)，2.32-2.24(m，1H)，1.30-1.23(m，9H)。
用于制备化合物37c的程序：
在0℃下，向化合物37b(300mg，1.44mmol)于CH2Cl2(5mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(5mL，4M)。在22-32℃下搅拌所得混合物2小时。减压浓缩反应混合物，得到呈白色固体状的化合物37c(260mg，粗品)。
LCMS：在0-60AB_2MIN_E.M色谱(Xtimate C18，2.1*30mm，3μm)中，Rt＝0.097min，MS(ESI)m/z＝109.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.38(s，1H)，3.35(br d，J＝4.0Hz，1H)，3.27-3.11(m，2H)，2.58(br d，J＝4.4Hz，3H)。
用于制备化合物37d的程序：
向化合物37c(250mg，0.54mmol)和K2CO3(149mg，1.08mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加化合物11d(230mg，1.27mmol)。在22-29℃下搅拌所得混合物12小时，同时颜色从浅褐色变为深黄色。用EtOAc(20mL)稀释反应混合物并用盐水(2×30mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(CH2Cl2/MeOH＝10/1)纯化，得到呈黄色固体状的化合物37d(90mg，30％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.820min，MS(ESI)m/z＝555.2[M+H]+。
用于制备化合物37e的程序：
向化合物37d(90mg，0.16mmol)于MeOH(4mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加Zn(52mg，0.80mmol)和NH4Cl(85mg，1.60mmol)。所得混合物用氮气吹扫并脱气3次，接着在80℃下搅拌1小时。过滤反应混合物并减压浓缩，用EtOAc(20mL)溶解残余物并用H2O(10mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈褐色固体状的化合物37e(80mg，95％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.709min，MS(ESI)m/z＝525.0[M+H]+。
用于制备实施例37的程序：
向化合物37e(80mg，0.15mmol)和DIEA(39mg，0.30mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(14mg，0.15mmol)于DMF(0.5mL)中的溶液。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应混合物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：43-73％B(A：0.05％NH3H2O；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例37(35.0mg，40％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.882min，MS(ESI)m/z＝579.3[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝3.23min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.60(br s，1H)，10.46(br s，1H)，9.96(br s，1H)，8.47(d，J＝7.6Hz，1H)，8.42(s，1H)，7.69(br s，1H)，7.10(d，J＝10.8Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.45-6.30(m，2H)，6.18(br s，1H)，5.81-5.70(m，1H)，3.88(s，3H)，2.87(br d，J＝4.8Hz，2H)，2.70(s，3H)，2.29(br s，2H)，1.78(s，6H)。
实施例38
(R)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(2-((二甲基氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001351
用于制备化合物38b的程序：
在85℃下，将化合物11c(180mg，0.385mmol)、化合物38a(440.3mg，3.86mmol)和K2CO3(532.9mg，3.86mmol)于DMSO(2mL)中的溶液搅拌2小时。在冰水浴中，在搅拌下将反应混合物添加至H2O(10mL)中，过滤沉淀的固体并用DCM(30mL)溶解滤饼，接着干燥并真空浓缩，得到呈橙色固体状的产物38b(230mg，95.7％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.718min，MS(ESI)m/z＝560.1，583.1[M+H，M+Na]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.71(br s，1H)，8.98(br s，1H)，8.37(br s，2H)，7.35(brs，1H)，7.06(d，J＝10.4Hz，1H)，6.83(s，1H)，4.45-4.35(m，1H)，4.30(dt，J＝5.1，9.2Hz，1H)，3.93(s，3H)，3.33-3.24(m，1H)，2.80(m，1H)，2.49(dd，J＝5.6，13.2Hz，1H)，2.46-2.36(m，1H)，2.30(s，6H)，2.20-2.08(m，1H)，1.69(s，6H)。
用于制备化合物38c的程序：
向化合物38b(230mg，0.410mmol)于6mL MeOH/H2O＝5/1(v/v)中的溶液中添加Zn(134.02mg，2.05mmol)和NH4Cl(109.65mg，2.05mmol)。在90℃下加热所得混合物1小时。过滤反应混合物，并真空浓缩滤液，得到粗品，用CH2Cl2(30mL)溶解，用水(20mL×2)和盐水(20mL)洗涤，接着经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈褐色固体状的产物38c(197mg，90.5％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(ACSSH-LCMS-AB MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.657min，MS(ESI)m/z＝531.3[M+H]+。
用于制备实施例38的程序：
在0℃下，向化合物38c(197mg，0.351mmol)和DIEA(67.9mg，0.527mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(31.7mg，0.351mmol)。在0℃下搅拌所得混合物1小时。利用H2O(0.1mL)淬灭反应并通过制备型HPLC(仪器：DB色谱柱：Gemini 150*25 5μm。流动相A：含0.05％氨水v/v的水，流动相B：DMF，流动速率：25ml/min，梯度时间：10分钟，特征说明：30％-60％)纯化，得到呈浅黄色固体状的实施例38(36.6mg，18％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(ACSSH-LCMS-AS A：Xtimate C18，2.1*30mm，3μm；B：XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝1.295min，MS(ESI)m/z＝585.3[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ml.met XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm中，Rt＝3.37min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.41(br s，1H)，9.38(br s，1H)，8.95(br s，1H)，8.38(m，1H)，7.56(m，1H)，7.08(m，1H)，6.62(m，1H)，6.37(m，1H)，6.82-6.21(m，2H)，5.80(br s，1H)，4.23(m，1H)，3.89(m，5H)，3.56(m，1H)，2.64(m，1H)，2.39(m，1H)，2.25(m，7H)，1.90-1.73(s，6H)。
实施例39
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(3-((二甲基氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001361
用于制备化合物39b的程序：
在90℃下，将化合物11c(100mg，0.22mmol)、化合物39a(40mg，0.22mmol)和K2CO3(110mg，0.85mmol)于DMSO(2mL)中的混合物搅拌3小时(黄色悬浮液)。完成后，将冰水(10mL)添加至混合物中。过滤沉淀的固体并用H2O(10mL)洗涤滤饼，在高真空中干燥，得到呈黄色固体状的化合物39b(150mg，83.4％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.710min，MS(ESI)m/z＝583.1[M+Na]+。
1H NMR：(400MHz，DMSO-d6)δppm 10.23(br s，1H)，9.27-8.91(m，1H)，8.27(s，1H)，7.90(s，1H)，7.29(s，1H)，6.30(br s，1H)，6.21(s，1H)，4.09(t，J＝8.4Hz，2H)，3.86(s，3H)，3.62(t，J＝8.4Hz，2H)，2.91-2.82(m，1H)，2.55(s，2H)，2.15(s，6H)，1.51(s，6H)。
用于制备化合物39c的程序：
向化合物39b(150mg，0.267mmol)于MeOH/H20(50/10mL)中的混合物中添加Zn(87mg，1.34mmol)和NH4Cl(71mg，1.34mmol)。在85℃下搅拌所得悬浮液3小时。过滤反应物并真空浓缩滤液，得到粗残余物，用水(20mL)处理并用CH2Cl2(30mL×3)萃取。用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈黄色固体状的产物39c(120mg，85.1％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.665min，MS(ESI)m/z＝529.1[M+H-2]+。
1H NMR：(400MHz，DMSO-d6)δ10.11(br s，1H)，8.84(br s，1H)，8.33(s，1H)，8.19(s，1H)，7.26(s，1H)，6.53(br s，1H)，6.27-6.21(m，2H)，4.05-3.91(m，4H)，3.67(s，3H)，3.46-3.39(m，2H)，2.76-2.67(m，1H)，2.16(s，6H)，1.51(s，6H)。
用于制备实施例39的程序：
在冰水浴下，经1小时向化合物39c(120mg，0.225mmol)和DIEA(87mg，0.675mmol)于DMF(3mL)中的混合物中逐滴添加溶于DMF(1mL)中的丙烯酰氯(26.6mg，0.293mmol)。在0-5℃下搅拌所得混合物30分钟(褐色溶液)，接着用H2O(0.05mL)淬灭并直接通过制备型HPLC[Waters Xbridge 150*25.5μm；条件：28-58％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例39(48.0mg，20.9％产率)。
LCMS：在0-60AB_4.0min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.325min，MS(ESI)m/z＝585.1[M+H]+。
HPLC：在0-60_CD_1.2ml色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝4.92min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δppm 10.23(brs，1H)，9.07(brs，1H)，8.36-8.28(m，2H)，743-7.32(m，2H)，6.99(d，J＝10.8Hz，1H)，6.34-6.19(m，3H)，5.72(d，J＝9.2Hz，1H)，3.90(t，J＝7.2Hz，2H)，3.80(s，3H)，3.42(t，J＝6.4Hz，2H)，2.86-2.79(m，1H)，2.45(d，J＝7.2Hz，2H)，2.16(s，6H)，1.64(s，6H)。
实施例40
(S)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(3-((二甲基氨基)甲基)吗啉基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001381
用于制备化合物40b的程序：
在0-5℃下，向化合物40a(1.4g，6.44mmol)于CH2Cl2(40mL)中的溶液中分数份添加DMP(4.1g，9.67mmol)。在0-5℃下搅拌所得白色混合物1小时。用NaHCO3水溶液(30mL)处理反应物，用EtOAc(3×20mL)萃取。用盐水(3×20mL)洗涤合并的有机层，干燥并减压浓缩，得到粗品，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝5/1(v/v))纯化，得到呈浅黄色油状的化合物40b(1.1g，79.7％产率)。
LCMS：在10-80CD_3MIN_220&254，色谱(XBrige Shield RP18 2.1×50mm)中，Rt＝1.300-1.400min。
1H NMR：(400MHz，DMSO-d6)δ9.60(br d，J＝10.0Hz，1H)，4.52-4.36(m，2H)，3.94-3.67(m，2H)，3.63-3.52(m，2H)，3.08-2.79(m，1H)，1.43-1.36(m，9H)。
用于制备化合物40c的程序：
向化合物40b(1.0g，4.65mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加Me2N.HCl(1.1g，13.94mmol)和NaOAc(572mg，6.97mmol)，在24-26℃下搅拌白色混合物2小时，接着添加NaBH3CN(584mg，9.29mmol)，在22-27℃下搅拌所得混合物18小时。通过添加NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应混合物，用EtOAc(3×10mL)萃取。用盐水(3×10mL)洗涤合并的有机层，干燥并真空浓缩，得到呈无色油状的化合物40c(800mg，70.5％产率)。
LCMS：在10-80CD_7MIN_220&254，色谱(XBrige Shield RP18 2.1×50mm)中，Rt＝2.475min，MS(ESI)m/z＝245.1[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ4.15-3.40(m，5H)，3.53-3.44(m，2H)，3.06(br s，1H)，2.79(br t，J＝10.8Hz，1H)，2.32(br s，6H)，1.48(s，9H)。
用于制备化合物40d的程序：
向化合物40c(500mg，2.30mmol)于CH2Cl2(6mL)中的溶液中添加TFA(2mL)。在22-32℃下搅拌所得无色溶液3小时。直接真空浓缩反应溶液，得到呈无色油状的三氟乙酸盐形式的化合物40d(300mg，61.1％产率)。
LCMS：在10-80CD_4MIN_E色谱(XBrige Shield RP18 2.1×50mm)中，Rt＝0.561min，MS(ESI)m/z＝145.2[M+H]+。
用于制备化合物40e的程序：
向化合物40d(375mg，0.42mmol)和K2CO3(230mg，1.67mmol)于DMSO(2mL)中的溶液中添加化合物11c(120mg，0.83mmol)。在28-33℃下搅拌混合物8小时。通过Biotage快速反相C-18柱色谱法，用MeOH/H2O(56％至60％的甲醇水溶液)洗脱对其进行纯化，得到呈红色固体状的化合物40e(120mg，20.9％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5MIN_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.809min。MS(ESI)m/z＝591.3[M+H]+。
用于制备化合物40f的程序：
向化合物40e(120mg，0.20mmol)于MeOH(5mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加Zn(67mg，1.02mmol)和NH4Cl(109mg，2.04mmol)。在N2下，在70℃下搅拌黑色悬浮液1.5小时。通过添加NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应混合物，用EtOAc(10mL×3)萃取。用盐水(10mL×3)洗涤有机层，干燥并直接真空浓缩，得到呈褐色油状的化合物40f(70mg，82.1％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5MIN_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.760min，MS(ESI)m/z＝561.2[M+H]+。
用于制备实施例40的程序：
向化合物40f(70mg，0.12mmol)和DIEA(24mg，0.19mmol)于DMF(1mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(11mg，0.12mmol)于DMF(1mL)中的溶液。在0℃下搅拌所得褐色混合物30分钟。反应物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150×25 5μm；条件：35-65％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例40(10.2mg，15.5％产率)。
LCMS：在10-80CD_7MIN_220&254，色谱(XBrige Shield RP18 2.1×50mm)中，Rt＝4.015min，MS(ESI)m/z＝615.3[M+H]+。
HPLC：Rt＝3.76min，10-80_CD_1.2mL.MET(XBridge Shield RP 18 2.1×50mm 5μm)。
1H NMR：(400MHz，DMSO-d6)δ10.20(br s，1H)，9.15-9.00(m，2H)，8.29(br d，J＝15.6Hz，2H)，7.26(br s，1H)，7.12(br s，1H)，6.63(dd，J＝10.0，16.8Hz，1H)，6.30(s，1H)，6.17(br d，J＝16.8Hz，1H)，5.73(br d，J＝11.0Hz，1H)，4.01(br d，J＝9.4Hz，1H)，3.82-3.77(m，5H)，3.55-3.49(m，1H)，3.32-3.23(m，1H)，2.84(br s，2H)，2.29-2.18(m，1H)，2.02(s，6H)，1.91(br d，J＝9.4Hz，1H)，1.51(d，J＝7.2Hz，6H)。
实施例41
N-(5-(4-(4-氯-5-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-((3aR，6aR)-5-甲基六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-1(2H)-基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001411
用于制备化合物41a的程序：
向4-氯-3-氟苯胺(15g，103.05mmol)于二氯甲烷(150mL)中的溶液中逐滴添加ICl(25g，154.57mmol)。在24-29℃下搅拌所得黑色混合物2小时。用100mL二氯甲烷稀释混合物并用饱和碳酸氢钠溶液(200mL)洗涤。浓缩有机层，得到粗残余物，在硅胶上通过快速柱色谱法(0至0.5％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到化合物41a(8g褐色固体和12g黑色固体，71.5％总产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.974min，MS(ESI)m/z＝271.8[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ7.53(d，J＝8.0Hz，1H)，6.46(d，J＝10.4Hz，1H)，4.12(s，2H)。
用于制备化合物41b的程序：
在氮气下，向化合物41a(20g，73.67mmol)于DMF(60mL)和甲醇(120mL)中的溶液中添加DPPF(4.08g，7.37mmol)、Et3N(31mL，221.03mmol)和Pd(OAc)2(1.65g，7.37mmol)。反应混合物用CO吹扫并脱气三次并在CO(50psi)下，在80℃下搅拌24小时。过滤混合物并在真空中去除甲醇，得到残余物，将其倒入盐水(300mL)中且黑色固体沉淀析出。通过过滤收集固体并在硅胶上通过快速柱色谱法(0至1％乙酸乙酯/石油醚)进一步纯化，得到呈粉色固体状的化合物41b(11.8g，78.6％产率)。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ7.83(d，J＝8.4Hz，1H)，6.36(d，J＝10.8Hz，1H)，5.80(s，2H)，3.79(s，3H)。
用于制备化合物41c的程序：
在氮气下，在0℃下向化合物41b(6g，29.47mmol)于THF(100mL)中的溶液中逐滴添加CH3MgBr(49.1mL，147.35mmol)。在24-31℃下搅拌所得褐色混合物2小时。用饱和NH4Cl溶液(300mL)淬灭混合物并用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。合并的有机层经硫酸钠脱水，过滤并浓缩，得到粗产物，在硅胶上通过快速柱色谱法(0至15％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到呈黄色油状的化合物41c(5.17g，84％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.821min，MS(ESI)m/z＝185.9[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ7.09(d，J＝8.4Hz，1H)，6.42(d，J＝11.2Hz，1H)，4.84(s，2H)，1.66(s，6H)。
用于制备化合物41d的程序：
向化合物41c(5.17g，25.39mmol)于二氯甲烷(100mL)中的溶液中添加DIEA(6.56g，50.78mmol)和2，4-二氯-1，3，5-三嗪(4.19g，27.93mmol)。在23-29℃下搅拌所得溶液3小时。真空浓缩溶液，得到粗产物，在硅胶上通过快速柱色谱法(0至10％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到呈白色固体状的化合物41d(5.74g，71.3％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.614min，MS(ESI)m/z＝316.7[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.20(s，1H)，8.49(s，1H)，8.16(d，J＝10.8Hz，1H)，7.22(d，J＝7.6Hz，1H)，2.24(s，1H)，1.62(s，6H)。
用于制备化合物41e的程序：
向化合物41d(4.74g，14.95mmol)于n-BuOH/TFA(50mL/0.5mL)中的黄色溶液中添加4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(2.8g，15.04mmol)。在21-24℃下搅拌所得混合物1小时，同时颜色变为褐色且黄色固体沉淀析出。通过过滤收集固体并用石油醚(20mL)洗涤，在真空中干燥固体，得到化合物41e(5.42g，77.7％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.971min，MS(ESI)m/z＝467.1[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，DMSO-d6)δ10.56(s，1H)，9.49(s，1H)，8.45(s，1H)，8.39(s，1H)，7.45-7.34(m，1H)，3.95(s，3H)，1.53(s，6H)。
用于制备化合物41f的程序：
向化合物41e(200mg，0.43mmol)和K2CO3(119mg，0.86mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加(3aR，6aR)-5-甲基八氢吡咯并[3，4-b]吡咯(65mg，0.52mmol)。在85℃下搅拌所得混合物4小时，同时颜色从浅黄色变为深黄色。将反应混合物倒入冰水(50mL)中且黄色固体沉淀。过滤黄色沉淀并用CH2Cl2(20mL)溶解，接着经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物41f(230mg，93％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.755min，MS(ESI)m/z＝572.9[M+H]+。
用于制备化合物41g的程序：
向化合物41f(230mg，0.40mmol)于MeOH(10mL)和H2O(5mL)中的溶液中添加Zn(131mg，2.00mmol)和NH4Cl(214mg，4.00mmol)。所得混合物用氮气吹扫并脱气3次，接着在80℃下搅拌1小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到残余物，用EtOAc(20mL)溶解并用H2O(10mL)洗涤，经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈褐色固体状的化合物41g(190mg，87％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.701min，MS(ESI)m/z＝542.9[M+H]+。
用于制备实施例41的程序：
向化合物41g(190mg，0.35mmol)和DIEA(90mg，0.70mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中逐滴添加溶于DMF(0.5mL)中的丙烯酰氯(32mg，0.35mmol)。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应混合物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：40-70％B(A：0.05％NH3H2O；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例41(74.4mg，36％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.924min，MS(ESI)m/z＝597.1[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝3.30min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.83(br s，1H)，9.9l(br s，1H)，9.60(br s，1H)，8.42(s，1H)，8.40(d，J＝11.6Hz，1H)，7.70(br s，1H)，7.29(s，1H)，6.78(s，1H)，6.56-6.33(m，2H)，5.96(br s，1H)，5.77(br d，J＝10.8Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.73-3.64(m，1H)，3.22(brt，J＝7.6Hz，1H)，2.93-2.79(m，3H)，2.72(br d，J＝10.4Hz，1H)，2.33(br s，1H)，2.30(s，3H)，2.25-2.16(m，1H)，1.95-1.86(m，2H)，1.78(s，6H)。
实施例42
(S)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-(甲基(2-(2-甲基吡咯烷-1-基)乙基)氨基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001441
用于制备化合物42b的程序：
向化合物42a(300mg，2.47mmol)于MeOH(8mL)中的溶液中添加NaOAc(404.74mg，4.93mmol)。在23-28℃下搅拌混合物10分钟并添加甲基(2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(512.76mg，2.96mmol)。在23-28℃下搅拌所得混合物1小时，接着将NaBH3CN(310.05mg，4.93mmol)添加至以上混合物中。在23-28℃下搅拌混合物15小时。真空浓缩混合物，得到残余物，用CH2Cl2(15mL)溶解并用水(6mL)和盐水(6mL)洗涤，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到粗产物。在硅胶上通过柱色谱法(0.5％MeOH/CH2Cl2)对其进行纯化，得到呈黄色油状的化合物42b(350mg，58.5％产率)。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ3.65-2.93(m，5H)，2.89(s，3H)，2.75-2.32(m，2H)，2.20(br s，1H)，2.06-1.65(m，3H)，1.46(s，9H)，1.26-1.06(m，3H)。
用于制备化合物42c的程序：
向化合物42b(350mg，1.44mmol)于CH2Cl2(3mL)中的溶液中添加HCl-EtOAc(4mL)。在22-32℃下搅拌所得混合物12小时。真空浓缩反应混合物，得到呈白色固体状的化合物42c(200mg，64％产率)。
LCMS：在0-60AB_2MIN_50_E.1cm色谱(Xtimate C18，2.1*30mm，3μm)中，Rt＝0.101min，MS(ESI)m/z＝143.1[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，D2O)δ3.81-3.61(m，2H)，3.60-3.33(m，4H)，3.24-3.12(m，1H)，2.77(s，3H)，2.39-2.23(m，1H)，2.17-2.04(m，1H)，2.03-1.94(m，1H)，1.79-1.63(m，1H)，1.41(d，J＝6.4Hz，3H)。
用于制备化合物42d的程序：
向化合物11c(200mg，0.428mmol)和K2CO3(118mg，0.856mmol)于DMSO(3mL)中的溶液中添加化合物42c(111mg，0.514mmol)。在50℃下加热反应混合物3小时，同时颜色从褐色变为橙色。在冰水浴中，在搅拌下将反应混合物逐滴添加至H2O(40mL)中，同时固体沉淀析出，接着过滤。用H2O(15mL×3)洗涤滤饼，在高真空中干燥，得到呈橙色固体状的化合物42d(210mg，83％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.748min，MS(ESI)m/z＝589.1[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CD3OD)δ8.53(br s，1H)，8.26(br s，1H)，8.18(br s，1H)，7.21(d，J＝10.8Hz，1H)，6.81(s，1H)，3.96(s，3H)，3.42-3.33(m，2H)，3.19-3.08(m，2H)，2.90(s，3H)，2.51-2.34(m，2H)，2.24(q，J＝9.2Hz，1H)，2.04-1.91(m，1H)，1.81-1.70(m，2H)，1.60(s，6H)，1.40(qd，J＝8.4，12.4Hz，1H)，1.12(d，J＝6.0Hz，3H)。
用于制备化合物42e的程序：
向化合物42d(200mg，0.34mmol)于MeOH/H2O(5mL，5/1)中的溶液中添加Zn(133mg，2.04mmol)和NH4Cl(109mg，2.04mmol)。在90℃下加热所得混合物3小时，同时颜色从橙色变为褐色。过滤反应混合物，接着真空浓缩滤液，得到粗残余物，用CH2Cl2(20mL)溶解，并用水(15mL×3)洗涤，接着经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈褐色固体状的化合物42e(118mg，62％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.703min，MS(ESI)m/z＝559.1[M+H]+。
用于制备实施例42的程序：
在冰水浴中，向化合物42e(115mg，0.206mmol)和DIEA(40mg，0.309mmol)于DMF(2mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(19mg，0.206mmol)。在5-10℃下搅拌所得混合物15分钟。利用H2O(0.1mL)淬灭反应，接着过滤，滤液通过制备型HPLC(色谱柱：Waters Xbridge150*25 5μm；条件：42-72％B(A：0.05％氨水，B：CH3CN)；流动速率：25ml/min)纯化并冻干，得到呈灰白色固体状的实施例42(23.7mg，16.8％产率)。
LCMS：在30-90CD_7min_220&254.1cm色谱(Xtimate 2.1*30mm 3μm)中，Rt＝4.638min，MS(ESI)m/z＝613.3[M+H]+。
HPLC：在10-80CD_1.2ml色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝4.56min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.60(br s，1H)，9.92(br s，1H)，9.73(br s，1H)，8.48(d，J＝7.2Hz，1H)，8.42(s，1H)，7.69(br s，1H)，7.10(d，J＝10.8Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.53-6.30(m，2H)，6.10(br s，1H)，5.84-5.70(m，1H)，3.88(s，3H)，3.22-3.18(m，1H)，3.02-2.90(m，2H)，2.88-2.77(m，1H)，2.67(s，3H)，2.37-2.28(m，1H)，2.16-1.91(m，3H)，1.77(s，6H)，1.66(br s，1H)，1.49-1.40(m，1H)，1.36-1.20(m，1H)，1.04(d，J＝5.6Hz，3H)。
实施例43
(R)-N-(5-(4-(4-氯-5-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(2-((二甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001471
用于制备化合物43a的程序：
向化合物41e(200mg，0.428mmol)和K2CO3(118mg，0.856mmol)于DMSO(3mL)中的溶液中添加(R)-N，N-二甲基-1-(吡咯烷-2-基)甲胺(103mg，0.514mmol)。在85℃下加热反应混合物2.5小时，同时颜色从褐色变为橙色。在冰水浴下，在搅拌下将反应混合物逐滴添加至H2O(40mL)中，同时固体沉淀析出，接着过滤。用H2O(15mL×3)洗涤滤饼，接着在高真空中干燥，得到呈橙色固体状的化合物43a(200mg，73.7％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.745min，MS(ESI)m/z＝575.2[M+H]+。
用于制备化合物43b的程序：
向化合物43a(200mg，0.348mmol)于MeOH/H2O＝5/1(5mL)中的溶液中添加Zn(136mg，2.087mmol)和NH4Cl(112mg，2.087mmol)。在90℃下加热所得混合物1.5小时，同时颜色从橙色变为褐色。过滤反应混合物，真空浓缩滤液，得到残余物，用CH2Cl2(20mL)溶解并用水(15mL×3)洗涤，接着经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈褐色固体状的化合物43b(175mg，92.3％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.725min，MS(ESI)m/z＝545.0[M+H]+。
用于制备实施例43的程序：
在冰水浴中，向化合物43b(175mg，0.321mmol)和DIEA(62mg，0.482mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(29mg，0.321mmol)。在5-10℃下搅拌所得混合物15分钟。利用H2O(0.1mL)淬灭反应，接着过滤，滤液通过制备型HPLC(色谱柱：Waters Xbridge 150*255μm；条件：42-72％B(A：0.05％氨水，B：CH3CN)；流动速率：25ml/min)纯化，接着冻干，得到呈白色固体状的实施例43(46.0mg，21.44％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254.1cm色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.066min，MS(ESI)m/z＝599.2[M+H]+。
HPLC：在10-80CD_1.2ml色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝4.12min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.82(br s，1H)，10.07(br s，1H)，9.88(br s，1H)，8.41(s，1H)，8.39(d，J＝12.0Hz，1H)，7.70(br s，1H)，7.32-7.25(m，1H)，6.71(s，1H)，6.44-6.28(m，2H)，6.03(br s，1H)，5.84-5.71(m，1H)，3.86(s，3H)，3.39-3.25(m，2H)，3.03-2.92(m，1H)，2.37(dd，J＝7.8，12.0Hz，1H)，2.33-2.21(m，1H)，2.19(s，6H)，2.06(dd，J＝5.4，12.0Hz，1H)，2.02-1.92(m，2H)，1.78(s，6H)，1.70-1.65(m，1H)。
