CN111869655A - 一种尿液保存液及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供的一种尿液保存液，包括：pH缓冲剂6‑10mmol/L、DNA酶抑制剂0.2‑0.4mol/L、防腐剂0.1‑0.3mol/L、细胞固定剂质量分数5％‑15％和甲醛淬灭剂0.3‑1.0mol/L；上述尿液保存液中，避免了各组分之间相互干扰影响各组分的功能，在4℃‑40℃之间仍旧具有各自相应的保护作用，且对尿液中核酸没有直接影响，因此，保存液可在4℃‑40℃下仍然能维持尿液不变质，保证cfDNA的相对含量。

Description

一种尿液保存液及其用途
技术领域
本发明涉及生物样品保存领域，具体涉及一种尿液保存液及其用途。
背景技术
尿液是人体排出的一种成分复杂的代谢废弃物，主要通过人体泌尿系统(肾单位→肾盂→输尿管→膀胱→尿道)产生。尿液中96％以上为水分，同时也包括很多病理性代谢产物如游离核酸、蛋白类和糖类物质等。游离DNA(Cell-Free Circulating DNA，cfDNA)是指来自细胞凋亡或坏死，游离于细胞外的DNA片段，广泛存在于人类的血清、血浆、脑脊液、尿液或唾液当中。目前，cfDNA已作为新的生物标志物用于临床孕妇产前诊断、肿瘤检测、器官移植术后排斥和感染检测等领域。其中，尿液中cfDNA主要来自于泌尿系统中器官上皮细胞脱落及少量的白细胞降解和感染的病原菌片段，当人体的泌尿系统发生病变，尿液中的cfDNA含量也随之发生改变。最近研究发现，尿液cfDNA包含有微生物组中细菌和病毒、药物敏感性、细菌生长动态、肾移植损伤和对感染的宿主响应的丰富的信息，并被认为是监测尿道感染的通用分析物。
然而，相对于外周血，尿液中成分更加复杂，特别是核酸酶的含量更高，这就造成尿液中的cfDNA更加容易被降解，浓度降低，无法真实反映机体的病理变化。此外，尿液中脱落的完整的上皮细胞或白细胞在复杂环境中不稳定，破裂释放基因组DNA进入尿液中，这也改变尿液中真实cfDNA的浓度，影响目标位点的比例，特别是对于低频变异位点，增加了背景噪音，并易造成假阴性。而对于已报道的现有技术中，其成分复杂、成本较高，且保存效果随时间延长下降严重，需要进一步改进。因此，为了保证尿液cfDNA检测结果的准确性，一种专门适用于尿液cfDNA保存液及保存管是需要的。如中国专利文献公开的CN107603970A公开的一种防止尿液中游离DNA降解的尿液保存剂及尿液保存管，能够在4℃条件下保存尿液最长达7天，期间游离DNA不会发生明显降解，且尿液中脱落细胞的gDNA不会显著释放尿液中，影响尿液中游离DNA的含量。然而上述文献中公开的尿液保存剂只能在低温条件下如4℃或更低的温度下使用，使得运输成本高。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的尿液保存剂只能在低温条件下使用，使得运输成本高缺陷，从而提供一种使用温度范围扩大的尿液保存液及其用途。
为此，本发明提供了如下的技术方案：
第一方面，本发明提供了一种尿液保存液，包括：pH缓冲剂6-10mmol/L、DNA酶抑制剂0.2-0.4mol/L、防腐剂0.1-0.3mol/L、细胞固定剂质量分数5％-15％和甲醛淬灭剂0.3-1.0mol/L。
优选的，所述尿液保存液包括：pH缓冲剂6-8mmol/L，DNA酶抑制剂0.2-0.3mol/L，防腐剂0.1-0.2mol/L，细胞固定剂质量分数5％-10％，和甲醛淬灭剂0.3-0.6mol/L。
更优选的，所述的尿液保存液包括：pH缓冲剂7.5-8mmol/L，DNA酶抑制剂0.2mol/L，防腐剂0.1mol/L、细胞固定剂质量分数5％，和甲醛淬灭剂0.3mol/L。
进一步的，所述pH缓冲剂包括Tris-HCl、磷酸盐(PO4 3-)、醋酸盐(CH3COO-)、碳酸氢盐(HCO3 -)和硼酸盐(BO3 -)中的至少一种；优选的，pH缓冲剂为Tris-HCl，pH为7.0-8.0。
