CN111896522A - 一种表面增强拉曼光谱检测基底及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种表面增强拉曼光谱检测基底及其应用,本发明通过对基底上的金属纳米粒子或金属微纳结构表面包裹第一介质层和第二介质层,既能有效隔绝金属纳米粒子或金属微纳结构与外界化学环境的直接接触,还能显著增强泪液的拉曼信号强度,有助于利用表面增强拉曼效应实现对人体眼部感染源的有效检测。
Description
技术领域
本发明具体涉及一种表面增强拉曼光谱检测基底及其应用。
背景技术
眼睛感染指细菌、病毒、真菌、寄生虫等病原体侵入人体眼部所引起的局部组织炎症反应。最常受到感染的部位包括眼皮睑、结膜、角膜和巩膜。眼部感染原因很多,包括眼外伤、不注意眼部卫生、用手揉眼睛、人群之间的接触传染等引起的细菌或病毒感染等。不同病原体引起的眼部感染潜伏期长短不一,病程发展也是急慢不一。目前临床上针对眼部感染的诊断主要依靠病史及、眼部体征以及医生的临床经验,很容易混淆发病原因。特别是在疾病早期,临床特征不明显,导致误诊或漏诊,造成错误用药,往往会耽误病人病情的发展。
眼部感染临床诊断普遍及主要使用的诊断仪器为裂隙灯。裂隙灯发明于1911年,使用至今,但使用裂隙灯诊断只能依靠医生的经验主观判断感染是由细菌、病毒还是真菌引起的,治疗效果与诊断分类结果息息相关。眼感染性疾病病因的确诊常常须进行细菌或真菌培养、病毒PCR扩增、共聚焦显微镜检查等手段:对疑似细菌感染的确诊要对泪液进行培养作为评判依据;对疑似真菌的感染要采用真菌培养和共聚焦显微镜检查的方法作为评判依据;对疑似病毒感染要采用病毒核酸杂交和聚合酶链反应作为评判依据。这些相关检查不仅费时长、价格昂贵,而且由于泪液取样量少,上述确诊检查方法的成功率并不高。因此往往临床医生在使用裂隙灯诊断后,就通过主观判断下药治疗。只有在治疗效果不明显时,再做进一步的确诊检测,耽误了病情的有效治疗也增加了患者的负担。
眼部感染缺乏客观、快速、有效的检测手段,现有确诊检测手段耗时长、费用高,眼部感染检测急需引入新的方法。
拉曼光谱,是一种散射光谱。拉曼光谱分析法是基于拉曼散射效应,对与入射光频率不同的散射光谱进行分析以得到分子振动、转动方面信息,并应用于分子结构研究的一种分析方法。拉曼光谱对于分子键合以及样品的结构非常敏感,因而每种分子或样品都会有其特有的光谱“指纹”。这些“指纹”可以用来进行化学鉴别、形态与相、内压力/应力以及组成成份等方面的研究和分析。拉曼光谱技术作为一种新型的定性、定量光学技术,有着非侵入性、检测所需样本体积小等优势。
拉曼光谱虽然有被报道应用于特定病菌检测,如HIV、轮状病毒等,但将拉曼光谱用于眼科感染源分类检测还未见报道。
为提高检测的灵敏度,可以使用表面增强拉曼来提高拉曼信号强度,表面增强拉曼的光谱增强效应主要来源于局域表面等离子体激元共振效应,即局域电磁场增强。当激发光的波长满足金属中导带电子的共振频率要求时,一定结构的纳米级金属表面会激发表面等离子体激元共振,金属表面的谐振相互作用产生较强的局域光电场,以此增强处于局域光电场中的分子的拉曼信号。表面增强拉曼可以通过在检测基底上涂覆纳米颗粒或加工微纳结构实现。
专利CN101629909A中提及使用“将样品材料引入含有纳米颗粒的样品溶液中”检测化学物或生化物物质。由于眼部分泌物或泪液所处人体部位的特殊性,样本提取量很少,在微升量级,所以眼部分泌物或泪液中所含感染源物质或其分泌物及代谢产物的含量更低。使用专利CN101629909A中提及的液态纳米颗粒溶液检测未经富集的痕量物质,由于纳米颗粒与待测物结合的可能性、均匀性等问题,当激光束照射样品溶液中的纳米颗粒时,从纳米颗粒的散射光获得的拉曼光谱无法保证含有痕量物质的拉曼信号,使这种方法不具备可行性。