实施例44
(S)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-(甲基((1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001481
用于制备化合物44b的程序：
向化合物36b(180mg，0.39mmol)、K2CO3(216mg，1.56mmol)于DMSO(10mL)中的溶液中添加化合物44a(117mg，0.58mmol)。在50℃下搅拌所得混合物12小时。将反应混合物与前一批料组合并在冰水浴下，在搅拌下逐滴添加至H2O(100mL)中，过滤沉淀的固体并用CH2Cl2(15mL×3)溶解滤饼，接着干燥并真空浓缩，得到呈橙色固体状的目标化合物44b(220mg，平均89.0％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.738min，MS(ESI)m/z＝575.1[M+Na]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.64(s，1H)，9.04(s，1H)，8.40(br s，1H)，8.38-8.30(m，1H)，7.42(br s，1H)，7.08(d，J＝10.4Hz，1H)，6.68(s，1H)，3.95(s，3H)，3.50(dd，J＝4.8，13.6Hz，1H)，3.17-3.05(m，2H)，2.86(s，3H)，2.63(s，2H)，2.59-2.52(m，1H)，2.42(s，3H)，2.30-2.21(m，1H)，2.07-1.96(m，1H)，1.80-1.74(m，1H)，1.70(s，6H)。
用于制备化合物44c的程序：
向化合物44b(220mg，0.38mmol)、Zn(125mg，1.9mmol)于6mL甲醇/水＝5∶1(v/v)中的溶液中添加NH4Cl(102mg，1.9mmol)。在75℃下搅拌所得混合物2小时。过滤反应混合物并真空浓缩，得到残余物，用水(10mL)处理并用CH2Cl2(15mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4脱水，过滤并真空浓缩，得到呈褐色固体状的化合物44c(90mg，43.4％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.701min，MS(ESI)m/z＝545.1[M+H]+。
用于制备实施例44的程序：
向化合物44c(90mg，0.17mmol)和DIEA(33mg，0.26mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中逐滴添加溶于DMF(0.5mL)中的丙烯酰氯(31mg，0.34mmol)。在0℃(冰水浴)下搅拌所得混合物20分钟。用三滴水淬灭反应混合物，接着直接通过制备型HPLC(色谱柱：Waters Xbridge150*25 5μm：53-83％B(A：水(0.05％氢氧化铵v/v)，B：CH3CN)，流动速率：25mL/min)纯化，得到呈白色固体状的实施例44(11.1mg，10.9％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.994min，MS(ESI)m/z＝599.1[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ML色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝4.42min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.53(br s，1H)，10.10(br s，1H)，10.03(br s，1H)，8.47(d，J＝7.2Hz，1H)，8.41(s，1H)，7.64(br s，1H)，7.10(d，J＝10.8Hz，1H)，6.71(s，1H)，6.43-6.32(m，2H)，6.12(br s，1H)，5.81-5.74(m，1H)，3.88(s，3H)，3.14-3.08(m，1H)，2.88-2.78(m，1H)，2.74(s，3H)，2.71-2.63(m，2H)，2.56(s，3H)，2.41-2.32(m，1H)，2.06-1.90(m，1H)，1.81-1.72(m，7H)，1.45-1.23(m，2H)。
实施例45
N-(5-(4-(4-环丙基-5-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-((3aR，6aR)-5-甲基六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-1(2H)-基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001501
用于制备化合物45b的程序：
向化合物34e(150mg，0.32mmol)和K2CO3(88mg，0.64mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加化合物45a(48mg，0.38mmol)。在85℃下搅拌所得混合物4小时，同时颜色从浅黄色变为深黄色。将反应混合物倒入冰水(50mL)中且黄色固体沉淀。过滤固体并用CH2Cl2(20mL)溶解滤饼，接着经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物45b(150mg，82％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.834min，MS(ESI)m/z＝579.3[M+H]+。
用于制备化合物45c的程序：
向化合物45b(150mg，0.26mmol)于MeOH(10mL)和H2O(5mL)中的溶液中添加Zn(85mg，1.30mmol)和NH4Cl(139mg，2.60mmol)。所得混合物用氮气吹扫并脱气3次，接着在80℃下搅拌2小时。过滤反应混合物并减压浓缩，接着用EtOAc(10mL×2)萃取，用H2O(10mL)洗涤合并的有机层，经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈褐色固体状的化合物45c(130mg，91％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.715min，MS(ESI)m/z＝549.1[M+H]+。
用于制备实施例45的程序：
向化合物45c(130mg，0.24mmol)和DIEA(62mg，0.48mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中逐滴添加溶于DMF(0.5mL)中的丙烯酰氯(22mg，0.24mmol)。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应混合物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：35-65％B(A：0.05％NH3H2O；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例45(28.1mg，19％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.778min，MS(ESI)m/z＝603.3[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝2.79min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.72(br s，1H)，9.93(br s，1H)，9.56(br s，1H)，8.41(s，1H)，8.12(d，J＝12.4Hz，1H)，7.64(br s，1H)，6.86(d，J＝8.4Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.55-6.45(m，1H)，6.44-6.35(m，1H)，5.76(br d，J＝11.2Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.67(br s，1H)，3.22(br t，J＝7.6Hz，1H)，2.96-2.79(m，3H)，2.73(br d，J＝10.0Hz，1H)，2.30(br s，4H)，2.25-2.17(m，1H)，2.08-1.94(m，2H)，1.89(br s，1H)，1.76(s，6H)，1.05-0.88(m，2H)，0.75-0.55(m，2H)。
实施例46
(R)-N-(5-(4-(4-环丙基-5-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(2-((二甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001521
用于制备化合物46b的程序：
向化合物34e(150mg，0.32mmol)和K2CO3(88mg，0.64mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加化合物46a(96mg，0.48mmol)。在85℃下搅拌所得混合物4小时，同时颜色从浅黄色变为深黄色。将反应混合物倒入冰水(50mL)中且黄色固体沉淀。过滤黄色固体并用CH2Cl2(20mL)稀释滤饼，经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物46b(140mg，75％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.766min，MS(ESI)m/z＝581.1[M+H]+。
用于制备化合物46c的程序：
向化合物46b(140mg，0.24mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(15mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在氢气球(15Psi)下，在21-24℃下搅拌2小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈褐色油状的化合物46c(130mg，98％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.738min，MS(ESI)m/z＝551.1[M+H]+。
用于制备实施例46的程序：
向化合物46c(130mg，0.24mmol)和DIEA(62mg，0.48mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中逐滴添加溶于DMF(0.5mL)中的丙烯酰氯(22mg，0.24mmol)。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应混合物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：42-72％B(A：0.05％NH3H2O；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例46(32.5mg，22％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.883min，MS(ESI)m/z＝605.3[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝3.00min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.71(br s，1H)，10.00(br s，1H)，9.91(br s，1H)，8.41(s，1H)，8.11(d，J＝12.4Hz，1H)，7.65(br s，1H)，6.86(d，J＝8.4Hz，1H)，6.70(s，1H)，6.44-6.30(m，2H)，5.77(br d，J＝11.2Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.39-3.24(m，2H)，3.03-2.90(m，1H)，2.41-2.31(m，1H)，2.25-2.15(m，7H)，2.10-1.96(m，4H)，1.76(s，6H)，1.69(br d，J＝4.4Hz，1H)，0.98-0.88(m，2H)，0.73-0.66(m，2H)。
实施例47
N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丁-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-((3aR，6aR)-5-甲基六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-1(2H)-基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001531
用于制备化合物47c的程序：
在N2下，向化合物47a(10g，48.08mmol)和化合物47b(20.84g，57.69mmol)于甲苯(200mL)中的混合物中整份添加Pd(PPh3)4(2.78g，2.4mmol)。在N2下，在100℃下搅拌所得黑色混合物12小时。将反应物冷却至25℃。接着在搅拌下，在25℃下用6N HCl(10mL)处理1小时。将其用水(400mL)稀释并用EtOAc(120mL×3)萃取。依序用20％KF溶液(200mL)和盐水(100mL)洗涤合并的有机层，经硫酸钠脱水并真空浓缩，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(5％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈黄色固体状的化合物47c(4.2g，51％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.709min，MS(ESI)m/z＝171.9[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ7.50(dd，J＝8.8Hz，11.2Hz，1H)，6.41(dd，J＝6.8Hz，12.0Hz，1H)，6.37-6.17(m，2H)，2.52(s，3H)。
用于制备化合物47d的程序：
在N2下，在0℃下向化合物47c(2g，11.68mmol)于THF(100mL)中的溶液中添加EtMgBr(3.0M)(16mL，46.72mmol)。在23-27℃下搅拌反应混合物2小时。用饱和NH4Cl溶液(50mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL×3)萃取。合并的有机层经Na2SO4脱水，过滤，并减压浓缩滤液，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(0-30％EtOAc/石油醚(v/v))纯化，得到呈黄色油状的化合物47d(1.7g，72％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱MERCK RP18 2.5-2mm中，Rt＝0.559min，MS(ESI)m/z＝184.0[M+H-18]+。
1H NMR：(400MHz，MeOD-d4)δ6.91(dd，J＝8.8Hz，12.8Hz，1H)，6.51(dd，J＝7.6Hz，12.8Hz，1H)，2.07-2.01(m，1H)，1.86-1.76(m，1H)，1.53(s，3H)，0.80(t，J＝7.6Hz，3H)。
用于制备化合物47e的程序：
向化合物47d(1.68g，8.4mmol)于CH2Cl2(15mL)中的溶液中添加DIEA(1.6g，12.6mmol)和2，4-二氯嘧啶(1.5g，10.0mmol)。在22-30℃下搅拌所得混合物0.5小时。减压浓缩反应混合物并在硅胶上通过柱色谱法(0-20％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈黄色固体状的化合物47e(1.58g，60％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.825min，MS(ESI)m/z＝314.9[M+H]+。
用于制备化合物47f的程序：
向化合物47e(1.58g，5.0mmol)和4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(935mg，5.0mmol)于n-BuOH(10mL)中的溶液中添加TFA(0.1mL)。在18-25℃下搅拌所得混合物2小时，同时沉淀析出灰色固体。过滤反应混合物并收集滤饼，并减压干燥，得到呈灰白色固体状的化合物47f(1.5g，97％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.911min，MS(ESI)m/z＝464.9[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，DMSO-d6)δ10.55(br s，1H)，9.46(br s，1H)，8.46(br s，1H)，8.37(s，1H)，7.39(d，J＝13.6Hz，1H)，7.33-7.29(m，1H)，7.18(s，1H)，7.05(s，1H)，3.94(s，3H)，1.82-1.70(m，2H)，1.51(s，3H)，0.71(br t，J＝7.6Hz，3H)。
用于制备化合物47h的程序：
向化合物47f(150mg，0.32mmol)和K2CO3(88mg，0.64mmol)于DMSO(3mL)中的溶液中添加化合物47g(48mg，0.38mmol)。在85℃下搅拌所得混合物2小时，同时颜色从浅黄色变为深黄色。将反应混合物倒入冰水(50mL)中并过滤沉淀的黄色固体，用CH2Cl2(20mL)溶解滤饼，接着经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物47h(160mg，88％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.766min，MS(ESI)m/z＝571.0[M+H]+。
用于制备化合物47i的程序：
向化合物47h(160mg，0.28mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(16mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在H2(氢气球，15Psi)下，在22-30℃下搅拌1小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈无色固体状的标题化合物47i(140mg，92％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.732min，MS(ESI)m/z＝541.0[M+H]+。
用于制备实施例47的程序：
向化合物47i(140mg，0.26mmol)和DIEA(67mg，0.52mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中逐滴添加溶于DMF(0.5mL)中的丙烯酰氯(24mg，0.26mmol)。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应混合物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：45-75％B(A：0.05％NH3H2O；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例47(50.6mg，33％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.855min，MS(ESI)m/z＝595.1[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝2.69min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.91(br s，1H)，9.94(br s，1H)，9.57(br s，1H)，8.45-8.35(m，2H)，7.69(br s，1H)，7.03(dd，J＝8.8，12.4Hz，1H)，6.79(s，1H)，6.49-6.33(m，2H)，5.78-5.73(m，1H)，3.96-3.81(m，3H)，3.62(br dd，J＝4.4，7.6Hz，1H)，3.19(br t，J＝7.6Hz，1H)，2.98-2.76(m，3H)，2.70(br d，J＝10.4Hz，1H)，2.36-2.26(m，4H)，2.26-2.10(m，2H)，2.09-2.00(m，1H)，1.89(br dd，J＝4.0，10.2Hz，1H)，1.86-1.78(m，1H)，1.70(s，3H)，0.89(td，J＝7.2，11.2Hz，3H)。
实施例48
N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丁-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001561
用于制备化合物48a的程序：
向化合物48a(200mg，0.43mmol)和K2CO3(119mg，0.86mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加化合物(R)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺(60mg，0.52mmol)。在23-29℃下搅拌所得混合物0.5小时。在冰水浴下，在搅拌下将反应混合物逐滴添加至H2O(100mL)中，过滤沉淀的固体并用CH2Cl2(45mL)溶解滤饼，接着干燥并真空浓缩，得到呈橙色固体状的化合物48b(230mg，96％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.722min，MS(ESI)m/z＝559.2[M+H]+。
用于制备化合物48b的程序：
向48a(230mg，0.41mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(35mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在氢气球(15Psi)下，在23-30℃下搅拌0.5小时。过滤反应混合物并减压浓缩滤液，得到呈褐色固体状的化合物48b(205mg，94％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.680min，MS(ESI)m/z＝529.2[M+H]+。
用于制备实施例48的程序：
向化合物48b(205mg，0.4mmol)和DIEA(78mg，0.4mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中逐滴添加溶于DMF(0.5mL)中的丙烯酰氯(37mg，0.4mmol)。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物20分钟。用三滴水淬灭反应混合物，接着直接通过制备型HPLC(色谱柱：WatersXbridge 150*25 5μm：40-70％B(A：水(0.05％氨水v/v)，B：CH3CN)，流动速率：25mL/min)纯化，得到呈白色固体状的实施例48(65.1mg，28％产率)。
LCMS：在10-80CD_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.795min，MS(ESI)m/z＝583.1[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ML色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝3.45min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.84(br s，1H)，9.78(br s，1H)，8.43-8.35(m，2H)，7.64(br s，1H)，7.02(dd，J＝8.4Hz，12.0Hz，1H)，6.76(s，1H)，6.37-6.32(m，2H)，5.82-5.77(m，1H)，3.87(s，3H)，3.16-3.04(m，4H)，2.94-2.85(m，1H)，2.30(s，6H)，2.24-2.08(m，2H)，2.05-1.90(m，2H)，1.69(s，3H)，0.92-0.86(m，3H)。
实施例49
N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丁-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001581
用于制备化合物49a的程序：
向化合物47f(200mg，0.43mmol)和K2CO3(119mg，0.86mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加化合物N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(53mg，0.52mmol)。在18-25℃下搅拌所得混合物0.5小时。在冰水浴中，在搅拌下将反应混合物逐滴添加至H2O(50mL)中，过滤沉淀的固体并用CH2Cl2(50mL)溶解滤饼，干燥并减压浓缩，得到呈橙色固体状的化合物49a(230mg，97％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.778min，MS(ESI)m/z＝547.0[M+H]+。
用于制备化合物49b的程序：
向化合物49a(230mg，0.42mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(35mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在氢气球(15Psi)下，在18-20℃下搅拌0.5小时。过滤反应混合物并减压浓缩滤液，得到呈暗红色固体状的化合物49b(150mg，69％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.691min，MS(ESI)m/z＝517.2[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，MeOH-d4)δ8.20(br s，2H)，7.16(dd，J＝8.8Hz，12.0Hz，1H)，6.83(s，1H)，3.80(s，3H)，3.07-3.01(m，2H)，2.65(s，3H)，2.48(t，J＝7.2Hz，2H)，2.27(s，6H)，1.90-1.83(m，2H)，1.58(s，3H)，0.81(t，J＝7.2Hz，3H)。
用于制备实施例49的程序：
向化合物49b(150mg，0.29mmol)和DIEA(56mg，0.44mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中逐滴添加溶于DMF(0.5mL)中的丙烯酰氯(26mg，029mmol)。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物20分钟。用三滴水淬灭反应混合物并直接通过制备型HPLC(色谱柱：Xbridge BEHC18，250*50mm，10μm，条件：44-84％B(A：水(0.04％NH3H2O+10mM NH4HCO3))，B：CH3CN)，流动速率：25mL/min)纯化，得到呈浅黄色固体状的实施例49(31.3mg，20％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.877min，MS(ESI)m/z＝571.1[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝2.72min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.91(br s，1H)，10.42(br s，1H)，9.94(br s，1H)，8.40(s，1H)，8.39-8.33(m，1H)，7.70(br s，1H)，7.02(dd，J＝8.4Hz，12.0Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.44-6.26(m，2H)，5.93(br s，1H)，5.78-5.72(m，1H)，3.88(s，3H)，2.87(br t，J＝4.8Hz，2H)，2.70(s，3H)，2.35-2.20(m，8H)，2.19-2.09(m，1H)，2.07-1.99(m，1H)，1.70(s，3H)，0.88(t，J＝7.6Hz，3H)。
实施例50
N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丁-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-((3aS，6aS)-5-甲基六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-1(2H)-基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001591
用于制备化合物50a的程序：
向化合物47f(150mg，0.32mmol)于DMSO(3mL)中的混合物中添加K2CO3(134mg，0.97mmol)和(3aS，6aS)-5-甲基八氢吡咯并[3，4-b]吡咯(60mg，0.48mmol)。在50℃下搅拌所得混合物12小时，接着在80℃下搅拌2小时。将反应混合物倒入水(15mL)中，同时沉淀析出橙色固体。通过抽吸过滤收集固体并真空干燥，得到化合物50a(190mg，91.7％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.019min，MS(ESI)m/z＝571.1[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.83(br.s，1H)，8.45-8.05(m，2H)，7.29(br.s，1H)，7.02-6.88(m，1H)，6.33(s，1H)，4.39-4.31(m，1H)，3.89(s，3H)，3.54-3.41(m，1H)，3.19-3.10(m，1H)，3.02-2.92(m，1H)，2.63-2.55(m，1H)，2.48-2.42(m，1H)，2.40-2.34(m，1H)，2.24-2.18(m，1H)，2.15(d，J＝2.4Hz，3H)，2.07-1.99(m，1H)，1.90-1.87(m，1H)，1.82-1.76(m，2H)，1.59(s，3H)，0.81(t，J＝7.2Hz，3H)。
用于制备化合物50b的程序：
向化合物50a(190mg，0.33mmol)于甲醇/水(5mL/1mL)中的黄色溶液中添加NH4Cl(125mg，2.33mmol)和Zn(109mg，1.66mmol)。在90℃下搅拌所得混合物1小时。将反应混合物倒入水(15mL)中并用二氯甲烷/甲醇(3/1，10mL×4)萃取。干燥合并的有机层并真空浓缩，得到呈黑色固体状的化合物50b(170mg，95.2％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.526min，MS(ESI)m/z＝541.2[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.86(br.s，1H)，8.29-8.15(m，2H)，7.78-7.42(m，2H)，7.01-6.88(m，1H)，6.62(s，1H)，4.06-3.96(m，1H)，3.74(s，3H)，3.42-3.32(m，1H)，2.88-2.79(m，1H)，2.77-2.68(m，1H)，2.63-2.55(m，1H)，2.54-2.48(m，1H)，2.47-2.38(m，1H)，2.22(s，3H)，2.15-2.07(m，1H)，2.06-1.97(m，1H)，1.85(q，J＝7.2Hz，2H)，1.77-1.73(m，1H)，1.57(s，3H)，0.79(t，J＝7.2Hz，3H)。
用于制备实施例50的程序：
向化合物50b(170mg，0.31mmol)于DMF(3mL)中的溶液中添加DIEA(81mg，0.63mmol)，随后在0℃下分三次添加丙烯酰氯(28mg，0.31mmol)，接着搅拌2小时。用3滴水淬灭混合物并通过制备型HPLC(色谱柱：Waters Xbridge150*25 5μm，条件：45％-75％B(A：水/10mM NH4HCO3，B：CH3CN)，流动速率：25mL/min)纯化，得到呈白色固体状的实施例50(39.8mg，21.6％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.697min，MS(ESI)m/z＝595.1[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ml色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝3.94min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.84(br.s，1H)，9.87(s，1H)，9.49(s，1H)，8.37-8.25(m，2H)，7.60(br.s，1H)，6.95(dd，J＝8.8，12.4Hz，1H)，6.71(s，1H)，6.46-6.22(m，1H)，5.68(d，J＝11.6Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.60-3.53(m，1H)，3.17-3.08(m，1H)，2.88-2.78(m，2H)，2.77-2.72(m，1H)，2.68-2.60(m，1H)，2.28-2.24(m，1H)，2.22(s，3H)，2.18-2.03(m，2H)，2.00-1.89(m，1H)，1.85-1.72(m，2H)，1.65(s，3H)，0.86-0.77(m，3H)。
实施例51
(R)-N-(5-(4-(4-氯-5-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001611
用于制备化合物51a的程序：
向化合物41e(200mg，0.43mmol)于DMSO(5mL)中的混合物中添加K2CO3(178mg，1.29mmol)和(R)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺(59mg，0.51mmol)。在23-29℃下搅拌所得橙色混合物4小时。将混合物倒入水(25mL)中并通过抽吸过滤收集沉淀的橙色固体。真空干燥固体，得到化合物51a(230mg，95％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.778min，MS(ESI)m/z＝583.0[M+Na]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.06(br.s，1H)，8.92(br.s，1H)，8.46-8.25(m，2H)，7.35(br.s，1H)，7.26(s，1H)，6.31(s，1H)，3.95(s，3H)，3.61-3.52(m，1H)，3.39-3.32(m，1H)，3.25-3.12(m，2H)，2.89-2.78(m，1H)，2.31(s，6H)，2.02-1.81(m，2H)，1.71(d，J＝5.2Hz，6H)。
用于制备化合物51b的程序：
向化合物51a(230mg，0.41mmol)于甲醇/水(5mL/1mL)中的黄色溶液中添加NH4Cl(154mg，2.87mmol)和Zn(134mg，2.05mmol)。在90℃下搅拌所得混合物1小时。将混合物倒入水(20mL)中并用二氯甲烷(15mL×5)萃取。合并的有机层经硫酸钠脱水，过滤并真空浓缩，得到呈绿色固体状的化合物51b(180mg，82.7％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.713min，MS(ESI)m/z＝531.0[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.86(br.s，1H)，8.30-8.16(m，2H)，7.79-7.39(m，2H)，7.18(s，1H)，6.59(s，1H)，3.75(s，3H)，3.16-2.98(m，4H)，2.95-2.84(m，1H)，2.29(s，6H)，1.88-1.79(m，2H)，1.61(s，6H)。
用于制备实施例51的程序：
向化合物51b(160mg，0.3mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加DIEA(78mg，0.6mmol)并在0℃下搅拌，随后在0℃下分三次添加丙烯酰氯(27mg，0.3mmol)并搅拌0.5小时。将反应混合物与前一批料的混合物组合并通过制备型HPLC(色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm，条件：42％-72％B(A：水/10mM NH4HCO3，B：CH3CN)，流动速率：25mL/min)纯化，得到呈白色固体状的实施例51(91.4mg，46％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.660min，MS(ESI)m/z＝585.2[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ml色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝3.46min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.67(br.s，1H)，9.63(s，1H)，8.53(s，1H)，8.38-8.26(m，2H)，7.57(s，1H)，7.22-7.16(m，1H)，6.63(s，1H)，6.51-6.38(m，1H)，6.35-6.25(m，1H)，5.73(d，J＝10.0Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.15-3.06(m，2H)，3.04-2.96(m，2H)，2.94-2.85(m，1H)，2.30(s，6H)，2.15-2.10(m，1H)，1.99-1.94(m，1H)，1.68(s，6H)。
实施例52