进一步的，所述DNA酶抑制剂包括EDTA、EDTA钠盐(包括EDTA-Na2和/或EDTA-Na3)、EDTA钾盐(包括EDTA-K2和/或EDTA-K3)和硫酸铵(NH4)2SO4中的至少一种；优选的，DNA酶抑制剂为EDTA。
进一步的，所述细胞固定剂包括咪唑烷基脲、重氮烷基脲、二唑烷基脲、多聚甲醛、福尔马林中的至少一种；优选的，为多聚甲醛。
进一步的，所述防腐剂包括枸橼酸、枸橼酸钠盐、乳酸、乳酸钠盐、山梨酸、山梨酸钠盐中的至少一种；优选的，为枸橼酸和/或枸橼酸钠盐。
进一步的，甲醛淬灭剂包括精氨酸、甘氨酸、L-赖氨酸和尿素中的至少一种；优选地，所述防腐剂为甘氨酸。
第二方面，本发明提供了所述的尿液保存液在尿液或体液的保存中的用途。
第三方面，本发明提供了一种尿液保存方法，包括：将所述的尿液保存液与尿液混合均匀，保存；优选的，所述尿液保存液与尿液的体积比为2％-4％。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的一种尿液保存液，包括：pH缓冲剂6-10mmol/L、DNA酶抑制剂0.2-0.4mol/L、防腐剂0.1-0.3mol/L、细胞固定剂质量分数5％-15％和甲醛淬灭剂0.3-1.0mol/L；上述尿液保存液中，避免了各组分之间相互干扰影响各组分的功能，在4℃-40℃之间仍旧具有各自相应的保护作用，且对尿液中核酸没有直接影响，因此，保存液可在4℃-40℃下仍然能维持尿液不变质，保证cfDNA的相对含量。
此外，在上述尿液保存液中，pH缓冲剂作用在于维持溶液的pH值及盐离子浓度，避免尿液中细胞破裂或cfDNA降解；DNA酶抑制剂主要是金属离子螯合剂，作用在于与尿液中Mg2+、Ca2+、Fe3+等金属离子结合，抑制尿液中核酸酶的活性，维持尿液中细胞稳定，同时也避免尿液中的DNA酶对cfDNA的降解；防腐剂主要作用在于抑制尿液中原本存在的微生物活动，防止微生物进一步繁殖，导致尿液变质；细胞固定剂主要作用于维持尿液中细胞的形态，避免细胞破裂造成基因组DNA释放到尿液中，影响cfDNA的真实浓度；甲醛淬灭剂主要消除防腐剂中释放的自由醛，避免对后续PCR过程的影响。
2.本发明提供的一种尿液保存方法，包括：将所述的尿液保存液与尿液混合均匀，然后保存，可以于4℃-40℃条件下保存；上述方法简单易操作，在保存前无需进行离心去除尿液中的细胞。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实验例中保存时间为5天时不同温度下尿液中cfDNA含量图；
图2是本发明实验例中保存温度为25℃时不同保存时间下尿液中cfDNA含量柱形图。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实施例1
本实施例提供了一种尿液保存液，为由如下浓度组分组成的水溶液：Tris-Hcl7mmol/L、EDTA 0.2mol/L、枸橼酸0.1mol/L、多聚甲醛质量分数5％、咪唑烷基脲质量分数5％、重氮烷基脲质量分数5％和甘氨酸0.3mol/L；所述尿液保存液pH为7.0-8.0。
上述尿液保存液按照常规方法配制，配制方法可以如下：将1M的Tris-Hcl(pH＝7-8)溶液加入水中，制备一定浓度的缓冲试剂A；称取相应量的DNA酶抑制剂EDTA固体溶于上述A溶液中；再称取相应质量的多聚甲醛、咪唑烷基脲、重氮烷基脲依次加入A溶液中，可在65℃条件下加热促进溶解；称取相应量的枸橼酸溶于A溶液中；称取相应量的甘氨酸溶于A溶液中；最后将溶液pH调整到7.0-8.0之间，用水定容，调整得到相应浓度的尿液保存液，过滤，4℃保存。
在尿液保存时，将上述尿液保存液与尿液混合均匀，所述尿液保存液与尿液的体积比为2％-4％，在本实施例中可以选择2％。
实施例2
本实施例提供了一种尿液保存液，为由如下浓度组分组成的水溶液：pH缓冲剂6mmol/L、DNA酶抑制剂0.4mol/L、防腐剂0.3mol/L、细胞固定剂质量分数5％和甲醛淬灭剂1.0mol/L；所述尿液保存液pH为7.0-8.0。
