CN111855863A - 阿胶制品中明胶来源的鉴定方法 - Google Patents
阿胶制品中明胶来源的鉴定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111855863A CN111855863A CN202010821364.1A CN202010821364A CN111855863A CN 111855863 A CN111855863 A CN 111855863A CN 202010821364 A CN202010821364 A CN 202010821364A CN 111855863 A CN111855863 A CN 111855863A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gelatin
- solution
- donkey
- product
- hide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 title claims abstract description 86
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 title claims abstract description 86
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 title claims abstract description 86
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 title claims abstract description 86
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 title claims abstract description 86
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 33
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 32
- 108010052008 colla corii asini Proteins 0.000 claims abstract description 30
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 17
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 16
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims abstract description 15
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 15
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims abstract description 12
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 24
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 7
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 6
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims description 6
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 claims description 5
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 5
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 5
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 4
- 241001550206 Colla Species 0.000 claims description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 3
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 claims description 3
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 3
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 claims description 3
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 abstract 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 2
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 1
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 210000003056 antler Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/14—Preparation by elimination of some components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8696—Details of Software
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/067—Preparation by reaction, e.g. derivatising the sample
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种阿胶制品中明胶来源的鉴定方法，包含如下步骤：1.阿胶制品的预处理：阿胶制品水溶液加入牛明胶和猪明胶；固液分离、过滤，滤液冻干；2.样品的酶解：冻干样品经过SDT缓冲液、UA缓冲液、IAA、NH4HCO3水溶液处理；最后加入含胰蛋白酶的NH4HCO3水溶液，离心，即得到明胶多肽溶液；3.高效液相色谱‑质谱检测：明胶多肽溶液上样于Easy nLC‑Orbitrap Fusion Tribrid质谱仪检测；4.数据分析：采用MASCOT软件匹配分析所获得的质谱图，数据库设置为目标胶原蛋白数据库，确定阿胶制品中明胶来源。本发明所述方法能够快速准确的鉴定阿胶制品中明胶来源，操作简单，成本低廉，鉴定精度高，误差较小。
Description
技术领域
本发明属于鉴定方法技术领域，尤其涉及一种阿胶制品中明胶来源的鉴定方法。
背景技术
阿胶是采用马科动物驴的鲜皮或干燥皮经去毛漂泡、煎煮、浓缩、并加入各类辅料制成的固体胶类药物，也被称为驴皮胶。其与人参、鹿茸三者一起被称为“中药三宝”，首载于《神农本草经》，并被列为上品。阿胶具有滋阴补血，润燥，止血的功效，其补血功效已被证实。除补血外，阿胶在增强免疫力、抗疲劳、抗辐射、保护大脑、促进骨愈合生长以及保护心血管等方面的功效都已被证实。由于其重要性，阿胶产业现已融入健康中国发展战略。
发明内容
本发明提供了一种阿胶制品中明胶来源的鉴定方法，包含如下步骤：
1. 阿胶制品的预处理：用去离子水将阿胶制品在50±5℃水浴锅溶解制成的阿胶溶液，向所述阿胶溶液中加入牛明胶和猪明胶，搅拌均匀制成阿胶-牛明胶-猪明胶混合溶液；混合溶液置于离心机中离心，所得上清液进一步过滤，将得到的滤液冻干，备用；
2. 样品的酶解：将冻干后的样品溶解于SDT缓冲液制成溶液，溶液于沸水中加热，然后离心10～20min，上清液置于超滤离心管中，加入UA缓冲液，置于离心机离心去除上清液，往浓缩物中加入UA缓冲液后再次离心10～20min去除上清液；然后加入IAA的乙醇溶液，于暗室放置20～40min后再次离心10～20min去除上清液；然后加入UA缓冲液，离心10～20min去除上清液，重复此加料、离心操作2次；再加入NH4HCO3水溶液并10～20min离心去除上清液，重复加料、离心操作2次；最后，在浓缩物中加入含胰蛋白酶的NH4HCO3水溶液，37±2℃放置过夜后离心，收集上清液即得到明胶多肽溶液；
3. 高效液相色谱-质谱检测：明胶多肽溶液上样于Easy nLC-Orbitrap FusionTribrid质谱仪检测，采用的柱子为C18柱，流动相A为含有甲酸体积分数0.1%甲酸的水溶液；流动相B为84%的乙腈和16%的水混合溶剂中含有体积分数0.1%的甲酸，在250 nl/min的流速下洗脱60min，由流动相A线性梯度变化为流动相B，采用数据依赖采集模式动态收集丰度最高的10个母离子进行HCD裂解，动态排除时间为20 s，归一化碰撞能量为27eV；
4. 数据分析：采用MASCOT软件匹配分析所获得的质谱图，数据库设置为目标胶原蛋白数据库，检索参数包括：半胱氨酸经碘乙酰胺为固定修饰；氧化为可能性修饰；最大的未酶切位点为2；一级质谱错误率为±20 ppm；二级质谱错误率为±0.1 Da；当Mascot分数大于40时，多肽峰被认定为阳性鉴定或准确度极高（P＜0.05）；依据三种胶原蛋白理论特征性多肽数据库进行阿胶、牛明胶和猪明胶特征性多肽的比对分析，确定阿胶制品中明胶来源。
进一步地，所述阿胶制品包括阿胶块、阿胶口服液、阿胶颗粒、阿胶糕。
进一步地，所述阿胶溶液为阿胶制品和去离子水按料水比80～120mg/mL的比例混合溶解而成；按配置阿胶溶液所用的阿胶制品质量1%的量向阿胶溶液中分别加入牛明胶和猪明胶，牛明胶和猪明胶的质量均为阿胶制品质量的1%。
进一步地，所述步骤1中，上清液经过0.45μm的过滤器过滤获得滤液。
进一步地，所述步骤2中，SDT缓冲液中SDS的质量百分含量为4%～5%，二硫苏糖醇的浓度为100～110mM、pH8 Tris-HCl的浓度为150～160mM，其余为水；冻干后的样品溶解于所述SDT缓冲液制成冻干后的样品浓度为1μg/μL的溶液；沸水中加热时间为2～5min；所述超滤离心管的截留分子量为10kDa；所述UA缓冲液中尿素的浓度为6～10M，pH8.0 Tris-HCl的浓度为150mM，其余为水；所述IAA的乙醇溶液中IAA的浓度为50～60mM；所述NH4HCO3水溶液中NH4HCO3浓度为25mM；所述含胰蛋白酶的NH4HCO3水溶液中胰蛋白酶的浓度为2μg/40μL，NH4HCO3浓度为25mM。