(R)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001631
用于制备化合物52a的程序：
向化合物36b(200mg，0.429mmol)和K2CO3(119mg，0.858mmol)于DMSO(3mL)中的溶液中添加(R)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺(59mg，0.515mmol)。在22-30℃下搅拌反应混合物4小时，接着在50℃下搅拌1小时，同时颜色从褐色变为深橙色。在冰水浴下，将反应混合物逐滴添加至H2O(40mL)中。通过过滤收集沉淀的固体并用H2O(15mL×3)洗涤，用CH2Cl2(20mL)溶解滤饼，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈橙色固体状的化合物52a(210mg，87.4％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.677min，MS(ESI)m/z＝559.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.42(s，1H)，7.99(d，J＝7.6Hz，1H)，7.96(d，J＝5.6Hz，1H)，7.24(d，J＝10.8Hz，1H)，6.50(s，1H)，6.15(d，J＝5.6Hz，1H)，3.96(s，3H)，3.54(dt，J＝6.4，10.4Hz，1H)，3.36(t，J＝9.2Hz，1H)，3.28-3.24(m，1H)，3.09(dd，J＝6.8，10.0Hz，1H)，2.93-2.81(m，1H)，2.33(s，6H)，2.30-2.25(m，1H)，1.97-1.82(m，1H)，1.59(d，J＝3.6Hz，6H)。
用于制备化合物52b的程序：
向化合物52a(210mg，0.375mmol)于5mL MeOH/H2O＝5/1(v/v)中的溶液中添加Zn(147mg，2.25mmol)和NH4Cl(120mg，2.25mmol)。在90℃下加热所得混合物2小时，同时颜色从橙色变为褐色。过滤反应混合物，并真空浓缩滤液，得到粗残余物，用CH2Cl2(20mL)溶解，用水(15mL×3)洗涤，接着经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈褐色固体状的化合物52b(125mg，63％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.629min，MS(ESI)m/z＝530.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.85(s，1H)，8.15(d，J＝7.2Hz，1H)，8.03(d，J＝6.0Hz，1H)，7.87(s，1H)，7.43(s，1H)，7.08(d，J＝10.4Hz，1H)，6.66(s，1H)，6.05(d，J＝5.6Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.20-3.11(m，2H)，3.06-2.97(m，2H)，2.91-2.83(m，1H)，2.28(s，6H)，2.17-2.09(m，1H)，1.92-1.81(m，1H)，1.65(s，6H)。
用于制备实施例52的程序：
在冰水浴中，向化合物52b(125mg，0.236mmol)和DIEA(46mg，0.354mmol)于DMF(1.5mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(21mg，0.236mmol)。在5-10℃下搅拌所得混合物15分钟。利用H2O(0.1mL)淬灭反应，接着过滤，滤液直接通过制备型HPLC(色谱柱：Xtimate C18150*25mm*5μm；条件：35-65％B(A：0.04％NH3·H2O+10mM NH4HCO3，B：CH3CN)；流动速率：30ml/min)纯化，接着冻干，得到呈灰白色固体状的实施例52(14.5mg，10.5％产率)。
LCMS：在10-80CD_3min_220&254.1cm色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm，5μm)中，Rt＝2.028min，MS(ESI)m/z＝584.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.62(s，1H)，9.43(br s，1H)，8.59(br s，1H)，8.08(d，J＝5.2Hz，1H)，7.53(d，J＝6.8Hz，1H)，7.47(br s，1H)，7.14(d，J＝10.8Hz，1H)，6.75(s，1H)，6.41-6.31(m，3H)，5.77(t，J＝5.4Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.15-3.02(m，4H)，2.97-2.84(m，1H)，2.30(s，6H)，2.21-2.14(m，1H)，1.99-1.94(m，1H)，1.72(s，6H)。
实施例53
(R)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-(2-((二甲基氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001651
用于制备化合物53a的程序：
向化合物36b(150mg，0.32mmol)和K2CO3(442mg，3.20mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加(R)-1-(氮杂环丁烷-2-基)-N，N-二甲基甲胺三氟乙酸盐(986mg，3.20mmol)。在85℃下搅拌所得混合物4小时，同时颜色从浅黄色变为深黄色。将反应混合物倒入冰水(50mL)中且黄色固体沉淀。过滤固体并用CH2Cl2(20mL)溶解，接着经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物53a(150mg，84％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.692min，MS(ESI)m/z＝559.9[M+H]+。
用于制备化合物53b的程序：
向化合物53a(150mg，0.27mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(15mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在氢气球(15Psi)下，在22-30℃下搅拌1小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈黑色固体状的化合物53b(100mg，70％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.663min，MS(ESI)m/z＝530.0[M+H]+。
用于制备实施例53的程序：
向化合物53b(100mg，0.19mmol)和DIEA(49mg，2.0eq，0.38mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中添加溶于DMF(0.5mL)中的丙烯酰氯(17mg，0.19mmol)。在冰-水浴下，在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应混合物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：36-66％B(A：0.05％NH3H2O；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例53(12.2mg，11％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.378min，MS(ESI)m/z＝584.1[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝2.74min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.41-9.33(m，2H)，8.95(br s，1H)，8.08(d，J＝6.0Hz，1H)，7.52(br d，J＝6.8Hz，1H)，7.44(s，1H)，7.15(d，J＝10.4Hz，1H)，6.68(s，1H)，6.38(d，J＝2.8Hz，1H)，6.36-6.30(m，2H)，5.81-5.75(m，1H)，5.62-5.36(m，1H)，4.19(br d，J＝6.8Hz，1H)，3.90(s，3H)，3.83-3.78(m，1H)，3.56(q，J＝8.4Hz，1H)，2.65(br dd，J＝5.6，12.4Hz，1H)，2.45(br dd，J＝6.8，12.8Hz，1H)，2.37(br d，J＝7.6Hz，1H)，2.26(s，6H)，2.16-2.08(m，1H)，1.71(d，J＝2.8Hz，6H)。
实施例54
(R)-N-(5-(4-(4，5-二氯-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(2-((二甲基氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001661
该合成遵循与实施例19类似的实验程序，得到呈灰白色固体状的实施例54。
LCMS：在10-80CD_7min_220&254.1cm中，Rt＝4.386min；XBrige Shield RP182.1*50mm MS(ESI)m/z＝601.3[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝3.72min。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.54(br s，1H)，9.32(br s，1H)，8.84(br s，1H)，8.51(s，1H)，8.33(s，1H)，7.52(br s，1H)，7.25(s，1H)，6.59-6.52(m，1H)，6.34-6.26(m，2H)，5.76-5.68(m，1H)，4.22-4.12(m，1H)，3.82(s，3H)，3.78(br s，1H)，3.48(q，J＝8.0Hz，1H)，2.60(br dd，J＝5.6，12.8Hz，1H)，2.45-2.26(m，2H)，2.20(s，6H)，2.09-1.90(m，2H)，1.67(br s，6H)。
实施例55
N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丁-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((R)-2-((二甲基氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001671
该合成遵循与实施例47类似的实验程序，得到呈白色固体状的实施例55。LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.741min，MS(ESI)m/z＝583.1[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ML色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝3.49min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.70(br s，1H)，9.43(br s，1H)，8.87(br s，1H)，8.39-8.26(m，2H)，7.62-7.48(m，1H)，6.99(dd，J＝8.8Hz，12.4Hz，1H)，6.61(br d，J＝＝6.0Hz，1H)，6.40-6.26(m，2H)，5.80-5.74(m，1H)，4.27-4.16(m，1H)，3.88(s，3H)，3.84-3.79(m，1H)，3.60-3.51(m，1H)，2.65(br dd，J＝5.6Hz，13.6Hz，1H)，2.49-2.32(m，2H)，2.24(s，6H)，2.16-1.91(m，3H)，1.66(s，3H)，0.86(q，J＝7.6Hz，3H)。
实施例56
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丁-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((R)-2-((二甲基氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001681
用于制备化合物56b的程序：
在氮气下，向化合物56a(5g，22.28mmol)于DMF(50mL)中的溶液中添加Pd(PPh3)2Cl2(1.0g，1.42mmol)和化合物47b(8.85g，24.5mmol)。在氮气下，在100℃下搅拌混合物12小时，接着将其冷却至室温，将HCl水溶液(6M，8mL)添加至混合物中并在25℃下再搅拌3小时。用水(250mL)稀释混合物并用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。用水(300mL)洗涤合并的有机层，经硫酸钠脱水，过滤并真空浓缩，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(0至10％EtOAc/PE(v/v))纯化，得到化合物56b(1.89g，45％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.071min，MS(ESI)m/z＝187.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.39(d，J＝10.0Hz，1H)，6.65(d，J＝4.0Hz，1H)，2.47(s，3H)。
用于制备化合物56c的程序：
在氮气下，在0℃下向化合物56b(1.69g，9.01mmol)于THF(20mL)中的黄色溶液中逐滴添加EtMgBr(12mL，36.03mmol)。在19-24℃下搅拌所得混合物3小时。用饱和NH4Cl溶液(100mL)淬灭混合物并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层与前一批次组合并真空浓缩，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(0至10％EtOAc/PE)纯化，得到呈黄色油状的化合物56c(1.1g，50％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.429min，MS(ESI)m/z＝199.9[M-H2O+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ6.94(d，J＝11.6Hz，1H)，6.71(d，J＝6.8Hz，1H)，5.50(s，2H)，1.88-1.72(m，2H)，1.43(s，3H)，0.72(t，J＝7.2Hz，3H)。
用于制备化合物56d的程序：
向化合物56c(1.34g，6.16mmol)于二氯甲烷(20mL)中的黄色溶液中依序添加DIEA(1.59g，12.31mmol)和2，4-二氯-1，3，5-三嗪(1.02g，6.77mmol)。在21-29℃下搅拌所得黄色溶液2小时。真空浓缩混合物，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(0至10％EtOAc/PE)纯化，得到呈黄色固体状的化合物56d(1.28g，58％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.922min，MS(ESI)m/z＝330.7[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.35-10.03(m，1H)，8.62-8.44(m，1H)，8.35(d，J＝7.2Hz，1H)，7.02(d，J＝10.4Hz，1H)，2.44(br.s，1H)，1.95-1.88(m，2H)，1.66(s，3H)，0.87(t，J＝7.2Hz，3H)。
用于制备化合物56e的程序：
向化合物56d(1.28g，3.87mmol)于n-BuOH/TFA(10mL/0.1mL)中的混合物中添加4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(720mg，3.87mmol)。在23-29℃下搅拌混合物4小时，同时沉淀析出灰色固体。通过抽吸过滤收集固体并在高真空中干燥，得到化合物56e(1.07g，57.5％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.984min，MS(ESI)m/z＝481.1[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，DMSO-d6)δ10.46(br s，1H)，8.36(s，1H)，7.40(d，J＝13.6Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.26(br d，J＝10.8Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.05(s，1H)，3.93(s，3H)，1.85-1.68(m，2H)，1.51(s，3H)，0.72(t，J＝7.2Hz，3H)。
用于制备化合物56f的程序：
向化合物56e(150mg，0.31mmol)于DMSO(3mL)中的混合物中添加K2CO3(474mg，3.43mmol)和(R)-1-(氮杂环丁烷-2-基)-N，N-二甲基甲胺三氟乙酸盐(1.07mg，3.12mmol)。在85℃下搅拌所得混合物1小时。将反应混合物与前一批次组合并倒入冰水(20mL)中，通过抽吸过滤收集沉淀的橙色固体并用水(10mL)洗涤，接着真空干燥，得到化合物7(160mg，79％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.003min，MS(ESI)m/z＝575.1[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.66(s，1H)，8.90(s，1H)，8.45-8.18(m，2H)，7.28(br.s，1H)，6.93(d，J＝10.4Hz，1H)，6.75(br.s，1H)，4.35(br.s，1H)，4.29-4.18(m，1H)，3.87(s，3H)，3.28-3.15(m，1H)，2.82-2.74(m，1H)，2.68-2.60(m，1H)，2.50-2.23(m，2H)，2.26(s，3H)，2.14-2.02(m，1H)，1.92-1.85(m，2H)，1.54(s，6H)，0.81(t，J＝7.2Hz，3H)。
用于制备化合物56g的程序：
向化合物56f(160mg，0.28mmol)于甲醇/水(5mL/1mL)中的黄色溶液中添加NH4Cl(89mg，1.67mmol)和Zn(90mg，1.39mmol)。在90℃下搅拌所得混合物1小时。将反应混合物倒入水(20mL)中并用二氯甲烷/甲醇＝3∶1(v/v)(10mL×3)萃取。干燥合并的有机层并真空浓缩，得到呈黑色固体状的化合物56g(150mg，98％产率)。
LCMS：在0-60AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.144min，MS(ESI)m/z＝545.2[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.66(br.s，1H)，8.30(br.s，1H)，8.21(br.s，1H)，7.78-7.37(m，2H)，6.93(d，J＝10.4Hz，1H)，6.45(s，1H)，4.21-4.09(m，1H)，4.00-3.88(m，1H)，3.76(s，3H)，3.34-3.20(m，1H)，2.43-2.30(m，1H)，2.22-2.17(m，5H)，2.14-2.00(m，2H)，1.89-1.83(m，2H)，1.61-1.51(m，6H)，0.82-0.77(m，3H)。
用于制备实施例56的程序：
向化合物56g(150mg，0.27mmol)于DMF(2mL)中的黑色溶液中添加DIEA(71mg，0.55mmol)，随后在0℃下分三次添加丙烯酰氯(25mg，0.27mmol)并在0℃下搅拌1小时。用3滴水淬灭混合物并直接通过制备型HPLC(色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm，条件：41％-61％B(A：水/10mM NH4HCO3，B：CH3CN)，流动速率：25mL/min)纯化，得到呈灰色固体状的实施例56(31.9mg，19.7％产率)，提供11.6mg且其余20.3mg批料通过SFC分离进一步纯化。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.709min，MS(ESI)m/z＝621.1[M+Na]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ml色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝3.65min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.68(br s，1H)，9.41(br s，1H)，8.90(br s，1H)，8.61-8.25(m，2H)，7.59(br s，1H)，7.02(d，J＝9.6Hz，1H)，6.64(br s，1H)，6.39(br s，2H)，5.80(br s，1H)，4.41-4.16(m，1H)，4.02-3.78(m，4H)，3.66-3.45(m，1H)，2.83-2.62(m，1H)，2.58-2.46(m，1H)，2.44-2.37(m，1H)，2.30(s，6H)，2.21-2.05(m，3H)，1.69(s，3H)，0.94-0.83(m，3H)。
实施例57
N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丁-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((R)-2-((二甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001711
该合成遵循与实施例47类似的实验程序，得到呈浅黄色固体状的实施例57。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.928min，MS(ESI)m/z＝597.1[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ML色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝4.09min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.92(br s，1H)，10.14-9.97(m，1H)，9.95-9.80(m，1H)，8.40(s，1H)，8.39-8.34(m，1H)，7.68(br d，J＝9.6Hz，1H)，7.03(dd，J＝8.4Hz，12.4Hz，1H)，6.71(s，1H)，6.36(br d，J＝5.2Hz，2H)，6.04-5.63(m，2H)，3.86(s，3H)，3.39-3.26(m，2H)，3.01-2.92(m，1H)，2.42-2.32(m，1H)，2.19(s，6H)，2.13-1.91(m，5H)，1.70(s，3H)，1.68-1.63(m，2H)，0.94-0.84(m Hz，3H)。
实施例58
N-(5-(4-(4，5-二氟-2-(2-羟基丁-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((S)-2-((二甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001721
该合成遵循与实施例47类似的实验程序，得到呈白色固体状的实施例58。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.959min，MS(ESI)m/z＝619.1[M+Na]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝2.74min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.91(br s，1H)，10.24-9.80(m，2H)，8.48-8.33(m，2H)，7.68(br d，J＝10.4Hz，1H)，7.03(dd，J＝8.8，12.4Hz，1H)，6.71(s，1H)，6.36(br d，J＝4.4Hz，2H)，5.79-5.75(m，1H)，3.87(s，3H)，3.32(br d，J＝10.8Hz，2H)，3.02-2.91(m，1H)，2.44-2.32(m，1H)，2.23-2.16(m，7H)，2.14-1.86(m，6H)，1.70(s，3H)，0.89(td，J＝7.6，12.0Hz，3H)。
实施例59
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丁-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001731
该合成遵循与实施例56类似的实验程序，得到呈白色固体状的实施例59。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254.1cm色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.713min，MS(ESI)m/z＝599.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.78(br s，1H)，9.77(br s，1H)，8.54(br s，1H)，8.53(br s，1H)，8.41(s，1H)，7.64(br s，1H)，7.01(d，J＝10.8Hz，1H)，6.74(s，1H)，6.48-6.29(m，2H)，5.86-5.76(m，1H)，5.62(br s，1H)，3.87(s，3H)，3.17-3.03(m，4H)，2.98-2.86(m，1H)，2.33(s，6H)，2.24-2.15(m，1H)，2.14-2.07(m，1H)，2.05-1.95(m，2H)，1.69(s，3H)，0.89(dt，J＝3.2，7.6Hz，3H)。
实施例60
(S)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001741
该合成遵循与实施例33类似的实验程序，得到呈白色固体状的实施例60。
LCMS在10-80AB_4min_220&254.1cm色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.568min，MS(ESI)m/z＝585.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.51(br s，1H)，9.72(br s，1H)，8.56(br s，1H)，8.47(d，J＝7.2Hz，1H)，8.40(s，1H)，7.63(br s，1H)，7.08(d，J＝10.8Hz，1H)，6.71(s，1H)，6.55-6.26(m，2H)，5.88(br s，1H)，5.79(d，J＝9.2Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.20-2.99(m，4H)，2.90(quin，J＝6.8Hz，1H)，2.31(s，6H)，2.23-2.12(m，1H)，2.03-1.90(m，1H)，1.75(br s，6H)。
实施例61
(R)-N-(5-(4-(4，5-二氯-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001742
该合成遵循与实施例33类似的实验程序，得到呈白色固体状的实施例61。
LCMS：在0-60AB_4.0min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.535min，MS(ESI)m/z＝601.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.71(br s，1H)，9.80(br s，1H)，8.63(s，1H)，8.52(brs，1H)，8.44(s，1H)，7.67(br s，1H)，7.35(s，1H)，6.76(s，1H)，6.39-6.38(m，2H)，5.95-5.70(m，2H)，3.89(s，3H)，3.15-3.08(m，4H)，2.94-2.87(m，1H)，2.32(s，6H)，2.24-2.13(m，1H)，1.96-1.93(m，1H)，1.78(s，6H)。
实施例62
(R)-N-(5-(4-(4-氯-5-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(2-((二甲基氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001751
该合成遵循与实施例41类似的实验程序，得到呈白色固体状的实施例62。
LCMS：在10-80AB_3min_220&254色谱(Xtimate C18，2.1*30mm，3μm)中，Rt＝1.493min，MS(ESI)m/z＝585.3[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ml.met XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm中，Rt＝3.52min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.66(br s，1H)，9.50-9.19(m，1H)，8.93(br s，1H)，8.50-8.28(m，2H)，7.58(br s，1H)，7.26(br s，1H)，6.62(s，1H)，6.44-6.28(m，2H)，5.80(br d，J＝9.6Hz，1H)，4.29-4.17(m，1H)，3.90(s，3H)，3.87-3.79(m，1H)，3.58(q，J＝8.4Hz，1H)，2.73-2.62(m，1H)，2.56-2.40(m，2H)，2.26(s，6H)，2.18-2.00(m，1H)，1.75(s，6H)。
实施例63
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丁-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((R)-2-((二甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001761
该合成遵循与实施例56类似的实验程序，得到呈白色固体状的实施例63。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254.1cm色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.870min，MS(ESI)m/z＝613.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.86(br s，1H)，10.04(d，J＝27.6Hz，1H)，9.89(br d，J＝20.0Hz，1H)，8.53(dd，J＝2.8，7.2Hz，1H)，8.41(s，1H)，7.69(d，J＝8.8Hz，1H)，7.02(d，J＝10.8Hz，1H)，6.70(s，1H)，6.36(s，1H)，6.35(br s，1H)，5.92(br s，1H)，5.77(t，J＝5.8Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.39-3.24(m，2H)，3.02-2.92(m，1H)，2.37(dd，J＝7.8，12.0Hz，1H)，2.23-2.16(m，7H)，2.13-1.88(m，5H)，1.70(s，3H)，1.69-1.64(m，1H)，0.89(td，J＝7.4，20.0Hz，3H)。
实施例64
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丁-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((S)-2-((二甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001771
该合成遵循与实施例56类似的实验程序，得到呈浅黄色固体状的实施例64。
LCMS：在10-80AB_3min_220&254色谱(Xtimate C18，2.1*30mm，3μm)中，Rt＝1.473min，MS(ESI)m/z＝613.3[M+H]+。
HPLC：Rt＝4.27min，10-80_CD_1.2ml.met XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.86(br s，1H)，10.15-9.97(m，1H)，9.93-9.79(m，1H)，8.53(br d，J＝7.4Hz，1H)，8.41(s，1H)，7.73-7.63(m，1H)，7.02(d，J＝10.8Hz，1H)，6.71(s，1H)，6.36(br d，J＝5.2Hz，2H)，5.91(brs，1H)，5.82-5.73(m，1H)，3.87(s，3H)，3.40-3.22(m，2H)，2.97(q，J＝7.2Hz，1H)，2.46-2.30(m，2H)，2.22-2.16(m，7H)，2.13-1.89(m，6H)，1.71(s，3H)，0.94-0.85(m，3H)。
实施例65
(S)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-(2-((二甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001781
该合成遵循与实施例31类似的实验程序，得到呈白色固体状的实施例65。
LCMS：在0-60AB_4.0min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.553min，MS(ESI)m/z＝621.0[M+Na]+。
1H NMR(CDCl3 400MHz)δ10.60(br s，1H)，10.09(br s，1H)，9.91(br s，1H)，8.48(d，J＝7.2Hz，1H)，8.42(s，1H)，7.68(br s，1H)，7.10(d，J＝10.8Hz，1H)，6.70(s，1H)，6.45-6.29(m，2H)，6.11(br s，1H)，5.85-5.73(m，1H)，3.87(s，3H)，3.38-3.25(m，2H)，3.02-2.93(m，1H)，2.42-2.34(m，1H)，2.24-2.16(m，7H)，2.16-1.91(m，4H)，1.77(s，6H)。
实施例66
N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-(4-(2-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001782
用于制备化合物66b的程序：
在0℃下，向化合物66a(5.0g，29mmol)和三乙胺(3.82g，38mmol)于DCM(125mL)中的溶液中添加特戊酰氯(3.855g，32mmol)。在20℃下搅拌所得混合物16小时。用水(100mL)稀释反应混合物并分离有机相。用DCM(50mL×3)萃取水相，并用盐水(200mL×1)洗涤合并的有机层，经无水Na2SO4脱水，过滤并减压蒸发。残余物通过快速二氧化硅色谱法，由10％至30％EtOAc/石油醚(v/v)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈白色固体状的化合物66b(7.271g，98％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.44min，MS(ESI)m/z＝257.2[M+H]+。
用于制备化合物66c的程序：
在-30℃下，向化合物66b(2.0g，7.8mmol)于THF(46mL)中的溶液中添加n-BuLi(12mL，1.6M的己烷溶液)，在-30℃下搅拌所得混合物1小时。在-30℃下添加TFAA(2.5g，12mmol)，接着在20℃下再搅拌混合物16小时。用1M HCl溶液(32mL)淬灭混合物并用EA(20mL×5)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠脱水，过滤并减压浓缩。用浓盐酸(20mL)和THF(20mL)处理残余物，接着在80℃下加热所得混合物16小时。用饱和NaHCO3溶液(100mL)稀释反应混合物，用EA(50mL×5)萃取。用盐水(200mL×1)洗涤合并的有机层并减压蒸发。残余物通过硅胶快速色谱法，由0％至30％EtOAc/石油醚梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈褐色油状的化合物66c(863mg，58％产率)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 6.4(brs，2H)6.7-6.8(m，2H)7.3-7.4(m，1H)7.7-7.8(m，1H)。
用于制备化合物66d的程序：
在0℃下，向化合物66c(850mg，4.5mmol)于THF(17mL)中的溶液中添加甲基溴化镁(7.48mL，3M的THF溶液)。在20℃下搅拌所得反应物1小时。用饱和NH4Cl溶液(50mL)淬灭反应并用EA(50mL×3)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发。残余物通过硅胶快速色谱法，由10％至50％EtOAc/石油醚梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈褐色油状的化合物66d(342mg，21％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.16min，MS(ESI)m/z＝206.1[M+H]+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.7(s，3H)5.5(s，2H)6.5-6.5(m，1H)6.6(dd，J＝7.9，1.3Hz，1H)6.9(s，1H)7.0-7.0(m，1H)7.1(d，J＝8.2Hz，1H)。
用于制备化合物66e的程序：