所述pH缓冲剂为磷酸盐；DNA酶抑制剂为EDTA钠盐和EDTA钾盐；防腐剂为枸橼酸钠盐；细胞固定剂为福尔马林；甲醛淬灭剂为精氨酸。
上述尿液保存液按照常规方法或实施例1中的配制方法配制。
在尿液保存时，将上述尿液保存液与尿液混合均匀，所述尿液保存液与尿液的体积比为2％-4％，在本实施例中可以选择4％。
实施例3
本实施例提供了一种尿液保存液，为由如下浓度组分组成的水溶液：pH缓冲剂8mmol/L，DNA酶抑制剂0.3mol/L，防腐剂0.2mol/L，细胞固定剂质量分数10％，和甲醛淬灭剂0.6mol/L；所述尿液保存液pH为7.0-8.0。
所述pH缓冲剂为碳酸氢盐；DNA酶抑制剂为硫酸铵；防腐剂为乳酸和乳酸钠盐；细胞固定剂为二唑烷基脲和多聚甲醛；甲醛淬灭剂为尿素和L-赖氨酸。
上述尿液保存液按照常规方法或实施例1中的配制方法配制。
实施例4
本实施例提供了一种尿液保存液，为由如下浓度组分组成的水溶液：pH缓冲剂7.5mmol/L，DNA酶抑制剂0.2mol/L，防腐剂0.1mol/L、细胞固定剂质量分数5％，和甲醛淬灭剂0.3mol/L；所述尿液保存液pH为7.0-8.0。
所述pH缓冲剂为Tris-HCl，pH为7.0-8.0；DNA酶抑制剂为EDTA；防腐剂为枸橼酸；细胞固定剂为多聚甲醛；甲醛淬灭剂为甘氨酸。
上述尿液保存液按照常规方法或实施例1中的配制方法配制。
对比例1
本实施例提供了一种尿液保存液，为由如下浓度组分组成的水溶液：pH缓冲剂7.5mmol/L，DNA酶抑制剂0.5mol/L，防腐剂0.4mol/L、细胞固定剂质量分数18％，和甲醛淬灭剂0.8mol/L；所述尿液保存液pH为7.0-8.0。
所述pH缓冲剂为Tris-HCl，pH为7.0-8.0；DNA酶抑制剂为EDTA；防腐剂为枸橼酸；细胞固定剂为多聚甲醛；甲醛淬灭剂为甘氨酸。
上述尿液保存液按照常规方法或实施例1中的配制方法配制。
对比例2
本实施例提供了一种尿液保存液，为由如下浓度组分组成的水溶液：pH缓冲剂2mmol/L，DNA酶抑制剂10mmol/L，防腐剂5mmol/L、细胞固定剂质量分数0.1％，和甲醛淬灭剂40mmol/L；所述尿液保存液pH为7.0-8.0。
所述pH缓冲剂为Tris-HCl，pH为7.0-8.0；DNA酶抑制剂为EDTA；防腐剂为1.25mmol/L柠檬酸，3.75mmol/L柠檬酸钠；细胞固定剂为等量的多聚甲醛、重氮烷基脲和咪唑烷基脲组成；甲醛淬灭剂为等量的甘氨酸、赖氨酸和乙二胺组成。
上述尿液保存液按照常规方法配制。
实验例
1、样本采集
在医院收集5例肾移植患者的尿液样本，尿液为晨尿中段尿。
2、实验方法
每个患者的尿液样本分别做以下处理：(1)加保存液轻轻摇晃混匀2h后抽提，尿液保存液和尿液的体积比例是3％；(2)加保存液轻轻摇晃混匀3天后抽提，尿液保存液和尿液的体积比例是3％；(3)加保存液轻轻摇晃混匀5天后抽提，尿液保存液和尿液的体积比例是3％；(4)加保存液轻轻摇晃混匀7天后抽提，尿液保存液和尿液的体积比例是3％。将上述处理的尿液样本在不同温度条件储藏，温度条件包括4℃、25℃和40℃。
患者的尿液样本使用的尿液保存液分别选择为实施例1、实施例3、实施例4、对比例1和对比例2的尿液保存液。
3、检测方法
3.1cfDNA浓度检测：将处理的尿液样本，于3000g，4℃离心10min，分离上清液至新的离心管，将上清液继续16000g，4℃离心10min，离心后的上清液转移至新的离心管，得到前处理后的尿液，可在-20℃下保存。使用cfDNA抽提试剂盒(Qiagen游离DNA提取试剂盒，55114)抽提尿液中cfDNA，并用Qubit 3.0进行cfDNA浓度定量。