进一步地，所述10个母离子的m/z范围为300-1800。
进一步地，所述目标胶原蛋白为驴皮、牛皮和猪皮胶原蛋白。
因此，通过上述技术方案可知，本发明的有益效果在于：本发明所述方法能够快速准确的鉴定阿胶制品中明胶来源，操作简单，成本低廉，鉴定精度高，误差较小。
具体实施方式
下面结合实施例进行详细的说明：
一种阿胶制品中明胶来源的鉴定方法，包含如下步骤：
1. 阿胶制品的预处理
用去离子水将阿胶制品（可以是阿胶块、阿胶口服液、阿胶颗粒、阿胶糕等中的任意一种）在50℃水浴锅溶解制成阿胶制品浓度100mg/ml的阿胶溶液，按照阿胶制品1%（w/w）的比例分别向阿胶溶液中加入牛明胶和猪明胶，牛明胶和猪明胶的质量均为阿胶制品质量的1%，搅拌均匀制成阿胶-牛明胶-猪明胶混合溶液。置于离心机中以6000 g的速度离心25min，所得上清液进一步通过0.45μm的过滤器处理，将得到的滤液冻干，备用。
2. 样品的酶解
将冻干后的样品溶解于SDT缓冲液（质量百分含量4% SDS、100 mM二硫苏糖醇、150mMpH8.0 Tris-HCl，其余为水）制成冻干后的样品浓度为1 μg/μL的溶液，于沸水中加热3min，然后在离心机中12000 g离心15 min。将上清液置于超滤离心管（截留分子量为10kDa）中，加入200 μL UA缓冲液（8M尿素，150mM pH8.0 Tris-HCl，其余为水），置于离心机中14000g，离心15分钟去除上清液。再往浓缩物中加入200μL所述UA缓冲液后再次离心去除上清液。然后，加入100 μL 50 mM的IAA乙醇溶液，于暗室放置30 min后离心15 min去除上清液。然后，加入100μL所述UA缓冲液，以14000g的速度离心15分钟去除上清液，再重复此加料、离心操作2次。再加入100μL的25mM NH4HCO3水溶液并离心去除上清液，重复此加料、离心操作2次。最后，在浓缩物中加入含2μg胰蛋白酶的40 μL 25mM NH4HCO3水溶液，37℃放置12h后离心20min收集滤液即得到明胶多肽溶液。
3. 高效液相色谱-质谱检测
混合明胶酶解液上样于Easy nLC-Orbitrap Fusion Tribrid质谱仪检测，采用的柱子为C18柱 （75 μm × 150 mm）。流动相A为含有甲酸体积分数0.1%甲酸的水溶液；流动相B为84%的乙腈和16%的水混合溶剂中含有体积分数0.1%的甲酸。在250 nl/min的流速下洗脱60min，由流动相A线性梯度变化为流动相B。采用数据依赖采集模式动态收集丰度最高的10个母离子（m/z范围为300-1800）进行HCD裂解。动态排除时间为20 s，归一化碰撞能量为27eV。
4. 数据分析
采用MASCOT软件匹配分析所获得的质谱图，数据库设置为目标胶原蛋白（驴皮、牛皮和猪皮胶原蛋白）数据库。检索参数包括：半胱氨酸经碘乙酰胺为固定修饰；氧化为可能性修饰；最大的未酶切位点为2；一级质谱错误率为±20 ppm；二级质谱错误率为±0.1 Da；当Mascot分数大于40时，多肽峰被认定为阳性鉴定或准确度极高（P＜0.05）；依据三种胶原蛋白理论特征性多肽数据库进行阿胶、牛明胶和猪明胶特征性多肽的比对分析，确定阿胶制品中明胶来源。
以上对本发明所提供的技术方案进行了详细介绍，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
Claims (7)
1.一种阿胶制品中明胶来源的鉴定方法，其特征在于，包含如下步骤：
阿胶制品的预处理：用去离子水将阿胶制品在50±5℃水浴锅溶解制成的阿胶溶液，向所述阿胶溶液中加入牛明胶和猪明胶，搅拌均匀制成阿胶-牛明胶-猪明胶混合溶液；混合溶液置于离心机中离心，所得上清液进一步过滤，将得到的滤液冻干，备用；
样品的酶解：将冻干后的样品溶解于SDT缓冲液制成溶液，溶液于沸水中加热，然后离心10～20min，上清液置于超滤离心管中，加入UA缓冲液，置于离心机离心去除上清液，往浓缩物中加入UA缓冲液后再次离心10～20min去除上清液；然后加入IAA的乙醇溶液，于暗室放置20～40min后再次离心10～20min去除上清液；然后加入UA缓冲液，离心10～20min去除上清液，重复此加料、离心操作2次；再加入NH4HCO3水溶液并10～20min离心去除上清液，重复加料、离心操作2次；最后，在浓缩物中加入含胰蛋白酶的NH4HCO3水溶液，37±2℃放置过夜后离心，收集上清液即得到明胶多肽溶液；
高效液相色谱-质谱检测：明胶多肽溶液上样于Easy nLC-Orbitrap Fusion Tribrid质谱仪检测，采用的柱子为C18柱，流动相A为含有甲酸体积分数0.1%甲酸的水溶液；流动相B为84%的乙腈和16%的水混合溶剂中含有体积分数0.1%的甲酸，在250 nl/min的流速下洗脱60min，由流动相A线性梯度变化为流动相B，采用数据依赖采集模式动态收集丰度最高的10个母离子进行HCD裂解，动态排除时间为20 s，归一化碰撞能量为27eV；
数据分析：采用MASCOT软件匹配分析所获得的质谱图，数据库设置为目标胶原蛋白数据库，检索参数包括：半胱氨酸经碘乙酰胺为固定修饰；氧化为可能性修饰；最大的未酶切位点为2；一级质谱错误率为±20 ppm；二级质谱错误率为±0.1 Da；当Mascot分数大于40时，多肽峰被认定为阳性鉴定或准确度极高（P＜0.05）；依据三种胶原蛋白理论特征性多肽数据库进行阿胶、牛明胶和猪明胶特征性多肽的比对分析，确定阿胶制品中明胶来源。