将化合物6e(174mg，0.58mmol)和化合物66d(120mg，0.58mmol)于NMP(1mL)中的溶液密封并在80℃下加热40分钟。用水(50mL)稀释反应物并用EA(20mL×5)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发。残余物通过硅胶快速色谱法，由30％至100％EtOAc/石油醚梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈褐色固体状的化合物66e(235mg，85％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.90min，MS(ESI)m/z＝469.3[M+H]+。
用于制备化合物66f的程序：
在50℃下，将化合物66e(235mg，0.50mmol)、N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(72mg，0.70mmol)和DIEA(194mg，1.5mmol)于NMP(3.0mL)中的溶液加热80分钟。用水(100mL)稀释反应混合物并用EA(20mL×5)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发。残余物通过硅胶快速色谱法，由0％至10％MeOH/DCM梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈浅褐色固体状的化合物66f(191mg，69％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.28min，MS(ESI)m/z＝551.2[M+H]+。
用于制备化合物66g的程序：
将钯/碳(37mg)添加至化合物66f(95mg，0.17mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中。在氢气气氛下，在20℃下搅拌所得反应物30分钟。过滤混合物并减压蒸发滤液，得到呈浅褐色固体状的化合物66(90mg，粗品)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.19min，MS(ESI)m/z＝521.3[M+H]+。
用于制备实施例66的程序：
在0℃下，向化合物66g(90mg，0.17mmol)和DIEA(67mg，0.52mmol)于NMP(3mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(21mg，0.23mmol)于NMP(0.5mL)中的溶液。在0℃下搅拌反应混合物30分钟。接着，溶液通过C18-快速色谱法，由0％至60％MeCN/水(0.02％氨水)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份冻干至干燥，得到呈浅黄色固体状的实施例66(23mg，23％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.24min，MS(ESI)m/z＝575.3[M+H]+。
1H NMR：(500MHz，DMSO-d6)δ1.8(br s，3H)2.2(s，6H)2.3(br t，J＝5.7Hz，2H)2.7(s，3H)2.9(br d，J＝5.0Hz，2H)3.8(s，3H)5.7(br d，J＝10.7Hz，1H)6.2(br d，J＝17.3Hz，1H)6.4(br dd，J＝16.7，10.1Hz，1H)7.0(s，2H)7.0-7.3(m，1H)7.3-7.4(m，1H)8.4(s，1H)8.2(s，1H)8.2-8.4(m，1H)8.9(br s，1H)10.1(br s，1H)。
实施例67
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丁-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001811
该合成遵循与实施例56类似的实验程序，得到呈白色固体状的实施例67。
LCMS：在10-80AB_3min_220&254色谱(Xtimate C18，2.1*30mm)中，Rt＝1.585min，MS(ESI)m/z＝609.1[M+Na]+。
HPLC：Rt＝3.45 10-80AB_1.2ml.met(Ultimate C18 3*50mm 3μm)。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.84(br s，1H)，10.42(br s，1H)，9.94(br s，1H)，8.52(br d，J＝7.4Hz，1H)，8.41(s，1H)，7.70(br s，1H)，7.02(d，J＝10.8Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.42-6.29(m，2H)，5.97(br s，1H)，5.82-5.72(m，1H)，3.88(s，3H)，2.92-2.82(m，2H)，2.70(s，3H)，2.42-2.31(m，8H)，2.18-2.02(m，2H)，1.70(s，3H)，0.88(br t，J＝7.6Hz，3H)。
实施例68
(R)-N-(5-(4-(4，5-二氯-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001821
用于制备化合物68a的程序：
向化合物15c(900mg，4.09mmol)和DIEA(1.1g，8.18mmol)于异丙醇(2mL)中的溶液中添加2，4-二氯嘧啶(730mg，4.90mmol)。在90℃下加热所得混合物48小时。真空浓缩反应混合物，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(25-35％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈白色固体状的化合物68a(1.1g，81％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.883min，MS(ESI)m/z＝331.8/333.8[M+H]+。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.27(s，1H)，8.14(d，J＝6.0Hz，1H)，7.50(s，1H)，6.74(d，J＝6.0Hz，1H)，1.58(s，6H)。
用于制备化合物68b的程序：
向化合物68a(1.1g，3.31mmol)和4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(616mg，3.31mmol)于n-BuOH(10mL)中的溶液中添加TFA(0.1mL)。在50℃下搅拌所得混合物12小时。过滤反应混合物并减压干燥滤饼，得到呈白色固体状的化合物68b(1.3g，81％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.807min，MS(ESI)m/z＝482.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.53(br d，J＝8.8Hz，1H)，8.02-7.92(m，2H)，7.53(s，1H)，7.22(d，J＝12.8Hz，1H)，6.49(d，J＝7.3Hz，1H)，4.00(s，3H)，1.59(s，6H)。
用于制备化合物68c的程序：
向化合物68b(200mg，0.41mmol)和K2CO3(113mg，0.82mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加(R)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺(56mg，0.49mmol)。在16-21℃下搅拌所得混合物12小时，同时颜色从浅黄色变为深黄色。将反应混合物倒入冰水(50mL)中且黄色固体沉淀析出。通过过滤收集固体并用CH2Cl2(20mL)溶解，接着经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物68c(200mg，85％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.867min，MS(ESI)m/z＝576.0[M+H]+。
用于制备化合物68d的程序：
向化合物68c(200mg，0.35mmol)于EtOAc(5mL)中的溶液中添加Pd/C(40mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在氢气球(15Psi)下，在12-17℃下搅拌1小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物68d(150mg，78％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.670min，MS(ESI)m/z＝546.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.96(s，1H)，8.30(s，1H)，8.07(d，J＝5.6Hz，1H)，7.87(s，1H)，7.45(s，1H)，7.33(s，1H)，6.68(s，1H)，6.09(d，J＝5.6Hz，1H)，3.82(s，3H)，3.15(brd，J＝6.8Hz，2H)，3.05(br d，J＝6.4Hz，2H)，2.89(s，1H)，2.31(s，6H)，2.14(br s，1H)，1.90(br s，1H)，1.68(s，6H)。
用于制备化合物68e的程序：
在冰水浴中，向化合物68d(150mg，0.27mmol)于CH2Cl2(3mL)中的溶液中添加3-氯丙酰氯(35mg，0.27mmol)。在5-10℃下搅拌所得混合物5分钟，同时颜色从褐色变为黄色。将反应混合物倒入饱和NaHCO3(5mL)中并用CH2Cl2(15mL×2)萃取。合并的有机层经Na2SO4脱水并减压浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(10％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到呈白色固体状的化合物68e(90mg，52％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.709min，MS(ESI)m/z＝636.1/638.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.60-9.43(m，2H)，8.63-8.45(m，1H)，8.11(d，J＝5.6Hz，1H)，7.67(s，1H)，7.49(s，1H)，7.40(s，1H)，6.76(s，1H)，6.37(s，1H)，3.91(br d，J＝6.4Hz，2H)，3.86(s，3H)，3.10(br s，4H)，2.91(br s，2H)，2.33(br s，8H)，2.06(s，1H)，1.77-1.70(m，6H)。
用于制备实施例68的程序：
向化合物68e(90mg，0.14mmol)于CH3CN(3mL)中的溶液中添加TEA(42mg，0.42mmol)。在80℃下搅拌所得混合物18小时。减压浓缩反应混合物并在硅胶上通过快速柱色谱法(5％MeOH/CH2Cl2)纯化，减压浓缩洗脱液，接着冻干，得到呈浅黄色固体状的实施例68(33.1mg，31％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.589min，MS(ESI)m/z＝600.0[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝2.42min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.57(br d，J＝11.8Hz，2H)，8.04(d，J＝5.8Hz，1H)，7.52(s，1H)，7.41(s，1H)，7.32(s，1H)，6.65(br s，1H)，6.37-6.27(m，2H)，5.71(br d，J＝11.2Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.12(br d，J＝12.8Hz，2H)，3.07-2.98(m，2H)，2.98-2.92(m，1H)，2.39(br s，6H)，2.15(br s，2H)，1.66(s，6H)。
实施例69/实施例70
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-((R)-2-羟基丁-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺和N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-((S)-2-羟基丁-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001851
通过SFC分离实施例59(50mg，0.0835mmol)，得到呈白色固体状的实施例69(21.0mg，42％产率)和呈白色固体状的实施例70(24.6mg，49.2％产率)。
实施例69：
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.840min，MS(ESI)m/z＝＝621.0[M+Na]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ml色谱(xBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝3.88min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.79(br s，1H)，9.69(br s，1H)，8.79(br s，1H)，8.53(d，J＝7.2Hz，1H)，8.40(s，1H)，7.61(br s，1H)，7.01(d，J＝10.8Hz，1H)，6.73(br s，1H)，6.67(s，1H)，6.37(d，J＝16.4Hz，1H)，5.79(d，J＝10.8Hz，1H)，5.70(br s，1H)，3.87(s，3H)，3.41-3.24(m，2H)，3.18(br s，1H)，3.07(dd，J＝6.4，10.0Hz，1H)，2.98(q，J＝8.0Hz，1H)，2.55(s，6H)，2.30-2.20(m，2H)，2.14-2.08(m，1H)，2.04-1.99(m，1H)，1.69(s，3H)，0.88(t，J＝7.6Hz，3H)。
SFC：Rt＝6.855min，在AD-3_IPA(DEA)_5_40_2.5ML。
实施例70：
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.850min，MS(ESI)m/z＝599.0[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ml色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝3.85min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.79(br s，1H)，9.68(br s，1H)，8.86(br s，1H)，8.52(d，J＝7.2Hz，1H)，8.41(s，1H)，7.61(br s，1H)，7.01(d，J＝10.8Hz，1H)，6.84(br s，1H)，6.66(s，1H)，6.37(d，J＝16.4Hz，1H)，5.80(d，J＝11.2Hz，1H)，5.71(br s，1H)，3.87(s，3H)，3.45-3.31(m，2H)，3.25(br s，1H)，3.06(dd，J＝6.6，10.4Hz，1H)，2.96(q，J＝8.0Hz，1H)，2.60(br s，6H)，2.35-2.19(m，2H)，2.15-2.09(m，1H)，2.04-2.00(m，1H)，1.69(s，3H)，0.87(t，J＝7.6Hz，3H)。
SFC：Rt＝7.292min，在AD-3_IPA(DEA)_5_40_2.5ML。
实施例71
(R)-N-(5-(4-(4，5-二氯-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-(2-((二甲基氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001861
用于制备化合物71a的程序：
向化合物68b(200mg，0.42mmol)和K2CO3(1.2g，8.4mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加(R)-1-(氮杂环丁烷-2-基)-N，N-二甲基甲胺三氟乙酸盐(887mg，4.2mmol)。在50℃下搅拌所得混合物1小时。在冰水浴下，在搅拌下将反应混合物逐滴添加至H2O(100mL)中，过滤沉淀的固体并用CH2Cl2(45mL)溶解滤饼，接着干燥并真空浓缩，得到粗产物，通过快速反相C-18柱色谱法，用MeOH/TFA/H2O(10％至100％的甲醇水溶液)洗脱进一步纯化，得到呈黄色固体状的化合物71a(180mg，74％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.710min，MS(ESI)m/z＝576.1[M+H]+。
用于制备化合物71b的程序：
向71a(180mg，0.31mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(40mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在氢气球(15Psi)下，在15-21℃下搅拌1小时。过滤反应混合物并减压浓缩滤液，得到呈黑色固体状的化合物71b(140mg，73％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.689min，MS(ESI)m/z＝546.1[M+H]+。
用于制备化合物71c的程序：
在冰水浴下，向化合物71b(110mg，0.2mmol)于CH2Cl2(3mL)中的溶液中添加3-氯丙酰氯(26mg，0.2mmol)。在5-10℃下搅拌所得混合物45分钟，同时颜色从黑色变为褐色。将反应混合物倒入饱和NaHCO3(5mL)中，用CH2Cl2(15mL×2)萃取。依序用水(10mL×2)和盐水(10mL)洗涤合并的有机层，干燥并真空浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(0-5％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到呈褐色固体状的化合物71c(50mg，39％产率)。
LCMS：在10-80AB_2min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.883min，MS(ESI)m/z＝636.1[M+H]+。
用于制备实施例71的程序：
向化合物71c(50mg，0.078mmol)于CH3CN(5mL)中的溶液中添加Et3N(32mg，0.31mmol)。在80℃下搅拌所得混合物12小时。真空浓缩反应混合物，得到粗品，在硅胶上通过柱色谱法(0-5％MeOH/CH2Cl2)纯化，接着干燥并冻干，得到呈灰白色固体状的实施例71(24.1mg，51％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.648min，MS(ESI)m/z＝600.0[M+H]+。
HPLC：在10-80AB_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝2.42min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.76(br s，1H)，9.40(br s，1H)，8.76(br s，1H)，8.06(d，J＝5.6Hz，1H)，7.86-7.55(m，2H)，7.39(s，1H)，6.86(br s，1H)，6.67(s，1H)，6.43-6.35(m，2H)，5.80(d，J＝11.6Hz，1H)，5.70-5.43(m，1H)，4.69(br s，1H)，4.09(br s，1H)，3.95(s，3H)，3.45-3.33(m，1H)，3.16-3.08(m，2H)，2.75(br s，6H)，2.56-2.45(m，1H)，2.43-2.34(m，1H)，1.71(s，6H)。
实施例72
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(1-羟基环丁基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺甲酸盐
Figure BDA0002577093870001881
用于制备化合物72b的程序：
向化合物72a(2.0g，9.0mmol)于甲苯(15mL)中的混合物中添加甲酸(1.0g，22mmol)，使所得混合物回流8小时。真空浓缩混合物并用甲醇(10mL)洗涤粗产物，接着过滤。真空干燥固体，得到呈白色固体状的化合物72b(1.6g，71％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.12min，MS(ESI)m/z＝252.0，254.0[M+H]+。
用于制备化合物72c的程序：
在氮气气氛下，在-78℃下经3分钟向化合物72b(1.6g，6.3mmol)的混合物中添加n-BuLi(10mL，1.6M的己烷溶液)，随后添加环丁酮(1g，14mmol)。在氮气气氛下，在-78℃下搅拌所得混合物10分钟。利用饱和NH4Cl水溶液(50mL)淬灭混合物并用EtOAc(50mL)萃取。真空浓缩有机层，得到呈黄色油状的化合物2c(500mg，32％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.06min，MS(ESI)m/z＝226.0[M+H]+。
用于制备化合物72d的程序：
向化合物72c(500mg，2.1mmol)于乙醇(3mL)中的混合物中添加氢氧化钾(200mg，3.6mmol)和水(2mL)，在氮气气氛下，在70℃下加热所得混合物15分钟。用饱和NH4Cl水溶液(50mL)稀释混合物并用EtOAc(50mL)萃取。真空浓缩有机层，残余物通过C18-快速色谱法，由5％至60％MeCN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物72d(320mg，72％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.12min，MS(ESI)m/z＝198.2[M+H]+。
用于制备化合物72e的程序：
向化合物72d(302mg，1.4mmol)于DCM(5mL)中的混合物中添加2，4-二氯-1，3，5-三嗪(300mg，2.0mmol)和DIEA(300mg，2.3mmol)，在20℃下搅拌所得混合物16小时。接着混合物通过快速二氧化硅色谱法，由5％至50％EtOAc/石油醚梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物72e(350mg，77％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.39min，MS(ESI)m/z＝329.1[M+H]+。
用于制备化合物72f的程序：
向化合物72e(160mg，0.49mmol)于1-丁醇(8mL)中的混合物中添加4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(80mg，0.54mmol)和TFA(20mg，0.21mmol)，在55℃下搅拌所得混合物2小时。接着混合物通过C18-快速色谱法，由5％至70％MeCN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物72f(150mg，64％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.40min，MS(ESI)m/z＝479.1[M+H]+。
用于制备化合物72g的程序：
向化合物72f(80mg，0.17mmol)于NMP(5mL)中的混合物中添加N，N，N′-三甲基乙二胺(30mg，0.29mmol)和DIEA(40mg，0.31mmol)，在60℃下搅拌所得混合物1小时。接着混合物通过C18-快速色谱法，由5％至60％MeCN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物72g(70mg，75％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.00min，MS(ESI)m/z＝560.2[M+H]+。
用于制备化合物72h的程序：
向化合物72g(70mg，0.13mmol)于甲醇(5mL)中的混合物中添加钯/碳(20mg)，在氢气气氛下，在20℃下搅拌所得混合物1小时。接着过滤混合物并真空浓缩滤液，得到呈白色固体状的化合物72h(50mg，76％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.92min，MS(ESI)m/z＝531.3[M+H]+。
用于制备实施例72的程序：
在0℃下，向化合物72h(50mg，0.094mmol)于NMP(2mL)中的混合物中添加丙烯酰氯(10mg，0.11mmol)和DIEA(30mg，0.23mmol)，在0℃下搅拌所得溶液10分钟。混合物通过C18-快速色谱法，由5％至60％MeCN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈白色固体状的甲酸盐形式的实施例72(28mg，51％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.97min，MS(ESI)m/z＝585.3[M+H]+。
1H NMR：(500MHz，DMSO-d6)δ1.46(br d，J＝7.57Hz，1H)1.83(br s，1H)2.23-2.32(m，2H)2.35-2.44(m，2H)2.51-2.57(m，2H)2.59(s，3H)2.79(s，3H)2.80(s，3H)3.26-3.27(m，2H)3.81(s，3H)5.76(br d，J＝10.40Hz，1H)6.25(br d，J＝17.34Hz，1H)6.52(br s，1H)6.64(br dd，J＝17.18，10.25Hz，1H)7.00(br s，1H)7.40(br s，1H)8.04(br s，1H)8.26(s，1H)8.81-9.22(m，2H)9.24-9.51(m，2H)。
实施例73
(R)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基-2-(3-(甲基氨基)吡咯烷-1-基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001911
用于制备化合物73b的程序：
在85℃下，将化合物11c(200mg，0.428mmol)、化合物73a(128.71mg，0.642mmol)和K2CO3(118.4mg，0.856mmol)于DMSO(2mL)中的溶液搅拌2小时。将反应物与前一批料组合并在冰水浴下，在搅拌下添加至H2O(20mL)中，过滤沉淀的固体并用CH2Cl2(50mL)溶解滤饼，干燥并真空浓缩，得到呈橙色固体状的化合物73b(430mg，88.6％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.873min，MS(ESI)m/z＝647.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.71(br s，1H)，8.96(br s，1H)，8.38(m，2H)，7.36(s，1H)，7.08(d，J＝10.4Hz，1H)，6.32(s，1H)，4.82(m，1H)，3.96(s，3H)，3.43-3.28(m，3H)，3.14-3.04(m，1H)，2.86(s，3H)，2.22-2.10(m，2H)，1.70(s，6H)，1.47(s，9H)。
用于制备化合物73c的程序：
向化合物73b(380mg，0.587mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(200mg)。在氢气球(15Psi)下，在16-21℃下搅拌所得混合物3小时。过滤反应混合物，合并滤液与前一批次并真空浓缩，得到呈褐色固体状的化合物73c(380mg，92.7％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.823min，MS(ESI)m/z＝617.2[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.61(br s，1H)，8.33(m，2H)，7.87-7.33(m，2H)，7.09(d，J＝10.4Hz，1H)，6.63(s，1H)，4.91(br s，1H)，3.83(s，3H)，3.80-3.55(m，2H)，3.20(m，1H)，3.12-3.06(m，2H)，2.92(s，3H)，2.32-2.21(m，1H)，1.98-1.87(m，1H)，1.68(s，6H)，1.48(s，9H)。
用于制备化合物73d的程序：
在0℃下，向化合物73c(280.0mg，0.453mmol)和DIEA(87.65mg，0.679mmol)于DMF(2mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(41.07mg，0.453mmol)。在0℃下搅拌所得混合物1小时。用H2O(0.2mL)淬灭反应混合物，将其与前一批次组合并通过C18-反相快速柱色谱法(MeOH和水)纯化，得到化合物73d(114mg，27.6％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.868min，MS(ESI)m/z＝671.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.55(br s，1H)，9.87(br s，1H)，8.72-8.51(m，1H)，8.49(br d，J＝7.6Hz，1H)，8.42(s，1H)，7.66(br s，1H)，7.10(d，J＝10.8Hz，1H)，6.72(s，1H)，6.39(br s，2H)，6.02-5.63(m，2H)，4.71(br s，1H)，3.89(s，3H)，3.19-3.11(m，2H)，3.05-2.99(m，2H)，2.95(s，3H)，2.38-2.25(m，1H)，2.10-2.00(m，1H)，1.77(s，6H)，1.50(s，9H)。
用于制备实施例73的程序：
在15-21℃下，向化合物73d(94mg，0.146mmol)于CH2Cl2(3mL)中的溶液中添加TFA(1mL)。接着在此温度下搅拌所得混合物12小时。将反应物与前一批次组合并通过制备型HPLC(仪器：BH色谱柱：Gemini 150*25 5μm。流动相A：含0.05％氢氧化铵v/v的水，流动相B：CH3CN，流动速率：25ml/min，梯度时间：7分钟，特征说明：42％-72％)纯化，得到呈白色固体状的实施例73(27.0mg，27.8％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(A：Xtimate C18，2.1*30mm，3μm；B：XBrigeShield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝1.317min，MS(ESI)m/z＝571.2[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ml.met，XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm中，Rt＝3.02min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.54(br s，1H)，9.77(br s，1H)，8.72(br s，1H)，8.48(d，J＝7.2Hz，1H)，8.41(s，1H)，7.63(br s，1H)，7.09(d，J＝10.4Hz，1H)，6.72(s，1H)，6.51-6.30(m，2H)，5.80(br d，J＝11.4Hz，1H)，6.04-5.68(m，1H)，3.87(s，3H)，3.73(m，1H)，3.72-3.66(m，1H)，3.49(s，1H)，2.98(m，3H)，2.48(s，3H)，2.32-2.24(m，1H)，1.85-1.79(m，1H)，1.76(s，6H)。
实施例74
(R)-N-(5-(5-氯-4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001931
用于制备化合物74a的程序：
在80℃下，将化合物11b(350mg，1.72mmol)、2，4，5-三氯嘧啶(314.5mg，1.72mmol)和DIEA(444mg，3.44mmol)于i-PrOH(5mL)中的混合物搅拌5小时。将反应混合物与前一批次组合并真空浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过快速柱色谱法(0-10％EtOAc/石油醚)纯化两次，得到呈灰白色固体状的化合物74a(580mg，84.6％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.870min，MS(ESI)m/z＝351.8[M+H+2]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ8.45(d，J＝7.2Hz，1H)，8.17(s，1H)，7.09(d，J＝10.4Hz，1H)，2.77(br s，1H)，1.68(s，6H)。
用于制备化合物74b的程序：
在100℃下，将化合物74a(500mg，1.43mmol)、4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(345mg，1.85mmol)和TFA(350μL)于n-BuOH(3.5mL)中的混合物搅拌5小时。将反应物与前一批次组合，接着过滤，用n-BuOH(2mL)洗涤滤饼并真空干燥，得到呈灰色固体状的化合物74b(560mg，71.4％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.836min，MS(ESI)m/z＝500.1[M+H]+。
用于制备化合物74c的程序：
在80℃下，将化合物74b(150mg，0.3mmol)、(R)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺(41.1mg，0.36mmol)和K2CO3(83.0mg，0.6mmol)于DMSO(2mL)中的混合物搅拌5小时(褐色悬浮液)。将反应物与前一批料组合并添加至H2O(10mL)中，同时固体沉淀析出。通过过滤收集固体并用H2O(5mL)洗涤，在高真空中干燥，得到呈褐色固体状的化合物74c(220mg，92.8％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.709min，MS(ESI)m/z＝594.1[M+H]+。
用于制备化合物74d的程序：
在80℃下，将化合物74c(180mg，0.3mmol)、Zn(98.4mg，1.5mmol)和NH4Cl(81mg，1.5mmol)于MeOH/H2O(5.0/2.0mL)中的混合物搅拌3小时(黑色悬浮液)。过滤反应混合物并依序用CH2Cl2(20mL)和H2O(5mL)洗涤滤饼，用CH2Cl2(30mL×3)萃取滤液。用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过快速柱色谱法(用MeOH/CH2Cl2＝10/1(v/v)洗脱)纯化，得到呈灰色固体状的化合物74d(130mg，76.0％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.708min，MS(ESI)m/z＝564.1[M+H]+。
用于制备实施例74的程序：
在冰水浴下，向化合物74d(130mg，0.23mmol)和DIEA(89.1mg，0.69mmol)于DMF(3mL)中的混合物中逐滴添加丙烯酰氯(31.0mg，0.34mmol)。在0-5℃下搅拌反应4小时后，用MeOH(0.05mL)淬灭褐色溶液并直接通过制备型HPLC[Xtimate C18 150*25mm*5μm，条件：44-74％B(A：0.04％氨水+10mM NH4HCO3 B：CH3CN)；流动速率：30ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例74(32.4mg，22.8％产率)。
LCMS：在0-60AB_4.0min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.266min，MS(ESI)m/z＝618.0[M+H]+。
HPLC：在0-60_CD_1.2ML色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝5.68min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.76(br s，1H)，8.93(br s，1H)，8.46(d，J＝7.2Hz，1H)，8.20(br s，1H)，8.11(s，1H)，7.18(s，1H)，6.87(d，J＝10.4Hz，1H)，6.68(s，1H)，6.40-6.20(m，2H)，5.72(d，J＝10.8Hz，1H)，3.85(s，3H)，3.70-3.47(m，1H)，3.20-3.04(m，4H)，2.95-2.84(m，1H)，2.34(s，6H)，2.22-2.10(m，1H)，1.98-1.86(m，1H)，1.61(d，J＝2.0Hz，6H)。
实施例75
N-(5-(4-(5-环丙基-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001951
用于制备化合物75a的程序：
向化合物11c(500mg，1.07mmol)于二噁烷(10mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加环丙基硼酸(229mg，2.67mmol)、Pd(OAc)2(168mg，0.75mmol)、PCy3(420mg，1.50mmol)和Cs2CO3(1.1g，3.21mmol)。用N2使所得混合物脱气1分钟并在微波下，在130℃下搅拌1小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝2/1(v/v))纯化，得到呈褐色固体状的化合物75a(300mg，59％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.878min，MS(ESI)m/z＝473.1[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.32(s，1H)，8.55-8.28(m，1H)，7.72(s，1H)，7.51(br d，J＝13.6Hz，1H)，7.26-7.23(m，1H)，6.97(br d，J＝11.2Hz，1H)，6.76(d，J＝12.0Hz，1H)，4.02(s，3H)，2.16(br d，J＝7.2Hz，1H)，1.69-1.64(m，6H)，0.96(br s，2H)，0.73(br s，2H)。