3.2cfDNA片段大小定量：基于leptin基因分别设计扩增片段长度为80bp、145bp、280bp、576bp的引物及探针，基于Primer Express软件设计相对应引物及探针(如下表1)，采用荧光定量PCR的方法对尿液cfDNA片段大小进行定量。采用TaqMan PCR Core ReagentKit(Applied Biosystems)试剂盒，反应体系为50uL，包括5uL 10×buffer A、4mM MgCl2、dATP、dCTP和dGTP各200uM、400uM dUTP、正向引物和反向引物各1uM、500nM TaqMan probe、2U AmpliTaq Gold polymerase、0.5U AmpErase uracil N-glycosylase、50nL dimethylsulfoxide(二甲基亚砜)和5uL cfDNA模板。反应条件为50℃2min；95℃10min,50cycles(95℃30s,58℃1min),72℃1min。基于80bp扩增ct值为基准，计算不同片段比例，观察25℃下，不同保存时间条件下不同长度的cfDNA片段比例变化。80bp扩增ct值为ct0，其他长度片段的扩增ct值为ct1，计算公式：其他长度片段比例变化％＝ct1值/ct0值。
表1引物和探针
Primer Name Sequence
F 5<sup>′</sup>-CAGTCTCCTCCAAACAGAAAGTCA-3<sup>′</sup>
80R 5<sup>′</sup>-GTCCATCTTGGATAAGGTCAGGA-3<sup>′</sup>
145R 5<sup>′</sup>-GATATTTGGATCACGTTTCTGG-3<sup>′</sup>
280R 5<sup>′</sup>-CTCTGTGGAGTAGCCTGAAGCTT-3<sup>′</sup>
576R 5<sup>′</sup>-CCTTCCTGGTGAGAATAGGATCC-3<sup>′</sup>
Probe 5′-(FAM)<sup>2</sup>GACTTCCATTCCTGG(MGBNFQ)-3′
3.3供体来源cfDNA比例变化：
供体来源细胞游离DNA(donor-derived cell-free DNA，ddcfDNA)是一种来源于移植器官细胞的游离胞外DNA。器官移植术后，ddcfDNA可在尿液中检测到。本实验对5位肾移植患者不同保存时间下的尿液cfDNA进行抽提，并用30ng cfDNA进行文库构建(KAPA LTPlibrary preparation kit)，基于设计的RNA探针(6200SNPs)(可以为CN107254514B中公开的SNP分子标记基于Primer Express软件设计的探针)进行液相杂交捕获，采用二代测序技术(illumina，每个样本10M数据)进行测序。下机数据通过生物信息学分析，得到ddcfDNA浓度。观察不同处理条件下ddcfDNA浓度变化。
4、检测结果
4.1不同处理条件下cfDNA浓度变化
表2为使用实施例1的Qubit 3.0定量结果，在4℃温度下，在0、3、5、7天之间的尿液中cfDNA含量无显著性差异，p值均大于0.05，而当在25℃、40℃时，随着保存时间的增加，出现了少量的核酸降解的现象，但是到第5天、7天降解核酸的现象减缓趋于稳定；在保存时间0天(2h)的条件下，在4℃、25℃和40℃之间的cfDNA含量无显著性差异，p值均大于0.05；在保存时间3天条件下，在4℃、25℃之间的cfDNA含量无显著性差异，而在40℃时出现了少量的核酸降解的现象；在保存时间5天、7天条件下，随着保存温度的增加，出现了少量的核酸降解的现象，但在25℃、40℃之间的降解核酸的现象减缓趋于稳定。
表2使用实施例1尿液保存液不同保存时间和保存温度下尿液样本中cfDNA含量(ng/uL)
保存时间 4℃(Mean±SD) 25℃(Mean±SD) 40℃(Mean±SD)
0天(2h) 0.91±0.14 1.01±0.21 0.97±0.24
3天 0.98±0.43 0.90±0.14 0.79±0.31
5天 1.04±0.21 0.79±0.20 0.69±0.29
7天 0.99±0.13 0.71±0.14 0.61±0.21