同时,裸露的纳米级金属表面可与眼部分泌物或泪液产生化学反应,或是对眼部分泌物或泪液中的各成分的吸附力具有选择性,因此直接将眼部分泌物或泪液与微纳结构的金属表面接触,由于纳米颗粒与待测物结合的可能性、均匀性等问题,在实际操作中会影响检测结果的稳定性及可重复性。
发明内容
本发明的目的在于为解决上述技术问题提供了一种表面增强拉曼光谱检测基底及其应用,本发明还提供了一种用于诊断眼部感染源的拉曼光谱检测系统。
为实现上述目的,所采取的技术方案:一种表面增强拉曼光谱检测基底,包括基底以及涂覆在所述基底上的复合纳米粒子,所述复合纳米粒子由内到外依次包括金属纳米粒子、第一介质层和第二介质层;所述第一介质层为金属氧化物、硅基化合物中的至少一种;所述第二介质层为具有氨基、羟基基团中的至少一种的高分子材料。
优选地,在所述金属纳米粒子表面形成第一介质层和第二介质层的方式分别为自组装、金属氧化、蒸镀或原子层沉积。
本发明提供了一种表面增强拉曼光谱检测基底,包括基底以及在所述基底上形成的微纳结构,在所述微纳结构表面依次覆盖有金属层、第一介质层和第二介质层;所述第一介质层为金属氧化物、硅基化合物中的至少一种;所述第二介质层为具有氨基、羟基基团中的至少一种的高分子材料。
优选地,在所述基底上形成微纳结构的方式为过半导体加工、纳米压印或倒模方式。优选地,在微纳结构表面覆盖金属层的方式为蒸镀、溅射、电镀方式。优选地,在金属层表面覆盖第一介质层和第二介质层的方式分别为化学气相沉积、物理气相沉积、溅射、蒸镀、原子层沉积。
金属氧化物及硅基化合物如Al2O3、Fe2O3、SiO2、SiONx等介质膜致密,较薄层即可起到隔绝外界化学环境与金属纳米粒子或金属微纳结构的接触。挑选具有C3-OH、C2-NH2、C6-OH等官能团的高分子材料作为介质膜,需要较厚层才能隔绝外界化学环境与金属纳米粒子或金属微纳结构的接触,但这些官能团具备细胞亲和性和生物效应,对眼部分泌物中感染源物质有很好的吸附作用,利于生物物质的检测。综合金属氧化物、硅基化合物的薄层隔绝特点以及高分子材料的细胞亲和性,在保障隔绝外界化学环境的前提下,可以有效提高生物物质检测灵敏度。
优选地,所述基底为硅片、塑料片或玻璃片。
优选地,所述金属纳米粒子为球形、椭球形、长方体、立方体、棱锥体中的至少一种;所述金属纳米粒子的结构为实心、空心壳层、多层壳层结构中的至少一种;所述金属纳米粒子为单个粒子、双粒子、团聚的多个粒子中的至少一种;所述金属纳米粒子为金、银、铝、铜中的至少一种。
优选地,所述金属纳米粒子的直径为1纳米~10微米。
优选地,所述微纳结构为柱状、金字塔形、倒金字塔形、蘑菇状中的至少一种。优选地,所述微纳结构的尺寸为1纳米~10微米。
优选地,所述金属层为金、银、铝、铜中的至少一种;所述金属层的厚度为1纳米~10微米。
优选地,所述第一介质层为Al2O3、Fe2O3、SiO2或SiONx。
优选地,所述第一介质层的厚度为0.2纳米~0.2微米。更优选地,所述第一介质层的厚度为3纳米。
优选地,所述第二介质层为纤维素、海藻酸和聚乳酸中的至少一种。
优选地,所述第二介质层的厚度为0.5纳米到1微米。更优选地,所述第二介质层的厚度为12-18纳米。
用于隔绝外界化学环境的介质层越薄,纳米颗粒的拉曼增强效应越强,但考虑到生物检测所需的细胞亲和性等,先采用金属氧化物或硅基化合物实现隔绝,再在外层包裹具备细胞亲和性的高分子材料,既保障了隔绝又实现有效增强,对生物物质的检测具有最佳的效果。
本发明提供了上述所述的表面增强拉曼光谱检测基底在制备用于检测眼部感染源的拉曼光谱检测系统中的应用。
本发明还提供了一种用于检测眼部感染源的拉曼光谱检测系统,包括:
数据采集模块,用于采集检测基底上患者眼部感染源的拉曼光谱图,并将采集到的拉曼光谱图输入数据比对模块,所述检测基底为上述所述的表面增强拉曼光谱检测基底;
数据比对模块,储存有已知病原体拉曼光谱图,用于将患者眼部感染源的拉曼光谱图与储存的已知病原体拉曼光谱图进行比对,确定患者眼部感染源的种类。