用于制备化合物75b的程序：
向化合物75a(300mg，0.64mmol)和K2CO3(177mg，1.28mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(79mg，0.77mmol)。在14-23℃下搅拌所得混合物4小时，同时颜色从褐色变为深黄色。用EtOAc(20mL)稀释反应混合物并用水(30mL)洗涤。干燥有机层并减压浓缩，得到粗品，在硅胶上通过柱色谱法(5％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到呈黄色固体状的化合物75b(200mg，56％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.760min，MS(ESI)m/z＝555.1[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.47-8.93(m，1H)，8.38(br s，1H)，7.86-7.51(m，1H)，7.40(br s，1H)，7.21(s，1H)，7.04-6.88(m，1H)，6.65(s，1H)，3.96(s，3H)，3.28(br t，J＝7.2Hz，2H)，2.87(s，3H)，2.58(br t，J＝7.2Hz，2H)，2.27(s，7H)，1.73-1.65(m，6H)，1.00-0.90(m，4H)。
用于制备化合物75c的程序：
向化合物75b(200mg，0.36mmol)于EtOAc(10mL)中的溶液中添加Pd/C(40mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在氢气球(15Psi)下，在12-21℃下搅拌12小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈浅黄色固体状的化合物75c(160mg，85％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.799min，MS(ESI)m/z＝525.2[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.12(s，1H)，8.34(br s，1H)，7.85(s，1H)，7.62(s，1H)，7.26-7.23(m，1H)，7.06-6.90(m，1H)，6.67(s，1H)，3.82(s，3H)，3.00-2.93(m，2H)，2.69-2.64(m，3H)，2.43(br s，2H)，2.29(br s，6H)，2.10(br s，1H)，1.67(s，6H)，0.96(br s，2H)，0.77(br s，2H)。
用于制备化合物75d的程序：
在冰水浴下，向化合物75c(160mg，0.30mmol)于CH2Cl2(5mL)中的溶液中添加化合物3-氯丙酰氯(42mg，0.33mmol)。在0-5℃下搅拌所得混合物30分钟，同时极少未溶解的固体沉淀析出。将反应混合物倒入饱和NaHCO3(10mL)中并在15-22℃下搅拌30分钟，接着用CH2Cl2(15mL×2)萃取。合并的有机层经Na2SO4脱水并减压浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(5％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到呈浅黄色固体状的化合物75d(150mg，81％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.751min，MS(ESI)m/z＝615.2[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.31(br s，1H)，10.08(s，1H)，9.86(s，1H)，8.38(s，1H)，7.80(br d，J＝8.0Hz，1H)，7.65(br s，1H)，7.32(s，1H)，7.02-6.90(m，1H)，6.74(s，1H)，3.92(t，J＝6.4Hz，2H)，3.87(s，3H)，3.80(t，J＝6.8Hz，1H)，2.98(br s，3H)，2.80(t，J＝6.8Hz，1H)，2.68(s，3H)，2.41(br s，8H)，1.74(s，6H)，1.03-0.94(m，2H)，0.82(br d，J＝6.0Hz，2H)。
用于制备实施例75的程序：
向化合物75d(150mg，0.24mmol)于CH3CN(5mL)中的溶液中添加TEA(97mg，4.0eq，0.96mmol)。在80℃下搅拌所得混合物12小时。反应混合物通过制备型HPLC[色谱柱：WatersXbridge 150*25 5μm；条件：55-85％B(A：0.05％NH3H2O；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例75(51.6mg，43％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.867min，MS(ESI)m/z＝579.0[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝3.29min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.43(br s，2H)，9.98(br s，1H)，8.38(s，1H)，7.83(brd，J＝7.6Hz，1H)，7.63(br s，1H)，6.96(d，J＝11.6Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.44-6.28(m，2H)，6.05(br s，1H)，5.80-5.73(m，1H)，3.87(s，3H)，2.91-2.84(m，2H)，2.70(s，3H)，2.27(s，7H)，2.14-2.04(m，1H)，1.76(s，6H)，1.04-0.94(m，2H)，0.86-0.73(m，2H)。
实施例76/实施例77
N-(5-(4.(5-氯-4-氟-2-((R)-2-羟基丁-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-((R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺和N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-((S)-2-羟基丁-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-((R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870001981
用于制备化合物76b的程序：
在氮气下，向化合物76a(5.0g，22.28mmol)于DMF(50mL)中的溶液中添加双(三苯基膦)钯(II)(1.0g，1.42mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(8.85g，24.51mmol)。在氮气下，在110℃下搅拌所得混合物12小时。冷却至室温后，用HCl水溶液(6M，10mL)处理反应混合物并在25℃下再搅拌4小时。将混合物倒入水(300mL)中并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。依序用KF溶液(20％，100mL×2)和盐水(100mL)洗涤合并的有机层，经硫酸钠脱水并浓缩，得到黑色粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(0至5％乙酸乙酯/PE)纯化，得到呈黄色固体状的化合物76b(1.7g，40.6％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.030min，MS(ESI)m/z＝187.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.74(d，J＝10.4Hz，1H)，7.20(s，2H)，6.92(d，J＝6.4Hz，1H)，2.48(s，3H)。
用于制备化合物76c的程序：
在氮气下，在0℃下向化合物76b(1.7g，9.06mmol)于THF(20mL)中的黄色溶液中逐滴添加EtMgBr(12mL，36.25mmol)。在19-21℃下搅拌所得混合物2小时。用饱和NH4Cl溶液(100mL)淬灭混合物并用EtOAc(50mL×3)萃取。干燥合并的有机层并真空浓缩，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(0至10％EtOAc/PE(v/v))纯化，得到呈黄色油状的化合物76c(1.2g，60.8％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.758min，MS(ESI)m/z＝199.8[M-H2O+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.76(d，J＝10.8Hz，1H)，6.55(d，J＝6.4Hz，1H)，4.53(brs，2H)，1.95-1.80(m，2H)，1.51(s，3H)，0.79(t，J＝7.2Hz，3H)。
用于制备化合物76d的程序：
向化合物76c(1.0g，4.59mmol)于n-BuOH(15mL)中的浅黄色溶液中添加DIEA(1.19g，9.19mmol)和2，4-二氯嘧啶(753mg，5.05mmol)。在120℃下搅拌所得混合物10小时。真空浓缩混合物并在硅胶上通过柱色谱法(0至20％EtOAc/PE)纯化，得到呈浅黄色固体状的化合物76d(780mg，51.5％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.872min，MS(ESI)m/z＝330.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.18(s，1H)，8.05(d，J＝6.0Hz，1H)，7.89(d，J＝6.8Hz，1H)，6.98(d，J＝10.4Hz，1H)，6.47(d，J＝6.0Hz，1H)，2.36(s，1H)，1.81(q，J＝7.6Hz，2H)，1.56(s，3H)，0.76(t，J＝7.6Hz，3H)。
用于制备化合物76e的程序：
向化合物76d(700mg，2.12mmol)于n-BuOH/TFA(5mL/0.05mL)中的混合物中添加4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(415mg，2.23mmol)。在50℃下搅拌所得混合物3小时并在80℃下搅拌3小时。将混合物冷却至25℃，同时灰白色固体沉淀，通过抽吸过滤收集固体，接着真空干燥，得到呈灰白色固体状的化合物76e(680mg，62.9％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.755min，MS(ESI)m/z＝480.1[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，DMSO-d6)δ10.28(br s，1H)，8.60-8.47(m，1H)，8.08(d，J＝6.4Hz，1H)，7.85-7.76(m，1H)，7.45-7.34(m，2H)，6.47(br.s，1H)，5.89(s，1H)，3.97(s，3H)，1.84-1.65(m，2H)，1.49(s，3H)，0.67(t，J＝7.2Hz，3H)。
用于制备化合物76f的程序：
向化合物76e(160mg，0.33mmol)于DMSO(3mL)中的橙色溶液中添加K2CO3(92mg，0.67mmol)和(R)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺(46mg，0.40mmol)。在50℃下搅拌所得混合物3小时。将混合物倒入冰水(30mL)中且橙色固体沉淀析出，通过抽吸过滤将其分离并真空干燥，得到化合物76f(130mg，68.6％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.674min，MS(ESI)m/z＝574.1[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ8.98(d，J＝4.8Hz，1H)，8.88(d，J＝10.8Hz，1H)，7.98(dd，J＝6.0，1.6Hz，1H)，7.90-7.82(m，1H)，7.11(d，J＝7.6Hz，1H)，6.96(dd，J＝10.8，2.0Hz，1H)，6.22(s，1H)，6.06(dd，J＝6.0，3.6Hz，1H)，3.85(s，3H)，3.52-3.42(m，1H)，3.30-3.23(m，1H)，3.12-3.02(m，2H)，2.78-2.69(m，1H)，2.22(d，J＝3.2Hz，6H)，2.16-2.07(m，1H)，1.90-1.75(m，3H)，1.55(s，3H)，0.78(t，J＝7.2Hz，3H)。
用于制备化合物76g的程序：
向化合物76f(200mg，0.36mmol)于甲醇/水(5mL/1mL)中的混合物中添加Zn(114mg，1.74mmol)和NH4Cl(186mg，3.48mmol)。在90℃下搅拌所得混合物1小时。将混合物倒入水(30mL)中并用二氯甲烷/甲醇(3/1，20mL×4)萃取。干燥合并的有机层并浓缩，得到呈黑色固体状的化合物76g(220mg，95％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.345min，MS(ESI)m/z＝544.1[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ8.87(s，1H)，8.06(d，J＝7.2Hz，1H)，7.93(d，J＝6.0Hz，1H)，7.77(s，1H)，7.34(s，1H)，6.94(d，J＝10.8Hz，1H)，6.58(s，1H)，5.95(d，J＝5.2Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.15-3.01(m，2H)，2.99-2.87(m，2H)，2.84-2.74(m，1H)，2.20(s，6H)，2.11-1.99(m，1H)，1.88-1.77(m，3H)，1.54(s，3H)，0.78(t，J＝7.6Hz，3H)。
用于制备化合物76h的程序：
向化合物76g(200mg，0.31mmol)于二氯甲烷(5mL)中的褐色溶液中添加3-氯丙酰氯(40mg，0.31mmol)。在冰浴下，在5-10℃下搅拌所得混合物1小时。用饱和碳酸氢钠溶液(30mL)淬灭混合物并用二氯甲烷(10mL×3)萃取。合并的有机层经硫酸钠脱水，过滤并真空浓缩，得到呈褐色胶状的化合物76h(200mg，86％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.715min，MS(ESI)m/z＝634.5[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.48(d，J＝5.2Hz，1H)，9.31(br.s，1H)，8.49(br.s，1H)，8.00(d，J＝6.0Hz，1H)，7.52-7.46(m，1H)，7.42-7.38(m，1H)，7.34(s，1H)，7.01(d，J＝10.8Hz，1H)，6.67(s，1H)，6.24(d，J＝6.4Hz，1H)，3.84-3.75(m，5H)，3.12-2.92(m，4H)，2.88-2.76(m，3H)，2.26(s，6H)，2.16-2.06(m，2H)，1.93-1.85(m，2H)，1.59(s，3H)，1.19-1.17(m，3H)。
用于制备化合物76i的程序：
向化合物76h(200mg，0.27mmol)于CH3CN(5mL)中的褐色混合物中添加Et3N(81mg，0.80mmol)。在80℃下搅拌所得混合物2小时。反应混合物通过制备型HPLC(色谱柱：WatersXbridge 150*25，5μm，条件：42％-62％B(A：水/10mM NH4HCO3，B：CH3CN)，流动速率：25mL/min)纯化，接着冻干，得到呈黄色固体状的化合物76i(73.2mg，44.7％产率)。通过SFC分离对其进一步纯化。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.595min，MS(ESI)m/z＝597.9[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ml色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝4.12min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.53(s，1H)，9.46(s，1H)，8.69(s，1H)，8.00(d，J＝5.6Hz，1H)，7.47-7.35(m，2H)，7.01(d，J＝10.8Hz，1H)，6.69-6.48(m，2H)，6.35-6.34(m，2H)，5.70(d，J＝10.8Hz，1H)，5.42(br s，1H)，3.79(s，3H)，3.28-2.84(m，5H)，2.44(s，6H)，2.23-2.09(m，2H)，2.06-1.99(m，1H)，1.95-1.88(m，1H)，1.58(s，3H)，0.77(t，J＝7.2Hz，3H)。
手性SFC：在IC-3_MeOH(DEA)_40_2.5ML中，Rt＝6.233min和6.903min。
用于制备实施例76和实施例77的程序：
化合物76i(73.2mg)通过SFC分离(色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IC 250mm*30mm 5μmm，条件：40％B(A：CO2，B：0.1％氨水/甲醇)，流动速率：60mL/min)，得到呈白色固体状的实施例76(13.5mg，18.4％产率)和实施例77(18.2mg，24.9％产率)。
实施例76：
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.588min，MS(ESI)m/z＝598.0[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ml色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝4.15min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.55(s，1H)，9.43(s，1H)，8.53(s，1H)，8.00(d，J＝6.0Hz，1H)，7.44(d，J＝6.8Hz，1H)，7.39(s，1H)，7.01(d，J＝10.8Hz，1H)，6.66(s，1H)，6.42-6.32(m，1H)，6.30(s，1H)，6.26(d，J＝5.2Hz，1H)，5.69(d，J＝10.8Hz，1H)，5.35(br s，1H)，3.79(s，3H)，3.13-2.95(m，4H)，2.93-2.82(m，1H)，2.29(s，6H)，2.18-2.09(m，1H)，2.06-1.99(m，1H)，1.98-1.88(m，2H)，1.58(s，3H)，0.78(t，J＝7.2Hz，3H)。
手性SFC：Rt＝6.292min，IC-3_MeOH(DEA)_40_2.5ML。
实施例77：
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.599min，MS(ESI)m/z＝597.9[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ml色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝4.14min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，9.44(s，1H)，8.56(s，1H)，8.00(d，J＝6.0Hz，1H)，7.43(d，J＝7.2Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.01(d，J＝10.8Hz，1H)，6.65(s，1H)，6.48-6.35(m，1H)，6.30(s，1H)，6.26(d，J＝5.6Hz，1H)，5.69(d，J＝11.2Hz，1H)，5.38(br s，1H)，3.78(s，3H)，3.14-3.04(m，2H)，3.03-2.96(m，2H)，2.95-2.88(m，1H)，2.32(s，6H)，2.19-2.10(m，1H)，2.07-2.00(m，1H)，1.98-1.88(m，2H)，1.58(s，3H)，0.77(t，J＝7.2Hz，3H)。
手性SFC：Rt＝6.980min，IC-3_MeOH(DEA)_40_2.5ML。
实施例78
N-(5-(5-氯-4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870002031
该合成遵循与实施例74类似的实验程序，得到呈白色固体状的实施例78。
LCMS：在10-80AB_3min_220&254色谱(Xtimate C18，2.1*30mm，3μm)中，Rt＝1.336min，MS(ESI)m/z＝606.2[M+H]+。
HPLC：Rt＝3.13min，10-80_AB_1.2ml.met Ultimate C18 3*50mm 3μm。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.15(br s，1H)，9.66(br s，1H)，9.16(s，1H)，8.44(brd，J＝7.4Hz，1H)，8.15(s，1H)，7.24(s，1H)，6.87(d，J＝10.8Hz，1H)，6.72(s，1H)，6.43-6.17(m，2H)，5.69(d，J＝11.2Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.78-3.66(m，1H)，2.88(br s，2H)，2.70(s，3H)，2.33-2.21(m，8H)，1.60(s，6H)。
实施例79
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-((3S，4R)-3-(二甲基氨基)-4-氟吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870002041
用于制备化合物79a的程序：
Figure BDA0002577093870002042
向化合物79a1(120mg，0.59mmol)于甲醇(3mL)中的混合物中添加钯/碳(40mg)和甲醛(0.3mL，37％水溶液)，在氢气气氛下，在20℃下搅拌所得混合物16小时。过滤混合物，真空浓缩滤液，得到呈白色固体状的化合物79a2(120mg，88％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.10min，MS(ESI)m/z＝233.2[M+H]+。
向化合物79a2(120mg，0.52mmol)于DCM(1mL)中的混合物中添加TFA(1mL)，在20℃下搅拌所得混合物30分钟。接着真空浓缩混合物并用水(2mL)稀释。冻干混合物，得到呈白色固体状的(三氟乙酸盐形式)化合物79a(110mg，86％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.27min，MS(ESI)m/z＝133.2[M+H]+
用于制备化合物79b的程序：
向化合物79a(40mg，0.30mmol)于DMF(3mL)中的混合物中添加化合物36b(100mg，0.21mmol)和碳酸钾(90mg，0.65mmol)，在100℃下搅拌所得混合物2小时。接着混合物通过C18-快速色谱法，由5至50％CH3CN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈橙色固体状的化合物79b(95mg，77％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.64min，MS(ESI)m/z＝578.1[M+H]+。
用于制备化合物79c的程序：
向化合物79b(95mg，0.16mmol)于甲醇(5mL)中的混合物中添加钯/碳(30mg)，在氢气气氛下，在20℃下搅拌所得混合物3小时。接着过滤混合物并真空浓缩滤液，得到呈白色固体状的化合物79c(75mg，83％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.99min，MS(ESI)m/z＝548.2[M+H]+。
用于制备实施例79的程序：
在0℃下，向化合物79c(70mg，0.13mmol)于NMP(2mL)中的混合物中添加丙烯酰氯(12mg，0.13mmol)和DIEA(40mg，0.31mmol)，在0℃下搅拌所得溶液1小时。混合物通过C18-快速色谱法，由5％至60％CH3CN/水(6mmol/L NH4HCO3)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈白色固体状的实施例79(22mg，29％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.31min，MS(ESI)m/z＝602.3[M+H]+。
1H NMR：(500MHz，DMSO-d6)δ1.49(s，6H)2.24(s，6H)2.53-2.65(m，1H)3.21-3.33(m，2H)3.41-3.45(m，1H)3.64-3.78(m，1H)3.80(s，3H)5.17-5.35(m，1H)5.68(dd，J＝10.25，1.73Hz，1H)6.05(d，J＝5.67Hz，1H)6.12-6.23(m，2H)6.39-6.55(m，2H)7.29(d，J＝11.03Hz，1H)7.47(br s，1H)7.82(br s，1H)7.95(d，J＝5.67Hz，1H)8.14(br d，J＝7.25Hz，1H)9.34(s，1H)9.57(s，1H)。
实施例80
(R)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-4-甲氧基-2-(3-(甲基氨基)吡咯烷-1-基)苯基)丙烯酰胺三氟乙酸盐
Figure BDA0002577093870002061
用于制备化合物80a的程序：
向化合物36b(300mg，0.644mmol)和K2CO3(178mg，1.29mmol)于DMSO(3mL)中的溶液中添加化合物73a(155mg，0.644mmol)。在85℃下搅拌所得混合物2小时，同时颜色从浅黄色变为深黄色。在搅拌下，将反应混合物倒入冰水(20mL)中且黄色固体沉淀。通过过滤收集沉淀的固体，接着将其溶解于CH2Cl2(50mL)中，经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物80a(380mg，71％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.800min，MS(ESI)m/z＝646.1[M+H]+。
用于制备化合物80b的程序：
向化合物80a(350mg，0.542mmol)于EtOAc(5mL)中的溶液中添加Pd/C(200mg，10％潮湿)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在氢气球(15Psi)下，在13-20℃下搅拌2小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈浅黄色固体状的化合物80b(300mg，70％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.758min，MS(ESI)m/z＝616.2[M+H]+。
用于制备化合物80c的程序：
在冰水浴下，向化合物80b(300mg，0.377mmol)于CH2Cl2(5mL)中的溶液中逐滴添加丙烯酰氯(47.9mg，0.377mmol)。在0-5℃下搅拌所得混合物30分钟。将反应混合物倒入饱和NaHCO3(5mL)中并在12-17℃下搅拌2小时，接着用CH2Cl2(5mL×2)萃取。合并的有机层经Na2SO4脱水并减压浓缩，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(8％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到呈黄色固体状的化合物80c(200mg，60％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(Agilent Pursit 5 C18 20*2.0mm)中，Rt＝0.825min，MS(ESI)m/z＝670.5[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.68-9.56(m，1H)，9.37(s，1H)，8.49(br s，1H)，8.01(d，J＝6.0Hz，1H)，7.43(s，1H)，7.37-7.27(m，1H)，7.08(d，J＝10.8Hz，1H)，6.64(s，1H)，6.32-6.26(m，2H)，5.74-5.65(m，1H)，4.68(br s，1H)，3.80(s，3H)，3.20-3.12(m，2H)，2.97-2.90(m，2H)，2.87(s，3H)，2.27-2.18(m，1H)，1.97-1.89(m，1H)，1.63(s，8H)，1.40(s，9H)。
用于制备实施例80的程序：
在0℃下，向化合物80c(200mg，2.12mmol)于CH2Cl2(10mL)中的溶液中添加TFA(1.57g，21.2mmol)。在18-22℃下搅拌混合物6小时。真空浓缩混合物，得到呈褐色油状的粗产物，通过制备型HPLC(仪器：BH色谱柱：Gemini 150*25 5μm。流动相A：含0.05％氨水v/v的水，流动相B：DMF，流动速率：25ml/min，梯度时间：7分钟，特征说明：42％-72％)纯化，得到呈黄色固体状的三氟乙酸盐形式的实施例80(90mg，78％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.455min，MS(ESI)m/z＝570.1[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝2.15min。
1H NMR：(400MHz，DMSO-d6)δ10.53(br s，1H)，9.86(br s，1H)，9.14(br s，1H)，8.90(br s，2H)，7.90(br s，2H)，7.68(br s，1H)，7.40(br s，1H)，6.71(s，1H)，6.55(dd，J＝10.4Hz，17.2Hz，1H)，6.43(br s，1H)，6.28-6.01(m，2H)，5.76-5.70(m，1H)，3.82-3.77(m，4H)，3.39-3.25(m，3H)，3.10-3.01(m，1H)，2.68-2.62(m，3H)，2.37-2.28(m，1H)，2.09-1.98(m，1H)，1.47(s，6H)。
实施例81
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-5-甲氧基嘧啶-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870002081
用于制备化合物81b的程序：
将化合物81a(200mg，1.1mmol)、化合物11b(240mg，1.2mmol)和DIEA(434mg，3.4mmol)于NMP(6mL)中的溶液密封并在120℃下加热2小时。用水(100mL)稀释反应物并用EA(20mL×5)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发滤液。残余物通过硅胶快速色谱法，由30％至100％EtOAc/石油醚梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈浅黄色固体状的化合物81b(50mg，13％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.53min，MS(ESI)m/z＝346.1[M+H]+。
1H NMR：(500MHz，DMSO-d6)δ1.5(s，6H)3.9(s，3H)6.4(s，1H)7.3(d，J＝11.0Hz，1H)8.0(s，1H)8.5(d，J＝7.3Hz，1H)10.8(s，1H)。
用于制备化合物81c的程序：
将化合物81b(47mg，0.14mmol)、4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(28mg，0.15mmol)和TFA(15mg，0.136mmol)于丙-2-醇(2.0mL)中的溶液密封并在100℃下加热48小时。减压蒸发反应混合物。残余物通过硅胶快速色谱法，由0％至10％MeOH/DCM梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈褐色固体状的化合物81c(67mg，79％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.20min，MS(ESI)m/z＝496.1[M+H]+。用于制备化合物81d的程序：
在80℃下，将化合物81c(67mg，0.14mmol)、N1，N1，N2-三甲基乙-1，2-二胺(28mg，0.27mmol)和DIEA(52mg，0.41mmol)于NMP(0.6mL)中的溶液加热2小时。用水(50mL)稀释反应混合物并用EA(10mL×5)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发滤液。残余物通过硅胶快速色谱法，由0％至10％MeOH/DCM梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈褐色固体状的化合物81d(30mg，38％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.46min，MS(ESI)m/z＝578.1[M+H]+。
用于制备化合物81e的程序：
将钯/碳(11mg)添加至化合物81d(30mg，0.050mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中。在氢气气氛下，在20℃下搅拌反应30分钟。过滤所得混合物并减压蒸发滤液，得到呈浅褐色固体状的化合物81e(22mg，粗品)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.22min，MS(ESI)m/z＝548.2[M+H]+。
用于制备实施例81的程序：
在0℃下，向化合物81e(22mg，0.04mmol)和DIEA(16mg，0.12mmol)于NMP(0.8mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(21mg，0.23mmol)于NMP(0.2mL)中的溶液。在0℃下搅拌反应混合物30分钟。溶液通过C18-快速色谱法，由0％至80％MeCN/水(0.02％氨水)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份冻干至干燥，得到呈灰白色固体状的实施例81(3.8mg，16％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.34min，MS(ESI)m/z＝602.1[M+H]+。
1H NMR：(500MHz，DMSO-d6)δ1.5(s，6H)2.2(s，6H)2.3(br t，J＝5.7Hz，2H)2.7(s，3H)2.8(br t，J＝5.5Hz，2H)3.8(s，3H)3.8(s，3H)5.7-5.7(m，1H)6.1(dd，J＝16.9，1.7Hz，1H)6.2(s，1H)6.3(dd，J＝16.9，10.2Hz，1H)7.0(s，1H)7.2(d，J＝11.0Hz，1H)7.6(s，1H)7.8(s，1H)8.6(d，J＝7.6Hz，1H)8.7(s，1H)10.0(s，1H)10.4(s，1H)。
实施例82
(R)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-(2-((二甲基氨基)甲基)-4，4-二氟吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870002101
用于制备化合物82a的程序：
Figure BDA0002577093870002102
在冰/水浴中，在0℃下经2分钟向化合物82a1(250mg，1.054mmol)和TEA(213mg，2.108mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中逐滴添加MsCl(127mg，1.106mmol，1.05当量)。接着，在此温度下搅拌反应混合物1小时。接着，用50ml饱和NaHCO3溶液稀释反应混合物，用DCM(20mL×3)萃取。用盐水(60mL×1)洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发，得到呈褐色油状的化合物82a2(330mg，粗品)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.21min，MS(ESI)m/z＝216.1[M-Boc]+。
向化合物82a2(330mg，1.05mmol)于THF中的溶液中添加40Wt％二甲基胺的水溶液(3mL)。密封所得混合物并在80℃下加热16小时。用饱和NaHCO3溶液(50mL)稀释反应物，用EA(20mL×3)萃取，用盐水(50mL×1)洗涤，经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发，得到呈褐色油状的化合物82a3(275mg，粗品)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.64min，MS(ESI)m/z＝208.7[M-55]+。
利用冰/水浴将化合物82a3(275mg，1.04mmol)于DCM(3mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。接着，将TFA逐滴添加至反应混合物中。搅拌所得混合物并使其缓慢升温至室温2小时。完成后，减压浓缩反应溶液，得到呈褐色油状的化合物82a(270mg，粗品)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.25min，MS(ESI)m/z＝165.1[M+1]+。
用于制备化合物82b的程序：