表3为使用实施例3的Qubit 3.0定量结果，在4℃温度下，在0、3、5、7天之间的尿液中cfDNA含量无显著性差异，p值均大于0.05，而当在25℃、40℃时，随着保存时间的增加，出现了少量的核酸降解的现象，但是到第3天、第5天、7天降解核酸的现象减缓趋于稳定；在保存时间0天(2h)的条件下，在4℃、25℃和40℃之间的cfDNA含量无显著性差异，p值均大于0.05；在保存时间3天、5天、7天条件下，随着保存温度的增加，出现了少量的核酸降解的现象，但在25℃、40℃之间的降解核酸的现象减缓趋于稳定。
表3使用实施例3尿液保存液不同保存时间和保存温度下尿液样本中cfDNA含量(ng/uL)
保存时间 4℃(Mean±SD) 25℃(Mean±SD) 40℃(Mean±SD)
0天(2h) 0.89±0.10 0.90±0.11 0.93±0.14
3天 0.92±0.21 0.82±0.12 0.78±0.21
5天 0.94±0.19 0.79±0.21 0.70±0.19
7天 0.92±0.13 0.73±0.15 0.63±0.22
表4为使用实施例4的Qubit 3.0定量结果，显示在不同温度下，分别在0、3、5、7天时的尿液中cfDNA含量无显著性差异，p值均大于0.05(如图1为保存时间5天时在不同温度下尿液中cfDNA含量图)，说明无核酸降解；此外，在不同保存时间的条件下，分别在4℃、25℃和40℃时的cfDNA含量也无显著性差异，p值均大于0.05(如图2为保存温度为25℃时不同保存时间下尿液中cfDNA含量图)，说明无核酸降解。
表4使用实施例4尿液保存液不同保存时间和保存温度下尿液样本中cfDNA含量(ng/uL)
保存时间 4℃(Mean±SD) 25℃(Mean±SD) 40℃(Mean±SD)
0天(2h) 0.98±0.12 1.02±0.14 0.97±0.24
3天 1.05±0.53 0.94±0.11 1.19±0.33
5天 1.14±0.15 1.03±0.13 1.17±0.31
7天 0.93±0.12 1.07±0.17 1.16±0.07
表5为使用对比例1的Qubit 3.0定量结果，在4℃温度下，在0、3、5、7天之间的尿液中cfDNA含量缓慢递减，而当在25℃、40℃时，随着保存时间的增加，出现了少量的核酸降解的现象；在保存时间0天(2h)、3天时的条件下，在4℃、25℃和40℃之间的cfDNA含量无显著性差异，p值均大于0.05；在保存时间5天、7天条件下，随着保存温度的增加，出现了少量的核酸降解的现象。
表5使用对比例1尿液保存液不同保存时间和保存温度下尿液样本中cfDNA含量(ng/uL)
保存时间 4℃(Mean±SD) 25℃(Mean±SD) 40℃(Mean±SD)
0天(2h) 0.89±0.09 0.91±0.11 0.91±0.09
3天 0.79±0.11 0.81±0.11 0.81±0.17
5天 0.80±0.20 0.70±0.21 0.67±0.16
7天 0.69±0.11 0.71±0.16 0.59±0.12
表6为使用对比例2的Qubit 3.0定量结果，在4℃温度下，在0、3、5、7天之间的尿液中cfDNA含量无显著差异，p值均大于0.05，而当在25℃时，随着保存时间的增加，出现了大量的核酸降解的现象，在40℃时，随着保存时间的增加，出现了少量的核酸降解的现象；在保存时间0天(2h)天时的条件下，在4℃、25℃和40℃之间的cfDNA含量无显著性差异，p值均大于0.05；在保存时间3天、5天、7天条件下，随着保存温度的增加，先出现了大量的核酸降解的现象，而后核酸含量又显著增加。
表6用对比例2尿液保存液不同保存时间和保存温度下尿液样本中cfDNA含量(ng/uL)
保存时间 4℃(Mean±SD) 25℃(Mean±SD) 40℃(Mean±SD)
0天(2h) 0.88±0.19 0.89±0.17 0.91±0.17
3天 0.81±0.10 0.68±0.13 0.79±0.15
5天 0.83±0.10 0.59±0.11 0.77±0.12
7天 0.76±0.13 0.51±0.14 0.69±0.11
4.2不同保存时间下不同长度的cfDNA片段比例变化