优选地,采集检测基底上患者眼部感染源所使用的拉曼光谱仪的光源波长为266nm、532nm、785nm、808nm、830nm或1064nm。
所述已知病原体包括细菌、病毒、真菌和寄生虫。
有益效果:
本发明提供了一种表面增强拉曼光谱检测基底及其应用,本发明通过在基底上的金属纳米粒子或金属微纳结构表面包裹第一介质层和第二介质层,不仅有效隔绝金属纳米粒子或金属微纳结构和外界化学环境的直接接触,而且实现了表面增强拉曼光谱对人体眼部感染源的有效检测。
附图说明
图1为本发明一实施例的表层覆盖复合纳米粒子的基底SEM图片。
图2为实施例1和实施例2的检测基底上泪液的增强拉曼谱图对比结果。
图3为实施例2、实施例3、实施例4的检测基底上泪液的增强拉曼谱图对比结果。
图4为实施例2、实施例5、实施例6的检测基底上泪液的增强拉曼谱图对比结果。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点,下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本实施例提供了一种表面增强拉曼光谱检测基底,所述表面增强拉曼光谱检测基底包括基底以及涂覆在所述基底上的复合纳米粒子,所述复合纳米粒子由内到外依次包括金属纳米粒子、第一介质层。所述基底为硅片。所述金属纳米粒子为球形,所述金属纳米粒子的结构为实心;所述金属纳米粒子为单个粒子,所述金属纳米粒子为银,所述金属纳米粒子的直径为40纳米。所述第一介质层为SiO2,所述第一介质层的厚度为3纳米。
所述表面增强拉曼光谱检测基底的制备方法包括以下步骤:
(1)在银纳米粒子表面通过自组装形成SiO2层,得到复合纳米粒子;
(2)在硅片表面涂覆复合纳米粒子,得到所述表面增强拉曼光谱检测基底。
实施例2
本实施例提供了一种表面增强拉曼光谱检测基底,如图1所示,包括基底以及涂覆在所述基底上的复合纳米粒子,所述复合纳米粒子由内到外依次包括金属纳米粒子、第一介质层和第二介质层。所述基底为硅片。所述金属纳米粒子为球形,所述金属纳米粒子的结构为实心,所述金属纳米粒子为单个粒子,所述金属纳米粒子为银,所述金属纳米粒子的直径为40纳米。所述第一介质层为SiO2,所述第一介质层的厚度为3纳米。所述第二介质层为纤维素,所述第二介质层的厚度为12-18nm。
所述表面增强拉曼光谱检测基底的制备方法包括以下步骤:
(1)在银纳米粒子表面通过自组装形成SiO2层,然后在SiO2层表面涂覆形成高分子材料层,得到复合纳米粒子;
(2)在硅片表面涂覆复合纳米粒子,得到所述表面增强拉曼光谱检测基底。
实施例3
本实施例提供了一种表面增强拉曼光谱检测基底,所述表面增强拉曼光谱检测基底同实施例2,不同的是,所述第一介质层的厚度为5纳米。
实施例4
本实施例提供了一种表面增强拉曼光谱检测基底,所述表面增强拉曼光谱检测基底同实施例2,不同的是,所述第一介质层的厚度为31纳米。
实施例5
本实施例提供了一种表面增强拉曼光谱检测基底,所述表面增强拉曼光谱检测基底同实施例2,不同的是,所述第二介质层的厚度为1-5纳米。
实施例6
本实施例提供了一种表面增强拉曼光谱检测基底,所述表面增强拉曼光谱检测基底同实施例2,不同的是,所述第二介质层的厚度为50-60纳米。
使用激光光源为532nm的拉曼光谱仪,激光功率为50mW,将实施例1和实施例2制得的表面增强拉曼光谱基底作为检测基底,分别滴2uL相同来源的细菌性结膜炎患者泪液,积分时间15秒,测量拉曼光谱,结果如图2所示。结果表明,使用实施例2作为检测基底的泪液拉曼信号较强,而采用实施例1检测基底的泪液拉曼信号较弱。即对于泪液检测,在纳米粒子表面仅包裹第一介质层的拉曼信号较弱,通过在金属氧化层表面再包裹一层高分子材料可以进一步提高待测物的拉曼信号强度。