将化合物36b(152mg，0.270mmol)、化合物82a(106mg，0.404mmol)和DIPEA(105mg，0.810mmol)于NMP(2.5mL)中的溶液密封并在100℃下加热5天。用100mL水稀释反应混合物，用EA(20mL×5)萃取，用盐水(100mL×1)洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发。残余物通过硅胶快速柱(MeOH/DCM＝0％-10％)纯化，得到呈浅褐色固体状的化合物82b(84mg，51％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.63min，MS(ESI)m/z＝610.1[M+H]+。
用于制备化合物82c的程序：
在氮气下，将10％Pd/C(29mg，0.028mmol)添加至化合物82b(84mg，0.138mmol)于7mL MeOH中的溶液中，在氢气气氛下，在室温下搅拌反应30分钟。反应完成后，通过硅藻土过滤所得混合物，并用甲醇洗涤。减压蒸发滤液，得到呈浅褐色固体状的化合物82c(80mg，粗品)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.51min，MS(ESI)m/z＝580.2[M+H]+。
用于制备实施例82的程序：
将化合物82c(54mg，0.093mmol)和DIPEA(36mg，0.279mmol)于NMP(2mL)中的溶液冷却并在冰/水浴下，在0℃下搅拌，接着将丙烯酰氯(8.4mg，0.093，1.00当量)于NMP(0.2mL)中的溶液逐滴添加至反应物中。在0℃下搅拌反应混合物30分钟。接着，溶液通过C18/40G(MeCN/水＝0％-80％，0.02％氢氧化铵水溶液)纯化并冻干，得到呈灰白色固体状的实施例82(8.50mg，14％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.56min，MS(ESI)m/z＝634.2[M+H]+。
HPLC：Rt＝10.203min(15min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，AgilentEclipse Plus C18，5μm，4.6*150mm，30℃)。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.4(s，6H)2.0(s，6H)2.1-2.4(m，4H)2.5-2.7(m，1H)3.6-3.7(m，1H)3.7(s，3H)3.8(br d，J＝6.3Hz，1H)5.6(br d，J＝10.1Hz，1H)6.0-6.1(m，3H)6.5(br dd，J＝16.7，10.4Hz，1H)6.8(s，1H)7.2(br d，J＝11.0Hz，1H)7.8(br s，1H)7.9(br d，J＝5.7Hz，1H)8.1(br d，J＝6.9Hz，1H)8.2(s，1H)9.2(s，1H)9.5(br s，1H)。
实施例83
(R)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-(7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺甲酸盐
Figure BDA0002577093870002121
用于制备化合物83b的程序：
向化合物36b(120mg，0.26mmol)于NMP(3mL)中的混合物中添加化合物83a(55mg，0.26mm0l)和DIEA(74mg，0.57mmol)。在100℃下加热所得混合物2小时。混合物通过C18-快速色谱法，由5％至70％CH3CN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物83b(120mg，70％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.19min，MS(ESI)m/z＝658.1[M+H]+。
用于制备化合物83c的程序：
向化合物83b(120mg，0.18mmol)于DCM(1mL)中的混合物中添加TFA(1mL)。在20℃下搅拌所得混合物30分钟。用饱和碳酸钠水溶液(50mL)和EtOAc(50mL)稀释混合物。用盐水洗涤有机层，经硫酸钠脱水，真空浓缩，得到呈黄色固体状的化合物83c(96mg，94％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.34min，MS(ESI)m/z＝558.1[M+H]+。
用于制备化合物83d的程序：
向化合物83c(95mg，0.17mmol)于甲醇(3mL)中的混合物中添加甲醛(1mL)和NaBH3CN(54mg，0.85mmol)。在20℃下搅拌所得混合物1小时。混合物通过C18-快速色谱法，由5％至70％CH3CN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物83d(82mg，82％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.55min，MS(ESI)m/z＝586.0[M+H]+。
用于制备化合物83e的程序：
向化合物83d(81mg，0.15mmol)于甲醇(3mL)中的混合物中添加钯/碳(20mg)，在氢气气氛下，在20℃下搅拌所得混合物1小时。接着过滤混合物并真空浓缩滤液，得到呈黄色固体状的化合物83e(67mg，87％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.44min，MS(ESI)m/z＝556.1[M+H]+。
用于制备实施例83的程序：
在0℃下，向化合物83e(67mg，0.12mmol)于NMP(2mL)中的混合物中添加3-氯丙酰氯(17mg，0.13mmol)和DIEA(19mg，0.15mmol)，在0℃下搅拌所得溶液1小时。添加MeCN(2mL)和TEA(0.5mL)。在80℃下加热混合物16小时。用水(30mL)和EA(30mL)稀释混合物。浓缩有机层，残余物通过C18-快速色谱法，由5％至60％CH3CN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈白色固体状的甲酸形式的实施例83(38mg，52％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.74min，MS(ESI)m/z＝610.2[M+H]+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ0.53-0.59(m，2H)0.66-0.72(m，1H)0.91-0.96(m，1H)1.49(s，6H)2.23(s，6H)2.77(br dd，J＝5.36，2.84Hz，1H)2.80(d，J＝8.83Hz，1H)3.35-3.37(m，3H)3.79(s，3H)5.63-5.73(m，1H)6.06(d，J＝5.67Hz，1H)6.16(dd，J＝17.18，2.05Hz，1H)6.48(dd，J＝17.02，10.40Hz，1H)6.56(s，1H)7.29(d，J＝11.03Hz，1H)7.65(s，1H)7.84(br s，1H)7.96(d，J＝5.67Hz，1H)8.14(d，J＝7.25Hz，1H)8.21(s，1H)9.21(s，1H)9.58(s，1H)。
实施例84
(R)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-2-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870002141
用于制备化合物84b的程序：
向化合物11b(1000mg，4.91mmol)和DIEA(1269mg，9.82mmol)于i-PrOH(20mL)中的溶液中添加化合物84a(1065mg，4.91mmol)。在50℃下搅拌所得混合物2小时。反应物通过快速反相C-18柱色谱法，用MeOH/H2O(10％至100％的甲醇水溶液)洗脱进行纯化，得到呈褐色固体状的化合物84b(300mg，16％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.944min，MS(ESI)m/z＝366.1[M-OH]+。
用于制备化合物84c的程序：
向化合物84b(300mg，0.78mmol)于n-BuOH(5mL)和TFA(0.05mL)中的溶液中添加4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(160mg，0.86mmol)。在50℃下搅拌所得混合物18小时。将反应物倒入冰水(50mL)中且黄色固体沉淀析出。过滤固体并用CH2Cl2(60mL)溶解，接着经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物84c(320mg，77％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.931min，MS(ESI)m/z＝534.1[M+H]+。
用于制备化合物84d的程序：
向化合物84c(300mg，0.56mmol)于DMSO(4mL)中的溶液中添加(R)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺(64mg，0.56mmol)和K2CO3(233mg，1.69mmol)。在80℃下搅拌混合物18小时。将反应物倒入冰水(50mL)中且黄色固体沉淀析出。过滤黄色固体并用CH2Cl2(60mL)溶解，接着经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物84d(280mg，80％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5MIN_220&254色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝0.773min，MS(ESI)m/z＝628.4[M+H]+。
用于制备化合物84e的程序：
在N2下，向化合物84d(280mg，0.45mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(28mg)。在氢气球(15Psi)下，在6-13℃下搅拌黑色混合物1小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈褐色油状的化合物84e(250mg，95.4％产率)。
LCMS：在10-80CD_3MIN_220&254色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝0.720min，MS(ESI)m/z＝598.1[M+H]+。
用于制备化合物84f的程序：
在冰水浴中，向化合物84e(250mg，1.0eq，0.42mmol)于CH2Cl2(10mL)中的溶液中添加3-氯丙酰氯(53mg，0.42mmol)。在0-5℃下搅拌所得混合物45分钟，同时颜色从黑色变为褐色。将反应混合物倒入饱和NaHCO3(5mL)中，用CH2Cl2(15mL×2)萃取。依序用水(10mL×2)和盐水(10mL)洗涤合并的有机层，干燥并真空浓缩，得到呈褐色固体状的化合物84f(200mg，69％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5MIN_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.736min，MS(ESI)m/z＝688.1[M+H]+。
用于制备实施例84的程序：
向化合物84f(200mg，0.29mmol)于CH3CN(10mL)中的溶液中添加Et3N(118mg，1.16mmol)。在80℃下搅拌所得混合物12小时。反应物通过制备型HPLC[色谱柱：WatersXbridge 150*25 5μm；条件：42-72％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例84(85.7mg，45.3％产率)。
LCMS：在0-60AB_4min_220&254.1cm色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.312min，MS(ESI)m/z＝652.0[M+H]+。
HPLC：在10-80AB_1.2ml.met色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝3.32min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.38(br s，1H)，8.75(br s，1H)，8.36(br s，1H)，8.15(br s，1H)，7.96(brs，1H)，7.43(s，1H)，7.04(d，J＝10.6Hz，1H)，6.70(s，1H)，6.33-6.20(m，2H)，5.75-5.68(m，1H)，3.87(s，3H)，3.21-3.06(m，4H)，2.93-2.82(m，1H)，2.72(br s，1H)，2.30(s，6H)，2.23-2.12(m，1H)，1.98-1.87(m，1H)，1.68(brd，J＝4.0Hz，6H)。
实施例85
(R)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-5-氰基嘧啶-2-基氨基)-2-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870002161
用于制备化合物85b的程序：
向化合物11b(500mg，2.46mmol)于i-PrOH(5mL)中的溶液中添加DIEA(635mg，4.91mmol)和化合物85a(470mg，2.70mmol)。在80℃下搅拌所得混合物1小时。将混合物倒入水(20mL)中并用EtOAc(100mL×3)萃取。合并的有机层经Na2SO4脱水，过滤并真空浓缩，得到粗产物，通过制备型HPLC[色谱柱：Boston Green ODS 150*30 5μm，条件：65％B(A：水/0.1％TFA，B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。用饱和NaHCO3将洗脱份的pH值调至7-8并用EtOAc(20mL×3)萃取。用盐水(50mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4脱水，过滤并真空浓缩，得到所希望的化合物85b(280mg，33％产率)及其区域异构体。
LCMS：在10-80AB_7.0min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝3.661，MS(ESI)m/z＝322.8[M+H-18]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.22(br s，1H)，8.82(s，1H)，8.23(d，J＝7.2Hz，1H)，7.44(d，J＝11.2Hz，1H)，6.63(br s，1H)，1.53(s，6H)。
用于制备化合物85c的程序：
在35℃下，将化合物85b(280mg，0.82mmol)、4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(168.0mg，0.90mmol)和TFA(300μL)于n-BuOH(3.0mL)中的混合物搅拌15小时。过滤反应混合物并用n-BuOH(3mL)洗涤滤饼，接着真空干燥，得到呈灰色固体状的所希望的产物85c(270mg，67.2％产率)。利用2D-NMR(HMBC等)确定此步骤中确定的确切结构。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.899min，MS(ESI)m/z＝491.1[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，DMSO-d6)δ10.81(s，1H)，9.47(br s，1H)，8.57(s，1H)，8.31(brd，J＝6.4Hz，1H)，8.02(br s，1H)，7.39(d，J＝13.6Hz，1H)，7.31(br d，J＝11.2Hz，1H)，7.28-7.14(m，1H)，6.56(br s，1H)，3.89(s，3H)，1.52(s，6H)。
用于制备化合物85d的程序：
在80℃下，将化合物85c(240mg，0.489mmol)、(R)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺(66.3mg，0.586mmol)和K2CO3(135.0mg，0.978mmol)于DMSO(3mL)中的混合物搅拌20小时(褐色悬浮液)。用H2O(10mL)淬灭反应并用EtOAc(10mL)稀释，搅拌3小时，接着过滤，用H2O(5mL)洗涤滤饼，接着在高真空中干燥，得到呈褐色固体状的标题化合物85d(190mg，66.4％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.760min，MS(ESI)m/z＝607.2[M+Na]+。
用于制备化合物85e的程序：
在80℃下，将化合物85d(140mg，0.239mmol)、Zn(77.8mg，1.196mmol)和NH4Cl(64.5mg，1.196mmol)于MeOH/H2O(5.0mL/2.0mL)中的混合物搅拌2.0小时(白色悬浮液)。过滤反应物并用CH2Cl2(10mL)和H2O(10mL)洗涤滤饼，用CH2Cl2(20mL×3)萃取滤液，用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈灰色固体状的化合物85e(120mg，90.9％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.712min，MS(ESI)m/z＝555.1[M+H]+。
用于制备实施例85的程序：
在0℃下，将化合物85e(120mg，0.217mmol)和3-氯丙酰氯(34.1mg，0.238mmol)于CH2Cl2(3mL)中的混合物搅拌1小时(褐色悬浮液)。用CH3CN(5mL)稀释反应物，将所得混合物真空浓缩至4mL体积，向残余物中添加TEA(218mg，2.16mmol)并在100℃下搅拌所得混合物4小时(黑色悬浮液)。反应物直接通过制备型HPLC[Waters Xbridge 150*25 5μm，条件：42-72％B(A：0.05％氨水B：CH3CN)；流动速率：25mL/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈黄色固体状的实施例85(59.0mg，32.6％产率)。
LCMS：在0-60AB_4.0min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.482min，MS(ESI)m/z＝609.1[M+H]+。
HPLC：在0-60_CD_1.2ML色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝5.13min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ10.08(br s，1H)，9.30-8.03(m，2H)，8.01-7.71(m，1H)，7.48(br s，1H)，6.96(d，J＝10.4Hz，1H)，6.64(s，1H)，6.21(br s，2H)，5.67(br d，J＝6.0Hz，1H)，3.82(s，3H)，3.70-3.36(m，1H)，3.25-2.98(m，4H)，2.82(q，J＝7.2Hz，1H)，2.24(s，6H)，2.17-2.06(m，1H)，1.88-1.82(m，1H)，1.62(br s，6H)。
实施例86
(S)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-(3-((二甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870002191
用于制备化合物86a的程序：
Figure BDA0002577093870002192
在冰水浴中，向化合物86a1(1g，4.98mmol)和TEA(1.0g，9.96mmol)于CH2Cl2(10mL)中的溶液中添加MsCl(800mg，6.98mmol)。在0-5℃下搅拌所得混合物30分钟。将反应溶液倒入盐水(5mL)中，并用CH2Cl2(10mL×2)萃取。依序用水(10mL×2)和盐水(10mL)洗涤合并的有机层，接着经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈黄色油状的化合物86a2(1.2g，86％产率)，不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。
在100℃下，将化合物86a2(1.2g，4.30mmol)和Me2NH.HCl(1.75g，21.5mmol)和K2CO3(4.16g，30.1mmol)于DMF(10mL)中的混合物搅拌5小时。用EtOAc(40mL)稀释反应混合物并再搅拌30分钟，过滤并用EtOAc(20mL)洗涤滤饼。真空浓缩滤液，得到粗产物，在硅胶上通过柱色谱法(0-10％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到呈无色油状的化合物86a3(800mg，66.7％产率)。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ3.52-3.42(m，1H)，3.41-3.31(m，1H)，3.28-3.16(m，1H)，2.94-2.85(m，1H)，2.34-2.13(m，9H)，1.95-1.85(m，1H)，1.59-1.44(m，1H)，1.38(s，9H)。
在0℃下，向86a3(800mg，3.51mmol)于CH2Cl2(10mL)中的溶液中添加TFA(2.6g，35.1mmol)。在6-13℃下搅拌混合物6小时。真空浓缩反应混合物，得到呈无色油状的三氟乙酸盐形式的标题化合物86a(400mg，80.2％产率)。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ3.70(br s，1H)，3.51(br s，1H)，3.34-3.26(m，1H)，3.26-3.22(m，1H)，3.00-2.92(m，7H)，2.83-2.72(m，1H)，2.66-2.54(m，1H)，2.16(br s，1H)，1.73(br s，1H)。
用于制备化合物86b的程序：
向化合物36b(200mg，0.429mmol)和K2CO3(118mg，0.858mmol)于DMSO(3mL)中的溶液中添加化合物86a(65.9mg，0.515mmol)。在85℃下搅拌所得混合物2小时，同时颜色从浅黄色变为深黄色。在搅拌下，将反应混合物倒入冰水(20mL)中且黄色固体沉淀。通过过滤收集沉淀的固体，接着将其溶解于CH2Cl2(50mL)中，经无水Na2SO4脱水并减压浓缩，得到呈黄色固体状的化合物86b(200mg，70.6％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(Agilent Pursit 5 C18 20*2.0mm)中，Rt＝0.691min，MS(ESI)m/z＝574.5[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ8.97(s，1H)，8.90(s，1H)，8.09(d，J＝5.6Hz，1H)，7.92(d，J＝7.2Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.10(d，J＝10.4Hz，1H)，6.33(s，1H)，6.17(d，J＝5.6Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.48-3.41(m，1H)，3.32-3.27(m，1H)，3.14-3.07(m，2H)，2.53-2.43(m，1H)，2.38-2.33(m，2H)，2.27-2.23(m，7H)，2.16-2.10(m，1H)，1.67(s，6H)。
用于制备化合物86c的程序：
向化合物86b(200mg，0.348mmol)于EtOAc(5mL)中的溶液中添加Pd/C(50mg，10％潮湿)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在氢气球(15Psi)下，在13-20℃下搅拌2小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈浅黄色固体状的化合物86c(150mg，72.8％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(Agilent Pursit 5 C18 20*2.0mm)中，Rt＝0.667min，MS(ESI)m/z＝544.5[M+H]+。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)J8.08(d，J＝6.8Hz，1H)，7.95(d，J＝5.6Hz，1H)，7.77(s，1H)，7.39(s，1H)，7.00(d，J＝10.4Hz，1H)，6.56(s，1H)，5.97(d，J＝5.6Hz，1H)，3.74(s，3H)，3.52-3.43(m，1H)，3.40-3.31(m，1H)，3.26-3.16(m，1H)，3.08-3.01(m，2H)，2.89(m，1H)，2.75(m，1H)，2.43(s，1H)，2.31-2.26(s，5H)，2.18-2.13(s，3H)，1.95-1.92(m，1H)，1.58(s，6H)。
用于制备实施例86的程序：
在冰水浴中，向化合物86c(150mg，0.276mmol)于CH2Cl2(150mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(150mg，0.276mmol)。在0-5℃下搅拌所得混合物30分钟。将反应混合物倒入饱和NaHCO3(5mL)中并在12-17℃下搅拌2小时，接着用CH2Cl2(15mL×2)萃取。合并的有机层经Na2SO4脱水并减压浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(8％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到呈黄色固体状的实施例86(24.5mg，15.7％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.547min，MS(ESI)m/z＝598.1[M+H]+。
HPLC：在10-80_ab_1.2ML色谱(Ultimate C18 3*50mm 3μm)中，Rt＝2.26min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.52-9.33(m，2H)，8.39(s，1H)，7.99(d，J＝6.0Hz，1H)，7.52-7.41(m，2H)，7.07(d，J＝10.8Hz，1H)，6.63(s，1H)，6.37-6.24(m，3H)，5.75-5.67(m，1H)，3.79(s，3H)，3.18-3.11(m，1H)，3.05-2.94(m，2H)，2.91-2.85(m，1H)，2.81-2.59(m，3H)，2.51(s，6H)，2.22-2.14(m，1H)，1.82-1.74(m，1H)，1.64(s，6H)。
实施例87
(S)-N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870002211
该合成遵循与实施例76类似的实验程序，得到呈白色固体状的实施例87。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.446min，MS(ESI)m/z＝584.1[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2ML色谱(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝3.74min。
1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ9.66(s，1H)，9.43(s，1H)，8.56(s，1H)，8.09(d，J＝5.6Hz，1H)，7.52(d，J＝7.2Hz，1H)，7.47(s，1H)，7.15(d，J＝10.4Hz，1H)，6.76(s，1H)，6.41-6.29(m，3H)，5.81-5.75(m，1H)，5.64(br s，1H)，3.86(s，3H)，3.16-3.01(m，4H)，2.89(q，J＝6.8Hz，1H)，2.30(s，6H)，2.23-2.12(m，1H)，2.00-1.87(m，1H)，1.73(s，6H)。
实施例88
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-((2R，4R)-2-((二甲基氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺甲酸盐
Figure BDA0002577093870002221
用于制备化合物88a的程序：
Figure BDA0002577093870002222
在冰/水浴下，在0℃下向化合物88a1(440mg，2.0mmol)和TEA(404mg，4.0mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中逐滴添加MsCl(276mg，2.4mmol)。接着，在0℃下搅拌反应混合物1小时。接着，用50ml饱和NaHCO3溶液稀释反应混合物，用DCM(30mL×3)萃取。用盐水(60mL×2)洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发，得到呈褐色油状的化合物88a2(500mg，84％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.32min，MS(ESI)m/z＝198.1[M-Boc]+。
向化合物88a2(500mg，1.7mmol)于THF中的溶液中添加二甲基胺水溶液(3mL，40％质量比)。密封所得混合物并在90℃下加热16小时。用饱和NaHCO3溶液(50mL)稀释反应物，用EA(20mL×3)萃取，用盐水(50mL×1)洗涤，经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发，得到呈无色油状的化合物88a3(320mg，77％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.18min，MS(ESI)m/z＝247.2[M+H]+。
在0℃下，向化合物88a3(320mg，1.3mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中逐滴添加TFA(2mL)。在20℃下搅拌所得混合物2小时，接着减压蒸发反应溶液，得到呈无色油状的化合物88a(180mg，95％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.25min，MS(ESI)m/z＝147.2[M+H]+。
用于制备化合物88b的程序：
将化合物36b(225mg，0.48mmol)、化合物88a(106mg，0.73mmol)和K2CO3(200mg，1.4mmol)于DMSO(3.0mL)中的混合物密封并在85℃下加热24小时。用100mL水稀释反应混合物并用EA(20mL×5)萃取。用盐水(100mL×1)洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发。残余物通过快速二氧化硅色谱法，由0％至10％MeOH/DCM梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈浅褐色固体状的化合物88b(240mg，85％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.48min，MS(ESI)m/z＝592.2[M+H]+。
用于制备化合物88c的程序：
在氮气气氛下，将钯/碳(25mg，10％Wt％)添加至化合物88b(70mg，0.12mmol)于MeOH(7mL)中的溶液中。在氢气气氛下，在20℃下搅拌所得反应物30分钟。通过硅藻土过滤混合物，并减压蒸发滤液，得到呈浅褐色固体状的化合物88c(62mg，94％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.34min，MS(ESI)m/z＝562.2[M+H]+。
用于制备化合物88d的程序：
在0℃下，向化合物88c(62mg，0.11mmol)和DIPEA(14mg，0.11mmol)于NMP(5mL)中的溶液中添加3-氯丙酰氯(14mg，0.11mmol)。在0℃下搅拌所得混合物10分钟。用水(50mL)稀释反应混合物，用DCM(10mL×3)萃取。用盐水(30mL×1)洗涤有机层，经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发，得到呈白色固体状的化合物88d(70mg，91％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.37min，MS(ESI)m/z＝652.2[M+H]+。
用于制备实施例88的程序：
在80℃下，将化合物88d(70mg，0.11mmol)和TEA(110mg，1.1mmol)于CH3CN(5mL)中的溶液加热12小时。接着，溶液通过C18-快速色谱法，由0％至80％CH3CN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈灰白色固体状的甲酸形式的实施例88(38mg，57％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.33min，MS(ESI)m/z＝616.2M+H]+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.50(d，J＝2.21Hz，6H)1.89-1.99(m，1H)2.12(s，6H)2.18(dd，J＝12.30，7.57Hz，1H)2.34(br dd，J＝12.14，5.83Hz，1H)3.17-3.31(m，2H)3.42-3.51(m，1H)3.55-3.62(m，1H)3.79(s，3H)5.33-5.49(m，1H)5.72(br d，J＝11.66Hz，1H)6.10-6.13(m，1H)6.13-6.20(m，2H)6.38(dd，J＝17.02，10.40Hz，1H)6.86(s，1H)7.29(d，J＝11.03Hz，1H)7.85(s，1H)7.97-8.01(m，1H)8.11-8.17(m，1H)8.36-8.45(m，1H)9.53-9.56(m，1H)9.57-9.61(m，1H)。
实施例89
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-4-甲氧基-2-((1R，5R)-6-甲基-3，6-二氮杂双环[3.2.0]庚-3-基)苯基)丙烯酰胺甲酸盐
Figure BDA0002577093870002251
用于制备化合物89b的程序：
向化合物36b(80mg，0.17mmol)于NMP(3mL)中的混合物中添加化合物89a(34mg，0.17mmol)和碳酸钾(60mg，0.43mmol)。在100℃下加热所得混合物3小时。混合物通过C18-快速色谱法，由5％至70％CH3CN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物89b(75mg，68％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.15min，MS(ESI)m/z＝644.1[M+H]+。
用于制备化合物89c的程序：
向化合物5c(75mg，0.11mmol)于DCM(1mL)中的混合物中添加TFA(1mL)，在20℃下搅拌所得混合物30分钟。用饱和碳酸钠水溶液(50mL)和EtOAc(50mL)稀释混合物。用盐水洗涤有机层，经硫酸钠脱水，真空浓缩，得到呈黄色固体状的化合物89c(59mg，93％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.21min，MS(ESI)m/z＝544.1[M+H]+。
用于制备化合物89d的程序：
向化合物89c(59mg，0.11mmol)于甲醇(3mL)中的混合物中添加甲醛(0.5mL)和NaBH3CN(34mg，0.54mmol)，在20℃下搅拌所得混合物1小时。混合物通过C18-快速色谱法，由5％至70％CH3CN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物89d(44mg，73％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.27min，MS(ESI)m/z＝558.2[M+H]+。
用于制备化合物89e的程序：
向化合物89d(59mg，0.11mmol)于甲醇(3mL)中的混合物中添加钯/碳(20mg)，在氢气气氛下，在20℃下搅拌所得混合物1小时。接着过滤混合物并真空浓缩滤液，得到呈黄色固体状的化合物89e(42mg，75％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.17min，MS(ESI)m/z＝528.1[M+H]+。
用于制备实施例89的程序：
在0℃下，向化合物5f(42mg，0.080mmol)于NMP(2mL)中的混合物中添加丙烯酰氯(8mg，0.089mmol)和DIEA(12mg，0.093mmol)，在0℃下搅拌所得溶液1小时。混合物通过C18-快速色谱法，由5％至50％CH3CN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈白色固体状的甲酸形式的实施例89(14mg，30％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.78min，MS(ESI)m/z＝582.0[M+H]+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ0.99(t，J＝7.09Hz，1H)1.43(s，6H)2.63-2.83(m，2H)3.07(br s，1H)3.15(br d，J＝9.46Hz，1H)3.32-3.54(m，5H)3.66-3.80(m，4H)5.65(br d，J＝11.03Hz，1H)6.04(d，J＝5.67Hz，1H)6.11(s，1H)6.14(br d，J＝17.02Hz，1H)6.34-6.47(m，1H)6.79(s，1H)7.22(d，J＝11.03Hz，1H)7.84(s，1H)7.92(d，J＝5.67Hz，1H)8.04-8.21(m，2H)9.27(s，1H)9.54(s，1H)。
实施例90
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-((((2R，4S)-1，4-二甲基吡咯烷-2-基)甲基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺甲酸盐
Figure BDA0002577093870002271
用于制备化合物90b的程序：