表7不同保存时间下尿液样本中不同长度的cfDNA片段比例变化
Figure BDA0002582064140000131
由上述表7中可以看到，使用实施例1、实施例3、实施例4和对比例1，随着储存时间的增长，145bp、280bp的比例变化基本稳定，而576bp的比例在保存时间为7天时增大，可能有少量的体细胞的破裂，使释放出来的基因组DNA影响576bp的cfDNA片段的原始含量。使用对比例2的，随着储存时间的增长，大片段比例增加，尤其是280bp、576bp在第7天时，说明细胞中基因组DNA释放出来，不能抑制体细胞的破裂，使释放出来的基因组DNA影响cfDNA的原始含量。
4.3不同保存时间下供体来源cfDNA比例变化
基于二代测序结果，对ddcfDNA进行分析定量。结果显示使用本发明实施例4的尿液保存液的在不同保存时间下(0天(2h)、3天、5天和7天)(保存的温度为25℃)，供体来源的cfDNA在尿液中的比例并没有显著性差异(p>0.05)。实施例1分别在0天(2h)、3天、5天和7天对应的均值依次为13.1％、12.3％、10％和8.7％，实施例3分别在0天(2h)、3天、5天和7天对应的均值依次为16.1％、14.3％、10％和10.3％，实施例4分别在0天(2h)、3天、5天和7天对应的其均值依次为14.04％、15.24％、15.26％和13.64％，对比例1分别在0天(2h)、3天、5天和7天对应的均值依次为15.8％、14.2％、9.8％和9.9％，对比例2分别在0天(2h)、3天、5天和7天对应的均值依次为13.9％、13.5％、11.3％和10.2％。结果表明，本发明实施例4所用的尿液保存液可对尿液中ddcfDNA稳定保存7天，实施例1、实施例3、对比例1和对比例2均是随着保存时间增加，供体来源的cfDNA在尿液中的比例逐渐降低。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种尿液保存液，其特征在于，包括：pH缓冲剂6-10mmol/L、DNA酶抑制剂0.2-0.4mol/L、防腐剂0.1-0.3mol/L、细胞固定剂质量分数5％-15％和甲醛淬灭剂0.3-1.0mol/L。
2.根据权利要求1所述的尿液保存液，其特征在于，包括：pH缓冲剂6-8mmol/L，DNA酶抑制剂0.2-0.3mol/L，防腐剂0.1-0.2mol/L，细胞固定剂质量分数5％-10％，和甲醛淬灭剂0.3-0.6mol/L。
3.根据权利要求2所述的尿液保存液，其特征在于，包括：pH缓冲剂7.5-8mmol/L，DNA酶抑制剂0.2mol/L，防腐剂0.1mol/L、细胞固定剂质量分数5％，和甲醛淬灭剂0.3mol/L。
4.根据权利要求1-3任一项所述的尿液保存液，其特征在于，pH缓冲剂包括Tris-HCl、磷酸盐、醋酸盐、碳酸氢盐和硼酸盐中的至少一种；优选的，pH缓冲剂为Tris-HCl，pH为7.0-8.0。
5.根据权利要求1-3任一项所述的尿液保存液，其特征在于，DNA酶抑制剂包括EDTA、EDTA钠盐、EDTA钾盐和硫酸铵中的至少一种；优选的，DNA酶抑制剂为EDTA。
6.根据权利要求1-3任一项所述的尿液保存液，其特征在于，细胞固定剂包括咪唑烷基脲、重氮烷基脲、二唑烷基脲、多聚甲醛、福尔马林中的至少一种；优选的，为多聚甲醛。
7.根据权利要求1-3任一项所述的尿液保存液，其特征在于，防腐剂包括枸橼酸、枸橼酸钠盐、乳酸、乳酸钠盐、山梨酸、山梨酸钠盐中的至少一种；优选的，为枸橼酸和/或枸橼酸钠盐。
8.根据权利要求1-3任一项所述的尿液保存液，其特征在于，甲醛淬灭剂包括精氨酸、甘氨酸、L-赖氨酸和尿素中的至少一种；优选地，所述防腐剂为甘氨酸。
9.权利要求1-8任一项所述的尿液保存液在尿液或体液的保存中的用途。
10.一种尿液保存方法，其特征在于，包括：将权利要求1-8任一项所述的尿液保存液与尿液混合均匀，保存；优选的，所述尿液保存液与尿液的体积比为2％-4％。
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