使用激光光源为532nm的拉曼光谱仪,激光功率为50mW,将实施例2、实施例3和实施例4制得的表面增强拉曼光谱基底作为检测基底,分别滴2uL相同来源的细菌性结膜炎患者泪液,积分时间15秒,测量拉曼光谱,结果如图3所示。结果表明,第一介质层的厚度会影响检测基底上的泪液的拉曼信号强弱;其中,在本次实验条件下,第一介质层的厚度为3nm时拉曼信号最佳。
使用激光光源为532nm的拉曼光谱仪,激光功率为50mW,将实施例2、实施例5和实施例6制得的表面增强拉曼光谱基底作为检测基底,分别滴2uL相同来源的细菌性结膜炎患者泪液,积分时间15秒,测量拉曼光谱,结果如图4所示。结果表明,第二介质层的厚度也会影响检测基底上的泪液的拉曼信号强弱;其中,在本次实验条件下,第二介质层的厚度为12-18nm时拉曼信号最佳。
最后所应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种表面增强拉曼光谱检测基底,其特征在于,包括基底以及涂覆在所述基底上的复合纳米粒子,所述复合纳米粒子由内到外依次包括金属纳米粒子、第一介质层和第二介质层;所述第一介质层为金属氧化物、硅基化合物中的至少一种;所述第二介质层为具有氨基、羟基基团中的至少一种的高分子材料。
2.一种表面增强拉曼光谱检测基底,其特征在于,包括基底以及在所述基底上形成的微纳结构,在所述微纳结构表面依次覆盖有金属层、第一介质层和第二介质层;所述第一介质层为金属氧化物、硅基化合物中的至少一种;所述第二介质层为具有氨基、羟基基团中的至少一种的高分子材料。
3.根据权利要求1或2所述的表面增强拉曼光谱检测基底,其特征在于,所述基底为硅片、塑料片或玻璃片。
4.根据权利要求1所述的表面增强拉曼光谱检测基底,其特征在于,所述金属纳米粒子为球形、椭球形、长方体、立方体、棱锥体中的至少一种;所述金属纳米粒子的结构为实心、空心壳层、多层壳层结构中的至少一种;所述金属纳米粒子为单个粒子、双粒子、团聚的多个粒子中的至少一种;所述金属纳米粒子为金、银、铝、铜中的至少一种;所述金属纳米粒子的直径为1纳米~10微米。
5.根据权利要求2所述的表面增强拉曼光谱检测基底,其特征在于,所述微纳结构为柱状、金字塔形、倒金字塔形、蘑菇状中的至少一种;所述微纳结构的尺寸为1纳米~10微米;所述金属层为金、银、铝、铜中的至少一种;所述金属层的厚度为1纳米~10微米。
6.根据权利要求1或2所述的表面增强拉曼光谱检测基底,其特征在于,所述第一介质层为Al2O3、Fe2O3、SiO2或SiONx;所述第一介质层的厚度为0.2纳米~0.2微米。
7.根据权利要求1或2所述的表面增强拉曼光谱检测基底,其特征在于,所述第二介质层为纤维素、海藻酸和聚乳酸中的至少一种;所述第二介质层的厚度为0.5纳米到1微米。
8.一种如权利要求1或2所述的表面增强拉曼光谱检测基底在制备用于检测眼部感染源的拉曼光谱检测系统中的应用。
9.一种用于检测眼部感染源的拉曼光谱检测系统,其特征在于,包括:
数据采集模块,用于采集检测基底上患者眼部感染源的拉曼光谱图,并将采集到的拉曼光谱图输入数据比对模块,所述检测基底为如权利要求1或2所述的表面增强拉曼光谱检测基底;
数据比对模块,储存有已知病原体拉曼光谱图,用于将患者眼部感染源的拉曼光谱图与储存的已知病原体拉曼光谱进行比对,确定患者眼部感染源的种类。
10.如权利要求9所述的拉曼光谱检测系统,其特征在于,采集检测基底上患者眼部感染源所使用的拉曼光谱仪的光源波长为266nm、532nm、785nm、808nm、830nm或1064nm。
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PB01 | Publication | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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