在0℃下，向化合物90a(215mg，1.0mmol)和DIEA(258mg，2.0mmol)于DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加甲烷磺酰氯(127mg，1.1mmol)。在0℃下搅拌所得溶液1小时。接着，用水(10mL)淬灭反应并用DCM(10mL)萃取两次。接着，有机层经硫酸钠脱水并浓缩，得到呈无色油状的化合物90b(300mg，粗品)，不经进一步纯化即可用于下一步骤。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L碳酸氢铵)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.39min，MS(ESI)m/z＝294.2[M+H]+。
用于制备化合物90c的程序：
向化合物90b(150mg粗品，0.50mmol)于乙醇(3mL)中的混合物中添加25％二甲基胺水溶液(1mL)。在氮气气氛下，在80℃下搅拌所得混合物16小时。接着浓缩混合物并将残余物倒入水(10mL)中，用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。接着，用盐水洗涤有机层，经硫酸钠脱水，浓缩，得到呈无色油状的化合物90c(100mg，粗品)，不经进一步纯化即可直接使用。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L碳酸氢铵)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.16min，MS(ESI)m/z＝229.3[M+H]+。
用于制备化合物90d的程序：
向化合物36d(120mg，0.26mmol)于DMF(3mL)中的混合物中添加化合物90c(60mg，0.26mmol)和DIEA(74mg，0.57mmol)，在90℃下加热所得混合物16小时。混合物通过C18-快速色谱法，由20％至100％MeCN/水(6mmol/L碳酸氢铵)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈橙色固体状的化合物90d(100mg，58％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L碳酸氢铵)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.96min，MS(ESI)m/z＝674.1[M+H]+。
用于制备化合物90e的程序：
向化合物90d(100mg，0.15mmol)于DCM(1mL)中的混合物中添加TFA(1mL)。在20℃下搅拌所得混合物90分钟。接着浓缩溶液并用饱和碳酸钠水溶液(20mL)和乙酸乙酯(20mL)稀释残余物。用盐水洗涤有机层，经硫酸钠脱水，真空浓缩，得到呈黄色固体状的化合物90e(80mg，93％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L碳酸氢铵)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.28min，MS(ESI)m/z＝574.1[M+H]+。
用于制备化合物90f的程序：
向化合物90e(80mg，0.14mmol)于甲醇(3mL)中的混合物中添加37％福尔马林(1mL)和NaBH3CN(54mg，0.85mmol)。接着浓缩所得混合物并用饱和碳酸钠水溶液(20mL)和EA(20mL)稀释残余物。用盐水洗涤有机层，经硫酸钠脱水，真空浓缩，得到呈黄色固体状的化合物90f(80mg，98％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L碳酸氢铵)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.53min，MS(ESI)m/z＝588.1[M+H]+。
用于制备化合物90g的程序：
向化合物90f(80mg，0.14mmol)于甲醇(3mL)中的混合物中添加钯/碳(20mg)，在氢气气氛下，在20℃下搅拌所得混合物1小时。接着过滤混合物并真空浓缩滤液，得到呈浅黄色固体状的化合物90g(70mg，92％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L碳酸氢铵)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.85min，MS(ESI)m/z＝558.1[M+H]+。
用于制备实施例90的程序：
在0℃下，向化合物90g(70mg，0.13mmol)和DIEA(17mg，0.13mmol)于DCM(2mL)中的冷却的搅拌溶液中添加3-氯丙酰氯(17mg，0.13mmol)。在0℃下搅拌所得溶液1小时。添加MeCN(2mL)和TEA(0.5mL)。在80℃下加热混合物16小时。浓缩混合物且残余物通过C18-快速色谱法，由5％至50％MeCN/水(0.05％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈白色固体状的甲酸形式的实施例90(36.3mg，52％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol碳酸氢铵)，Waters Acquity UPLCBEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.68min，MS(ESI)m/z＝612.0[M+H]+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.93(s，1H)，9.66(s，1H)，8.71(s，1H)，8.20(s，1H)，8.17(d，J＝7.4Hz，1H)，7.97(d，J＝5.7Hz，1H)，7.91(s，1H)，7.24(d，J＝11.0Hz，1H)，6.86(s，1H)，6.34(dd，J＝16.9，10.1Hz，1H)，6.16(dd，J＝16.9，2.1Hz，1H)，6.08(d，J＝5.7Hz，1H)，5.72(dd，J＝10.1，2.1Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.13-3.10(m，1H)，2.88-2.82(m，1H)，2.81-2.75(m，1H)，2.72(s，3H)，2.63(dd，J＝12.9，4.4Hz，1H)，2.11-1.97(m，2H)，1.61-1.47(m，8H)，0.96(d，J＝6.2Hz，3H)。
实施例91
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-((2R，4S)-2-((二甲基氨基)甲基)-4-甲基吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870002291
用于制备化合物91b的程序：
在0℃下，向化合物91a(215mg，1.0mmol)和DIEA(258mg，2.0mmol)于DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加甲烷磺酰氯(127mg，1.1mmol)。在0℃下搅拌所得溶液1小时。接着，用水(10mL)淬灭反应并用DCM(10mL)萃取两次。接着，有机层经硫酸钠脱水并浓缩，得到呈无色油状的化合物91b(300mg，粗品)，不经进一步纯化即可用于下一步骤。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L碳酸氢铵)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.39min，MS(ESI)m/z＝294.2[M+H]+。
用于制备化合物91c的程序：
向化合物91b(150mg粗品，0.50mmol)于乙醇(3mL)中的混合物中添加25％二甲基胺水溶液(1mL)。在氮气气氛下，在80℃下搅拌所得混合物16小时。接着浓缩混合物并将残余物倒入水(10mL)中，用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。用盐水洗涤有机层并经硫酸钠脱水。浓缩溶液，得到呈无色油状的化合物91c(120mg，粗品)，不经进一步纯化即可直接使用。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L碳酸氢铵)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.29min，MS(ESI)m/z＝243.3[M+H]+。
用于制备化合物91d的程序：
向化合物1c(120mg，0.50mmol)于DCM(1mL)中的混合物中添加TFA(1mL)，在25℃下搅拌所得混合物3小时。接着真空浓缩混合物并用水(2mL)稀释。冻干混合物，得到呈白色固体状的(三氟乙酸盐形式)化合物91d(180mg，97％)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.27min，MS(ESI)m/z＝143.2[M+H]+。
用于制备化合物91e的程序：
向化合物91d(110mg，0.30mmol)于DMF(3mL)中的混合物中添加化合物36d(100mg，0.21mmol)和DIEA(129mg，1.0mmol)，在90℃下搅拌所得混合物16小时。接着混合物通过C18-快速色谱法，由20％至90％MeCN/水(6mmol/L碳酸氢铵)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈橙色固体状的化合物91e(80mg，63％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L碳酸氢铵)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.63min，MS(ESI)m/z＝588.1[M+H]+。
用于制备化合物91f的程序：
向化合物91e(80mg，0.14mmol)于甲醇(6mL)中的混合物中添加钯/碳(20mg)，在氢气气氛下，在20℃下搅拌所得混合物1小时。接着过滤混合物并真空浓缩滤液，得到呈浅黄色固体状的化合物91f(76mg，粗品)，不经进一步纯化即可直接使用。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.99min，MS(ESI)m/z＝558.2[M+H]+。
用于制备实施例91的程序：
在0℃下，向化合物91f(76mg，0.14mmol)和DIEA(17.6mg，0.14mmol)于DCM(2mL)中的冷却的搅拌溶液中添加3-氯丙酰氯(17mg，0.14mmol)。在0℃下搅拌所得溶液1小时。添加MeCN(2mL)和TEA(0.5mL)。在80℃下加热混合物16小时。浓缩混合物且残余物通过C18-快速色谱法，由10％至70％MeCN/水(6mmol/L碳酸氢铵)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈白色固体状的实施例91(17.6mg，21％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L碳酸氢铵)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.68min，MS(ESI)m/z＝612.0[M+H]+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.61(s，1H)，9.37(s，1H)，8.22-8.15(m，2H)，8.00(d，J＝5.7Hz，1H)，7.86(s，1H)，7.31(d，J＝11.0Hz，1H)，6.86(s，1H)，6.53(dd，J＝17.0，10.2Hz，1H)，6.19(s，1H)，6.13(dd，J＝16.5，3.9Hz，1H)，5.70(dd，J＝10.1，2.0Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.70(dq，J＝13.6，7.0，5.6Hz，1H)，3.45(dd，J＝8.9，6.5Hz，1H)，2.38(h，J＝6.8Hz，1H)，2.25(dd，J＝11.9，4.8Hz，1H)，2.12(s，1H)，1.93-1.75(m，2H)，1.52(s，6H)，1.05(d，J＝6.7Hz，3H)。
实施例92
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-((R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870002321
用于制备化合物92a的程序：
在0℃下，向2-溴-5-氯-4-氟苯胺(2.0g，8.9mmol)和三乙胺(1.2g，12mmol)于DCM(40mL)中的溶液中添加特戊酰氯(1.2g，9.8mmol)。在20℃下搅拌所得混合物16小时。用水(100mL)淬灭混合物并用DCM(50mL×3)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经无水Na2SO4脱水，过滤并真空蒸发滤液。残余物通过硅胶快速色谱法，由10％至20％EtOAc/石油醚梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈白色固体状的化合物92a(2.7g，97％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.51min，MS(ESI)m/z＝309.0[M+H]+。
用于制备化合物92b的程序：
在-30℃下，向化合物92a(2.7g，8.6mmol)于THF(53mL)中的溶液中添加n-BuLi(13mL，1.6M的己烷溶液)，在-30℃下搅拌所得混合物1小时。在-30℃下，添加TFAA(2.7g，13mmol)，接着在20℃下再搅拌混合物16小时。用1M HCl溶液(35mL)淬灭混合物并用EA(30mL×5)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠脱水，过滤并真空浓缩。用浓盐酸(60mL)和THF(30mL)处理残余物，接着在100℃下加热所得混合物2小时。用饱和NaHCO3溶液稀释反应混合物并用EtOAc(50mL×5)萃取。用盐水洗涤合并的有机层并真空蒸发。残余物通过硅胶快速色谱法，由0％至30％EtOAc/石油醚梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈褐色油状的化合物92b(576mg，28％产率)。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ7.2(d，J＝6.3Hz，1H)7.4(dd，J＝10.6，1.7Hz，1H)7.8(br s，1H)。
用于制备化合物92c的程序：
在0℃下，向化合物92b(576mg，2.4mmol)于THF(12mL)中的溶液中添加甲基溴化镁(4.0mL，3M的THF溶液)。在20℃下搅拌所得反应物1小时。用饱和NH4Cl溶液(50mL)淬灭反应并用EA(50mL×3)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠脱水，过滤并真空蒸发。残余物通过硅胶快速色谱法，由10％至50％EtOAc/石油醚梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈褐色油状的化合物92c(401mg，65％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.22min，MS(ESI)m/z＝258.1[M+H]+。
用于制备化合物92d的程序：
在0℃下，向化合物92c(401mg，1.6mmol)于NMP(7mL)中的溶液中添加NaH(120mg，0.58mmol，60％于矿物油中的分散液)。在0℃下搅拌反应15分钟，接着添加2，4-二氯嘧啶(232mg，1.6mmol)。在20℃下搅拌所得混合物1小时。在0℃下，用水(100mL)淬灭反应并用EA(20mL×5)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠脱水，过滤并真空蒸发滤液。残余物通过硅胶快速色谱法，由30％至100％EtOAc/石油醚梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈褐色固体状的化合物92d(374mg，65％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.36min，MS(ESI)m/z＝370.0[M+H]+。
用于制备化合物92e的程序：
将化合物92d(374mg，1.0mmol)、4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(207mg，1.1mmol)和TFA(576mg，5.1mmol)于丙-2-醇(5.7mL)中的溶液密封并在50℃下加热16小时。真空蒸发反应混合物。残余物通过硅胶快速色谱法，由0％至10％MeOH/DCM梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈褐色固体状的化合物92e(420mg，80％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.21min，MS(ESI)m/z＝520.1[M+H]+。
用于制备化合物92f的程序：
向化合物92e(420mg，0.81mmol)和K2CO3(447mg，3.2mmol)于DMSO(8mL)中的溶液中添加(R)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺(129mg，1.1mmol)。在50℃下搅拌所得混合物16小时。用冰水(100mL)稀释反应混合物并用EA(20mL×5)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠脱水，过滤并真空蒸发滤液，得到呈黄色固体状的化合物92f(500mg，粗品)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.51min，MS(ESI)m/z＝613.9[M+H]+。
用于制备化合物92g的程序：
将钯/碳(88mg)添加至化合物92f(253mg，0.41mmol)于MeOH(8mL)中的溶液中，在氢气气氛下，在20℃下搅拌所得混合物30分钟。接着过滤混合物并真空蒸发滤液，得到呈浅褐色固体状的粗化合物92g(241mg，粗品)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.10min，MS(ESI)m/z＝583.9[M+H]+。
用于制备化合物92h的程序：
在0℃下，向化合物92g(241mg，0.41mmol)于DCM(4mL)中的溶液中逐滴添加3-氯丙酰氯(55mg，0.43mmol)。在0℃下搅拌反应混合物0.5小时。接着用饱和NaHCO3水溶液(10mL)稀释混合物并在12-17℃下搅拌所得混合物2小时。用DCM(20mL×3)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠脱水，过滤并减压浓缩滤液。残余物通过硅胶快速色谱法，由0％至3％MeOH/DCM梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物92h(270mg，97％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.36min，MS(ESI)m/z＝673.9[M+H]+。
用于制备实施例92的程序：
向化合物92h(270mg，0.40mmol)于MeCN(4mL)中的溶液中添加TEA(162mg，1.60mmol)。在80℃下加热反应混合物16小时。真空蒸发反应溶液。残余物通过C18-快速色谱法，由0％至60％MeCN/水(0.02％氨水)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份冻干至干燥，得到呈浅褐色固体状的实施例92(120mg，47％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.33min，MS(ESI)m/z＝638.0[M+H]+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.7-1.8(m，1H)1.8(s，3H)2.0-2.1(m，1H)2.2(s，6H)2.7(quin，J＝7.6Hz，1H)3.1-3.2(m，3H)3.3-3.3(m，1H)3.3(br s，1H)3.8(d，J＝6.9Hz，3H)5.7(br d，J＝10.4Hz，1H)6.1(dd，J＝5.5，3.0Hz，1H)6.2(dd，J＝17.0，1.6Hz，1H)6.4-6.5(m，2H)7.5(br dd，J＝11.2，2.0Hz，1H)7.5(br d，J＝7.6Hz，1H)7.9(br d，J＝6.3Hz，1H)7.9(d，J＝5.7Hz，2H)8.3(dd，J＝12.1，7.4Hz，1H)9.3(s，1H)9.4(br s，1H)。
实施例93
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-2-((3S，4R)-3-(二甲基氨基)-4-氟吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870002351
用于制备化合物93a的程序：
向化合物1d(100mg，0.21mmol)于NMP(3mL)中的混合物中添加化合物79a(28mg，0.21mmol)和碳酸钾(73mg，0.53mmol)，在100℃下加热所得混合物2小时。混合物通过C18-快速色谱法，由5％至60％CH3CN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物93a(91mg，74％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.99min，MS(ESI)m/z＝579.0[M+H]+。
用于制备化合物93b的程序：
向化合物93a(90mg，0.16mmol)于甲醇(5mL)中的混合物中添加钯/碳(30mg)，在氢气气氛下，在20℃下搅拌所得混合物1小时。接着过滤混合物并真空浓缩滤液，得到呈黄色固体状的化合物93b(78mg，91％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.24min，MS(ESI)m/z＝549.1[M+H]+。
用于制备实施例93的程序：
在0℃下，向化合物93b(78mg，0.14mmol)于NMP(2mL)中的混合物中添加丙烯酰氯(13mg，0.14mmol)和DIEA(20mg，0.16mmol)，在0℃下搅拌所得溶液1小时。混合物通过C18-快速色谱法，由5％至50％CH3CN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈白色固体状的实施例93(45mg，52％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.92min，MS(ESI)m/z＝603.1[M+H]+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.50(br s，6H)2.25(s，6H)2.54-2.66(m，1H)3.38-3.48(m，3H)3.78(s，3H)3.79-3.87(m，1H)5.17-5.34(m，1H)5.21(br s，1H)5.32(br s，1H)5.68(br d，J＝11.03Hz，1H)6.18(br d，J＝16.71Hz，1H)6.27(br s，1H)6.46(br dd，J＝17.02，10.09Hz，2H)6.95-7.40(m，2H)8.21(br s，2H)8.52-9.11(m，1H)9.37(br s，1H)10.12(br s，1H)。
实施例94
N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-(4-(4-(2-羟基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870002371
用于制备化合物94b的程序：
向化合物94a(3.0g，12.9mmol)于DMF(10mL)中的混合物中添加NBS(2.3g，12.9mmol)，在20℃下搅拌所得混合物30分钟。用水(50mL)稀释混合物并用EtOAc(50mL)萃取。真空浓缩有机层，残余物通过快速二氧化硅色谱法，由5％至50％EtOAc/石油醚梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物94b(2.0g，50％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.54min，MS(ESI)m/z＝313.2[M+H]+。
用于制备化合物94c的程序：
向化合物94b(1.6g，5.1mmol)和[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)二氯甲烷复合物(200mg，0.25mmol)于甲醇(15mL)中的混合物中添加TEA(1g，9.9mmol)。在一氧化碳气氛下，在80℃下加热所得混合物16小时。真空浓缩混合物，残余物通过C18-快速色谱法，由5％至80％MeCN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物94c(350mg，24％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.49min，MS(ESI)m/z＝291.3[M+H]+。
用于制备化合物94d的程序：
向化合物1c(300mg，1.0mmol)于THF(10mL)中的混合物中添加MeMgBr(10mL，3M的THF溶液)，在氮气气氛下，在20℃下搅拌所得混合物1小时。接着用水(50mL)稀释混合物并用EtOAc(50mL)萃取。真空浓缩有机层，残余物通过C18-快速色谱法，由5％至70％MeCN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物1d(120mg，40％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.39min，MS(ESI)m/z＝291.3[M+H]+。
用于制备化合物94e的程序：
向化合物94d(120mg，0.41mmol)于NMP(5mL)中的混合物中添加化合物6e(130mg，0.43mmol)和DIEA(150mg，1.2mmol)，在100℃下搅拌所得混合物30分钟。接着混合物通过C18-快速色谱法，由5％至70％MeCN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物94e(110mg，48％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.52min，MS(ESI)m/z＝554.2[M+H]+。
用于制备化合物94f的程序：
向化合物94e(110mg，0.20mmol)于NMP(5mL)中的混合物中添加N，N，N′-三甲基乙二胺(30mg，0.29mmol)和DIEA(40mg，0.31mmol)，在60℃下搅拌所得混合物2小时。接着混合物通过C18-快速色谱法，由5％至60％MeCN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈黄色固体状的化合物94f(120mg，95％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.04min，MS(ESI)m/z＝636.2[M+H]+。
用于制备化合物94g的程序：
向化合物94f(110mg，0.17mmol)于甲醇(5mL)中的混合物中添加甲醇钠(500mg，4.0mmol)，在20℃下搅拌所得混合物6小时。接着用水(50mL)稀释混合物并用EtOAc(50mL)萃取。真空浓缩有机层，得到呈黄色固体状的化合物94g(75mg，81％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.78min，MS(ESI)m/z＝536.2[M+H]+。
用于制备化合物94h的程序：
向化合物94g(40mg，0.075mmol)于甲醇(5mL)中的混合物中添加钯/碳(20mg)，在氢气气氛下，在20℃下搅拌所得混合物2小时。接着过滤混合物并真空浓缩滤液，得到呈褐色固体状的化合物94h(32mg，85％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.67min，MS(ESI)m/z＝506.3[M+H]+。
用于制备实施例94的程序：
在0℃下，向化合物94h(32mg，0.063mmol)于NMP(2mL)中的混合物中添加丙烯酰氯(7mg，0.077mmol)和DIEA(20mg，0.15mmol)，在0℃下搅拌所得溶液10分钟。混合物通过C18-快速色谱法，由5％至60％MeCN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈白色固体状的实施例94(14mg，39％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.70min，MS(ESI)m/z＝560.3[M+H]+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.69(s，7H)2.22(s，7H)2.34(br t，J＝5.83Hz，2H)2.70(s，3H)2.87(br t，J＝5.67Hz，2H)3.77(br s，3H)5.69-5.78(m，1H)5.92(br s，1H)6.23(dd，J＝17.02，1.89Hz，1H)6.30-6.47(m，1H)6.56-6.71(m，1H)6.96(s，1H)7.06-7.29(m，2H)7.65(br s，1H)8.09-8.27(m，1H)8.12-8.57(m，1H)8.46(br s，1H)10.09(br s，2H)10.86-11.07(m，1H)。
实施例95
N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-(4-(6-(2-羟基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基氨基)-1，3，5-三嗪-2-基氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870002401
用于制备化合物95a的程序：
向化合物32d(3.0g，8.10mmol)于MeOH(50mL)中的溶液中添加Pd/C(300mg)。所得混合物用氢气吹扫并脱气3次，接着在H2(氢气球，15Psi)下，在29-40℃下搅拌1小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈褐色固体状的化合物95a(1.48g，95.5％产率)。
LCMS：在10-80CD_3MIN_220&254色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝1.440min，MS(ESI)m/z＝191.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.82(br s，1H)，7.84(s，1H)，7.42(t，J＝2.8Hz，1H)，6.80(s，1H)，6.16(br s，1H)，5.91(br s，2H)，3.80(s，3H)。
用于制备化合物95b的程序：
在0-5℃下，向化合物95a(1.3g，6.84mmol)于THF(100mL)中的溶液中添加CH3MgBr(9.1mL，3M的乙醚溶液)。在29-40℃下搅拌混合物1.5小时。通过添加NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应混合物，接着用EtOAc(3×100mL)萃取。用盐水(3×100mL)洗涤有机层，干燥并真空浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20/1)纯化，得到呈褐色固体状的化合物95b(1.1g，84.6％产率)。
LCMS：在10-80CD_7MIN_220&254色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝0.880min，MS(ESI)m/z＝191.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.47(br s，1H)，7.09(s，2H)，6.78-6.62(m，1H)，6.07(s，1H)，5.18(br s，1H)，4.92(br s，2H)，1.56(s，6H)。
用于制备化合物95c的程序：
向化合物95b(200mg，1.05mmol)和DIEA(204mg，1.58mmol)于CH2Cl2(5mL)中的溶液中添加2，4-二氯-1，3，5-三嗪(174mg，1.16mmol)。在25-33℃(室温)下搅拌所得混合物2小时。减压浓缩反应物，得到粗残余物，在硅胶上通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝5/1)纯化，得到呈褐色固体状的化合物95c(200mg，62.7％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.717min，MS(ESI)m/z＝285.9[M-18]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.13-9.72(m，1H)，8.56-8.41(m，1H)，8.35-8.09(m，2H)，7.40(s，1H)，7.26(t，J＝2.6Hz，1H)，6.65-6.51(m，1H)，1.76(s，6H)。
用于制备化合物95d的程序：
向化合物95c(190mg，0.63mmol)和化合物2g(168mg，0.63mmol)于n-BuOH(5mL)中的溶液中添加TFA(0.05mL)。在25-33℃下搅拌所得混合物3小时。向反应物中添加10mL水，并用EtOAc(10mL×3)萃取混合物。用盐水(10mL×3)洗涤合并的有机层，干燥并真空浓缩，得到粗残余物，在硅胶上通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝15/1(v/v))纯化，得到呈红色固体状的化合物95d(250mg，73％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.728min，MS(ESI)m/z＝518.3[M-18]+。
用于制备化合物95e的程序：
在N2保护下，向化合物95d(190mg，0.35mmol)于MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg)。在H2(氢气球，15Psi)下，在26-33℃下搅拌混合物1小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈褐色油状的化合物95e(100mg，75％产率)。
LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(MERCK RP18e 25-2mm)中，Rt＝0.703min，MS(ESI)m/z＝506.4[M+H]+。
用于制备实施例95的程序：
向化合物95d(100mg，0.20mmol)和DIEA(38mg，0.30mmol)于DMF(1mL)中的溶液中添加溶于DMF(1mL)中的丙烯酰氯(18mg，0.20mmol)。在0℃下搅拌所得混合物30分钟。反应物通过制备型HPLC[色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；条件：25-55％B(A：0.05％氨水；B：CH3CN)；流动速率：25ml/min]纯化。将含有所希望的化合物的洗脱份冻干，得到呈白色固体状的实施例95(13.6mg，12.2％产率)。
LCMS：在10-80CD_3MIN_220&254色谱(XBrige Shield RP18 2.1*50mm)中，Rt＝1.908min，MS(ESI)m/z＝560.3[M+H]+。
HPLC：在10-80_CD_1.2mL.MET(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中，Rt＝3.44mins。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.87(br s，1H)，10.04(br s，2H)，8.43(br s，1H)，8.19(br s，2H)，7.28(br s，2H)，7.02(br s，1H)，6.41(br d，J＝9.4Hz，1H)，6.22(br d，J＝16.4Hz，2H)，5.91(br s，1H)，5.74(br d，J＝10.8Hz，1H)，3.80(s，3H)，2.90(br s，2H)，2.71(s，3H)，2.42-2.12(m，8H)，1.57(s，6H)。
实施例96
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-4-甲氧基-2-((1S，5R)-3-甲基-3，6-二氮杂双环[3.2.0]庚-6-基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002577093870002421
用于制备化合物96b的程序：
向化合物LiAlH4(230mg，6.05mmol)于THF(8mL)中的溶液中添加化合物96a(300mg，1.51mmol)。在75℃下加热所得灰白色混合物14小时。冷却至室温后，用THF(15mL)稀释反应物并依序用H2O(0.2mL)、15％NaOH水溶液(0.2mL)和H2O(0.6mL)处理，接着再搅拌30分钟并添加Na2SO4。过滤混合物并真空浓缩滤液，得到呈黄色油状的化合物96b(130mg，77％产率)。
LCMS：在0-60AB_2MIN_50_E色谱(Xtimate C18，2.1*30mm，3μm)中，Rt＝0.079min，MS m/z＝113.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.24(dd，J＝4.4，6.4Hz，1H)，3.68-3.66(m，1H)，3.38(dd，J＝4.8，8.8Hz，1H)，3.08-3.03(m，1H)，2.98-2.93(m，2H)，2.45(s，3H)，2.05-2.01(m，2H)。用于制备化合物96c的程序：
向化合物36b(200mg，0.43mmol)和K2CO3(119mg，0.86mmol)于DMSO(2mL)中的溶液中添加化合物96b(58mg，0.86mmol)。在50℃下搅拌反应混合物14小时，同时颜色从黄色变为橙色。在搅拌下，将反应混合物逐滴添加至H2O(30mL)中，通过过滤收集沉淀的固体。将固体溶解于CH2Cl2(20mL)中，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈橙色固体状的化合物96c(220mg，92％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.667min，MS(ESI)m/z＝558.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.09(s，1H)，8.92(s，1H)，8.09(d，J＝6.0Hz，1H)，7.95(d，J＝6.8Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.09(d，J＝10.4Hz，1H)，6.16(d，J＝6.0Hz，1H)，5.94(s，1H)，5.02(dd，J＝4.4，6.4Hz，1H)，4.07(t，J＝8.0Hz，1H)，3.91(s，3H)，3.89-3.83(m，1H)，3.15-3.06(m，1H)，2.96(d，J-10.0Hz，1H)，2.89(d，J＝11.2Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.07(dd，J＝5.2，10.0Hz，1H)，1.85(dd，J＝4.4，11.2Hz，1H)，1.67(br s，3H)，1.66(s，3H)。
用于制备化合物96d的程序：
向化合物96c(220mg，0.39mmol)于EtOAc(10mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，30mg)。在氢气球(15Psi)下，在8-13℃下搅拌反应混合物15小时，接着在35℃下再搅拌15小时。过滤反应混合物并真空浓缩滤液，得到呈黑色固体状的化合物96d(180mg，87％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.640min，MS(ESI)m/z＝528.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.82(s，1H)，8.15(d，J＝7.2Hz，1H)，8.01(d，J＝5.6Hz，1H)，7.75(s，1H)，7.33(s，1H)，7.07(d，J＝10.8Hz，1H)，6.34(s，1H)，6.01(d，J＝5.6Hz，1H)，4.65(dd，J＝4.8，6.4Hz，1H)，3.91(dd，J＝4.8，7.2Hz，1H)，3.87-3.79(m，4H)，3.13-3.05(m，1H)，3.01(br d，J＝10.4Hz，2H)，2.35(s，3H)，2.10(br dd，J＝6.0，10.0Hz，1H)，1.96(dd，J＝4.4，10.8Hz，1H)，1.65(s，3H)，1.65(s，3H)。
用于制备化合物96e的程序：
在冰水浴中，向化合物96d(176mg，0.33mmol)于CH2Cl2(3mL)中的溶液中逐滴添加化合物3-氯丙酰氯(42mg，0.33mmol)。在5-10℃下搅拌所得黑色混合物1.5小时且固体沉淀析出。将饱和NaHCO3水溶液(10mL)添加至反应混合物中且再搅拌2小时，接着在室温下静置12小时。分离水相并用CH2Cl2(15mL×3)萃取。依序用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4脱水并真空浓缩，得到呈深绿色固体状的标题化合物96e(164mg，59％产率)。
LCMS：在5-95AB_220&254.1cm色谱(MERCK RP18 2.5-2mm)中，Rt＝0.683min，MS(ESI)m/z＝618.1[M+H]+。
用于制备实施例96的程序：
向化合物96e(164mg，0.19mmol)于CH3CN(5mL)中的溶液中添加Et3N(79mg，0.78mmol)。在80℃下搅拌所得黑色混合物14小时。减压去除溶剂，得到粗残余物，用MeOH(2mL)溶解且先通过制备型TLC(CH2Cl2∶MeOH＝5∶1(v/v))纯化，得到呈深红色固体状的不纯产物。再通过制备型HPLC(色谱柱：Xbridge 150*30mm*10μm；条件：37-67％B(A：0.05％氨水，B：CH3CN)；流动速率：25ml/min)纯化，接着冻干，得到呈浅黄色固体状的实施例96(31.3mg，28％产率)。
LCMS：在10-80AB_4min_220&254.1cm色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.225min，MS(ESI)m/z＝582.1[M+H]+。
HPLC：在10-80AB_1.2ml.met(Ultimate C18 3.0um 3.0*50mm)中，Rt＝2.10min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.35(br s，1H)，9.08(br s，1H)，8.16(br s，1H)，8.05(d，J＝6.0Hz，1H)，7.60(d，J＝6.0Hz，1H)，7.35(s，1H)，7.12(d，J＝10.8Hz，1H)，6.46-6.31(m，3H)，6.25(d，J＝5.2Hz，1H)，5.75(dd，J＝3.6，7.6Hz，1H)，5.40(br s，1H)，4.61(dd，J＝4.0，6.4Hz，1H)，3.92-3.84(m，4H)，3.83-3.76(m，1H)，3.17-3.01(m，3H)，2.43(s，3H)，2.18(dd，J＝6.4，10.0Hz，1H)，2.04-1.94(m，1H)，1.75-1.63(m，6H)。
实施例97
N-(5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-4-甲氧基-2-((1S，5S)-6-甲基-3，6-二氮杂双环[3.2.0]庚-3-基)苯基)丙烯酰胺甲酸盐
Figure BDA0002577093870002451
该合成遵循与实施例89类似的实验程序，得到呈浅黄色固体状的甲酸形式的实施例97。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(0.02％FA)，Waters Acquity UPLC BEHC18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.75min，MS(ESI)m/z＝582.0[M+H]+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.61(s，1H)，9.55(s，1H)，8.31(s，1H)，8.20(s，1H)，8.15(d，J＝7.4Hz，1H)，7.99(d，J＝5.7Hz，1H)，7.91(s，1H)，7.28(d，J＝11.0Hz，1H)，6.84(s，1H)，6.55(dd，J＝17.1，10.3Hz，1H)，6.20(dd，J＝17.1，2.0Hz，1H)，6.10(d，J＝5.7Hz，1H)，5.70(dd，J＝10.2，2.0Hz，1H)，4.25-4.16(m，1H)，3.79(s，3H)，3.58-3.53(m，4H)，3.21(d，J＝9.8Hz，2H)，3.17-3.11(m，2H)，2.88-2.82(m，1H)，2.77-2.72(m，1H)，1.50(s，6H)。
实施例98
(R)-N-(2-(2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)吡咯烷-1-基)-5-(4-(5-氯-4-氟-2-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺甲酸盐
Figure BDA0002577093870002452
用于制备化合物98b的程序：
在0℃下，向化合物98a(0.70g，3.0mmol)于DCM(5mL)中的溶液中添加甲苯磺酰氯(684mg，3.6mmol)和吡啶(1.79mL，22mmol)。在20℃下搅拌所得混合物16小时。用1N HCl(10mL)稀释混合物并用DCM(20mL×3)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发滤液，得到粗产物，通过快速二氧化硅色谱法，由0％至10％EtOAc/石油醚梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈无色油状的化合物98b(1.1g，75％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.55min，MS(ESI)m/z＝390[M+H]+。
用于制备化合物98c的程序：
向化合物98b(0.47g，1.2mmol)于NMP(10mL)中的溶液中添加氮杂环丁烷盐酸盐(673mg，7.2mmol)和碳酸钾(995mg，7.2mmol)。在85℃下搅拌混合物16小时。用水(20mL)稀释混合物并用EtOAc(20mL×3)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发滤液，得到粗产物，通过C18-快速色谱法，由0至50％CH3CN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈无色油状的化合物98c(0.20g，60％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.94min，MS(ESI)m/z＝275[M+H]+。
用于制备化合物98d的程序：
向化合物98c(90mg，0.30mmol)于IPA(5mL)中的溶液中添加钯/碳(10mg)。在氢气气氛下，在20℃下搅拌所得混合物16小时。过滤混合物并真空浓缩滤液，得到粗化合物98d(70mg，粗品)，直接用于下一步骤中。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝0.24min，MS(ESI)m/z＝141[M+H]+。
用于制备化合物98e的程序：
向化合物98d(70mg，0.50mmol)于IPA(10mL)中的溶液中添加碳酸钾(90mg，0.65mmol)和化合物36b(150mg，0.32mmol)。在氮气气氛下，在80℃下加热所得混合物16小时。接着，过滤混合物并减压去除滤液。用水(20mL)稀释残余物并用EtOAc(20mL×3)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠脱水，过滤并减压蒸发滤液，得到呈红色固体状的化合物98e(150mg，80％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3)，Waters AcquityUPLC BEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.52min，MS(ESI)m/z＝586[M+H]+。用于制备化合物98f的程序：
向化合物98e(70mg，0.12mmol)于MeOH(15mL)中的溶液中添加钯/碳(20mg)。在氢气气氛下，在20℃下搅拌所得混合物2小时。过滤混合物并真空浓缩滤液，得到呈黄色固体状的化合物98f(50mg，60％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3，Waters Acquity UPLCBEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.16min，MS(ESI)m/z＝556[M+H]+。
用于制备实施例98的程序：
在0℃下，向化合物98f(40mg，0.070mmol)和DIEA(10mg，0.080mmol)于NMP(3mL)中的溶液中添加3-氯丙酰氯(10mg，0.080mmol)。接着，添加MeCN(3mL)和TEA(1mL)并在80℃下加热所得混合物16小时。真空浓缩混合物且残余物通过C18-快速色谱法，由0至30％CH3CN/水(0.02％FA)梯度洗脱进行纯化。将纯洗脱份蒸发至干燥，得到呈白色固体状的甲酸形式的实施例98(3.9mg，8.9％产率)。
LCMS：在3min色谱(3min-5-95％MeCN/水(6mmol/L NH4HCO3，Waters Acquity UPLCBEH C18 1.7μm，2.1*50mm，40℃)中，Rt＝1.16min，MS(ESI)m/z＝610.1[M+H]+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δμpm 9.61(d，J＝8.1Hz，1H)，8.28(s，1H)，8.16(d，J＝7.4Hz，1H)，7.98(d，J＝5.7Hz，1H)，7.86(s，1H)，7.28(d，J＝11.1Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.57(dd，J＝17.0，10.2Hz，1H)，6.35-6.03(m，3H)，5.70(dd，J＝10.4，1.9Hz，1H)，3.97-3.68(m，4H)，3.11(dq，J＝22.2，6.8Hz，4H)，2.96-2.85(m，1H)，2.48-2.34(m，2H)，2.27-2.15(m，1H)，2.11-2.00(m，1H)，1.98-1.71(m，4H)，1.69-1.59(m，1H)，1.55-1.40(m，6H)。
生物学实施例：
以下描述的是用于测量相较于WT EGFR(和其它蛋白激酶)，所提供的化合物作为突变型EGFR的选择性抑制剂的生物学活性的分析。
实施例99：具有EGFR或HER2突变的细胞系
出于初步体外效力分析的目的，可以使用慢病毒系统产生具有不同EGFR或Her2突变的细胞系。
确切地说，通过将人EGFR外显子20 V769_D770insASV亚克隆至慢病毒转移载体pMT143(Sunbio Co.，Ltd.)中且接着将所述慢病毒转移载体和慢病毒包装质粒转染至293T/17(美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)，CRL-11268)细胞中以产生编码人EGFR V769_D770insASV的重组慢病毒，由此产生具有人EGFR外显子20ASV插入突变的细胞系。由于IL-3依赖性增殖，在补充有10％FBS以及10％体积分数的作为小鼠IL3来源的WEHI-3B细胞系(DSMZ，目录号ACC-26)的条件培养基的RPMI1640培养基(Life Technology，目录号11835-055)中培养亲本Ba/F3(DSMZ，目录号ACC-300)细胞。为产生用EGFR外显子20 V769_D770insASV转导的Ba/F3细胞系，用重组EGFR V769_D770insASV慢病毒感染亲本Ba/F3细胞且接着进行1μg/ml嘌呤霉素选择和IL3耗竭。由此得到的细胞系组成性表达磷酸化的EGFR蛋白质并且在无IL3存在下增殖，由此可用于体外PD和抗增殖分析中。
通过将人Her2外显子20插入突变YVMA亚克隆至慢病毒转移载体pMT143(SunbioCo.，Ltd.)中且接着将所述慢病毒转移载体和慢病毒包装质粒转染至293T/17(美国典型培养物保藏中心(ATCC)，CRL-11268)细胞中以产生编码人Her2外显子20插入突变YVMA的重组慢病毒，由此产生具有人Her2外显子20插入突变YVMA的细胞系。在补充有10％NBCS的DMEM培养基(Life Technology，目录号11835-055)中培养亲本NIH-3T3细胞。为了产生用Her2外显子20插入YVMA转导的NIH-3T3细胞系，用重组Her2外显子20插入YVMA慢病毒感染亲本细胞且接着进行1.0μg/mL嘌呤霉素选择。由此得到的细胞系表达磷酸化Her2蛋白质并且其增殖依赖于突变基因，由此可用于体外PD和抗增殖分析。
重组人EGFR外显子20H773_V774insNPH Ba/F3细胞系是购自中国的冠科生物(Crown Bioscience，Inc.)(目录号C2058)。与重组人EGFR外显子20H769_V770insASV Ba/F3细胞系类似，重组人EGFR外显子20H773_V774insNPH Ba/F3细胞系也组成性表达磷酸化的EGFR蛋白质并且在无IL3存在下增殖，由此可用于体外PD和抗增殖分析中。
NCI-H1975细胞系(CRL5908TM)含有点突变EGFR L858R&T790M，其购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)。
实施例100：效力评估-EGFR(WT)和EGFR突变体
通过使用WT EGFR细胞系A-431(美国典型培养物保藏中心(ATCC)，CRL-1555TM)和如实施例99中所描述的突变型细胞系评估化合物针对突变型EGFR和WT EGFR的抑制活性和选择性。
测试前一天，将适当浓度的WT或突变型细胞接种于96孔板中补充有1％FBS的相应生长培养基中，并培育过夜。次日，将一系列浓度的测试化合物添加至所述板的各个孔中，并在37℃和5％CO2下培育板4小时。对于WT EGFR细胞系，应当在与测试化合物一起培育之后且在用MSD试剂盒分析之前，用100ng/ml重组hEGF(RD，目录号236-EG)再刺激10分钟。
接着，用名为“
Figure BDA0002577093870002491
96 4点HB原型EGFR三链体分析物：pEGFR(Tyr1068)、pEGFR(Tyr1173)、总EGFR(4-Spot HB Prototype EGFR Triplex ANALYTES：pEGFR(Tyr1068)，pEGFR(Tyr1173)，Total EGFR)”的MSD试剂盒，根据制造商的说明书(MESOSCALE DISCOVERY，目录号N45ZB-1)测量各孔中细胞的EGFR(Y1068)磷酸化水平(活性)。这一分析是用MSD
Figure BDA0002577093870002492
成像仪测定细胞中的磷酸化EGFR和总EGFR的一种电化学发光方法并且可利用该机器产生磷酸化EGFR/总EGFR的比率。用名为“磷酸ErbB2(Tyr1248)分析全细胞溶解产物试剂盒(Phospho-ErbB2(Tyr1248)Assay Whole Cell Lysate Kit)”的MSD试剂盒，根据制造商的说明书(MESO SCALE DISCOVERY，目录号K151CLD-3)测量各孔中细胞的Her2(Y1248)磷酸化水平(活性)。这一分析是用MSD
Figure BDA0002577093870002493
成像仪测定细胞中的磷酸化Her2和总Her2的一种电化学发光方法(MESO SCALE DISCOVERY)且接着可利用该机器产生产生磷酸化Her2/总Her2的比率。抑制百分比是基于下式计算：抑制％＝100×[1-(样品孔的比率-最小对照孔的比率)/(最大对照孔的比率-最小对照孔的比率)]。IC50值是使用Prism GraphPad7.0或Microsoft X1fit软件，以最佳拟合曲线中50％抑制所需的化合物浓度计算。
表2：针对各细胞系的活性抑制测试的参数
Figure BDA0002577093870002494
Figure BDA0002577093870002501
表3显示在以上描述的EGFR抑制分析中示例性本申请化合物和作为阳性对照的其它EGFR抑制剂的活性。测试化合物针对突变型EGFR和WT EGFR的选择性可以基于各测试化合物的数据评价。化合物编号对应于表1中的化合物编号。
表3.示例性化合物的EGFR(突变型和WT)细胞磷酸化抑制数据
Figure BDA0002577093870002502
Figure BDA0002577093870002511
Figure BDA0002577093870002521
Figure BDA0002577093870002531
Figure BDA0002577093870002541
所述化合物针对具有EGFR L858R和T790M双重突变的细胞的IC50可以比所述化合物针对野生型EGFR的IC50强效高达1500倍。大部分本申请化合物针对EGFR外显子20NPH和ASV插入以及Her2外显子20YVMA插入显示出高于AZD9291的抑制活性。
实施例101：细胞增殖-EGFR(WT)和EGFR突变体
将适当浓度的WT或突变型细胞接种于384孔板中补充有10％FBS的相应生长培养基中，对于每一实验，准备两份相同的实验重复板，并将各板培育过夜。次日，向各重复板之一给与一系列浓度的测试化合物，并且分析另一重复板的G0值。给与化合物的板在37℃和5％CO2下再培育72小时并且通过
Figure BDA0002577093870002542
发光细胞活力分析(Promega)测量G0板或给与化合物的板各孔中活细胞的数量。这一分析是通过检测荧光素酶活性测量细胞ATP浓度来测定活细胞数量的一种发光方法。将检测试剂(15μl)施配至每个孔中，并在室温下培育板30分钟。接着，使用Envision读板仪(PerkinElmer)测量各孔中的发光。增殖百分比是基于下式计算：增殖％＝100×(样品孔的G3值-G0值)/(DMSO对照的G3值-G0值)。GI50值是使用Genedata
Figure BDA0002577093870002551
软件，以最佳拟合曲线中50％增殖所需的化合物浓度进一步计算。
表4：针对各细胞系的增殖测试的参数
Figure BDA0002577093870002552
表5显示在以上描述的增殖抑制分析中示例性本申请化合物和作为阳性对照的其它EGFR抑制剂的增殖抑制。
表5.EGFR(突变型和野生型)细胞增殖
Figure BDA0002577093870002553
Figure BDA0002577093870002561
Figure BDA0002577093870002571
Figure BDA0002577093870002581
Figure BDA0002577093870002591
所述化合物针对具有EGFR L858R和T790M双重突变的细胞的GI50可以比所述化合物针对野生型EGFR的GI50强效高达25倍。大部分本申请化合物针对EGFR外显子20NPH和ASV插入以及Her2外显子20YVMA插入显示出高于AZD9291的抑制活性。
实施例102：细胞增殖-BTK(WT)
将3,750个细胞/孔的OCI-LY-10、2,000个细胞/孔的TMD-8和Ri-1以及1,250个细胞/孔的DB分别分选至384孔板中的含10％FBS的RPMI1640的培养基中。培育过夜之后，将所有细胞与一系列浓度的化合物一起培育。同时，制备各细胞系的重复板以测量G0值。再培育给与化合物的板72小时并利用
Figure BDA0002577093870002592
发光细胞活力分析(Promega)测量活细胞的数量，这一分析是通过使用Envision读板仪(PerkinElmer)测量细胞ATP浓度来测定活细胞数量的一种发光方法。增殖百分比计算如下：增殖％＝100×(样品孔的G3值-G0值)/(DMSO对照的G3值-G0值)。GI50值是使用XLFit软件，以最佳拟合曲线中50％增殖抑制所需的化合物浓度进一步计算。
表6显示在以上描述的增殖抑制分析中示例性本申请化合物和作为阳性对照的其它BTK抑制剂的增殖抑制。
表6.BTK细胞增殖
Figure BDA0002577093870002593
Figure BDA0002577093870002601
Figure BDA0002577093870002611
Figure BDA0002577093870002621
Figure BDA0002577093870002631
如下表7中所示，相较于ACP 196和依鲁替尼，本发明中公开的示例性化合物在较低药物浓度下显示出较佳的效力和较高的受体占有率。
p-BTK分析
将Ramos细胞于含1.5％FBS(Invitrogen)的RPMI1640(Gibco)中的悬浮液均等地分配于384孔小体积白板中。通过Platemate plus(Thermo)稀释化合物并使用ECHO 555液体处置器(Labcyte)添加至分析板中，得到0.1％DMSO最终浓度。接着，在37℃和5％CO2下培育分析板30分钟。将300μM过钒酸盐(3×)添加至各孔中并在37℃和5％CO2下再培育分析板60分钟。磷酸化BTK(Tyr223)是使用
Figure BDA0002577093870002632
试剂(Cisbio)，根据制造商的单板分析方案检测。
Btk靶位点占有率-酶联结免疫吸附分析法.
用于检测小鼠和人裂解产物中不受抑制的游离Btk的酶联结免疫吸附分析(ELISA)方法。将人或小鼠全血与化合物一起在37℃下培育2小时。在含有50mM Tris-HCl(pH 7.5)、150mM NaCl、1mM EDTA、1％Triton X-100的冰冷裂解缓冲液中裂解全血。接着，将细胞裂解产物与1μM最终浓度的依鲁替尼-生物素一起培育。将样品转移至涂覆抗生蛋白链菌素的96孔ELISA板上并在室温下，在振荡下混合1小时。接着，将α-Btk抗体(1∶500；克隆编号D3H5，美国马萨诸塞州丹佛斯(Danvers，MA，USA)的Cell signaling Technology)添加至孔中并在室温下培育1小时。洗涤之后，将山羊α-兔-HRP(在PBS+0.05％Tween-20+1％BSA中以1∶5000稀释)添加至各孔中并在室温下培育1小时。通过添加四甲基联苯胺(TMB)使ELISA显色，随后添加终止溶液并在OD 450nm下读取。
表7.BTK PD标记物分析和受体占有率分析结果
Figure BDA0002577093870002641
实施例103：体外大鼠/人肝细胞清除分析
采用大鼠/人肝细胞代谢稳定性分析方案体外测定本申请化合物的清除情况。
从商业供应商(例如BioreclamationIVT)获得雄性大鼠肝细胞和混合性别的人的肝细胞并在-150℃下储存待用。在DMSO中制备测试化合物的10mM储备溶液。将解冻培养基和补充培育培养基(无血清)放入37℃水浴中保持至少15分钟待用。通过组合198μL乙腈和2μL的10mM储备溶液将储备溶液稀释至100μM。
从储存中取出冷冻保存的肝细胞小瓶，确保小瓶保持低温温度。在轻柔振荡下，在37℃水浴中解冻这些小瓶。将小瓶保持在水浴中，直至所有冰晶都溶解并且不再可见。用70％乙醇喷洒小瓶，随后将其转移至生物安全柜中。接着，将内含物倒入50mL解冻培养基锥形管中。小瓶在室温下以100g离心10分钟。抽吸出解冻培养基并将肝细胞再悬浮于无血清培育培养基中，得到约1.5×106个细胞/毫升。
使用台盼蓝拒染法(Trypan Blue exclusion)对细胞活力和密度进行计数，且接着用无血清培育培养基稀释细胞以达到1×106个活细胞/毫升的工作细胞密度。将1×106个活细胞/毫升的一部分肝细胞煮沸10分钟，随后添加至板中作为阴性对照以除去酶活性，由此应当观察到极少或观察不到底物转换。使用失活的肝细胞制备阴性样品，以排除由化学物质本身的不稳定性引起的误导因素。
将数等分247.5μL肝细胞施配至96孔未涂覆板的各个孔中。在定轨振荡器上，将板放入恒温箱中，保持约10分钟。将数等分2.5μL的100μM测试化合物添加至未涂覆的96孔板的个别孔中以起始反应。此分析设置重复实验。在定轨振荡器上，在恒温箱中培育板，持续设计的时间点。在5、15、30、45、60、80和100分钟时间点时，转移20μL内含物并与6体积(120μL)含内标的冷乙腈混合以终止反应。样品以4000g离心20分钟并将数等分100μL的上清液用于LC-MS/MS分析中以测量测试化合物。
基于自初始浓度测定的化合物消失的消除半衰期(T1/2)来估计体外肝细胞清除率。计算各化合物(测试或对照)与IS的峰面积比率。标绘Ln(对照％)随培育时间(分钟)变化的曲线，并计算线性拟合线的斜率。药物消除速率常数k(min-1)、T1/2(分钟)和体外固有清除率CLint(μL/min/E6)是根据以下等式计算：
k＝-斜率
T1/2＝0.693/k
CLint＝k/Chep
其中Chep(个细胞×μL-1)是培育系统中的细胞浓度。
示例性数据显示于下表8中。
表8.人和大鼠肝细胞固有清除率
Figure BDA0002577093870002651
Figure BDA0002577093870002661
由于肝细胞同时含有I相和II相代谢酶，故在大鼠/人肝细胞中进行的清除率分析可以反映肝中的固有清除率。作为初步筛选分析，使用其选择化合物用于下一轮体内大鼠药物动力学研究，并且在大鼠中建立体外-体内外推的情况下，预测人肝清除率。
实施例104：体内药物动力学研究
对于大鼠药物动力学研究，从北京维通利华(Beijing Vital River)购得六只雄性Han Wistar大鼠并经口给与含10mg/kg测试化合物的0.5％Tween-80和0.5％羟丙基甲基纤维素(v/w)。在给与化合物后0.5、1、2、4、7和16小时，从门静脉并通过心脏穿刺将血液样品(每个时间点＞100μL)收集至独立的K2EDTA凝集管中，且接着立即在4℃下以1500g离心5分钟以分离血浆。用4倍乙腈(包括内标)使血浆样品脱蛋白，涡旋10分钟并在4℃下以4000g离心10分钟。将上清液送至LC/MS/MS(API 5500，福斯特市(Foster City)的AppliedBiosystems)分析。在来自血浆样品分析的每个批次开始和结束时操作两组标准曲线。
在经口施用之后，通过在大鼠中门静脉AUC(AUCHPV)和全身AUC(AUCSYS)观察到的最大浓度(Cmax)来测量化合物吸收情况。剂量是SOA研究中使用的实际剂量。参见下表9中示例性测试化合物的数据。
表9示例性测试化合物的大鼠药物动力学参数
Figure BDA0002577093870002671
本研究旨在根据Cmax和AUC评价通过口腔吸收、肠道代谢和肝提取所引起的测试化合物的全身暴露情况。其将被用于选择用于体内药物动力学研究的化合物。
尽管已经参照具体实施方式(其中一部分是优选实施方式)具体地显示和描述本申请，但本领域的技术人员应理解，在不脱离本申请的精神和范围的情况下，可以对其中的形式和细节作出各种变化。

Claims (23)

1.一种式(I)化合物，
Figure FDA0002577093860000011
或其药学上可接受的盐，
其中，
A1是N或CR8；
A2、A3、A4及A5各自独立地是N或CR9，其中A2、A3、A4及A5中至多一个是N；
R1和R2各自独立地是氢或C1-12烷基，其任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：卤素、羟基、-NRaRb、C1-12烷基、C1-12烷氧基、3-10元饱和或不饱和碳环基、3-10元饱和或不饱和杂环基，其中C1-12烷基、C1-12烷氧基、3-10元饱和或不饱和碳环基、3-10元饱和或不饱和杂环基各自能够未被取代或者被C1-12烷基单取代或多取代，
其中，Ra和Rb各自独立地选自氢或C1-12烷基，其能够任选地被以下基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基或C1-12烷氧基，
或Ra和Rb连同其所结合的氮原子一起形成3-10元饱和或不饱和杂环基，其任选地被卤素、羟基或C1-12烷基单取代或多取代；
或，R1和R2连同其所结合的氮原子一起形成任选地包含一个或多个选自N、O和S的额外杂原子的3-12元单环或多环，其能够任选地被以下基团单取代或独立地多取代：卤素、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、-NRaRb或-C1-12烷基-NRaRb；
R3是H、C1-12烷基或-C1-12烷基-NRaRb；
R4和R5各自独立地是C1-6烷基，其任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基，
或，R4和R5连同其所结合的碳原子一起形成任选地包含一个或多个选自N、O和S的杂原子的3-10元单环或多环，其能够任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基，
R6是氢，或C1-12烷基，其能够任选地被以下基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基，
R7是氢，或C1-12烷基，其能够任选地被以下基团单取代或多取代：氘、氚、卤素或羟基，
R8是氢、氘、氚、卤素、氰基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基，其能够任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素或C1-12烷基；
R9是不存在、氢、氘、氚、卤素、氰基、羟基、C1-12烷基、或C1-12烷氧基，其能够任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素或C1-12烷基；
n是0、1、2、3或4；
各R独立地是氢、氘、氚、卤素、氰基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、3-10元饱和或不饱和碳环基或与所连接的环稠合的3-10元饱和或不饱和杂环基，所述基团能够任选地被以下一个或多个基团单取代或独立地多取代：氘、氚、卤素或C1-12烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中A1是N。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中A1是CH。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中A2、A3、A4及A5各自独立地是CR9。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中R1和R2各自独立地选自：
Figure FDA0002577093860000031
6.根据权利要求1所述的化合物，其中R1和R2连同其所结合的氮原子一起形成选自以下的3-12元单环或多环：
Figure FDA0002577093860000032
其任选地被以下基团单取代或独立地多取代：卤素、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、-NRaRb或-C1-12烷基-NRaRb。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中R1和R2连同其所结合的氮原子一起形成：
Figure FDA0002577093860000041
8.根据权利要求1所述的化合物，其中n是2，A2和A5是CH，A3和A4各自独立地是被R取代的CH，R各自独立地是卤素，以及R4和R5各自独立地是未被取代的C1-6烷基。
9.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自下组：
Figure FDA0002577093860000042
Figure FDA0002577093860000051
Figure FDA0002577093860000061
Figure FDA0002577093860000071
Figure FDA0002577093860000081
Figure FDA0002577093860000091
10.根据权利要求1至9中任一项所述的式(I)化合物，或其药学上可接受的盐，其呈结晶形式。
11.一种药物组合物，包含作为第一活性成分的一种或多种根据权利要求1至9中任一项所述的式(I)化合物、其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载剂。
12.根据权利要求1至9中任一项所述的式(I)化合物，或其药学上可接受的盐，或根据权利要求11所述的药物组合物，其用作供抑制EGFR用的药物。
13.一种抑制ErbB或BTK的方法，所述方法是通过使用一种或多种权利要求1至9中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐，或权利要求11所述的药物组合物实现。
14.一种或多种权利要求1至8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗受试者的ErbB相关疾病或BTK相关疾病的药物中的用途，其中所述治疗包括向所述受试者施用有效量的所述药物。
15.根据权利要求14所述的用途，其中所述受试者是温血动物，如人。
16.根据权利要求14所述的用途，其中所述ErbB相关疾病是癌症。
17.根据权利要求14所述的用途，其中所述BTK相关疾病是肿瘤疾病或自身免疫性疾病。
18.根据权利要求17所述的用途，其中所述肿瘤疾病是淋巴瘤或白血病。
19.根据权利要求17所述的用途，其中所述自身免疫性疾病是类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮或休格连氏综合症。
20.根据权利要求13至16中任一项所述的用途，其中所述ErbB是EGFR或Her2，优选地是突变型EGFR或突变型Her2。
21.根据权利要求20所述的用途，其中所述突变型EGFR选自下组：EGFR D761_E762insEAFQ、EGFR A763_Y764insHH、EGFR M766_A767instAI、EGFR A767_V769dupASV、EGFR A767_S768insTLA、EGFR S768_D770 dupSVD、EGFR S768_V769insVAS、EGFR S768_V769insAWT、EGFR V769_D770insASV、EGFR V769_D770insGV、EGFR V769_D770insCV、EGFRV769_D770insDNV、EGFR V769_D770insGSV、EGFR V769_D770insGVV、EGFR V769_D770insMASVD、EGFR D770_N771insSVD、EGFR D770_N771insNPG、EGFR D770_N771insAPW、EGFR D770_N771insD、EGFR D770_N771insDG、EGFR D770_N771insG、EGFR D770_N771insGL、EGFR D770_N771insN、EGFR D770_N771insNPH、EGFR D770_N771insSVP、EGFRD770_N771insSVQ、EGFR D770_N771insMATP、EGFR delD770insGY、EGFR N771_P772insH、EGFR N771_P772insN、EGFR N771_H773dupNPH、EGFR delN771insGY、EGFR delN771insGF、EGFR P772_H773insPR、EGFR P772_H773insYNP、EGFR P772_H773insX、EGFR P772_H773insDPH、EGFR P772_H773insDNP、EGFR P772_H773insQV、EGFR P772_H773insTPH、EGFRP772_H773insN、EGFR P772_H773insV、EGFR H773_V774insNPH、EGFR H773_V774insH、EGFRH773_V774insPH、EGFR H773_V774insGNPH、EGFR H773_V774dupHV、EGFR H773_V774insG、EGFR H773_V774insGH、EGFR V774_C775insHV、EGFR外显子19缺失、EGFR L858R、EGFRT790M、EGFR L858R/T790M、EGFR外显子19缺失/T790M、EGFR S768I、EGFR G719S、EGFRG719A、EGFR G719C、EGFR E709A/G719S、EGFR E709A/G719A、EGFR E709A/G719C以及EGFRL861Q。
22.根据权利要求20所述的用途，其中所述突变型Her2选自下组：Her2 A775_G776insYVMA、Her2 delG776insVC、Her2 V777_G778insCG以及Her2 P780_Y781insGSP。
23.根据权利要求1至9中任一项所述的式(I)化合物，或其药学上可接受的盐，其与第二治疗剂，优选地抗肿瘤剂组合。
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