2.根据权利要求1所述的阿胶制品中明胶来源的鉴定方法，其特征在于，所述阿胶制品包括阿胶块、阿胶口服液、阿胶颗粒、阿胶糕。
3.根据权利要求1所述的阿胶制品中明胶来源的鉴定方法，其特征在于，所述阿胶溶液为阿胶制品和去离子水按料水比80～120mg/mL的比例混合溶解而成；按配置阿胶溶液所用的阿胶制品质量1%的量向阿胶溶液中分别加入牛明胶和猪明胶，牛明胶和猪明胶的质量均为阿胶制品质量的1%。
4.根据权利要求1所述的阿胶制品中明胶来源的鉴定方法，其特征在于，所述步骤1中，上清液经过0.45μm的过滤器过滤获得滤液。
5.根据权利要求1所述的阿胶制品中明胶来源的鉴定方法，其特征在于，所述步骤2中，SDT缓冲液中SDS的质量百分含量为4%～5%，二硫苏糖醇的浓度为100～110mM、pH8 Tris-HCl的浓度为150～160mM，其余为水；冻干后的样品溶解于所述SDT缓冲液制成冻干后的样品浓度为1μg/μL的溶液；沸水中加热时间为2～5min；所述超滤离心管的截留分子量为10kDa；所述UA缓冲液中尿素的浓度为6～10M，pH8.0 Tris-HCl的浓度为150mM，其余为水；所述IAA的乙醇溶液中IAA的浓度为50～60mM；所述NH4HCO3水溶液中NH4HCO3浓度为25mM；所述含胰蛋白酶的NH4HCO3水溶液中胰蛋白酶的浓度为2μg/40μL，NH4HCO3浓度为25mM。
6.根据权利要求1所述的阿胶制品中明胶来源的鉴定方法，其特征在于，所述10个母离子的m/z范围为300-1800。
7.根据权利要求1所述的阿胶制品中明胶来源的鉴定方法，其特征在于，所述目标胶原蛋白为驴皮、牛皮和猪皮胶原蛋白。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010821364.1A CN111855863A (zh) | 2020-08-14 | 2020-08-14 | 阿胶制品中明胶来源的鉴定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010821364.1A CN111855863A (zh) | 2020-08-14 | 2020-08-14 | 阿胶制品中明胶来源的鉴定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111855863A true CN111855863A (zh) | 2020-10-30 |
Family
ID=72969036
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010821364.1A Pending CN111855863A (zh) | 2020-08-14 | 2020-08-14 | 阿胶制品中明胶来源的鉴定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111855863A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115754092A (zh) * | 2022-12-16 | 2023-03-07 | 江西师范大学 | 一种鲤科鱼明胶的鉴定方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015052405A1 (fr) * | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Fondation Mediterranee Infection | Procédé d'identification de l'espèce animale mammifère d'origine de la viande ou gélatine d'un échantillon à tester |
| CN106198790A (zh) * | 2016-07-01 | 2016-12-07 | 山东省食品药品检验研究院 | 一种马和骡共有特征性多肽及其应用 |
| CN106589063A (zh) * | 2016-12-13 | 2017-04-26 | 山东省食品药品检验研究院 | 一组驴源性特征肽及其在驴皮和阿胶胶定性检测中的应用流程 |
| CN107525873A (zh) * | 2017-10-18 | 2017-12-29 | 江西师范大学 | 定性分析阿胶糕中胶类来源的方法 |
-
2020
- 2020-08-14 CN CN202010821364.1A patent/CN111855863A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015052405A1 (fr) * | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Fondation Mediterranee Infection | Procédé d'identification de l'espèce animale mammifère d'origine de la viande ou gélatine d'un échantillon à tester |
| CN106198790A (zh) * | 2016-07-01 | 2016-12-07 | 山东省食品药品检验研究院 | 一种马和骡共有特征性多肽及其应用 |
| CN106589063A (zh) * | 2016-12-13 | 2017-04-26 | 山东省食品药品检验研究院 | 一组驴源性特征肽及其在驴皮和阿胶胶定性检测中的应用流程 |
| CN107525873A (zh) * | 2017-10-18 | 2017-12-29 | 江西师范大学 | 定性分析阿胶糕中胶类来源的方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| XIAO-MEI SHA 等: "Effect of extraction temperature on the gelling properties and identification of porcine gelatin", 《FOOD HYDROCOLLOIDS》 * |
| XIAO-MEI SHA 等: "The identification of three mammalian gelatins by liquid chromatography-high resolution mass spectrometry", 《LWT-FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY》 * |
| 巩丽萍 等: "马皮特征肽的发现及其在阿胶中马皮源成分检测中的应用", 《药物分析杂志》 * |
| 张静娴 等: "超高效液相色谱-三重四级杆质谱法用于阿胶糕类食品中阿胶的鉴别及马、牛、羊、猪皮源成分的检测", 《世界中医药》 * |
| 杭宝剑 等: "超高效液相色谱-串联质谱法测定阿胶中马、牛、羊、猪、骆驼、鹿皮源成分", 《色谱》 * |
| 阳洪波 等: "基于特征肽段的液相色谱-质谱技术鉴定胶原蛋白的物种来源", 《分析测试学报》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115754092A (zh) * | 2022-12-16 | 2023-03-07 | 江西师范大学 | 一种鲤科鱼明胶的鉴定方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107607642B (zh) | 一种鉴定烟草中蛋白与蛋白组的多维液相色谱质谱联用法 | |
| CN110542735A (zh) | 超高效液相质谱联用高通量测定多种脂溶性维生素的方法 | |
| CN112213401B (zh) | 一种阿胶及其制品的驴源性特征肽及其阿胶及其制品的鉴别方法 | |
| CN113004374B (zh) | 鹿胶特征肽及鉴定待测样品中是否包含鹿胶的方法 | |
| CN111721939B (zh) | 一种蛋白质凝胶样品的质谱检测前处理方法及处理试剂盒 | |
| CN111239267B (zh) | 一种基于gc-ms检测血清、淋巴组织中短链脂肪酸的方法 | |
| CN111024873A (zh) | 一种水稻全生长期磷酸化蛋白质组数据库建立及定量方法 | |
| CN113176362B (zh) | 一种评估天然蜂花粉及发酵蜂花粉致敏性的方法 | |
| CN111855863A (zh) | 阿胶制品中明胶来源的鉴定方法 | |
| CN108359704A (zh) | 用于蛋白质组学研究的山羊乳乳清蛋白的处理方法 | |
| CN111089969B (zh) | 一种n-糖链快速酶解释放和固相富集并质谱分析的方法 | |
| CN108548876B (zh) | 一种改进的生物样本中磷酸化肽段的鉴定及定量方法 | |
| CN109738538B (zh) | 一种鉴别天然封盖成熟蜂蜜和热加工浓缩蜂蜜的方法 | |
| CN109012611A (zh) | 一种纤维素微球、纤维素微柱及其制备方法和应用 | |
| CN106568875B (zh) | 一种富集唾液酸化糖肽的材料及其应用 | |
| CN109293741B (zh) | 一种鉴别阿胶及含阿胶制品中马皮源性成分的多肽 | |
| CN110988210A (zh) | 一种降低脂溶性维生素96孔板非特异性吸附的方法 | |
| CN117567562B (zh) | 南极磷虾ace抑制肽及其制备方法和应用 | |
| CN115043905B (zh) | 用于相对定量分析猪甘氨酸脒基转移酶gatm的肽段组合物及应用 | |
| CN109293742B (zh) | 一种鉴别阿胶及含阿胶制品中骡皮源性成分的多肽 | |
| CN117169393B (zh) | 一种植物组织中环肽的检测方法 | |
| CN117214350B (zh) | 多形态叶酸总含量的检测方法及试剂盒 | |
| CN109879928B (zh) | 一种植物体内源肽的提取方法 | |
| US3109774A (en) | Erythropoietic factor preparation | |
| CN117778502A (zh) | 一种抗氧化黄精多肽的制备和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |